СРЕДСТВО ДЛЯ УХОДА ЗА ПОЛОСТЬЮ РТА, СОДЕРЖАЩЕЕ ГЕКСАПЕПТИД И ХЛОРГЕКСИДИН Российский патент 2023 года по МПК A61K8/43 A61K8/64 A61K31/155 A61K38/08 A61P1/02 A61Q11/00 

Область изобретения

Изобретение относится к области средств гигиены полости рта, в частности к средству для ухода за полостью рта, содержащему гексапептид и хлоргексидин.

Сведения о предшествующем уровне техники

Полость рта (лат. cavum oris) представляет собой начальный участок переднего отдела пищеварительной системы, функция которого состоит в приеме пищи и ее первичной обработке. Ротовая полость заселена нормальной микрофлорой, но накопление патогенов, преимущественно грамотрицательных бактерий, в поддесневой зубной биопленке может индуцировать воспаление пародонта (ткани, окружающей зуб), известное как пародонтит. В индукции воспаления участвуют молекулярные структуры патогена, преимущественно липополисахарид стенки грамотрицательных бактерий (ЛПС). ЛПС вызывает появление медиаторов воспаления, в том числе фактора некроза опухоли (ФНО)-α, который стимулирует образование и созревание остеокластов, опосредующих деструкцию альвеолярной кости, а также выработку матриксных металлопротеиназ, разрушающих коллагеновые волокна в тканях пародонта. Graves D. J Periodontol. 2008, 79(8 Suppl):1585-91. Jiang F et al. Am J Transl Res. 2021, 13(8):9224-9232. Распространенность пародонтита в человеческой популяции составляет от 11% до 42% в зависимости от территории проживания, возраста пациента и наличия сопутствующих хронических заболеваний. Kwon T et al. Int Dent J. 2021, 71(6):462-476. Таким образом, существует необходимость в средствах для ухода за полостью рта, препятствущих развитию воспаления пародонта, вызываемого действием патогеной микрофлоры.

Патент MD1413G2 раскрывает способ санации полости рта с целью усиления ранозаживления после замены металлических конструкций однородными конструкциями, заключающийся в последовательном введении 0,1% раствора даларгина, 0,25-0,5 г метронидазола и 0,05% раствора хлоргексидина.

Патент РФ № 2221547С1 раскрывает средство, защищающее кожные покровы от неблагоприятных воздействий повреждающих факторов, содержащее даларгин в концентрации от 0,001 до 0,015 мас.%.

Мы обнаружили, что гексапептид H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH и хлоргексидин синергически эффективны в подавлении воспаления в полости рта, вызываемого липополисахаридом грамотрицательных бактерий, причем эффект синергизма достигается при содержании гексапептида от 0,016 до 0,099 мас.% и содержании хлоргексидина 0,2-0,25 мас.% в составе средства для ухода за полостью рта.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к средству для ухода за полостью рта, включающему гексапептид формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I), хлоргексидин и воду при следующем содержании ингредиентов, мас.%:

Гексапептид (I) 0,016-0,099 Хлоргексидин 0,20-0,25 Вода до 100

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ухода за полостью рта с использованием средства настоящего изобретения, включающему введение 0,2-1,0 мл указанного средства в полость рта субъекта, нуждающегося в этом.

Технический результат настоящего изобретения состоит в синергическом снижении воспаления в полости рта при совместном применении гексапептида формулы (I) и хлогрегксидина в составе средства настоящего изобретения.

Гексапептид формулы (I) имеет брутто-формулу C₃₅H₅₁N₉O₈, молекулярную массу 725,84 дальтон и регистрационный номер CAS 81733-79-1 в качестве идентификатора. Предпочтительно, гексапептид формулы (I) используется в виде ацетата, имеющего формулу C₃₅H₅₁N₉O₈ x 2C₂H₄O₂. Гексапептид формулы (I) может быть получен любым способом известным из уровня техники, в частности, твердофазным синтезом. Гексапептид формулы (I) и его соли и сольваты коммерчески доступны, например, в каталоге Bachem № 4030569.0100 (https://shop.bachem.com/4030569.html).

Хлоргексидин имеет брутто-формулу C₂₂H₃₀Cl₂N₁₀, молекулярную массу 505,45 дальтон и регистрационный номер CAS 55-56-1 в качестве идентификатора. Предпочтительно, хлоргексидин используется в виде биглюконата. Хлоргексидин коммерчески доступен, например, в каталоге Sigma-Aldrich №C9394.

Средство настоящего изобретения может быть произведено в виде раствора, эмульсии, геля, пасты или пены. Предпочтительной формой средства является гель.

Средство настоящего изобретения может содержать другие активные ингредиенты, а также вспомогательные вещества для придания ему необходимых физико-химических свойств. Неэксклюзивные примеры вспомогательных веществ включают очищенную воду, поверхностно-активные вещества, стабилизирующие агенты, гелеобразователи, эмульгаторы, эфирные масла, экстракты растений, буферные компоненты для поддержания значения рН на уровне 5,0-8,0 и отдушки (левоментол).

Неэксклюзивные примеры гелеобразователей включают карбополы (карбопол 940), карбомеры, альгинаты, пектины и производные целлюлозы (гидроксипропилцеллюлоза).

В способе ухода за полостью рта средство настоящего изобретения вводится один раз или несколько раз в день, после еды, один день или несколко дней в количестве 0,2-1,0 мл субъекту, нуждающемуся в этом с целью снижения воспаления пародонта.

Следующие примеры демонстрируют изобретение. Примеры иллюстрируют изобретение и не предназначены для ограничения объема изобретения тем или иным образом.

Пример 1

Пример иллюстрирует приготовление средства для ухода за полостью рта в виде раствора.

Таблица 1. Состав средства для ухода за полостью рта

Состав Содержание, мас. % Гексапептид (I) 0,016-0,099 Хлоргексидин 0,2-0,25 Вода очищенная до 100,0

Средство для ухода за полостью рта приготавливается растворением ингредиентов в воде очищенной в пропорциях, указанных в таблице 1. Полученный раствор помещают во флаконы с номинальным объемом 10 мл. Уход за полостью рта у субъекта с пародонтитом осуществляется следующим образом: полость рта промывают 0,5-1,0 мл средства после еды, два раза в день, пять дней подряд.

Пример 2

Пример иллюстрирует приготовление средства для ухода за полостью рта в виде геля.

Таблица 2. Состав средства для ухода за полостью рта

Состав Содержание, мас. % Гексапептид (I) 0,016-0,099 Хлоргексидин 0,2-0,25 Карбопол 940 1,0 Вода очищенная до 100,0

Средство для ухода за полостью рта приготавливается растворением ингредиентов в воде очищенной в пропорциях, указанных в таблице 2 с последующим добавлением раствора NaOH до рН 6,5-7,0. Полученный гель помещают во флаконы с номинальным объемом 10 мл. Уход за полостью рта у субъекта с пародонтитом осуществляется следующим образом: гель наносят на десны в количестве 0,2-0,5 мл после еды, два раза в день, семь дней подряд.

Пример 3.

Пример иллюстрирует синергическую эффективность средства настоящего изобретения в снижении воспаления.

Мышей-самцов C57Bl/6 рандомизировали в семь групп по 5 животных в каждой. Животным в первой группе вводили в полость рта физ. раствор (контроль), а в шести остальных группах раствор гексапептида (I) (ГП), раствор хлоргексидина (ХГ) или раствор гексапептида (I) и хлоргексидина (ГП + ХГ) из примера 1 с содержанием ГП и ХГ как указано в таблице 3, один раз в день, в течение 3-х дней, после чего животные получали однократно инъекцию липополисахарида E.coli (ЛПС, 300 мкг/мышь) в десну. Через два часа после инъекции образцы ткани десны забирали и определяли экспрессию мРНК провоспалительного фактора некроза опухоли α (ФНО-α) методом ПЦР с использованием наборов РНК-экстран (Синтол, Москва, Россия) и REVERTA-L (АмплиСенс, Москва, Россия) в соответствии с инструкциями производителя. Для определения экспрессии мРНК ФНО-α использовали праймеры: 5’-TCT GTC TCT CAC CTG CTC TG-3’ (прямой), 5’-GGT TCT CAG ATG TGT CAC GA-3’ (обратный) и ROX-GAA TGG ATG GGC TAC ATA AGT TAC G-BHQ2 (зонд). Данные нормализовали по гену домашнего хозяйства GAPDH. Результаты представлены в Таблице 3 как среднее кратное изменение экспрессии мРНК ФНО-α ± стандартная ошибка среднего, рассчитанное путем деления индивидуального уровня экспрессии у мышей, получавших средство для ухода за полостью рта, на средний уровень экспрессии у интактных животных. Индекс снижения воспаления оценивали в % по формуле: Δ = мРНК ФНО-α (препарат) – мРНК ФНО-α (физ. раствор).

Таблица 3. Эффект средства настоящего изобретения на экспрессию мРНК ФНО-α.

Препарат Содержание, мас.% мРНК ФНО-α, усл.ед. мРНК ФНО-α, % Δ, % ГП ХГ Физ. раствор 0 0 79,2 ± 13,1 100,0 0 ГП 0,016 0 55,0 ± 11,9* 69,4 -30,6 0,099 0 49,7 ± 9,4* 62,8 -37,2 ХГ 0 0,20 63,2 ± 8,2* 79,8 -20,2 0 0,25 61,1 ± 6,9* 77,1 -22,9 ГП + ХГ 0,016 0,20 27,6 ± 4,2* 34,8 -65,2 0,099 0,25 19,1 ± 5,6* 24,1 -75,9

Статистически значимое отличие от физ. раствора: *p<0,05.

Таблица 3 показывает, что инъекция липополисахарида в десну вызывает острое воспаление, на что указывает 79-кратное повышение экспрессии мРНК ФНО-α в ткани десны относительно экспрессии ФНО-α у интактных животных. Кроме того, таблица 3 показывает, что введение растворов настоящего изобретения достоверно снижает экспрессию ФНО-α у животных, индуцированных липополисахаридом, причем эффект совместного введения гексапептида и хлоргексидина выше, чем сумма эффектов отдельно гексапептида и отдельно хлоргексидина, что указывает на синергизм противовоспалительного действия гексапептида и хлоргексидина. Композиция 0,016 мас.% гексапептида (I) и 0,2 мас.% хлоргексидина обеспечили снижение экспрессии мРНК ФНО-α на 65,2% по сравнению с контролем, тогда как гексапептид (I) отдельно (0,016 мас.%) снизил указанную экспрессию на 30,6%, а хлоргексидин (0,2 мас.%) отдельно на 20,2%, т.е., совместный эффект гексапептида (I) и хлоргексидина в составе средства настоящего изобретения (снижение мРНК ФНО-α на 65,2%) превышает сумму эффектов отдельных компонентов (снижение мРНК ФНО-α на 50,8%=30,6+20,2). Композиция 0,099 мас.% гексапептида (I) и 0,25 мас.% хлоргексидина в составе средства настоящего изобретения обеспечили снижение экспрессии мРНК ФНО-α на 75,9% по сравнению с контролем, тогда как 0,099 мас.% гексапептида (I) и 0,25 мас.% хлоргексидина отдельно снизили указанную экспрессию на 37,2% и на 22,9%, соответственно, (суммарное снижение мРНК ФНО-α на 60,1%=37,2+22,9), т.е., совместный эффект гексапептида (I) и хлоргексидина превышает сумму эффектов отдельных компонентов. Таким образом, технический результат, а именно синергическое снижение воспаления в полости рта при совместном применении гексапептида (I) и хлоргексидина в составе средства настоящего изобретения достигается во всем интервале содержаний гексапептида (I) и хлоргексидина гексапептида, указанном в настоящем изобретении.

Пример 4

Пример иллюстрирует эффективность средства настоящего изобретения в снижении воспаления.

Пять добровольцев с пародонтитом получали средство для ухода за полостью рта настоящего изобретения (Средство) в виде геля из примера 2, в количестве 1,0 мл, а пять добровольцев гель, но без гексапептида (I) и хлоргексидина (Контроль), в том же количестве, два раза в день после еды, в течение двух недель. Воспаление в полости рта оценивалось с использованием так называемого десневого индекса согласно Löe H. J Periodontol. 1967, 38(6):Suppl:610-6 до начала использования средства (До) и через две недели после начала использования средства (После). Результаты представлены в таблице 4 как среднее значение десневого индекса ± ошибка среднего в группах до и после применения соответствующих средств.

Таблица 4. Эффект средства настоящего изобретения на десневой индекс воспаления

Десневой индекс воспаления, усл.ед. До После Контроль 1,8 ± 0,4 1,8 ± 0,4 Средство 2,0 ± 0,3 0,6 ± 0,2*

Статистически значимое отличие от Контроля: *p<0,05.

Таблица 4 показывает, что введение средства настоящего изобретения в виде геля в ротовую полость субъекта с пародонтитом статистически значимо снижает десневой индекс воспаления по сравнению с контролем. Таким образом, средство для ухода за полостью рта эффективно для снижения воспаления у субъекта, нуждающегося в этом.

Группа изобретений относится к области средств гигиены полости рта и способов подавления воспаления в полости рта. Предлагается средство для ухода за полостью рта, включающее гексапептид формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I), хлоргексидин и воду при следующем содержании ингредиентов, мас.%: гексапептид (I) 0,016-0,099, хлоргексидин 0,20-0,25, вода - до 100. Предлагается также способ ухода за полостью рта, включающий введение 0,2-1,0 мл указанного выше средства в полость рта субъекта, нуждающегося в этом. Технический результат: синергическое снижение воспаления в полости рта при совместном применении гексапептида (I) и хлоргексидина в составе средства для ухода за полостью рта при содержании гексапептида от 0,016 до 0,099 мас.% и содержании хлоргексидина 0,2-0,25 мас.%. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 4 пр.

1. Средство для ухода за полостью рта, включающее гексапептид формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I), хлоргексидин и воду при следующем содержании ингредиентов, мас.%:

Гексапептид (I) 0,016-0,099 Хлоргексидин 0,20-0,25 Вода до 100

2. Способ ухода за полостью рта с использованием средства по п.1, включающий введение 0,2-1,0 мл средства по п.1 в полость рта субъекта, нуждающегося в этом.