СОЕДИНЕНИЯ, МОДУЛИРУЮЩИЕ АКТИВНОСТЬ РЕЦЕПТОРОВ GPR92, И КОРМОВЫЕ ПРОДУКТЫ ДЛЯ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ Российский патент 2023 года по МПК A23L27/00 A23L27/20 A23L27/26 A23K50/40 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 62/728229, поданной 7 сентября 2018, содержание которой включено здесь посредством ссылки в полном объеме.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка содержит список последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и включен здесь посредством ссылки в полном объеме. Копия ASCII, созданная 27 августа 2019, названа «069269.0351_SEQ Listing.txt» и имеет размер 14 633 байта.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к соединениям, модулирующим рецептор GPR92, и вкусоароматическим композициям, содержащим их. Вкусоароматические композиции можно использовать для улучшения или изменения вкусовой привлекательности, вкуса и/или аромата кормовых продуктов для домашних животных. Вкусоароматические композиции могут включать комбинации соединений и могут быть добавлены в кормовые продукты для домашних животных с помощью различных систем доставки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Вкусовые профили съедобных композиций включают основные вкусы, такие как сладкий, соленый, горький, кислый, умами и кокуми. Вкусовые профили также описывают как включающие вкусы свободных жирных кислот. Химические соединения, вызывающие эти вкусовые ощущения, часто называют тастанты. Предполагается, что тастанты воспринимаются вкусовыми рецепторами во рту и глотке, передающими сигналы в головной мозг, где регистрируются тастанты и получаемые в результате вкусовые профили. Вкусовые рецепторы включают вкусовой рецептор GPR92 (также известный как LPA5 и LPAR5), который, как предполагается, является сопряженным с G-белком рецептором клеточной поверхности. Рецептор содержит семь трансмембранных доменов, участвующих в обнаружении специфических соединений, и внутриклеточный участок, сопряженный с G-белком, участвующий в передаче сигнала.

У производителей кормов для домашних животных давно имеется потребность в получении кормовых продуктов для домашних животных, обладающих высокой питательной ценностью. Кроме того, особенно в отношении кормов для кошек и собак, производителям кормов для домашних животных требуется высокая степень вкусовой привлекательности, чтобы домашние животные могли получать полную питательную пользу от своих кормов. Домашние животные, особенно кошки, как известно, переменчивы в своих пищевых предпочтениях и часто отказываются есть кормовой продукт для домашних животных, который они употребляют в течение некоторого времени, или отказываются есть больше, чем минимальное количество кормового продукта для домашних животных. Это явление может быть, частично, связано с небольшими различиями в сенсорных профилях сырья, которые могут ощущаться домашними животными за счет их вкусовой и обонятельной систем. В результате владельцы домашних животных часто меняют типы и марки кормов для домашних животных с целью поддержания своих питомцев в здоровом и довольном состоянии.

Несмотря на последние достижения в технологиях вкусов и ароматов, сохраняется потребность в соединениях, которые могут усиливать или модифицировать вкусовую привлекательность кормовых продуктов для домашних животных усилением или модификацией вкусового, текстурного и/или ароматического профилей кормового продукта для домашних животных. Усиление или модификация могут заключаться в повышении интенсивности требуемого признака, замене требуемого признака, отсутствующего или каким-либо образом утраченного в кормовом продукте для домашних животных, или в снижении интенсивности нежелательного признака. В частности, желательно повысить интенсивность требуемого тастанта в кормовом продукте для домашних животных.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к вкусоароматическим композициям и способам получения и модификации таких композиций в различных кормовых продуктах для домашних животных. В частности, настоящее изобретение относится к вкусоароматической композиции, содержащей одно или более соединений, которые усиливают, повышают и/или модулируют активность рецептора GPR92, например, рецептора GPR92 кошки (fGPR92).

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит одно или более соединений формулы I, имеющих структуру:

или любую его соль,

где n равно 0 или 1; и

R представляет собой замещенную или незамещенную углеводородную цепь, имеющую длину углеродной цепи от около C₂ до около C₄₀.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит одно или более соединений формулы II, имеющих структуру:

или любую его соль,

где R представляет собой замещенную или незамещенную углеводородную цепь, имеющую длину углеродной цепи от около C₂ до около C₄₀.

В некоторых вариантах осуществления углеводородная цепь содержит от нуля до восьми двойных связей. В некоторых вариантах осуществления одна или более двойных связей могут быть замещены водородом, метилом или C₁-C₁₂-алкилом. В некоторых вариантах осуществления один или более атомов углерода в углеводородной цепи замещены кислородом, серой, азотом, кетоном, сульфоном, сульфоксидом, амидом, мочевиной или сульфонамидом. В некоторых вариантах осуществления R представляет собой замещенную углеводородную цепь, которая замещена одним или более из следующего: H, CH₃, C₁-C₂₀-алкил, COOH, SO₃H, CHO, C(O)R₁, C=CR₁R₂, C=NOH, OP(O)(OR₁)(OR₂), OR₁, SR₁, CN, COOR₁, CONR₁R₂, NO₂, NHOH, F, Cl, Br, I и NR₁R₂, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбирают из H и разветвленного или неразветвленного C₁-C₆-алкила.

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I выбирают из группы, состоящей из следующего: 1-(9Z-октадеценил)-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфата (LPA C18:1),

1-миристоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 14:0),

1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 16:0),

1-стеароил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 18:0),

D-(+)-sn-1-O-линолеоил-глицерил-3-фосфат (LPA 18:2).

D-(+)-sn-1-O-линоленоил-глицерил-3-фосфат (LPA 18:3),

1-олеоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 18:1),

1-гексадецил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (AGP 16:0),

1-октадецил лизофосфатидная кислота (1-октадецил LPA),

1-гептадеканоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 17:0),

(R)-2-амино-3-((3-октилфенил)амино)-3-оксопропил дигидрофосфат (VPC 23019, Cayman),

D-(+)-sn-1-O-арахидоноил-глицерил-3-фосфат (LPA 20:4),

любой их аналог или производное и любая их комбинация.

В конкретных вариантах осуществления соединение формулы II выбирают из группы, состоящей из 9Z-октадеценил-фосфата, сфингозин-1-фосфата, 1-меркаптоундецилфосфорной кислоты, транс, транс-фарнезил монофосфата и любого их аналога или производного, и любой их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит пирофосфат динатрия (Na₂H₂P₂O₇), триполифосфат натрия (Na₅P₃O₁₀), гидролизат из рыбы, пептон, 16:0 лизо-PG 1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфоглицерин или любую их комбинацию.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к кормовому продукту, содержащему любую вкусоароматическую композицию, раскрытую здесь, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве, эффективном для повышения вкусовой привлекательности кормового продукта. В некоторых вариантах осуществления повышение вкусовой привлекательности определяется группой дегустаторов. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от около 10 пМ до около 1 М, от около 0,01 ppm до 1000 ppm или от около 0,01% до около 10% вес./вес. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит одно или более очищенных соединений, раскрытых здесь, и вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от около 1 нМ до около 0,1 М. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит пептон или гидролизат, и вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от около 0,1% до около 10%. В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт включает кормовой продукт для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой кормовой продукт для домашних кошек или кормовой продукт для домашних собак. В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой влажный кормовой продукт для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой сухой кормовой продукт для домашних животных.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к способу модуляции активности рецептора GPR92 кошки, содержащего аминокислотную последовательность, представленную в виде SEQ ID NO:4, способ включает контактирование вкусоароматической композиции с рецептором GPR92 кошки, где композиция связывается с одной или более аминокислотами рецептора GPR92 кошки, выбраннами из группы, состоящей из Arg83, Gly103, Phe106, Gln107, Met110, Cys114, Thr161, His165, Ala200, Gly204, Pro208, Phe248, Phe252, Tyr255, Asn256, Leu259, Arg281, Val288, Glu182 рецептора GPR92 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с Arg83 рецептора GPR92 кошки. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с одной или более аминокислотами рецептора GPR92 кошки, выбранными из группы, состоящей из Gly103, Phe106, Gln107, Met110, Cys114 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с одной или более аминокислотами рецептора GPR92 кошек, выбранными из группы, состоящей из Thr161, His165 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с одной или более аминокислотами рецептора GPR92 кошки, выбранными из группы, состоящей из Ala200, Gly204, Pro208 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с одной или более аминокислотами рецептора GPR92 кошки, выбранными из группы, состоящей из Phe248, Phe252, Tyr255, Asn256, Leu259 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с одной или более аминокислотами рецептора GPR92 кошки, выбранными из группы, состоящей из Arg281, Met285, Val288 и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция связывается с Glu182 рецептора GPR92 кошки.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к способу идентификации вкусоароматической композиции, модулирующей активность рецептора GPR92 кошки, включающему (а) контактирование испытуемого вещества с рецептором GPR92 кошки, (b) определение взаимодействия между испытуемым соединением и одной или более аминокислотами в сайте взаимодействия рецептора GPR92 кошки, и (c) выбор в качестве вкусоароматической композиции испытуемого вещества, которое взаимодействует с одной или более аминокислотами. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение активности рецептора GPR92 кошки после стадии (а). В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контактирование лиганда рецептора GPR92 кошки с рецептором GPR92. В некоторых вариантах осуществления испытуемое вещество повышает активность рецептора умами кошки. В некоторых вариантах осуществления рецептор умами кошки экспрессируется клеткой, и при этом испытуемое вещество контактирует с клеткой.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к вкусоароматическим композициям, модулирующим активность рецептора GPR92, идентифицированного согласно способам, раскрытым здесь.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к кормовым продуктам, содержащим вкусоароматические композиции, раскрытые здесь. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция присутствует в концентрации от около 0,01% до около 10% вес/вес (вес./вес.) в кормовом продукте.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к способу повышения вкусовой привлекательности кормового продукта, включающему смешивание кормового продукта с вкусоароматической композицией, как описано здесь, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве, эффективном для повышения вкусовой привлекательности кормового продукта. В некоторых вариантах осуществления повышение вкусовой привлекательности определяется группой дегустаторов.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к способу получения кормового продукта, способного повышать активность рецептора GPR92, включающему смешивание кормового продукта с эффективным количеством вкусоароматической композиции, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от около 10 пМ до около 1 М. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция присутствует в концентрации от около 0,01 ppm до 1000 ppm в кормовом продукте. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция присутствует в концентрации от около 0,01% до около 10% вес./вес. в кормовом продукте. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит одно или более очищенных соединений, и вкусоароматическая композиция присутствует в концентрации от около 1 нМ до около 0,1 М в кормовом продукте. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит пептон или гидролизат из рыбы, и вкусоароматическая композиция присутствует в концентрации от около 0,1% до около 10% в кормовом продукте.

Вышеизложенное довольно широко обозначило признаки и технические преимущества настоящей заявки для того, чтобы последующее подробное описание можно было лучше понять. В дальнейшем будут описаны дополнительные признаки и преимущества заявки, которые составляют предмет пунктов формулы изобретения заявки. Специалистам в данной области должно быть понятно, что концепция и конкретный раскрытый вариант осуществления могут быть легко использованы в качестве основы для модификации или проектирования других структур для выполнения того же назначения настоящей заявки. Также специалистам в данной области должно быть понятно, что такие эквивалентные конструкции не выходят за рамки сущности и объема заявки, как изложено в прилагаемой формуле изобретения. Новые признаки, которые считаются характерными для заявки, как для ее структуры, так и способа осуществления, вместе с дополнительными целями и преимуществами будут лучше понятны из последующего описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фиг.1A-1C приведены кривые зависимости доза-эффект для пирофосфата динатрия (Na₂H₂P₂O₇) как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C). Имитированные клетки не содержали рецептора fGPR92.

На фиг.2A-2C приведены кривые зависимости доза-эффект для триполифосфата натрия (Na₅P₃O10) как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.3A-3C приведены кривые зависимости доза-эффект для лизофофатидовой кислоты (LPA) [LPA C18:1] как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.4A-4C приведены кривые зависимости доза-эффект для [LPA 14:0]; 14:0 Лизо PA; миристоил лизофосфатидная кислота как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (С).

На фиг.5A-5C приведены кривые зависимости доза-эффект для [LPA 16:0]; пальмитоил лизофосфатидная кислота как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.6A-6C приведены кривые зависимости доза-эффект для [LPA 18:0]; 18:0 Лизо PA; 1-стеароил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфата как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.7A-7C приведены кривые зависимости доза-эффект для [LPA 18:2]; -(+)-sn-1-O-линолеоилглицерил-3-фосфат (линолеоил LPA) как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.8A-8C приведены кривые зависимости доза-эффект для [LPA 18:3]; D-(+)-sn-1-O-линоленоил-глицерил-3-фосфат как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.9A-9C приведены кривые зависимости доза-эффект для октадеценил фосфата: 9Z-октадеценил фосфата как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.10A-10C приведены кривые зависимости доза-эффект для алкил-глицерин фосфата; AGP (18:1); 18:1 Лизо PA 1-олеоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.11A-11C приведены кривые зависимости доза-эффект для алкил-глицерин фосфата; AGP (16:0); Cayman порядковый № 10010188, как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (С).

На фиг.12A-12C приведены кривые зависимости доза-эффект для коричного альдегида в качестве отрицательного контроля как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.13A-13C приведены кривые зависимости доза-эффект для коричного альдегида в качестве отрицательного контроля как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.14A-14C приведены кривые зависимости доза-эффект для гидролизата из рыбы как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг. 15A-15C приведены кривые зависимости доза-эффект для гидролизата из рыбы как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.16A-16C приведены кривые зависимости доза-эффект для 1-октадецил лизофосфатидовой кислоты как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.17A-17C приведены кривые зависимости доза-эффект для Лизо PA (17:0 LPA) при восьми различных уровнях доз как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора (B), а также сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.18A-18B приведены кривые зависимости доза-эффект для 16:0 Лизо-PG 1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфоглицерина в виде агониста (A) и сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (В).

На фиг.19A-19B приведены кривые зависимости доза-эффект для (R)-2-амино-3-((3-октилфенил)амино)-3-оксопропил дигидрофосфата (VPC 23019, Cayman) в виде агониста (A) и сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (В).

На фиг.20A-20B приведены кривые зависимости доза-эффект для сфингозин-1-фосфата в виде агониста (A) и сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (B).

На фиг.21A-21C приведены кривые зависимости доза-эффект для (S) 20:4 LPA; D-(+)-sn-1-O-арахидоноил-глицерил-3-фосфата в виде агониста (A) и сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (C).

На фиг.22A-22B приведены кривые зависимости доза-эффект для 1-меркаптоундецилфосфорной кислоты в виде агониста (A) и сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (B).

На фиг.23A-23B приведены кривые зависимости доза-эффект для транс, транс-фарнезил монофосфата в виде агониста (A) и сигнал % при максимальной концентрации и значения EC₅₀ соединения (B).

На фиг.24 представлена сводная информация по уровням сигнала и значениям ЕС₅₀ для 21 образца и отрицательных контролей (ментола и коричного альдегида) как в виде агониста (A), так и в виде положительного аллостерического модулятора. Значения ЕС₅₀ выражены в молярной (М) концентрации. Н/о: не обнаружено.

На фиг.25 приведены результаты испытания на различие между 0,1% GPR92 пептонной водой и простой водой. Потребление 0,1% GPR92 пептонной воды составляло в среднем на 19,65 г больше, чем потребление простой воды.

На фиг.26 приведены результаты испытания на различие между 1% GPR92 пептонной водой и простой водой. Потребление 1% GPR92 пептона составляло в среднем на 22,38 г больше, чем потребление простой воды.

На фиг.27 приведены результаты испытания на различие между 1% GPR92 пептонной водой и 0,1% пептонной водой. Потребление 1% GPR92 пептонной воды составляло в среднем на 17,60 г больше, чем потребление 0,1% GPR92 пептонной воды.

На фиг.28A-28C показано in silico моделирование связывания соединения LPA C18:1 (1-(9Z-октадеценил)-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат) с доменом 7TM рецептора GPR92 кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с GPR92, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки GPR92, которые взаимодействуют со связывающим соединением. Положительно заряженные остатки присутствуют на внеклеточной стороне домена GPR92 GPCR, который координирует фосфаты активных фосфолипидов. Лиганд образует солевой мостик с Arg83 и водородные связи с Tyr255. Хвост фосфолипида проходит через длинный гидрофобный канал, образуя множественные гидрофобные взаимодействия.

На фиг.29A-29C показано in silico моделирование связывания соединения AGP 16:0 (1-гексадецил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат) с доменом 7TM GPR92 кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с GPR92, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки GPR92, которые взаимодействуют со связывающим соединением. Положительно заряженные остатки присутствуют на внеклеточной стороне домена GPR92 GPCR, который координирует фосфаты активных фосфолипидов. Лиганд располагает фосфат таким образом, чтобы потенциально образовывать электростатические взаимодействия. Хвост фосфолипида проходит через длинный гидрофобный канал, образуя множественные гидрофобные взаимодействия.

На фиг.30A-30C показано in silico моделирование связывания соединения октадеценил фосфата (9Z-октадеценилфосфата) с доменом 7TM GPR92 кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с GPR92, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки GPR92, которые взаимодействуют со связывающим соединением. Положительно заряженные остатки присутствуют на внеклеточной стороне домена GPR92 GPCR, который координирует фосфаты активных фосфолипидов. Лиганд образует солевой мостик с Arg281 и ARG83, водородные связи с ARG281. Хвост фосфолипида проходит через длинный гидрофобный канал, образуя множественные гидрофобные взаимодействия.

На фиг.31 представлена нуклеотидная последовательность GPR92 кошки (SEQ ID NO:1).

На фиг.32 представлена нуклеотидная последовательность GPR92 собаки(SEQ ID NO:2).

На фиг.33 представлена нуклеотидная последовательность GPR92 человека (SEQ ID NO:3).

На фиг.34 представлена аминокислотная последовательность GPR92 кошки (SEQ ID NO:4).

На фиг.35 представлена аминокислотная последовательность GPR92 собаки (SEQ ID NO:5).

На фиг.36 представлена аминокислотная последовательность GPR92 человека (SEQ ID NO:6).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

До настоящего времени сохраняется потребность в модификаторе вкуса и аромата, который может усиливать и/или улучшать вкусовую привлекательность различных кормовых продуктов для домашних животных. Настоящая заявка относится к вкусоароматическим композициям, которые содержат, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее активность рецептора GPR92, например, рецептора GPR92 кошки (fGPR92). Вкусоароматические композиции можно использовать для усиления вкусовой привлекательности и/или улучшения или модификации вкуса различных кормовых продуктов для домашних животных, таких как питательно полноценный корм для домашних животных, и можно добавлять в кормовые продукты для домашних животных с помощью различных систем доставки. Вкусоароматические композиции могут дополнительно содержать комбинации соединений, включающих аминокислоты, нуклеотиды и фураноны (которые описаны в международных заявках № PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, и PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, каждая из которых включена посредством ссылки в их полном объеме) и/или трансмембранные соединения, активирующие рецептор умами (которые описаны в международной заявке № PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в полном объеме), и/или производные нуклеотидов (которые описаны в международной заявке № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в полном объеме), и/или соединения, активирующие рецептор жирных кислот (GPR120) (которые описаны в международной заявке № PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в полном объеме), и/или соединения, активирующие кальцийчувствительный рецептор (CaSR) (как описано в международной заявке № PCT/US17/027698, поданной 14 апреля 2017 года, которая включена посредством ссылки в полном объеме).

1. Определения

Термины, используемые в данном описании, в целом имеют свои обычные значения в данной области, в контексте данного изобретения и в определенном контексте, где используется каждый термин. Некоторые термины рассмотрены ниже или в других местах в описании для обеспечения дополнительных указаний практикам в описании композиций и способов по изобретению и как получить и использовать их.

В том смысле, в каком здесь применяются грамматические формы единственного числа при использовании в сочетании с термином «содержащий» в формуле изобретения и/или описании, они могут означать «один», но также соответствовать значениям «один или более», «по меньшей мере, один» и «один или более чем один». Более того, термины «имеющий», «включающий», «состоящий» и «содержащий» являются взаимозаменяемыми, и специалист в данной области понимает, что данные термины являются неограничивающими терминами.

Термин «около» или «приблизительно» означает в пределах допустимой погрешности для конкретного значения, как определяет специалист с общей подготовкой в данной области, которая будет зависеть частично от того, как значение измеряют или определяют, то есть от ограничений системы измерения. Например, «около» может означать в пределах 3 или более чем 3 стандартных отклонений на практике в данной области. Альтернативно, «около» может означать диапазон до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5% и еще более предпочтительно до 1% указанного значения. Альтернативно, в частности, относительно биологических систем или процессов, термин может означать в пределах порядка величины, предпочтительно в пределах 5-кратного и более предпочтительно - в пределах от 2-кратного значения величины.

В том смысле, в котором здесь используется термин «вкус», он относится к ощущению, вызванному активацией или ингибированием рецепторных клеток вкусовых луковиц субъекта. В некоторых вариантах осуществления вкус можно выбирать из группы, состоящей из сладкого, кислого, соленого, горького, кокуми и умами вкуса. В некоторых вариантах осуществления вкус вызывается у субъекта тастантом. В некоторых вариантах осуществления тастант представляет собой синтетический тастант. В некоторых вариантах осуществления тастант получают из природного источника.

В некоторых вариантах осуществления «вкус» может включать вкус кокуми. Смотри, например, Ohsu et al., J. Biol. Chem., 285(2): 1016-1022 (2010), содержание которой включено здесь посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления вкус кокуми представляет собой ощущение, вызванное активацией или ингибированием рецепторных клеток вкусовых луковиц субъекта, например, рецептора CaSR, и отличается от других вкусов, например, сладкого, соленого и умами вкусов, хотя он может выполнять функцию усилителя вкуса для этих вкусов.

Используемый здесь термин «вкусовый профиль» относится к комбинации вкусов, таких как, например, один или более из сладкого, кислого, соленого, горького, умами, кокуми и вкуса свободной жирной кислоты. В некоторых вариантах осуществления вкусовой профиль образуется одним или более тастантами, которые присутствуют в композиции в одинаковых или разных концентрациях. В некоторых вариантах осуществления вкусовой профиль относится к интенсивности вкуса или комбинации вкусов, например, сладкого, кислого, солевого, горького, умами, кокуми и вкуса свободной жирной кислоты, определяемых субъектом или любым анализом, известным в данной области. В некоторых вариантах осуществления модификация, изменение или варьирование комбинации тастантов во вкусовом профиле может изменить сенсорное восприятие субъекта.

Используемый здесь термин «вкусоаромат» относится к одному или более сенсорным стимулам, таким как, например, один или более стимулов: вкус (вкусовой), запах (обонятельный), осязание (тактильный) и температура (тепловой). В некоторых неограничивающих вариантах осуществления сенсорное восприятие субъекта при воздействии вкусоаромата можно классифицировать как характерное восприятие конкретного вкусоаромата. Например, вкусоаромат может быть идентифицирован субъектом в качестве, но не ограничиваясь этим, цветочного, цитрусового, ягодного, орехового, карамельного, шоколадного, острого, дымного, сырного, мясного и тому подобного вкусоаромата. В том смысле, в каком здесь используется вкусоароматическая композиция, ее можно выбирать из жидкости, сухого порошка, спрея, пасты, суспензии и любой их комбинации. Ароматизатор может быть натуральной композицией, искусственной композицией, идентичной натуральной или любой их комбинацией.

В том смысле, в котором здесь используется взаимозаменяемо термин «аромат» и «запах», он относится к обонятельной реакции на стимул. Для примера, а не в качестве ограничения, аромат может быть образован ароматическими веществами, которые воспринимаются рецепторами запаха обонятельной системы.

В том смысле, в каком здесь используется термин «вкусоароматический профиль», он относится к комбинации сенсорных стимулов, например, вкусов, таких как сладкий, кислый, горький, соленый, умами, кокуми и вкус свободной жирной кислоты, и/или обонятельных, тактильных и/или тепловых стимулов. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматический профиль содержит один или более вкусоароматов, которые вносят свой вклад в сенсорное восприятие субъекта. В некоторых вариантах осуществления модификация, изменение или варьирование комбинации стимулов во вкусоароматическом профиле может изменить сенсорное восприятие субъекта.

Используемый здесь термин «примешивание», например, «примешивание вкусоароматической композиции или их комбинаций по настоящей заявке к кормовому продукту», относится к способу, в котором вкусоароматическая композиция или отдельные компоненты вкусоароматической композиции смешиваются или добавляются в готовый продукт или смешиваются или добавляется в некоторые или все компоненты продукта во время получения продукта или некоторых комбинаций этих стадий. При использовании в контексте примешивания термин «продукт» относится к продукту или любым его компонентам. Данная стадия примешивания может включать способ, выбранный из стадии добавления вкусоароматической композиции в продукт, распыления вкусоароматической композиции на продукт, покрытия вкусоароматической композицией продукта, суспендирования продукта во вкусоароматической композиции, окрашивания вкусоароматической композицией продукта, обмазывания охлаждающей композицией продукта, инкапсулирования продукта во вкусоароматическую композицию, смешивания вкусоароматической композиции с продуктом и любой их комбинации. Вкусоароматическая композиция может представлять собой жидкость, эмульсию, сухой порошок, спрей, пасту, суспензию и любую их комбинацию.

В некоторых вариантах осуществления соединения вкусоароматической композиции можно получить во время обработки кормового продукта для домашних животных, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструдирования, из соединений-предшественников, присутствующих в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления соединение вкусоароматической композиции можно получить во время обработки кормового продукта для домашних животных, а дополнительные компоненты вкусоароматической композиции можно добавить в кормовой продукт для домашних животных примешиванием.

В том смысле, в каком здесь используется термин «ppm», он означает частей на миллион и является относительным параметром веса. Часть на миллион представляет собой микрограмм на грамм, таким образом, что компонент, который присутствует в количестве 10 ppm, присутствует в количестве 10 микрограмм конкретного компонента на 1 грамм совокупной смеси.

В том смысле, в каком здесь используется термин «ppb», он означает частей на миллиард и является относительным параметром веса. Часть на миллиард представляет собой микрограмм на килограмм, таким образом, что компонент, который присутствует в количестве 10 микрограммов конкретного компонента на 1 килограмм совокупной смеси.

В том смысле, в каком здесь используется термин «вкусовая привлекательность», он может относиться в целом к желанию животного съесть определенный кормовой продукт. Усиление «вкусовой привлекательности» кормового продукта для домашних животных может привести к повышению удовольствия и принятия корма для домашних животных животным-компаньоном в целях обеспечения скармливания животному «здорового количества» корма для домашних животных. В том смысле, в каком здесь используется термин «здоровое количество» корма для домашних животных, он относится к количеству, которое позволяет животному-компаньону обеспечивать или получать рацион, способствующий в целом его общему состоянию здоровья в отношении микроэлементов, макроэлементов и энергетической ценности, таких как установленные в «Mars Petcare Essential Nutrient Standards». В некоторых вариантах осуществления «вкусовая привлекательность» может означать относительное предпочтение животным одного кормового продукта над другим. Например, если животное демонстрирует предпочтение одному из двух или более кормовых продуктов, предпочтительный кормовой продукт является более «вкусным» и обладает «повышенной вкусовой привлекательностью». В некоторых вариантах осуществления относительную вкусовую привлекательность одного кормового продукта по сравнению с одним или более другими кормовыми продуктами можно определить, например, при проведении параллельных сравнений свободного выбора, например, на основе относительного потребления кормовых продуктов, или других подходящих измерений предпочтений, указывающих на вкусовую привлекательность. Вкусовую привлекательность можно определить в соответствии со стандартным протоколом испытаний, в котором животное имеет равный доступ к обоим кормовым продуктам, таким как тест, называемый «тест двух мисок» или «тест сравнения». Такое предпочтение может возникать вследствие любого ощущения животного, но может быть связано, в частности, со вкусом, послевкусием, запахом, ощущением во рту и/или текстурой.

Термин «корм для домашних животных» или «кормовой продукт для домашних животных» означает продукт или композицию, предназначенную для потребления животным-компаньоном, таким как кошки, собаки, морские свинки, кролики, рыбы, птицы и лошади. Для примера, а не в качестве ограничения, животное-компаньон может быть «домашней» кошкой, такой как Felis domesticus. В некоторых вариантах осуществления животное-компаньон может быть «домашней» собакой, например Canis lupus familiaris. «Корм для домашних животных» или «кормовой продукт для домашних животных» включает любой кормовой продукт, корм, закуску, кормовую добавку, жидкость, напиток, лакомство, игрушку (жевательные и/или потребляемые игрушки), суррогатный корм или заменитель корма.

В том смысле, в каком здесь используется термин «питательно полноценный», он относится к кормовому продукту для домашних животных, который содержит все известные необходимые питательные вещества для предполагаемого получателя кормового продукта для домашних животных в соответствующих количествах и пропорциях, основанных, например, на рекомендациях признанных или компетентных органов в области кормления животных-компаньонов. Следовательно, такие продукты способны выполнять функцию единственного источника кормового рациона для поддержания жизни без добавления дополнительных источников питательных веществ.

В том смысле, в каком здесь используется термин «вкусоароматическая композиция», он относится, по меньшей мере, к одному соединению или его биологически приемлемой соли, модулирующим, включая повышение, увеличение, усиление действия, ослабление, подавление или стимулирование вкусов, запахов, ароматов и/или текстур натурального или синтетического тастанта, вкусоароматического вещества, вкусового профиля, ароматического профиля и/или текстурного профиля у животного или человека. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит комбинацию соединений или их биологически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит одно или более вспомогательных веществ.

В том смысле, в каком здесь используется термин «модулирует» или «модифицирует», он означает увеличение или уменьшение количества, качества или влияния конкретной активности рецептора и/или увеличение или уменьшение экспрессии, активности или функции рецептора. В том смысле, в каком здесь используется термин «модуляторы», он относятся к любым ингибирующим или активирующим соединениям, идентифицированным с использованием методов in silico, in vitro и/или in vivo, например, агонистов, антагонистов и их гомологов, включая фрагменты, варианты и миметики.

В том смысле, в каком здесь используется термин «ингибиторы» или «антагонисты», он относятся к модулирующим соединениям, которые снижают, уменьшают, блокируют, предотвращают, замедляют активацию, инактивируют, десенсибилизируют или понижают регуляцию биологической активности и/или экспрессию представляющих интерес рецепторов или метаболического пути.

В том смысле, в каком здесь используется термин «индукторы», «активаторы» или «агонисты», он относятся к модулирующим соединениям, которые повышают, индуцируют, стимулируют, увеличивают, активируют, облегчают, усиливают активацию, сенсибилизируют или повышают регуляцию представляющего интерес рецептора или метаболического пути.

В некоторых вариантах осуществления «активное соединение» представляет собой модулирующее соединение, то есть является активным в отношении вкусового рецептора, например, рецептора GPR92. Например, активное соединение может быть активным в отношении рецептора GPR92 в качестве агониста, антагониста, позитивного аллостерического модулятора (ПАМ), негативного аллостерического модулятора или демонстрируя сочетание активностей, например, как активности агониста, так и активности позитивного аллостерического модулятора или как активности агонистов, так и активности негативного аллостерического модулятора.

В том смысле, в каком здесь используются термины «вектор» и «вектор экспрессии», они относятся к молекулам ДНК, являющимся или линейными, или кольцевыми, в которые может быть интегрирован фрагмент последовательности другой ДНК соответствующего размера. Такой фрагмент(ы) ДНК может включать дополнительные сегменты, которые обеспечивают транскрипцию гена, кодированного фрагментом последовательности ДНК. Дополнительные сегменты могут включать, но не ограничиваться ими: промоторы, терминаторы транскрипции, энхансеры, участки внутренней посадки рибосом, нетранслируемые области, сигналы полиаденилирования, селективные маркеры, ориджины репликации и тому подобное. Экспрессирующие векторы часто получают из плазмид, космид, вирусных векторов и искусственных хромосом дрожжей. Векторы часто представляют собой рекомбинантные молекулы, содержащие последовательности ДНК из нескольких источников.

Термин «функционально связанный» в применении к последовательностям ДНК, например, в векторе экспрессии, указывает, что последовательности расположены таким образом, что для достижения намеченных целей они действуют совместно, то есть последовательность промотора позволяет инициировать транскрипцию, которая происходит с помощью связанной кодирующей последовательности до сигнала терминации транскрипции.

В том смысле, в каком здесь используется термин «молекула нуклеиновой кислоты» и «нуклеотидная последовательность», он относится к одно- или двухцепочечной ковалентно связанной последовательности нуклеотидов, в которых 3ʽ и 5ʽ концы каждого нуклеотида соединены фосфодиэфирными связями. Молекула нуклеиновой кислоты может состоять из дезоксирибонуклеотидных оснований или рибонуклеотидных оснований и может быть синтезирована in vitro или выделена из природных источников.

Термины «полипептид», «пептид», «аминокислотная последовательность» и «белок», используемые здесь взаимозаменяемо, относятся к молекуле, образованной связыванием, по меньшей мере, двух аминокислот. Связь между одним аминокислотным остатком и следующим является амидной связью и иногда называется пептидная связь. Полипептид можно получить подходящим способом, известным в данной области, включающим выделение из природных источников, экспрессию в системе рекомбинантной экспрессии, химический синтез или ферментативный синтез. Термины могут применяться к аминокислотным полимерам, в которых один или более аминокислотных остатков представляют собой искусственный химический миметик соответствующей природной аминокислоты, а также к природным аминокислотным полимерам и неприродным аминокислотным полимерам.

В том смысле, в каком здесь используется термин «аминокислота», он относится к природным и синтетическим аминокислотам, а также к аналогам аминокислот и миметикам аминокислот, которые действуют аналогично природным аминокислотам. Природные аминокислоты представляют собой аминокислоты, кодированные генетическим кодом, а также те аминокислоты, которые затем модифицируются, например, гидроксипролин, гамма-карбоксиглутамат и O-фосфосерин. Аналоги и производные аминокислот могут относиться к соединениям, которые имеют такую же основную химическую структуру, как природная аминокислота, то есть углерод, который связан с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой и R группой, например, гомосерином, норлейцином, метионинсульфоксидом и метионинметилсульфонием. Такие аналоги могут иметь модифицированные R-группы (например, норлейцин) или модифицированные боковые пептидные связи, но сохранять такую же основную химическую структуру, как природная аминокислота. Миметики аминокислот означают химические соединения, которые имеют структуру, отличающуюся от общей химической структуры аминокислоты, но действуют аналогично природной аминокислоте.

Термины «выделенный» или «очищенный», используемые здесь взаимозаменяемо, относятся к нуклеиновой кислоте, полипептиду или другому биологическому фрагменту, отделенному от компонентов, с которыми он связан в природных условиях. Термин «выделенный» может относиться к полипептиду, который является отдельным и обособленным от целого организма, в котором молекула встречается в природе или присутствует, по существу, в отсутствие других биологических макромолекул того же типа. Термин «выделенный» относительно полинуклеотида может относиться к молекуле нуклеиновой кислоты, полностью или частично лишенной последовательностей, обычно связанных с ней в природе; или к последовательности, существующей в природе, но имеющей гетерологичные последовательности, связанные с ней; или к молекуле, диссоциировавшей от хромосомы.

Используемый здесь термин «рекомбинантный» может использован для описания молекулы нуклеиновой кислоты и относится к полинуклеотиду геномного, РНК, ДНК, кДНК, вирусного, полусинтетического или синтетического происхождения, который в силу своего происхождения или манипуляции не связан со всем или частью полинуклеотида, с которым он связан в природе.

В том смысле, в каком здесь используется термин «слияние», он относится к соединению различных пептидных или белковых сегментов генетическими или химическими методами, в которых соединенные концы пептидных или белковых сегментов могут быть непосредственно связаны друг с другом или могут быть разделены линкерными или спейсерными фрагментами, такими как аминокислотные остатки или другие линкерные группы.

Термин «алкил» относится к линейной или разветвленной С₁-С₂₀ углеводородной группе, состоящей исключительно из атомов углерода и водорода, не содержащей ненасыщенности, и которая присоединена к остальной части молекулы посредством одинарной связи, например, метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил, н-пентил, 1,1-диметилэтил (трет-бутил).

2. Рецептор GPR92

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к рецепторам GPR92 для применения в раскрытых способах. Рецепторы GPR92 по настоящему изобретению могут включать рецепторы GPR92 млекопитающих, такие как, но не ограничиваясь ими, рецепторы GPR92 кошки, собаки и человека.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления рецептор GPR92 по настоящему раскрытию кодируется нуклеиновой кислотой, описанной в международной заявке № PCT/US17/027626, поданной 14 апреля 2017, которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления рецептор GPR92 по настоящему раскрытию содержит аминокислотную последовательность, описанную в международной заявке № PCT/US17/027626, поданной 14 апреля 2017.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления рецептор GPR92 содержит нуклеотидную последовательность рецептора GPR92 кошки, собаки или человека, описанную в международной заявке № PCT/US17/027626, поданной 14 апреля 2017.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления рецептор GPR92 содержит аминокислотную последовательность рецептора GPR92 кошки, собаки или человека, описанную в международной заявке № PCT/US17/027626, поданной 14 апреля 2017.

В некоторых вариантах осуществления рецептор GPR92 для применения в настоящем раскрываемом предмете изобретения может включать рецептор, содержащий нуклеотидную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности с нуклеотидной последовательностью рецептора GPR92 кошки, собаки или человека, например, нуклеотидной последовательностью рецептора GPR92 кошки, собаки или человека, представленную в виде SEQ ID NO:1, 2 или 3 соответственно.

В некоторых вариантах осуществления рецептор GPR92 для применения в настоящем раскрываемом предмете изобретения может включать рецептор, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности с аминокислотной последовательностью рецептора GPR92 кошки, собаки или человека, например, аминокислотной последовательностью рецептора GPR92 кошки, собаки и человека, представленную в виде SEQ ID NO:4, 5 или 6 соответственно.

В некоторых вариантах осуществления раскрываемый предмет изобретения относится к применению выделенного или очищенного рецептора GPR92 и/или его вариантов и фрагментов. Раскрытый предмет изобретения также охватывает применение вариантов последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариация может происходить в каждой или обеих кодирующей и некодирующей областях нуклеотидной последовательности рецептора GPR92. Варианты могут включать, по существу, гомологичный белок, кодируемый одним и тем же генетическим локусом в организме, то есть аллельный вариант. Варианты также включают белки, полученные из других генетических локусов в организме, например, кошки, но имеющие существенную гомологию с рецептором GPR92, то есть гомолог. Варианты также могут включать белки, по существу, гомологичные рецептору GPR92, но полученные из другого организма, то есть ортолог. Варианты также включают белки, которые, по существу, гомологичны рецептору GPR92, которые получают химическим синтезом. Варианты также включают белки, которые, по существу, гомологичны рецептору GPR92, которые получают рекомбинантными методами.

Раскрытый предмет изобретения также относится к слитым белкам, которые содержат рецептор GPR92 или его фрагмент. В некоторых вариантах осуществления слитый белок по настоящему раскрытию может включать детектируемый маркер, функциональную группу, такую как носитель, метку, стабилизирующую последовательность или механизм, посредством которого можно обнаружить связывание агониста с рецептором GPR92. Неограничивающие варианты осуществления метки включают метку FLAG, метку His, метку MYC, связывающий мальтозу белок и другие известные в данной области. Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим такие слитые белки, векторам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие слитые белки, и клеткам-хозяевам, содержащим такие нуклеиновые кислоты или векторы. В некоторых вариантах осуществления слияния можно проводить на аминоконце (N-конце) рецептора GPR92 или на карбоксильном конце (С-конце) рецептора GPR92.

В некоторых вариантах осуществления раскрытые здесь рецепторы GPR92 могут содержать дополнительные аминокислоты на N-терминальном и/или С-терминальном конце последовательностей, например, при использовании в способах по раскрываемому предмету изобретения. В некоторых вариантах осуществления дополнительные аминокислоты могут способствовать иммобилизации полипептида для целей скрининга или позволить полипептиду стать частью слитого белка, как описано выше, для облегчения определения биологической активности.

3. Соединения, модулирующие рецептор GPR92

Настоящее раскрытие относится к вкусоароматическим композициям, содержащим, по меньшей мере, одно соединение, которое может модулировать активность рецептора GPR92, например, рецептора fGPR92. В некоторых вариантах осуществления композиции содержат фосфолипид. Раскрытые здесь соединения идентифицировали с помощью метода in vitro, в котором определяли способность соединений активировать рецептор GPR92 кошки (fGPR92), экспрессированный клетками в культуре, и/или метода in silico, в котором способность соединений связываться с fGPR92 определяли in silico. Вкусоароматические композиции можно использовать для усиления или модификации вкусовой привлекательности, вкуса или аромата кормовых продуктов для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления соединения включаются во вкусоароматическую композицию без других веществ, усиливающих вкусовую привлекательность. В некоторых вариантах осуществления соединения включаются в одну или более вкусоароматических композиций с одним или более дополнительными веществами, усиливающими вкусовую привлекательности, например, нуклеотидами, производными нуклеотидов, аминокислотами, фуранонами, соединениями, активирующими рецептор жирных кислот, соединениями, активирующими рецептор вкуса умами, соединениями, активирующими кальцийчувствительный рецептор, описанными здесь.

В некоторых вариантах осуществления соединения, модулирующие рецептор GPR92, которые могут называться модуляторами рецептора GPR92, по настоящей заявке идентифицируют с помощью in silico моделирования рецептора GPR92, например, рецептора fGPR92, где модуляторы рецептора GPR92 по настоящей заявке имеют структуру, соответствующую сайту связывания рецептора GPR92.

В некоторых вариантах осуществления модуляторы рецептора GPR92 по настоящей заявке идентифицируют посредством метода in vitro, например, где соединения-агонисты рецептора GPR92 активируют и/или модулируют раскрытый здесь рецептор GPR92, экспрессированный клетками in vitro. В некоторых вариантах осуществления метод in vitro включает методы in vitro, описанные здесь и в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее рецептор GPR92, представляет собой соединение формулы I, имеющее структуру:

или любую его соль,

где n равно 0 или 1; и R представляет собой замещенную или незамещенную углеводородную цепь.

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I выбирают из группы, состоящей из следующего: 1-(9Z-октадеценил)-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA C18:1),

1-миристоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 14:0),

1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 16:0),

1-стеароил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 18:0),

D-(+)-sn-1-O-линолеоил-глицерил-3-фосфат (LPA 18:2).

D-(+)-sn-1-O-линоленоил-глицерил-3-фосфат (LPA 18:3),

1-олеоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 18:1),

1-гексадецил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (AGP 16:0),

1-октадецил лизофосфатидная кислота (1-октадецил LPA),

1-гептадеканоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 17:0),

(R)-2-амино-3-((3-октилфенил)амино)-3-оксопропил дигидрофосфат (VPC 23019, Cayman),

D-(+)-sn-1-O-арахидоноил-глицерил-3-фосфат (LPA 20:4),

любой их аналог или производное,

и любая их комбинация.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее рецептор GPR92, представляет собой соединение формулы II, имеющее структуру:

или любую его соль,

где R представляет собой замещенную или незамещенную углеводородную цепь.

В конкретных вариантах осуществления соединение формулы II выбирают из группы, состоящей из 9Z-октадеценил-фосфата, сфингозин-1-фосфата, 1-меркаптоундецилфосфорной кислоты, транс, транс-фарнезил монофосфата и любого их аналога или производного, и любой их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления R представляет собой углеводородную цепь, имеющую длину углерода от около C₂ до около C₄₀, или от около C₄ до около C₃₅, или от около C₆ до около C₃₀, или от около C₈ до около C₂₈, или от около C₁₀ до около C₂₆, или от около C₁₂ до около C₂₄, или от около C₁₄ до около C₂₂, или от около C₁₆ до около C₂₀. В некоторых вариантах осуществления углеводородная цепь имеет длину углеродной цепи от около C₁₄ до около C₂₂.

В некоторых вариантах осуществления углеводородная цепь может быть незамещенной или замещенной одним или более из следующего: H, CH₃, C₁-C₂₀-алкил, COOH, SO₃H, CHO, C(O)R₁, C=CR₁R₂, C=NOH, OP(O)(OR₁)(OR₂), OR₁, SR₁, CN, COOR₁, CONR₁R₂, NO₂, NHOH, F, Cl, Br, I и NR₁R₂, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбирают из H и разветвленного или неразветвленного низшего алкила (например, C₁-C₆).

В некоторых вариантах осуществления углеводородная цепь содержит от нуля до восьми двойных связей, например, расположенных попеременно с одинарными связями вдоль углеводородной цепи. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (E) изомер. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (Z) изомер. В некоторых вариантах осуществления двойные связи необязательно могут быть замещены одним или более из следующего: водородом, метильными или низшими алкильными группами, например, алкилом, имеющим длину углеродной цепи от около C₁ до C₁₂.

В некоторых вариантах осуществления один или более атомов углерода в углеводородной цепи замещены кислородом, серой, азотом, кетоном, сульфоном, сульфоксидом, амидом, мочевиной или сульфонамидом.

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему раскрытию содержат одну или более отрицательно заряженных групп, присоединенных к углеводородной цепи. В некоторых вариантах осуществления отрицательно заряженная группа включает, например, карбоксильную группу или биоизостерическую замену карбоксилата, такую как, но не ограничиваясь ими, фосфат, бороновая кислота, фосфоэфир, фосфодиэфир, фосфиновая кислота, сульфонамид, малоновая кислота, 2-сульфоуксусная кислота, сульфоновая кислота, гидроксамовая кислота, тетразол, гидроксимочевина, фосфорамид или любую другую биоизостерическую замену карбоксилата, известную практикующему специалисту в данной области.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее рецептор GPR92, выбирают из следующих соединений:

1-(9Z-октадеценил)-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (также известный как лизофосфатидная кислота, LPA и LPA C18:1),

1-миристоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (также известный как LPA 14:0 и миристоил лизофосфатидная кислота),

1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (также известный как LPA 16:0 и пальмитоиллизофосфатидная кислота),

1-стеароил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (также известный как LPA 18:0),

D-(+)-sn-1-O-линолеоил-глицерил-3-фосфат (также известный как LPA 18:2, 1-линолеоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат и линолеоил LPA),

D-(+)-sn-1-O-линоленоил-глицерил-3-фосфат (LPA 18:3) (также известный как LPA 18:3 и линоленоил LPA),

1-олеоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (также известный как LPA 18:1, алкилглицерин фосфат и AGP 18:1),

1-гексадецил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (также известный как AGP 16:0, алкилглицерин фосфат 16:0 и 1-гексадецил LPA),

1-октадецил лизофосфатидная кислота (также известная как 1-октадецил LPA, LPA O-18:0 и LPA 18:0e),

1-гептадеканоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат (LPA 17:0),

9Z-октадеценил фосфат (также известный как октадеценил фосфат),

16:0 Лизо-PG 1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфоглицерин,

(R)-2-амино-3-((3-октилфенил)амино)-3-оксопропил дигидрофосфат (VPC 23019, Cayman),

сфингозин-1-фосфат,

D-(+)-sn-1-O-арахидоноил-глицерил-3-фосфат (LPA 20:4),

1-меркаптоундецилфосфорная кислота,

транс, транс-фарнезил монофосфат;

любой их аналог или производное,

и любая их комбинация.

В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой пирофосфат динатрия (Na₂H₂P₂O₇) или триполифосфат натрия (Na₅P₃O₁₀). В некоторых вариантах осуществления соединение содержится в гидролизате из рыбы или в GPR92 пептоне.

Настоящее раскрытие также относится к солям, стереоизомерам и съедобным формам описанных здесь соединений.

В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой насыщенный фосфолипид.

В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой ненасыщенный или полиненасыщенный фосфолипид.

В некоторых вариантах осуществления модуляторы рецептора GPR92 по настоящему раскрытию содержат соль модулятора рецептора GPR92, например, но не ограничиваясь ими, ацетатную соль или формиатную соль. В некоторых вариантах осуществления соль модулятора рецептора GPR92 содержит анион (-) (например, но не ограничиваясь ими, Cl^-, O^2-, CO₃^2-, HCO₃^-, OH^-, NO₃^-, PO₄^3-, SO₄^2-, CH₃COO^- , HCOO^- и C₂O₄^2-), связанные посредством ионной связи с катионом (+) (например, но не ограничиваясь ими, Al³⁺, Ca²⁺, Na⁺, K⁺, Cu²⁺, H⁺, Fe³⁺, Mg²⁺, NH⁴⁺ и H₃O⁺). В других вариантах осуществления соль агониста рецептора GPR92 содержит катион (+), связанный посредством ионной связи с анионом (-). В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему раскрытию содержат натриевую соль или калиевую соль соединения.

В некоторых вариантах осуществления модуляторы рецептора GPR92 по настоящей заявке идентифицируют с помощью in silico моделирования рецептора GPR92 (такого как рецептор GPR92), например, рецептора GPR92 кошки или собаки, где соединения, модулирующие рецептор GPR92, по настоящей заявке имеют структуру, соответствующую сайту связывания рецептора GPR92.

В некоторых вариантах осуществления модуляторы рецептора GPR92 по настоящей заявке идентифицируют с помощью метода in vitro, где соединения-агонисты рецептора GPR92 активируют и/или модулируют раскрытый здесь рецептор GPR92, экспрессированный клетками in vitro. В некоторых вариантах осуществления метод in vitro включает методы in vitro, описанные здесь и в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления соединения включаются в вкусоароматическую композицию без других веществ, усиливающих вкусовую привлекательность. В некоторых вариантах осуществления соединения включаются в композицию с одним или более дополнительными веществами, усиливающими вкусовую привлекательности, например, нуклеотидами, производными нуклеотидов, аминокислотами, фуранонами, соединениями, модулирующими рецептор GPR92, описанными здесь.

В некоторых вариантах осуществления раскрытые здесь соединения включаются в вкусоароматическую композицию в количестве от около 0,001% до около 100% вес./вес., от около 0,1% до около 99,9% вес./вес., от около 1% до около 99% вес./вес., от около 1% до около 80% вес./вес., от около 1% до около 50% вес./вес., от около 1% до около 20% вес./вес., от около 50% до около 100% вес./вес., от около 20% до около 80% вес./вес., от около 30% до около 70% вес./вес.

4. Способы идентификации соединений, модулирующих рецептор GPR92

Настоящее раскрытие также относится к способу идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию рецептора GPR92. Для примера, а не в качестве ограничения, модулятор может быть агонистом или антагонистом. Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к методам in silico и in vitro для идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию рецептора GPR92, описанного выше.

4.1 Методы in silico

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к методам in silico для идентификации соединений, которые могут потенциально взаимодействовать с рецептором GPR92 и/или модулировать активность и/или экспрессию рецептора GPR92.

В некоторых вариантах осуществления способ может включать прогнозирование трехмерной структуры (3D) рецептора GPR92 и скрининг предсказанной 3D структуры с предполагаемыми соединениями, модулирующими рецептор GPR92 (то есть испытуемыми соединениями). Способ может дополнительно включать прогнозирование того, будет ли взаимодействовать предполагаемое соединение с сайтом связывания рецептора путем анализа потенциальных взаимодействий с предполагаемым соединением и аминокислотами рецептора. Способ может дополнительно включать идентификацию испытуемого соединения, которое может связываться с или модулировать биологическую активность рецептора GPR92, путем определения соответствует ли трехмерная структура соединения сайту связывания трехмерной структуры рецептора.

В некоторых вариантах осуществления GPR92 для применения в раскрытом способе может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 5 или 6 или ее фрагмент или вариант. В некоторых вариантах осуществления GPR92 для применения в настоящем раскрытом предмете изобретения может включать рецептор, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности с SEQ ID NO:4, 5 или 6, или ее фрагментом или вариантом. В некоторых вариантах осуществления GPR92 для применения в раскрытом способе может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, 2 или 3 или ее фрагмент или вариант. В некоторых вариантах осуществления GPR92 для применения в настоящем раскрытом предмете изобретения может включать рецептор, содержащий нуклеотидную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности с SEQ ID NO:1, 2 или 3 или ее фрагментом или вариантом.

Неограничивающие примеры соединений (например, потенциальных модуляторов GPR92), которые можно испытывать с использованием раскрытых способов, включают любое низкомолекулярное химическое соединение или любой биологический объект, в частности пептиды, соли и аминокислоты, известные в данной области. В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может являться малой химической молекулой. В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может представлять собой гидролизат белка. В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может быть агонистом GPR92, например, но не ограничиваясь ими, NAG (N-арахидонилглицином), FPP (3,7,11-триметил-2,6,10-додекатриен-1-ил пирофосфатом), LPA (18:0) (1-стеароил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфатом), CPA (18:1) (1-олеоил-sn-глицеро-2,3-циклофосфатом), LPA (14:0) (1-миристоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфатом), LPA (16:0) (1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфатом) и LPA (18:1) (1-олеоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфатом). В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может являться фарнезил монофосфатом (FMP), алкил-глицерофосфатом (AGP, также известным как алкил-LPA), циклической фосфатидной кислотой (CPA); карбо-CPA (CCPA), 2-карбо-CPA (2CCPA) или 3-карбо-CPA (3CCPA). В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может представлять собой любой агонист GPR92, описанный в Williams, et al., The Journal of Biological Chemistry VOL. 284, NO. 25, pp. 17304-17319, June 19, 2009. В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может являться LPA C18:1 (1- (9Z-октадеценил)-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфатом), AGP 16:0 (1-гексадецил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфатом) или октадеценил фосфатом (9Z-октадеценил фосфатом). В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может являться 16:0 лизо-PG 1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфоглицерином, (R)-2-амино-3-((3-октилфенил)амино)-3-оксопропил дигидрофосфатом (VPC 23019, Cayman), сфингозин-1-фосфатом, D-(+)-sn-1-O-арахидоноил-глицерил-3-фосфатом, 1-меркаптоундецилфосфорной кислотой или транс, транс-фарнезил монофосфатом.

В некоторых вариантах осуществления структурные модели рецептора GPR92 можно построить с использованием кристаллических структур других GPCR в качестве матрицы для моделирования гомологии. Для примера, а не в качестве ограничения, структурные модели можно получать с использованием кристаллических структур других GPCR класса А. В некоторых вариантах осуществления структурная модель GPR92 может быть основана на известной кристаллической структуре GPCR класса A или комбинации известных кристаллических структур GPCR класса А (смотри, например, Lee et al., Eur. J Pharmacol. 2015 May 14. pii: S0014-2999(15)30012-1 и Berman et al., Nucleic Acids Research, 28: 235-242 (2000), каждая из которых включена здесь посредством ссылки в полном объеме). Примеры кристаллических структур других GPCR класса A включают 4N6H дельта-опиоидного рецептора человека; и/или 4MBS рецептора хемокинов CCR5; и/или 4PHU GPR40 человека. Можно использовать любое подходящее программное обеспечение для моделирования, известное в данной области. В некоторых вариантах осуществления для получения трехмерной структуры белка можно использовать пакет программ Modeller (Eswar et al., Curr Protoc Bioinformatics, John Wiley & Sons, Inc., Supplement 15, 5,6.1-5,6.30 (2006)) и/или пакет программ I-TASSER (Yang et al., Nature Methods, 12: 7-8 (2015)).

В некоторых вариантах осуществления методы in silico идентификации соединения, которое связывается с GPR92, включают определение, взаимодействует ли испытуемое соединение с одной или более аминокислотами взаимодействующего домена GPR92, как описано здесь.

Соединения, идентифицированные раскрытыми методами in silico, можно дополнительно испытывать с использованием методов in vitro, описанных здесь.

4.2 Сайт связывания рецептора GPR92

Настоящая заявка относится к способам скрининга соединений, модулирующих активность рецептора GPR92, например, рецептора GPR92 кошки, собаки или человека, где соединения взаимодействуют с одной или более аминокислотами рецептора GPR92. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания рецептора GPR92 содержит аминокислоты в составе трансмембранного домена, например, 7 трансмембранного (7TM) домена рецептора, и может быть идентифицирован формированием карты взаимодействия рецептора с использованием in silico моделирования, описанного здесь. В одном неограничивающем примере присутствие аминокислоты в карте трансмембранного взаимодействия означает, что остаток попадает под условия связывания лиганда и взаимодействует с лигандом.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие между соединением и одной или более аминокислотами рецепторов GPR92, описанных здесь, может включать одно или более из следующего: водородную связь, ковалентную связь, нековалентную связь, солевой мостик, физическое взаимодействие и их комбинации. Взаимодействия могут также представлять собой любую характеристику взаимодействия известного в данной области взаимодействия лиганда рецептора. Такие взаимодействия можно определять, например, сайт-направленным мутагенезом, рентгеновской кристаллографией, рентгеновским или другими спектроскопическими методами, ядерным магнитным резонансом (ЯМР), оценкой степени поперечного сшивания, масс-спектроскопией или электрофорезом, криомикроскопией, методами замещения на основе известных агонистов, анализом структуры и их комбинациями. В некоторых вариантах осуществления взаимодействия определяют in silico, например, теоретическими средствами, такими как докинг соединения в кармане связывания рецептора GPR92 кошки или собаки, как описано здесь, например, с использованием молекулярного докинга, молекулярного моделирования, молекулярной имитации или других средств, известных специалистам в данной области.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие представляет собой взаимодействие типа водородная связь.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие представляет собой гидрофобное взаимодействие.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с способами, описанными здесь, модулирующие активность рецептора GPR92, взаимодействуют с одной или более аминокислотами трансмембранного домена рецептора GPR92, например, семи трансмембранных доменов (7TM). В некоторых вариантах осуществления аминокислоты, с которыми взаимодействуют соединения, содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или более Arg83 на спирали 2; Gly103, Phe106, Gln107, Met110, Cys114 на спирали 3; Thr161, His165 на спирали 4; Ala200, Gly204, Pro208 на спирали 5; Phe248, Phe252, Tyr255, Asn256, Leu259 на спирали 6; Arg281, Met285, Val288 на спирали 7; и Glu182 на второй внеклеточной петле (EC2) рецептора GPR92, например, рецептора GPR92, включающего рецептор GPR92 кошки, или соответствующие аминокислоты рецептора GPR92 собаки или рецептора GPR92 человека.

В некоторых вариантах осуществления способы идентификации композиции, модулирующей активность рецептора GPR92 кошки, включают (а) контактирование испытуемого вещества с рецептором GPR92, например, рецептор GPR92 кошки, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, (b) определение взаимодействия между испытуемым веществом и одной или более аминокислотами в сайте взаимодействия рецептора GPR92, выбранными из группы, состоящей из Arg83 на спирали 2; Gly103, Phe106, Gln107, Met110, Cys114 на спирали 3; Thr161, His165 на спирали 4; Ala200, Gly204, Pro208 на спирали 5; Phe248, Phe252, Tyr255, Asn256, Leu259 на спирали 6; Arg281, Met285, Val288 на спирали 7; Glu182 на второй внеклеточной петле (EC2); и их комбинации, и (c) выбор в качестве композиции испытуемого вещества, которое взаимодействует с одной или более аминокислотой.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение активности рецептора GPR92 после стадии (а) и выбор в качестве композиции испытуемого вещества, повышающего активность рецептора GPR92.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контактирование рецептора GPR92 с лигандом, например, агонистом, и выбор в качестве композиции испытуемого вещества, повышающего или усиливающего способность агониста активировать рецептор GPR92.

4.3 Методы in vitro

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к методам in vitro для идентификации соединений, которые могут модулировать активность и/или экспрессию рецептора GPR92.

Рецепторы GPR92 для применения в способах по настоящему раскрытию могут включать выделенные или рекомбинантные рецепторы GPR92 или клетки, экспрессирующие рецептор GPR92, раскрытый здесь. В некоторых вариантах осуществления рецептор GPR92 для применения в раскрытых способах может иметь аминокислотную или нуклеотидную последовательность, описанную в международной заявке № PCT/US17/027626, поданной 14 апреля 2017, или ее фрагмент или вариант.

В некоторых вариантах осуществления способ для идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию рецептора GPR92, включает определение биологической активности рецептора GPR92 в отсутствии и/или присутствии испытуемого соединения. В некоторых вариантах осуществления способ может включать определение биологической активности рецептора GPR92 в присутствии различных концентраций испытуемого соединения. Способ может дополнительно включать идентификацию испытуемых соединений, вызывающих модуляцию активности и/или экспрессии рецептора GPR92, по сравнению с активностью и/или экспрессией рецептора GPR92 в отсутствии испытуемого соединения.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с описанными здесь способами, повышают биологическую активность рецептора GPR92, по меньшей мере, на около 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% и более по сравнению с биологической активностью рецептора GPR92 в отсутствии соединения. В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с описанными здесь способами, повышают биологическую активность рецептора GPR92, по меньшей мере, на 30% по сравнению с биологической активностью рецептора GPR92 при отсутствии соединения.

В некоторых вариантах осуществления способ может дополнительно включать анализ двух или более, трех или более или четырех или более испытуемых соединения в комбинации. В некоторых вариантах осуществления два или более, три или более или четыре или более испытуемых соединений могут быть из разных классов соединений, например аминокислоты и низкомолекулярные химические соединения. Для примера, а не в качестве ограничения, способ может включать анализ влияния одного или более низкомолекулярных химических испытуемых соединений на биологическую активность и/или экспрессию рецептора GPR92 в присутствии одного или более испытуемых соединений типа аминокислот. В некоторых вариантах осуществления способ для определения влияния соединения на активность и/или экспрессию рецептора GPR92 включает анализ влияния испытуемого соединения на биологическую активность и/или экспрессию рецептора GPR92 в присутствии одного или более испытуемых соединений типа нуклеотиды или производные нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления способ идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию рецептора GPR92, включает определение того, что модулирует ли соединение рецептор непосредственно, например, в качестве агониста или антагониста. В некоторых вариантах осуществления способ включает определение, модифицирует ли соединение косвенно активность рецептора (например, в качестве аллостерического модулятора), например, усилением или снижением влияния других соединений на активацию или ингибирование активности рецептора.

В некоторых вариантах осуществления способ идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию рецептора GPR92, включает экспрессию рецептора GPR92 в клеточную линию и определение биологической активности рецептора в присутствии и/или отсутствии испытуемого соединения. Способ может дополнительно включать идентификацию испытуемых соединений, модулирующих активность рецептора определением, существует ли разница в активации рецептора в присутствии испытуемого соединения по сравнению с активностью рецептора в отсутствии испытуемого соединения. В некоторых вариантах осуществления селективность предполагаемого модулятора рецептора GPR92 можно оценить сравнением его влияния на другие GPCRs или рецепторы вкуса, например, умами, CaSR, T1R и тому подобное.

Активацию рецептора в описанных способах можно определить с использованием меченого соединения и/или вещества. В некоторых вариантах осуществления активность рецептора GPR92 можно определить путем обнаружения вторичных мессенджеров, таких как, но не ограничиваясь ими, cAMP, cGMP, IP3, DAG или кальций. В некоторых вариантах осуществления активность рецептора GPR92 можно определить путем обнаружения уровней внутриклеточного кальция. Мониторинг можно осуществлять путем детектирования люминесценцией или флуоресценцией, например, с помощью кальцийчувствительного флуоресцентного красителя. В некоторых вариантах осуществления уровни внутриклеточного кальция можно определить с использованием красителя клеток, например, флуоресцентного индикатора кальция, такого как Calcium 4. В некоторых вариантах осуществления уровни внутриклеточного кальция можно определить измерением степени связывания кальция с кальцийсвязывающим белок, например, кальмодулин. Альтернативно и/или дополнительно активность рецептора GPR92 можно определить детектированием уровней фосфорилирования, транскрипции и/или уровней белка в одном или более белках-мишенях ниже по ходу транскрипции рецептора GPR92.

Клеточная линия, используемая в раскрытых способах, может включать любой клеточный тип, способный экспрессировать рецептор GPR92. Неограничивающие примеры клеток, которые можно использовать в раскрытых способах, включают клетки HeLa, клетки яичника китайского хомячка (клетки CHO), клетки почек африканской зеленой мартышки (клетки COS), ооциты Xenopus, клетки HEK-293 и фибробласты мыши 3T3. В некоторых вариантах осуществления способ может включать экспрессию рецептора GPR92 в клетках CHO-K1. В некоторых вариантах осуществления способ может включать экспрессию рецептора GPR92 в клетках HEK-293. В некоторых вариантах осуществления способ может включать экспрессию рецептора GPR92 в клетках COS. В некоторых вариантах осуществления клетки конститутивно экспрессируют кальцийчувствительный рецептор. В другом варианте осуществления экспрессия рецептора GPR92 клетками является индуцируемой.

В некоторых вариантах осуществления клетка экспрессирует кальцийсвязывающий фотобелок, где фотобелок люминесцирует при связывании кальция. В некоторых вариантах осуществления кальцийсвязывающий фотобелок включает белок клитин. В некоторых вариантах осуществления клитин представляет собой рекомбинантный клитин. В некоторых вариантах осуществления клитин включает выделенный клитин, например, клитин, выделенный из Clytia gregarium. В некоторых вариантах осуществления кальцийсвязывающий фотобелок включает белок экворин, например рекомбинантный экворин или выделенный экворин, такой как экворин, выделенный из Aequorea victoria. В некоторых вариантах осуществления кальцийсвязывающий фотобелок включает белок обелин, например рекомбинантный обелин или выделенный обелин, такой как обелин, выделенный из Obelia longissima.

В некоторых вариантах осуществления экспрессию рецептора GPR92 в клетке можно осуществлять введением нуклеиновой кислоты, кодирующей рецептор GPR92, в клетку. Для примера, а не в качестве ограничения, нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, указанную в международной заявке № PCT/US17/027626, поданной 14 апреля 2017, или ее фрагмент, может быть введена в клетку. В некоторых вариантах осуществления введение нуклеиновой кислоты в клетку можно проводить любым способом, известным в данной области, включая, но не ограничиваясь этим, трансфекцию, электропорацию, микроинъекцию, инфицирование вирусным или бактериофаговым вектором, содержащим нуклеотидную последовательность, слияние клеток, перенос генов, опосредованный хромосомой, перенос генов, опосредованный микроклетками, слияние сферопластов и тому подобное. В данной области известны многочисленные способы введения чужеродных генов в клетки (смотри, например, Loeffler and Behr, Meth. Enzymol. 217:599-618 (1993); Cohen et al., Meth. Enzymol. 217:618-644 (1993); Cline, Pharmacol. Ther. 29:69-92 (1985), раскрытие которых включено здесь посредством ссылки в их полном объеме) и могут использоваться в соответствии с раскрываемым предметом изобретения. В некоторых вариантах осуществления способ может обеспечить стабильный перенос нуклеиновой кислоты в клетку таким образом, что нуклеиновая кислота экспрессируется клеткой и наследуется, и экспрессируется ее потомством. В некоторых вариантах осуществления способ может обеспечить переходный перенос нуклеиновой кислоты в клетку, таким образом, что нуклеиновая кислота экспрессируется клеткой, при этом наследуемость и экспрессия снижаются в последующих поколениях потомства клетки.

В некоторых вариантах осуществления способ может включать идентификацию соединений, которые связываются с рецептором GPR92. Способ может включать контактирование рецептора GPR92 с испытуемым соединением и оценку связывания между соединением и рецептором GPR92. Для примера, а не в качестве ограничения, способы могут включать предоставление выделенного или очищенного рецептора GPR92 в бесклеточной системе и контактирование рецептора с испытуемым соединением в бесклеточной системе для определения, связывается ли испытуемое соединение с рецептором GPR92. В некоторых вариантах осуществления способ может включать контактирование рецептора GPR92, экспрессированного на поверхности клетки с испытуемым соединением, и определение связывания испытуемого соединения с рецептором GPR92. Связывание можно определить непосредственно, например, с использованием меченого испытуемого соединения или можно определить косвенно. В некоторых вариантах осуществления определение включает обнаружение физиологического события в клетке, вызванного связыванием соединения с рецептором GPR92, например, повышение уровней внутриклеточного кальция. Для примера, а не в качестве ограничения, определение можно осуществлять посредством детектирования флуоресценцией, например, кальцийчувствительного флуоресцентного красителя, детектирования люминесценцией или любого другого способа определения, известного в данной области.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления исследование in vitro охватывает клетки, экспрессирующие рецептор GPR92, который является нативным для клеток. Примеры таких клеток, экспрессирующих нативный рецептор GPR92, включают, например, но не ограничиваются ими, вкусовые клетки собаки (собачьи) и/или кошки (кошачьи) (например, клетки первичного рецептора вкуса). В некоторых вариантах осуществления вкусовые клетки собаки и/или кошки, экспрессирующие рецептор GPR92, выделяются из организма собаки и/или кошки и культивируются in vitro. В некоторых вариантах осуществления клетки рецептора вкуса могут быть иммортализированы, например, таким образом, что клетки, выделенные из организма собаки и/или кошки, могут размножаться в культуре.

В некоторых вариантах осуществления экспрессию рецептора GPR92 в клетке можно индуцировать редактированием генома, например, с использованием системы редактирования генома CRISPR, для включения гена рецептора GPR92 в геном клетки или редактирования или модифицирования гена рецептора GPR92, нативного клетке.

В некоторых вариантах осуществления методы in vitro для идентификации соединения, которое связывается с рецептором GPR92, включают определение, взаимодействует ли испытуемое соединение с одной или более аминокислотами взаимодействующего домена рецептора GPR92, описанного здесь.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные как модуляторы рецептора GPR92, можно дополнительно протестировать в других аналитических методах, включающих, но не ограничивающихся ими, исследования in vivo, для подтверждения или количественного определения их модулирующей активности.

В некоторых вариантах осуществления способы, описанные здесь, могут включать определение, является ли модулятор рецептора GPR92 соединением, усиливающим рецептор GPR92 вкуса, например, агонистом рецептора GPR92.

В некоторых вариантах осуществления способы идентификации модулятора рецептора GPR92 могут включать сравнение влияния испытуемого соединения на агонист рецептора GPR92. Например, испытуемое соединение, которое повышает активность рецептора по сравнению с активностью рецептора при контактировании с агонистом рецептора GPR92, можно выбирать в качестве соединения, модулирующего рецептор GPR92 (например, в качестве агониста).

В некоторых вариантах осуществления способы идентификации модулятора рецептора GPR92 могут включать определение, модулирует ли испытуемое соединение активность рецептора при контактировании рецептора с агонистом, или может ли испытуемое соединение модулировать активность позитивного аллостерического модулятора (ПАМ). Испытуемые соединения, которые усиливают или снижают влияние указанного агониста или ПАМ на рецептор, можно выбирать в качестве соединения, модулирующего рецептор GPR92 (например, в качестве аллостерического модулятора).

5. Вкусоароматические композиции

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматические композиции по настоящему раскрытию можно использовать для повышения вкусовой привлекательности кормовых продуктов для домашних животных, таких как кормовые продукты для кошек. Вкусоароматические композиции могут содержать комбинации соединений и могут быть добавлены в кормовой продукт для домашних животных в различных системах доставки.

В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способам модуляции вкусового рецептора GPR92 (например, активности GPR92, включая fGPR92) и/или вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающим: а) предоставление, по меньшей мере, одного кормового продукта для домашних животных или его предшественника и b) смешивание кормового продукта для домашних животных или его предшественника, по меньшей мере, с эффективным количеством, по меньшей мере, одной вкусоароматической композиции, например, содержащей одно или более соединений или их приемлемых в пищевом отношении солей, с целью получения улучшенного кормового продукта для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматические композиции по настоящему изобретению могут усиливать активность рецептора GPR92 и/или вкусовую привлекательность кормового продукта для домашних животных, такого как, например, кормовой продукт для домашних животных, включающий влажные кормовые продукты для домашних животных, сухие кормовые продукты для домашних животных, сырые кормовые продукты для домашних животных, питьевые продукты для домашних животных и/или кормовые продукты типа закуски для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления одну или более вкусоароматических композиций по настоящему раскрытию можно добавить в кормовой продукт для домашних животных в количестве, эффективном для модификации, улучшения или иного изменения вкуса или вкусового профиля кормового продукта для домашних животных. Модификация может включать, например, усиление или повышение вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, это определяется животными, например, кошками и/или собаками, или, в случае испытания рецептуры, это определяется группой дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения животных, например, кошек и/или собак, с использованием методик, известных в данной области.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия можно получить кормовой продукт для домашних животных, содержащий достаточное количество, по меньшей мере, одной вкусоароматической композиции, описанной здесь. В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия можно получить кормовой продукт для домашних животных, содержащий достаточное количество вкусоароматической композиции, включающей, по меньшей мере, одно, два, три, четыре, пять, шесть или более соединений.

В некоторых вариантах осуществления количество, эффективное для модуляции рецептора GPR92 одной или более вкусоароматических композиций по настоящему раскрытию можно добавить в кормовой продукт для домашних животных, в результате чего кормовой продукт для домашних животных обладает повышенной вкусовой привлекательностью по сравнению с кормовым продуктом для домашних животных, полученным без вкусоароматической композиции, это определяется животными, например, кошками и/или собаками, или в случае испытания рецептуры это определяется группой дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения животных, с использованием методик, известных в данной области.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическую композицию добавляют в кормовой продукт для домашних животных в количестве, эффективном для повышения, усиления и/или модификации вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных.

Концентрация вкусоароматической композиции, смешанной с кормовым продуктом для домашних животных для модуляции и/или улучшения вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, может изменяться в зависимости от переменных факторов, таких как, например, конкретный вид кормового продукта для домашних животных, какие активные соединения в отношении рецептора GPR92 уже присутствуют в кормовом продукте для домашних животных и их концентрации, и усиливающий эффект конкретной вкусоароматической композиции на такие активные соединения в отношении рецептора GPR92.

Для обеспечения такой модификации вкусовой привлекательности можно использовать широкий диапазон концентраций вкусоароматических композиций. В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, в котором вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,01 ppm до около 1000 ppm. Для примера, но не в качестве ограничения, вкусоароматическая композиция может присутствовать в количестве от около 0,01 ppm до около 750 ppm, от около 0,01 ppm до около 500 ppm, от около 0,01 ppm до около 250 ppm, от около 0,01 ppm до около 150 ppm, от около 0,01 ppm до около 100 ppm, от около 0,01 ppm до около 75 ppm, от около 0,01 ppm до около 50 ppm, от около 0,01 ppm до около 25 ppm, от около 0,01 ppm до около 15 ppm, от около 0,01 ppm до около 10 ppm, от около 0,01 ppm до около 5 ppm, от около 0,01 ppm до около 4 ppm, от около 0,01 ppm до около 3 ppm, от около 0,01 ppm до около 2 ppm, от около 0,01 ppm до около 1 ppm, от около 0,01 ppm до около 1000 ppm, от около 0,1 ppm до 1000 ppm, от около 1 ppm до 1000 ppm, от около 2 ppm до около 1000 ppm, от около 3 ppm до около 1000 ppm, от около 4 ppm до около 1000 ppm, от около 5 ppm до около 1000 ppm, от около 10 ppm до около 1000 ppm, от около 15 ppm до около 1000 ppm, от около 25 ppm до около 1000 ppm, от около 50 ppm до около 1000 ppm, от около 75 ppm до около 1000 ppm, от около 100 ppm до около 1000 ppm, от около 150 ppm до около 1000 ppm, от около 250 ppm до около 1000 ppm, от около 250 ppm до около 1000 ppm, от около 500 ppm до около 1000 ppm или от около 750 ppm до около 1000 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,01 ppm до около 500 ppm или от около 0,1 ppm до около 500 ppm, или от около 1 ppm до около 500 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,01 ppm до около 100 ppm или от около 0,1 ppm до около 100 ppm, или от около 1 ppm до около 100 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте для животных в количестве более чем около 0,01 ppm, более чем около 0,1 ppm, более чем около 1 ppm, более чем около 2 ppm, более чем около 3 ppm, более чем около 4 ppm, более чем около 5 ppm, более чем около 10 ppm, более чем около 25 ppm, более чем около 50 ppm, более чем около 75 ppm, более чем около 100 ppm, более чем около 250 ppm, более чем около 500 ppm, более чем около 750 ppm или более чем около 1000 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему раскрытию присутствует в кормовом продукте в количестве, достаточном для модуляции, активации и/или усиления рецептора GPR92, например, рецептора GPR92 кошки. Для примера, но не в качестве ограничения, соединение может присутствовать в кормовом продукте в количестве от около 10 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 0,001 мкМ до около 1 М, от около 0,001 мкМ до около 750 мМ, от около 0,001 мкМ до около 500 мМ, от около 0,001 мкМ до около 250 мМ, от около 0,001 мкМ до около 100 мМ, от около 0,001 мкМ до около 50 мМ, от около 0,001 мкМ до около 25 мМ, от около 0,001 мкМ до около 10 мМ, от около 0,001 мкМ до около 1 мМ, от около 0,001 мкМ до около 100 мкМ или от около 0,001 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 10 пМ до около 1 М или от около 1 пМ до около 1 М, или от около 0,1 пМ до 1 М и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 10 пМ до около 0,5 М или от около 1 пМ до около 0,5 М, или от около 0,1 пМ до около 0,5 М и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 10 пМ до около 0,1 М или от около 1 пМ до около 0,1 М, или от около 0,1 пМ до 0,1 М и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,001% до около 10% вес/вес (вес./вес.) кормового продукта. Для примера, но не в качестве ограничения, вкусоароматическая композиция может присутствовать в количестве от около 0,001% до около 10%, от около 0,01% до около 20%, от около 0,001% до около 1%, от около 0,001% до около 0,1%, от около 0,001% до около 0,01%, от около 0,01% до около 10%, от около 0,01% до около 1%, от около 0,1% до около 10% или от около 0,1% до около 1% вес./вес. и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления по настоящей заявке вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,001% до около 5% или от около 0,01% до около 5%, от около 0,1% до около 5% вес./вес. и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления по настоящей заявке вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,001% до около 1% или от около 0,01% до около 1%, или от около 0,1% до около 1% осуществления и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления по настоящей заявке вкусоароматическую композицию смешивают с кормовым продуктом, где вкусоароматическая композиция присутствует в количестве от около 0,01% до около 10% вес./вес.

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящей заявке смешивают вместе в различных соотношениях или смешивают вместе с другими соединениями, включающими аминокислоты, нуклеотиды и фураноны (как описано в международных заявках №№ PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, и PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, каждая из которых включена посредством ссылки в их полном объеме), и/или трансмембранные соединения, активирующие рецептор умами (как описано в международной заявке № PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в ее полном объеме), и/или производные нуклеотидов (как описано в международной заявке № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в ее полном объеме), и/или активных соединений рецептора жирных кислот (GPR120) (как описано в международной заявке № PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в ее полном объеме) и/или активными соединениями кальцийчувствительного рецептора (CaSR) (как описано в международной заявке № PCT/US17/027698, поданной 14 апреля 2017, которая включена посредством ссылки в ее полном объеме).

5.1. Нуклеотиды и производные нуклеотидов

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия кормовая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, один нуклеотид и/или производное нуклеотида, описанные здесь и в международной заявке № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, которая включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более нуклеотидов и/или производных нуклеотидов, описанных здесь. Неограничивающие примеры нуклеотидов включают гуанозинмонофосфат (ГМФ), инозинмонофосфат (ИМФ), аденозинмонофосфат (АМФ), цитидинмонофосфат (ЦМФ), тиминмонофосфат (ТМФ), ксантозинмонофосфат (КМФ), уридинмонофосфат (УМФ) и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция может содержать нуклеотид и/или производное нуклеотида, присутствующие в кормовом продукте, которые могут присутствовать в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления нуклеотид и/или производное нуклеотида может присутствовать в количестве более чем около 1 мМ или более чем около 2,5 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления нуклеотид и/или производное нуклеотида может присутствовать в количестве менее чем около 100 мМ, менее чем около 50 мМ, менее чем около 20 мМ или менее чем около 10 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления нуклеотид и/или производное нуклеотида присутствует в количестве около 5 мМ в кормовом продукте для домашних животных.

5.2. Аминокислоты

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, одну аминокислоту, описанную здесь и в международных заявках №№ PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, и PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, каждая из которых включена здесь посредством ссылки в их полном объеме. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, две, три, четыре, пять или более аминокислот, описанных здесь.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или более первичных аминокислот и/или, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или более вторичных аминокислот.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, по меньшей мере, одну первичную аминокислоту и, по меньшей мере, одну вторичную аминокислоту.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, по меньшей мере, две первичные аминокислоты и, по меньшей мере, одну вторичную аминокислоту.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, по меньшей мере, одну первичную аминокислоту и, по меньшей мере, две вторичные аминокислоты.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, по меньшей мере, две первичные аминокислоты и, по меньшей мере, две вторичные аминокислоты.

Неограничивающие примеры первичной аминокислоты включают триптофан, фенилаланин, гистидин, глицин, цистеин, аланин, тирозин, серин, метионин, аспарагин, лейцин и их комбинации.

Неограничивающие примеры вторичной аминокислоты включают треонин, изолейцин, пролин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, гидроксипролин, аргинин, цистин, глутамин, лизин, валин, орнитин, таурин, глутамат натрия (MSG) и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одна первичная аминокислота и/или вторичная аминокислота, отдельно или в комбинации, могут присутствовать в количестве от около 1 мМ до около 1 М или от около 250 мМ до около 1 М, или от около 5 мМ до около 500 мМ, или от около 10 мМ до около 100 мМ, или от около 15 мМ до около 50 мМ, или от около 20 мМ до около 40 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления аминокислота(-ы) могут присутствовать в количестве менее около 1 М, менее чем около 200 мМ, менее чем около 100 мМ, менее чем около 50 мМ, менее чем около 20 мМ или менее чем около 10 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления первичная аминокислота и/или вторичная аминокислота, отдельно или в комбинации, могут присутствовать в количестве около 25 мМ в кормовом продукте для домашних животных.

5.3. Трансмембранные соединения

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, как описано в настоящей заявке, и, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение, описанное в международной заявке № PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015, которая включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме, и в таблице 1 ниже.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более трансмембранных соединений.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение и, по меньшей мере, одну аминокислоту, как описано здесь.

В некоторых вариантах осуществления трансмембранное соединение по настоящему раскрытию может присутствовать в кормовом продукте в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 M, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ, и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления трансмембранное соединение может представлять собой соль, стереоизомер или съедобную форму трансмембранного соединения, описанного здесь.

Таблица 1.

Название соединения 5-бром-N-(пентан-3-ил) фуран-2-карбоксамид 3,4-диметил-N-(пентан-3-ил)бензамид; N-(1-этилпропил)-3,4-диметилбензамид 4-метокси-3-метил-N-(1-фенилэтил)бензамид N-(2,3-диметилциклогексил)бензо[d][1,3]диоксол-5-карбоксамид Этил-2-(бензо[d][1,3]диоксол-5-карбоксамидо)-3-метилбутаноат; этил-N-(1,3-бензодиоксол-5-илкарбонил)валинат 4-метокси-3-метил-N-(пентан-2-ил)бензамид N-(пентан-3-ил)-2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-карбоксамид 3,4-диметокси-N-(пентан-3-ил)бензамид (E)-метил-3-метил-2-(3-(тиофен-2-ил)акриламидо)бутаноат (E)-3-(3,4-диметоксифенил)-N-(пентан-2-ил)акриламид; (2E)-3-(3,4-диметоксифенил)-N-(пентан-2-ил)проп-2-енамид (E)-3-(4-метоксифенил)-N-(2-метилциклогексил)акриламид N1-фенетил-N2-(пиридин-3-илметил)оксаламид; N-(2-фенилэтил)-Nʽ-(пиридин-3-илметил)этандиамид N-(гептан-4-ил)бензо[d][1,3]диоксол-5-карбоксамид 1-(2-бромфенил)-3-(1R,2S)-2-гидрокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил)мочевина N-(бензо[d][1,3]диоксол-5-ил)-2-пропилпентанамид 1-бензил-3-(2-оксо-2-фенилэтил)имидазолидин-2,4,5-трион N-(2-амино-2-оксо-1-фенилэтил)-3-хлор-4,5-диметоксибензамид (E)-3-(4-метоксифенил)-N-(пентан-3-ил)акриламид 2-((5-(4-(метилтио)фенил)-2H-тетразол-2-ил)метил)пиридин N-(гептан-4-ил)бензо[d][1,3]диоксол-5-карбоксамид

5.4. Соединения, активирующие рецептор жирных кислот

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор жирных кислот (GPR120), описанное здесь и в международной заявке № PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015, которая включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более соединений, активирующих рецептор жирных кислот, как описано здесь.

Неограничивающие примеры соединений, активирующих рецептор жирных кислот, включают (5Z,8Z,11Z,14Z)-икоза-5,8,11,14-тетраеновую кислоту (также известную как арахидоновая кислота); (5Z,8Z)-икоза-5,8-диеновую кислоту; 4-[4-(гептилокси)фенил]-4-оксобутановую кислоту; (11Z)-октадек-11-еновую кислоту (также известную как цис-вакценовая кислота); (9E)-гексадек-9-еновую кислоту (также известную как пальмитэлаидиновая кислота); тридец-12-еновую кислоту (также известную как 12-тридеценовая кислота); S-фарнезилтиоуксусную кислоту; (10Z)-пентадец-10-еновую кислоту (также известную как (10Z)-10-пентадеценовая кислота); 10(E),12(Z)-конъюгированную линолевую кислоту (также известную как (10Z,12Z)-10,12-октадекадиеновая кислота); (10Z, 13Z)-нонадека-10,13-диеновую кислоту; (9Z,11E)-октадека-9,11-диеновую кислоту; цис-7-гексадеценовую кислоту; додекановую кислоту (также известная как лауриновая кислота); (9Z)-тетрадек-9-еновую кислоту (также известную как миристолеиновая кислота); (11Z,14Z,17Z)-икоса-11,14,17-триеновую кислоту (также известная как дигомо-α-линоленовая кислота (20:3(n-3))); (6Z,9Z,12Z)-октадека-6,9,12-триеновую кислоту (также известную как γ-линоленовая кислота); (11Z,14Z)-икоза-11,14-диеновую кислоту (также известную как дигомолинолевая кислота (20:2(n-6))); (9Z)-гексадек-9-еновую кислоту (также известную как пальмитолеат, (Z)-пальмитолеиновая кислота); 12-метоксидодекановую кислоту; (8Z,11Z,14Z)-икоза-8,11,14-триеновую кислоту; (9Z,12Z)-октадека-9,12-диеновую кислоту (также известную как линолевая кислота); (10Z)-гептадек-10-еновую кислоту; пиноленовую кислоту; (9Z,12Z,15Z)-октадека-9,12,15-триеновую кислоту (также известную как α-линоленовая кислота); тридекановую кислоту (также известную как тридециловая кислота); тетрадекановую кислоту (также известную как миристиновая кислота); (9Z)-октадек-9-еновую кислоту (также известную как олеиновая кислота); GW9508 (также известный как 4-[[(3-феноксифенил)метил]амино]бензолпропановая кислота); (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-икоса-5,8,11,14,17-пентаеновую кислоту (также известную как эйкозапентаеновая кислота); 3-(4-((4-фтор-4ʽ-метилбифенил-2-ил)метокси)фенил)пропановую кислоту (также известную как TUG 891 и 4-[(4-фтор-4ʽ-метил[1,lʽ-бифенил]-2-ил)метокси]бензолпропановая кислота); (10E)-пентадец-10-еновую кислоту; (9E)-тетрадец-9-еновую кислоту (также известную как миристолеат); (6Z,9Z,12Z,15Z)-октадека-6,9,12,15-тетраеновую кислоту; (5Z,8Z,11Z)-эйкоза-5,8,11-триеновую кислоту (также известную как мидовая кислота); додецил дигидрофосфат и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция может включать соединения, активирующие рецептор жирных кислот, присутствующие в кормовом продукте, которые могут присутствовать в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до примерно 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления соединения, активирующие рецептор жирных кислот, могут присутствовать в количестве более чем около 1 мМ или более чем около 2,5 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления соединения, активирующие рецептор жирных кислот, могут присутствовать в количестве менее чем около 100 мМ, менее чем около 50 мМ, менее чем около 20 мМ или менее чем около 10 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления соединения, активирующие рецептор жирных кислот, присутствуют в количестве около 5 мМ в кормовом продукте для домашних животных.

5.5 Соединения, активирующие кальцийчувствительный рецептор

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, одно соединение, активирующее кальцийчувствительный рецептор, как описано здесь и в международной заявке № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, которая включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, раскрытое здесь, и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более соединений, активирующих кальцийчувствительный рецептор, как описано здесь. Неограничивающие примеры соединений, активирующих кальцийчувствительный рецептор, включают N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-6-метилгептан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(фуран-2-ил)-3-(п-толил)пропан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-фенилпропан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-4-метилпентан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-(2-метоксифенил)пропан-1-амин, 3-(фуран-2-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(фуран-2-ил)-3-(2-метоксифенил)пропан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-6-метилгептан-1-амин, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-4-метилпентан-1-амин, 3-(фуран-2-ил)-N-(1-фенилэтил)-3-(п-толил)пропан-1-амин, 3-(2,2-диметилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амин, 3-(фуран-2-ил)-N-(1-(тиофен-2-ил)этил)-3-(п-толил)пропан-1-амин и N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(фуран-2-ил)-4-фенилбутан-1-амин и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматическая композиция может включать соединения, активирующие кальцийчувствительный рецептор, присутствующие в кормовом продукте, которые могут присутствовать в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления соединения, активирующие кальцийчувствительный рецептор, могут присутствовать в количестве более чем около 1 мМ или более чем около 2,5 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления соединения, активирующие кальцийчувствительный рецептор, могут присутствовать в количестве менее чем около 100 мМ, менее чем около 50 мМ, менее чем около 20 мМ или менее чем около 10 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления соединения, активирующие кальцийчувствительный рецептор, присутствуют в количестве около 5 мМ в кормовом продукте для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту, как описано здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия вкусоароматическая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение, как описано здесь.

6. Системы доставки

В некоторых вариантах осуществления вкусоароматические композиции по настоящей заявке можно включать в систему доставки для использования в кормовых продуктах для домашних животных. Системы доставки могут представлять собой безводную жидкость, твердое вещество или эмульсию. Системы доставки обычно адаптируют для соответствия требованиям вкусоароматической композиции и/или кормового продукта для домашних животных, в который вводится вкусоароматическая композиция.

Вкусоароматические композиции можно использовать в безводной жидкой форме, сухой форме, твердой форме и/или в виде эмульсии. При использовании в сухой форме можно применять подходящие способы высушивания, такие как распылительная сушка. Альтернативно, вкусоароматическая композиция может быть инкапсулирована или абсорбирована на нерастворимых в воде материалах. Современные способы получения таких сухих форм хорошо известны в данной области и могут быть применены к настоящему раскрываемому предмету изобретения.

Вкусоароматические композиции по настоящему раскрываемому предмету изобретения можно использовать во многих различных физических формах, хорошо известных в данной области, для обеспечения исходного импульса вкуса, аромата и/или текстуры, и/или пролонгированного ощущения вкуса, аромата и/или текстуры. Но не ограничиваясь этим, такие физические формы включают свободные формы, такие как высушенные распылительной сушкой, порошкообразные, гранулированные формы и инкапсулированные формы и их смеси.

В некоторых вариантах осуществления соединения вкусоароматической композиции можно получить в процессе обработки кормового продукта для домашних животных, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструзии соединений-предшественников, присутствующих в кормовом продукте для домашних животных. В неограничивающем примере композиция может содержать фосфолипид, полученный из мясных (например, курица, говядина, свинина, рыба и/или жир) и/или растительных (например, масла, такие как растительное и подсолнечное масло) источников, которые перерабатываются для производства кормов для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления, как отмечено выше, способы инкапсуляции можно использовать для модификации вкусоароматических систем. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматические соединения, вкусоароматические компоненты или вся вкусоароматическая система могут быть полностью или частично инкапсулированы. Инкапсулирующие материалы и/или способы могут быть выбраны для определения типа модификации вкусоароматической системы.

В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующие материалы и/или способы выбирают для повышения стабильности вкусоароматических соединений, вкусоароматических компонентов или вкусоароматических композиций; в то время как в других вариантах осуществления инкапсулирующие материалы и/или способы выбирают для модификации профиля высвобождения вкусоароматических композиций.

Подходящие инкапсулирующие материалы могут включать, но не ограничиваются ими, гидроколлоиды, такие как альгинаты, пектины, агары, гуаровые камеди, целлюлозы и тому подобное, белки, поливинилацетат, полиэтилен, сшитый поливинилпирролидон, полиметилметакрилат, полилактидная кислота, полигидроксиалканоаты, этилцеллюлоза, поливиниловый ацетатфталат, сложные эфиры полиэтиленгликоля, сополимер метакриловой кислоты и метилметакрилата, сополимер этилена и винилацетата (EVA) и тому подобное и их комбинации. Подходящие способы инкапсуляции могут включать, но не ограничиваются ими, нанесение покрытия распылением, распылительную сушку, охлаждение распылением, абсорбцию, адсорбцию, образование комплексов включения (например, создание комплекса включения аромат/циклодекстрин), коацервацию, нанесение покрытия в кипящем слое, или может быть использован другой способ для инкапсуляции компонента с инкапсулирующим материалом.

Инкапсулированные системы доставки вкусоароматических веществ или подслащивающих веществ содержат гидрофобную матрицу жира или воска, окружающую ядро подслащивающего вещества или вкусоароматического вещества. Жиры могут быть выбраны из любого числа обычных материалов, таких как жирные кислоты, глицериды или полиглицериновые сложные эфиры, сложные эфиры сорбита и их смеси. Примеры жирных кислот включают, но не ограничиваются ими, гидрогенизированные и частично гидрогенизированные растительные масла, такие как пальмовое масло, пальмоядровое масло, арахисовое масло, рапсовое масло, рисовое масло, соевое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло и их комбинации. Примеры глицеридов включают, но не ограничиваются ими, моноглицериды, диглицериды и триглицериды.

Подходящие воски могут быть выбраны из группы, состоящей из природных и синтетических восков и их смесей. Неограничивающие примеры включают парафин, вазелин, карбовакс, микрокристаллический воск, пчелиный воск, карнаубский воск, канделильский воск, ланолин, воск восковницы, воск сахарного тростника, спермацетовый воск, воск рисовых отрубей и их смеси.

Жиры и воски можно использовать по отдельности или в комбинации в количествах от около 10% до около 70%, и в альтернативном варианте в количестве от около 30% до около 60% по весу инкапсулированной системы. При использовании в комбинации жир и воск могут присутствовать в соотношении от около 70:10 до 85:15 соответственно.

Обычные инкапсулированные системы доставки вкусоароматических композиций, вкусоароматического вещества или подслащивающего вещества раскрыты в патентах США № 4597970 и 4722845, раскрытие которых включено здесь посредством ссылки в их полном объеме.

Жидкие системы доставки могут включать, но не ограничиваться ими, системы с использованием дисперсии вкусоароматических композиций по настоящей заявке, например, в углеводных сиропах и/или эмульсиях. Жидкие системы доставки также могут включать экстракты, где соединение и/или вкусоароматические композиции растворяются в растворителе. Твердые системы доставки могут быть созданы с использованием распылительной сушки, нанесения покрытия распылением, охлаждения распылением, сушки в кипящем слое, абсорбции, адсорбции, коацервации, комплексообразования или любой другой стандартной технологии. В некоторых вариантах осуществления система доставки может быть выбрана для соответствия или назначения съедобной композиции. В некоторых вариантах осуществления система доставки включает масляный материал, такой как жир или масло. В некоторых вариантах осуществления система доставки включает кондитерский жир, такой как какао-масло, заменитель какао-масла, суррогат масла-какао или эквивалент какао-масла.

При использовании в сухой форме можно использовать подходящие способы высушивания, такие как распылительная сушка. Альтернативно, вкусоароматическая композиция может быть адсорбирована или абсорбирована на носителях, таких как нерастворимые в воде материалы, и может быть инкапсулирована. Современные способы получения таких сухих форм хорошо известны в данной области.

7. Кормовые продукты для домашних животных

Вкусоароматические композиции по настоящему раскрываемому предмету изобретения можно использовать в широком диапазоне кормовых продуктов для домашних животных. Неограничивающие примеры подходящих кормовых продуктов для домашних животных включают влажные кормовые продукты, сухие кормовые продукты, сырые кормовые продукты, кормовые добавки для домашних животных (например, витамины), питьевые продукты для домашних животных, закуски и лакомства, описанные здесь.

Комбинация вкусоароматической композиции(й) по настоящему раскрываемому предмету изобретения вместе с кормовым продуктом для домашних животных и необязательными компонентами, при необходимости, обеспечивает вкусоароматическое вещество, обладающее неожиданным вкусом и вызывающее, например, сенсорное восприятие фосфолипида, например, за счет повышения активности рецептора GPR92. Раскрытые здесь вкусоароматические композиции можно добавлять до, во время или после обработки смеси или упаковки кормового продукта для домашних животных, а компоненты вкусоароматической композиции можно добавлять последовательно или одновременно. В некоторых вариантах осуществления соединения вкусоароматической композиции можно получить во время обработки кормового продукта для домашних животных, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструзии соединений-предшественников, присутствующих в кормовом продукте для домашних животных. В неограничивающем примере композиция может представлять собой фосфолипид, который получают в процессе обработки кормового продукта для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления фосфолипид получают из мясных (например, курица, говядина, свинина, рыба и/или жир) и/или растительных (например, масла, такие как растительное и подсолнечное масло) источников, которые перерабатываются для производства кормов для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой питательно полноценный сухой кормовой продукт. Сухой или с низким содержанием влаги питательно полноценный кормовой продукт для домашних животных может содержать менее чем около 15% влаги, и содержать от около 10% до около 60% жира, от около 10% до около 70% белка и от около 30% до около 80% углеводов, например, пищевых волокон и золы.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой питательно полноценный влажный кормовой продукт. Влажный или с высоким содержанием влаги питательно полноценный кормовой продукт для домашних животных может содержать более чем около 50% влаги. В некоторых вариантах осуществления влажный кормовой продукт для домашних животных содержит от около 40% жира, от около 50% белка и от около 10% углеводов, например, пищевых волокон и золы.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой питательно полноценный сырой кормовой продукт. Сырой, например, полувлажный или полусухой или слегка сухой или слегка влажный или с промежуточным или средним содержанием влаги, питательно полноценный кормовой продукт для домашних животных содержит от около 15% до около 50% влаги.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой кормовой продукт типа закуска для домашних животных. Неограничивающие примеры кормовых продуктов типа закуска для домашних животных включают закусочные батончики, жевательные продукты для домашних животных, хрустящие лакомства, зерновые батончики, закуски, печенье и сладкие продукты.

В некоторых вариантах осуществления источник белка может происходить из растительного источника, такого как люпиновый белок, пшеничный белок, соевый белок и их комбинации. Альтернативно или дополнительно источник белка может происходить из различных животных источников. Неограничивающие примеры белка животного происхождения включают говядину, свинину, птицу, баранину или рыбу, включая, например, мышечное мясо, мясные субпродукты, мясную муку или рыбную муку.

8. Методы определения показателей вкуса

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса, аромата и/или вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных можно модифицировать смешиванием вкусоароматической композиции с кормовым продуктом или формировать в условиях получения продукта, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления показатель(и) можно усилить или снизить повышением или уменьшением концентрации вкусоароматической композиции, смешанной или полученной с кормовым продуктом. В некоторых вариантах осуществления показатели вкуса модифицированного кормового продукта можно оценить, как описано здесь, и концентрации вкусоароматической композиции, смешанной или полученной с кормовым продуктом, можно повысить или уменьшить в зависимости от результатов оценки.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса и/или вкусовой привлекательности можно определить с использованием испытаний in vitro, в которых определяется способность соединения активировать рецептор GPR92 кошки, экспрессированный клетками in vitro при различных концентрациях. В некоторых вариантах осуществления повышение активации рецептора коррелирует с усилением вкуса и/или вкусовой привлекательности соединения. В некоторых вариантах осуществления композицию оценивают отдельно или в комбинации с другими соединениями. В некоторых вариантах осуществления испытание in vitro включает испытания in vitro, описанные в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса и/или вкусовой привлекательности можно определить с помощью дегустаторов, оценивающих вкус. Для примера, но не в качестве ограничения, дегустационная комиссия может состоять из дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения кошки. В некоторых вариантах осуществления дегустационная комиссия может состоять из дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения собак. В некоторых вариантах осуществления вкусовую привлекательность кормового продукта для домашних животных можно определять по потреблению кормового продукта для домашних животных, содержащего только вкусоароматическую композицию (например, тест одной миски, монадическое ранжирование). В некоторых вариантах осуществления вкусовую привлекательность кормового продукта для домашних животных можно определить предпочтительным потреблением кормового продукта для домашних животных, содержащего вкусоароматическую композицию, описанную здесь, в сравнении с кормовым продуктом для домашних животных, несодержащим вкусоароматическую композицию или другую вкусоароматическую композицию (например, тест двух мисок для тестирования предпочтений, различия и/или выбора).

В некоторых вариантах осуществления вкусовую привлекательность вкусоароматической композиции можно определить предпочтительным потреблением эмульсии (или любой другой композиции, в которую можно добавить соединение по настоящей заявке, например, гель или желатин), содержащей вкусоароматическую композицию, раскрытую здесь, по сравнению с эмульсией, несодержащей вкусоароматической композиции или содержащей другую вкусоароматическую композицию. Например, дегустационную оценку геля можно использовать для сравнения вкусовой привлекательности ряда концентраций соединений при монадической экспозиции. В некоторых вариантах осуществления эмульсия может содержать усилитель вкусовой привлекательности, например L-гистидин, в качестве пищевого/вполне определенного тастанта для увеличения базового потребления эмульсии, что позволяет идентифицировать потенциальное отрицательное влияние испытуемого соединения.

Коэффициент потребления для каждого кормового продукта для домашних животных или эмульсии можно определить, измеряя количество одного потребляемого рациона, деленное на общее потребление. Затем можно рассчитать коэффициент потребления (CR) для сравнения потребления одного рациона в пересчете на другой рацион для определения предпочтительного потребления одного кормового продукта или эмульсии над другим. Альтернативно или дополнительно разницу потребления (g) можно использовать для оценки средней разницы потребления двух эмульсий в тесте двух бутылок или двух кормовых продуктов для домашних животных в тесте двух мисок при выбранном уровне значимости, например, при уровне значимости 5%, для определения средней разницы потребления с 95% доверительным интервалом. Однако, можно использовать любой уровень значимости, например, уровень значимости 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% или 50%. В некоторых вариантах осуществления можно также рассчитать процентные показатели предпочтений, например, процентное предпочтение одной эмульсии или кормового продукта животным представляет собой процент от общего количества потребления эмульсии или кормового продукта во время теста, который приходиться на эту эмульсию или кормовой продукт.

9. Способы получения

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему раскрытию можно получить с использованием стандартных процессов хемосинтеза. В некоторых вариантах осуществления процесс хемосинтеза предоставляет соединение, имеющее чистоту, по меньшей мере, 99,999% или, по меньшей мере, 99% или, по меньшей мере, 95% или, по меньшей мере, 90% или, по меньшей мере, 85% или, по меньшей мере, 80%. В некоторых вариантах осуществления соединения можно получить с использованием стандартных процессов гидролиза, таких как те, которые используют кислоты, ферменты или комбинацию кислот и ферментов.

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему раскрытию можно получить в условиях приготовления продукта, например, во время производства кормового продукта для домашних животных. Для примера, но не в качестве ограничения, соединения по настоящему раскрытию можно получить во время тепловой обработки продукта, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструзии соединений-предшественников, присутствующих в корме для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления жидкий и/или порошкообразный палатант также можно добавлять для улучшения вкуса корма для домашних животных, например, для сухого кормового продукта для домашних животных, и для усиления вкусовой привлекательности корма для домашних животных. Палатант может представлять собой гидролизат мяса (например, печень) и/или гидролизат растений и может необязательно включать другие палатанты, известные в данной области. В некоторых вариантах осуществления соединение можно смешивать или получать в жидком и/или порошкообразном палатанте до его добавления в кормовой продукт для домашних животных. Альтернативно или дополнительно, соединение можно смешивать или получать в жидком и/или порошкообразном палатанте после его добавления в кормовой продукт для домашних животных.

10. Неограничивающие примеры способов по настоящему раскрытию

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с вкусоароматической композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где соединение присутствует в концентрации от около 1 пМ до около 1 М в смеси.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу повышения вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, например, повышением активности рецептора GPR92, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с вкусоароматической композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где соединение присутствует в концентрации от 0,01 ppm до 1000 ppm в смеси.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу повышения вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, например, повышением активности рецептора GPR92, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с вкусоароматической композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где вкусоароматическая композиция присутствует в концентрации от около 0,001% до около 10% вес./вес. или от около 0,01% до около 20% вес./вес., или от около 0,01% до около 5% вес./вес., или от около 0,01% до около 1% вес./вес. в смеси.

ПРИМЕРЫ

Настоящий раскрываемый предмет изобретения будет лучше понятен со ссылкой на следующие примеры, которые приведены в качестве иллюстрации настоящего изобретения, а не в качестве ограничения.

ПРИМЕР 1. МОДЕЛИРОВАНИЕ IN SILICO ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СОЕДИНЕНИЙ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХ С GPR92

Настоящий пример описывает моделирование in silico GPR92 кошки для идентификации предполагаемых модуляторов GPR92.

Вычислительные методы применяли для анализа трехмерной структуры рецептора GPR92 с целью идентификации участков полипептидов, которые можно использовать для селективной модуляции рецептора GPR92. Структурную гомологическую модель 7 трансмембранного домена рецептора GPR92 формировали на основе структур GPCR класса A из банка данных Protein Data Bank (PDB). (Смотри Berman et al., Nucleic Acids Research, 28: 235-242 (2000), которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме). Гомологичные модели строили с использованием пакета программ I-TASSER (смотри Yang et al., Nature Methods, 12: 7-8 (2015), которая включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме) и пакета программ Modeller (смотри Eswar et al., Curr Protoc Bioinformatics, John Wiley & Sons, Inc., Supplement 15, 5.6.1-5.6.30 (2006), которая включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме) из пакета программ DiscoveryStudio (DS) от Dassault Systemes (BIOVIA Corp., San Diego, CA, США).

Моделирование in silico использовали для идентификации аминокислот в 7 трансмембранном домене (7TM) рецептора fGPR92, которые взаимодействуют с соединениями, подвергнутыми докингу в активном сайте рецептора. Рецепторы GPCR класса A включают 7 трансмембранный домен (7TM).

Остатки, выстилающие активный сайт GPR92 кошки, включают: Arg83 на спирали 2; Gly103, Phe106, Gln107, Met110 и Cys114 на спирали 3; Thr161 и His165 на спирали 4; Ala200, Gly204 и Pro208 на спирали 5; Phe248, Phe252, Tyr255, Asn256 и Leu259 на спирали 6; Arg281, Met285 и Val288 на спирали 7; а также Glu182 на второй внеклеточной петле (EC2). В частности, как описано ниже, Arg83, Arg281 и Tyr255 играли решающую роль в гомологических моделях, образуя солевые мостики и водородные связи для координации отрицательно заряженных головных групп и полярных частей соединений, связанных с активным сайтом.

Три связывающих GPR92 соединения подвергали докингу в активном сайте домена 7TM GPR92 кошки.

Как показано на фиг.28C, LPA C18:1 (1-(9Z-октадеценил)-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат) образует солевой мостик с Arg83 и водородные связи с Tyr255. Хвост LPA C18:1 проходит через длинный гидрофобный канал, образуя множественные гидрофобные взаимодействия.

Как показано на фиг.29C, AGP 16:0 (1-гексадецил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфат) располагал фосфат таким образом, чтобы потенциально образовывать электростатические взаимодействия с Arg281 и Arg83 и водородных связей с Tyr255. Хвост AGP 16:0 проходит через длинный гидрофобный канал, образуя множественные гидрофобные взаимодействия.

Как показано на фиг.30C, октадеценил фосфат (9Z-октадеценил фосфат) образует солевой мостик с Arg281 и ARG83, водородные связи с ARG281. Хвост октадеценил фосфата проходит через длинный гидрофобный канал, образуя множественные гидрофобные взаимодействия.

ПРИМЕР 2. СОЕДИНЕНИЯ/КОМПОЗИЦИИ, АКТИВИРУЮЩИЕ РЕЦЕПТОР fGPR92

В настоящем примере описывается активация рецептора GPR92 кошки (fGPR92) различными соединениями и композициями in vitro.

Образцы, которые могут выполнять функции агонистов GPR92, идентифицировали по функциональной характеристике in vitro. Оценивали эффективность образца для активации рецептора fGPR92.

Методы: клетки CHO-K1, стабильно экспрессирующие fGPR92, использовали для скрининга 118 испытуемых образцов для идентификации образцов, которые могут активировать рецептор fGPR92. Активацию рецептора fGPR92 определяли по изменениям концентраций внутриклеточного кальция с использованием кальцийчувствительного флуоресцентного красителя. Клетки без экспрессии рецептора fGPR92 (макетные клетки) использовали в качестве контроля. Для сбора данных использовали систему FLIPR® Tetra.

Каждый образец сначала испытывали на его способность активировать fGPR92 при трех различных значениях доз как в виде агониста, так и в виде положительного аллостерического модулятора. Активные образцы дополнительно испытывали при восьми различных значениях доз как в виде агониста, так и в виде положительного аллостерического модулятора. В этом примере использовали пептон от Sigma-Aldrich (номер продукта: P5905; номер CAS 73049-73-7). Затем для каждого образца строили кривые зависимости доза-эффект. Ментол и коричный альдегид использовали в качестве отрицательного контроля. В виде агонистов (АГО) 14:0 LPA при 10 мкМ (EC100) использовали в качестве положительного контроля, а аналитический буфер использовали в качестве отрицательного контроля. В виде положительного аллостерического модулятора (ПАМ) 14:0 LPA при 10 мкМ (EC100) использовали в качестве положительного контроля, а 14:0 LPA при 10 нМ (EC20) использовали в качестве отрицательного контроля.

Результаты: идентифицировали 21 активный образец в качестве селективного агониста при первоначальном испытании. Ни один из образцов не проявил положительной аллостерической модуляторной активности. Эти образцы отбирали для дальнейшего испытания.

На фиг.1-23 приведены кривые зависимости доза-эффект для отобранных образцов и отрицательных контролей (ментол и коричный альдегид) с использованием восьми или десяти различных значений доз как в виде агониста, так и в виде положительного аллостерического модулятора. В виде агониста каждый отобранный образец активировал fGPR92 при различных концентрациях демонстрировал значение EC50 ниже 0,02 мМ. Ментол и коричный альдегид не активировали рецептор fGPR92, как ожидалось. Ни один из образцов не проявил активности положительного аллостерического модулятора. Эти результаты обобщенно представлены на фиг.24.

ПРИМЕР 3. ТЕСТЫ ПО КОРМЛЕНИЮ ЖИВОТНЫХ

Кошкам предоставляли доступ к парам растворов, указанным в следующих тестах: Тест 1: 0,1% пептон и простая вода; Тест 2: 1% пептон и простая вода; и Тест 3: 0,1% пептона и 1% пептона. В этом примере использовали пептон от Sigma-Aldrich (номер продукта: P5905; номер CAS 73049-73-7).

В методологии использовался тест выбора из двух мисок с 24 кошками (окончательное количество кошек для каждого теста может изменяться вследствие отбрасывания данные по причине разливания и тому подобного). Кошки размещались по отдельности во время периодов тестирования и имели свободный доступ к воде между периодами тестирования. Каждое тестирование включало тест выбора между пептоном в заданной концентрации, растворенным в деионизированной воде, и пептоном в другой заданной концентрации, растворенным в деионизированной воде, или только деионизированной водой. Контроль производился для позиционного смещения (например, A/B для первой экспозиции и B/A для второй экспозиции) и потерь от испарения. Время тестирования составляло 1 час в день, обеспечивая двухдневное перекрестное кормление. После двух последовательных дней каждого тестирования кошки имели два последовательных дня отдыха. Кошкам предлагали сухой рацион в виде однократного приема корма в начале каждого тестового периода в течение 30 минут, рассчитанного с учетом индивидуальных потребностей каждой кошки.

Результаты представлены ниже в таблицах 2-4 и на фиг.25-27. Результаты показали, что кошки предпочитали пептонную воду простой воде и предпочитали 1% пептонную воду 0,1% пептонной воде.

Таблица 2.

Тест 1: 0,1% пептон и простая вода

Таблица ANOVA для фиксированных эффектов

Фактор Степени свободы F-значение P-значение Числитель Знаменатель Разница между продуктами 1 24 65,99 0,0000

Таблица средней разницы продуктов, стандартной ошибки и 95% доверительных интервалов

Разница между продуктами Среднее значение Стандартная ошибка 95% доверительный интервал Нижняя Верхняя Вода - 0,1% пептон -19,65 2,42 -24,65 -14,66

Потребление 0,1% пептона составляло в среднем на 19,65 г больше, чем потребление простой воды.

Таблица 3.

Тест 2: 1% пептон и простая вода

Таблица ANOVA для фиксированных эффектов

Фактор Степени свободы F-значение P-значение Числитель Знаменатель Разница между продуктами 1 24 44,86 0,0000

Таблица средней разницы продуктов, стандартной ошибки и 95% доверительных интервалов

Разница между продуктами Среднее значение Стандартная ошибка 95% доверительный интервал Нижняя Верхняя Вода - 1% пептон -22,38 3,34 -29,27 -15,48

Потребление 1% пептона составляло в среднем на 22,38 г больше, чем потребление простой воды.

Таблица 4.

Тест 3: 0,1% пептон и 1% пептон

Таблица ANOVA для фиксированных эффектов

Фактор Степени свободы F-значение P-значение Числитель Знаменатель Разница между продуктами 1 24 24,45 0,0000

Таблица средней разницы продуктов, стандартной ошибки и 95% доверительных интервалов

Разница между продуктами Среднее значение Стандартная ошибка 95% доверительный интервал Нижняя Верхняя 0,1% пептон - 1% пептон 17,60 3,56 10,26 24,95

Потребление 1% пептона составляло в среднем на 17,60 г больше, чем потребление 0,1% пептона.

Несмотря на то, настоящий раскрываемый предмет изобретения и его преимущества были описаны подробно, следует понимать, что различные изменения, замены и варианты могут быть сделаны здесь без отступления от сущности и объема изобретения, определяемого прилагаемой формулой изобретения. Кроме того, объем настоящей заявки не предназначен для ограничения конкретными вариантами осуществления способа, устройств, производства, композиции веществ, средств, методов и стадий, приведенных в описании. Как легко поймет специалист в данной области из раскрытия настоящего раскрываемого предмета изобретения, способы, устройства, производство, композиции веществ, средства, методы или стадии, существующие в настоящее время или которые будут разработаны позднее, выполняющие по существу ту же самую функцию или позволяющие получать по существу такой же результат, как и соответствующие варианты осуществления, описанные здесь, можно использовать в соответствии с настоящим раскрываемым предметом изобретения. Соответственно, прилагаемая формула изобретения предполагает включение в ее объем таких способов, устройств, производства, композиций веществ, средств, методов или стадий.

В данной заявке приведены патенты, заявки на патенты, публикации описаний продуктов и протоколы, раскрытие которых включено здесь посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> MARS, Inc.

<120> СОЕДИНЕНИЯ, МОДУЛИРУЮЩИЕ АКТИВНОСТЬ РЕЦЕПТОРОВ GPR92, И

КОРМОВЫЕ ПРОДУКТЫ ДЛЯ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ.

<130> 069269.0284PCT

<150> US 62/728,229

<151> 2018-09-07

<160> 6

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 1122

<212> ДНК

<213> Домашняя кошка (Felis catus)

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(1122)

<223> Нуклеотидная последовательность GPR92 кошки

<400> 1

atgttgccca actctaccaa cagttctgtt ccccctgcca acggttctgt tcccccgtgc

60

cccgactacc ggcccaccca ccgcctgcac atggtggcct acagcctggt gctggccgca

120

gggctccccc tcaacgcgct ggccctctgg gtcttcctgc gcgcgctgcg agtgcactcc

180

gtcgtgagcg tgtacatgtg caacctggcg gccagcgacc tgctcttcac cctctcgctg

240

cccgtgcgca tctcctacta cgccctgcac tactggccct tctccgacct cctgtgccag

300

acggcgggcg ccatcttcca gacgaacatg tacggcagct gcatcttcct gactctcatc

360

aacgtggacc gctacgcggc catcgtgcac ccgctgcggc tgcgccacct gcggcggccc

420

cgcgtggcgc ggctgctctg cctgggagtg tgggcgctca tcctcgtgtt cgctgtgccc

480

accgtcctgg tgcacaggcc ctcgtcctgc agctacggcg gcggccaggt gcgcctgtgc

540

ttcgagagct tcggcgacag gctgtggaag ggcgggctgc tgccgctcgt gctgctggcc

600

gaggcgctgg gcttcctgct gcccctggtg gcggtgctct actcgtcggg ccgggtcttc

660

tggaccctgg cgcggcccga cgccacgcag agccagcggc ggcggaagac cgtgcgcctc

720

ctgctggcca acctcgtcat cttcctgctg tgcttcgtgc cctacaacgc cacgctggcg

780

gtgtacgggc tgctgcgggg caacctggtg gcggcgaaca gcaaggtctg cgatcgggtg

840

cgcggggtgc tgatggtgat ggtgctgttg gccggcgcca actgcgtgct agaccctctg

900

gtgtattact tcagcgccga gggtttccgc aacaccctgc gaggcctggg cactccgaac

960

cgcgccagga ccttggccac caacggggct cagggggcgc tcgccgaaca gcccactgag

1020

accacttaca tcaccacccc ggctaccgcc gaacaggggc tgctcaggcc ctccaacgtg

1080

gggacaccct taacccagct ccccgaggac tcggccctct ga

1122

<210> 2

<211> 1101

<212> ДНК

<213> Собака домашняя (Canis familiaris)

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(1101)

<223> Нуклеотидная последовательность GPR92 собаки

<400> 2

atgctgaccg cctcggccaa cagctccgtc cccccatgcc ccgactaccg ggtcacccac

60

cgcctgcaca tggtggccta cagcctggtg ctggccgcgg ggctccccct caacgcgctg

120

gccctctggg tcttcctgcg cgcgctgcgc gtgcactccg tggtcagcgt gtacatgtgc

180

aacctggcgg ccagcgacct gctcttcacg ctctcgctgc ccgtgcgcat ctcctactac

240

gccctgcacc actggccctt ctccgacctc ctgtgtcaga cggccggcgc cgtcttccag

300

accaacatgt acggcagctg catcttcctg accctcatta acgtggaccg ctacgcggcc

360

atcgtgcacc cactgcggct gcgccacctg cggcggcccc gcgtggcgcg gctgctgtgc

420

ctgggcgtgt gggcgctcat cctggtgttc gccgtgccca ccgtcctggt gcaccggccc

480

tcgccctgca gctacgacgg cggccgggcg cggctgtgct tcgagagctt cggcgacaag

540

ctgtggaagg gcgggctgct gccgctcgtg ctgctggccg aggcgctggg cttcctgctg

600

ccgctcgcgg ccatgctcta ctcgtcgggc cgggtcttct ggaccctggc gcggcccgac

660

gccacgcgga gccggcggcg gcggaagacc gtgcgcctcc tgctggccaa cctcgtcatc

720

ttcctgctgt gcttcgtgcc ctacaacgcc acgctggccg tctacgggct gctgcggggc

780

aacctggtgg cggccggcag cgaggccagc gaccgcgtgc gccaggtgct catggtgatg

840

gtgctgctgg ccagcgccaa ctgcgtgctg gacccgctgg tgtactactt cagcgccgag

900

ggcttccgca acaccctgcg cggcctgggc acttggcacc gtgccaggac cttggccacc

960

aacggggcgc agggggcgct ggccgagcgg ctcaccgaga ccacctgcat cgccgggccg

1020

gctcccgcca gccgagagcc tcccgcgtcc tcccccgggg ggacgccctt gacccagcgc

1080

cgggaggact cggccctctg a

1101

<210> 3

<211> 1119

<212> ДНК

<213> Человек разумный (Homo sapiens)

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(1119)

<223> Нуклеотидная последовательность GPR человека

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(1119)

<223> Нуклеотидная последовательность GPR92 человека

<400> 3

atgttagcca acagctcctc aaccaacagt tctgttctcc cgtgtcctga ctaccgacct

60

acccaccgcc tgcacttggt ggtctacagc ttggtgctgg ctgccgggct ccccctcaac

120

gcgctagccc tctgggtctt cctgcgcgcg ctgcgcgtgc actcggtggt gagcgtgtac

180

atgtgtaacc tggcggccag cgacctgctc ttcaccctct cgctgcccgt tcgtctctcc

240

tactacgcac tgcaccactg gcccttcccc gacctcctgt gccagacgac gggcgccatc

300

ttccagatga acatgtacgg cagctgcatc ttcctgatgc tcatcaacgt ggaccgctac

360

gccgccatcg tgcacccgct gcgactgcgc cacctgcggc ggccccgcgt ggcgcggctg

420

ctctgcctgg gcgtgtgggc gctcatcctg gtgtttgccg tgcccgccgc ccgcgtgcac

480

aggccctcgc gttgccgcta ccgggacctc gaggtgcgcc tatgcttcga gagcttcagc

540

gacgagctgt ggaaaggcag gctgctgccc ctcgtgctgc tggccgaggc gctgggcttc

600

ctgctgcccc tggcggcggt ggtctactcg tcgggccgag tcttctggac gctggcgcgc

660

cccgacgcca cgcagagcca gcggcggcgg aagaccgtgc gcctcctgct ggctaacctc

720

gtcatcttcc tgctgtgctt cgtgccctac aacagcacgc tggcggtcta cgggctgctg

780

cggagcaagc tggtggcggc cagcgtgcct gcccgcgatc gcgtgcgcgg ggtgctgatg

840

gtgatggtgc tgctggccgg cgccaactgc gtgctggacc cgctggtgta ctactttagc

900

gccgagggct tccgcaacac cctgcgcggc ctgggcactc cgcaccgggc caggacctcg

960

gccaccaacg ggacgcgggc ggcgctcgcg caatccgaaa ggtccgccgt caccaccgac

1020

gccaccaggc cggatgccgc cagtcagggg ctgctccgac cctccgactc ccactctctg

1080

tcttccttca cacagtgtcc ccaggattcc gccctctga

1119

<210> 4

<211> 373

<212> ПРТ

<213> Домашняя кошка (Felis catus)

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(373)

<223> Аминокислотная последовательность GPR92 кошки

<400> 4

Met Leu Pro Asn Ser Thr Asn Ser Ser Val Pro Pro Ala Asn Gly Ser

1 5 10 15

Val Pro Pro Cys Pro Asp Tyr Arg Pro Thr His Arg Leu His Met Val

20 25 30

Ala Tyr Ser Leu Val Leu Ala Ala Gly Leu Pro Leu Asn Ala Leu Ala

35 40 45

Leu Trp Val Phe Leu Arg Ala Leu Arg Val His Ser Val Val Ser Val

50 55 60

Tyr Met Cys Asn Leu Ala Ala Ser Asp Leu Leu Phe Thr Leu Ser Leu

65 70 75 80

Pro Val Arg Ile Ser Tyr Tyr Ala Leu His Tyr Trp Pro Phe Ser Asp

85 90 95

Leu Leu Cys Gln Thr Ala Gly Ala Ile Phe Gln Thr Asn Met Tyr Gly

100 105 110

Ser Cys Ile Phe Leu Thr Leu Ile Asn Val Asp Arg Tyr Ala Ala Ile

115 120 125

Val His Pro Leu Arg Leu Arg His Leu Arg Arg Pro Arg Val Ala Arg

130 135 140

Leu Leu Cys Leu Gly Val Trp Ala Leu Ile Leu Val Phe Ala Val Pro

145 150 155 160

Thr Val Leu Val His Arg Pro Ser Ser Cys Ser Tyr Gly Gly Gly Gln

165 170 175

Val Arg Leu Cys Phe Glu Ser Phe Gly Asp Arg Leu Trp Lys Gly Gly

180 185 190

Leu Leu Pro Leu Val Leu Leu Ala Glu Ala Leu Gly Phe Leu Leu Pro

195 200 205

Leu Val Ala Val Leu Tyr Ser Ser Gly Arg Val Phe Trp Thr Leu Ala

210 215 220

Arg Pro Asp Ala Thr Gln Ser Gln Arg Arg Arg Lys Thr Val Arg Leu

225 230 235 240

Leu Leu Ala Asn Leu Val Ile Phe Leu Leu Cys Phe Val Pro Tyr Asn

245 250 255

Ala Thr Leu Ala Val Tyr Gly Leu Leu Arg Gly Asn Leu Val Ala Ala

260 265 270

Asn Ser Lys Val Cys Asp Arg Val Arg Gly Val Leu Met Val Met Val

275 280 285

Leu Leu Ala Gly Ala Asn Cys Val Leu Asp Pro Leu Val Tyr Tyr Phe

290 295 300

Ser Ala Glu Gly Phe Arg Asn Thr Leu Arg Gly Leu Gly Thr Pro Asn

305 310 315 320

Arg Ala Arg Thr Leu Ala Thr Asn Gly Ala Gln Gly Ala Leu Ala Glu

325 330 335

Gln Pro Thr Glu Thr Thr Tyr Ile Thr Thr Pro Ala Thr Ala Glu Gln

340 345 350

Gly Leu Leu Arg Pro Ser Asn Val Gly Thr Pro Leu Thr Gln Leu Pro

355 360 365

Glu Asp Ser Ala Leu

370

<210> 5

<211> 366

<212> ПРТ

<213> Собака домашняя (Canis familiaris)

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(366)

<223> Аминокислотная последовательность GPR92 собаки

<400> 5

Met Leu Thr Ala Ser Ala Asn Ser Ser Val Pro Pro Cys Pro Asp Tyr

1 5 10 15

Arg Val Thr His Arg Leu His Met Val Ala Tyr Ser Leu Val Leu Ala

20 25 30

Ala Gly Leu Pro Leu Asn Ala Leu Ala Leu Trp Val Phe Leu Arg Ala

35 40 45

Leu Arg Val His Ser Val Val Ser Val Tyr Met Cys Asn Leu Ala Ala

50 55 60

Ser Asp Leu Leu Phe Thr Leu Ser Leu Pro Val Arg Ile Ser Tyr Tyr

65 70 75 80

Ala Leu His His Trp Pro Phe Ser Asp Leu Leu Cys Gln Thr Ala Gly

85 90 95

Ala Val Phe Gln Thr Asn Met Tyr Gly Ser Cys Ile Phe Leu Thr Leu

100 105 110

Ile Asn Val Asp Arg Tyr Ala Ala Ile Val His Pro Leu Arg Leu Arg

115 120 125

His Leu Arg Arg Pro Arg Val Ala Arg Leu Leu Cys Leu Gly Val Trp

130 135 140

Ala Leu Ile Leu Val Phe Ala Val Pro Thr Val Leu Val His Arg Pro

145 150 155 160

Ser Pro Cys Ser Tyr Asp Gly Gly Arg Ala Arg Leu Cys Phe Glu Ser

165 170 175

Phe Gly Asp Lys Leu Trp Lys Gly Gly Leu Leu Pro Leu Val Leu Leu

180 185 190

Ala Glu Ala Leu Gly Phe Leu Leu Pro Leu Ala Ala Met Leu Tyr Ser

195 200 205

Ser Gly Arg Val Phe Trp Thr Leu Ala Arg Pro Asp Ala Thr Arg Ser

210 215 220

Arg Arg Arg Arg Lys Thr Val Arg Leu Leu Leu Ala Asn Leu Val Ile

225 230 235 240

Phe Leu Leu Cys Phe Val Pro Tyr Asn Ala Thr Leu Ala Val Tyr Gly

245 250 255

Leu Leu Arg Gly Asn Leu Val Ala Ala Gly Ser Glu Ala Ser Asp Arg

260 265 270

Val Arg Gln Val Leu Met Val Met Val Leu Leu Ala Ser Ala Asn Cys

275 280 285

Val Leu Asp Pro Leu Val Tyr Tyr Phe Ser Ala Glu Gly Phe Arg Asn

290 295 300

Thr Leu Arg Gly Leu Gly Thr Trp His Arg Ala Arg Thr Leu Ala Thr

305 310 315 320

Asn Gly Ala Gln Gly Ala Leu Ala Glu Arg Leu Thr Glu Thr Thr Cys

325 330 335

Ile Ala Gly Pro Ala Pro Ala Ser Arg Glu Pro Pro Ala Ser Ser Pro

340 345 350

Gly Gly Thr Pro Leu Thr Gln Arg Arg Glu Asp Ser Ala Leu

355 360 365

<210> 6

<211> 372

<212> ПРТ

<213> Человек разумный (Homo sapiens)

<220>

<221> GPR92

<222> (1)..(372)

<223> Аминокислотная последовательность GPR92 человека

<400> 6

Met Leu Ala Asn Ser Ser Ser Thr Asn Ser Ser Val Leu Pro Cys Pro

1 5 10 15

Asp Tyr Arg Pro Thr His Arg Leu His Leu Val Val Tyr Ser Leu Val

20 25 30

Leu Ala Ala Gly Leu Pro Leu Asn Ala Leu Ala Leu Trp Val Phe Leu

35 40 45

Arg Ala Leu Arg Val His Ser Val Val Ser Val Tyr Met Cys Asn Leu

50 55 60

Ala Ala Ser Asp Leu Leu Phe Thr Leu Ser Leu Pro Val Arg Leu Ser

65 70 75 80

Tyr Tyr Ala Leu His His Trp Pro Phe Pro Asp Leu Leu Cys Gln Thr

85 90 95

Thr Gly Ala Ile Phe Gln Met Asn Met Tyr Gly Ser Cys Ile Phe Leu

100 105 110

Met Leu Ile Asn Val Asp Arg Tyr Ala Ala Ile Val His Pro Leu Arg

115 120 125

Leu Arg His Leu Arg Arg Pro Arg Val Ala Arg Leu Leu Cys Leu Gly

130 135 140

Val Trp Ala Leu Ile Leu Val Phe Ala Val Pro Ala Ala Arg Val His

145 150 155 160

Arg Pro Ser Arg Cys Arg Tyr Arg Asp Leu Glu Val Arg Leu Cys Phe

165 170 175

Glu Ser Phe Ser Asp Glu Leu Trp Lys Gly Arg Leu Leu Pro Leu Val

180 185 190

Leu Leu Ala Glu Ala Leu Gly Phe Leu Leu Pro Leu Ala Ala Val Val

195 200 205

Tyr Ser Ser Gly Arg Val Phe Trp Thr Leu Ala Arg Pro Asp Ala Thr

210 215 220

Gln Ser Gln Arg Arg Arg Lys Thr Val Arg Leu Leu Leu Ala Asn Leu

225 230 235 240

Val Ile Phe Leu Leu Cys Phe Val Pro Tyr Asn Ser Thr Leu Ala Val

245 250 255

Tyr Gly Leu Leu Arg Ser Lys Leu Val Ala Ala Ser Val Pro Ala Arg

260 265 270

Asp Arg Val Arg Gly Val Leu Met Val Met Val Leu Leu Ala Gly Ala

275 280 285

Asn Cys Val Leu Asp Pro Leu Val Tyr Tyr Phe Ser Ala Glu Gly Phe

290 295 300

Arg Asn Thr Leu Arg Gly Leu Gly Thr Pro His Arg Ala Arg Thr Ser

305 310 315 320

Ala Thr Asn Gly Thr Arg Ala Ala Leu Ala Gln Ser Glu Arg Ser Ala

325 330 335

Val Thr Thr Asp Ala Thr Arg Pro Asp Ala Ala Ser Gln Gly Leu Leu

340 345 350

Arg Pro Ser Asp Ser His Ser Leu Ser Ser Phe Thr Gln Cys Pro Gln

355 360 365

Asp Ser Ala Leu

370

<---

Изобретение относится к кормовым продуктам для домашних животных. Кормовой продукт включает вкусоароматическую композицию, содержащую a) по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из триполифосфата натрия (Na₅P₃O₁₀), гидролизата из рыбы, пептона, 16:0 лизо-PG 1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфоглицерина и любой их комбинации, и b) воду, при этом кормовой продукт включает кормовой продукт для домашних животных. Вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от 10 пМ до 1 М, или в концентрации от 0,01 до 1000 ppm, или в концентрации от 0,01 до 10% вес./вес., или в концентрации от 1 нМ до 0,1 М. Кормовой продукт применяют для кошек и собак. Кормовой продукт может быть влажным или сухим кормовым продуктом. Предлагаемый кормовой продукт обладает повышенной пищевой привлекательностью за счет включения вкусоароматической композиции, которая модулирует, увеличивает и/или усиливает активность рецептора GPR92. 8 з.п. ф-лы, 6 табл., 83 ил., 3 пр.

1. Кормовой продукт, содержащий вкусоароматическую композицию, содержащую

a) по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из триполифосфата натрия (Na₅P₃O₁₀), гидролизата из рыбы, пептона, 16:0 лизо-PG 1-пальмитоил-2-гидрокси-sn-глицеро-3-фосфоглицерина и любой их комбинации, и

b) воду;

где кормовой продукт включает кормовой продукт для домашних животных.

2. Кормовой продукт по п.1, где вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от 10 пМ до 1 М.

3. Кормовой продукт по п.1, где вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от 0,01 до 1000 ppm.

4. Кормовой продукт по п.1, где вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от 0,01 до 10% вес./вес.

5. Кормовой продукт по п.1, где вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от 1 нМ до 0,1 М.

6. Кормовой продукт по п.1, где вкусоароматическая композиция содержит пептон или гидролизат из рыбы и вкусоароматическая композиция присутствует в кормовом продукте в концентрации от 0,1 до 10%.

7. Кормовой продукт по одному из пп.1-6, где кормовой продукт для домашних животных представляет собой кормовой продукт для домашних кошек или кормовой продукт для домашних собак.

8. Кормовой продукт по п.7, где кормовой продукт для домашних животных представляет собой влажный кормовой продукт для домашних животных.

9. Кормовой продукт по п.7, где кормовой продукт для домашних животных представляет собой сухой кормовой продукт для домашних животных.