СРЕДСТВО, ПОВЫШАЮЩЕЕ ИНТЕНСИВНОСТЬ ПРЕНАТАЛЬНОГО ИММУНОГЕНЕЗА У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/315 A61K31/131 A61K31/133 A61K31/28 A61P37/04 

Изобретение относится к области медицины и касается средства, стимулирующего пренатальный иммуногенез экспериментальных животных, в частности белых лабораторных мышей.

Известно иммуномодулирующее средство, обладающее иммунотропной активностью - комбинированный препарат исмиген. Это поливалентный лизат из антигенов, полученных из 13 штаммов инактивированных патогенных бактерий, которые являются наиболее распространенными возбудителями инфекций дыхательных путей: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Streptococcus pneumoniae (типы TY1/EQ11, TY2/EQ22, TY3/EQ14, TY5/EQ15, TY8/EQ23, TY47/EQ24), Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Haemophilus influenzae B, Neisseria catarrhalis. Исмиген оказывает действие на различные звенья иммунитета, стимулирует как местный клеточный и гуморальный иммунный ответ, так и системный иммунный ответ.

Таким образом, исмиген обладает способностью эффективно стимулировать как врожденный (благодаря стимуляции и созреванию дендритных клеток, NK-клеток и гранулоцитов), так и адаптивный (благодаря специфической стимуляции Т- и В-лимфоцитов и секреции необходимых антител) иммунитет (Рязанцев С.В., Коноплев О.И., Сапова К.И. Бактериальные лизаты в лечении заболеваний дыхательных путей и ЛОР-органов // РМЖ. 2015. №23. С. 1387-1390).

Недостатком данного препарата является недостаточно эффективное влияние его на пренатальный иммуногенез.

Ближайшим аналогом (прототипом) является БАД трекрезан. Данный препарат относится к фармакотерапевтической группе адаптогенов и обладает воздействием на иммунную систему, кроме этого препарат малотоксичен и является иммуномодулятором (Воронков М.Г., Расулов М.М. Трекрезан - родоначальник нового класса адаптогенов и иммуномодуляторов (обзор). Химико-фармацевтический журнал. 2007; 41(1):3-7, Шабанов П.Д., Мокренко Е.В. Новый иммуномодулятор и адаптоген трекрезан как средство профилактики и лечения простудных воспалительных заболеваний // Вестник Смоленской государственной медицинской академии. 2014. №2).

Трекрезан, состоит из оксиэтиламмония метилфеноксиацетата, крахмала картофельного, сахара молочного (лактозы моногидрата), кальция стеариновокислого (кальция стеарата).

Согласно постановлению главного санитарного врача РФ №50 от 17.04.2003 г. о необязательности точного количественного состава биологически активных добавок, информация о данной БАД содержит ингредиентный состав в порядке убывания в весовом выражении.

Трекрезан улучшает внутриутробное развитие эмбриона и повышает жизнеспособность потомства экспериментальных животных (Павел Ю.Г., Карус А.Л., Кумар Ю.А., Шаттшнейдер Т.К., Воронков М.Г. Стимулирование трекрезаном антителогенеза потомства экспериментальных животных в эмбриональный период // Докл. РАН, 2002, Т. 385. - №3. - С. 419-421).

Недостатком трекрезана является относительно небольшой эффект стимуляции иммуногенеза экспериментальных животных во внутриутробном развитии.

В последние годы особый интерес представляет новый класс трис (2-гидроксиэтил) аммониевых солей арилгетероуксусных кислот-протатранов, обладающих протекто-адаптационной активностью (см. Воронков М.Г., Мирскова А.Н., Левковская Г.Г. Канцеростатическая и протекто-адаптационная активность трис(2-гидроксиэтил) аммониевых солей арилгетероуксусных кислот // Докл. РАН, 2002, Т. 386, №3, с. 411-414).

Одним из представителей протатранов является биологически активное соединение комплекс трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка - (цинкатран) и имеет формулу (НОСН2СН2)3N-Zn(OOCCH20C6H4CH3-2)2, синтезированный ранее (Воронков М.Г., Адамович С.Н., Мирсков Р.Г., Мирскова А.Н. Синтез новых биологически активных О-гидрометаллоатранов // ЖОХ, 2009, т. 79, №1, С. 162-163).

Приведенная формула указывает как на сходство трекрезана и цинкатрана, что позволяет отнести их к одной группе - протатранов, так и на различие их, которое определяется наличием катиона цинка в молекуле цинкатрана. Для хорошего иммунитета важно наличие многих микроэлементов, одним из которых является цинк. Недостаток цинка в крови может повысить уровень гормона кортизола, который в свою очередь «виноват» в снижении иммунитета.

Цинкатран обладает широким спектром терапевтического действия, в том числе может использоваться как иммуномодулятор (Воронков М.Г., Адамович С.Н. и др. Синтез новых биологически активных О-гидрометаллоатранов // ЖОХ, 2009, т. 79, №1, С. 162-163, Адамович С.Н. Атраны и ионные комплексы в дизайне биологически активных соединений, диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук. - Иркутск, ИрИХ им. А.Е. Фаворского СО РАН, 2014. - 270 с.).

Технический результат - повышение интенсивности пренатального иммуногенеза экспериментальных животных в эмбриональный период.

Технический результат достигается тем, что в качестве средства, повышающего интенсивность иммуногенеза у экспериментальных животных в эмбриональный период, применяют биологически активное соединение цинкатран, в виде инъекций беременным самкам белых мышей внутрибрюшинно в количестве 1 мл 2%-го раствора цинкатрана в 0,9% натрия хлорида.

Преимущество цинкатрана по сравнению с трекрезаном выражено в существенном повышении иммунитета при использовании цинкатрана в указанном количестве у самок белых мышей. «Материнский эффект» цинкатрана значителен, что отражено в приведенных примерах.

Примеры использования цинкатрана, как средства повышающего интенсивность иммуногенеза в эмбриональный период.

Используют иммунологически гетерогенных беспородных белых лабораторных мышей. Животных содержат в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемыми для экспериментальных и иных научных целей, а также в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации». Правила утверждены приказом Министерства здравоохранения РФ от 19.06.2003 г №267 (Правила лабораторной практики в Российской Федерации Министерства здравоохранения РФ Приказ от 19 июня 2003 года №267 http://www.kodeks.ru (24 апреля 2010 г.)).

«Материнский эффект» цинкатрана и трекрезана (прототип) изучают с помощью метода заражения вакцинным штаммом Salmonella typhimurium 34-96 (см. Павел Ю.Г., Карус А.Л., Кумар Ю.А., Шаттшнейдер Т.К., Воронков М.Г. Стимулирование трекрезаном антителогенеза потомства экспериментальных животных в эмбриональный период // Докл. РАН, 2002, Т. 385.- №3.- С. 419-421).

Формируют следующие группы самок: А, Б, В и Г по 10 особей в каждой группе.

Самки группы А не получают никаких препаратов и не заражаются (являются интактными, то есть эталоном).

Каждой из самок группы Б как на первый, так и на седьмой день после посадки взрослых половозрелых самцов к девственным самкам, вводят внутрибрюшинно 0,3 мл вакцинного штамма Salmonella typhimurium 34-96, содержащего 0,7*10⁹ бактериальных клеток (контрольная группа - не леченные).

Каждой из самок группы В как на первый, так и на седьмой день после посадки взрослых половозрелых самцов к девственным самкам, вводят внутрибрюшинно 0,3 мл вакцинного штамма Salmonella typhimurium 34-96, содержащего 0,7*10⁹ бактериальных клеток и внутрибрюшинно 1 мл 2% раствора трекрезана (прототипа).

Каждой из самок группы Г как на первый, так и на седьмой день после посадки взрослых половозрелых самцов к девственным самкам, вводят внутрибрюшинно 0,3 мл вакцинного штамма Salmonella typhimurium 34-96, содержащего 0,7*10⁹ бактериальных клеток и внутрибрюшинно 1 мл 2% раствора цинкатрана (опытная группа).

В качестве дозатора используют стандартный, емкостью 1 мл, шприц для инъекций инсулина.

Для определения иммунного статуса берут по 30 мышат из каждой вышеуказанной группы самок (формируются репрезентативные группы мышат - а, б, в, г соответственно) в первые 40-50 минут после рождения, т.е. до начала подсосного периода.

С помощью унифицированных методик регистрации реакции антиген - антитело (см. Хабриев Р.У. (ред). Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М. 2009) определяют антитело генез. Антителогенез (иммуногенез) у всех новорожденных мышат выражают в - lg титра антител.

Статистическую обработку данных проводят методом Стьюдента. Данные представляют в виде средних и стандартных значений ошибки - М и m, соответственно. Достоверными считают различия при р≤0,05 (см. Петри А., Сэбин К., 2009).

Результаты. Преимущество цинкатрана в качестве иммуностимулятора в пренатальном периоде для белых лабораторных мышей демонстрируют следующие данные: иммунный ответ (- lg титра антител к вакцинному штамму Salmonella typhimurium) у новорожденных мышат приведен в таблице 1.

«Материнский эффект» характерен для генов, которые влияют на ход раннего эмбриогенеза и определяют признаки, закладывающиеся на ранних стадиях развития.

Из таблицы 1 следует, что 2%-ный раствор цинкатрана в 0,9% натрия хлорида (NaCl), вводимый внутрибрюшинно в количестве 1 мл взрослым беременным самкам белых лабораторных мышей, обладает иммуномодулирующим действием уже в эмбриональный период, то есть положительно влияет на проявление «материнского эффекта» и цинкатран эффективнее прототипа трекрезана на 26,1%.

Положительный эффект - предлагаемое биологически активное соединение цинкатран повышает иммунорезистентность экспериментальных животных в пренатальный период и может быть рекомендовано для экспериментальной медицины в качестве средства, повышающего интенсивность пренатального иммуногенеза.

Изобретение относится к медицине, а именно к применению 2% раствора цинкатрана. Применение 2% раствора цинкатрана в 0,9% натрия хлорида в виде инъекций в количестве 1 мл беременным самкам белых лабораторных мышей для повышения интенсивности пренатального иммуногенеза у экспериментальных животных. Использование изобретения обеспечивает повышение интенсивности пренатального иммуногенеза экспериментальных животных в эмбриональный период. 1 табл., 1 пр.

Применение 2% раствора цинкатрана в 0,9% натрия хлорида в виде инъекций в количестве 1 мл беременным самкам белых лабораторных мышей для повышения интенсивности пренатального иммуногенеза у экспериментальных животных.