ВАКЦИНА ПРОТИВ КОШАЧЬЕГО КАЛИЦИВИРУСА Российский патент 2023 года по МПК A61K39/12 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По этой заявке испрашивается приоритет в соответствии с 35 U.S.C. §119(e) временной заявки на патент США c серийным номером 62/596508, поданной 8 декабря 2017 г., временной заявки на патент США с серийным номером 62/582050, поданной 6 ноября 2017 г., временной заявки на патент США с серийным номером 62/581955, поданной 6 ноября 2017 г., и временной заявки на патент США с серийным номером 62/599401, поданной 15 декабря 2017 г., содержание которых в полном объеме включено здесь посредством ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым вакцинам против кошачьего калицивируса. Также изобретение относится к способам получения и применения вакцин индивидуально или в комбинации с другими защитными агентами.

Уровень техники

Кошачий калицивирус (FCV) обычно ассоциируется с заболеванием верхних дыхательных путей у кошек. Считается, что FCV вместе с герпесвирусом кошачьих ответственны примерно за 80% всех респираторных заболеваний у представителей семейства кошачьих. Наиболее распространенными характерными клиническими признаками FCV инфекции является появление везикул (язв) на языке и слизистой оболочке ротовой полости. Эти везикулы вначале появляются в виде небольших единичных язв, которые могут распространяться и поражать большую часть языка. Везикулы обычно не мешают животному принимать корм и воду, и, как правило, заживают без осложнений. У инфицированных кошек также часто наблюдается лихорадка.

Некоторые штаммы FCV также вызывают заболевание у кошек, известное как синдром хромоты. Синдром хромоты характеризуется лихорадкой, болями в суставах и мышцах (хромота), и иногда изъязвлениями на языке/слизистой ротовой полости. Кроме того, некоторые штаммы FCV связывали с хроническим стоматитом у инфицированных кошек. Другими, менее распространенными клиническими признаками инфекции являются конъюнктивит, ринит и иногда пневмония. Кошки, инфицированные FCV, могут стать хронически инфицированными и могут выделять инфекционный вирус в течение длительных периодов времени.

FCV содержит одноцепочечный РНК-геном с положительной смысловой цепью, состоящий из трех открытых рамок считывания (ORF). Геном полиаденилирован на 3'-конце и связан с кодированным вирусом белком на 5'-конце. Первая открытая рамка считывания кодирует вирусную протеазу и РНК-зависимую РНК-полимеразу, которые экспрессируются в виде одного полипептида. Затем данный полипептид посттрансляционно расщепляется вирусной протеазой. Вторая открытая рамка считывания кодирует главный капсидный белок (т.е. капсидный белок FCV), который имеет шесть областей, обозначенных как A-F [Scott et al., Am. J. Vet. Res., 60:652-658 (1999)]. Область А расщепляется с образованием зрелого капсидного белка. В то время как области B, D и F ORF2 являются относительно консервативными среди изолятов FCV, области C и E являются вариабельными, при этом область E ORF2 содержит основные B-клеточные эпитопы [см. Radford et al., Vet. Res., 38 (2): 319-335 (2007)]. ORF 3 кодирует минорный структурный белок [Sosnovtsev and Green, Virology, 277: 193-203 (2000)].

В течение многих лет при создании вакцин в целях защиты от определенных патогенов использовался ряд векторных стратегий. Одна такая векторная стратегия включает применение частиц РНК-репликона альфа-вируса (RP) [Vander Veen et al., Anim Health Res Rev., 13 (1):1-9 (2012) doi: 10.1017/S1466252312000011; Kamrud et al., J. Gen. Virol., 91(Pt7):1723-1727 (2010)], которые были разработаны на основе нескольких различных альфа-вирусов, включая вирус венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) [Pushko et al., Virology, 239:389-401 (1997)], вирус Синдбис (SIN) [Bredenbeek et al., Journal of Virology, 67:6439-6446 (1993)] и вирус леса Семлики (SFV) [Liljestrom and Garoff, Biotechnology (NY), 9:1356-1611 (1991)]. Вакцины на основе RP доставляют репликационно-дефектные РНК-репликоны альфа-вируса в клетки-хозяева и приводят к экспрессии желаемого антигенного трансгена(ов) in vivo [Pushko et al., Virology, 239(2):389-401 (1997)]. RP обладают привлекательным профилем безопасности и эффективности по сравнению с некоторыми обычными вакцинными композициями [Vander Veen et al., Anim. Health Res. Rev., 13 (1):1-9.(2012)]. Платформу RP использовали для кодирования патогенных антигенов, и она является основой для нескольких лицензированных USDA вакцин для свиней и птицы.

Несмотря на то, что длительное время они характеризовались как относящиеся к одному серотипу, изоляты FCV в антигенном отношении являются высоковариабельными, и антитела от кошек, вакцинированных более старыми вакцинными штаммами FCV, такими как FCV-F9, не нейтрализуют эффективно все имеющиеся в настоящее время полевые изоляты. Кроме того, были идентифицированы новые штаммы FCV, ассоциированные с системным заболеванием и высокой смертностью [см., например, заявка на патент США № 7449323 B2]. Эти «вирулентные системные» (VS-FCV) изоляты ответственны за локализованные вспышки инфекции, и имеющиеся в настоящее время вакцины также не защищают кошек от инфекций, вызванных этими штаммами. Это вызывает обеспокоенность тем, что кошки, вакцинированные имеющимися вакцинными штаммами, не полностью защищены от инфекций, вызванных такими «антигенно гетерологичными» штаммами FCV, и что эти гетерологичные штаммы могут быть ответственны за вспышки инфекций, даже у вакцинированных кошек. Следовательно, желательно разработать новые вакцины, которые стимулируют выработку более широко реактивных вирус-нейтрализующих (VN) антител и, соответственно, обеспечивают лучшую защиту от новых полевых изолятов.

Цитирование любой ссылки в настоящей заявке не должно быть истолковано как признание того, что такая ссылка доступна в качестве предшествующего уровня техники для настоящего изобретения.

Сущность изобретения

Следовательно, настоящее изобретение относится к векторам, которые кодируют один или более антигенов кошачьего калицивируса (FCV). Такие векторы можно использовать в иммуногенных композициях, содержащих эти векторы. Иммуногенные композиции по настоящему изобретению можно использовать в вакцинах. В одном аспекте настоящего изобретения вакцина защищает вакцинированного субъекта (например, млекопитающего) от FCV. В конкретном варианте осуществления этого типа вакцинированный субъект является представителем семейства кошачьих. В более конкретном варианте осуществления вакцинированный субъект представляет домашнюю кошку. Настоящее изобретение также обеспечивает комбинированные вакцины для индукции защитного иммунитета против FCV и других заболеваний, например других инфекционных заболеваний у кошачьих. Также обеспечиваются способы получения и применения иммуногенных композиций и вакцин по настоящему изобретению.

В частных вариантах осуществления вектор представляет собой частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует один или более антигенов, происходящих из кошачьего патогена. В конкретных вариантах осуществления кошачий патоген представляет собой калицивирус кошачьих (FCV). В конкретных вариантах осуществления этого типа частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует капсидный белок FCV. В близких вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует антигенный фрагмент капсидного белка FCV. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок FCV представляет капсидный белок F9-подобного штамма FCV. В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует антигенный фрагмент капсидного белка F9-подобного штамма FCV. В других вариантах осуществления изобретения капсидный белок FCV представляет капсидный белок вирулентного системного FCV (VS-FCV). В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует антигенный фрагмент капсидного белка VS-FCV. В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует как капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент, так и капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент.

В еще более конкретных вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса представляет частицу репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса VEE является частицей РНК-репликона альфа-вируса VEE ТС-83. В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса является частицей РНК-репликона альфа-вируса Синдбис (SIN). В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса представляет частицу РНК-репликона альфа-вируса леса Семлики (SFV). В альтернативном варианте осуществления вектор с «голой» ДНК содержит конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует один или более антигенов, происходящих из кошачьего патогена. В конкретных вариантах осуществления этого типа векторы с «голой» ДНК содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует капсидный белок FCV или его антигенный фрагмент.

В некоторых вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует один или более антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют от двух до четырех антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В близких вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует один или более антигенов FCV или их антигенных фрагментов и один или более антигенов, отличных от FCV, или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют один или более капсидных белков FCV или их антигенных фрагментов и один-три антигенов, отличных от FCV, или их антигенных фрагментов. В более конкретных вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент и капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент и один-три антигенов, отличных от FCV, или их антигенных фрагментов.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к иммуногенным композициям, которые содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют один или более антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В близких вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют от двух до четырех антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует капсидный белок FCV. В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует антигенный фрагмент капсидного белка FCV. В некоторых вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует антигенный фрагмент капсидного белка F9-подобного штамма FCV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует капсидный белок вирулентного системного FCV (VS-FCV). В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует антигенный фрагмент капсидного белка VS-FCV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует как капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент, так и капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент. В более конкретных вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые являются частицами РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса VEE, которые являются частицами РНК-репликона альфа-вируса VEE ТС-83.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит два или более наборов частиц РНК-репликона альфа-вируса. В некоторых вариантах осуществления этого типа один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует первый антиген, в то время как другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует второй антиген. В конкретных вариантах осуществления этого типа первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует один или более антигенов FCV или их антигенных фрагментов, и второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует один или более антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В некоторых вариантах осуществления антиген FCV происходит из изолята вирулентного системного кошачьего калицивируса (VS-FCV). В других вариантах осуществления антиген FCV происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса. В других вариантах осуществления второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует два антигена FCV или их антигенных фрагмента, один из которых происходит из изолята вирулентного системного FCV, в то время как другой происходит из F9-подобного штамма FCV. В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент, и второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент. В близких вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, и второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют гликопротеин FeLV (например, gp85) или его антигенный фрагмент (например, гликопротеин FeLV gp70 и/или gp45).

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют первый антиген, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют второй антиген, и третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют третий антиген. В конкретном варианте осуществления этого типа первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген FCV (например, капсидный белок), который происходит из классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген FCV (например, капсидный белок), который происходит из вирулентного системного кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, и третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген FeLV (например, FeLV gp85) или его антигенный фрагмент.

Следовательно, в конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат много наборов (например, 2-10) частиц РНК-репликона альфа-вируса, где первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент, и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, и один или более других наборов частиц РНК-репликона альфа-вируса кодируют один или более антигенов, отличных от FCV.

В некоторых вариантах осуществления этого типа антиген, отличный от FCV, или его антигенный фрагмент представляет собой белковый антиген, который происходит из кошачьего герпесвируса (FHV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса лейкоза кошачьих (FeLV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет собой белковый антиген, происходящий из кошачьего пневмовируса (FPN). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего парвовируса (FPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса бешенства. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет собой белковый антиген, который происходит из вируса инфекционного перитонита кошачьих (FIPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса иммунодефицита кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса болезни Борна (BDV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса гриппа кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса панлейкопении кошачьих (FPLV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего коронавируса (FCoV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса ринотрахеита кошачьих (FVR). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет собой белковый антиген, который происходит из Chlamydophila felis.

Настоящее изобретение также включает все частицы РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению, векторы с «голой» ДНК, конструкты нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, включая синтетическую мессенджер-РНК и РНК-репликоны, а также все иммуногенные композиции и/или вакцины, которые содержат конструкты нуклеиновой кислоты (например, синтетическую мессенджер-РНК, РНК-репликоны), частицы РНК-репликона альфа-вируса и/или векторы с «голой» ДНК по настоящему изобретению.

В конкретных вариантах осуществления конструкт нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению кодирует один или более антигенов FCV или их антигенные фрагменты. В близких вариантах осуществления этого типа конструкт нуклеиновой кислоты кодирует от двух до четырех антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В других вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует один или более антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует от двух до четырех антигенов FCV или их антигенных фрагментов.

В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса и/или векторы с «голой» ДНК, которые содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует от двух до четырех антигенов FCV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент и гликопротеин FeLV (gp85) или его антигенный фрагмент. В конкретных вариантах осуществления этого типа антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp70. В еще одних близких вариантах осуществления антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp45. В более конкретных вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые являются частицами РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса VEE являются частицами РНК-репликона альфа-вируса VEE ТС-83.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит два или более наборов частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК. В конкретных вариантах осуществления этого типа один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК содержит первый конструкт нуклеиновой кислоты, в то время как другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК содержит второй конструкт нуклеиновой кислоты. В определенном варианте осуществления этого типа первый конструкт нуклеиновой кислоты кодирует антиген FCV или его антигенный фрагмент, и второй конструкт нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV) или его антигенный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления этого типа антиген FCV происходит из изолята вирулентного системного кошачьего калицивируса (VS-FCV). В других вариантах осуществления антиген FCV происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса. В других вариантах осуществления второй конструкт нуклеиновой кислоты кодирует два антигена FCV, один из которых происходит из изолята вирулентного системного кошачьего калицивируса, в то время как другой происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат первый конструкт нуклеиновой кислоты, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат второй конструкт нуклеиновой кислоты, и третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат третий конструкт нуклеиновой кислоты. В конкретном варианте осуществления этого типа первый конструкт нуклеиновой кислоты кодирует антиген FeLV или его антигенный фрагмент, второй конструкт нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из вирулентного системного кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, и третий конструкт нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из классического (F9-подобного штамам) кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат первый конструкт нуклеиновой кислоты, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат второй конструкт нуклеиновой кислоты, третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат третий конструкт нуклеиновой кислоты, и четвертый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат четвертый конструкт нуклеиновой кислоты. В конкретных вариантах осуществления этого типа первый конструкт нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из вирулентного системного кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, и антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат первый конструкт нуклеиновой кислоты, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат второй конструкт нуклеиновой кислоты, третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат третий конструкт нуклеиновой кислоты, четвертый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат четвертый конструкт нуклеиновой кислоты, и пятый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса и/или векторов с «голой» ДНК, которые содержат пятый конструкт нуклеиновой кислоты. В таких вариантах осуществления нуклеотидные последовательности первого конструкта нуклеиновой кислоты, второго конструкта нуклеиновой кислоты, третьего конструкта нуклеиновой кислоты, четвертого конструкта нуклеиновой кислоты и пятого конструкта нуклеиновой кислоты являются различными. В конкретных вариантах осуществления этого типа первый конструкт нуклеиновой кислоты кодирует как антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из вирулентного системного кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, так и антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент.

Следовательно, иммуногенная композиция по настоящему изобретению может содержать частицы РНК-репликона альфа-вируса и/или векторы с «голой» ДНК, которые содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует по меньшей мере один антиген, отличный от FCV, для индукции защитного иммунитета к патогену, отличному от FCV. В конкретных вариантах осуществления этого типа антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего герпесвируса (FHV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса лейкоза кошачьих (FeLV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, происходящий из кошачьего пневмовируса (FPN). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего парвовируса (FPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса инфекционного перитонита кошачьих (FIPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса иммунодефицита кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса бешенства. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса болезни Борна (BDV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса гриппа кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса панлейкопении кошачьих (FPLV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего коронавируса (FCoV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса ринотрахеита кошачьих (FVR). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FCV, представляет белковый антиген, происходящий из Chlamydophila felis.

Настоящее изобретение также относится к комбинированным иммуногенным композициям и/или вакцинам (поливалентным вакцинам), которые включают частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют один или более антигенов или их антигенных фрагментов, происходящих из FCV (например, капсидный белок FCV), вместе и дополнительно содержат один или более модифицированных живых/аттенуированных или убитых кошачьих патогенов. В конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции дополнительно содержат модифицированный живой или убитый Chlamydophila felis в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции дополнительно содержат модифицированный живой или убитый вирус ринотрахеита кошачьих (FVR) в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции дополнительно содержат модифицированный живой или убитый вирус панлейкопении кошачьих (FPL) в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В некоторых вариантах осуществления вакцина содержит иммунологически эффективное количество одной или более из этих иммуногенных композиций.

В более конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют капсидный белок или его антигенный фрагмент, происходящий из VS-FCV, и дополнительно содержат модифицированный живой или убитый F9-подобный штамм FCV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют капсидный белок или его антигенный фрагмент, происходящий из VS-FCV, и дополнительно содержат модифицированный живой или убитый F9-подобный штамм FCV, модифицированный живой или убитый Chlamydophila felis, модифицированный живой или убитый FVR, и модифицированный живой или убитый FPL. В близких вариантах осуществления иммуногенная композиция также содержит частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В конкретных вариантах осуществления этого типа кошачий антиген FeLV представляет собой вирусный гликопротеин FeLV (gp85). В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к вакцинам, которые содержат иммунологически эффективное количество одной или более из этих иммуногенных композиций.

В конкретных вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент. В конкретных вариантах осуществления этого типа капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2. В более конкретных вариантах этого типа капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 98% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2. В еще более конкретных вариантах этого типа капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В конкретных вариантах осуществления этого типа капсидный белок VS-FCV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 12.

В близких вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент. В конкретных вариантах этого типа капсидный белок F9-подобного штамма FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4. В более конкретных вариантах этого типа капсидный белок F9-подобного штамма FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 98% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4. В еще более конкретных вариантах этого типа капсидный белок F9-подобного штамма FCV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO 4. В конкретных вариантах этого типа капсидный белок F9-подобного штамма FCV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 13.

В некоторых вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует гликопротеин FeLV (gp85). В конкретных вариантах осуществления этого типа гликопротеин FeLV gp85 содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6. В более конкретных вариантах этого типа гликопротеин FeLV (gp85) содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В еще более конкретных вариантах этого типа гликопротеин FeLV (gp85) кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 14.

В близких вариантах осуществления гликопротеин FeLV gp70 содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8. В более конкретных вариантах этого типа гликопротеин FeLV (gp85) содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В еще более конкретных вариантах этого типа гликопротеин FeLV (gp70) кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 15.

В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует гликопротеин (G) вируса бешенства. В конкретных вариантах осуществления этого типа гликопротеин вируса бешенства содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 10. В более конкретных вариантах этого типа гликопротеин (G) вируса бешенства содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В еще более конкретных воплощениях этого типа гликопротеин (G) вируса бешенства кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 16.

Настоящее изобретение дополнительно включает вакцины, в том числе, поливалентные вакцины, содержащие иммуногенные композиции по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления вакцины представляют собой неадъювантные вакцины. В некоторых вариантах осуществления вакцина обеспечивает профилактику заболевания, вызванного FCV. В близких вариантах осуществления антитела индуцируются у субъекта из семейства кошачьих, когда субъект из семейства кошачьих иммунизирован вакциной.

Настоящее изобретение также относится к способам иммунизации представителя семейства кошачьих против патогена кошачьих, например FCV, включающим введение кошачьему иммунологически эффективного количества вакцины или поливалентной вакцины по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления вакцину вводят внутримышечной инъекцией. В альтернативных вариантах осуществления вакцину вводят подкожной инъекцией. В других вариантах осуществления вакцину вводят внутривенной инъекцией. В других вариантах осуществления вакцину вводят внутрикожной инъекцией. В других вариантах осуществления вакцину вводят перорально. В других вариантах осуществления вакцину вводят интраназальным введением. В конкретных вариантах представитель семейства кошачьих представляет собой домашнюю кошку.

Вакцины и поливалентные вакцины по настоящему изобретению можно вводить в виде прайм-вакцины и/или в виде бустер-вакцины. В конкретных вариантах осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят в виде вакцины однократного применения (одна доза) без необходимости в последующих введениях. В некоторых вариантах осуществления в случае введения как прайм-вакцины, так и бустер-вакцины, то прайм-вакцина и бустер-вакцина могут вводиться одинаковым путем. В некоторых вариантах осуществления этого типа прайм-вакцину и бустер-вакцину вводят подкожной инъекцией. В альтернативных вариантах осуществления в случае введения как прайм-вакцины, так и бустер-вакцины, введение прайм-вакцины может быть выполнено одним путем, и бустер-вакцины - другим путем. В некоторых вариантах осуществления этого типа прайм-вакцину вводят подкожной инъекцией, и бустер-вакцину вводят перорально.

Изобретение также относится к способу иммунизации представителя семейства кошачьих против FCV, включающему инъекцию кошачьему иммунологически эффективного количества вышеописанных вакцин. В конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать, например, примерно от 1×10⁴ до примерно 1×10¹⁰ RP или выше. В более конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать примерно от 1×10⁵ до примерно 1×10⁹ RP. В еще более конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать примерно от 1×10⁶ до примерно 1×10⁸ RP. В конкретных вариантах осуществления представитель семейства кошачьих представляет собой домашнюю кошку.

В конкретных вариантах осуществления вакцины по настоящему изобретению вводят в дозах от 0,05 до 3 мл. В более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,1 до 2 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,2 мл до 1,5 мл. В других вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,5 до 2,0 мл. В других вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,3 до 1,0 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,4 до 0,8 мл.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут более понятными при ссылке на следующее подробное описание.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к эффективным безопасным вакцинам против FCV. В конкретных вариантах осуществления вакцина является неадъювантной. В одном аспекте вакцины по настоящему изобретению не вызывают образования саркомы в месте инъекции у кошачьих, но все же помогают защитить вакцинированных животных от заболевания верхних дыхательных путей и/или синдрома хромоты, вызванного инфекцией FCV. В конкретном варианте осуществления капсидный белок FCV происходит из вирулентного системного FCV (VS-FCV). В близких вариантах осуществления капсидный белок FCV происходит из более старого штамма, такого как штамм F9 FCV (F9-подобный штамм FCV).

Следовательно, вакцинные композиции по настоящему изобретению включают иммунологически эффективное количество вектора, кодирующего антиген из одного или более штаммов кошачьего калицивируса, которое обеспечивает индукцию защитного иммунитета у вакцинированного животного-реципиента. Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает новые иммуногенные композиции для повышения надежности вакцинации, с целью снижения заболеваемости верхних дыхательных путей у кошек, инфицированных FCV, и тем самым вызвать более скоротечное или легкое заболевание и/или привести к снижению уровня инфекции. В конкретном аспекте настоящего изобретения вакцины содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса (RP), кодирующую капсид FCV, например, происходящий из VS-FCV, или, альтернативно, классического штамма, такого как F9-подобный штамм FCV.

В более конкретных вариантах осуществления вакцины содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса (RP), которые содержат капсидный белок и гликопротеины вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) и кодируют капсидный белок FCV и/или его антигенный фрагмент. В еще более конкретных вариантах осуществления вакцины содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса (RP), которые содержат капсидный белок и гликопротеины авирулентного штамма TC-83 VEE и кодируют один или более капсидных белков FCV и/или один или более их антигенных фрагментов.

В еще одном аспекте настоящего изобретения вакцины содержат векторы с «голой» ДНК, которые кодируют один или более капсидных белков FCV и/или один или более их антигенных фрагментов. Вакцины по настоящему изобретению можно вводить представителю семейства кошачьих в отсутствии адъюванта и все же эффективно способствовать защите вакцинированной кошки от FCV.

Для того, чтобы можно было полнее понять изобретение, приводятся следующие определения.

Использование терминов в единственном числе для удобства описания никоим образом не подразумевает ограничение. Таким образом, например, ссылка на композицию, содержащую «полипептид», включает ссылку на один или более таких полипептидов. Кроме того, ссылка на «частицу РНК-репликона альфа-вируса» включает ссылку на множество таких частиц РНК-репликона альфа-вируса, если не указано иное.

В рамках изобретения, термин «примерно» используется взаимозаменяемо с термином «приблизительно» и означает, что значение находится в пределах пятидесяти процентов от указанного значения, т.е. композиция, содержащая «примерно» 1×10⁸ частиц РНК-репликона альфа-вируса на мл, содержит от 0,5×10⁸ до 1,5×10⁸ частиц РНК-репликона альфа-вируса на мл.

В рамках изобретения, термин «представитель семейства кошачьих» относится к любому члену семейства Felidae. Домашние кошки, чистокровные и/или беспородные домашние кошки и дикие или бесхозные кошки - все являются представителями семейства кошачьих.

В рамках изобретения, термин «репликон» относится к модифицированному вирусному РНК-геному, в котором отсутствует один или более элементов (например, кодирующие последовательности структурных белков), которые, если бы они присутствовали, обеспечили бы успешное размножение исходного вируса в клеточных культурах или в организме животного-хозяина. В подходящих клеточных контекстах репликон сам амплифицируется и может продуцировать один или более видов субгеномной РНК.

В рамках изобретения, термин «частица РНК-репликона альфа-вируса», сокращенно «RP», представляет полученный из альфа-вируса РНК-репликон, упакованный в структурные белки, например, капсид и гликопротеины, которые также происходят из альфа-вируса, например, как описано Pushko et al., [Virology, 239 (2): 389-401 (1997)]. RP не может размножаться в клеточных культурах или в организме животных-хозяев (без хелперной плазмиды или аналогичного компонента), потому что репликон не кодирует структурные компоненты альфа-вируса (например, капсид и гликопротеины).

Термины «FCV F9-подобный штамм» и «F9-подобный штамм FCV» используются взаимозаменяемо друг с другом, и также с термином «классический FCV», и в настоящем описании это FCV, который можно охарактеризовать как более старый и ранее универсальный вакцинный штамм FCV, для которого штамм F9 FCV считается типичным представителем. В противоположность этому, FCV, называемый вирулентным системным «VS-FCV» или, как его используют здесь, взаимозаменяемо с «(VS) FCV», представляет собой новую группу FCV, который является необычно вирулентным и не может быть нейтрализован антителами, индуцированными против F9-подобных штаммов FCV [см. патент США № 7449323; Radford et al., Vet Res., 38 (2): 319-335 (2007)].

Термин «отличный от FCV» используется для модификации терминов, таких как патоген и/или антиген (или иммуноген), для обозначения того, что соответствующий патоген и/или антиген (или иммуноген) не является ни патогеном FCV, ни антигеном FCV (или иммуногеном) и что белковый антиген (или иммуноген), отличный от FCV, не происходит из FCV.

Термины «происходят из», «происходит из» и «происхождение из» используются взаимозаменяемо по отношению к конкретному белковому антигену и патогену или штамму этого патогена, который его кодирует в природе, и как здесь используются, эти термины означают, что немодифицированная и/или усеченная аминокислотная последовательность конкретного белкового антигена кодируется этим патогеном или штаммом этого патогена. Кодирующая последовательность в конструкте нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению для белкового антигена, происходящего из патогена, могла быть генетически изменена таким образом, чтобы приводить к модификации и/или усечению аминокислотной последовательности экспрессированного белкового антигена относительно соответствующей последовательности этого белкового антигена в патогене или штамме патогена (включая природно аттенуированные штаммы), из которого он происходит.

В рамках изобретения, термины «защита» или «обеспечение защиты» или «индукция защитного иммунитета к», «обеспечивает профилактику заболевания» и «обеспечивает защиту» не требуют полной защиты от проявления каких-либо признаков инфекции. Например, «обеспечивает защиту» может означать, что защита является достаточной для того, чтобы после контрольного заражения симптомы основной инфекции, по меньшей мере, ослаблялись, и/или что одна или более лежащих в основе причин или механизмов, вызывающих симптомы, на клеточном, физиологическом или биохимическом уровне были ослаблены и/или элиминированы. Понятно, что термин «ослабленный», используемый в данном контексте, означает относительный статус инфекции, включая молекулярный статус инфекции, а не только физиологический статус инфекции.

В рамках изобретения, термин «вакцина» представляет композицию, которая подходит для применения на животных, например, кошачьих (включая, в некоторых вариантах осуществления, людей, в то время как в других вариантах осуществления конкретно не для людей), содержащую один или более антигенов, обычно в комбинации с фармацевтически приемлемый носителем, таким как жидкость, содержащая воду, которая при введении животному вызывает иммунный ответ, достаточно сильный для минимального обеспечения защиты от заболевания, возникшего в результате инфицирования микроорганизмом дикого типа, т.е. достаточно сильного для обеспечения профилактики заболевания и/или профилактики, ослабления или излечения заболевания.

В рамках изобретения, поливалентная вакцина представляет собой вакцину, которая содержит два или более различных антигена. В конкретном варианте осуществления этого типа поливалентная вакцина стимулирует иммунную систему реципиента против двух или более различных патогенов.

Термины «адъювант» и «иммуностимулятор» используются здесь взаимозаменяемо и определяются как одно или более соединений, которые вызывают стимуляцию иммунной системы. В данном контексте адъювант используется для усиления иммунного ответа на один или более вакцинных антигенов/изолятов. Соответственно, «адъюванты» представляют собой агенты, которые неспецифически усиливают иммунный ответ на конкретный антиген, тем самым уменьшая количество антигена, необходимого в любой данной вакцине, и/или частоту инъекций, необходимых для генерации адекватного иммунного ответа на представляющий интерес антиген. В данном контексте адъювант используется для усиления иммунного ответа на один или более вакцинных антигенов/изолятов. Например, в Руководстве по вакцинации кошек Американской ассоциации практикующих врачей-фелинологов предлагается применять неадъювантные вакцины FeLV [AAFP Feline Advisory Panel, 15: 785-808 (2013)].

В рамках изобретения, термин «неадъювантная вакцина» представляет вакцину или поливалентную вакцину, которая не содержит адъюванта.

В рамках изобретения, термин «фармацевтически приемлемый» используется в качестве прилагательного для обозначения того, что модифицированное существительное подходит для применения в фармацевтическом продукте. Когда термин используется, например, для описания эксципиента в фармацевтической вакцине, то он характеризует эксципиент как совместимый с другими ингредиентами композиции и не оказывающий неблагоприятного токсического влияния для предполагаемого животного-реципиента, например представителя семейства кошачьих.

«Парентеральное введение» включает подкожные инъекции, субмукозальные инъекции, внутривенные инъекции, внутримышечные инъекции, внутрикожные инъекции и инфузию.

В рамках изобретения, термин «антигенный фрагмент» по отношению к конкретному белку (например, белковому антигену) представляет собой фрагмент этого белка, который является антигенным, т.е. способен специфически взаимодействовать с антигенраспознающей молекулой иммунной системы, такой как иммуноглобулин (антитело) или Т-клеточный антигенный рецептор. Например, антигенный фрагмент капсидного белка FCV представляет фрагмент капсидного белка, который является антигенным. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент капсидного белка FCV содержит область E ORF2, которая включает главные В-клеточные эпитопы. Предпочтительно антигенный фрагмент по настоящему изобретению является иммунодоминантным для распознавания антител и/или Т-клеточного рецептора. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент по отношению к данному белковому антигену представляет фрагмент этого белка, который сохраняет, по меньшей мере, 25% от антигенности полноразмерного белка. В предпочтительных вариантах осуществления антигенный фрагмент сохраняет, по меньшей мере, 50% от антигенности полноразмерного белка. В более предпочтительных вариантах осуществления антигенный фрагмент сохраняет по меньшей мере 75% от антигенности полноразмерного белка. Антигенные фрагменты могут быть небольшими и содержать всего 20 аминокислот или, с другой стороны, представлять собой крупные фрагменты, в которых отсутствует всего одна аминокислота из полноразмерного белка. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент содержит от 25 до 150 аминокислотных остатков. В других вариантах осуществления антигенный фрагмент содержит от 50 до 250 аминокислотных остатков. Например, гликопротеин FeLV gp45 и гликопротеин FeLV gp70 являются антигенными фрагментами гликопротеина FeLV gp85.

В рамках изобретения, одна аминокислотная последовательность на 100% «идентична» или обладает 100% «идентичностью» со второй аминокислотной последовательностью, когда аминокислотные остатки обеих последовательностей идентичны. Следовательно, аминокислотная последовательность на 50% «идентична» второй аминокислотной последовательности, когда 50% аминокислотных остатков двух аминокислотных последовательностей являются идентичными. Сравнение последовательностей проводят по непрерывному блоку аминокислотных остатков, составляющих данный белок, например белок или фрагмент сравниваемого полипептида. В конкретном варианте осуществления учитываются выбранные делеции или вставки, которые в противном случае могли бы изменить соответствие между двумя аминокислотными последовательностями.

В рамках изобретения, процентную идентичность нуклеотидной и аминокислотной последовательности можно определить с использованием алгоритма C, MacVector (MacVector, Inc. Cary, NC 27519), Vector NTI (Informax, Inc. MD), Oxford Molecular Group PLC (1996) и алгоритма Clustal W с параметрами по умолчанию для выравнивания и параметрами по умолчанию для идентичности. Эти коммерчески доступные программы также можно использовать для определения сходства последовательностей с использованием таких же или аналогичных параметров по умолчанию. В качестве альтернативы можно использовать поиск Advanced Blast в условиях фильтрации по умолчанию, например, с использованием pileup программы GCG (Genetics Computer Group, Program Manual for the GCG Package, version 7, Madison, Wisconsin), используя параметры по умолчанию.

В рамках изобретения, термин «инактивированный» микроорганизм используется взаимозаменяемо с термином «убитый» микроорганизм. Для целей этого изобретения «инактивированный» микроорганизм представляет собой микроорганизм, который способен индуцировать иммунный ответ у животного, но не способен инфицировать животное. Антиген по настоящему изобретению (например, инактивированный кошачий калицивирус) может быть инактивирован агентом, выбранным из группы, состоящей из бинарного этиленимина, формалина, бета-пропиолактона, тимеросала или нагревания. В конкретном варианте осуществления инактивированные изоляты кошачьего калицивируса в комбинации с RP по настоящему изобретению инактивируются бинарным этиленимином.

Частицы РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению можно лиофилизировать и регидратировать стерильным водным разбавителем. С другой стороны, когда частицы РНК-репликона альфа-вируса хранятся отдельно, но предназначены для смешивания с другими компонентами вакцины перед введением, то частицы РНК-репликона альфа-вируса могут храниться в стабилизирующем растворе этих компонентов, например в растворе с высоким содержанием сахарозы.

Вакцину по настоящему изобретению можно легко вводить любым обычным путем, включая внутривенную, внутримышечную, подкожную, пероральную, интраназальную, внутрикожную и/или внутрибрюшинную вакцинацию. Специалист в данной области понимает, что вакцинную композицию предпочтительно формулируют соответственно для каждого вида животного-реципиента и пути введения.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к способам иммунизации кошачьих против FCV и/или других патогенов кошачьих. Один такой способ включает инъекцию кошачьему иммунологически эффективного количества вакцины по настоящему изобретению, так что в результате у кошачьего продуцируются соответствующие антитела против FCV.

Поливалентные вакцины:

Настоящее изобретение также относится к поливалентным вакцинам. Например, кодирующую последовательность белкового антигена или его антигенного фрагмента или комбинацию таких кодирующих последовательностей белковых антигенов, пригодных для применения в кошачьей вакцине, можно добавить к частице РНК-репликона альфа-вируса (RP) или объединить в той же RP, которая кодирует кошачий антиген FCV [например, капсидный белок FCV] в вакцине. В конкретных вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса кодирует как капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент, так и капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент и кодирует антиген, отличный от FCV. Соответственно, такие поливалентные вакцины включаются в настоящее изобретение.

Примеры патогенов, из которых могут происходить один или более таких белковых антигенов, включают вирус ринотрахеита кошачьих (FVR), вирус лейкоза кошачьих (FeLV), вирус панлейкопении кошачьих (FPL), кошачий герпесвирус (FHV), другие штаммы FCV, кошачий парвовирус (FPV), вирус инфекционного перитонита кошачьих (FIPV), вирус иммунодефицита кошачьих, вирус болезни Борна (BDV), вирус бешенства, вирус кошачьего гриппа, вирус собачьего гриппа, вирус птичьего гриппа, собачий пневмовирус, кошачий пневмовирус, Chlamydophila felis (FKA Chlamydia psittela), Bartonella bronchiseptica и Bartonella spp. (например, B. henselae). В конкретных вариантах осуществления кодирующая последовательность капсидного белка или аналогичного белка из одного или более этих кошачьих или собачьих патогенов может быть вставлена в ту же RP, что и антиген FCV. Альтернативно или в комбинации с этим кодирующая последовательность капсидного белка или аналогичного белка из одного или более этих кошачьих или собачьих патогенов может быть вставлена в одну или более других RP, которые можно объединить в вакцине с RP, которая кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент, и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент.

Кроме того, частица РНК-репликона альфа-вируса (RP), которая кодирует один или более антигенов FCV [например, капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент] может быть добавлена вместе с одним или более другими живыми аттенуированными вирусными изолятами, например, живым аттенуированным F9-подобным штаммом вируса FCV (например, модифицированным живым FCV F9) и/или живым аттенуированным кошачьим герпесвирусом, и/или живым аттенуированным кошачьим парвовирусом, и/или живым аттенуированным вирусом лейкоза кошачьих, и/или живым аттенуированным вирусом инфекционного перитонита кошачьих, и/или живым аттенуированным вирусом иммунодефицита кошачьих, и/или живым аттенуированным вирусом болезни Бора, и/или живым аттенуированным вирусом бешенства, и/или живым аттенуированным вирусом кошачьего гриппа, и/или живым аттенуированным вирусом собачьего гриппа, и/или живым аттенуированным вирусом птичьего гриппа и/или живым аттенуированным собачьим пневмовирусом и/или живым аттенуированным кошачьим пневмовирусом. Кроме того, живой аттенуированный Chlamydophila felis и/или живой аттенуированный Bordetella bronchiseptica и/или живой аттенуированный Bartonella spp. (например, B. henselae) также могут быть включены в такие поливалентные вакцины.

Кроме того, частица РНК-репликона альфа-вируса (RP), которая кодирует один или более антигенов FCV [например, капсидный белок F9-подобного штамма FCV или его антигенный фрагмент и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент], может быть добавлена вместе с одним или более другими изолятами убитого вируса, такими как убитый штамм FCV, и/или убитый кошачий герпесвирус, и/или убитый кошачий парвовирус и/или убитый вирус лейкоза кошачьих, и/или убитый вирус инфекционного перитонита кошачьих, и/или убитый вирус иммунодефицита кошачьих, и/или убитый вирус болезни Борна, и/или убитый вирус бешенства, и/или убитый вирус гриппа кошачьих и/или убитый вирус собачьего гриппа и/или убитый вирус птичьего гриппа, и/или убитый собачий пневмовирус, и/или убитый кошачий пневмовирус. Кроме того, бактерин (или субфракции бактерина, например субфракция пилуса) Chlamydophila felis и/или Bordetella bronchiseptica и/или Bartonella spp. (например, B. henselae) также могут быть включены в такие поливалентные вакцины.

Также следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными конфигурациями, стадиями способа и материалами, раскрытыми здесь, поскольку такие конфигурации, стадии способа и материалы могут несколько отличаться. Кроме того, следует понимать, что терминология, используемая здесь, используется только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения, поскольку объем настоящего изобретения ограничивается только прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.

Таблица с последовательностями

SEQ ID NO: Описание Тип 1 Кошачий калицивирус (VS-FCV) нуклеиновая кислота
ДНК 2 Кошачий калицивирус (VS-FCV) аминокислотная последовательность 3 Кошачий калицивирус (F9-подобный штамм) нуклеиновая кислота
ДНК 4 Кошачий калицивирус (F9-подобный штамм) аминокислотная последовательность 5 Гликопротеин вируса FeLV (gp85) нуклеиновая кислота
ДНК 6 Гликопротеин вируса FeLV (gp85) аминокислотная последовательность 7 Гликопротеин вируса FeLV (gp70) нуклеиновая кислота
ДНК 8 Гликопротеин вируса FeLV (gp70) аминокислотная последовательность 9 Гликопротеин вируса бешенства нуклеиновая кислота
ДНК 10 Гликопротеин вируса бешенства аминокислотная последовательность 11 GGCGCGCCGCACC нуклеиновая кислота 12 Кошачий калицивирус (VS-FCV) нуклеиновая кислота
РНК 13 Кошачий калицивирус (F9-подобный штамм) нуклеиновая кислота
РНК 14 Гликопротеин вируса FeLV (gp85) нуклеиновая кислота
РНК 15 Гликопротеин вируса FeLV (gp70) нуклеиновая кислота
РНК 16 Гликопротеин вируса бешенства нуклеиновая кислота
РНК TTAATTAA нуклеиновая кислота

Последовательности

Капсид кошачьего калицивируса (VS-FCV) SEQ ID NO: 1

atggctgacgacggatctgtgaccaccccagaacaaggaacaatggtcggaggagtgatt

gccgaacccagcgctcagatgtcaactgcggcggacatggcctccggaaagtcggtggac

tccgagtgggaagccttcttctcgttccacacgtccgtgaactggagcacctccgaaacc

caaggaaagatcctcttcaagcagtccctgggtcccctgctgaacccgtacctggagcac

atcagcaagctgtacgtcgcttggagcgggtcgatcgaagtgcgattttccatctcggga

agcggcgtgttcggtggtaaactggccgccatcgtcgtgccgcctggtgtcgaccctgtc

cagtcaacctccatgctgcagtacccgcacgtcctgttcgacgcaagacaagtggagcca

gtgatcttctccatcccggacctccgcaacagcctgtatcacttgatgtccgataccgat

accacttccctcgtgatcatggtgtacaacgatctgatcaacccgtacgccaatgactcc

aacagctcgggttgcatcgtgaccgtcgaaacgaagcctggcatcgatttcaagtttcat

ctgctgaaaccgcccggatccatgcttactcacgggtccatcccttccgatctgatcccc

aagagctcctccctgtggattgggaaccgccactggaccgatattaccgatttcgtgatt

cggcctttcgtgttccaagccaaccggcacttcgacttcaaccaggagactgccggctgg

tcaactccacggttccgcccattggccgtgactgtgtcgcagtcaaagggagccaagctc

gggaacggcatcgccaccgactacattgtgcctggaatccccgacggatggcctgatact

accatccccaccaagctgacccctaccggagattacgccatcacctcctccgacggcaat

gatattgaaaccaagctggaatacgagaacgcggacgtgattaagaacaacaccaacttc

cgctccatgtatatctgcggaagcctccagagggcttggggcgacaagaagatcagcaac

accgggttcatcactaccggagtgatttctgacaactccatcagcccttcgaacacaatt

gaccagtccaagatcgtggtgtaccaggacaaccatgtcaattcggaggtccagactagc

gacatcactcttgccatcctgggctacaccggaattggagaagaggccataggcgccaac

cgggactccgtcgtgagaatttccgtgcttccggaaactggagcaaggggcggaaatcac

cccatcttctacaaaaattccatgaagctgggctacgtgatctcctccattgacgtgttc

aactcccaaatcctccacacctcgcgccagctgtcactgaacaactacttgttgccccct

gactccttcgcggtgtaccggattattgacagcaacggatcatggttcgacattgggatt

gacagcgatgggttttcattcgtgggcgtgtcgtcatttccaaagctggagtttccgctg

tccgcctcatacatgggcatccagctcgcaaagatccggctggcgtccaacatccggtca

tccatgactaagctgtga

Капсид кошачьего калицивируса (VS-FCV) SEQ ID NO: 2

MADDGSVTTPEQGTMVGGVIAEPSAQMSTAADMASGKSVDSEWEAFFSFHTSVNWSTSET

QGKILFKQSLGPLLNPYLEHISKLYVAWSGSIEVRFSISGSGVFGGKLAAIVVPPGVDPV

QSTSMLQYPHVLFDARQVEPVIFSIPDLRNSLYHLMSDTDTTSLVIMVYNDLINPYANDS

NSSGCIVTVETKPGIDFKFHLLKPPGSMLTHGSIPSDLIPKSSSLWIGNRHWTDITDFVI

RPFVFQANRHFDFNQETAGWSTPRFRPLAVTVSQSKGAKLGNGIATDYIVPGIPDGWPDT

TIPTKLTPTGDYAITSSDGNDIETKLEYENADVIKNNTNFRSMYICGSLQRAWGDKKISN

TGFITTGVISDNSISPSNTIDQSKIVVYQDNHVNSEVQTSDITLAILGYTGIGEEAIGAN

RDSVVRISVLPETGARGGNHPIFYKNSMKLGYVISSIDVFNSQILHTSRQLSLNNYLLPP

DSFAVYRIIDSNGSWFDIGIDSDGFSFVGVSSFPKLEFPLSASYMGIQLAKIRLASNIRS

SMTKL

Капсид кошачьего калицивируса (VS-FCV) (SEQ ID NO: 12)

auggcugacgacggaucugugaccaccccagaacaaggaacaauggucggaggagugauu

gccgaacccagcgcucagaugucaacugcggcggacauggccuccggaaagucgguggac

uccgagugggaagccuucuucucguuccacacguccgugaacuggagcaccuccgaaacc

caaggaaagauccucuucaagcagucccuggguccccugcugaacccguaccuggagcac

aucagcaagcuguacgucgcuuggagcgggucgaucgaagugcgauuuuccaucucggga

agcggcguguucggugguaaacuggccgccaucgucgugccgccuggugucgacccuguc

cagucaaccuccaugcugcaguacccgcacguccuguucgacgcaagacaaguggagcca

gugaucuucuccaucccggaccuccgcaacagccuguaucacuugauguccgauaccgau

accacuucccucgugaucaugguguacaacgaucugaucaacccguacgccaaugacucc

aacagcucggguugcaucgugaccgucgaaacgaagccuggcaucgauuucaaguuucau

cugcugaaaccgcccggauccaugcuuacucacggguccaucccuuccgaucugaucccc

aagagcuccucccuguggauugggaaccgccacuggaccgauauuaccgauuucgugauu

cggccuuucguguuccaagccaaccggcacuucgacuucaaccaggagacugccggcugg

ucaacuccacgguuccgcccauuggccgugacugugucgcagucaaagggagccaagcuc

gggaacggcaucgccaccgacuacauugugccuggaauccccgacggauggccugauacu

accauccccaccaagcugaccccuaccggagauuacgccaucaccuccuccgacggcaau

gauauugaaaccaagcuggaauacgagaacgcggacgugauuaagaacaacaccaacuuc

cgcuccauguauaucugcggaagccuccagagggcuuggggcgacaagaagaucagcaac

accggguucaucacuaccggagugauuucugacaacuccaucagcccuucgaacacaauu

gaccaguccaagaucgugguguaccaggacaaccaugucaauucggagguccagacuagc

gacaucacucuugccauccugggcuacaccggaauuggagaagaggccauaggcgccaac

cgggacuccgucgugagaauuuccgugcuuccggaaacuggagcaaggggcggaaaucac

cccaucuucuacaaaaauuccaugaagcugggcuacgugaucuccuccauugacguguuc

aacucccaaauccuccacaccucgcgccagcugucacugaacaacuacuuguugcccccu

gacuccuucgcgguguaccggauuauugacagcaacggaucaugguucgacauugggauu

gacagcgauggguuuucauucgugggcgugucgucauuuccaaagcuggaguuuccgcug

uccgccucauacaugggcauccagcucgcaaagauccggcuggcguccaacauccgguca

uccaugacuaagcuguga

Капсид кошачьего калицивируса (F9-подобного штамма) (SEQ ID NO: 3)

atgactgccccggaacaaggaacgatggtcggaggagtgattgcagaaccgtcagcacag

atgtccaccgctgccgacatggccactggaaagagcgtggactccgaatgggaagccttc

ttctccttccacacttcggtcaactggtcgactagcgaaacccaggggaagattttgttc

aagcaatccctcggccctctgctgaacccctacctggagcatctggccaagctgtacgtg

gcatggtcgggcagcatcgaagtgcgctttagcatttccggctccggagtgttcggggga

aagcttgctgccattgtcgtgccgccaggagtggacccggtgcagtccacttctatgctc

caatacccgcatgtcctgttcgacgccagacaggtggagcctgtgatcttttgcctgccg

gatctcaggtccaccctgtatcacctcatgtccgacaccgacaccacctcgctcgtgatc

atggtgtacaacgacctgatcaacccctacgctaacgacgccaacagctcaggttgcatt

gtgactgtcgaaaccaagccaggccctgacttcaagtttcatttgctgaagccgcccggt

tccatgctgacccacggctcgatcccatccgacctgatccccaagacgagctccctgtgg

atcggaaaccgctactggtccgatattaccgacttcgtgatcagaccattcgtgttccaa

gccaaccgccatttcgacttcaaccaggaaaccgcaggatggtcgacccctcgattccgc

ccgatttcagtgaccatcaccgaacagaacggcgcgaagctgggaattggcgtggcgacc

gactacatcgtgccgggaatcccggatggatggcctgatacgaccattcccggggagctg

atccctgccggggactacgccatcaccaacggtactggaaacgacatcaccactgccacc

ggttacgacaccgccgacatcataaagaacaacaccaacttcagaggaatgtacatttgc

ggctccctgcaacgcgcttggggtgacaaaaagatctcgaacactgccttcatcacaaca

gcgactctggacggcgataacaacaacaagatcaatccttgtaataccatcgaccagtcc

aaaatcgtggtgttccaggataaccacgtgggaaagaaggcgcagacctccgacgacact

ctggcgctgcttggctacaccgggatcggcgagcaggccattggaagcgatcgggatcgg

gtcgtgcggatctccaccctccccgagactggagcaaggggaggcaaccaccccatcttt

tacaaaaacagcattaagctcggatacgtcatccgctccatcgatgtgttcaactctcaa

atcctgcacacttcgcggcagctgtccctgaaccactacctcttgccgcccgactccttc

gccgtctaccggatcattgattcgaacgggagctggttcgacatcggcattgatagcgat

ggcttctcgtttgtgggcgtgtcgggcttcgggaagctggagttcccactgagcgcctca

tacatgggtatccagctggccaagatcaggctggcctccaacatccgctcacctatgact

aagctgtga

Капсид кошачьего калицивируса (F9-подобного штамма) (SEQ ID NO: 4)

MTAPEQGTMVGGVIAEPSAQMSTAADMATGKSVDSEWEAFFSFHTSVNWSTSETQGKILF

KQSLGPLLNPYLEHLAKLYVAWSGSIEVRFSISGSGVFGGKLAAIVVPPGVDPVQSTSML

QYPHVLFDARQVEPVIFCLPDLRSTLYHLMSDTDTTSLVIMVYNDLINPYANDANSSGCI

VTVETKPGPDFKFHLLKPPGSMLTHGSIPSDLIPKTSSLWIGNRYWSDITDFVIRPFVFQ

ANRHFDFNQETAGWSTPRFRPISVTITEQNGAKLGIGVATDYIVPGIPDGWPDTTIPGEL

IPAGDYAITNGTGNDITTATGYDTADIIKNNTNFRGMYICGSLQRAWGDKKISNTAFITT

ATLDGDNNNKINPCNTIDQSKIVVFQDNHVGKKAQTSDDTLALLGYTGIGEQAIGSDRDR

VVRISTLPETGARGGNHPIFYKNSIKLGYVIRSIDVFNSQILHTSRQLSLNHYLLPPDSF

AVYRIIDSNGSWFDIGIDSDGFSFVGVSGFGKLEFPLSASYMGIQLAKIRLASNIRSPMT

KL

Капсид кошачьего калицивируса (F9-подобного штамма) (SEQ ID NO: 13)

augacugccccggaacaaggaacgauggucggaggagugauugcagaaccgucagcacag

auguccaccgcugccgacauggccacuggaaagagcguggacuccgaaugggaagccuuc

uucuccuuccacacuucggucaacuggucgacuagcgaaacccaggggaagauuuuguuc

aagcaaucccucggcccucugcugaaccccuaccuggagcaucuggccaagcuguacgug

gcauggucgggcagcaucgaagugcgcuuuagcauuuccggcuccggaguguucggggga

aagcuugcugccauugucgugccgccaggaguggacccggugcaguccacuucuaugcuc

caauacccgcauguccuguucgacgccagacagguggagccugugaucuuuugccugccg

gaucucagguccacccuguaucaccucauguccgacaccgacaccaccucgcucgugauc

augguguacaacgaccugaucaaccccuacgcuaacgacgccaacagcucagguugcauu

gugacugucgaaaccaagccaggcccugacuucaaguuucauuugcugaagccgcccggu

uccaugcugacccacggcucgaucccauccgaccugauccccaagacgagcucccugugg

aucggaaaccgcuacugguccgauauuaccgacuucgugaucagaccauucguguuccaa

gccaaccgccauuucgacuucaaccaggaaaccgcaggauggucgaccccucgauuccgc

ccgauuucagugaccaucaccgaacagaacggcgcgaagcugggaauuggcguggcgacc

gacuacaucgugccgggaaucccggauggauggccugauacgaccauucccggggagcug

aucccugccggggacuacgccaucaccaacgguacuggaaacgacaucaccacugccacc

gguuacgacaccgccgacaucauaaagaacaacaccaacuucagaggaauguacauuugc

ggcucccugcaacgcgcuuggggugacaaaaagaucucgaacacugccuucaucacaaca

gcgacucuggacggcgauaacaacaacaagaucaauccuuguaauaccaucgaccagucc

aaaaucgugguguuccaggauaaccacgugggaaagaaggcgcagaccuccgacgacacu

cuggcgcugcuuggcuacaccgggaucggcgagcaggccauuggaagcgaucgggaucgg

gucgugcggaucuccacccuccccgagacuggagcaaggggaggcaaccaccccaucuuu

uacaaaaacagcauuaagcucggauacgucauccgcuccaucgauguguucaacucucaa

auccugcacacuucgcggcagcugucccugaaccacuaccucuugccgcccgacuccuuc

gccgucuaccggaucauugauucgaacgggagcugguucgacaucggcauugauagcgau

ggcuucucguuugugggcgugucgggcuucgggaagcuggaguucccacugagcgccuca

uacauggguauccagcuggccaagaucaggcuggccuccaacauccgcucaccuaugacu

aagcuguga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp85) SEQ ID NO: 5

atggagtcaccaacacaccctaaaccttctaaagacaaaaccctctcgtggaatctcgccttccttgtgggcatcctgttcacaatcgacatcggcatggccaacccttcgccgcatcagatctacaatgtgacatgggtcattactaatgtgcagacaaacacccaggcaaatgctacttctatgcttggtactctgactgatgcttatccaaccctgcacgtcgacctttgcgatctcgtcggtgacacatgggagcccatcgtgctgaatccaactaatgtcaaacatggtgccaggtattcttctagcaaatacgggtgtaagaccactgatcggaagaaacagcaacaaacctacccattctacgtgtgcccgggtcacgcaccgtccctgggtccgaagggaacacattgtgggggagcccaagacggtttttgcgctgcttggggttgtgaaacaaccggagaagcctggtggaagcctacctcatcttgggactacattactgtgaaaagaggctctagccaggataacagctgcgaaggaaagtgtaatcccctggtgcttcaattcacccagaaaggccggcaggcatcatgggatggaccgaaaatgtggggacttagactctatcgcaccggatacgaccccatcgctctgtttactgtgtcacgccaagtctccaccattactccgccacaggccatggggccgaatctggtcctccccgatcagaagccaccctcacggcaaagtcaaaccggctcaaaagtggccacccaacggccccagacaaatgagtccgcacctaggtcagtggcacctacaacaatgggtccaaagcggatcggaaccggagacaggctcattaacctcgtgcaagggacttatctggcccttaacgctactgaccccaacaagaccaaggattgctggctctgccttgtgagcagacctccttactatgaggggatcgccattctcggaaactactcaaatcagaccaacccccctccgtcgtgtctgagcaccccccagcacaagcttactatttcagaagtcagtggacagggaatgtgcatcggaaccgtgccaaagactcatcaagccctttgcaacaaaactcaacaagggcacactggagctcattatctcgccgcacctaacgggacctactgggcttgcaatactggattgaccccgtgtatctctatggccgtgctgaattggacttccgacttctgcgtgcttattgagctttggcctagagtgacataccatcagcctgagtacgtctatacccatttcgccaaggcagtcagattccggcgggagcctatctccctgactgtggccttgatgctcggtggactgacagtgggaggaattgcagctggagtcggaactggaaccaaggccctgctcgaaactgctcagttccggcagctgcagatggccatgcacactgacatccaggctctggaggaatcaatttcagcccttgagaaaagcttgacctcgctgtctgaagtggtcctccaaaacaggcgcggtttggacatcctgttccttcaagagggtggtctgtgcgccgctctcaaggaggaatgctgtttctacgctgaccataccgggctggtgcgcgataacatggcaaagctgcgggaacgcttgaaacagaggcagcaactgttcgactctcagcagggatggttcgagggctggtttaacaagagcccatggtttaccactctgatctcttcaatcatgggtccactgctcatcctgcttctgattcttctcttcggaccgtgtattctcaacaggctggtgcagtttgtcaaggacagaatctcggtggtccaggccctgattcttactcagcagtatcagcagattaagcagtacgaccccgatcggccttga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp85) SEQ ID NO: 6

MESPTHPKPSKDKTLSWNLAFLVGILFTIDIGMANPSPHQIYNVTWVITNVQTNTQANAT

SMLGTLTDAYPTLHVDLCDLVGDTWEPIVLNPTNVKHGARYSSSKYGCKTTDRKKQQQTY

PFYVCPGHAPSLGPKGTHCGGAQDGFCAAWGCETTGEAWWKPTSSWDYITVKRGSSQDNS

CEGKCNPLVLQFTQKGRQASWDGPKMWGLRLYRTGYDPIALFTVSRQVSTITPPQAMGPN

LVLPDQKPPSRQSQTGSKVATQRPQTNESAPRSVAPTTMGPKRIGTGDRLINLVQGTYLA

LNATDPNKTKDCWLCLVSRPPYYEGIAILGNYSNQTNPPPSCLSTPQHKLTISEVSGQGM

CIGTVPKTHQALCNKTQQGHTGAHYLAAPNGTYWACNTGLTPCISMAVLNWTSDFCVLIE

LWPRVTYHQPEYVYTHFAKAVRFRREPISLTVALMLGGLTVGGIAAGVGTGTKALLETAQ

FRQLQMAMHTDIQALEESISALEKSLTSLSEVVLQNRRGLDILFLQEGGLCAALKEECCF

YADHTGLVRDNMAKLRERLKQRQQLFDSQQGWFEGWFNKSPWFTTLISSIMGPLLILLLI

LLFGPCILNRLVQFVKDRISVVQALILTQQYQQIKQYDPDRP*

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp85) SEQ ID NO: 14

auggagucaccaacacacccuaaaccuucuaaagacaaaacccucucguggaaucucgccuuccuugugggcauccuguucacaaucgacaucggcauggccaacccuucgccgcaucagaucuacaaugugacaugggucauuacuaaugugcagacaaacacccaggcaaaugcuacuucuaugcuugguacucugacugaugcuuauccaacccugcacgucgaccuuugcgaucucgucggugacacaugggagcccaucgugcugaauccaacuaaugucaaacauggugccagguauucuucuagcaaauacggguguaagaccacugaucggaagaaacagcaacaaaccuacccauucuacgugugcccgggucacgcaccgucccuggguccgaagggaacacauugugggggagcccaagacgguuuuugcgcugcuugggguugugaaacaaccggagaagccugguggaagccuaccucaucuugggacuacauuacugugaaaagaggcucuagccaggauaacagcugcgaaggaaaguguaauccccuggugcuucaauucacccagaaaggccggcaggcaucaugggauggaccgaaaauguggggacuuagacucuaucgcaccggauacgaccccaucgcucuguuuacugugucacgccaagucuccaccauuacuccgccacaggccauggggccgaaucugguccuccccgaucagaagccacccucacggcaaagucaaaccggcucaaaaguggccacccaacggccccagacaaaugaguccgcaccuaggucaguggcaccuacaacaauggguccaaagcggaucggaaccggagacaggcucauuaaccucgugcaagggacuuaucuggcccuuaacgcuacugaccccaacaagaccaaggauugcuggcucugccuugugagcagaccuccuuacuaugaggggaucgccauucucggaaacuacucaaaucagaccaaccccccuccgucgugucugagcaccccccagcacaagcuuacuauuucagaagucaguggacagggaaugugcaucggaaccgugccaaagacucaucaagcccuuugcaacaaaacucaacaagggcacacuggagcucauuaucucgccgcaccuaacgggaccuacugggcuugcaauacuggauugaccccguguaucucuauggccgugcugaauuggacuuccgacuucugcgugcuuauugagcuuuggccuagagugacauaccaucagccugaguacgucuauacccauuucgccaaggcagucagauuccggcgggagccuaucucccugacuguggccuugaugcucgguggacugacagugggaggaauugcagcuggagucggaacuggaaccaaggcccugcucgaaacugcucaguuccggcagcugcagauggccaugcacacugacauccaggcucuggaggaaucaauuucagcccuugagaaaagcuugaccucgcugucugaagugguccuccaaaacaggcgcgguuuggacauccuguuccuucaagaggguggucugugcgccgcucucaaggaggaaugcuguuucuacgcugaccauaccgggcuggugcgcgauaacauggcaaagcugcgggaacgcuugaaacagaggcagcaacuguucgacucucagcagggaugguucgagggcugguuuaacaagagcccaugguuuaccacucugaucucuucaaucauggguccacugcucauccugcuucugauucuucucuucggaccguguauucucaacaggcuggugcaguuugucaaggacagaaucucggugguccaggcccugauucuuacucagcaguaucagcagauuaagcaguacgaccccgaucggccuuga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp70) SEQ ID NO: 7

aatcctagtccacaccaaatatataatgtaacttgggtaataaccaatgtacaaactaacacccaagctaacgccacctctatgttaggaaccttaaccgatgcctaccctaccctacatgttgacttatgtgacctagtgggagacacctgggaacctatagtcctaaacccaaccaatgtaaaacacggggcacgttactcctcctcaaaatatggatgtaaaactacagatagaaaaaaacagcaacagacataccccttttacgtctgccccggacatgccccctcgttggggccaaagggaacacattgtggaggggcacaagatgggttttgtgccgcatggggatgtgagaccaccggagaagcttggtggaagcccacctcctcatgggactatatcacagtaaaaagagggagtagtcaggacaatagctgtgagggaaaatgcaaccccctggttttgcagttcacccagaagggaagacaagcctcttgggacggacctaagatgtggggattgcgactataccgtacaggatatgaccctatcgctttattcacggtgtcccggcaggtatcaaccattacgccgcctcaggcaatgggaccaaacctagtcttacctgatcaaaaacccccatcccgacaatctcaaacagggtccaaagtggcgacccagaggccccaaacgaatgaaagcgccccaaggtctgttgcccccaccaccatgggtcccaaacggattgggaccggagataggttaataaatttagtacaagggacatacctagccttaaatgccaccgaccccaacaaaactaaagactgttggctctgcctggtttctcgaccaccctattacgaagggattgcaatcttaggtaactacagcaaccaaacaaacccccccccatcctgcctatctactccgcaacacaaactaactatatctgaagtatcagggcaaggaatgtgcatagggactgttcctaaaacccaccaggctttgtgcaataagacacaacagggacatacaggggcgcactatctagccgcccccaacggcacctattgggcctgtaacactggactcaccccatgcatttccatggcggtgctcaattggacctctgatttttgtgtcttaatcgaattatggcccagagtgacttaccatcaacccgaatatgtgtacacacattttgccaaagctgtcaggttccgaaga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp70) SEQ ID NO: 8

NPSPHQIYNVTWVITNVQTNTQANATSMLGTLTDAYPTLHVDLCDLVGDTWEPIVLNPTNVKHGARYSSSKYGCKTTDRKKQQQTYPFYVCPGHAPSLGPKGTHCGGAQDGFCAAWGCETTGEAWWKPTSSWDYITVKRGSSQDNSCEGKCNPLVLQFTQKGRQASWDGPKMWGLRLYRTGYDPIALFTVSRQVSTITPPQAMGPNLVLPDQKPPSRQSQTGSKVATQRPQTNESAPRSVAPTTMGPKRIGTGDRLINLVQGTYLALNATDPNKTKDCWLCLVSRPPYYEGIAILGNYSNQTNPPPSCLSTPQHKLTISEVSGQGMCIGTVPKTHQALCNKTQQGHTGAHYLAAPNGTYWACNTGLTPCISMAVLNWTSDFCVLIELWPRVTYHQPEYVYTHFAKAVRFRR

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp70) SEQ ID NO: 15

aauccuaguccacaccaaauauauaauguaacuuggguaauaaccaauguacaaacuaacacccaagcuaacgccaccucuauguuaggaaccuuaaccgaugccuacccuacccuacauguugacuuaugugaccuagugggagacaccugggaaccuauaguccuaaacccaaccaauguaaaacacggggcacguuacuccuccucaaaauauggauguaaaacuacagauagaaaaaaacagcaacagacauaccccuuuuacgucugccccggacaugcccccucguuggggccaaagggaacacauuguggaggggcacaagauggguuuugugccgcauggggaugugagaccaccggagaagcuugguggaagcccaccuccucaugggacuauaucacaguaaaaagagggaguagucaggacaauagcugugagggaaaaugcaacccccugguuuugcaguucacccagaagggaagacaagccucuugggacggaccuaagauguggggauugcgacuauaccguacaggauaugacccuaucgcuuuauucacggugucccggcagguaucaaccauuacgccgccucaggcaaugggaccaaaccuagucuuaccugaucaaaaacccccaucccgacaaucucaaacaggguccaaaguggcgacccagaggccccaaacgaaugaaagcgccccaaggucuguugcccccaccaccaugggucccaaacggauugggaccggagauagguuaauaaauuuaguacaagggacauaccuagccuuaaaugccaccgaccccaacaaaacuaaagacuguuggcucugccugguuucucgaccacccuauuacgaagggauugcaaucuuagguaacuacagcaaccaaacaaacccccccccauccugccuaucuacuccgcaacacaaacuaacuauaucugaaguaucagggcaaggaaugugcauagggacuguuccuaaaacccaccaggcuuugugcaauaagacacaacagggacauacaggggcgcacuaucuagccgcccccaacggcaccuauugggccuguaacacuggacucaccccaugcauuuccauggcggugcucaauuggaccucugauuuuugugucuuaaucgaauuauggcccagagugacuuaccaucaacccgaauauguguacacacauuuugccaaagcugucagguuccgaaga

Вирус бешенства G (SEQ ID NO: 9)

atggtgccgcaggctctcctgtttgtcccccttctggtctttccattgtgttttgggaaattccctatctacacaattccggacaagttgggaccctggagcccaattgacattcatcatctcagctgcccgaacaatttggtcgtggaggacgaaggatgcaccaacctgtcggggttctcctacatggaattgaaagtcggatacatcagtgccattaagatgaacgggttcacttgcacaggcgtcgtgactgaagctgagacatacactaacttcgtgggatatgtcactaccactttcaaaagaaagcatttccgccctactcctgatgcttgtagggccgcatacaactggaagatggccggtgaccccagatatgaggaatcacttcacaatccgtaccctgactaccactggcttcggactgtcaaaaccaccaaggagtcactcgtgatcattagtccaagtgtggctgatcttgacccatacgaccggtcacttcactcacgggtgttcccgggggggaattgctctggtgtcgcagtgtcgtcaacctactgctccacaaaccacgattacaccatttggatgccagaaaatcctcggcttggtatgtcatgtgacattttcaccaattctcgggggaagagggcttccaaagggtctgaaacttgcggctttgtcgatgagcggggcttgtataagtcacttaaaggtgcttgcaaactcaagctttgtggtgtcttgggattgagattgatggatggaacttgggtcgcaatgcagacttctaacgaaaccaaatggtgccctcccggacagcttgtgaatttgcatgactttcgctctgacgaaattgagcatcttgtcgtcgaggagttggtcaagaagcgggaagagtgtctggatgctttggaatcaatcatgaccaccaagtcagtgtctttcagacggctctcacatcttaggaaattggtgccaggttttggaaaagcatataccattttcaacaagacccttatggaagccgatgctcactacaagtctgtcaggacttggaatgagatcatcccgtctaaagggtgtcttagggtcggagggagatgtcatcctcatgtcaacggagtctttttcaatggtatcattcttggacctgacggaaatgtccttatccctgagatgcaatcttccctcctccagcaacacatggaacttcttgtctcatcggtcatcccccttatgcaccccctggctgacccatcaaccgtgttcaagaacggtgacgaggcagaggattttgtcgaggtccaccttcccgatgtgcatgaacggatctctggtgtcgaccttggactccctaactggggaaagtatgtccttctgtcggcaggagccctgactgccttgatgttgattatcttcctgatgacttgttggaggagagtcaatcggtcggagccaacacaacataatctcagaggaacaggaagggaggtgtcagtcacaccccaaagcgggaagatcatttcgtcttgggagtcatacaagagcggaggtgaaaccggactgtga

Вирус бешенства G (SEQ ID NO: 10)

MVPQALLFVPLLVFPLCFGKFPIYTIPDKLGPWSPIDIHHLSCPNNLVVEDEGCTNLSGF

SYMELKVGYISAIKMNGFTCTGVVTEAETYTNFVGYVTTTFKRKHFRPTPDACRAAYNWK

MAGDPRYEESLHNPYPDYHWLRTVKTTKESLVIISPSVADLDPYDRSLHSRVFPGGNCSG

VAVSSTYCSTNHDYTIWMPENPRLGMSCDIFTNSRGKRASKGSETCGFVDERGLYKSLKG

ACKLKLCGVLGLRLMDGTWVAMQTSNETKWCPPGQLVNLHDFRSDEIEHLVVEELVKKRE

ECLDALESIMTTKSVSFRRLSHLRKLVPGFGKAYTIFNKTLMEADAHYKSVRTWNEIIPS

KGCLRVGGRCHPHVNGVFFNGIILGPDGNVLIPEMQSSLLQQHMELLVSSVIPLMHPLAD

PSTVFKNGDEAEDFVEVHLPDVHERISGVDLGLPNWGKYVLLSAGALTALMLIIFLMTCW

RRVNRSEPTQHNLRGTGREVSVTPQSGKIISSWESYKSGGETGL*

Вирус бешенства G (SEQ ID NO: 16)

auggugccgcaggcucuccuguuugucccccuucuggucuuuccauuguguuuugggaaauucccuaucuacacaauuccggacaaguugggacccuggagcccaauugacauucaucaucucagcugcccgaacaauuuggucguggaggacgaaggaugcaccaaccugucgggguucuccuacauggaauugaaagucggauacaucagugccauuaagaugaacggguucacuugcacaggcgucgugacugaagcugagacauacacuaacuucgugggauaugucacuaccacuuucaaaagaaagcauuuccgcccuacuccugaugcuuguagggccgcauacaacuggaagauggccggugaccccagauaugaggaaucacuucacaauccguacccugacuaccacuggcuucggacugucaaaaccaccaaggagucacucgugaucauuaguccaaguguggcugaucuugacccauacgaccggucacuucacucacggguguucccgggggggaauugcucuggugucgcagugucgucaaccuacugcuccacaaaccacgauuacaccauuuggaugccagaaaauccucggcuugguaugucaugugacauuuucaccaauucucgggggaagagggcuuccaaagggucugaaacuugcggcuuugucgaugagcggggcuuguauaagucacuuaaaggugcuugcaaacucaagcuuuguggugucuugggauugagauugauggauggaacuugggucgcaaugcagacuucuaacgaaaccaaauggugcccucccggacagcuugugaauuugcaugacuuucgcucugacgaaauugagcaucuugucgucgaggaguuggucaagaagcgggaagagugucuggaugcuuuggaaucaaucaugaccaccaagucagugucuuucagacggcucucacaucuuaggaaauuggugccagguuuuggaaaagcauauaccauuuucaacaagacccuuauggaagccgaugcucacuacaagucugucaggacuuggaaugagaucaucccgucuaaagggugucuuagggucggagggagaugucauccucaugucaacggagucuuuuucaaugguaucauucuuggaccugacggaaauguccuuaucccugagaugcaaucuucccuccuccagcaacacauggaacuucuugucucaucggucaucccccuuaugcacccccuggcugacccaucaaccguguucaagaacggugacgaggcagaggauuuugucgagguccaccuucccgaugugcaugaacggaucucuggugucgaccuuggacucccuaacuggggaaaguauguccuucugucggcaggagcccugacugccuugauguugauuaucuuccugaugacuuguuggaggagagucaaucggucggagccaacacaacauaaucucagaggaacaggaagggaggugucagucacaccccaaagcgggaagaucauuucgucuugggagucauacaagagcggaggugaaaccggacuguga

Следующие примеры служат для дальнейшего понимания изобретения, но никоим образом не предназначены для ограничения действительного объема изобретения.

Примеры

Пример 1

Включение кодирующих последовательностей капсидных белков FCV в частицы РНК-репликона альфа-вируса

Введение

РНК-вирусы использовали в качестве векторов-носителей для введения вакцинных антигенов, которые были генетически введены в их геномы. Однако к настоящему времени их применение ограничивалось преимущественно включением вирусных антигенов в РНК-вирус и затем введением вируса хозяину-реципиенту. Результатом является индукция ответной выработки защитных антител против включенных вирусных антигенов. Частицы РНК-репликона альфа-вируса использовали для кодирования патогенных антигенов. Такие платформы альфа-вирусных репликонов были разработаны на основе нескольких различных альфа-вирусов, включая вирус венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) [Pushko et al., Virology, 239: 389-401 (1997)], вирус Синдбис (SIN) [Bredenbeek et al., Journal of Virology, 67: 6439-6446 (1993), содержание указанных публикаций в полном объеме включено здесь посредством ссылки], и вирус леса Семлики (SFV) [Liljestrom and Garoff, Biotechnology (NY), 9: 1356-1611 (1991), содержание указанной публикации в полном объеме включено здесь посредством ссылки]. Кроме того, частицы РНК-репликона альфа-вируса являются основой для нескольких лицензированных USDA вакцин для свиней и птицы. К ним относятся: вакцина против эпидемической диареи свиней, частица РНК (код продукта 19U5.P1), вакцина против свиного гриппа, РНК (код продукта 19A5.D0), вакцина против птичьего гриппа, РНК (код продукта 19O5.D0) и рецептурный продукт, частица РНК (код продукта 9PP0.00).

Конструирование частиц РНК-реликона альфа-вируса

Аминокислотные последовательности капсидных белков FCV использовали для получения кодон-оптимизированных (с использованием кошачьих кодонов) нуклеотидных последовательностей in silico. Оптимизированные последовательности получали в виде синтетической ДНК из коммерческого источника (ATUM, Newark, CA). Соответственно, синтетические гены конструировали на основе аминокислотных последовательностей капсидного белка VS-FCV и капсидного белка F9-подобного штамма FCV, соответственно. Конструкты, которые кодируют аминокислотную последовательность капсидного белка VS-FCV [SEQ ID NO: 2] или капсидного белка F9-подобного штамма FCV [SEQ ID NO: 4], кодон-оптимизировали для кошачьих, с фланкирующей последовательностью, подходящей для клонирования в плазмидный альфа-вирусный репликон.

Векторы на основе репликона VEE, сконструированные для экспрессии капсидных белков FCV, конструировали, как описано ранее [см. заявка на патент США № 9441247 B2; содержание которой включено здесь посредством ссылки] со следующими модификациями. Полученный из TC-83 вектор, содержащий репликон, «pVEK» [раскрытый и описанный в заявке на патент США № 9441247 B2] расщепляли рестриктазами AscI и PacI. ДНК-плазмиду, содержащую кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность открытой рамки считывания одного из генов капсидного белка FCV (F9-подобного штамма FCV или VS-FCV) с 5'-фланкирующей последовательностью (5'-GGCGCGCCGCACC-3') [SEQ ID NO: 11] и 3'-фланкирующей последовательностью (5'-TTAATTAA-3'), аналогичным образом расщепляли рестриктазами AscI и PacI. Затем синтетическую генную кассету лигировали в аналогично расщепленный вектор pVEK, и полученные клоны были переименованы в «pVHV-F9» и «pVHV-Kalem», кодирующие капсидные белки F9-подобного штамма FCV и VS-FCV соответственно. Номенклатура векторов «pVHV» была выбрана для обозначения векторов на основе репликонов, полученных из pVEK, содержащих трансгенные кассеты, клонированные через сайты AscI и PacI в сайт множественного клонирования pVEK.

Для создания двойного конструкта область вектора pVHV, кодирующую субгеномный промотор VEE и капсидные последовательности FCV Kalem (VS-FCV), удаляли с помощью ПЦР и лигировали в вектор pVHV-F9 между 3'-концом капсидной последовательности F9 FCV и VEE 3'-UTR последовательности. Дупликацию последовательности субгеномного промотора и подтверждение капсидной последовательности FCV Kalem проводили секвенированием конечного векторного клона, названного «pVHV-F9-Kalem».

Получение частиц РНК-репликона ТС-83 (RP) проводили в соответствии с методами, описанными ранее [заявки на патент США № 9441247 B2 и № 8460913 B2; содержание которых в полном объеме включено здесь посредством ссылки]. Вкратце, плазмиды с ДНК репликоном вектора pVHV и ДНК хелпера линеаризовали рестриктазой NotI перед транскрипцией in vitro с использованием РНК-полимеразы MegaScript T7 и кэп-аналога (Promega, Madison, WI). Важно, что хелперные РНК, используемые в получении, не имеют последовательности субгеномного промотора VEE, как описано ранее [Kamrud et al., J. Gen. Virol., 91 (Pt 7): 1723-1727 (2010)]. Выделенную РНК для компонентов репликона и хелпера объединяли и смешивали с суспензией клеток Vero, подвергали электропорации в 4-мм кюветах и возвращали в культуральную клеточную среду OptiPro^® SFM (Thermo Fisher, Waltham MA). После инкубации в течение ночи частицы РНК-репликона альфа-вируса очищали от клеток и среды пропусканием суспензии через глубинный фильтр ZetaPlus BioCap (3M, Maplewood, MN), промыванием фосфатно-солевым буфером, содержащим 5% сахарозы (мас./об.), и, наконец, элюированием оставшейся RP 400 мМ NaCl-буфером. Элюированную RP формулировали в конце в 5% растворе сахарозы (мас./об.), пропускали через мембранный фильтр 0,22 мкм и распределяли на аликвотные порции для хранения. Титр функциональной RP определяли иммунофлуоресцентным анализом на монослоях инфицированных клеток Vero.

Пример 2

Оценка эффективности и безопасности вакцины против FCV на основе двойного конструкта у кошек

Вакцину на основе двойного конструкта, содержащую репликационно-дефектную РНК-частицу (RP), кодирующую капсидные белки двух разных штаммов FCV, вирулентного системного штамма (VS-FCV) и классического вакцинного штамма (F9-подобного штамма FCV) вместе с капсидным белком и гликопротеинами авирулентного штамма ТС-83 вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) формулировали в 5% растворе сахарозе и хранили в замороженном виде. Вакцину на основе данного двойного конструкта использовали для оценки эффективности против контрольного заражения двумя штаммами FCV, как показано в таблице 1 ниже. Две группы по 10 кошек в каждой вакцинировали вакциной против FCV на основе двойного конструкта в режиме «прайм/буст» вакцинации в возрасте 13-14 недель, и затем через 21 день. Две группы контрольных кошек вакцинировали по той же схеме с использованием вакцины плацебо, состоящей из культуральной клеточной среды (минимальная эссенциальная среда, сбалансированная солями Эрла, EMEM).

Таблица 1
Протокол вакцинации Группа обработки Количество животных Исследуемый продукт Доза вакцины Штамм для контрольного заражения 1 9 Двойной конструкт RP-FCV 6,1×10⁷ Классический FCV (штамм 255) 2 7 Плацебо неприменимо Классический FCV (штамм 255) 3 9 Двойной конструкт RP-FCV 6,1×10⁷ Вирулентный системный FCV (штамм Kalem^#) 4 7 Плацебо неприменимо Вирулентный системный FCV (штамм Kalem^#) ^#Внутренняя ссылка

После вакцинации за кошками проводили наблюдение в отношении проявления побочных реакций на вакцины, определением у кошек любых локальных или системных реакций на вакцины, а также клинических признаков инфекции FCV. Никаких побочных реакций не наблюдали ни у одной из вакцинированных кошек.

Через три недели после бустер-вакцинации кошек в группах 1 и 2 интраназально заражали вирулентной культурой штамма 255 FCV (классический штамм для заражения FCV). Через три недели после бустер-вакцинации кошек в группах 3 и 4 интраназально заражали вирулентной культурой вирулентного системного штамма для заражения FCV (штамм FCV Kalem).

За кошками проводили наблюдение в отношении клинических признаков инфекции FCV в течение 14 суток после контрольного заражения следующим образом: наблюдение и ежедневная оценка на наличие клинических признаков, включая падеж, депрессию/летаргию, температуру тела, язвы в носовой и ротовой полости, выделения из носа и глаз, хромоту, обезвоживание и чихание. Массу тела определяли каждые четыре дня в течение 14 дней после заражения. Каждому из наблюдаемых клинических признаков был присвоен взвешенный числовой балл, основанный на степени тяжести и количестве дней, в течение которых он наблюдался. Затем каждой кошке давали общий взвешенный балл, основанный на сумме ежедневно определяемых взвешенных баллов. Затем рассчитывали средневзвешенный и медианный взвешенный балл для каждой группы обработки. Для того, чтобы заражение считалось подтвержденным, у 80% контрольных кошек должны проявляться клинические признаки инфекции FCV (иные чем лихорадка). Результаты заражения приведены в таблице 2 ниже:

Таблица 2
Результаты контрольного заражения Группа обработки Исследуемый продукт Штамм для заражения Медианный взвешенный клинический балл Средневзвешенный клинический балл 1 Двойной конструкт RP-FCV Классический FCV (штамм 255) 5 6,3 2 Плацебо Классический FCV (штамм 255) 16 14,3 3 Двойной конструкт RP-FCV Вирулентный системный FCV (штамм Kalem) 10 8,8 4 Плацебо Вирулентный системный FCV (штамм Kalem) 38 36,9

Контрольное заражение обоими штаммами было признано подтвержденным, поскольку у 100% контрольных кошек, вакцинированных плацебо, наблюдали клинические признаки инфекции FCV (иные чем лихорадка). Вакцина RP-FCV на основе двойного конструкта, кодирующая вирулентный системный и классический вакцинный штамм FCV, защищала кошек от двух различных штаммов FCV: классического штамма FCV, а также вирулентного системного штамма FCV. Было установлено, что экспериментальная вакцина является безопасной для кошек.

Пример 3

Оценка интерференции при введении вакцин на основе двух разных частиц РНК

Проводили исследование для оценки многочисленных аспектов вакцины FCV с частицами РНК-репликона альфа-вируса, включая серологический ответ, эффективность против контрольного заражения и интерференцию. Вакцину на основе конструкта RP-FCV, кодирующего капсидный белок классического вакцинного штамма FCV (F9), формулировали в стабилизаторе, состоящем из желатина, NZ-амина и сахарозы, и лиофилизировали. Две группы из пяти кошек в каждой вакцинировали вакциной RP-FCV в возрасте 17 недель. Через двадцать один день кошкам в группе 1 вводили бустер-дозу только вакцины RP-FCV, кошкам в группе 2 вводили бустер-дозу вакцины RP-FCV и вводили дозу RP вакцины против бешенства в одно и то же время, как показано в таблице 3 ниже. RP вакцина против вируса бешенства представляет собой конструкт, кодирующий гликопротеин (G) вируса бешенства на той же платформе альфа-вируса VEE TC-83.

Таблица 3
Протокол вакцинации Группа обработки Исследуемый продукт - первоначальная вакцинация (день 0) Исследуемый продукт(ы)-бустер-вакцинация (день 21) 1 RP-FCV (F9) RP-FCV (F9) 2 RP-FCV (F9) RP-FCV (F9) RP против вируса бешенства

После каждой вакцинации за кошками проводили наблюдение в отношении побочных реакций на вакцины, определением у кошек любых местных или системных реакций на вакцины. Никаких побочных реакций не наблюдали ни у одной из вакцинированных кошек.

У кошек отбирали пробы крови для приготовления сыворотки в день первоначальной вакцинации (день опыта 0), день бустер-вакцинации (день опыта 21) и через шесть недель после первоначальной вакцинации (день опыта 42). В сыворотке определяли титр антител к FCV F9 анализом нейтрализации сыворотки. Сыворотку также тестировали на титр антител к вирусу бешенства с помощью анализа быстрого ингибирования фокусов флуоресценции (RFFIT). Результаты RIFFT представлены в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл). Результаты серологического анализа приведены в таблицах 4 и 5 ниже.

Таблица 4
Результаты серологического анализа на FCV F9 Группа обработки Режим вакцинации (день 0/день 21) Титр антител против FCV (F9) (геометрическое среднее) день 0 день 21 день 42 1 RP-FCV (F9)/ RP-FCV (F9) <2 3 34 2 RP-FCV (F9)/ RP-FCV (F9)+ RP-против вируса бешенства <2 3 38

На основании сравнения титров антител к FCV (F9) (на образцах сыворотки, отобранных после бустер-вакцинации) одновременная вакцинация RP-R вакциной против вируса бешенства не оказывала влияния на ответную выработку антител на RP-FCV (F9) вакцину.

Таблица 5
Результаты серологического анализа на вирус бешенства Группа обработки Режим вакцинации (день 0/день 21) Титр антител против вируса бешенства (геометрическое среднее МЕ/мл) день 0 день 21 день 42 1 RP-FCV (F9)/ RP-FCV (F9) 2 1 не тестировали 2 RP-FCV (F9)/ RP-FCV (F9)+ RP-против вируса бешенства 1 <1 39

Несмотря на то, что это исследование не включало контрольную группу, которую вакцинировали только RP-вакциной против вируса бешенства с целью сравнения титра антител против вируса бешенства после введения бустер-дозы в группе 2, исторические данные других опытов представлены ниже в таблице 6.

Таблица 6
Результаты серологического анализа на вирус бешенства в нескольких исследованиях Группа обработки Схема вакцинации Активность RP-против вируса бешенства Титр антител против вируса бешенства (геометрическое среднее МЕ/мл) До вакцинации Примерно через 1 месяц после вакцинации* 2 RP-FCV (F9)/ RP-FCV (F9)+RP-против вируса бешенства 1,3×10⁷ 1 39 Исследование RUS-006 RP-одна вакцинация только против вируса бешенства 2,7×10⁷ <0,1 42,7 Исследование RUS-006 RP-одна вакцинация только против вируса бешенства 2,6×10⁶ <0,1 17,6 *У кошек в исследовании RUS-006 образцы крови для приготовления сыворотки отбирали через 30 дней после вакцинации

На основе активности RP-вакцин против вируса бешенства и титров антител после вакцинации против бешенства, предварительная вакцинация RP-FCV вакциной не оказывает отрицательного влияния на ответную выработку антител на RP-вакцину против вируса бешенства. Векторный иммунитет является проблемой для вакцин на основе платформ, однако результаты этого исследования показывают, что многочисленные вакцины на основе RP можно использовать на животных без ущерба для эффективности.

Для подтверждения отсутствия интерференции при одновременной вакцинации RP-против вируса бешенства на эффективность RP-FCV(F9), в исследование были внесены поправки, и оно было продолжено. Группа из пяти кошек такого же возраста была добавлена в исследование в качестве невакцинированных контролей. Всех кошек интраназально заражали вирулентным классическим штаммом FCV (FCV 255) через 79 дней после первоначальной вакцинации групп 1 и 2.

В течение 14 дней после контрольного заражения за кошками проводили наблюдение и ежедневно оценивали на наличие следующих клинических признаков инфекции FCV: падеж, депрессия/летаргия, температура тела, язвы в носовой и ротовой полости, выделения из носа и глаз, хромота, обезвоживание и чихание. Массу тела определяли каждые четыре дня в течение 14-дневного периода после заражения. Каждому из наблюдаемых клинических признаков был присвоен взвешенный числовой балл, основанный на степени тяжести и количестве дней, в течение которых он наблюдался. Затем каждой кошке давали общий взвешенный балл, основанный на сумме ежедневно определяемых взвешенных баллов. Затем рассчитывали средневзвешенный балл и медианный взвешенный балл для каждой группы обработки. Для того, чтобы заражение считалось подтвержденным, у 80% контрольных кошек должны быть клинические признаки инфекции FCV (иные чем лихорадка). Результаты контрольного заражения приведены в таблице ниже:

Таблица 7
Результаты заражения в опыте по интерференции Группа обработки Режим вакцинации (день 0/день 21) Средневзвешенный клинический балл Медианный взвешенный клинический балл 1 RP-FCV (F9)/ RP-FCV (F9) 3 4,0 2 RP-FCV (F9)/RP-FCV (F9)+RP-против вируса бешенства 2 4,4 3 Невакцинированные 20 19,6

Заражение считали подтвержденным, поскольку у 100% невакцинированных контрольных кошек проявлялись клинические признаки инфекции FCV (иные чем лихорадка). Обе вакцинированные группы (группы 1 и 2) были достоверно защищены от заражения вирулентным FCV (р-значения 0,012 для обеих групп).

Основываясь на сравнении клинических показателей, одновременная вакцинация RP-вакциной против вируса бешенства не влияет отрицательно на эффективность вакцины против RP-FCV (F9). Было установлено, что экспериментальная вакцина является безопасной для кошек.

Пример 4

Оценка эффективности у кошек вакцины на основе RP конструкта, кодирующего один капсидный белок F9-подобного штамма FCV

Это исследование проводили для дальнейшей оценки эффективности кошачьей вакцины, содержащей частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует один капсидный белок F9-подобного штамма FCV (RP-FCV F9). Вакцину сравнивали с контрольной группой, получавшей плацебо, при контрольном заражении классическим FCV. Кошкам инокулировали либо данную одновалентную вакцину, либо плацебо, и затем заражали классическим FCV. Клинические баллы основаны на характерных признаках инфекции FCV, в основном язвы в ротовой полости и наружные язвы и ринит, которые оценивали в течение 14 дней после заражения FCV. Система оценки была такой же, как описана в примерах 2 и 3 выше. В то время, как средний клинический балл для контрольной группы с плацебо составлял 92, средний клинический балл для вакцины F9 RP-FCV равнялся только 2. Удивительно, но балл для вакцины F9 RP-FCV также был достоверно ниже, чем показатель, полученный с двумя вакцинами, которые по отдельности включали один аттенуированный живой вирус F9-подобного штамма FCV. Результаты данного эксперимента дополнительно демонстрируют, что RP-FCV вакцина, кодирующая классический вакцинный штамм FCV, защищает кошек от F9-подобного штамма вируса FCV.

Настоящее изобретение не должно ограничиваться в объеме конкретными вариантами осуществления, описанными здесь. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые описаны здесь, станут очевидными для специалистов в данной области техники из вышеприведенного описания. Такие модификации предназначены для включения в объем прилагаемой формулы изобретения.

Кроме того, следует понимать, что все размеры последовательностей оснований или размеры последовательностей аминокислот и все молекулярные массы или значения молекулярной массы, приведенные для нуклеиновых кислот или полипептидов, являются примерными и представлены для описания.

--->

Список последовательностей

<110> Intervet, Inc.

Intervet InteРНКtional BV

Tarpey, Ian

<120> ВАКЦИНА ПРОТИВ КОШАЧЬЕГО КАЛИЦИВИРУСА

<130> 24551

<150> 62/596,508

<151> 2017-12-08

<150> 62/582,050

<151> 2017-11-06

<150> 62/581,955

<151> 2017-11-06

<150> 62/599,401

<151> 2017-12-15

<160> 16

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1638

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 1

atggctgacg acggatctgt gaccacccca gaacaaggaa caatggtcgg aggagtgatt 60

gccgaaccca gcgctcagat gtcaactgcg gcggacatgg cctccggaaa gtcggtggac 120

tccgagtggg aagccttctt ctcgttccac acgtccgtga actggagcac ctccgaaacc 180

caaggaaaga tcctcttcaa gcagtccctg ggtcccctgc tgaacccgta cctggagcac 240

atcagcaagc tgtacgtcgc ttggagcggg tcgatcgaag tgcgattttc catctcggga 300

agcggcgtgt tcggtggtaa actggccgcc atcgtcgtgc cgcctggtgt cgaccctgtc 360

cagtcaacct ccatgctgca gtacccgcac gtcctgttcg acgcaagaca agtggagcca 420

gtgatcttct ccatcccgga cctccgcaac agcctgtatc acttgatgtc cgataccgat 480

accacttccc tcgtgatcat ggtgtacaac gatctgatca acccgtacgc caatgactcc 540

aacagctcgg gttgcatcgt gaccgtcgaa acgaagcctg gcatcgattt caagtttcat 600

ctgctgaaac cgcccggatc catgcttact cacgggtcca tcccttccga tctgatcccc 660

aagagctcct ccctgtggat tgggaaccgc cactggaccg atattaccga tttcgtgatt 720

cggcctttcg tgttccaagc caaccggcac ttcgacttca accaggagac tgccggctgg 780

tcaactccac ggttccgccc attggccgtg actgtgtcgc agtcaaaggg agccaagctc 840

gggaacggca tcgccaccga ctacattgtg cctggaatcc ccgacggatg gcctgatact 900

accatcccca ccaagctgac ccctaccgga gattacgcca tcacctcctc cgacggcaat 960

gatattgaaa ccaagctgga atacgagaac gcggacgtga ttaagaacaa caccaacttc 1020

cgctccatgt atatctgcgg aagcctccag agggcttggg gcgacaagaa gatcagcaac 1080

accgggttca tcactaccgg agtgatttct gacaactcca tcagcccttc gaacacaatt 1140

gaccagtcca agatcgtggt gtaccaggac aaccatgtca attcggaggt ccagactagc 1200

gacatcactc ttgccatcct gggctacacc ggaattggag aagaggccat aggcgccaac 1260

cgggactccg tcgtgagaat ttccgtgctt ccggaaactg gagcaagggg cggaaatcac 1320

cccatcttct acaaaaattc catgaagctg ggctacgtga tctcctccat tgacgtgttc 1380

aactcccaaa tcctccacac ctcgcgccag ctgtcactga acaactactt gttgccccct 1440

gactccttcg cggtgtaccg gattattgac agcaacggat catggttcga cattgggatt 1500

gacagcgatg ggttttcatt cgtgggcgtg tcgtcatttc caaagctgga gtttccgctg 1560

tccgcctcat acatgggcat ccagctcgca aagatccggc tggcgtccaa catccggtca 1620

tccatgacta agctgtga 1638

<210> 2

<211> 545

<212> БЕЛОК

<213> Кошачий калицивирус

<400> 2

Met Ala Asp Asp Gly Ser Val Thr Thr Pro Glu Gln Gly Thr Met Val

1 5 10 15

Gly Gly Val Ile Ala Glu Pro Ser Ala Gln Met Ser Thr Ala Ala Asp

20 25 30

Met Ala Ser Gly Lys Ser Val Asp Ser Glu Trp Glu Ala Phe Phe Ser

35 40 45

Phe His Thr Ser Val Asn Trp Ser Thr Ser Glu Thr Gln Gly Lys Ile

50 55 60

Leu Phe Lys Gln Ser Leu Gly Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Leu Glu His

65 70 75 80

Ile Ser Lys Leu Tyr Val Ala Trp Ser Gly Ser Ile Glu Val Arg Phe

85 90 95

Ser Ile Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Lys Leu Ala Ala Ile Val

100 105 110

Val Pro Pro Gly Val Asp Pro Val Gln Ser Thr Ser Met Leu Gln Tyr

115 120 125

Pro His Val Leu Phe Asp Ala Arg Gln Val Glu Pro Val Ile Phe Ser

130 135 140

Ile Pro Asp Leu Arg Asn Ser Leu Tyr His Leu Met Ser Asp Thr Asp

145 150 155 160

Thr Thr Ser Leu Val Ile Met Val Tyr Asn Asp Leu Ile Asn Pro Tyr

165 170 175

Ala Asn Asp Ser Asn Ser Ser Gly Cys Ile Val Thr Val Glu Thr Lys

180 185 190

Pro Gly Ile Asp Phe Lys Phe His Leu Leu Lys Pro Pro Gly Ser Met

195 200 205

Leu Thr His Gly Ser Ile Pro Ser Asp Leu Ile Pro Lys Ser Ser Ser

210 215 220

Leu Trp Ile Gly Asn Arg His Trp Thr Asp Ile Thr Asp Phe Val Ile

225 230 235 240

Arg Pro Phe Val Phe Gln Ala Asn Arg His Phe Asp Phe Asn Gln Glu

245 250 255

Thr Ala Gly Trp Ser Thr Pro Arg Phe Arg Pro Leu Ala Val Thr Val

260 265 270

Ser Gln Ser Lys Gly Ala Lys Leu Gly Asn Gly Ile Ala Thr Asp Tyr

275 280 285

Ile Val Pro Gly Ile Pro Asp Gly Trp Pro Asp Thr Thr Ile Pro Thr

290 295 300

Lys Leu Thr Pro Thr Gly Asp Tyr Ala Ile Thr Ser Ser Asp Gly Asn

305 310 315 320

Asp Ile Glu Thr Lys Leu Glu Tyr Glu Asn Ala Asp Val Ile Lys Asn

325 330 335

Asn Thr Asn Phe Arg Ser Met Tyr Ile Cys Gly Ser Leu Gln Arg Ala

340 345 350

Trp Gly Asp Lys Lys Ile Ser Asn Thr Gly Phe Ile Thr Thr Gly Val

355 360 365

Ile Ser Asp Asn Ser Ile Ser Pro Ser Asn Thr Ile Asp Gln Ser Lys

370 375 380

Ile Val Val Tyr Gln Asp Asn His Val Asn Ser Glu Val Gln Thr Ser

385 390 395 400

Asp Ile Thr Leu Ala Ile Leu Gly Tyr Thr Gly Ile Gly Glu Glu Ala

405 410 415

Ile Gly Ala Asn Arg Asp Ser Val Val Arg Ile Ser Val Leu Pro Glu

420 425 430

Thr Gly Ala Arg Gly Gly Asn His Pro Ile Phe Tyr Lys Asn Ser Met

435 440 445

Lys Leu Gly Tyr Val Ile Ser Ser Ile Asp Val Phe Asn Ser Gln Ile

450 455 460

Leu His Thr Ser Arg Gln Leu Ser Leu Asn Asn Tyr Leu Leu Pro Pro

465 470 475 480

Asp Ser Phe Ala Val Tyr Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Ser Trp Phe

485 490 495

Asp Ile Gly Ile Asp Ser Asp Gly Phe Ser Phe Val Gly Val Ser Ser

500 505 510

Phe Pro Lys Leu Glu Phe Pro Leu Ser Ala Ser Tyr Met Gly Ile Gln

515 520 525

Leu Ala Lys Ile Arg Leu Ala Ser Asn Ile Arg Ser Ser Met Thr Lys

530 535 540

Leu

545

<210> 3

<211> 1629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 3

atgactgccc cggaacaagg aacgatggtc ggaggagtga ttgcagaacc gtcagcacag 60

atgtccaccg ctgccgacat ggccactgga aagagcgtgg actccgaatg ggaagccttc 120

ttctccttcc acacttcggt caactggtcg actagcgaaa cccaggggaa gattttgttc 180

aagcaatccc tcggccctct gctgaacccc tacctggagc atctggccaa gctgtacgtg 240

gcatggtcgg gcagcatcga agtgcgcttt agcatttccg gctccggagt gttcggggga 300

aagcttgctg ccattgtcgt gccgccagga gtggacccgg tgcagtccac ttctatgctc 360

caatacccgc atgtcctgtt cgacgccaga caggtggagc ctgtgatctt ttgcctgccg 420

gatctcaggt ccaccctgta tcacctcatg tccgacaccg acaccacctc gctcgtgatc 480

atggtgtaca acgacctgat caacccctac gctaacgacg ccaacagctc aggttgcatt 540

gtgactgtcg aaaccaagcc aggccctgac ttcaagtttc atttgctgaa gccgcccggt 600

tccatgctga cccacggctc gatcccatcc gacctgatcc ccaagacgag ctccctgtgg 660

atcggaaacc gctactggtc cgatattacc gacttcgtga tcagaccatt cgtgttccaa 720

gccaaccgcc atttcgactt caaccaggaa accgcaggat ggtcgacccc tcgattccgc 780

ccgatttcag tgaccatcac cgaacagaac ggcgcgaagc tgggaattgg cgtggcgacc 840

gactacatcg tgccgggaat cccggatgga tggcctgata cgaccattcc cggggagctg 900

atccctgccg gggactacgc catcaccaac ggtactggaa acgacatcac cactgccacc 960

ggttacgaca ccgccgacat cataaagaac aacaccaact tcagaggaat gtacatttgc 1020

ggctccctgc aacgcgcttg gggtgacaaa aagatctcga acactgcctt catcacaaca 1080

gcgactctgg acggcgataa caacaacaag atcaatcctt gtaataccat cgaccagtcc 1140

aaaatcgtgg tgttccagga taaccacgtg ggaaagaagg cgcagacctc cgacgacact 1200

ctggcgctgc ttggctacac cgggatcggc gagcaggcca ttggaagcga tcgggatcgg 1260

gtcgtgcgga tctccaccct ccccgagact ggagcaaggg gaggcaacca ccccatcttt 1320

tacaaaaaca gcattaagct cggatacgtc atccgctcca tcgatgtgtt caactctcaa 1380

atcctgcaca cttcgcggca gctgtccctg aaccactacc tcttgccgcc cgactccttc 1440

gccgtctacc ggatcattga ttcgaacggg agctggttcg acatcggcat tgatagcgat 1500

ggcttctcgt ttgtgggcgt gtcgggcttc gggaagctgg agttcccact gagcgcctca 1560

tacatgggta tccagctggc caagatcagg ctggcctcca acatccgctc acctatgact 1620

aagctgtga 1629

<210> 4

<211> 542

<212> БЕЛОК

<213> Кошачий калицивирус

<400> 4

Met Thr Ala Pro Glu Gln Gly Thr Met Val Gly Gly Val Ile Ala Glu

1 5 10 15

Pro Ser Ala Gln Met Ser Thr Ala Ala Asp Met Ala Thr Gly Lys Ser

20 25 30

Val Asp Ser Glu Trp Glu Ala Phe Phe Ser Phe His Thr Ser Val Asn

35 40 45

Trp Ser Thr Ser Glu Thr Gln Gly Lys Ile Leu Phe Lys Gln Ser Leu

50 55 60

Gly Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Leu Glu His Leu Ala Lys Leu Tyr Val

65 70 75 80

Ala Trp Ser Gly Ser Ile Glu Val Arg Phe Ser Ile Ser Gly Ser Gly

85 90 95

Val Phe Gly Gly Lys Leu Ala Ala Ile Val Val Pro Pro Gly Val Asp

100 105 110

Pro Val Gln Ser Thr Ser Met Leu Gln Tyr Pro His Val Leu Phe Asp

115 120 125

Ala Arg Gln Val Glu Pro Val Ile Phe Cys Leu Pro Asp Leu Arg Ser

130 135 140

Thr Leu Tyr His Leu Met Ser Asp Thr Asp Thr Thr Ser Leu Val Ile

145 150 155 160

Met Val Tyr Asn Asp Leu Ile Asn Pro Tyr Ala Asn Asp Ala Asn Ser

165 170 175

Ser Gly Cys Ile Val Thr Val Glu Thr Lys Pro Gly Pro Asp Phe Lys

180 185 190

Phe His Leu Leu Lys Pro Pro Gly Ser Met Leu Thr His Gly Ser Ile

195 200 205

Pro Ser Asp Leu Ile Pro Lys Thr Ser Ser Leu Trp Ile Gly Asn Arg

210 215 220

Tyr Trp Ser Asp Ile Thr Asp Phe Val Ile Arg Pro Phe Val Phe Gln

225 230 235 240

Ala Asn Arg His Phe Asp Phe Asn Gln Glu Thr Ala Gly Trp Ser Thr

245 250 255

Pro Arg Phe Arg Pro Ile Ser Val Thr Ile Thr Glu Gln Asn Gly Ala

260 265 270

Lys Leu Gly Ile Gly Val Ala Thr Asp Tyr Ile Val Pro Gly Ile Pro

275 280 285

Asp Gly Trp Pro Asp Thr Thr Ile Pro Gly Glu Leu Ile Pro Ala Gly

290 295 300

Asp Tyr Ala Ile Thr Asn Gly Thr Gly Asn Asp Ile Thr Thr Ala Thr

305 310 315 320

Gly Tyr Asp Thr Ala Asp Ile Ile Lys Asn Asn Thr Asn Phe Arg Gly

325 330 335

Met Tyr Ile Cys Gly Ser Leu Gln Arg Ala Trp Gly Asp Lys Lys Ile

340 345 350

Ser Asn Thr Ala Phe Ile Thr Thr Ala Thr Leu Asp Gly Asp Asn Asn

355 360 365

Asn Lys Ile Asn Pro Cys Asn Thr Ile Asp Gln Ser Lys Ile Val Val

370 375 380

Phe Gln Asp Asn His Val Gly Lys Lys Ala Gln Thr Ser Asp Asp Thr

385 390 395 400

Leu Ala Leu Leu Gly Tyr Thr Gly Ile Gly Glu Gln Ala Ile Gly Ser

405 410 415

Asp Arg Asp Arg Val Val Arg Ile Ser Thr Leu Pro Glu Thr Gly Ala

420 425 430

Arg Gly Gly Asn His Pro Ile Phe Tyr Lys Asn Ser Ile Lys Leu Gly

435 440 445

Tyr Val Ile Arg Ser Ile Asp Val Phe Asn Ser Gln Ile Leu His Thr

450 455 460

Ser Arg Gln Leu Ser Leu Asn His Tyr Leu Leu Pro Pro Asp Ser Phe

465 470 475 480

Ala Val Tyr Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Ser Trp Phe Asp Ile Gly

485 490 495

Ile Asp Ser Asp Gly Phe Ser Phe Val Gly Val Ser Gly Phe Gly Lys

500 505 510

Leu Glu Phe Pro Leu Ser Ala Ser Tyr Met Gly Ile Gln Leu Ala Lys

515 520 525

Ile Arg Leu Ala Ser Asn Ile Arg Ser Pro Met Thr Lys Leu

530 535 540

<210> 5

<211> 1929

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 5

atggagtcac caacacaccc taaaccttct aaagacaaaa ccctctcgtg gaatctcgcc 60

ttccttgtgg gcatcctgtt cacaatcgac atcggcatgg ccaacccttc gccgcatcag 120

atctacaatg tgacatgggt cattactaat gtgcagacaa acacccaggc aaatgctact 180

tctatgcttg gtactctgac tgatgcttat ccaaccctgc acgtcgacct ttgcgatctc 240

gtcggtgaca catgggagcc catcgtgctg aatccaacta atgtcaaaca tggtgccagg 300

tattcttcta gcaaatacgg gtgtaagacc actgatcgga agaaacagca acaaacctac 360

ccattctacg tgtgcccggg tcacgcaccg tccctgggtc cgaagggaac acattgtggg 420

ggagcccaag acggtttttg cgctgcttgg ggttgtgaaa caaccggaga agcctggtgg 480

aagcctacct catcttggga ctacattact gtgaaaagag gctctagcca ggataacagc 540

tgcgaaggaa agtgtaatcc cctggtgctt caattcaccc agaaaggccg gcaggcatca 600

tgggatggac cgaaaatgtg gggacttaga ctctatcgca ccggatacga ccccatcgct 660

ctgtttactg tgtcacgcca agtctccacc attactccgc cacaggccat ggggccgaat 720

ctggtcctcc ccgatcagaa gccaccctca cggcaaagtc aaaccggctc aaaagtggcc 780

acccaacggc cccagacaaa tgagtccgca cctaggtcag tggcacctac aacaatgggt 840

ccaaagcgga tcggaaccgg agacaggctc attaacctcg tgcaagggac ttatctggcc 900

cttaacgcta ctgaccccaa caagaccaag gattgctggc tctgccttgt gagcagacct 960

ccttactatg aggggatcgc cattctcgga aactactcaa atcagaccaa cccccctccg 1020

tcgtgtctga gcacccccca gcacaagctt actatttcag aagtcagtgg acagggaatg 1080

tgcatcggaa ccgtgccaaa gactcatcaa gccctttgca acaaaactca acaagggcac 1140

actggagctc attatctcgc cgcacctaac gggacctact gggcttgcaa tactggattg 1200

accccgtgta tctctatggc cgtgctgaat tggacttccg acttctgcgt gcttattgag 1260

ctttggccta gagtgacata ccatcagcct gagtacgtct atacccattt cgccaaggca 1320

gtcagattcc ggcgggagcc tatctccctg actgtggcct tgatgctcgg tggactgaca 1380

gtgggaggaa ttgcagctgg agtcggaact ggaaccaagg ccctgctcga aactgctcag 1440

ttccggcagc tgcagatggc catgcacact gacatccagg ctctggagga atcaatttca 1500

gcccttgaga aaagcttgac ctcgctgtct gaagtggtcc tccaaaacag gcgcggtttg 1560

gacatcctgt tccttcaaga gggtggtctg tgcgccgctc tcaaggagga atgctgtttc 1620

tacgctgacc ataccgggct ggtgcgcgat aacatggcaa agctgcggga acgcttgaaa 1680

cagaggcagc aactgttcga ctctcagcag ggatggttcg agggctggtt taacaagagc 1740

ccatggttta ccactctgat ctcttcaatc atgggtccac tgctcatcct gcttctgatt 1800

cttctcttcg gaccgtgtat tctcaacagg ctggtgcagt ttgtcaagga cagaatctcg 1860

gtggtccagg ccctgattct tactcagcag tatcagcaga ttaagcagta cgaccccgat 1920

cggccttga 1929

<210> 6

<211> 642

<212> БЕЛОК

<213> Вирус лейкоза кошачьих

<400> 6

Met Glu Ser Pro Thr His Pro Lys Pro Ser Lys Asp Lys Thr Leu Ser

1 5 10 15

Trp Asn Leu Ala Phe Leu Val Gly Ile Leu Phe Thr Ile Asp Ile Gly

20 25 30

Met Ala Asn Pro Ser Pro His Gln Ile Tyr Asn Val Thr Trp Val Ile

35 40 45

Thr Asn Val Gln Thr Asn Thr Gln Ala Asn Ala Thr Ser Met Leu Gly

50 55 60

Thr Leu Thr Asp Ala Tyr Pro Thr Leu His Val Asp Leu Cys Asp Leu

65 70 75 80

Val Gly Asp Thr Trp Glu Pro Ile Val Leu Asn Pro Thr Asn Val Lys

85 90 95

His Gly Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Lys Tyr Gly Cys Lys Thr Thr Asp

100 105 110

Arg Lys Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Phe Tyr Val Cys Pro Gly His

115 120 125

Ala Pro Ser Leu Gly Pro Lys Gly Thr His Cys Gly Gly Ala Gln Asp

130 135 140

Gly Phe Cys Ala Ala Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Glu Ala Trp Trp

145 150 155 160

Lys Pro Thr Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Lys Arg Gly Ser Ser

165 170 175

Gln Asp Asn Ser Cys Glu Gly Lys Cys Asn Pro Leu Val Leu Gln Phe

180 185 190

Thr Gln Lys Gly Arg Gln Ala Ser Trp Asp Gly Pro Lys Met Trp Gly

195 200 205

Leu Arg Leu Tyr Arg Thr Gly Tyr Asp Pro Ile Ala Leu Phe Thr Val

210 215 220

Ser Arg Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro Pro Gln Ala Met Gly Pro Asn

225 230 235 240

Leu Val Leu Pro Asp Gln Lys Pro Pro Ser Arg Gln Ser Gln Thr Gly

245 250 255

Ser Lys Val Ala Thr Gln Arg Pro Gln Thr Asn Glu Ser Ala Pro Arg

260 265 270

Ser Val Ala Pro Thr Thr Met Gly Pro Lys Arg Ile Gly Thr Gly Asp

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Leu Val Gln Gly Thr Tyr Leu Ala Leu Asn Ala Thr

290 295 300

Asp Pro Asn Lys Thr Lys Asp Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Arg Pro

305 310 315 320

Pro Tyr Tyr Glu Gly Ile Ala Ile Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Gln Thr

325 330 335

Asn Pro Pro Pro Ser Cys Leu Ser Thr Pro Gln His Lys Leu Thr Ile

340 345 350

Ser Glu Val Ser Gly Gln Gly Met Cys Ile Gly Thr Val Pro Lys Thr

355 360 365

His Gln Ala Leu Cys Asn Lys Thr Gln Gln Gly His Thr Gly Ala His

370 375 380

Tyr Leu Ala Ala Pro Asn Gly Thr Tyr Trp Ala Cys Asn Thr Gly Leu

385 390 395 400

Thr Pro Cys Ile Ser Met Ala Val Leu Asn Trp Thr Ser Asp Phe Cys

405 410 415

Val Leu Ile Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Gln Pro Glu Tyr

420 425 430

Val Tyr Thr His Phe Ala Lys Ala Val Arg Phe Arg Arg Glu Pro Ile

435 440 445

Ser Leu Thr Val Ala Leu Met Leu Gly Gly Leu Thr Val Gly Gly Ile

450 455 460

Ala Ala Gly Val Gly Thr Gly Thr Lys Ala Leu Leu Glu Thr Ala Gln

465 470 475 480

Phe Arg Gln Leu Gln Met Ala Met His Thr Asp Ile Gln Ala Leu Glu

485 490 495

Glu Ser Ile Ser Ala Leu Glu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Ser Glu Val

500 505 510

Val Leu Gln Asn Arg Arg Gly Leu Asp Ile Leu Phe Leu Gln Glu Gly

515 520 525

Gly Leu Cys Ala Ala Leu Lys Glu Glu Cys Cys Phe Tyr Ala Asp His

530 535 540

Thr Gly Leu Val Arg Asp Asn Met Ala Lys Leu Arg Glu Arg Leu Lys

545 550 555 560

Gln Arg Gln Gln Leu Phe Asp Ser Gln Gln Gly Trp Phe Glu Gly Trp

565 570 575

Phe Asn Lys Ser Pro Trp Phe Thr Thr Leu Ile Ser Ser Ile Met Gly

580 585 590

Pro Leu Leu Ile Leu Leu Leu Ile Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile Leu

595 600 605

Asn Arg Leu Val Gln Phe Val Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala

610 615 620

Leu Ile Leu Thr Gln Gln Tyr Gln Gln Ile Lys Gln Tyr Asp Pro Asp

625 630 635 640

Arg Pro

<210> 7

<211> 1233

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 7

aatcctagtc cacaccaaat atataatgta acttgggtaa taaccaatgt acaaactaac 60

acccaagcta acgccacctc tatgttagga accttaaccg atgcctaccc taccctacat 120

gttgacttat gtgacctagt gggagacacc tgggaaccta tagtcctaaa cccaaccaat 180

gtaaaacacg gggcacgtta ctcctcctca aaatatggat gtaaaactac agatagaaaa 240

aaacagcaac agacataccc cttttacgtc tgccccggac atgccccctc gttggggcca 300

aagggaacac attgtggagg ggcacaagat gggttttgtg ccgcatgggg atgtgagacc 360

accggagaag cttggtggaa gcccacctcc tcatgggact atatcacagt aaaaagaggg 420

agtagtcagg acaatagctg tgagggaaaa tgcaaccccc tggttttgca gttcacccag 480

aagggaagac aagcctcttg ggacggacct aagatgtggg gattgcgact ataccgtaca 540

ggatatgacc ctatcgcttt attcacggtg tcccggcagg tatcaaccat tacgccgcct 600

caggcaatgg gaccaaacct agtcttacct gatcaaaaac ccccatcccg acaatctcaa 660

acagggtcca aagtggcgac ccagaggccc caaacgaatg aaagcgcccc aaggtctgtt 720

gcccccacca ccatgggtcc caaacggatt gggaccggag ataggttaat aaatttagta 780

caagggacat acctagcctt aaatgccacc gaccccaaca aaactaaaga ctgttggctc 840

tgcctggttt ctcgaccacc ctattacgaa gggattgcaa tcttaggtaa ctacagcaac 900

caaacaaacc cccccccatc ctgcctatct actccgcaac acaaactaac tatatctgaa 960

gtatcagggc aaggaatgtg catagggact gttcctaaaa cccaccaggc tttgtgcaat 1020

aagacacaac agggacatac aggggcgcac tatctagccg cccccaacgg cacctattgg 1080

gcctgtaaca ctggactcac cccatgcatt tccatggcgg tgctcaattg gacctctgat 1140

ttttgtgtct taatcgaatt atggcccaga gtgacttacc atcaacccga atatgtgtac 1200

acacattttg ccaaagctgt caggttccga aga 1233

<210> 8

<211> 411

<212> БЕЛОК

<213> Вирус лейкоза кошачьих

<400> 8

Asn Pro Ser Pro His Gln Ile Tyr Asn Val Thr Trp Val Ile Thr Asn

1 5 10 15

Val Gln Thr Asn Thr Gln Ala Asn Ala Thr Ser Met Leu Gly Thr Leu

20 25 30

Thr Asp Ala Tyr Pro Thr Leu His Val Asp Leu Cys Asp Leu Val Gly

35 40 45

Asp Thr Trp Glu Pro Ile Val Leu Asn Pro Thr Asn Val Lys His Gly

50 55 60

Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Lys Tyr Gly Cys Lys Thr Thr Asp Arg Lys

65 70 75 80

Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Phe Tyr Val Cys Pro Gly His Ala Pro

85 90 95

Ser Leu Gly Pro Lys Gly Thr His Cys Gly Gly Ala Gln Asp Gly Phe

100 105 110

Cys Ala Ala Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Glu Ala Trp Trp Lys Pro

115 120 125

Thr Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Lys Arg Gly Ser Ser Gln Asp

130 135 140

Asn Ser Cys Glu Gly Lys Cys Asn Pro Leu Val Leu Gln Phe Thr Gln

145 150 155 160

Lys Gly Arg Gln Ala Ser Trp Asp Gly Pro Lys Met Trp Gly Leu Arg

165 170 175

Leu Tyr Arg Thr Gly Tyr Asp Pro Ile Ala Leu Phe Thr Val Ser Arg

180 185 190

Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro Pro Gln Ala Met Gly Pro Asn Leu Val

195 200 205

Leu Pro Asp Gln Lys Pro Pro Ser Arg Gln Ser Gln Thr Gly Ser Lys

210 215 220

Val Ala Thr Gln Arg Pro Gln Thr Asn Glu Ser Ala Pro Arg Ser Val

225 230 235 240

Ala Pro Thr Thr Met Gly Pro Lys Arg Ile Gly Thr Gly Asp Arg Leu

245 250 255

Ile Asn Leu Val Gln Gly Thr Tyr Leu Ala Leu Asn Ala Thr Asp Pro

260 265 270

Asn Lys Thr Lys Asp Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Arg Pro Pro Tyr

275 280 285

Tyr Glu Gly Ile Ala Ile Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Gln Thr Asn Pro

290 295 300

Pro Pro Ser Cys Leu Ser Thr Pro Gln His Lys Leu Thr Ile Ser Glu

305 310 315 320

Val Ser Gly Gln Gly Met Cys Ile Gly Thr Val Pro Lys Thr His Gln

325 330 335

Ala Leu Cys Asn Lys Thr Gln Gln Gly His Thr Gly Ala His Tyr Leu

340 345 350

Ala Ala Pro Asn Gly Thr Tyr Trp Ala Cys Asn Thr Gly Leu Thr Pro

355 360 365

Cys Ile Ser Met Ala Val Leu Asn Trp Thr Ser Asp Phe Cys Val Leu

370 375 380

Ile Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Gln Pro Glu Tyr Val Tyr

385 390 395 400

Thr His Phe Ala Lys Ala Val Arg Phe Arg Arg

405 410

<210> 9

<211> 1575

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для человека

<400> 9

atggtgccgc aggctctcct gtttgtcccc cttctggtct ttccattgtg ttttgggaaa 60

ttccctatct acacaattcc ggacaagttg ggaccctgga gcccaattga cattcatcat 120

ctcagctgcc cgaacaattt ggtcgtggag gacgaaggat gcaccaacct gtcggggttc 180

tcctacatgg aattgaaagt cggatacatc agtgccatta agatgaacgg gttcacttgc 240

acaggcgtcg tgactgaagc tgagacatac actaacttcg tgggatatgt cactaccact 300

ttcaaaagaa agcatttccg ccctactcct gatgcttgta gggccgcata caactggaag 360

atggccggtg accccagata tgaggaatca cttcacaatc cgtaccctga ctaccactgg 420

cttcggactg tcaaaaccac caaggagtca ctcgtgatca ttagtccaag tgtggctgat 480

cttgacccat acgaccggtc acttcactca cgggtgttcc cgggggggaa ttgctctggt 540

gtcgcagtgt cgtcaaccta ctgctccaca aaccacgatt acaccatttg gatgccagaa 600

aatcctcggc ttggtatgtc atgtgacatt ttcaccaatt ctcgggggaa gagggcttcc 660

aaagggtctg aaacttgcgg ctttgtcgat gagcggggct tgtataagtc acttaaaggt 720

gcttgcaaac tcaagctttg tggtgtcttg ggattgagat tgatggatgg aacttgggtc 780

gcaatgcaga cttctaacga aaccaaatgg tgccctcccg gacagcttgt gaatttgcat 840

gactttcgct ctgacgaaat tgagcatctt gtcgtcgagg agttggtcaa gaagcgggaa 900

gagtgtctgg atgctttgga atcaatcatg accaccaagt cagtgtcttt cagacggctc 960

tcacatctta ggaaattggt gccaggtttt ggaaaagcat ataccatttt caacaagacc 1020

cttatggaag ccgatgctca ctacaagtct gtcaggactt ggaatgagat catcccgtct 1080

aaagggtgtc ttagggtcgg agggagatgt catcctcatg tcaacggagt ctttttcaat 1140

ggtatcattc ttggacctga cggaaatgtc cttatccctg agatgcaatc ttccctcctc 1200

cagcaacaca tggaacttct tgtctcatcg gtcatccccc ttatgcaccc cctggctgac 1260

ccatcaaccg tgttcaagaa cggtgacgag gcagaggatt ttgtcgaggt ccaccttccc 1320

gatgtgcatg aacggatctc tggtgtcgac cttggactcc ctaactgggg aaagtatgtc 1380

cttctgtcgg caggagccct gactgccttg atgttgatta tcttcctgat gacttgttgg 1440

aggagagtca atcggtcgga gccaacacaa cataatctca gaggaacagg aagggaggtg 1500

tcagtcacac cccaaagcgg gaagatcatt tcgtcttggg agtcatacaa gagcggaggt 1560

gaaaccggac tgtga 1575

<210> 10

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Вирус бешенства

<400> 10

Met Val Pro Gln Ala Leu Leu Phe Val Pro Leu Leu Val Phe Pro Leu

1 5 10 15

Cys Phe Gly Lys Phe Pro Ile Tyr Thr Ile Pro Asp Lys Leu Gly Pro

20 25 30

Trp Ser Pro Ile Asp Ile His His Leu Ser Cys Pro Asn Asn Leu Val

35 40 45

Val Glu Asp Glu Gly Cys Thr Asn Leu Ser Gly Phe Ser Tyr Met Glu

50 55 60

Leu Lys Val Gly Tyr Ile Ser Ala Ile Lys Met Asn Gly Phe Thr Cys

65 70 75 80

Thr Gly Val Val Thr Glu Ala Glu Thr Tyr Thr Asn Phe Val Gly Tyr

85 90 95

Val Thr Thr Thr Phe Lys Arg Lys His Phe Arg Pro Thr Pro Asp Ala

100 105 110

Cys Arg Ala Ala Tyr Asn Trp Lys Met Ala Gly Asp Pro Arg Tyr Glu

115 120 125

Glu Ser Leu His Asn Pro Tyr Pro Asp Tyr His Trp Leu Arg Thr Val

130 135 140

Lys Thr Thr Lys Glu Ser Leu Val Ile Ile Ser Pro Ser Val Ala Asp

145 150 155 160

Leu Asp Pro Tyr Asp Arg Ser Leu His Ser Arg Val Phe Pro Gly Gly

165 170 175

Asn Cys Ser Gly Val Ala Val Ser Ser Thr Tyr Cys Ser Thr Asn His

180 185 190

Asp Tyr Thr Ile Trp Met Pro Glu Asn Pro Arg Leu Gly Met Ser Cys

195 200 205

Asp Ile Phe Thr Asn Ser Arg Gly Lys Arg Ala Ser Lys Gly Ser Glu

210 215 220

Thr Cys Gly Phe Val Asp Glu Arg Gly Leu Tyr Lys Ser Leu Lys Gly

225 230 235 240

Ala Cys Lys Leu Lys Leu Cys Gly Val Leu Gly Leu Arg Leu Met Asp

245 250 255

Gly Thr Trp Val Ala Met Gln Thr Ser Asn Glu Thr Lys Trp Cys Pro

260 265 270

Pro Gly Gln Leu Val Asn Leu His Asp Phe Arg Ser Asp Glu Ile Glu

275 280 285

His Leu Val Val Glu Glu Leu Val Lys Lys Arg Glu Glu Cys Leu Asp

290 295 300

Ala Leu Glu Ser Ile Met Thr Thr Lys Ser Val Ser Phe Arg Arg Leu

305 310 315 320

Ser His Leu Arg Lys Leu Val Pro Gly Phe Gly Lys Ala Tyr Thr Ile

325 330 335

Phe Asn Lys Thr Leu Met Glu Ala Asp Ala His Tyr Lys Ser Val Arg

340 345 350

Thr Trp Asn Glu Ile Ile Pro Ser Lys Gly Cys Leu Arg Val Gly Gly

355 360 365

Arg Cys His Pro His Val Asn Gly Val Phe Phe Asn Gly Ile Ile Leu

370 375 380

Gly Pro Asp Gly Asn Val Leu Ile Pro Glu Met Gln Ser Ser Leu Leu

385 390 395 400

Gln Gln His Met Glu Leu Leu Val Ser Ser Val Ile Pro Leu Met His

405 410 415

Pro Leu Ala Asp Pro Ser Thr Val Phe Lys Asn Gly Asp Glu Ala Glu

420 425 430

Asp Phe Val Glu Val His Leu Pro Asp Val His Glu Arg Ile Ser Gly

435 440 445

Val Asp Leu Gly Leu Pro Asn Trp Gly Lys Tyr Val Leu Leu Ser Ala

450 455 460

Gly Ala Leu Thr Ala Leu Met Leu Ile Ile Phe Leu Met Thr Cys Trp

465 470 475 480

Arg Arg Val Asn Arg Ser Glu Pro Thr Gln His Asn Leu Arg Gly Thr

485 490 495

Gly Arg Glu Val Ser Val Thr Pro Gln Ser Gly Lys Ile Ile Ser Ser

500 505 510

Trp Glu Ser Tyr Lys Ser Gly Gly Glu Thr Gly Leu

515 520

<210> 11

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5'-фланкирующая последовательность

<400> 11

ggcgcgccgc acc 13

<210> 12

<211> 1638

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 12

auggcugacg acggaucugu gaccacccca gaacaaggaa caauggucgg aggagugauu 60

gccgaaccca gcgcucagau gucaacugcg gcggacaugg ccuccggaaa gucgguggac 120

uccgaguggg aagccuucuu cucguuccac acguccguga acuggagcac cuccgaaacc 180

caaggaaaga uccucuucaa gcagucccug gguccccugc ugaacccgua ccuggagcac 240

aucagcaagc uguacgucgc uuggagcggg ucgaucgaag ugcgauuuuc caucucggga 300

agcggcgugu ucggugguaa acuggccgcc aucgucgugc cgccuggugu cgacccuguc 360

cagucaaccu ccaugcugca guacccgcac guccuguucg acgcaagaca aguggagcca 420

gugaucuucu ccaucccgga ccuccgcaac agccuguauc acuugauguc cgauaccgau 480

accacuuccc ucgugaucau gguguacaac gaucugauca acccguacgc caaugacucc 540

aacagcucgg guugcaucgu gaccgucgaa acgaagccug gcaucgauuu caaguuucau 600

cugcugaaac cgcccggauc caugcuuacu cacgggucca ucccuuccga ucugaucccc 660

aagagcuccu cccuguggau ugggaaccgc cacuggaccg auauuaccga uuucgugauu 720

cggccuuucg uguuccaagc caaccggcac uucgacuuca accaggagac ugccggcugg 780

ucaacuccac gguuccgccc auuggccgug acugugucgc agucaaaggg agccaagcuc 840

gggaacggca ucgccaccga cuacauugug ccuggaaucc ccgacggaug gccugauacu 900

accaucccca ccaagcugac cccuaccgga gauuacgcca ucaccuccuc cgacggcaau 960

gauauugaaa ccaagcugga auacgagaac gcggacguga uuaagaacaa caccaacuuc 1020

cgcuccaugu auaucugcgg aagccuccag agggcuuggg gcgacaagaa gaucagcaac 1080

accggguuca ucacuaccgg agugauuucu gacaacucca ucagcccuuc gaacacaauu 1140

gaccagucca agaucguggu guaccaggac aaccauguca auucggaggu ccagacuagc 1200

gacaucacuc uugccauccu gggcuacacc ggaauuggag aagaggccau aggcgccaac 1260

cgggacuccg ucgugagaau uuccgugcuu ccggaaacug gagcaagggg cggaaaucac 1320

cccaucuucu acaaaaauuc caugaagcug ggcuacguga ucuccuccau ugacguguuc 1380

aacucccaaa uccuccacac cucgcgccag cugucacuga acaacuacuu guugcccccu 1440

gacuccuucg cgguguaccg gauuauugac agcaacggau caugguucga cauugggauu 1500

gacagcgaug gguuuucauu cgugggcgug ucgucauuuc caaagcugga guuuccgcug 1560

uccgccucau acaugggcau ccagcucgca aagauccggc uggcguccaa cauccgguca 1620

uccaugacua agcuguga 1638

<210> 13

<211> 1629

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 13

augacugccc cggaacaagg aacgaugguc ggaggaguga uugcagaacc gucagcacag 60

auguccaccg cugccgacau ggccacugga aagagcgugg acuccgaaug ggaagccuuc 120

uucuccuucc acacuucggu caacuggucg acuagcgaaa cccaggggaa gauuuuguuc 180

aagcaauccc ucggcccucu gcugaacccc uaccuggagc aucuggccaa gcuguacgug 240

gcauggucgg gcagcaucga agugcgcuuu agcauuuccg gcuccggagu guucggggga 300

aagcuugcug ccauugucgu gccgccagga guggacccgg ugcaguccac uucuaugcuc 360

caauacccgc auguccuguu cgacgccaga cagguggagc cugugaucuu uugccugccg 420

gaucucaggu ccacccugua ucaccucaug uccgacaccg acaccaccuc gcucgugauc 480

augguguaca acgaccugau caaccccuac gcuaacgacg ccaacagcuc agguugcauu 540

gugacugucg aaaccaagcc aggcccugac uucaaguuuc auuugcugaa gccgcccggu 600

uccaugcuga cccacggcuc gaucccaucc gaccugaucc ccaagacgag cucccugugg 660

aucggaaacc gcuacugguc cgauauuacc gacuucguga ucagaccauu cguguuccaa 720

gccaaccgcc auuucgacuu caaccaggaa accgcaggau ggucgacccc ucgauuccgc 780

ccgauuucag ugaccaucac cgaacagaac ggcgcgaagc ugggaauugg cguggcgacc 840

gacuacaucg ugccgggaau cccggaugga uggccugaua cgaccauucc cggggagcug 900

aucccugccg gggacuacgc caucaccaac gguacuggaa acgacaucac cacugccacc 960

gguuacgaca ccgccgacau cauaaagaac aacaccaacu ucagaggaau guacauuugc 1020

ggcucccugc aacgcgcuug gggugacaaa aagaucucga acacugccuu caucacaaca 1080

gcgacucugg acggcgauaa caacaacaag aucaauccuu guaauaccau cgaccagucc 1140

aaaaucgugg uguuccagga uaaccacgug ggaaagaagg cgcagaccuc cgacgacacu 1200

cuggcgcugc uuggcuacac cgggaucggc gagcaggcca uuggaagcga ucgggaucgg 1260

gucgugcgga ucuccacccu ccccgagacu ggagcaaggg gaggcaacca ccccaucuuu 1320

uacaaaaaca gcauuaagcu cggauacguc auccgcucca ucgauguguu caacucucaa 1380

auccugcaca cuucgcggca gcugucccug aaccacuacc ucuugccgcc cgacuccuuc 1440

gccgucuacc ggaucauuga uucgaacggg agcugguucg acaucggcau ugauagcgau 1500

ggcuucucgu uugugggcgu gucgggcuuc gggaagcugg aguucccacu gagcgccuca 1560

uacaugggua uccagcuggc caagaucagg cuggccucca acauccgcuc accuaugacu 1620

aagcuguga 1629

<210> 14

<211> 1929

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 14

auggagucac caacacaccc uaaaccuucu aaagacaaaa cccucucgug gaaucucgcc 60

uuccuugugg gcauccuguu cacaaucgac aucggcaugg ccaacccuuc gccgcaucag 120

aucuacaaug ugacaugggu cauuacuaau gugcagacaa acacccaggc aaaugcuacu 180

ucuaugcuug guacucugac ugaugcuuau ccaacccugc acgucgaccu uugcgaucuc 240

gucggugaca caugggagcc caucgugcug aauccaacua augucaaaca uggugccagg 300

uauucuucua gcaaauacgg guguaagacc acugaucgga agaaacagca acaaaccuac 360

ccauucuacg ugugcccggg ucacgcaccg ucccuggguc cgaagggaac acauuguggg 420

ggagcccaag acgguuuuug cgcugcuugg gguugugaaa caaccggaga agccuggugg 480

aagccuaccu caucuuggga cuacauuacu gugaaaagag gcucuagcca ggauaacagc 540

ugcgaaggaa aguguaaucc ccuggugcuu caauucaccc agaaaggccg gcaggcauca 600

ugggauggac cgaaaaugug gggacuuaga cucuaucgca ccggauacga ccccaucgcu 660

cuguuuacug ugucacgcca agucuccacc auuacuccgc cacaggccau ggggccgaau 720

cugguccucc ccgaucagaa gccacccuca cggcaaaguc aaaccggcuc aaaaguggcc 780

acccaacggc cccagacaaa ugaguccgca ccuaggucag uggcaccuac aacaaugggu 840

ccaaagcgga ucggaaccgg agacaggcuc auuaaccucg ugcaagggac uuaucuggcc 900

cuuaacgcua cugaccccaa caagaccaag gauugcuggc ucugccuugu gagcagaccu 960

ccuuacuaug aggggaucgc cauucucgga aacuacucaa aucagaccaa ccccccuccg 1020

ucgugucuga gcacccccca gcacaagcuu acuauuucag aagucagugg acagggaaug 1080

ugcaucggaa ccgugccaaa gacucaucaa gcccuuugca acaaaacuca acaagggcac 1140

acuggagcuc auuaucucgc cgcaccuaac gggaccuacu gggcuugcaa uacuggauug 1200

accccgugua ucucuauggc cgugcugaau uggacuuccg acuucugcgu gcuuauugag 1260

cuuuggccua gagugacaua ccaucagccu gaguacgucu auacccauuu cgccaaggca 1320

gucagauucc ggcgggagcc uaucucccug acuguggccu ugaugcucgg uggacugaca 1380

gugggaggaa uugcagcugg agucggaacu ggaaccaagg cccugcucga aacugcucag 1440

uuccggcagc ugcagauggc caugcacacu gacauccagg cucuggagga aucaauuuca 1500

gcccuugaga aaagcuugac cucgcugucu gaaguggucc uccaaaacag gcgcgguuug 1560

gacauccugu uccuucaaga ggguggucug ugcgccgcuc ucaaggagga augcuguuuc 1620

uacgcugacc auaccgggcu ggugcgcgau aacauggcaa agcugcggga acgcuugaaa 1680

cagaggcagc aacuguucga cucucagcag ggaugguucg agggcugguu uaacaagagc 1740

ccaugguuua ccacucugau cucuucaauc auggguccac ugcucauccu gcuucugauu 1800

cuucucuucg gaccguguau ucucaacagg cuggugcagu uugucaagga cagaaucucg 1860

gugguccagg cccugauucu uacucagcag uaucagcaga uuaagcagua cgaccccgau 1920

cggccuuga 1929

<210> 15

<211> 1233

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 15

aauccuaguc cacaccaaau auauaaugua acuuggguaa uaaccaaugu acaaacuaac 60

acccaagcua acgccaccuc uauguuagga accuuaaccg augccuaccc uacccuacau 120

guugacuuau gugaccuagu gggagacacc ugggaaccua uaguccuaaa cccaaccaau 180

guaaaacacg gggcacguua cuccuccuca aaauauggau guaaaacuac agauagaaaa 240

aaacagcaac agacauaccc cuuuuacguc ugccccggac augcccccuc guuggggcca 300

aagggaacac auuguggagg ggcacaagau ggguuuugug ccgcaugggg augugagacc 360

accggagaag cuugguggaa gcccaccucc ucaugggacu auaucacagu aaaaagaggg 420

aguagucagg acaauagcug ugagggaaaa ugcaaccccc ugguuuugca guucacccag 480

aagggaagac aagccucuug ggacggaccu aagauguggg gauugcgacu auaccguaca 540

ggauaugacc cuaucgcuuu auucacggug ucccggcagg uaucaaccau uacgccgccu 600

caggcaaugg gaccaaaccu agucuuaccu gaucaaaaac ccccaucccg acaaucucaa 660

acagggucca aaguggcgac ccagaggccc caaacgaaug aaagcgcccc aaggucuguu 720

gcccccacca ccaugggucc caaacggauu gggaccggag auagguuaau aaauuuagua 780

caagggacau accuagccuu aaaugccacc gaccccaaca aaacuaaaga cuguuggcuc 840

ugccugguuu cucgaccacc cuauuacgaa gggauugcaa ucuuagguaa cuacagcaac 900

caaacaaacc cccccccauc cugccuaucu acuccgcaac acaaacuaac uauaucugaa 960

guaucagggc aaggaaugug cauagggacu guuccuaaaa cccaccaggc uuugugcaau 1020

aagacacaac agggacauac aggggcgcac uaucuagccg cccccaacgg caccuauugg 1080

gccuguaaca cuggacucac cccaugcauu uccauggcgg ugcucaauug gaccucugau 1140

uuuugugucu uaaucgaauu auggcccaga gugacuuacc aucaacccga auauguguac 1200

acacauuuug ccaaagcugu cagguuccga aga 1233

<210> 16

<211> 1575

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для человека

<400> 16

auggugccgc aggcucuccu guuugucccc cuucuggucu uuccauugug uuuugggaaa 60

uucccuaucu acacaauucc ggacaaguug ggacccugga gcccaauuga cauucaucau 120

cucagcugcc cgaacaauuu ggucguggag gacgaaggau gcaccaaccu gucgggguuc 180

uccuacaugg aauugaaagu cggauacauc agugccauua agaugaacgg guucacuugc 240

acaggcgucg ugacugaagc ugagacauac acuaacuucg ugggauaugu cacuaccacu 300

uucaaaagaa agcauuuccg cccuacuccu gaugcuugua gggccgcaua caacuggaag 360

auggccggug accccagaua ugaggaauca cuucacaauc cguacccuga cuaccacugg 420

cuucggacug ucaaaaccac caaggaguca cucgugauca uuaguccaag uguggcugau 480

cuugacccau acgaccgguc acuucacuca cggguguucc cgggggggaa uugcucuggu 540

gucgcagugu cgucaaccua cugcuccaca aaccacgauu acaccauuug gaugccagaa 600

aauccucggc uugguauguc augugacauu uucaccaauu cucgggggaa gagggcuucc 660

aaagggucug aaacuugcgg cuuugucgau gagcggggcu uguauaaguc acuuaaaggu 720

gcuugcaaac ucaagcuuug uggugucuug ggauugagau ugauggaugg aacuuggguc 780

gcaaugcaga cuucuaacga aaccaaaugg ugcccucccg gacagcuugu gaauuugcau 840

gacuuucgcu cugacgaaau ugagcaucuu gucgucgagg aguuggucaa gaagcgggaa 900

gagugucugg augcuuugga aucaaucaug accaccaagu cagugucuuu cagacggcuc 960

ucacaucuua ggaaauuggu gccagguuuu ggaaaagcau auaccauuuu caacaagacc 1020

cuuauggaag ccgaugcuca cuacaagucu gucaggacuu ggaaugagau caucccgucu 1080

aaaggguguc uuagggucgg agggagaugu cauccucaug ucaacggagu cuuuuucaau 1140

gguaucauuc uuggaccuga cggaaauguc cuuaucccug agaugcaauc uucccuccuc 1200

cagcaacaca uggaacuucu ugucucaucg gucauccccc uuaugcaccc ccuggcugac 1260

ccaucaaccg uguucaagaa cggugacgag gcagaggauu uugucgaggu ccaccuuccc 1320

gaugugcaug aacggaucuc uggugucgac cuuggacucc cuaacugggg aaaguauguc 1380

cuucugucgg caggagcccu gacugccuug auguugauua ucuuccugau gacuuguugg 1440

aggagaguca aucggucgga gccaacacaa cauaaucuca gaggaacagg aagggaggug 1500

ucagucacac cccaaagcgg gaagaucauu ucgucuuggg agucauacaa gagcggaggu 1560

gaaaccggac uguga 1575

<---

Настоящее изобретение относится к новым вакцинам против кошачьего калицивируса. Предложена вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного кошачьим калицивирусом (FCV). Вакцина содержит частицу РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE), которая кодирует антиген FCV, представляющий капсидный белок, и фармацевтически приемлемый носитель. Вакцина может быть использована для иммунизации субъекта из семейства кошачьих против патогенного FCV. Предложен способ иммунизации кошачьего против патогенного FCV, включающий введение кошачьему иммунологически эффективного количества предложенной вакцины. Вакцина стимулирует выработку более широко реактивных вирус-нейтрализующих (VN) антител и, соответственно, обеспечивает лучшую защиту от новых полевых изолятов. 3 н. и 22 з.п. ф-лы, 8 табл., 4 пр.

1. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного кошачьим калицивирусом (FCV), содержащая частицу РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE), которая кодирует антиген FCV, и фармацевтически приемлемый носитель, где антиген FCV представляет капсидный белок.

2. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по п. 1, где капсидный белок выбран из группы, состоящей из капсидного белка F9-подобного штамма FCV и капсидного белка вирулентного системного FCV (VS-FCV).

3. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по п. 2, где капсидный белок представляет капсидный белок VS-FCV.

4. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по п. 2, где капсидный белок представляет капсидный белок F9-подобного штамма FCV.

5. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по пп. 1, 2, 3 или 4, которая содержит дополнительную частицу РНК-репликона альфа-вируса VEE, которая кодирует второй антиген FCV, где второй антиген FCV происходит из другого штамма FCV, чем тот, из которого происходит капсидный белок FCV.

6. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по п. 3, которая содержит дополнительную частицу РНК-репликона альфа-вируса VEE, которая кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV.

7. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по п. 3, где частица РНК-репликона альфа-вируса VEE также кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV.

8. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по пп. 2, 3, 5, 6 или 7, где капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2.

9. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по пп. 2, 4, 5, 6, 7 или 8, где капсидный белок F9-подобного штамма FCV содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4.

10. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по любому из пп. 1-9, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген, отличный от FCV, для индукции защитного иммунитета к кошачьему патогену, отличному от FCV.

11. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по любому из пп. 1-10, которая дополнительно содержит частицу РНК-репликона альфа-вируса VEE, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белковый антиген, который происходит из антигена, отличного от FCV.

12. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FCV по любому из пп. 1-11, которая представляет собой неадъювантную вакцину.

13. Способ иммунизации субъекта из семейства кошачьих против патогенного FCV, включающий введение субъекту из семейства кошачьих иммунологически эффективного количества вакцины по любому из пп. 1-12.

14. Вакцина для иммунизации субъекта из семейства кошачьих против патогенного FCV, содержащая частицу РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE), которая кодирует антиген FCV, и фармацевтически приемлемый носитель, где антиген FCV представляет капсидный белок.

15. Вакцина по п. 14, где капсидный белок выбран из группы, состоящей из капсидного белка F9-подобного штамма FCV и капсидного белка вирулентного системного FCV (VS-FCV).

16. Вакцина по п. 15, где капсидный белок представляет капсидный белок VS-FCV.

17. Вакцина по п.15, где капсидный белок представляет капсидный белок F9-подобного штамма FCV.

18. Вакцина по пп. 14, 15, 16 или 17, которая содержит дополнительную частицу РНК-репликона альфа-вируса VEE, которая кодирует второй антиген FCV, где второй антиген FCV происходит из другого штамма FCV, чем тот, из которого происходит капсидный белок FCV.

19. Вакцина по п. 16, которая содержит дополнительную частицу РНК-репликона альфа-вируса VEE, которая кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV.

20. Вакцина по п. 16, где частица РНК-репликона альфа-вируса VEE также кодирует капсидный белок F9-подобного штамма FCV.

21. Вакцина по пп. 15, 16, 18, 19 или 20, где капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2.

22. Вакцина по пп.15, 17, 18, 19, 20 или 21, где капсидный белок F9-подобного штамма FCV содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4.

23. Вакцина по любому из пп. 14-22, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген, отличный от FCV, для индукции защитного иммунитета к кошачьему патогену, отличному от FCV.

24. Вакцина по любому из пп. 14-23, которая дополнительно содержит частицу РНК-репликона альфа-вируса VEE, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белковый антиген, который происходит из антигена, отличного от FCV.

25. Вакцина по любому из пп. 14-24, которая представляет собой неадъювантную вакцину.