Способ определения ранних проявлений дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом Российский патент 2023 года по МПК G01N33/58 G01N33/543 G01N30/72 C12Q1/6806 C12Q1/6827 C12Q1/686 C12Q1/6876 C12Q1/6883 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской экологии, гигиенической диагностике. Изобретение может быть использовано для определения ранних проявлений дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет под воздействием свинца.

Дорсопатии - это группа заболеваний костно-мышечной системы и соединительной ткани, симптомокомплексом которых является боль в туловище и конечностях невисцеральной этиологии (согласно Международной классификации болезней (МКБ-10) деформирующие дорсопатии относятся к классу М43). Кроме нарушения осанки, наличия скелетных патологий системного характера и некоторых заболеваний, сопровождающихся деформацией позвоночника, факторами риска дорсопатии грудного отдела является ослабление защитных механизмов позвоночника.

Дорсалгия – это объединенное понятие, дословно с латинского языка переводящееся как боль в спине (согласно Международной классификации болезней (МКБ-10) дорсалгия относится к классу М54.9). Включает в себя все болезни позвоночного столба, главный симптом которых – боль в любой части спины и позвоночника.

Актуальность настоящего изобретения обусловлена большим распространением патологии позвоночника, которая, по данным статистки, встречается у 20-30% подростков к окончанию школы. Дорсопатии (или как раньше было принято называть - остеохондроз позвоночника) является одной из ведущих проблем. Быстрая утомляемость и боли в спине снижают возможности детей к занятию спортом, а в будущем ограничивают выбор профессии.

В детском возрасте формируются все основные патологические двигательные стереотипы, которые с возрастом только закрепляются и приводят к ухудшению функционирования всего опорно-двигательного аппарата. Все больше детей сегодня жалуется на головные боли, повышенную утомляемость, плохую успеваемость, боли в области спины, шеи и т.д. Нередко причиной данных симптомов у детей являются начальные проявления остеохондроза позвоночника, что зачастую обусловлено гиподинамией, длительными занятиями за компьютером и т.д.

Среди химических факторов риска развития негативных эффектов со стороны болезни костно-мышечной системы и соединительной ткани к числу приоритетных по уровню и частоте воздействия относится свинец. Широкое использование свинца в различных отраслях промышленности, выделение его с выбросами автотранспорта обусловило риск непрофессионального воздействия на организм неработающего населения, в том числе детей и подростков.

Следует пояснить, что дорсопатия относится к одному из заболеваний костно-мышечной системы. Еще одним заболеванием, связанным с нарушением костно-мышечной системы, является сколиоз (М41).

В уровне техники не были установлены известные методы, основанные на генетических исследованиях для диагностики дорсопатии, но были установлены известные способы, диагностирующие сколиоз. Учитывая, что эти два заболевания объединены единым заболеваниям, связанным с нарушением костно-мышечной системы, то обзор уровни техники включает методы для диагностики сколиоза.

Исследованиями последних лет было убедительно показано, что первичные генетические нарушения в системе регулирования роста и развития организма могут лежать в основе различных деформаций позвоночника, в том числе идиопатического сколиоза [Sanders J.O., Finegold D.N. Maturity assessment and curve progression in girls with idiopathic scoliosis // J.Bone Joint Surg. Am. 2007. Vol.89. P.64-73. Viola S., Peter F., Nagy I.S., Gyorgy I. GH-IGF-I axis in young patients with adolescent idiopathic scoliosis (AIS) and Scheuermann's disease (SD) coupled with AIS. // 10^th International Philip Zorab Symposium: Programme and abstracts / Oxford. 1998. Yeung H.Y., Tang N.L., Lee K.M., Nq B.K., Hung V.W., Kwok R., Guo X., Oin L., Cheng J.C. Genetic association study of insulin-like growth factor-I (IGF-I) gene with curve severity and osteopenia in adolescent idiopathic scoliosis. // Studies in health technology and informatics 2006. Vol.123. P.18-24]. Хотя регуляция структурно-функциональной организации костно-мышечной системы достаточно сложна и включает в себя большое количество звеньев, генетически детерминированными являются различные факторы роста, характеризующиеся выраженными межиндивидуальными различиями в активности и экспрессии, что связано с наличием в структуре их генов функционально неравнозначных полиморфных аллелей.

Из патента РФ №2203497 известен способ диагностики метаболических костных  заболеваний. Способ обеспечивает высокую специфичность и точность измерения уровня нового маркера, который позволяет производит более точную диагностику метаболических костных заболеваний. Проводят исследование биологической жидкости, при этом во взятой биологической жидкости определяют концентрацию мономерного и гомодимерного типов фактора, ингибирующего остеокластогенез (OCIF), с помощью моноклональных антител, одинаково распознающих мономерный и гомодимерный типы OCIF и имеющих константу диссоциации менее 10-9М с антигеном или избирательно распознающих димерный тип OCIF и имеющих константу диссоциации менее 2•10-7 М с антигеном. Для количественного определения концентрации OCIF заявлено также моноклональное антитело, которое способно одинаково распознавать мономерный и гомодимерный типы OCIF, и моноклональное антитело, способное избирательно распознавать димерный тип OCIF, а также набор, содержащий, указанные выше антитела.

Из патента РФ № 2456925 известен способ прогнозирования риска развития идиопатического сколиоза у детей. Для прогнозирования риска развития идиопатического сколиоза у детей выделяют полиморфизм С-509Т гена трансформирующего фактора роста β1 из периферической венозной крови пациентов. При выявлении генотипа -509ТТ прогнозируют повышенный риск развития идиопатического сколиоза. При выявлении генотипов -509СТ и -509СС прогнозируют отсутствие риска развития идиопатического сколиоза у детей. Способ позволяет прогнозировать риск развития идиопатического сколиоза у детей на основании выявления полиморфизма С-509Т гена трансформирующего фактора роста β1

Также из уровня техники (Патент РФ № 2762429) известен способ диагностики генетической предрасположенности к идиопатическому сколиозу, включающий в себя выделение из периферической крови геномной ДНК и выявление данных о наличии полиморфизмов генов, при этом выделение из периферической крови геномной ДНК проводят при помощи известного метода молекулярной генетики, проводят совместное выявление патогенных аллелей гена CHD7 и гена SNTG1, при этом диагностическим признаком генетической предрасположенности к идиопатическому сколиозу является наличие сочетания генотипов SNTG1 С/С, А>С, K26Q, rs35384568 и CHD7 G/G, A>G, rs1231738122. А в качестве известного метода молекулярной генетики используют метод полимеразной цепной реакции.

Недостатками указанных известных способов является то, что алгоритм и техника выполнения диагностических процедур предрасположенности либо развития костных заболеваний не учитывает модификацию патологического процесса экзогенными химическими факторами, в частности, свинцом.

При этом из уровня техники не были выявлены известные способы определения ранних проявлений дорсопатии с явлениями дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом, поэтому сделать выбор ближайшего аналога к заявляемому объекту не представляется возможным.

Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении достоверности определения проявлений дорсопатии с явлениями дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом, с обеспечением возможности в последующем судить о развитии таких состояний у детей уже на ранних стадиях его формирования.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом определения ранних проявлений дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом, характеризующийся тем, что определяют токсикологические, лабораторные и генетические показатели, при этом в качестве токсикологических показателей определяют содержание свинца в крови, в качестве лабораторных показателей определяют уровень дофамина в крови, а в качестве генетических показателей определяют при помощи метода полимеразной цепной реакции полиморфизм генов DRD2 и MTRR, используя в качестве праймера участок ДНК путем исследования генотипов гена DRD2 C2137T (rs1800497), устанавливая при этом для указанного гена генотип СТ и ТТ, и гена MTRR A66G (rs1801394), устанавливая при этом для указанного гена генотип AG и GG, и при одновременном выполнении следующих условий: при превышении содержания свинца в крови ребенка в 1,45 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,0144±0,001мг/л, при превышении уровня дофамина по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 44 пг/см³, не менее, чем в 1,5 раза, а также при наличии комбинации генотипа СТ или ТТ гена DRD2 C2137T (rs1800497) и генотипа AG или GG гена MTRR A66G (rs1801394) у детей среднего школьного возраста 11-15 лет определяют ранние проявления дорсалгии, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом.

Поставленный технический результат обеспечивается за счет следующего.

Детская популяция представляет собой группу высокого риска, так как дети имеют ряд физиологических особенностей, характеризуются наличием критических периодов развития, большей чувствительностью к влиянию токсичных веществ.

При воздействии химических соединений в первую очередь страдают неспецифические звенья защитных систем, в частности, иммунная и биохимическая системы, обеспечивающие поддержание гомеостаза. Комплекс биохимических реакций, направленных на метаболизм и трансформацию токсических соединений экзогенного происхождения, определяет развитие адаптационно-компенсаторных процессов. Нарушение согласованности этапов биотрансформации, являясь одним из общих механизмов эндогенной интоксикации, способствует возникновению болезней костно-мышечной системы и соединительной ткани.

Такой токсикант, как свинец, оказывает неблагоприятное воздействие именно на возникновение болезней костно-мышечной системы и в частности, дорсопатии. Это обусловлено тем, что в ходе длительной кумуляции и метаболизма в организме этот тяжелый металл,  конкурентно взаимодействуя с кальцием в костной ткани и разбалансируя витаминно‐минеральный обмен, приводит к деминерализации костной ткани. Под влиянием катионов свинца изменяются не только концентрация дофамина в клетках, но и скорость его оборота.

Благодаря расширению в предлагаемом способе прогностических информационных показателей (одновременное использование лабораторных и генетических показателей) и одновременно с сочетанным наличием химического токсиканта – свинца, в пробе крови и будет обеспечена точность оценки диагностики влияния этого соединения на возможное развитие указанной патологии.

Полиморфизм гена метионин-синтаза-редуктаза MTRR проявляется в замене аденина (А) на гуанин (G) и обозначается как генетический маркер A2756G. Следовательно, изменяются и биохимические свойства фермента, в котором происходит замена аминокислоты изолейцина на метионин. В результате этой замены функциональная активность фермента снижается, что приводит к повышению риска такого нарушения развития плода, как дефект невральной трубки, ассоциированной с дорсопатией пояснично-крестцового отдела позвоночника.

Наличие генотипа GG или AG по гену MTRR приводит не только к накоплению гомоцистеина, но и недостатку метионина, что снижает эффективность процессов детоксикации свинцовой нагрузки. Это приводит к накоплению дельтааминолевулиновой кислоты и вытеснению кальция из костной ткани, который формирует увеличение в биосредах количество ионизированного кальция. Фенотипически данный механизм сопровождается клиническими проявлениями остеохондроза (дорсопатии).

Дофамин — представитель класса молекул, называемых катехоламинами, которые служат в качестве нейротрансмиттеров и гормонов. В мозге дофамин является нейротрансмиттером и выпускается нервными клетками, чтобы подавать сигналы другим нервным клеткам. В периферической нервной системе дофамин выступает местным химическим посредником (синаптическим медиатором) в некоторых частях тела. Уже известно, что дофамин играет важную роль в мышлении, памяти, движении и вознаграждении. Однако недавно исследователи показали, что дофаминергическая нейротрансмиссия играет центральную роль в модулировании восприятия боли и анальгезии в определенных частях мозга, включая островковый аппарат, таламус, базальные ганглии, переднюю поясную кору и периакведуктальное серое вещество. Исследователи из Техасского университета опубликовали в Journal of Neuroscience исследование, показывающее, что дофамин может играть ключевую роль в поддержании хронической боли, в частности, дорсалгии. Исследователи проследили сигнальный путь боли между головным и спинным мозгом на примере животных и обнаружили, что удаление клеток, продуцирующих дофамин, уменьшает хроническую боль.

Аномальная дофаминергическая нейротрансмиссия также была продемонстрирована при болезненных состояниях. Дофамин воздействует на специфические дофаминовые рецепторы, располагающиеся на поверхности нейронов (в синапсах – местах контакта нейронов между собой). Нарушение работы дофаминеэргичесокой системы ассоциировано с неврологическими и психическими заболеваниями. А дофаминовые рецепторы часто являются мишенями действия различных лекарственных препаратов.

Наши исследования показали, что особенности полиморфизма генов кандидатов (дофаминового рецептора и метионин-синтазы-редуктазы) влияют на формирование дорсопатии, а свинец модифицирует ее течение, формируя хронический болевой синдром (дорсалгию), являясь предикторами развития деформирующей дорсопатии неуточненной с явлениями дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет.

Клиническая значимость предлагаемых показателей доказана методом корреляционно-регрессионного анализа, а также доказана дополнительная информационная связь изменений указанных совокупных критериев с превышением в крови над фоновым уровнем содержания свинца, что делает предлагаемый способ точным и достоверным.

Генетический профиль детей с дорсопатией и избыточной контаминацией свинцом (0,0207±0,0013мг/л, контроль – дорсопатия у детей не контаминированных свинцом - 0,0102±0,0011мг/л; норма 0,0144±0,001мг/л) отличается повышенной частотой Т-аллеля гена рецептора дофамина DRD2 (rs1800497), C2137T (мультипликативная модель: показатель отношения шансов OR=3,76; доверительный интервал 95%CI=1,53-9,28, вероятность p=0,0029); и соответствующих СТ и ТТ генотипов гена (p=0,0088; показатель относительного риска RR=1,73; 95%CI=1,33-2,22); а также повышенной частотой G-аллеля гена метионин-синтаза-редуктаза MTRR (rs1801394) A66G (мультипликативная модель: OR=5,40; 95%CI=1,53-19,05, p=0,0056); и соответствующих AG и GG генотипов гена (p=0,0038; OR=5,95; 95%CI=1,22-28,95; RR=1,77; 95%CI=1,23-2,53); общая модель: OR=1,51; 95%CI =1,05-2,17, p<0,05); что соотносится с выявленной пониженной экспрессией дофамина и избыточным уровнем ионизированного кальция.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что поставленный технический результат обеспечивается за счет совокупности всех операций предлагаемого способа, их последовательности и режимов его реализации.

При реализации предлагаемого способа осуществляют следующие операции в нижеуказанной последовательности:

1. Проводят отбор группы школьников 11-15 лет одной этнической популяции, проживающих на неблагополучной по условиям проживания территории с повышенным содержанем в атмосфере воздуха свинца. Затем проводят отбор пробы крови у обследуемого ребенка – для определения содержания свинца в крови и уровня дофамина. Указанные показатели определяют:

- содержание свинца - методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой на масс-спектрометре Agilent 7500сх («Agilent Technologies Inc.», США) в соответствии c методическими указаниями МУК 4.1.3230 –14 и МУК 4.1.3161 – 14;

- уровень дофамина - методом иммуноферментного анализа согласно инструкции к коммерческому набору Dopamine ELISA Fast Track (Labor Diagnostika Nord GmbH,Германия).

2. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия (в виде мазка со слизистой оболочки щеки). После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную пробирку типа «Эппендорф» с 500 мкл транспортной среды (стерильный 0,9 %-ный раствор NaCl). Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.

Далее производят выделение ДНК из пробы. Для этого пробы в количестве 100 мкл лизируют 300 мкл лизирующего раствора, представляющего собой 0,5 %-ный раствор саркозила и протеиназы К (20 мг/мл) в ацетатном буфере (рН 7,5). Затем добавляют сорбент (каолин) и последовательными процедурами промывки отмывают фосфатно-солевым буфером (рН 7,2) пробы от белков и смесью изопропиловый спирт : ацетон от липидов. Нуклеиновые кислоты остаются при этом на сорбенте. Далее адсорбированные на сорбенте ДНК из пробы экстрагируют ТЕ-буфером, представляющим собой смесь 10 мМ трис-HCl и 1 мМ ЭДТА (рН 8,0). Экстракт подвергают центрифугированию. После центрифугирования пробирки надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК.

Полученный материал готов к постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР проводят на детектирующем амплификаторе с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» с использованием готовых наборов праймеров и зондов производства ЗАО «Синтол», Россия, в котором в качестве праймеров использовались участки ДНК гена DRD2 C2137T (rs1800497) и гена MTRR A66G (rs1801394)

Проводят реакцию амплификации, это достигается тем, что для исследования аллельного состояния каждого гена у отдельного ребенка готовят свою реакционную смесь. В каждую пробирку вносят 0,1 мкл готовой смеси праймеров (принятый в генетике термин, обозначающий конечные нуклеотиды с меткой, ограничивающие (отрезающие) амплифицируемую цепочку нуклеотидов гена) и зондов для выбранных гена DRD2 C2137T (rs1800497) и гена MTRR A66G (rs1801394) (использованы Наборы реагентов для определения полиморфизма гена DRD2 C2137T (rs1800497) и гена MTRR A66G (rs1801394) (ЗАО «Синтол», Россия). В каждую пробирку добавляют остальные компоненты необходимые для осуществления ПЦР: нуклеотиды (дезоксинуклеозидтрифосфаты: по 10 мМ дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ), буфера (100 мМ трис-HCl-буфера, 500 мМ KCl, 40 мМ MgCl₂) и Tag F-полимеразы. Вносят пробу в количестве 10 мкл. Таким образом, общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Каждая пробирка плотно закрывается пробкой и устанавливается в амплификатор.

При проведении ПЦР амплификацию и детекцию проводят на детектирующем амплификаторе CFX96 фирмы Bio-Rad.

Используется универсальная программа амплификации, подобранная производителем реактивов. Она включает в себя несколько этапов: 1 этап – активация TaqF-полимеразы (режим «горячего старта») продолжается 15 мин при 95 °C; 2 этап – установочные циклы амплификации без измерения флуоресценции (5 циклов); 3 этап – рабочие циклы амплификации с измерением флюоресценции (40 циклов).

Каждый цикл амплификации включает в себя денатурацию ДНК (5 с при 95 °С), отжиг праймеров (20 с при 60 °С) и саму реакцию полимеризации ДНК (15 с при 72 °С).

Регистрация сигнала флюоресценции, возникающего при накоплении продуктов амплификации участков ДНК проводится в режиме «реального времени» после стадии отжига праймеров для выбранных генов по каналу VIC – для детекции одного из аллельных вариантов генов, и по каналу FAM – для альтернативного варианта.

Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флюоресценции с установленной на заданном уровне пороговой линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла (N) в соответствующей графе в таблице результатов, отображаемой в программном обеспечении для амплификатора CFX96.

По соотношению пороговых циклов, полученных по двум каналам детекции, определяют состояние гена DRD2 в исследуемом участке ДНК C2137T (rs1800497), а также гена MTRR в исследуемом участке ДНК A66G (rs1801394) (метод аллельной дискриминации). Возможных вариантов состояния гена было два: гомозиготное – в случае, когда одно из значений порогового цикла не определяется (ниже пороговой линии) и гетерозиготное – в случае, когда получено два значения пороговых циклов и по этим каналам получены параболические кривые флюоресценции. В зависимости от того, накопление какого продукта амплификации происходит в реакции, устанавливается вариантное гомозиготное (GG) или гетерозиготное (АG) состояние гена MTRR A66G (rs1801394), а также устанавливается вариантное гомозиготное (ТТ) или гетерозиготное (СТ) состояние гена DRD2 C2137T (rs1800497).

3. И при выполнении следующих условий: при одновременном наличии комбинации СТ и ТТ генотипа гена DRD2 C2137T (rs1800497), а также генотипа AG и GG гена MTRR A66G (rs1801394), при превышении содержания свинца в крови ребенка в 1,45 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,0144±0,001мг/л, при повышении уровня сывороточного дофамина по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 44 пг/см³, в 1,5 и более раз, делают вывод о наличии ранних проявлений дорсопатии с явлениями дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом.

При проведении испытаний по реализации предлагаемого способа были сформированы несколько группы детей:

Первая группа наблюдения – дети, в крови которых установлено повышенное содержание свинца, с диагнозом «дорсопатия» с болевым синдромом дорсалгия (26 чел).

Вторая группа наблюдения - дети, в крови которых установлено повышенное содержание свинца, с диагнозом «дорсопатия», но без болевого синдрома дорсалгия (24 чел).

Третья группа сравнения - дети, в крови которых не установлено повышенное содержание свинца, и без диагноза «дорсопатия» (24 чел).

Группы исследования были сопоставимы по возрасту, полу, этническому составу, сопутствующей патологии, социально-экономическому уровню семьи, качеству и составу питания.

У всех обследуемых детей была взята проба венозной крови, исследование которых проводилось по вышеуказанной схеме. Также была взята проба буккального эпителия для установления по реакции ПЦР полиморфизма исследуемых генов.

Данные, полученные в результате исследований для детей из группы наблюдения и группы сравнения, приведены в таблице 1.

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, что у пациентов, которым поставлен диагноз дорсопатия с дорсалгией (примеры 1-6), выявлены одновременно следующие обстоятельства: превышение содержания свинца в крови ребенка в 1,45 – 2,8 раза по сравнению с нормой, равной 0,0144±0,001мг/л; превышение уровня дофамина по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 44 пг/см³ , составляет в 1,50 –1,99 раза, а также наличие комбинации СТ и ТТ генотипа гена DRD2 C2137T (rs1800497) и генотипа AG и GG гена MTRR A66G (rs1801394). Доказательством тому, что у пациентов действительно имеется заболевание дорсопатия с элементами дорсалгии, дополнительно служат показатели по ионизированному кальцию, который был выше верхней границы нормы не менее, чем на 13,6% (13,6-18,2%) у всех пациентов.

В то время как у пациентов с заболеванием дорсопатия без дорсалгии (примеры 7-10) наблюдалось следующее отличие от пациентов первой группы наблюдения: наличие комбинации СТ и ТТ генотипа гена DRD2 C2137T (rs1800497) и генотипа AG и GG гена MTRR A66G (rs1801394) присутствовало, однако отсутствовал свинец в крови выше нормы; превышение дофамина по сравнению с нормой было 1,25 – 1,4 раза, кальций ионизированный превышал норму не более, чем на 1,8% (1,8-5,5%) у всех пациентов.

В группе сравнения у пациента (пример 11) даже при превышении свинца в крови в 1,46 раза по сравнению с нормой, дорсопатия не выявлена, т.к. у него отсутствует одновременное наличие других диагностических показателей: нет комбинации СТ и ТТ генотипа гена DRD2 C2137T (rs1800497) и генотипа AG и GG гена MTRR A66G (rs1801394), отсутствует превышение дофамина по сравнению с нормой. Исходя из этого кальций ионизированный также был в пределах нормы. Это доказывает достоверность предлагаемого способа.

Таким образом, заявляемый способ позволяет уже на ранних стадиях устанавливать проявления дорсопатии с явлениями дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом.

Таблица 1

№ Пациент DRD2 C2137T
(rs1800497) С/Т MTRR A66G
(rs1801394) A/G Свинец в крови,
мг/ дм³ Дофамин, пг/см³ Ионизированный Са, ммоль/дм³ Первая группа наблюдения (дети с дорсопатией и дорсалгией) 1 Пациент, 11 лет TT GG 0,040 (выше нормы в 2,8 раз) 78,1 (выше верхней границы нормы в 1,8 раз) 1,30 2 Пациент, 15лет TT АG 0,034 (выше нормы в 2,4 раз) 71,0 (выше верхней границы нормы в 1,6 раз) 1,28 3 Пациент, 13 лет TT GG 0,041 (выше нормы в 2,8 раз) 85,3 (выше верхней границы нормы в 1,9 раз) 1,29 4 Пациент, 14 лет СT GG 0,024 (выше нормы в 1,7 раз) 68,0 (выше верхней границы нормы в 1,5раз) 1,30 5 Пациент, 13 лет TT GG 0,036 (выше нормы в 2,5 раз) 87,6 (выше верхней границы нормы в 1,99 раз) 1,25 6 Пациент, 11 лет СT АG 0,021 (выше нормы в 1,45 раз) 66,2 (выше верхней границы нормы в 1,5 раз) 1,26 Вторая группа наблюдения (дети с дорсопатией без дорсалгии) 7 Пациент, 14 лет СТ АG 0,011 55,3 1,16 8 Пациент, 13 лет СT GG 0,007 65,9 1,12 9 Пациент, 11 лет TT АG 0,008 63,0 1,12 10 Пациент, 15 лет TT GG 0,010 57,1 1,15 Группа сравнения (дети без дорсопатии) 11 Пациент, 11 лет СС АА 0,021 33,1 1,0 12 Пациент, 11 лет СТ АА 0,001 38,4 1,01 13 Пациент, 15 лет СС АG 0,003 43,1 1,06 норма 0,0144
±0,001 5,6 – 44 1,0-1,10

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской экологии, гигиенической диагностике, и может быть использовано для определения ранних проявлений дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом. При превышении содержания свинца в крови ребенка в 1,45 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,0144±0,001 мг/л, превышении уровня дофамина по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 44 пг/см³, не менее чем в 1,5 раза и при наличии комбинации генотипа СТ или ТТ гена DRD2 C2137T (rs1800497) и генотипа AG или GG гена MTRR A66G (rs1801394) определяют ранние проявления дорсалгии, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом. Способ обеспечивает достоверность определения ранних проявлений дорсопатии с явлениями дорсалгии, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом, у детей среднего школьного возраста 11-15 лет за счет одновременного определения токсикологических, лабораторных и генетических показателей. 1 табл., 6 пр.

Способ определения ранних проявлений дорсалгии у детей среднего школьного возраста 11-15 лет, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом, характеризующийся тем, что определяют токсикологические, лабораторные и генетические показатели, при этом в качестве токсикологических показателей определяют содержание свинца в крови, в качестве лабораторных показателей определяют уровень дофамина в крови, а в качестве генетических показателей определяют при помощи метода полимеразной цепной реакции полиморфизм генов DRD2 и MTRR, используя в качестве праймера участок ДНК, путем исследования генотипов гена DRD2 C2137T (rs1800497), устанавливая при этом для указанного гена генотип СТ и ТТ, и гена MTRR A66G (rs1801394), устанавливая при этом для указанного гена генотип AG и GG, и при одновременном выполнении следующих условий: при превышении содержания свинца в крови ребенка в 1,45 и более раз по сравнению с нормой, равной 0,0144±0,001 мг/л, при превышении уровня дофамина по сравнению с верхней границей физиологической нормы, равной 44 пг/см³, не менее чем в 1,5 раза, а также при наличии комбинации генотипа СТ или ТТ гена DRD2 C2137T (rs1800497) и генотипа AG или GG гена MTRR A66G (rs1801394) у детей среднего школьного возраста 11-15 лет определяют ранние проявления дорсалгии, ассоциированной с контаминацией биосред свинцом.