Способ диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием Российский патент 2024 года по МПК G01N33/58 G01N33/543 G01N30/72 C12Q1/6806 C12Q1/6827 C12Q1/686 C12Q1/6876 C12Q1/6883 

Изобретение относится к области профилактической медицины, экологии человека, педиатрии и может быть использовано для диагностики у детей синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет, ассоциируемого с контаминацией организма алюминием.

В настоящее время у детей, в том числе дошкольного возраста, широко распространены различные нарушения в работе нервной системы. Одно из часто встречающихся расстройств – синдром утомляемости после перенесенной вирусной болезни (согласно МКБ-10 как G93.3), который проявляется такими симптомами, как: тревожный сон, слабость, общая утомляемость, рассеянность, раздражительность, головные боли, плохое настроение, капризность, плаксивость и др. [Делягин В.М. Астенические состояния у детей и подростков. Медицинский совет. 2012; 3: 84-91; Шишкова В.Н. Астенический синдром в неврологической и общетерапевтической практике. Consilium Medicum. 2020; 22 (9): 65-67. DOI: 10.26442/20751753.2020.9.200343]. По разным данным встречаемость данного состояния у детей составляет от 3 до 15%. Значимость подобного рода состояний актуализировалась в период новой коронавирусной пандемии, а постковидный синдром и астения, которые его сопровождают, становится частой причиной обращения за медицинской помощью.

Для понимания существа вопроса следует пояснить, что проблема оценки влияния промышленного загрязнения окружающей среды на здоровье детского населения является актуальной для многих стран мира, в том числе и для России. Детская популяция представляет собой группу высокого риска, так как дети имеют ряд физиологических особенностей и характеризуются наличием критических периодов развития, большей чувствительностью к влиянию токсичных веществ.

Эпидемиологическими исследованиями показано, что за последние 20 лет увеличился уровень заболеваемости болезнями нервной системы и в определенной степени это объясняется воздействием химических загрязнений.

Из уровня техники известны технические решения: «Способ диагностики расстройства вегетативной нервной системы у девочек дошкольного возраста, ассоциированного с избыточной контаминацией биосред детей марганцем» (Патент РФ № 2773830) и «Способ диагностики у детей функционального расстройства центральной нервной системы, ассоциированного с сочетанным воздействием марганца, свинца, бензола, ксилола и стирола техногенного происхождения» (Патент РФ № 2622010), которые позволяют проводить диагностику заболевания нервной системы в условиях контаминации биосред ребенка токсикантами. В первом способе в качестве диагностических критериев используют наличие генотипа АА гена ММР-9 Gln279Arg (rs17576) и генотипа АА гена AGTR1 А1166С (rs5186), превышение содержания марганца в крови по сравнению с референтным уровнем и лабораторный показатель IgE к марганцу. Во втором способе в качестве диагностических критериев используют лабораторные показатели: уровни малонового диальдегида (МДА), ионизированного кальция, антиоксидантной активности сыворотки крови (АОА), уровня гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК), уровня глутаминовой кислоты, уровня серотонина, глутатионпероксидазы (ГлПО) и тиреотропного гормона (ТТГ), а также результаты КИГ ваготонического типа исходного вегетативного тонуса у ребенка.

Также известен способ определения предрасположенности к нарушению функции вегетативной нервной системы у женщин, ассоциированной с избыточной контаминацией гексаном (Патент РФ № 2766728), согласно которому определяют в моче содержание гексана, а в крови - содержание иммуноглобулина G (IgG) к гексану и уровень сывороточного серотонина. Проводят генотипирование полиморфизма гена GNB3 С825Т (rs5443). При одновременном выполнении следующих диагностических критериев: наличие генотипа С/С гена GNB3 С825Т (rs5443), превышение содержания гексана в моче более, чем в 10 раз по сравнению с фоновым уровнем, равным 0,01 мкг/см3, превышение по сравнению с верхней границей физиологической нормы уровня IgG к гексану более, чем в 2 раза и уровня содержания сывороточного серотонина выше 50-220 нг/мл, диагностируют у пациентки генетическую предрасположенность к нарушению функции вегетативной нервной системы, ассоциированной с избыточной контаминацией гексаном.

Из патента РФ № 2694230 известен способ прогнозирования уровня тревожности, согласно которому проводят выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипирование полиморфных локусов А218С гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-1 (ТРН1) и G-703T гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-2 (ТРН2) методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующей рестрикцией. При выявлении сочетания генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G прогнозируют высокий уровень тревожности, а при выявлении сочетания генотипов ТРН1 С/С и TPH2 G/G - низкий уровень тревожности.

Однако все указанные известные технические решения не позволяют проводить диагностику «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

Из ряда патентов известно использование в качестве диагностического критерия полиморфизм гена HTR2A (rs7997012) в целях диагностики ряда заболеваний:

- Способ анализа генетического полиморфизма для определения предрасположенности к шизофрении и алкоголизму (Патент РФ № 2565036);

- Способ оценки индивидуального риска формирования избыточной массы тела и ожирения у детей, потребляющих питьевую воду с повышенным содержанием хлороформа и тетрахлорметана (Патент РФ № 2619872).

Однако указанные известные технические решения не позволяют проводить диагностику «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

Из патента РФ № 2687731 известен способ диагностики у детей астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием. Согласно известному способу в пробе мочи ребенка определяют содержание алюминия. На детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма генов ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839). При одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839), при условии одновременного обнаружения у пациента превышения содержания алюминия в моче более чем в 1,3 раза по сравнению с референтным диагностируют у ребенка наличие астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием. Однако и данный способ не позволяет проводить диагностику «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

При этом из уровня техники не были выявлены известные способы диагностики «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием, поэтому сделать выбор ближайшего аналога к заявляемому объекту не представляется возможным.

Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в создании информативного и доказательного способа диагностики «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

Поставленный технический результат достигается предлагаемым способом диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием, согласно которому определяют токсикологические, лабораторные и генетические показатели, при этом в качестве токсикологических показателей определяют содержание алюминия в моче, в качестве лабораторных показателей определяют уровень серотонина в крови, а в качестве генетических показателей определяют полиморфизм гена HTR2A rs7997012 при помощи метода полимеразной цепной реакции путем исследования генотипов гена HTR2A rs7997012, и при одновременном выполнении следующих условий: при превышении содержания алюминия в моче ребенка в 3 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,01 мг/дм3, при уровне серотонина в крови более 200,0 нг/см3 , а также при наличии генотипа GG гена HTR2A rs7997012 диагностируют наличие синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

Указанный технический результат достигается за счет следующего.

Алюминий, как компонент аэрогенного загрязнения выбросами предприятий, попадая в организм, действует на многие органы и системы, так как легко образовывает соединения с белками и накапливается в почках, костной и нервной тканях. При этом большая часть алюминия выводится с мочой, и ряд исследователей рассматривают его концентрацию в моче в качестве индикаторного показателя хронической экзогенной интоксикации [Сопрун Л.А., Акулин И.М., Гвоздецкий А.Н., Строев Ю.И., Утехин В.И., Чурилов Л.П. Микроэлементы и региональная частота аутоиммунного заболевания щитовидной железы среди детей России. Биосфера. 2019; 11 (4): 201-210].

Накопление алюминия в организме может влиять на холинэргическую передачу нервного импульса. Клиническими проявлениями нейротоксического действия являются нарушения двигательной активности, судороги, снижение памяти, психопатические реакции, трудности в обучении [Шугалей И.В., Гарабаджиу А.В., Илюшин М.А., Судариков А.М. Некоторые аспекты влияния алюминия и его соединений на живые организмы. Экологическая химия. 2012; 21 (3): 172-186]. Алюминий как нейротропный металл может проникать через гематоэнцефалический барьер и необратимо накапливаться в ядрах нейронов головного мозга, а также в перинуклеарных областях астроцитов, оказывая влияние на ДНК-зависимый синтез РНК и инактивацию нейромедиаторов. Кроме этого, повреждается синаптическая передача нервных импульсов от нервных рецепторов к клеткам тканей внутренних органов, либо между нейронами центральной и периферической нервными системами с обязательным участием вегетативного ствола.

Невротические расстройства относятся к числу наиболее универсальных проявлений состояний дезадаптации после перенесённой вирусной инфекции, постковидного синдрома, в развитии которых важное значение имеют эндокринно-биохимические механизмы стрессорной реакции и полиморфные варианты генов серотонинергической системы [Рядовая Л.А., Гуткевич Е.В., Иванова С.А., Семке В.Я., Епанчинцева Е.М. Гормональные показатели и генетический полиморфизм в норме и при невротических связанных со стрессом, расстройствах. Бюллетень Сибирской медицины. 2008; 3: 19-23].

Серотонин (5-гидрокситриптамин), выполняя функции нейротрансмиттера и тканевого гормона, участвует в формировании и регуляции различных физиологических параметров организма, играя важную роль в поддержании гомеостаза. Характеризуя широкий спектр биологического действия серотонина, следует отметить, что он модулирует процессы высшей нервной деятельности, вызывает сокращение гладкой мускулатуры бронхов, кишечника, сосудов, оказывает выраженное влияние на миокард и другие органы и системы организма [Шур В.Ю., Самотруева М.А., Мажитова М.В., Тризно Н.Н., Файзиев Р.М., Петренко Л.В., Шур Ю.В. Серотонин: биологические свойства и перспективы клинического применения. Фундаментальные исследования. 2014; 7 (3): 621-629].

Повышение серотонинергической активности создает в коре головного мозга ощущение подъема настроения, одновременно может способствовать тревожным реакциям и депрессии. Серотонин является основным химическим медиаторным соединением, контролирующим выраженность тревожных проявлений на фоне меняющихся условий внешней среды [Рядовая Л.А., Гуткевич Е.В., Иванова С.А., Семке В.Я., Епанчинцева Е.М. Полиморфизм генов серотонинового обмена при невротических психических расстройствах у русских Западно-Сибирского региона. Вестник Томского государственного университета. 2009; 319: 198-202].

Рецептор серотонина 2А участвует в патофизиологии и лечении различных психических расстройств. Исследования генов-кандидатов показывают, что однонуклеотидные полиморфизмы гена HTR2A, включая rs7997012, могут влиять на риск психических расстройств и реакцию на лечение [Spies M., Nasser A., Ozenne B., Jensen P.S., Knudsen G.M., Patrick M Fisher P.M. Common HTR2A variants and 5-HTTLPR are not associated with human in vivo serotonin 2A receptor levels. Human Brain Mapping. 2020; 41 (16): 4518-4528].

Проведенные исследования показали, что особенности полиморфизма гена HTR2A (rs7997012) влияют на формирование синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей, а алюминий модифицирует ее течение.

Благодаря использованию в качестве исследуемого материала проб буккального эпителия (при определении наличия гена), крови и мочи, а также стандартных методик изучения иммунологических и генетических параметров, обеспечивается простота, надежность и доступность исследований, а также получение результатов нужной информативности.

Установление содержания химического контаминанта – алюминия, именно в моче, обусловлено тем, что моча является средой преимущественной элиминации из организма данного элемента, имеющего реферируемые уровни в данной биологической среде.

Благодаря использованию в качестве исследуемого материала буккального эпителия (пробы биологического материала со слизистой щеки) обеспечивается простота и надежность исследований, а также получение нужной информативности в плане выделения из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) проведения генотипирования полиморфизма гена HTR2A (rs7997012). При этом устанавливается для указанного гена одно из следующих его состояний: или АА – нормальный гомозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012); или AG - гетерозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012); или GG - вариантный гомозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012).

Именно благодаря расширению информационных показателей, связанных с полиморфным вариантом гена HTR2A (rs7997012), тропного к вегетативной нервной системе, определяющей синдром утомляемости после перенесенной вирусной инфекции, и одновременно с уровнем серотонина в крови, и количеством химического токсиканта – алюминия в моче, и будет обеспечена точность оценки модифицирующего влияния алюминия на риск возникновения «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

Клиническая значимость предлагаемых диагностических показателей доказана методом корреляционно-регрессионного анализа, а также доказана дополнительная информационная связь изменений указанных совокупных критериев с превышением в моче над фоновым уровнем содержания алюминия, что делает предлагаемый способ точным и достоверным.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что поставленный технический результат обеспечивается за счет совокупности всех операций предлагаемого способа, их последовательности и режимов его реализации.

При реализации предлагаемого способа осуществляют следующие операции в нижеуказанной последовательности:

1. Проводят отбор группы детей 4-7 лет одной этнической популяции, проживающих на неблагополучной по условиям проживания территории с повышенным содержанием в атмосфере воздуха алюминия. Затем проводят отбор пробы мочи для определения алюминия, отбор пробы крови у обследуемого ребенка – для определения уровня серотонина. Указанные показатели определяют:

- содержание алюминия - методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой на масс-спектрометре Agilent 7500сх («Agilent Technologies Inc.», США) в соответствии c методическими указаниями МУК 4.1.3589-19;

- уровень серотонина в сыворотке крови - методом иммуноферментного анализа согласно методике, изложенной в инструкции Serotonin FAST ELISA («ДРГ Техсистемс», Германия, EIA5061). В качестве физиологического диапазона содержания серотонина был принят диапазон, равный 50-200 нг/мл (Н.Тиц, 2003).

2. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия (в виде мазка со слизистой оболочки щеки). После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную пробирку типа «Эппендорф» с 500 мкл транспортной среды (стерильный 0,9%-ный раствор NaCl). Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.

Далее производят выделение ДНК из пробы. Для этого пробы в количестве 100 мкл лизируют 300 мкл лизирующего раствора, представляющего собой 0,5 %-ный раствор саркозила и протеиназы К (20 мг/мл) в ацетатном буфере (рН 7,5). Затем добавляют сорбент (каолин) и последовательными процедурами промывки отмывают фосфатно-солевым буфером (рН 7,2) пробы от белков и смесью изопропиловый спирт : ацетон от липидов. Нуклеиновые кислоты остаются при этом на сорбенте. Далее адсорбированные на сорбенте ДНК из пробы экстрагируют ТЕ-буфером, представляющим собой смесь 10 мМ трис-HCl и 1 мМ ЭДТА (рН 8,0). Экстракт подвергают центрифугированию. После центрифугирования пробирки надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК.

Полученный материал готов к постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР проводят на детектирующем амплификаторе с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» с использованием готовых наборов праймеров и зондов производства ЗАО «Синтол», Россия, в котором в качестве праймеров использовались участки ДНК гена HTR2A (rs7997012).

Проводят реакцию амплификации, это достигается тем, что для исследования аллельного состояния каждого гена у отдельного ребенка готовят свою реакционную смесь. В каждую пробирку вносят 0,1 мкл готовой смеси праймеров (принятый в генетике термин, обозначающий конечные нуклеотиды с меткой, ограничивающие (отрезающие) амплифицируемую цепочку нуклеотидов гена) и зондов для выбранного гена HTR2A (rs7997012) (использованы Наборы реагентов для определения полиморфизма гена HTR2A (rs7997012) (ЗАО «Синтол», Россия). В каждую пробирку добавляют остальные компоненты необходимые для осуществления ПЦР: нуклеотиды (дезоксинуклеозидтрифосфаты: по 10 мМ дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ), буфера (100 мМ трис-HCl-буфера, 500 мМ KCl, 40 мМ MgCl₂) и Tag F-полимеразы. Вносят пробу в количестве 10 мкл. Таким образом, общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Каждая пробирка плотно закрывается пробкой и устанавливается в амплификатор.

При проведении ПЦР амплификацию и детекцию проводят на детектирующем амплификаторе CFX96 фирмы Bio-Rad.

Используется универсальная программа амплификации, подобранная производителем реактивов. Она включает в себя несколько этапов: 1 этап – активация TaqF-полимеразы (режим «горячего старта») продолжается 15 мин при 95 °C; 2 этап – установочные циклы амплификации без измерения флуоресценции (5 циклов); 3 этап – рабочие циклы амплификации с измерением флюоресценции (40 циклов).

Каждый цикл амплификации включает в себя денатурацию ДНК (5 с при 95 °С), отжиг праймеров (20 с при 60 °С) и саму реакцию полимеризации ДНК (15 с при 72 °С).

Регистрация сигнала флюоресценции, возникающего при накоплении продуктов амплификации участков ДНК проводится в режиме «реального времени» после стадии отжига праймеров для выбранных генов по каналу VIC – для детекции одного из аллельных вариантов генов, и по каналу FAM – для альтернативного варианта.

Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флюоресценции с установленной на заданном уровне пороговой линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла (N) в соответствующей графе в таблице результатов, отображаемой в программном обеспечении для амплификатора CFX96.

По соотношению пороговых циклов, полученных по двум каналам детекции, определяют состояние гена HTR2A в исследуемом участке ДНК HTR2A (rs7997012) (метод аллельной дискриминации). Возможных вариантов состояния гена было два: гомозиготное – в случае, когда одно из значений порогового цикла не определяется (ниже пороговой линии) и гетерозиготное – в случае, когда получено два значения пороговых циклов и по этим каналам получены параболические кривые флюоресценции. В зависимости от того, накопление какого продукта амплификации происходит в реакции, устанавливается: АА – нормальный гомозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012); AG - гетерозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012); GG - вариантный гомозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012).

3. И при выполнении следующих условий: при превышении содержания алюминия в моче ребенка в 3 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,01 мг/дм³, при превышении уровня серотонина в крови по сравнению с верхней границей физиологической нормы, а также при одновременном наличии генотипа GG гена HTR2A (rs7997012), диагностируют наличие «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.

При проведении испытаний по реализации предлагаемого способа были сформированы две группы детей: группа наблюдения – 47 детей 4-7 лет, переболевшие КОВИД-19, страдающие симптомами постковидного синдрома; группа сравнения – 20 детей 4-7 лет, согласно опросу не болевших КОВИД-19, соответственно, с отсутствием проявлений постковидной астении.

Группы исследования были сопоставимы по возрасту, полу, этническому составу, сопутствующей патологии, социально-экономическому уровню семьи, качеству и составу питания.

У детей отбирали следующие биологические среды: мочу для химико-аналитического анализа на содержание алюминия методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой; буккальный эпителий для генотипирования полиморфизма A/G гена серотонинового рецептора HTR2A (rs7997012) на амплификаторе CFX96 методом полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени; кровь для определения уровня серотонина в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа на анализаторе Elx808.

В результате указанных исследований были получены следующие сравнительные данные, изложенные в таблицах 1 – 3.

В таблице 1 приведены данные по содержанию алюминия в моче детей в различных группах.

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, что детей группы наблюдения значимо повышено содержание алюминия в моче в 1,3 раза относительно группы сравнения (р<0,05).

В таблице 2 приведены данные по распределению аллелей гена HTR2A у детей различных групп.

Данные, приведенные в таблице 2, показывают, что при генетическом исследовании частоты встречаемости генотипов гена серотонинового рецептора HTR2A (rs7997012) в группах соответствовали равновесию Харди-Вайнберга (р>0,05), поэтому можно проанализировать генетические различия с применением мультипликативной модели наследования. Выявлено, что у детей группы наблюдения, экспонированных алюминием, частота встречаемости вариантного аллеля G гена HTR2A (rs7997012) выше в 1,6 раза относительно группы сравнения за счет вариантного генотипа G/G (р<0,05).

В таблице 3 приведены данные по установлению критериев диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3) у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием предлагаемым способом и установления его точности.

Иммуноферментный анализ крови показал (таблица 3), что у детей группы наблюдения повышена экспрессия нейромедиатора серотонина в 1,4 раза относительно детей без патологии нервной системы (р<0,05).

В качестве критерия возникновения нарушений функции центральной нервной системы «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» (G93.3) после перенесенной новой коронавирусной инфекции (постковидный синдром) у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием рекомендуется использовать вариантный гомозиготный генотип GG гена серотонинового рецептора HTR2A (rs7997012), отвечающий, наряду с лигандом (сывороточным серотонином), за формирование постковидной астении как ответа организма на воздействие стрессорных биологических и химических факторов окружающей среды.

Низкий уровень экспрессии гена серотонинового рецептора приводит к снижению синтеза продукта экспрессии гена – серотонинового рецептора. Серотонин-лиганд образуется преимущественно в слизистых. Эффекты серотонина возникают в результате его взаимодействия с серотониновыми рецепторами. В случае генетического «дефекта» экспрессии серотонинового рецептора, его дефицит приводит к накоплению в организме сывороточного серотонина и связанных с ним эффектов, в том числе, пролонгированное течение воспалительного процесса. Серотонин участвует в патогенезе заболеваний, связанных с воспалением и нарушениями микроциркуляции. В ходе воспалительной реакции значительные количества серотонина выделяются тромбоцитами и тучными клетками. Серотонин накапливается в тромбоцитах и освобождается при их агрегации.

Соединения алюминия как нейротропные соединения усугубляют явления астении и участвуют в формировании постковидной астенизации. Сочетание вариантного генотипа GG гена серотонинового рецептора HTR2A (rs7997012), контаминации биосред алюминием (содержание в моче более чем в 3 раза выше нормы), верифицированные избытком сывороточного серотонина характеризуют «синдром утомляемости после перенесенной вирусной болезни» (G93.3), в том числе синдром утомляемости после перенесенной новой коронавирусной инфекции (постковидный синдром) у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием

Таким образом, приведенные данные показывают, что при реализации заявляемого способа с использованием предлагаемых диагностических критериев обеспечивается его назначение.

Для иллюстративности предлагаемого способа ниже приведены два примера на конкретных пациентах.

Пример 1. Пациент, девочка-дошкольница 7 лет, русская, страдающая после перенесенной новой коронавирусной инфекции синдромом утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3). Клинические признаки этого состояния: тошнота, слабость, усталость, вялость, капризность, агрессивность, отсутствие прилежности и послушания, отставание в нервно-психическом развитии, сложности восприятия и обучения. Определяется уровень алюминия в моче выше референтного уровня в 6 раз – 0,06 мг/дм³. Определяется уровень содержания специфического IgG к алюминию в крови выше референтного уровня в 2,0 раза – 0,20 у.е. Определено наличие у девочки вариантного гомозиготного генотипа гена HTR2A (rs7997012) - GG. Содержание серотонина в крови – медиатора моноаминовой регуляции состояния и тонуса сосудов – 274,0 нг/см³, т.е. выше верхней границы нормы (<200 пг/мл) в 1,37 раза. Таким образом, установлено высокое содержание сывороточного серотонина на фоне повышенных по отношению к фоновому уровню значений содержания алюминия в моче, а также наличие вариантного гомозиготного генотипа GG гена HTR2A (rs7997012), ассоциированного с нарушением экспрессии серотонинового рецептора, что приводит к накоплению лиганда (сывороточного серотонина), поддержанию воспаления, нарушению микроциркуляции, избыточному тонусу сосудов и формированию астении, фенотипом которой у данного пациента выступает синдром утомляемости после перенесенной вирусной болезни, сопряженный с избыточной контаминацией алюминием.

Пример 2. Пациент, девочка-дошкольница 5 лет, русская, здорова, с отсутствием после перенесенной новой коронавирусной инфекции в анамнезе симптомов астении, не имеет патологии нервной системы. Определяется в моче уровень алюминия, который не превышает референтный диапазон – 0,01 мг/дм³. Определяется уровень содержания специфического IgG к алюминию в пределах референтного диапазона – 0,08 у.е. Отсутствует кандидатный генотип гена предиктора развития синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3) HTR2A (rs7997012) - GG (идентифицирован генотип АА). Содержание серотонина в крови – медиатора, отражающего степень астенизации – 90,0 нг/см³ – в диапазоне физиологической нормы (норма серотонина в крови –50-200,0 нг/см³). Таким образом, отсутствие вариантного гомозиготного генотипа GG гена HTR2A (rs7997012) на фоне допустимого по отношению к фоновому уровню содержания алюминия в моче, не приводит к развитию негативных эффектов в виде отклонения от нормы сывороточного серотонина, а также превышения уровня специфического IgG к алюминию, то есть в отсутствии негативной генетической программы, а также негативных экзогенных химических факторов, не формируется развитие синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3) у данного пациента.

Таким образом, реализация способа диагностики «синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни» у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием позволяет предложить систему критериев возникновения и течения данной патологии у детей-дошкольников, что, в свою очередь, позволит оптимизировать мероприятия по коррекции данного состояния у детей.

Таблица 1. Содержание алюминия в моче детей в различных группах

Показатель Группа наблюдения
(n=47) Группа сравнения
(n=20) p Алюминий [моча], мг/дм³ 0.072±0.001 0.054±0.0012 0.03

n – количество детей; p – достоверность.

Таблица 2. Распределение частот аллелей гена HTR2A у детей

Ген Аллели Группа наблюдения
(n=47) Группа сравнения
(n=20) OR (95% CI) p HTR2A
(rs7997012) A 0.49 0.68 0.44 (0.20-0.98) 0.04 G 0.51 0.32 2.26 (1.06-4.77)

OR- оценка шансов; CI- 95% доверительный интервал; p-уровень значимости.

Таблица 3. Данные по установлению критериев диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3) у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием предлагаемым способом и установления его точности

Пациент Содержание алюминия в моче, мг/дм³
(референтный уровень не более 0,01 мг/дм³) Генотип гена HTR2A (rs7997012)
A/G, определенного в пробе буккального эпителия Уровень сывороточного серотонина, нг/см³
(норма 50 — 200 нг/см³) Уровень IgG к алюминию,
у.е
(норма 0-0,1) Пациенты с синдромом утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3), контаминированные алюминием >0,01 мг/дм³ и наличием мутантного аллеля G (генотипа GG) гена серотонинового рецептора HTR2A(rs7997012) 1. (5 лет) 0,05 GG 249 0,22 2. (4 года) 0,06 GG 280 0,180 3. (7лет) 0,06 GG 274 0,20 4. ( 6 лет) 0,03 GG 245 0,25 Пациенты без проявлений синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3), не контаминированные алюминием <0,01 мг/дм³ и отсутствием мутантного аллеля G (генотип АА) гена серотонинового рецептора HTR2A(rs7997012) 5. (5 лет) 0,01 AA 64 0,09 6. (6 лет) 0,01 AA 100 0,10 7. (5 лет) 0,01 AА 98 0,09 8. (4 года) 0,01 AА 85 0,08 9. (6 лет) 0,01 AА 90 0,08 Пациенты без проявлений синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3), не контаминированные алюминием <0,01 мг/дм³ и присутствием мутантного аллеля G (генотип GG) гена серотонинового рецептора HTR2A(rs7997012) 10. (7 лет) 0,01 GG 150 0,08 11. (7 лет) 0,01 GG 169 0,05 12. (5 лет) 0,01 GG 200 0,09 Пациенты без проявлений синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни (G93.3), контаминированные алюминием >0,01 мг/дм³ и отсутствием мутантного аллеля G (генотип АА) гена серотонинового рецептора HTR2A(rs7997012) 13. (5 лет) 0,015 AA 166 0,16 14. (6 лет) 0,019 AA 71 0,19

Примечание: АА – нормальный гомозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012); AG - гетерозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012); GG - вариантный гомозиготный генотип гена HTR2A (rs7997012)

Изобретение относится к медицине, а именно к профилактической медицине, экологии человека и педиатрии, и может быть использовано для диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием. При превышении содержания алюминия в моче ребенка в 3 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,01 мг/дм³, при уровне серотонина в крови более 200,0 нг/см³, а также при наличии генотипа GG гена HTR2A rs7997012 диагностируют наличие синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием. Способ обеспечивает повышение информативности и доказательности диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием за счет одновременного определения токсикологических, лабораторных и генетических показателей. 3 табл., 2 пр.

Способ диагностики синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием, характеризующийся тем, что определяют токсикологические, лабораторные и генетические показатели, при этом в качестве токсикологических показателей определяют содержание алюминия в моче, в качестве лабораторных показателей определяют уровень серотонина в крови, а в качестве генетических показателей определяют полиморфизм гена HTR2A rs7997012 при помощи метода полимеразной цепной реакции путем исследования генотипов гена HTR2A rs7997012, и при одновременном выполнении следующих условий: при превышении содержания алюминия в моче ребенка в 3 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,01 мг/дм³, при уровне серотонина в крови более 200,0 нг/см³, а также при наличии генотипа GG гена HTR2A rs7997012 диагностируют наличие синдрома утомляемости после перенесенной вирусной болезни у детей 4-7 лет в условиях контаминации алюминием.