L718 И/ИЛИ L792 МУТАНТНЫЙ ИНГИБИТОР РЕЗИСТЕНТНОГО К ЛЕЧЕНИЮ EGFR Российский патент 2023 года по МПК A61K31/519 A61P35/00 

Область техники

[0001]

Настоящее изобретение относится к противоопухолевому агенту для лечения злокачественных новообразований, содержащему резистентный к лечению мутантный рецептор эпидермального фактора роста экзона 18 и/или экзона 20 (далее именуемый «EGFR»).

Предпосылки изобретения

[0002]

EGFR представляет собой тирозинкиназу рецепторного типа, которая выполняет свою физиологическую функцию в нормальной ткани, связываясь с эпидермальным фактором роста (далее также называемым EGF), который является лигандом и способствует ингибированию роста и апоптоза в эпителиальных тканях (НПЛ 1). Кроме того, соматическая мутация гена EGFR известна как ген, вызывающий злокачественное новообразование; например, EGFR, в котором кодоны с 746 по 750 в экзоне 19 удалены (в дальнейшем также называемые «мутацией с делецией экзона 19»), и EGFR, в котором лейцин, кодируемый кодоном 858 в экзоне 21, мутирован в аргинин (далее также именуемый как «мутация L858R») постоянно индуцирует EGF-независимую киназную активность и способствует росту и выживанию раковых клеток (НПЛ 2). Эти мутации наблюдаются, например, в 30-50% случаев немелкоклеточного рака легкого в Восточной Азии. Мутации также наблюдаются примерно в 10% случаев немелкоклеточного рака легкого в Европе и США и считаются одной из причин рака (НПЛ 3).

[0003]

Таким образом, активно ведутся исследования и разработки ингибитора EGFR в качестве противоопухолевого агента, который используется для лечения различных видов рака легких с положительным результатом мутации EGFR (НПЛ 2 и НПЛ 4). В качестве терапевтических агентов в отношении EGFR-позитивного мутантного рака легких с делецией экзона 19 и мутантного L858R использовались гефитиниб, эрлотиниб и афатиниб. 90% мутации EGFR составляют мутация с делецией экзона 19 и мутация L858R. Кроме того, было известно возникновение приобретенной резистентности в процессе лечения с использованием этих агентов, и 50% ее вызвано мутацией резистентности EGFR, в которой кодон 790 экзона 20 заменен с треонина на метионин (в дальнейшем также называемая «мутацией T790M»). Для лечения рака легких с этой мутацией в качестве терапевтического средства использовался осимертиниб. Таким образом, лечение с использованием ингибиторов EGFR пациентов с раком легких, имеющих основные мутации EGFR, находится в процессе разработки.

Список цитированной литературы

Патентная литература

[0004]

[ПТЛ 1]

WO2015/175632A1

[ПТЛ 2]

WO2015/025936A1

Непатентная литература

[0005]

[НПЛ 1]

Nat. Rev. Cancer, vol. 6, pp. 803-812 (2006)

[НПЛ 2]

Nature Medicine, vol. 19, pp. 1389-1400 (2013)

[НПЛ 3]

Nat. Rev. Cancer, vol. 7, pp. 169-181 (2007)

[НПЛ 4]

Clin. Cancer Res., vol. 24, pp. 3097-3107 (2018)

Сущность изобретения

Техническая задача

[0006]

В настоящее время разрабатываются методы лечения с использованием ингибиторов EGFR пациентов с раком легких, имеющих основные мутации EGFR. В то же время известно также о наличии пациентов, резистентных к лечению осимертинибом. Сообщается, что некоторыми причинами этого являются мутации гена EGFR (НПЛ 4). Было подтверждено, например, что, резистентным к лечению осимертинибом является рак легкого, имеющий в дополнение к мутации с делецией экзона 19 или мутации L858R, обе из которых являются мутациями de novo, и мутацию T790M, которая является мутацией приобретенной резистентности, точечной мутацией, при которой лейцин, кодируемый кодоном 718 в экзоне 18 заменен произвольной аминокислотой (далее также называемой «мутация L718X») или точечной мутацией, при которой лейцин, кодируемый кодоном 792 в экзоне 20, был заменен произвольной аминокислотой (далее также называемой «мутация L792X»). Предполагается, что аминокислотная замена, вызванная мутацией L718X или L792X, вызывает стерические затруднения и снижение гидрофобного связывания, тем самым предотвращая связывание EGFR с осимертинибом (НПЛ 4). Соответственно, существует потребность в разработке ингибиторов, обладающих высокой ингибирующей активностью в отношении EGFR, имеющих гибридную мутацию из активной мутации de novo, мутации приобретенной резистентности T790M и мутации L718X или мутации L792X.

[0007]

Таким образом, предполагается, что разработка лекарств, обладающих высокой ингибирующей активностью в отношении EGFR, имеющего гибридную мутацию, включающую L718X или L792X, сделает возможным проявление противоопухолевых эффектов в отношении рака легких, резистентного к лечению осимертинибом, и, как ожидается, будет способствовать продлению жизни и улучшению качества жизни мутантных EGFR-положительных онкологических пациентов, для которых лечение не было разработано. Кроме того, ожидается, что лекарство, обладающее высокой ингибирующей активностью в отношении T790M, который представляет собой приобретенную мутацию резистентности в отношении лечения с использованием ингибиторов EGFR, снизит частоту проявления приобретенной резистентности в процессе лечения с использованием ингибиторов EGFR в отношении экзона 19 или мутантного экзона 21 EGFR, который является мутацией de novo; и поэтому ожидается, что он будет способствовать продлению жизни больных раком.

[0008]

При таких обстоятельствах целью настоящего изобретения является предоставление ингибитора, который обладает высокой ингибирующей активностью в отношении EGFR, имеющего мутации L718 и L792, являющиеся мутацией, резистентной к лечению осимертинибом, и для которого терапевтические эффекты ранее известных ингибиторов EGFR являются недостаточными.

Решение задачи

[0009]

Авторы настоящего изобретения провели обширное исследование и обнаружили, что ингибиторы EGFR, традиционно вводимые для лечения, обладают плохой ингибирующей активностью в отношении гибридного мутантного EGFR, содержащего мутации L718 и L792, в дополнение к активной мутации и мутации T790M приобретенной резистентности. Кроме того, авторы настоящего изобретения провели обширные исследования, начиная со сравнения сокристаллических структур соединений, и также обнаружили, что соединение по настоящему изобретению проявляет превосходную ингибирующую активность в отношении EGFR, имеющего мутации L718 и L792, и, кроме того, демонстрирует превосходную ингибирующую активность в отношении вышеуказанного гибридного мутантного EGFR. Сделав это открытие, изобретатели разработали настоящее изобретение.

[0010]

Настоящее изобретение охватывает следующие варианты осуществления.

[0011]

Пункт 1.

Противоопухолевый агент для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток, противоопухолевый агент, содержащий (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид (соединение (A)) или его соль.

[0012]

Пункт 2.

Противоопухолевый агент в соответствии с пунктом 1, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию с делецией экзона, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутацию вставки экзона 20.

[0013]

Пункт 3.

Противоопухолевый агент в соответствии с пунктом 2, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

[0014]

Пункт 4.

Противоопухолевый агент в соответствии с любым из пунктов 1-3, где мутацией L718X является мутация L718Q.

[0015]

Пункт 5.

Противоопухолевый агент в соответствии с любым из пунктов 1-4, где мутация L792X представляет собой L792H, L792F или L792Y.

[0016]

Пункт 6.

Способ лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, включающий стадию введения (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли пациенту, имеющему злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющим по крайней мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20.

[0017]

Пункт 7.

(S)-N-(4-Амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20.

[0018]

Пункт 8.

Применение (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20.

[0019]

Пункт 9.

Применение (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли при изготовлении фармацевтического агента для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20.

[0020]

Пункт 10.

Фармацевтическая композиция, содержащая (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль и фармацевтически приемлемый носитель, для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток.

[0021]

Пункт 11.

Способ прогнозирования терапевтических эффектов химиотерапии с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль, у пациента, имеющего злокачественную опухоль, где способ включает стадии (1) и (2), ниже::

(1) стадию обнаружения наличия или отсутствия мутации гена EGFR, содержащегося в биологическом образце, полученном от пациента; и

(2) стадию прогнозирования того, что химиотерапия с высокой вероятностью проявит достаточные терапевтические эффекты по отношению к пациенту, когда результаты обнаружения на стадии (1) показывают, что ген EGFR имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток.

[0022]

Пункт 12.

Способ лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, включающий стадии с (1) по (3), ниже:

(1) стадию обнаружения наличия или отсутствия мутации гена EGFR, содержащегося в биологическом образце, полученном от пациента;

(2) стадию прогнозирования того, что химиотерапия с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль, с высокой вероятностью окажет достаточное терапевтическое воздействие на пациента, когда результаты обнаружения на стадии (1) показывают, что ген EGFR имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, включающей мутацию L718X в экзоне 18 и мутацию L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток; и

(3) стадию введения (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли пациенту, имеющему злокачественную опухоль, у которого на стадии (2) с высокой вероятностью прогнозируется достаточный ответ на химиотерапию с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль.

Положительные эффекты изобретения

[0023]

Противоопухолевый агент по настоящему изобретению проявляет высокую ингибирующую активность в отношении EGFR, имеющего мутации L718 и L792. Следовательно, противоопухолевый агент по настоящему изобретению является полезным с точки зрения предоставления противоопухолевого агента, который оказывает превосходное терапевтическое действие на пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего мутации L718 и L792.

[0024]

Настоящее изобретение также является полезным с точки зрения предоставления способа лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего мутации L718 и L792.

[0025]

Ингибирующая активность обычных ингибиторов EGFR в отношении EGFR значительно снижалась при наличии мутации T790M, которая представляет собой мутацию приобретенной резистентности в области экзона 20, или при наличии мутаций L718 и L792. Таким образом, было трудно оказать достаточное терапевтическое воздействие. В то же время противоопухолевый агент по настоящему изобретению обладает высокой ингибирующей активностью в отношении EGFR, имеющего мутацию L718 и/или L792, а также имеющего активную мутацию, такую как мутация Ex19del или L858R; таким образом, противоопухолевый агент по настоящему изобретению может оказывать превосходное терапевтическое действие на пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего эти комплексные мутации. Противоопухолевый агент по настоящему изобретению обладает высокой ингибирующей активностью в отношении EGFR, имеющего мутацию L718 и/или L792, даже если он имеет мутацию T790M в дополнение к вышеуказанным мутациям; таким образом, противоопухолевый агент по настоящему изобретению может оказывать превосходное терапевтическое действие на пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR в комплексе с этими мутациями.

[0026]

Кроме того, противоопухолевый агент по настоящему изобретению также является полезным с точки зрения снижения частоты проявления приобретенной резистентности в процессе лечения с использованием ингибиторов EGFR в отношении экзона 18 или экзона 21 мутантного EGFR, который является мутацией de novo, из-за его высокой ингибирующей активности в отношении экзона 18 и экзона 20 мутантного EGFR, резистентного к лечению, даже при наличии мутации T790M, которая представляет собой мутацию приобретенной резистентности в области экзона 20.

Краткое описание чертежей

[0027]

[Фиг. 1]

Иллюстрирует результаты оценки фосфорилирования (ингибирующей активности) в системе принудительной экспрессии мутантного EGFR с использованием клеток HEK293.

Описание вариантов осуществления изобретения

[0028]

Предпочтительные примеры различных определений в объеме настоящего изобретения, используемых в данном описании, подробно поясняются ниже.

[0029]

В данном описании термин «EGFR» относится к белку рецептора эпидермального фактора роста человека и также обозначается как ErbB-1 или HER1.

[0030]

В данном описании термин «EGFR дикого типа» относится к EGFR, свободному от соматической мутации, который представляет собой белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 1 (номер доступа в GenBank: NP_005219.2).

[0031]

В данном описании термин «экзон 18» относится к области 688-728 в аминокислотной последовательности EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1).

[0032]

В данном описании термин «мутация, резистентная к лечению в экзоне 18», относится к точечной мутации или делеционной мутации в аминокислоте в области экзона 18 EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1). Предпочтительной резистентной к лечению мутацией экзона 18 является точечная мутация с заменой одной аминокислоты в области экзона 18. Более предпочтительно, резистентная к лечению мутация экзона 18 представляет собой L718X (из аминокислот, составляющих белок, кодируемый генетической информацией, X представляет собой произвольный аминокислотный остаток, отличный от лейцина), что является точечной мутацией, при которой лейцин, кодируемый кодоном 718 экзона 18, был заменен на произвольную аминокислоту. Более конкретно, предпочтительные примеры L718X включают L718Q, который представляет собой точечную мутацию, в которой лейцин, кодируемый кодоном 718 в области экзона 18, был заменен на глутамин; и L718V, точечная мутация, в которой лейцин, кодируемый кодоном 718, был заменен на валин.

[0033]

В данном описании термин «активная мутация экзона 18» относится к точечной мутации или делеционной мутации в аминокислоте в области экзона 18 EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1). Предпочтительной активной мутацией экзона 18 является точечная мутация с заменой одной аминокислоты в области экзона 18. Более предпочтительно, активная мутация экзона 18 представляет собой E709X, которая представляет собой точечную мутацию, при которой глутаминовая кислота, кодируемая кодоном 709 экзона 18, была заменена на произвольную аминокислоту; или G719X, который представляет собой точечную мутацию, при которой глицин, кодируемый кодоном 719 экзона 18, на произвольную аминокислоту. Более конкретно, предпочтительные примеры E709X включают E709K, которая представляет собой точечную мутацию, в которой глутаминовая кислота, кодируемая кодоном 709 в области экзона 18, был заменена на лизин; и E709A, который представляет собой точечную мутацию, при которой глутаминовая кислота, кодируемая кодоном 709 в области экзона 18, был заменена на аланин. Предпочтительные примеры G719X включают G719A, которая представляет собой точечную мутацию, в которой глицин, кодируемый кодоном 719 в области экзона 18, был заменен на аланин; G719S, точечная мутация, при которой глицин, кодируемый кодоном 719 в области экзона 18, был заменен на серин; и G719C, который представляет собой точечную мутацию, при которой глицин, кодируемый кодоном 719 в области экзона 18, был заменен на цистеин.

[0034]

В настоящем изобретении термин «экзон 20» относится к области 824-875 в аминокислотной последовательности EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1).

[0035]

В данном описании термин «мутация, резистентная к лечению в экзоне 20», относится к точечной мутации в аминокислоте в области экзона 20 EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1). Предпочтительной резистентной к лечению мутацией экзона 20 является точечная мутация с заменой одной аминокислоты в области экзона 20. Более предпочтительно, резистентная к лечению мутация экзона 20 представляет собой L792X (из аминокислот, составляющих белок, кодируемый генетической информацией, X представляет собой произвольный аминокислотный остаток, отличный от лейцина), которая представляет собой точечную мутацию, при которой лейцин, кодируемый кодоном 792 в области экзона 20, был заменен на произвольную аминокислоту. Конкретные примеры включают L792H, точечную мутацию, в которой лейцин, кодируемый кодоном 792 в области экзона 20, был заменен на гистидин; L792F, которая представляет собой точечную мутацию, в которой лейцин, кодируемый кодоном 792, был заменен на фенилаланин; L792Y, точечная мутация, в которой лейцин, кодируемый кодоном 792, был заменен на тирозин; L792R, точечная мутация, в которой лейцин, кодируемый кодоном 792, был заменен на аргинин; L792V, точечная мутация, в которой лейцин, кодируемый кодоном 792, был заменен на валин; и L792P, который представляет собой точечную мутацию, в которой лейцин, кодируемый кодоном 792, был заменен на пролин. Из них предпочтительными являются L792F, L792H и L792Y.

[0036]

В данном описании термин «мутация вставки экзона 20» относится к мутации со вставкой одной или нескольких (предпочтительно, от 1 до 7, более предпочтительно. от 1 до 4) аминокислот в область экзона 20 EGFR (последовательность от 761 до 823 аминокислот в SEQ ID NO: 1). Предпочтительные примеры включают мутацию со вставкой аминокислотной последовательности FQEA (фенилаланин, глутамин, глутаминовая кислота и аланин, последовательно со стороны N-конца) между аланином 763 и тирозином 764 в области экзона 20 (A763_Y764insFQEA), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности ASV (аланин, серин и валин, последовательно со стороны N-конца) между валином 769 и аспарагиновой кислотой 770 в области экзона 20 (V769_D770insASV), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности SVD (серин, валин и аспарагиновая кислота, последовательно со стороны N-конца) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insSVD), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности NPG (аспарагин, пролин и глицин, последовательно со стороны N-конца) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insNPG), мутацию со вставкой аминокислоты G (глицин) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insG), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности GY (глицин и тирозин, последовательно со стороны N-конца) после делеции аспарагиновой кислоты 770 в области экзона 20 (D770>GY), мутацию со вставкой аминокислоты N (аспарагин) между аспарагином 771 и пролином 772 в области экзона 20 (N771_P772insN), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности PR (пролин и аргинин, последовательно со стороны N-конца) между пролином 772 и гистидином 773 в области экзона 20 (P772_R773insPR), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности NPH (аспарагин, пролин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insNPH), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности PH (пролин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insPH), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности AH (аланин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insAH), мутацию со вставкой аминокислоты H (гистидин) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insH), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности HV (гистидин и валин, последовательно со стороны N-конца) между валином 774 и цистеином 775 в области экзона 20 (V774_C774insHV), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности EAFQ (глутаминовая кислота, аланин, фенилаланин и глутамин, последовательно со стороны N-конца) между аланином 761 и глутаминовой кислотой 762 в области экзона 20 (A761_E762insEAFQ) и тому подобное. Более предпочтительные примеры включают мутацию со вставкой аминокислотной последовательности ASV (аланин, серин и валин, последовательно со стороны N-конца) между валином 769 и аспарагиновой кислотой 770 в области экзона 20 (V769_D770insASV), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности SVD (серин, валин и аспарагиновая кислота, последовательно со стороны N-конца) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insSVD), мутацию со вставкой аминокислоты G (глицин) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insG), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности NPH (аспарагин, пролин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insNPH), и мутацию со вставкой аминокислотной последовательности PH (пролин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insPH). Особенно предпочтительные примеры включают мутацию со вставкой аминокислотной последовательности FQEA (фенилаланин, глутамин, глутаминовая кислота и аланин, последовательно со стороны N-конца) между 763 аланином и тирозином 764 в области экзона 20 (A763_Y764insFQEA), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности ASV (аланин, серин и валин, последовательно со стороны N-конца) между валином 769 и аспарагиновой кислотой 770 в области экзона 20 (V769_D770insASV), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности SVD (серин, валин и аспарагиновая кислота, последовательно со стороны N-конца) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insSVD), мутацию со вставкой аминокислоты G (глицин) между аспарагиновой кислотой 770 и аспарагином 771 в области экзона 20 (D770_N771insG), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности NPH (аспарагин, пролин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774inchsNPH), мутацию со вставкой аминокислотной последовательности PH (пролин и гистидин, последовательно со стороны N-конца) между гистидином 773 и валином 774 в области экзона 20 (H773_V774insPH) и тому подобное.

[0037]

В настоящем изобретении термин «экзон 21» относится к области 824-875 в аминокислотной последовательности EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1).

[0038]

В данном описании термин «активная мутация экзона 21» относится к точечной мутации аминокислоты в области экзона 21 EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1). Предпочтительной активной мутацией экзона 21 является точечная мутация с заменой одной аминокислоты в области экзона 21. Более предпочтительно, активная мутация экзона 21 представляет собой L858X, которая представляет собой точечную мутацию, при которой лейцин, кодируемый кодоном 858 в области экзона 21, был заменен на произвольную аминокислоту; или L861X, который представляет собой точечную мутацию, при которой лейцин, кодируемый кодоном 861 в области экзона 21, был заменен на произвольную аминокислоту (из аминокислот, составляющих белок, кодируемый генетической информацией, X представляет собой произвольный аминокислотный остаток, отличный от лейцина). Более конкретно, предпочтительные примеры включают L858R, который представляет собой точечную мутацию, при которой лейцин, кодируемый кодоном 858 в области экзона 21, мутирован на аргинин; и L861Q, которая представляет собой точечную мутацию, при которой лейцин, кодируемый кодоном 861 в области экзона 21, был заменен на глутамин.

[0039]

В настоящем изобретении термин «мутация, резистентная к лечению в экзоне 18 и/или экзоне 20», включает «мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18», «мутацию, резистентную к лечению в экзоне 20», и «мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18 и экзоне 20».

[0040]

В настоящем изобретении термин «точечная мутация» относится к мутации, вызывающей замену, вставку или делецию одной или нескольких (например, примерно от 1 до 10, предпочтительно, примерно от 1 до 5, более предпочтительно, примерно 1, 2 или 3) аминокислотных остатков; и может включать в себя инсерционную и/или делеционную мутацию в качестве нуклеиновой кислоты.

[0041]

«EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18 и/или экзоне 20», включает «EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18», «EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 20», и «EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18 и/или экзоне 21».

[0042]

«EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18», относится к EGFR, имеющему по меньшей мере указанную выше мутацию L718X в экзоне 18 как мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18. EGFR может дополнительно иметь мутацию экзона 18, отличную от L718X, но, предпочтительно, имеет единственную мутацию L718X в качестве мутации, резистентной к лечению в экзоне 18. Более того, EGFR может иметь мутацию, отличную от мутации, резистентной к лечению в экзоне 18 (например, мутация с делецией экзона 19, мутация L858R и мутация L790M).

[0043]

В данном описании термин «EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 20», относится к EGFR, имеющему по меньшей мере указанную выше мутацию L792X в экзоне 20 как мутацию, резистентную к лечению в экзоне 20. EGFR может иметь мутацию, отличную от мутации L792X, но, предпочтительно, имеет единственную мутацию L718X в качестве мутации экзона 20, резистентной к лечению. Более того, EGFR может иметь мутацию, отличную от мутации, резистентной к лечению в экзоне 20 (например, мутация с делецией экзона 19, мутация L858R и мутация L790M).

[0044]

В данном описании термин «экзон 19» относится к области 729-823 в аминокислотной последовательности EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1).

[0045]

В данном описании термин «мутация с делецией экзона 19» относится к мутации с делецией одной или нескольких аминокислот в области экзона 19 EGFR дикого типа (SEQ ID NO: 1). Помимо делеции в этой области, также включена мутация со вставкой одной или нескольких произвольных аминокислот. Примеры мутации с делецией экзона 19 включают мутацию с делецией 5 аминокислот от глутаминовой кислоты 746 до аланина 750 в области экзона 19 (Del E746-A750), мутацию со вставкой серина после делеции 7 аминокислот от лейцина 747 до пролина 753 в области экзона 19 (Del 747-P753insS), мутацию с делецией 5 аминокислот от лейцина 747 до 751 треонина в области экзона 19 (Del L747-T751), мутацию со вставкой пролина после делеции 4 аминокислот от лейцина 747 до аланина 750 в области экзона 19 (Del 747-A750insP) и тому подобное. Предпочтительные примеры включают мутацию с делецией 5 аминокислот от глутаминовой кислоты 746 до аланина 750 в области экзона 19 (Del E746-A750).

[0046]

Более того, EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18 и/или экзоне 20, может дополнительно иметь по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации с вставкой экзона 20. Конкретные примеры включают EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий мутацию с делецией экзона 19, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий мутацию с делецией экзона 19, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий L858R, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий L858R, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий L861Q, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий L861Q, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий G719X, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий G719X, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий E709X, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий E709X, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий мутацию вставки экзона 20, и EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий мутацию вставки экзона 20. Предпочтительными среди них являются EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий мутацию с делецией экзона 19, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий мутацию с делецией экзона 19, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, дополнительно имеющий L858R, и EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, дополнительно имеющий L858R.

[0047]

Кроме того, EGFR, имеющий мутацию, резистентную к лечению в экзоне 18 и/или экзоне 20, может дополнительно иметь мутацию T790M, в дополнение к вышеупомянутой мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутацию вставки экзона 20. T790M представляет собой приобретенную мутацию резистентности в области экзона 20. Известно, что T790M вырабатывается при использовании существующих ингибиторов EGFR. Приобретение T790M часто снижает эффекты существующих лекарств в отношении пациентов, имеющих злокачественные опухоли.

[0048]

В настоящем изобретении примеры включают EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий мутацию с делецией экзона 19, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий мутацию с делецией экзона 19, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий L858R, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий L858R, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий L861Q, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий L861Q, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий G719X, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий G719X, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий E709X, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий E709X, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий мутацию вставки экзона 20, дополнительно имеющий мутацию T790M, и EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий мутацию вставки экзона 20, дополнительно имеющий мутацию T790M. Предпочтительными среди них являются EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий мутацию с делецией экзона 19, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий мутацию с делецией экзона 19, дополнительно имеющий мутацию T790M, EGFR, имеющий мутацию L718X в области экзона 18, имеющий L858R, дополнительно имеющий мутацию T790M, и EGFR, имеющий мутацию L792X в области экзона 20, имеющий L858R, дополнительно имеющий мутацию T790M.

[0049]

Из EGFR, имеющих вышеуказанные гибридные мутации, EGFR, имеющий мутацию L718Q в области экзона 18, EGFR, имеющий мутацию L792F в области экзона 20, EGFR, имеющий мутацию L792H, и EGFR, имеющий мутацию L792Y, являются особенно предпочтительными.

[0050]

В настоящем изобретении способ обнаружения мутаций в EGFR, экспрессируемых пациентом, имеющим злокачественную опухоль, особо не ограничивается, поскольку способ позволяет обнаруживать мутации, и могут использоваться любые известные методы обнаружения.

[0051]

Образец, используемый для обнаружения мутации EGFR, особо не ограничивается, если образец представляет собой биологический образец, полученный от пациента, имеющего злокачественную опухоль, в частности, образец, полученный от пациента, имеющего злокачественную опухоль, и содержащий клетки злокачественной опухоли. Примеры биологических образцов включают жидкости организма (например, кровь, мочу и т.д.), ткани, их экстракты и культуры полученных тканей. Способ получения биологического образца может быть выбран подходящим образом в зависимости от вида биологического образца.

[0052]

Биологический образец готовится путем соответствующей обработки в соответствии с методом определения. Кроме того, реагент, содержащий праймер или зонд, используемый для обнаружения, может быть приготовлен обычным способом в соответствии с методом его определения.

[0053]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения стадия обнаружения присутствия мутации по настоящему изобретению в EGFR, экспрессируемого пациентом, имеющим злокачественную опухоль, может быть выполнена перед введением противоопухолевого агента пациенту, имеющему злокачественную опухоль.

[0054]

Злокачественная опухоль может включать два или более различных типа злокачественных опухолевых клеток. Кроме того, у одного пациента могут возникнуть две или более злокачественных опухолей. Следовательно, у одного пациента одновременно могут быть разные мутации EGFR (например, мутация экзона 18 представляет собой мутацию экзона 18 L718Q и L718V; и мутация экзона 20 представляет собой мутацию L792F, L792H, L792Y, L792R, L792V и L792P экзона 20; однако здесь нет ограничений).

[0055]

Противоопухолевый агент по настоящему изобретению содержит в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид (соединение (A)) или его соль. Соединение (A) представлено следующей химической формулой.

[0056]

[0057]

Ниже поясняется способ получения соединения по настоящему изобретению.

Соединение A по настоящему изобретению может быть получено, например, способом получения, описанным в WO2015/025936A1, способами, описанными в примерах, и тому подобное. Однако способ получения соединения настоящего изобретения не ограничивается этими примерами реакций.

[0058]

Когда соединение A по настоящему изобретению имеет изомеры, такие как оптические изомеры, стереоизомеры и таутомеры, любой из изомеров и их смеси являются включенными в объем соединения по настоящему изобретению, если не указано иное. Например, когда соединение по настоящему изобретению имеет оптические изомеры, рацемические смеси и оптические изомеры, выделенные из рацемической смеси, также входят в объем соединения по настоящему изобретению, если не указано иное.

[0059]

Соли соединения A относятся к любым фармацевтически приемлемым солям; примеры включают соли присоединения оснований и соли присоединения кислот.

[0060]

Примеры солей присоединения оснований включают соли щелочных металлов, такие как соли натрия и соли калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и соли магния; соли аммония; и соли органических аминов, такие как соли триметиламина, соли триэтиламина, соли дициклогексиламина, соли этаноламина, соли диэтаноламина, соли триэтаноламина, соли прокаина и соли N, N’-дибензилэтилендиамина.

[0061]

Примеры солей присоединения кислот включают соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, сульфаты, нитраты, фосфаты и перхлораты; соли органических кислот, такие как ацетаты, формиаты, малеаты, фумараты, тартраты, цитраты, аскорбаты и трифторацетаты; и сульфонаты, такие как метансульфонаты, изетионаты, бензолсульфонаты и п-толуолсульфонаты.

Соединение по настоящему изобретению или его соли также включают его пролекарства. Пролекарство относится к соединению, которое может быть преобразовано в соединение по настоящему изобретению или его соль посредством реакции с ферментом, желудочной кислотой или тому подобным в физиологических условиях in vivo, то есть соединение, которое можно преобразовать в соединение по настоящему изобретению или его соль ферментативным окислением, восстановлением, гидролизом или тому подобным; или соединение, которое можно преобразовать в соединение по настоящему изобретению или его соль путем гидролиза или тому подобного с помощью желудочной кислоты или подобного. Кроме того, пролекарство может быть соединением, которое может быть преобразовано в соединение по настоящему изобретению или его соль в физиологических условиях, таких как описанные в работе «Iyakuhin no Kaihatsu [Development of Pharmaceuticals]», Vol. 7, Molecular Design, published in 1990 by Hirokawa Shoten Co., pp. 163-198.

[0063]

Описание болезней

Конкретные примеры опухолей, на которые нацелено настоящее изобретение, включают, но не ограничиваются ими, рак головы и шеи, рак желудочно-кишечного тракта (рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных путей (например, рак желчного пузыря и желчных протоков), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (например, рак толстой кишки и рак прямой кишки и т.д.), рак легких (например, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого и мезотелиома), рак груди, рак половых органов (рак яичников, рак матки (например, рак шейки матки и рак эндометрия и т.д.), урологический рак (например, рак почки, рак мочевого пузыря, рак простаты и опухоль яичек), гемопоэтическую опухоль (например, лейкоз, злокачественная лимфома и множественная миелома), остеосаркома, саркома мягких тканей, рак кожи, опухоль головного мозга и тому подобное. Предпочтительные примеры включают рак легких, рак груди, рак головы и шеи, опухоль мозга, рак матки, рак желудочно-кишечного тракта, гемопоэтическую опухоль и рак кожи. Рак легких особенно предпочтителен.

[0064]

Когда соединение по настоящему изобретению или его соль используют в качестве фармацевтического агента, при необходимости может быть добавлен фармацевтический носитель, тем самым образуя подходящую лекарственную форму в соответствии с целями профилактики и лечения. Примеры лекарственной формы включают пероральные препараты, инъекции, суппозитории, мази, пластыри и тому подобное. Предпочтительны пероральные препараты. Такие лекарственные формы могут быть получены методами, обычно известными специалистам в данной области.

[0065]

Как фармацевтически приемлемый носитель в твердых препаратах могут быть примешаны в качестве наполнителя, связующего, разрыхлителя, смазки или красителя различные обычные органические или неорганические материалы носителя, используемые в качестве материалов для изготовления; или в качестве растворителя, солюбилизирующего агента, суспендирующего агента, изотонизирующего агента, буфера или успокаивающего агента в жидких препаратах. Кроме того, при необходимости также могут быть использованы добавки к фармацевтическим препаратам, такие как антисептики, антиоксиданты, красители, подсластители и стабилизаторы.

[0066]

Твердые препараты для перорального применения готовят следующим образом. После добавления к соединению по настоящему изобретению наполнителя, необязательно вместе с наполнителем, связующего, разрыхлителя, смазывающего вещества, красителя, агента, маскирующего вкус или ароматизатора и т.д., полученную смесь обычными способами формуют в таблетки, таблетки с покрытием, гранулы, порошки, капсулы и тому подобное.

[0067]

Примеры наполнителей включают лактозу, сахарозу, D-маннит, глюкозу, крахмал, карбонат кальция, каолин, микрокристаллическую целлюлозу и ангидрид кремниевой кислоты. Примеры связующих включают воду, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол, простой сироп, жидкую глюкозу, жидкий α-крахмал, жидкий желатин, D-маннит, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилкрахмал, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, шеллак, фосфат кальция, поливинилпирролидон и тому подобное. Примеры разрыхлителей включают сухой крахмал, альгинат натрия, порошкообразный агар, гидрокарбонат натрия, карбонат кальция, лаурилсульфат натрия, моноглицерид стеариновой кислоты, лактозу и тому подобное. Примеры смазывающих веществ включают очищенный тальк, стеарат натрия, стеарат магния, буру, полиэтиленгликоль и тому подобное. Примеры красителей включают оксид титана, оксид железа и тому подобное. Примеры маскирующих вкус или ароматизирующих агентов включают сахарозу, кожуру горького апельсина, лимонную кислоту, винную кислоту и тому подобное.

[0068]

Когда готовят жидкий препарат для перорального введения, к соединению по настоящему изобретению можно добавлять агент, маскирующий вкус, буфер, стабилизатор, ароматизатор и тому подобное, и полученная смесь может быть приготовлена в виде перорального жидкого препарата, сиропа, эликсира и т.д. обычным способом.

[0069]

Когда готовят средство для инъекций, к соединению по настоящему изобретению могут быть добавлены регулятор pH, буфер, стабилизатор, изотонический агент, местный анестетик и тому подобное и смесь может быть приготовлена для подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекции обычным способом.

[0070]

Примеры используемого в настоящем документе регулятора pH и буфера включают цитрат натрия, ацетат натрия и фосфат натрия. Примеры стабилизатора включают пиросульфит натрия, EDTA, тиогликолевую кислоту и тиомолочную кислоту. Примеры местного анестетика включают гидрохлорид прокаина и гидрохлорид лидокаина. Примеры изотонизирующего агента включают хлорид натрия, глюкозу, D-маннит и глицерин.

[0071]

При получении суппозитория к соединению A могут быть добавлены фармацевтически приемлемые носители, известные в соответствующей области, такие как полиэтиленгликоль, ланолин, масло какао и триглицерид жирных кислот; и, при необходимости, поверхностно-активные вещества, такие как Tween 80 (зарегистрированная торговая марка), и полученная смесь может быть изготовлена в виде суппозитория обычным способом.

[0072]

При получении мази с соединением A при необходимости можно смешивать обычно используемую основу, стабилизатор, смачивающий агент, консервант и тому подобное; и полученную смесь смешивают и превращают в мазь обычным способом.

[0073]

Примеры основы включают жидкий парафин, белый вазелин, белый пчелиный воск, октилдодециловый спирт и парафин.

[0074]

Примеры консерванта включают метилпараоксибензоат, этилпараоксибензоат и пропилпараоксибензоат.

[0075]

При изготовлении пластыря описанная выше мазь, крем, гель, паста и тому подобное может быть нанесена на обычный субстрат обычным способом.

[0076]

Примеры субстратов включают тканые или нетканые материалы, содержащие хлопок, штапельные волокна или химические волокна; и также могут быть использованы пленки или вспененные листы из мягкого винилхлорида, полиэтилена, полиуретана и т.д.

[0077]

Количество соединения A, которое должно быть включено в каждую из таких стандартных дозированных форм, зависит от состояния пациента, которому вводят соединение, его лекарственной формы и т.д. Обычно в случае перорального средства количество соединения, предпочтительно, составляет от 0,05 до 1000 мг на лекарственную форму. В случае инъекции количество соединения, предпочтительно, составляет от 0,01 до 500 мг на лекарственную форму; и в случае суппозитория количество соединения, предпочтительно. составляет от 1 до 1000 мг на лекарственную форму.

[0078]

Кроме того, суточная доза лекарства в такой лекарственной форме зависит от состояния, веса тела, возраста, пола и т.д. пациента и не может быть обобщена. Обычно для взрослого (масса тела: 50 кг) суточная доза соединения по настоящему изобретению обычно может составлять от 0,05 до 5000 мг и, предпочтительно, от 0,1 до 1000 мг; и, предпочтительно, вводится одной дозой или двумя-тремя разделенными дозами в день.

[0079]

Настоящее изобретение относится также к способу лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, включающий стадию введения соединения A или его соли пациенту, имеющему злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего резистентную к лечению мутацию в экзоне 18 и/или экзоне 20.

[0080]

Настоящее изобретение относится также к соединению A или его соли для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего резистентную к лечению мутацию в экзоне 18 и/или экзоне 20.

[0081]

Настоящее изобретение относится также к применению соединения A или его соли для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего резистентную к лечению мутацию в экзоне 18 и/или экзоне 20.

[0082]

Настоящее изобретение относится также к применению соединения A или его соли при изготовлении фармацевтического агента для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего резистентную к лечению мутацию в экзоне 18 и/или экзоне 20.

[0083]

Настоящее изобретение относится также к способу прогнозирования терапевтических эффектов химиотерапии с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента соединение А или его соль, у пациента, имеющего злокачественную опухоль, где способ включает стадии (1) и (2), ниже:

(1) стадию обнаружения наличия или отсутствия мутации гена EGFR, содержащегося в биологическом образце, полученном от пациента; и

(2) стадию прогнозирования того, что химиотерапия с высокой вероятностью окажет достаточное терапевтическое воздействие на пациента, когда результаты обнаружения на стадии (1) показывают, что ген EGFR имеет резистентную к лечению мутацию в экзоне 18 и/или экзоне 20.

[0084]

Настоящее изобретение относится также к способу лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, включающему стадии с (1) по (3), ниже:

(1) стадию обнаружения наличия или отсутствия мутации гена EGFR, содержащегося в биологическом образце, полученном от пациента; и

(2) стадию прогнозирования того, что химиотерапия с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль, с высокой вероятностью будет проявлять достаточные терапевтические эффекты в отношении пациента, когда результаты обнаружения на стадии (1) показывают, что ген EGFR имеет экзон 18 и/или мутацию в экзоне 20, резистентную к лечению; и

(3) стадию введения (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли пациенту, имеющему злокачественную опухоль, у которого с высокой вероятностью прогнозируется достаточный ответ на химиотерапию с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль на стадии (2).

[0085]

Последовательность оснований гена EGFR общеизвестна. Регистрационным номером в GenBank последовательности оснований кДНК является NM_005228.4.

[0086]

«Терапевтические эффекты» можно оценить по эффектам уменьшения опухоли, эффектам подавления рецидива, эффектам продления жизни и тому подобное. Эффекты подавления рецидива могут быть показаны как степень продления периода отсутствия рецидивов или степень улучшения частоты рецидивов; и эффекты продления жизни могут быть показаны как степень полного времени выживания или степень увеличения медианы выживаемости без прогрессирования или тому подобное. «Достаточные терапевтические эффекты» химиотерапии с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента соединение А или его соль, означает, например, что превосходные терапевтические эффекты достигаются при введении противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента соединение A или его соль, например, увеличение времени выживания, подавление рецидива и тому подобное по сравнению с отсутствием введения.

Примеры

[0087]

Далее приводится более подробное описание настоящего изобретения со ссылкой на следующий пример исследования. Однако настоящее изобретение не ограничивается этим примером (примером исследования).

Пример исследования 1

[0088]

Исследование эффективности лекарственного средства in vitro

Результаты оценки внутриклеточного фосфорилирования в системе принудительной экспрессии мутантного EGFR с использованием клеток HEK293 (ингибирующая активность)

Внутриклеточную целевую ингибирующую активность соединений оценивали на основании следующего в качестве индекса: внутриклеточное фосфорилирование EGFR в системе принудительной экспрессии мутантного EGFR с использованием клеток Jump-In (товарный знак) Grip (товарный знак) HEK293 (Thermo Fisher Scientific Inc.) (далее также называемые «клетки HEK293»). Клетки HEK293 выдерживали в среде D-MEM с GlutaMAX (товарный знак)-I (с высоким содержанием глюкозы) (Thermo Fisher Scientific Inc.), которая содержала 10% диализованного FBS. Клетки HEK293 высевали в каждую лунку 96-луночного микропланшета с плоским дном таким образом, чтобы количество клеток на лунку составляло 10000, и инкубировали в инкубаторе, содержащем 5% газообразного CO₂ при температуре 37°C в течение ночи. Затем с использованием реагента для трансфекции ViaFect (товарный знак) вместе с Opti-MEM (товарный знак) I (Thermo Fisher Scientific Inc.) (Promega Corporation) вводили вектор pcDNATM 6.2/V5-DEST, кодирующий ген EGFR человека (Del E746-A750 (далее также называемый «Ex19del»), Ex19del+T790M (символ «+» указывает на наличие обеих мутаций), Ex19del+T790M+L718Q, Ex19del+T790M+L792H, Ex19del+T790M+L792F, Ex19del+T790M+L792Y, L858R, L858R+T790M, L858R+T790M+L718Q, L858R+T790M+L790M+L790M+L790M+L790M+L790M+L792H+L792Y) вместе с Opti-MEM (товарный знак) I (Thermo Fisher Scientific Inc.). Клетки снова инкубировали в инкубаторе, содержащем газообразный 5% CO₂, при температуре 37°C в течение ночи. На следующий день в ДМСО отдельно растворяли соединение A, эрлотиниб, афатиниб и осимертиниб (эрлотиниб, афатиниб и осимертиниб, каждый может именоваться в дальнейшем «сравнительное соединение») и разбавляли ДМСО или средой. Затем растворы отдельно добавляли в каждую лунку планшета для культивирования клеток, и клетки в течение 6 часов инкубировали в инкубаторе, содержащем газообразный 5% CO₂, 37°C. После инкубации клетки иммобилизовали с использованием 20% нейтрального забуференного формалина (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) и блокировали блокирующим буфером Odyssey (торговая марка) (PBS) (M&S TechnoSystems Inc.). Затем клетки подвергали взаимодействию с первичным антителом (EGFR Antibody Cocktail #AHR5062 (Thermo Fisher Scientific Inc.) и фосфо-EGFR рецептором (Tyr1068) Antibody #2234L (CST)), разбавленным блокирующим буфером Odyssey (торговая марка) (PBS) до 1/200, и клетки оставляли на ночь при температуре 4°C. На следующий день клетки подвергали взаимодействию с вторичным антителом (IRDye 800CW Goat aRabbit #926-32211 и IRDye 680RD Goat aMouse #926-68070 (M&S TechnoSystems Inc.)), разбавленным блокирующим буфером Odyssey (торговая марка) (PBS) до 1/800, и клеткам давали постоять при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем клетки подвергали взаимодействию с первичным антителом (EGFR Antibody Cocktail #AHR5062 (Thermo Fisher Scientific Inc.) и фосфо-EGFR рецептором (Tyr1068) Antibody #2234L (CST)), разбавленным блокирующим буфером Odyssey (торговая марка) (PBS) до 1/200, и клетки оставляли на ночь при температуре 4°C. На следующий день клетки подвергали взаимодействию с вторичным антителом (IRDye 800CW Goat aRabbit #926-32211 и IRDye 680RD Goat aMouse #926-68070 (M&S TechnoSystems Inc.)), разбавленным блокирующим буфером Odyssey (торговая марка) (PBS) до 1/800, и клеткам давали постоять при комнатной температуре в течение 1 часа.

[0089]

Значение, полученное вычитанием значения FI лунки без первичного антитела из значения FI, определенного при длине волны флуоресценции 800 или 700 нм, было обозначено как FI (800, EGFR)-контроль (для 800 нм) и FI (700, p-EGFR)-контроль (для 700 нм). Значение, полученное делением FI (700, p-EGFR)-контроль каждой лунки на FI (800, EGFR)-контроль, было определено как FI (p-EGFR/EGFR). Степень фосфорилирования EGFR рассчитывали с использованием следующей формулы для определения концентрации исследуемых соединений, при которой EGFR фосфорилировался на 50% (IC₅₀ (мкМ)). В таблице 1 проиллюстрированы результаты.

[0090]

Степень фосфорилирования EGFR (%)=T/C×100

T: FI (p-EGFR/EGFR) лунки, в которую было добавлено исследуемое соединение.

C: FI (p-EGFR/EGFR) лунки, в которую не добавляли исследуемое соединение.

[0091]

Как видно из таблицы 1, соединение A проявляет высокую ингибирующую активность в отношении внутриклеточного фосфорилирования гибридного мутантного EGFR, содержащего L718Q и L792X; и активность была выше, чем у эрлотиниба, афатиниба и осимертиниба.

[0092]

[Таблица 1]

Соединение A по настоящему изобретению Осимертиниб Афатиниб Эрлотиниб Ex19del 11,2±6,4 52,1±23,6 18,5±10,2 201±6 Ex19del+T790M 16,9±5,9 69,7±15,6 250±64 >1000 Ex19del+T790M+L718Q 82,5±9,0 5800±2940 >10000 >10000 Ex19del+T790M+L792H 11,1±5,6 513±280 8190±560 >10000 Ex19del+T790M+L792F 6,25±1,83 65,7±15,5 692±325 >10000 Ex19del+T790M+L792Y 6,54±1,49 111±38 508±218 >10000 L858R 13,8±3,8 53,3±11,0 17,9±3,0 167±22 L858R+T790M 16,0±2,6 59,0±10,9 162±38 >1000 L858R+T790M+L718Q 104±40 7880±950 3670±1690 >10000 L858R+T790M+L792H 15,3±5,0 441±161 2190±1310 >10000 L858R+T790M+L792F 9,07±4,74 124±40 538±274 >10000 L858R+T790M+L792Y 11,3±5,8 273±72 512±269 >10000

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD.

<120> L718 И/ИЛИ L792 МУТАНТНЫЙ ИНГИБИТОР EGFR, РЕЗИСТЕНТНЫЙ К

ЛЕЧЕНИЮ

<130> P19-261WO

<150> JP 2018-247131

<151> 2018-12-28

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1210

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln

20 25 30

Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe

35 40 45

Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn

50 55 60

Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys

65 70 75 80

Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val

85 90 95

Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr

100 105 110

Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn

115 120 125

Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu

130 135 140

His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu

145 150 155 160

Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met

165 170 175

Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro

180 185 190

Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln

195 200 205

Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg

210 215 220

Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys

225 230 235 240

Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp

245 250 255

Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro

260 265 270

Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly

275 280 285

Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His

290 295 300

Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu

305 310 315 320

Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val

325 330 335

Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn

340 345 350

Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp

355 360 365

Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr

370 375 380

Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu

385 390 395 400

Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp

405 410 415

Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln

420 425 430

His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu

435 440 445

Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser

450 455 460

Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu

465 470 475 480

Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu

485 490 495

Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro

500 505 510

Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn

515 520 525

Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly

530 535 540

Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro

545 550 555 560

Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro

565 570 575

Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val

580 585 590

Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp

595 600 605

Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys

610 615 620

Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly

625 630 635 640

Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu

645 650 655

Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His

660 665 670

Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu

675 680 685

Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu

690 695 700

Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser

705 710 715 720

Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu

725 730 735

Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser

740 745 750

Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser

755 760 765

Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser

770 775 780

Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp

785 790 795 800

Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn

805 810 815

Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg

820 825 830

Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro

835 840 845

Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala

850 855 860

Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp

865 870 875 880

Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp

885 890 895

Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser

900 905 910

Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu

915 920 925

Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr

930 935 940

Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys

945 950 955 960

Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln

965 970 975

Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro

980 985 990

Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp

995 1000 1005

Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe

1010 1015 1020

Phe Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu

1025 1030 1035

Ser Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn

1040 1045 1050

Gly Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg

1055 1060 1065

Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp

1070 1075 1080

Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro

1085 1090 1095

Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln

1100 1105 1110

Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro

1115 1120 1125

His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln

1130 1135 1140

Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala

1145 1150 1155

Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln

1160 1165 1170

Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys

1175 1180 1185

Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln

1190 1195 1200

Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

1205 1210

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. Изобретение раскрывает новый противоопухолевый агент, содержащий (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид (соединение (A) или его фармацевтически приемлемую соль. Изобретение может быть применимо для лечения пациента, имеющего резистентную злокачественную опухоль, экспрессирующую мутантный EGFR, имеющий по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы L792H, L792F, L792Y и L718Q. 7 н. и 14 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 табл., 1 ил.

1. Противоопухолевый агент, содержащий (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид (Соединение (A)) или его соль, для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

2. Противоопухолевый агент по п.1, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

3. Противоопухолевый агент по п.2, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

4. Способ лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, включающий стадию введения (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли пациенту, имеющему злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по крайней мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

5. Способ по п.4, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

6. Способ по п.5, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

7. Применение (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

8. Применение по п.7, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

9. Применение по п.8, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

10. Применение (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли при изготовлении фармацевтического агента для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

11. Применение по п.10, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

12. Применение по п.11, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

13. Фармацевтическая композиция для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, экспрессирующую EGFR, имеющего по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток, где композиция содержит (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль и фармацевтически приемлемый носитель, и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

14. Фармацевтическая композиция по п.13, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

15. Фармацевтическая композиция по п.14, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

16. Способ прогнозирования терапевтических эффектов химиотерапии с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль, у пациента, имеющего злокачественную опухоль, где способ включает стадии (1) и (2) ниже:

(1) стадию обнаружения наличия или отсутствия мутации гена EGFR, содержащегося в биологическом образце, полученном от пациента; и

(2) стадию прогнозирования того, что химиотерапия с высокой вероятностью проявит достаточные терапевтические эффекты по отношению к пациенту, когда результаты обнаружения на стадии (1) показывают, что ген EGFR имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток, и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

17. Способ по п.16, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

18. Способ по п.17, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.

19. Способ лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль, включающий стадии с (1) по (3) ниже:

(1) стадию обнаружения наличия или отсутствия мутации гена EGFR, содержащегося в биологическом образце, полученном от пациента;

(2) стадию прогнозирования того, что химиотерапия с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль, с высокой вероятностью окажет достаточное терапевтическое воздействие на пациента, когда результаты обнаружения на стадии (1) показывают, что ген EGFR имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации L718X в экзоне 18 и мутации L792X в экзоне 20, где X представляет собой произвольный аминокислотный остаток; и

(3) стадию введения (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламида или его соли пациенту, имеющему злокачественную опухоль, у которого на стадии (2) с высокой вероятностью прогнозируется достаточный ответ на химиотерапию с использованием противоопухолевого агента, содержащего в качестве активного ингредиента (S)-N-(4-амино-6-метил-5-(хинолин-3-ил)-8,9-дигидропиримидо[5,4-b]индолизин-8-ил)акриламид или его соль, и указанные мутации выбраны из группы, состоящей из L792H, L792F, L792Y и L718Q.

20. Способ по п.19, где EGFR дополнительно имеет по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации с делецией экзона 19, L858R, L861Q, G719X, E709X и мутации со вставкой экзона 20.

21. Способ по п.20, где EGFR дополнительно имеет мутацию T790M.