ВИДЫ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА Российский патент 2024 года по МПК A61K31/496 A61K31/506 A61K31/519 A61K31/4439 A61K31/437 C07D403/12 C07D401/12 C07D239/42 C07D471/04 C07D487/04 A61P35/00 A61P35/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к одному или нескольким средствам комбинированного лечения пациентов с раком с помощью соединения формулы (I), описанного в данном документе, и аллостерического ингибитора или молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Хронический миелоидный лейкоз (CML) представляет собой редкое гематологическое злокачественное новообразование с ежегодным коэффициентом частоты заболеваний, составляющим примерно 1,9 случая/100000. Ингибиторы тирозинкиназы BCR-ABL (TKI) значительно улучшили клиническое ведение CML. Однако, несмотря на клинические преимущества, обеспечиваемые TKI BCR-ABL первого поколения иматинибом (Gleevec^®) и несколькими TKI второго поколения, у многих пациентов развивается резистентность к лекарственным средствам. Такая приобретенная резистентность к TKI является серьезной проблемой при лечении CML. Мутации в киназе BCR-ABL представляют ключевой механизм приобретенной резистентности к лекарственным средствам; при этом T315I, наиболее распространенная мутация резистентности к лекарственным средствам, встречается у приблизительно 25% пациентов с CML, резистентной к лекарственным средствам. Пациенты с мутацией T315I резистентны к ингибиторам BCR-ABL как первого, так и второго поколения. Соответственно, существует постоянная потребность в новых видах терапии и средствах лечения, которые являются более эффективными. Способы по настоящему изобретению предоставляют пациентам с раком новые возможности.

[0003] HQP-1351 представляет собой новый перорально активный мощный ингибитор BCR-ABL третьего поколения, предназначенный для эффективного нацеливания на мутантные формы BCR-ABL, включая T315I, и он разрабатывается для лечения пациентов с CML, резистентным к TKI первого и второго поколения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] В одном аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ лечения рака, включающий совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом:

a) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и

b) аллостерического ингибитора;

где формула (I) имеет следующую структуру,

(I),

где

R₁ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил, C_1-4алкилокси или фенил; и

R₂ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил или галоген.

[0005] В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ лечения рака, включающий совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом:

a) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и

b) молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой.

[0006] В одном варианте осуществления соединение формулы (I) представляет собой HQP-1351 со следующей структурой:

HQP-1351.

[0007] В одном варианте осуществления аллостерический ингибитор представляет собой асциминиб.

[0008] В одном варианте осуществления молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой, представляет собой PD-1 или PD-L1.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0009] На фиг. 1А и 1В проиллюстрированы результаты исследования действия HQP-1351, понатиниба + ABL001 в клетках BaF3 (Bcr-Abl, T315I/F317L) с использованием анализов с WST.

[0010] На фиг. 2A-2D проиллюстрированы результаты исследования действия HQP-1351, понатиниба + ABL001 в клетках BaF3 (Bcr-Abl, T315I/Y253).

[0011] На фиг. 3А и 3В проиллюстрированы результаты исследования действия понатиниба, HQP-1351 + ABL001 в клетках BaF3 (Bcr-Abl, E255V/T315I) с использованием анализов с WST.

[0012] На фиг. 4А и 4В проиллюстрированы результаты исследования действия понатиниба, HQP-1351 + ABL001 в клетках BaF3 (Bcr-Abl, E255K/T315I).

[0013] На фиг. 5 проиллюстрированы результаты исследования действия WB-TZ-04-2020-HQP-1351, понатиниба + ABL001 в клетках BaF3 Bcr-Abl-T315I.

[0014] На фиг. 6 проиллюстрированы результаты исследования 20201110-1111 действия WB-TZ-04-2020-HQP-1351, понатиниба + ABL001 в линиях клеток BaF3 Bcr-Abl-E255V/T315I.

[0015] На фиг. 7A и 7B проиллюстрированы результаты исследования 20201111-1113 апоптоза, индуцированного HQP-1351, понатинибом + ABL001 в линиях клеток BaF3 Bcr-Abl-E255V/T315I.

[0016] На фиг. 8A и 8B проиллюстрирован превосходный эффект, получаемый в случае комбинирования HQP-1351 с ABL001 в модели ортотопической опухоли T315I.

[0017] На фиг. 9A и 9B проиллюстрирован превосходный эффект, получаемый в случае комбинирования HQP-1351 с ABL001 в модели ортотопической опухоли Y253H/T315I.

[0018] На фиг. 10A и 10B проиллюстрирована превосходная эффективность HQP-1351 и ALB001 в модели ортотопической опухоли F317L/T315I.

[0019] На фиг. 11A и 11B проиллюстрирована сравнимая эффективность HQP-1351 и ALB001 в модели ортотопической опухоли E255V/T315I.

[0020] На фиг. 12А-С проиллюстрировано, что HQP-1351 усиливает эффективность антитела к PD-1 in vitro.

[0021] На фиг. 13A-F проиллюстрировано, что HQP-1351 усиливает эффективность антитела к PD-L1 in vivo.

[0022] На фиг. 14A-F проиллюстрировано, что HQP-1351 подавляет экспрессию p-SRC и PD-L1 в зависимости от дозы и времени.

[0023] На фиг. 15 показана кривая жизнеспособности клеток для клеток SUP-B15, обработанных HQP1351, в течение 72 часов.

[0024] На фиг. 16 показаны значения IC50 антипролиферативной активности HQP1351 в линиях клеток лейкоза, положительных по филадельфийской хромосоме (Ph+ или BCR-ABL1+) и отрицательных по ней (Ph- или BCR-ABL1-).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0025] Все опубликованные документы, цитируемые в данном документе, настоящим включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[0026] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимает средний специалист в той области техники, к которой относится настоящее изобретение.

[0027] Термин "приблизительно" используется в данном документе в значении примерно, порядка, ориентировочно или около. При использовании термина "приблизительно" в сочетании с числовым диапазоном он модифицирует этот диапазон, расширяя пределы в большую и меньшую сторону от приведенных числовых значений. Как правило, термин "приблизительно" используется в данном документе для модификации числового значения в большую и меньшую сторону от указанного значения с отклонением на 10%.

[0028] Термин "содержит" относится к “включает без ограничения".

[0029] Термины "лечение", "лечить" и "осуществление лечения" относятся к обращению вспять, смягчению, задержке начала проявления или подавлению прогрессирования заболевания или нарушения или одного или нескольких его симптомов, включая без ограничения терапевтическую пользу. В некоторых вариантах осуществления лечение проводят после развития одного или нескольких симптомов. В некоторых вариантах осуществления лечение можно проводить при отсутствии симптомов. Например, лечение можно проводить субъекту до появления симптомов (например, в свете наличия симптомов в анамнезе и/или в свете генетических или других факторов предрасположенности). Лечение также можно продолжать после устранения симптомов, например, для предупреждения или задержки их рецидива.

[0030] Термин “ABL001” относится к асциминибу.

[0031] Терапевтическая польза включает искоренение и/или уменьшение интенсивности проявлений первопричинного нарушения, лечение которого осуществляют, такого как рак; она также включает искоренение и/или уменьшение интенсивности проявлений одного или нескольких симптомов, ассоциированных с первопричинным нарушением, так что у субъекта наблюдается улучшение, несмотря на то, что субъект все еще может быть поражен первопричинным нарушением.

[0032] В некоторых вариантах осуществления "лечение" или "осуществление лечения" включает одно или несколько из следующего: (a) подавление нарушения (например, ослабление одного или нескольких симптомов, обусловленных нарушением, и/или уменьшение степени тяжести нарушения); (b) замедление или остановку развития одного или нескольких симптомов, ассоциированных с нарушением (например, стабилизацию нарушения и/или задержку усугубления или прогрессирования нарушения); и/или (c) облегчение нарушения (например, обеспечение регрессии клинических симптомов, уменьшение интенсивности проявлений нарушения, задержку прогрессирования нарушения и/или повышение качества жизни).

[0033] Термины "осуществление введения" или "введение" охватывают доставку пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли, или пролекарства, или другого его фармацевтически приемлемого производного с использованием любого подходящего состава или пути введения, например, как описано в данном документе.

[0034] Термины “совместное введение” или “комбинированная терапия” понимаются как введение двух или более активных средств с использованием отдельных составов или одного фармацевтического состава или последовательное введение в любом порядке, так что существует период времени, в течение которого оба (или все) активные средства одновременно проявляют свою биологическую активность.

[0035] Термины "терапевтически эффективное количество" или "эффективное количество" относятся к количеству, которое является эффективным для того, чтобы вызвать требуемый биологический или медицинский ответ, в том числе к количеству соединения, которое при введении субъекту для лечения нарушения является достаточным для осуществления такого лечения нарушения. Эффективное количество будет меняться в зависимости от нарушения и степени его тяжести, а также возраста, массы и т. д. субъекта, подлежащего лечению. Эффективное количество может быть представлено одной или несколькими дозами (например, для достижения требуемой конечной точки лечения может потребоваться однократная доза или многократные дозы). Эффективное количество можно считать введенным в эффективном количестве, если в сочетании с одним или несколькими другими средствами может быть достигнут или достигается требуемый или благоприятный результат. Подходящие дозы любых совместно вводимых соединений могут быть необязательно снижены ввиду комбинированного действия, аддитивного или синергического действия соединения.

[0036] Термин "пациент", которому предполагается введение, включает без ограничения людей (т. е. мужчину или женщину из любой возрастной группы, например, педиатрического субъекта (например, младенца, ребенка, подростка) или взрослого субъекта (например, молодого человека, человека среднего возраста или пожилого человека)) и/или других приматов (например, яванских макаков, макаков-резусов).

[0037] “Субъект”, подлежащий лечению с помощью способа по настоящему изобретению, может означать либо человека, либо отличное от человека животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно человека. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется выявляемая опухоль до начала лечения с применением способов по настоящему изобретению. В определенных вариантах осуществления у субъекта имеется выявляемая опухоль на момент начала лечения с применением способов по настоящему изобретению.

[0038] Термины “осуществление предупреждения” или “предупреждение” относятся к снижению риска приобретения заболевания или нарушения. Для предупреждения не требуется, чтобы заболевание или состояние никогда не возникали или не рецидивировали у субъекта.

[0039] Термины "фармацевтически приемлемый" или "физиологически приемлемый" относятся к соединениям, солям, композициям, лекарственным формам и другим материалам, которые применимы при получении фармацевтической композиции, подходящей для фармацевтического применения в ветеринарии или медицине.

[0040] Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к тем солям, которые в пределах здравого медицинского суждения подходят для применения в контакте с тканями людей и низших животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и т. п. соизмеримо с разумным соотношением польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны из уровня техники. Например, S. M. Berge и соавт. подробно описывают фармацевтически приемлемые соли в J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Фармацевтически приемлемые соли соединения 1 включают соли, полученные из подходящих неорганических и органических кислот и оснований.

[0041] Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных солей присоединения кислоты являются соли по аминогруппе, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и хлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или с использованием других способов, используемых в данной области техники, таких как ионный обмен.

[0042] Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипатные, альгинатные, аскорбатные, аспартатные, бензолсульфонатные, бензоатные, бисульфатные, боратные, бутиратные, камфоратные, камфорсульфонатные, цитратные, циклопентанпропионатные, диглюконатные, додецилсульфатные, этансульфонатные, формиатные, фумаратные, глюкогептонатные, глицерофосфатные, глюконатные, гемисульфатные, гептаноатные, гексаноатные, гидройодидные, 2-гидроксиэтансульфонатные, лактобионатные, лактатные, лауратные, лаурилсульфатные, малатные, малеатные, малонатные, метансульфонатные, 2-нафталинсульфонатные, никотинатные, нитратные, олеатные, оксалатные, пальмитатные, памоатные, пектинатные, персульфатные, 3-фенилпропионатные, фосфатные, пивалатные, пропионатные, стеаратные, сукцинатные, сульфатные, тартратные, тиоцианатные, п-толуолсульфонатные, ундеканоатные, валератные соли и т. п. Хотя фармацевтически приемлемые противоионы будут предпочтительными для получения фармацевтических составов, другие анионы вполне приемлемы в качестве промежуточных продуктов синтеза. Таким образом, это могут быть фармацевтически нежелательные анионы, такие как йодид, оксалат, трифторметансульфонат и т. п., если такие соли являются промежуточными химическими соединениями.

[0043] Термин "фармацевтически приемлемый носитель" используется в данном документе для обозначения материала, который совместим с получающим его субъектом, предпочтительно с млекопитающим, более предпочтительно с человеком, и подходит для доставки активного средства в сайт-мишень без прекращения активности средства. Токсичность или нежелательные эффекты, ассоциированные с носителем, если таковые имеются, предпочтительно должны быть соизмеримы с разумным соотношением риск/польза для предполагаемого применения активного средства.

[0044] Термин “перорально” относится к введению композиции, предназначенной для приема внутрь. Примеры пероральных форм включают без ограничения таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии и капли. Такие формы можно проглатывать целиком, или они могут быть представлены в жевательной форме.

[0045] Термин “иммунная контрольная точка” или “молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой” означает молекулу в иммунной системе, которая модулирует сигнал. Молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой, может являться молекулой, являющейся костимулирующей иммунной контрольной точкой, т. е. усиливающей сигнал, или молекулой, являющейся ингибирующей иммунной контрольной точкой, т. е. ослабляющей сигнал. Используемый в данном документе термин “молекула, являющаяся костимулирующей иммунной контрольной точкой” означает молекулу в иммунной системе, которая усиливает сигнал или является костимулирующей. Используемый в данном документе термин “ингибирующая молекула, представляющая собой иммунную контрольную точку” означает молекулу в иммунной системе, которая ослабляет сигнал или является коингибирующей.

[0046] Термин "модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой" означает средство, способное изменять активность иммунной контрольной точки у субъекта. В определенных вариантах осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, изменяет функцию одной или нескольких молекул, являющихся иммунными контрольными точками, включая PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, TIM-3, LAG3, CD160, 2B4, TGF β, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, OX40, CD2, CD27, ICAM-1, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, LFA-1, 1COS, 4-1BB, GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT и CD83. Модулятор иммунной контрольной точки может быть активатором (например, агонистом) или ингибитором (например, антагонистом) иммунной контрольной точки. В некоторых вариантах осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, представляет собой белок, связывающий иммунную контрольную точку (например, антитело, Fab-фрагмент антитела, двухвалентное антитело, конъюгат антитело-лекарственное средство, scFv, слитый белок, бивалентное антитело или четырехвалентное антитело). В некоторых вариантах осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В других вариантах осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, представляет собой малую молекулу. В конкретном варианте осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, представляет собой антитело к PD1. В конкретном варианте осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, представляет собой антитело к PD-L1. В конкретном варианте осуществления модулятор молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, представляет собой антитело к CTLA-4.

[0047] Используемый в данном документе термин “осуществление совместного введения” или “совместное введение” относится к введению соединения формулы (I) или HQP-1351 до, одновременно или практически одновременно, последовательно или периодически с введением аллостерического ингибитора или модулятора иммунной контрольной точки.

[0048] Термин “полная регрессия” относится к опухоли, которую нельзя выявить после лечения.

[0049] Термин “частичная регрессия” относится к уменьшению объемов опухоли (например, уменьшению на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%) по сравнению с состоянием до лечения.

[0050] Во всех случаях в данной заявке, в которых имеется серия указанных числовых значений, следует понимать, что любое из указанных числовых значений может являться верхним пределом или нижним пределом числового диапазона. Кроме того, следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все такие числовые диапазоны, т. е. диапазон, содержащий комбинацию верхнего числового предела и нижнего числового предела, где числовое значение для каждого из верхнего предела и нижнего предела может представлять собой любое числовое значение, указанное в данном документе. Подразумевается, что представленные в данном документе диапазоны включают все значения в пределах диапазона. Например, подразумевается, что 1-10 включает все из значений 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, а также дробные значения, в соответствующих случаях. Диапазоны, выраженные как “не более” определенного значения, например не более 5, подразумеваются как все значения, включая верхний предел диапазона, например, 0, 1, 2, 3, 4 и 5, и дробные значения, в соответствующих случаях. Подразумевается, что не более или в пределах недели включает 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней. Аналогичным образом подразумевается, что диапазоны, ограниченные выражением “по меньшей мере”, включают нижнее предусмотренное значение и все более высокие числа.

[0051] Термин “алкил” означает алкильную группу с разветвленной цепью или прямой цепью с определенным числом атомов углерода. Например, определение “C₁-C₅” в “C₁-C₅алкил” означает алкильную группу с прямой цепью или разветвленной цепью с 1, 2, 3, 4 или 5 атомами углерода. Например,“C₁-C₅алкил” включает метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, изобутил, пентил и т. д.

[0052] Термин “циклоалкил” относится к конкретному одиночному насыщенному алкильному кольцу с определенным числом атомов углерода. Например, “циклоалкил” включает циклопропил-, метилциклопропил-, 2,2-диметилциклобутил, 2-этилциклопентил-, циклогексил и т. д.

[0053] Термин “алкокси” относится к метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси или трет-бутокси.

[0054] Термин “галоген” или “галогеновый радикал” означает хлор, фтор, бром и йод.

[0055] В данном документе описаны различные (пронумерованные) варианты осуществления настоящего изобретения. Следует понимать, что признаки, указанные в каждом варианте осуществления, могут быть объединены с другими указанными признаками с обеспечением дополнительных вариантов осуществления настоящего изобретения.

[0056] Вариант осуществления 1. Способ лечения рака, включающий совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом:

a) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и

b) аллостерического ингибитора;

где формула (I) имеет следующую структуру,

(I),

где

R₁ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил, C_1-4алкилокси или фенил; и

R₂ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил или галоген.

[0057] В одном варианте осуществления соединения формулы (I) R₁ представляет собой водород или C_1-4алкил.

[0058] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₁ представляет собой водород.

[0059] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₂ представляет собой водород или C_1-4алкил.

[0060] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₂ представляет собой C_1-4алкил.

[0061] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₂ представляет собой метил или этил. В другом варианте осуществления R₂ представляет собой метил.

[0062] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₁ представляет собой водород, и R₂ представляет собой C_1-4алкил.

[0063] Соединения формулы (I) являются новыми селективными мощными ингибиторами широкого спектра мутаций в BCR-ABL, включая T3151, E255K/V, G250E, H396P, M351T, Q252H, Y253F/H или BCR-ABL^WT.

[0064] Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемая соль также являются мощными ингибиторами других киназ, включая KIT, BRAF, DDR1, PDGFR, FGFR, FLT3, RET, SRC, TIE1 и TIE2.

[0065] Вариант осуществления 2. Способ согласно варианту осуществления 1, где соединение формулы (I) представляет собой HQP-1351 или его фармацевтически приемлемую соль, где HQP-1351 имеет следующую структуру:

HQP-1351.

[0066] HQP-1351 представляет собой новый перорально активный мощный ингибитор BCR-ABL третьего поколения, предназначенный для эффективного нацеливания на мутантные формы BCR-ABL, включая T315I, и он разрабатывается для лечения пациентов с CML, резистентным к ингибиторам тирозинкиназы (TKI) первого и второго поколения.

[0067] Химическим названием HQP-1351 является 3-(2-(1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-5-ил)этинил)-4-метил-N-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)-3-(трифторметил)фенил)бензамид.

[0066] Соединения формулы (I) или HQP-1351 или их фармацевтически приемлемая соль можно получить в соответствии со способами получения, описанными в патенте США № 8846671 B2, выданном 30 сентября 2014 г., который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте и для всех целей, или способом, аналогичным ему.

[0067] Вариант осуществления 3. Способ согласно варианту осуществления 1 или 2, где аллостерический ингибитор представляет собой асциминиб.

[0070] В настоящем изобретении обнаружено, что HQP-1351, также известный как олверембатиниб, усиливал эффект аллостерического ингибитора при резистентности, обусловленной сочетанными мутациями в BCR-ABL. Лечение с помощью ингибиторов тирозинкиназы (TKI), направленное против АТФ-связывающего сайта BCR-ABL, содействует выздоровлению при Ph+ лейкозе. Однако возникновение мутации иммунной контрольной точки T315I и сочетанных мутантов придает резистентность к таким TKI. HQP-1351 представляет собой TKI нового поколения, нацеливающийся на BCR-ABL. Он является ингибитором АТФ-сайта и в настоящее время находится в разработке для лечения рецидивирующих и рефрактерных форм CML.

[0071] Асциминиб представляет собой аллостерический ингибитор, нацеливающийся на миристоил-связывающий карман киназы BCR-ABL и нисходящую передачу сигнала. Исследования показывают, что комбинирование асциминиба с понатинибом может преодолевать только часть резистентности, вызванной сочетанными мутантами BCR-ABL. Новая комбинация HQP-1351 с асциминибом, нацеливающимися как на АТФ-карман, так и на аллостерическую область белка BCR-ABL, может содействовать ингибирующему эффекту у киназы, содержащей сочетанные мутации.

[0072] Асциминиб можно получать в соответствии со способами, описанными в Nature (London, United Kingdom), 543 (7647), 733-737: 2017, или в соответствии со способами, описанными в публикации согласно РСТ WO2013/171639.

[0073] Серии клеток с одиночными или сочетанными мутациями в BCR-ABL конструировали на основании клеток BaF3. Эффект HQP-1351 в качестве отдельного средства или в комбинации с асциминибом анализировали с использованием анализа антипролиферативного действия, вестерн-блоттинга и FACS-анализа in vitro. Эффективность in vivo оценивали с использованием сингенной мышиной модели, полученной за счет клеток BaF3 с T315I и/или сочетанными мутациями.

[0074] Клеточные исследования антипролиферативного действия продемонстрировали превосходную активность HQP-1351 в отношении одиночных или сочетанных мутаций в BCR-ABL со значениями IC₅₀, находящимися в диапазоне 6-300 нМ. В частности, HQP-1351 был более эффективным, чем понатиниб, асциминиб и другие TKI, в отношении таких сочетанных мутаций. Более того, комбинация HQP-1351 с асциминибом была высокоэффективной в отношении сочетанных мутаций в BCR-ABL, особенно тех, которые содержат T315I. Исследования in vivo дополнительно показали, что совместное введение HQP-1351 с асциминибом приводило к значительному продлению выживаемости по сравнению с отдельными средствами. Важно отметить, что противоопухолевый эффект был более сильным, чем у понатиниба плюс асциминиб у моделей, несущих сочетанные мутации. С точки зрения механизма, комбинированное лечение синергически снижало фосфорилирование BCR-ABL и расположенные в нисходящем пути белков CRKL и STAT5, а усиленное расщепление каспазы-3 и PARP-1, тем самым, запускало апоптоз и впоследствии усиливало противоопухолевые эффекты.

[0075] Результаты в примере 1 настоящего изобретения показывают, что комбинация ингибитора АТФ-связывающего сайта, HQP-1351, и аллостерического ингибитора может оказывать наилучший противоопухолевый эффект в отношении опухолевых клеток, несущих одиночные или сочетанные мутации в BCR-ABL. Такая новая стратегия может помочь преодолеть вторичные сочетанные мутации после лечения с помощью одиночных TKI.

[0076] Вариант осуществления 4. Способ согласно вариантам осуществления 1-3, где рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование.

[0077] Вариант осуществления 5. Способ согласно варианту осуществления 4, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой лейкоз.

[0078] Вариант осуществления 6. Способ согласно варианту осуществления 4, где гематологическое злокачественное новообразование представляет собой хронический миелогенный лейкоз.

[0079] Вариант осуществления 7. Способ согласно вариантам осуществления 1-6, где способ представляет собой лечение пациента с хроническим миелоидным лейкозом, резистентным к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы.

[0080] Вариант осуществления 8. Способ согласно варианту осуществления 7, где хронический миелоидный лейкоз, резистентный к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы, у пациента вызван мутациями в BCR-ABL.

[0081] Вариант осуществления 9. Способ согласно варианту осуществления 8, где мутация в BCR-ABL представляет собой мутации T3151, E255K/V, G250E, H396P, M351T, Q252H, Y253F/H или BCR-ABL^WT.

[0082] Вариант осуществления 10. Способ согласно варианту осуществления 8, где мутация в BCR-ABL представляет собой мутацию T3151.

[0083] Вариант осуществления 11. Способ согласно вариантам осуществления 1-3, где рак представляет собой рак молочной железы, рак шейки матки, рак яичника, рак эндометрия, рак предстательной железы, рак толстой кишки, рак мочевого пузыря, метастазы в кости, колоректальный рак, рак пищевода, рак головы и шеи, рак легкого, карциноидную опухоль легкого или карциному желудка.

[0084] Вариант осуществления 12. Способ согласно варианту осуществления 11, где рак легкого представляет собой немелкоклеточный рак легкого (NSCLC).

[0085] Вариант осуществления 13. Способ согласно варианту осуществления 11, где рак легкого представляет собой мелкоклеточный рак легкого (SCLC).

[0086] Вариант осуществления 14. Способ ингибирования мутантов BCR-ABL, включающий приведение мутантов BCR-ABL в контакт с a) соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью и b) аллостерическим ингибитором;

где соединение формулы (I) имеет следующую структуру,

(I),

где

R₁ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил, C_1-4алкилокси или фенил; и

R₂ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил или галоген.

[0087] Вариант осуществления 15. Способ согласно варианту осуществления 14, где соединение формулы (I) представляет собой HQP-1351 или его фармацевтически приемлемую соль, где HQP-1351 имеет следующую структуру:

HQP-1351.

[0088] Вариант осуществления 16. Способ согласно вариантам осуществления 14 или 15, где аллостерический ингибитор представляет собой асциминиб.

[0089] Вариант осуществления 17. Способ согласно вариантам осуществления 14-16, где ингибирование осуществляют in vitro или in vivo.

[0090] Вариант осуществления 18. Способ согласно вариантам осуществления 14-19, где ингибирование осуществляют у пациента с хроническим миелоидным лейкозом, резистентным к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы.

[0091] Вариант осуществления 19. Способ согласно варианту осуществления 18, где хронический миелоидный лейкоз, резистентный к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы, у пациента вызван мутациями в BCR-ABL.

[0092] Вариант осуществления 20. Способ согласно варианту осуществления 19, где мутация в BCR-ABL представляет собой мутации T3151, E255K/V, G250E, H396P, M351T, Q252H, Y253F/H или BCR-ABL^WT.

[0093] Вариант осуществления 21. Способ согласно варианту осуществления 19, где мутация в BCR-ABL представляет собой T3151.

[0094] В настоящем изобретении дополнительно обнаружено, что HQP-1351 усиливал опосредованные Т-клетками противоопухолевые иммунные ответы при NSCLC. Обнаружение по настоящему изобретению предоставляет доказательства для поддержки комбинации HQP-1351 и антитела к PD-1/PD-L1 в качестве потенциального подхода для комбинированного лечения, чтобы повысить эффективности иммунотерапии при NSCLC.

[0095] Хотя ингибиторы иммунных контрольных точек (ICI), включая антитело к PD-1/PD-L1, продемонстрировали положительные терапевтические ответы для некоторых средств лечения рака, значительная часть пациентов с раком все еще не проявляет ответ. Существенные ограничения по частоте отсутствия ответа подчеркивают необходимость в подходящих видах комбинированной терапии. Киназы семейства SRC сверхэкспрессируются или активируются при множестве злокачественных новообразованиях человека, что делает их кандидатом-мишенью для регуляции противоопухолевого иммунитета. HQP-1351, пероральный биодоступный мультикиназный ингибитор, продемонстрировал клиническую эффективность при хроническом миелоидном лейкозе. В настоящем изобретении демонстрируется, что HQP-1351 в качестве ингибитора SRC способен повышать противоопухолевый иммунитет при немелкоклеточном раке легкого (NSCLC), как показано в примере ниже.

[0096] PD-1. Белок 1 запрограммированной гибели клеток (PD-1, также известный как CD279 и PDCD1) представляет собой ингибиторный рецептор, который осуществляет отрицательную регуляцию иммунной системы. В отличие от CTLA-4, который в основном влияет на наивные Т-клетки, PD-1 более широко экспрессируется на иммунных клетках и регулирует активность зрелых Т-клеток в периферических тканях и в микроокружении опухоли. PD-1 ингибирует Т-клеточные ответы за счет противодействия передаче сигнала через Т-клеточный рецептор. PD-1 имеет два лиганда, PD-L1 и PD-L2. Было разработано множество модуляторов иммунных контрольных точек, специфических для PD-1, и их можно применять, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой средство, которое модулирует активность и/или экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой средство, которое связывается с PD-1 (например, антитело к PD-1). В некоторых вариантах осуществления модулятор контрольных точек представляет собой агонист PD-1. В некоторых вариантах осуществления модулятор контрольных точек представляет собой антагонист PD-1. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой PD-1-связывающий белок (например, антитело), выбранный из группы, состоящей из пембролизумаба (Китруда; ранее ламбролизумаб; Merck & Co., Inc.) , ниволумаб (Опдиво; Bristol-Myers Squibb), пидилизумаб (CT-011, CureTech), JS-001 (Shanghai Junshi Bioscience Co., Ltd.), SHR-1210 (Incyte/Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd.), MEDI0680 (также известный как AMP-514; Amplimmune Inc./Medimmune), PDR001 (Novartis), BGB-A317 (BeiGene Ltd.), TSR-042 (также известный как ANB011; AnaptysBio/Tesaro, Inc.), REGN2810 (также известный как цемиплимаб, Regeneron Pharmaceuticals, Inc./Sanofi-Aventis) и PF-06801591 (Pfizer). Дополнительные PD-1-связывающие белки (например, антитела) известны из уровня техники и раскрыты, например, в патентах США №№ 9181342, 8927697, 7488802, 7029674; публикациях заявок на патенты США №№ 2015/0152180, 2011/0171215, 2011/0171220 и публикациях согласно РСТ №№ WO 2004/056875, WO 2015/036394, WO 2010/029435, WO 2010/029434, WO 2014/194302, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки.

[0097] PD-L1/PD-L2. Лиганд PD 1 (PD-L1, также известный как B7-H1) и лиганд PD 2 (PD-L2, также известный как PDCD1LG2, CD273 и B7-DC) связываются с рецептором PD-1. Оба лиганда принадлежат к тому же семейству B7, что и белки B7-1 и B7-2, которые взаимодействуют с CD28 и CTLA-4. PD-L1 может экспрессироваться на многих типах клеток, включая, например, эпителиальные клетки, эндотелиальные клетки и иммунные клетки. Связывание PDL-1 снижает выработку IFN, TNF и IL-2 и стимулирует выработку IL10, противовоспалительного цитокина, ассоциированного со снижением реактивности и пролиферации Т-клеток, а также с антигенспецифической анергией Т-клеток. PDL-2 преимущественно экспрессируется на антигенпрезентирующих клетках (APC). Связывание PDL2 также приводит к супрессии Т-клеток, однако если взаимодействия PDL-1-PD-1 подавляют пролиферацию посредством остановки клеточного цикла в фазе G1/G2, было продемонстрировано, что взаимодействие PDL2-PD-1 ингибирует TCR-опосредованную передачу сигнала путем блокирования сигналов B7:CD28 при низких концентрациях антигена и снижает выработку цитокинов при высоких концентрациях антигена. Было разработано множество модуляторов иммунных контрольных точек, специфических для PD-L1 и PD-L2, и их можно применять, как описано в данном документе.

[0098] В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой средство, которое модулирует активность и/или экспрессию PD-L1. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой средство, которое связывается с PD-L1 (например, антитело к PD-L1). В некоторых вариантах осуществления модулятор контрольных точек представляет собой агонист PD-L1. В некоторых вариантах осуществления модулятор контрольных точек представляет собой антагонист PD-L1. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой PD-L1-связывающий белок (например, антитело или Fc-слитый белок), выбранный из группы, состоящей из дурвалумаба (также известного как MEDI-4736; AstraZeneca/Celgene Corp./Medimmune), атезолизумаба (Тецентрик; также известного как MPDL3280A и RG7446; Genetech Inc.), авелумаба (также известного как MSB0010718C; Merck Serono/AstraZeneca); MDX-1105 (BMS-936559, Medarex/Bristol-Meyers Squibb), AMP-224 (Amplimmune, GlaxoSmithKline), LY3300054 (Eli Lilly and Co.), JS003 (Shanghai Junshi Bioscience Co., Ltd.), SHR-1316 (Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd.), KN035 (Alphamab и 3D Medicines) или CK-301 (Checkpoint Therapeutics). Дополнительные PD-L1-связывающие белки известны из уровня техники и описаны, например, в патентах США №№ 2016/0084839, 2015/0355184, 2016/0175397 и публикациях согласно РСТ №№ WO 2014/100079, WO 2016/030350, WO 2013181634, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки.

[0099] В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой средство, которое модулирует активность и/или экспрессию PD-L2. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек представляет собой средство, которое связывается с PD-L2 (например, антитело к PD-L2). В некоторых вариантах осуществления модулятор контрольных точек представляет собой агонист PD-L2. В некоторых вариантах осуществления модулятор контрольных точек представляет собой антагонист PD-L2. PD-L2-связывающие белки (например, антитела) известны из уровня техники и описаны, например, в патентах США №№ 9255147, 8188238; публикациях заявок на патенты США №№ 2016/0122431, 2013/0243752, 2010/0278816, 2016/0137731, 2015/0197571, 2013/0291136, 2011/0271358 и публикациях согласно РСТ №№ WO 2014/022758 и WO 2010/036959, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки.

[0100] В определенных вариантах осуществления вводимая доза модулятора иммунных контрольных точек на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% ниже стандартной дозы модулятора иммунных контрольных точек для конкретной формы рака. В определенных вариантах осуществления вводимая доза модулятора иммунных контрольных точек составляет 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%. %, 30 %, 25%, 20 %, 15%, 10% или 5% от стандартной дозы модулятора иммунных контрольных точек для конкретного онкологического нарушения. В одном варианте осуществления, если вводят комбинацию модуляторов иммунных контрольных точек, то по меньшей мере один из модуляторов иммунных контрольных точек вводят в дозе, которая ниже стандартной дозы модулятора иммунных контрольных точек для конкретного онкологического нарушения. В одном варианте осуществления, если вводят комбинацию модуляторов иммунных контрольных точек, то по меньшей мере два из модуляторов иммунных контрольных точек вводят в дозе, которая ниже стандартной дозы модуляторов иммунных контрольных точек для конкретного онкологического нарушения. В одном варианте осуществления, если вводят комбинацию модуляторов иммунных контрольных точек, то по меньшей мере три из модуляторов иммунных контрольных точек вводят в дозе, которая ниже стандартной дозы модулятора иммунных контрольных точек для конкретного онкологического нарушения. В одном варианте осуществления, если вводят комбинацию модуляторов иммунных контрольных точек, то все из модуляторов иммунных контрольных точек вводят в дозе, которая ниже стандартной дозы модуляторов иммунных контрольных точек для конкретного онкологического нарушения. В некоторых вариантах осуществления модулятор иммунных контрольных точек вводят в дозе, которая ниже стандартной дозы модулятора иммунных контрольных точек, и соединение формулы (I) или HQP-1351 вводят в дозе, которая ниже стандартной дозы.

[0101] Вариант осуществления 22. Способ лечения рака, включающий совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом:

a) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и

b) молекулы, являющейся иммунной контрольной точкой, где формула (I) имеет следующую структуру:

(I),

где

R₁ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил, C_1-4алкилокси или фенил; и

R₂ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил или галоген.

[0102] Вариант осуществления 23. Способ согласно варианту осуществления 22, где соединение формулы (I) представляет собой HQP-1351 или его фармацевтически приемлемую соль.

[0103] Вариант осуществления 24. Способ согласно вариантам осуществления 21-22, где молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой, представляет собой PD-1 или PD-L1.

[0104] Вариант осуществления 25. Способ согласно вариантам осуществления 21-22, где молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой, представляет собой PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, TIM-3, LAG3, CD160, 2B4, TGF β, VISTA, BTLA, TIGIT или LAIR1.

[0105] Вариант осуществления 26. Способ согласно вариантам осуществления 21-22, где молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой, представляет собой пембролизумаб, ипилимумаб, ниволумаб, атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб, цемиплимаб, лирилумаб, тремелимумаб или пидилизумаб.

[0106] Вариант осуществления 27. Способ согласно вариантам осуществления 21-22, где молекула, являющаяся иммунной контрольной точкой, представляет собой AMP-224, AMP-514, BGB-A317, цемиплимаб, JS001, PDR-001, PF-06801591, IBI-308, пидилизумаб, SHR-1210 или TSR-042.

[0107] Вариант осуществления 28. Способ согласно вариантам осуществления 22-27, где рак представляет собой рак молочной железы, рак шейки матки, рак яичника, рак эндометрия, рак предстательной железы, рак толстой кишки, рак мочевого пузыря, метастазы в кости, колоректальный рак, рак пищевода, рак головы и шеи, рак легкого, карциноидную опухоль легкого или карциному желудка.

[0108] Вариант осуществления 29. Способ согласно варианту осуществления 28, где рак легкого представляет собой немелкоклеточный рак легкого.

[0109] Вариант осуществления 30. Способ согласно варианту осуществления 29, где рак легкого представляет собой мелкоклеточный рак легкого.

[0110] Вариант осуществления 31. Способ согласно вариантам осуществления 1-13 и 22-30, где соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально пациентам, нуждающимся в этом.

[0111] Вариант осуществления 32. Способ согласно любому из пунктов 1-30, где соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вводят один раз в два дня (QOD) во время 28-дневного цикла лечения.

[0112] Вариант осуществления 33. Способ согласно варианту осуществления 32, где соединение формулы (I) представляет собой HQP-1351.

[0113] Вариант осуществления 34. Способ согласно варианту осуществления 32, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 4 мг или приблизительно 8 мг.

[0114] Вариант осуществления 35. Способ согласно варианту осуществления 32, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 12 мг или приблизительно 20 мг.

[0115] Вариант осуществления 36. Способ согласно варианту осуществления 32, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг или приблизительно 45 мг.

[0116] Вариант осуществления 37. Способ согласно варианту осуществления 32, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 50 мг или приблизительно 60 мг.

[0117] В некоторых вариантах осуществления комбинированная терапия для лечения рака предусматривает по меньшей мере один 21-дневный цикл лечения, где соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят в терапевтически эффективном количестве.

[0118] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество составляет от 0,5 мг до 100 мг, предпочтительно от 1 мг до 80 мг, более предпочтительно от 1 мг до 60 мг, наиболее предпочтительно приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 4 мг или приблизительно 8 мг.

[0119] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество HQP-1351 составляет приблизительно 12 мг или приблизительно 20 мг.

[0120] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество HQP-1351 составляет приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг или приблизительно 45 мг.

[0121] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество HQP-1351 составляет приблизительно 50 мг или приблизительно 60 мг.

[0122] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество HQP-1351 вводят перорально раз в два дня пациенту, нуждающемуся в этом, в течение первых двух последовательных недель из 21-дневного цикла лечения и не вводят во время третьей недели цикла лечения.

[0123] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально в день 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 из 21-дневного цикла лечения.

[0124] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль, не вводят в дни 14-21 из 21-дневного цикла лечения.

[0125] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально в количестве, составляющем от приблизительно 50 мг до приблизительно 200 мг, в день 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 из 21-дневного цикла лечения.

[0126] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально в количестве, составляющем приблизительно 50 мг, в дни 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 из 21-дневного цикла лечения.

[0127] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально в количестве, составляющем приблизительно 100 мг, в дни 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 из 21-дневного цикла лечения.

[0128] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально в количестве, составляющем приблизительно 150 мг, в дни 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 из 21-дневного цикла лечения.

[0129] В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), такое как HQP-1351, или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту перорально в количестве, составляющем приблизительно 200 мг, в дни 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 из 21-дневного цикла лечения.

[0130] В некоторых вариантах осуществления асциминиб вводят перорально.

[0131] В некоторых вариантах осуществления PD-1 или PD-L1 вводят посредством внутривенной инфузии в количестве, составляющем 200 мг, в день 1 из 21-дневного цикла лечения.

[0132] В некоторых вариантах осуществления комбинированная терапия предусматривает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 день из 21-дневного цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления комбинированная терапия продолжается до прогрессирования заболевания или неприемлемой токсичности.

[0133] В определенных вариантах осуществления субъекту вводят по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 циклов комбинированной терапии. Субъекта оценивают по критериям ответа в конце каждого цикла. Субъекта также контролируют на всем протяжении каждого цикла в отношении нежелательных явлений (например, свертывания крови, анемии, функции печени и почек и т. д.), чтобы убедиться, что схема лечения адекватно переносится.

[0134] Следующие примеры представлены в целях иллюстрации, а не ограничения.

ПРИМЕРЫ

[0135] Пример 1. Анализ антипролиферативного эффекта HQP-1351 для усиления эффекта аллостерического ингибитора в отношении устойчивости, вызванной сочетанными мутациями BCR-ABL

Способы

Антипролиферативный эффект определяли с помощью анализа на основе водорастворимого тетразолия (WST) с использованием набора для подсчета количества клеток Cell Counting Kit-8 (CCK-8, № D3100L4057, Shanghai life ilab bio technology co., LTD, Китай). Клетки высевали в 96-луночные планшеты и обрабатывали различными концентрациями тестируемых готовых продуктов. Эффект комбинации тестировали с использованием 9 различных концентраций асциминиба с 3 фиксированными дозами HQ-P1351. Каждую вариант обработки тестировали в трех повторностях. Затем планшет культивировали при 37ºC с 5% CO₂ в течение 72 часов. В конце вариантов обработки в каждую лунку непосредственно добавляли по 20 мкл/лунка реагента CCK-8. Затем планшет инкубировали при 37ºC с 5% CO₂ в течение 2-4 ч. Значение OD выявляли при 450 нм на ридере для микропланшетов (SpectraMax I3X, Molecular Devices, США). Значения IC₅₀ рассчитывали с помощью программного обеспечения Graphpad Prism 7.0 с использованием анализа данных типа нелинейной регрессии (аппроксимация кривых). Для анализа комбинированного эффекта жизнеспособность клеток нормализовали с использованием среднего значения OD трех повторов лунок для контроля с одним средством. Синергизм между двумя соединениями выявляли, если расчетная IC₅₀ кривых для комбинаций была меньше, чем IC₅₀ отдельного средства (кривые комбинации сдвигались влево), а индекс аддитивности (CI) составлял менее 1,0 (Calcusyn, версия 2.0, Zhou).

Анализ методом проточной цитометрии

Апоптотические клетки определяли с использованием набора для окрашивания с помощью аннексина V-PI (йодид пропидия) (№ C1062L, Beyotime Biotechnology, Китай). Вкратце, клетки собирали после обработки тестируемыми готовыми продуктами в течение указанного времени и промывали фосфатно-солевым буфером (PBS). Затем клетки окрашивали аннексином-V и PI и анализировали с помощью проточного цитометра (CytoFLEX, Beckman, США). Профили апоптоза получали посредством анализа 10000 клеток на обработку.

Анализ методом вестерн-блоттинга

После обработки тестируемыми готовыми продуктами в течение указанного времени культивируемые клетки собирали и промывали с помощью PBS, охлажденного льдом. Клеточные осадки лизировали в буфере RIPA, содержащем 1% PMSF и 1% ингибиторов протеазы. Концентрацию белка определяли с использованием набора для анализа белка с использованием BCA (№ P0011, Beyotime Biotechnology, Китай). Лизаты клеток (20-50 мкг) разделяли на 8-12% SDS-PAGE. Разделенные белки переносили на мембрану из PVDF (№ 10600023, Amersham, США). Мембрану из PVDF промокали 1% буфером BSA в течение 1 ч при комнатной температуре. Мембрану инкубировали с первичным антителом в 1 x TBST с 5% BSA при 4°C в течение ночи. Мембрану промывали с помощью 1 x TBST 3 раза. Мембрану инкубировали с HRP-конъюгированным вторичным антителом в течение 1 ч при комнатной температуре. Мембрану промывали с помощью 1 x TBST 3 раза. Сигналы визуализировали с помощью Super ECL plus (№ 36208ES76, Yeasen Biotech, Китай) и системы визуализации (Azure C300, Azure Biosystems, США).

Эффективность in vivo в ортотопических моделях

Эффективность in vivo оценивали с использованием сингенной мышиной модели, полученной за счет клеток BaF3 с T315I и/или сочетанными мутациями. Модели опухолей создавали посредством внутривенной инъекции опухолевых клеток (1×10⁵/мышь) в хвостовую вену в стерильных условиях. Мышей случайным образом распределяли на контрольную группу и группу лечения по 8-10 мышей в группе и начинали лечение со второго дня после инокуляции. Значения веса тела животных измеряли два раза в неделю. Кривые противоопухолевой активности тестируемых готовых продуктов строили с временем лечения (дни) на оси X и соответствующей коэффициентом выживаемости на оси Y. Проверку с помощью логрангового критерия (Мантеля-Кокса) использовали для анализа статистической значимости любых различий между группой лечения и контрольной группой. Prism версии 7 (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) использовали для всего статистического анализа и для графического представления.

Результаты

Серию линий клеток, экспрессирующих одиночные или сочетанные мутации BCR-ABL, конструировали на основе линии клеток мыши про-B BaF3. Эффект HQP-1351 в качестве отдельного средства или в комбинации с асциминибом анализировали с использованием анализа антипролиферативного эффекта, анализов методом вестерн-блота и FACS in vitro. Клеточные исследования антипролиферативного эффекта продемонстрировали превосходную активность HQP-1351 в отношении одиночных или сочетанных мутаций BCR-ABL со значениями IC₅₀, находящимися в диапазоне 6-300 нМ. В частности, HQP-1351 был более эффективным, чем понатиниб, асциминиб и другие TKI, в отношении этих сочетанных мутаций. Более того, комбинация HQP-1351 с асциминибом была высокоэффективной в отношении сочетанных мутаций в BCR-ABL, особенно тех, которые содержат T315I.

Исследования in vivo дополнительно показали, что совместное введение HQP-1351 с асциминибом (ABL001) приводило в результате к значительному повышению выживаемости по сравнению с таковой в случае отдельных средств. Важно отметить, что противоопухолевый эффект был более сильным, чем таковой понатиниба плюс асциминиба в моделях, несущих T315I или сочетанные мутации. Результаты показаны в таблицах 1-6 и на фигурах 1-11.

Результат исследования также показан на фигурах 8А и 8В.

Результат исследования также показан на фигурах 9A и 9B.

Результат исследования также показан на фигурах 10A и 10B.

Результат исследования также показан на фигурах 11A и 11B.

Заключение

Результаты продемонстрировали, что комбинация ингибитора АТФ-связывающего сайта олверембатиниба и аллостерического ингибитора оказывает синергический противоопухолевый эффект в отношении опухолевых клеток, несущих одиночные или сочетанные мутации в BCR-ABL. Без ограничения теорией, комбинированное лечение обеспечивало синергическое снижение уровня фосфорилирования BCR-ABL и расположенных ниже в цепи передачи сигнала белков CRKL и STAT5, а усиленное расщепление Caspase-3 и PARP-1 запускало таким образом апоптоз и впоследствии усиливало противоопухолевые эффекты. Эта новая стратегия может помочь преодолеть вторичные сочетанные мутации после лечения с помощью TKI.

[0136] Пример 2. Исследование HQP-1351 в качестве ингибитора SRC, который повышает противоопухолевый иммунитет при немелкоклеточном раке легкого

Общий способ

Анализ цитотоксичности использовали для определения проявлений противоопухолевой активности HQP-1351 в линиях клеток NSCLC. Кроме того, экспрессию PD-L1 в клетках, обработанных с помощью HQP-1351, исследовали с помощью вестерн-блота, количественной ПЦР и проточной цитометрии. В дополнение, эффекты HQP-1351 отдельно или в комбинации с ICI в отношении усиления противоопухолевого иммунитета также были определены in vitro и in vivo. Для изучения основных механизмов применяли технику манипуляции генами для получения клеток NSCLC со стабильным нокдауном SRC.

Культура клеток и регенты

Линии клеток NSCLC (A549, H1299, H460), линию клеток рака легкого Льюиса (LLC) и линию Т-клеток 293 получили из Американской коллекции типовых культур (ATCC, США) и валидировали с помощью анализа коротких тандемных повторов (STR). Клетки культивировали либо в среде RPMI-1640 (для линий клеток NSCLC), либо в среде DMEM (для клеток LLC и Т-клеток 293), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, и поддерживали при 37°C в увлажняемом инкубаторе с 5% CO2. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) культивировали в среде для Т-клеток (RPMI-1640 с добавлением 10% человеческой сыворотки крови, 5% раствора L-глутамина-пенициллина-стрептомицина (Sigma-Aldrich, США) и IL-2 (100 МЕ/мл). HQP-1351 был предоставлен Ascentage Pharma Group Inc. Для исследований in vitro HQP-1351 растворяли в DMSO при концентрации 10 мкМ и хранили при -20°C. Для исследований in vivo HQP-1351 растворяли в 0,2% HPMC.

Анализы жизнеспособности клеток

Клетки культивировали при плотности 3 × 10³ клеток на лунку, содержащую 200 мкл культивирующей среды, в 96-луночных планшетах в течение 12 часов. После прилипания клетки предварительно обрабатывали с помощью HQP-1351 в указанной концентрации в течение 72 часов. Добавляли 20 мкл реагентов CCK8 (Dojindo Laboratories, Япония) к 200 мкл питательной среды на лунку и инкубировали в течение 2-4 ч при 37°С. Затем измеряли значение поглощения с помощью спектрофотометра при 450 нм. Все эксперименты выполняли в 3 повторах на испытание и осуществляли их не менее трех раз. Кривые доза-ответ и значения полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC50) анализировали с помощью нелинейной регрессии на GraphPad Prism версии 8.0.

Анализ методом вестерн-блот

Клетки обрабатывали указанными концентрациями и дважды промывали холодным PBS. Экстракты цельных клеток собирали в буфере для лизиса RIPA (Santa Cruz Biotechnology, Германия) и измеряли концентрацию белка в лизатах с использованием набора для анализа белков BCA Protein Assay Kit (ThermoFisher, США). Образцы белка подвергали электрофорезу через 10% гель SDS-PAGE и переносили на мембрану из поливинилидендифторида (PVDF) (Roche, США). После блокирования мембраны зондировали первичными антителами (1:1000) к SRC, p-SRC, PD-L1, GAPDH, β-тубулину (Cell Signaling Technology, США) с последующей промывкой и инкубацией со вторичным антителом (1:5000), конъюгированным с пероксидазой хрена (Santa Cruz Biotechnology, США). Белковые полосы визуализировали путем применения хемилюминесцентного реагента (набор Pierce ECL, Thermo Fisher Scientific, США) и уровень белка определяли количественно с помощью Image Lab (Bio-Rad Laboratory, США).

Экстракция РНК и количественная ПЦР в реальном времени

Общую клеточную РНК выделяли с помощью Trizol (Invitrogen, США) для анализа мРНК. РНК подвергали обратному транскрибированию с получением профиля кДНК с использованием набора для синтеза кДНК Transcriptor First Strand cDNA Synthesis kit (Roche Applied Science, США), а затем реакции ПЦР в реальном времени осуществляли с использованием реагента FastStart SYBR Green Master (ROX) (Roche Applied Science, США) в соответствии с инструкциями производителя. Анализ методом ПЦР в реальном времени осуществляли с использованием системы Biorad CFX96 с SYBR green (Bio-Rad, США) и соответствующими праймерами для оценки уровня экспрессии мРНК SRC. Данные нормализовали по уровням GAPDH в образцах в трех повторах. Праймеры были следующими:

SRC: прямой: GAGCGGCTCCAGATTGTCAA (SEQ ID NO: 1),

обратный: CTGGGGATGTAGCCTGTCTGT (SEQ ID NO: 2);

PDL1: прямой: TATGGTGGTGCCGACTACAA (SEQ ID NO: 3),

обратный: TGCTTGTCCAGATGACTTCG (SEQ ID NO: 4);

GAPDH: прямой: GGTGAAGGTCGGAGTCAACGG (SEQ ID NO: 5),

обратный: CCTGGAAGATGGTGATGGGATT (SEQ ID NO: 6).

Трансфекция shRNA и плазмидной ДНК

Осуществляли временную трансфекцию с помощью shRNA SRC и скрембл-контроля shRNA (GeneCopoeia, США) вместе с набором для упаковывания pSIH-H1-puro Lentivector Packaging Kit (System Biosciences, США). Процедуры трансфекции осуществляли в Т-клетках 293, выращенных до достижения степени формирования клеточного монослоя, составляющей ~80%, в чашках с диаметром 10 см с использованием реагента для трансфекции Lipofectamine 2000 (Life Technologies, США) и следуя инструкциям производителя. Клетки Н460 и Н1299 инфицировали и инкубировали с вирусными частицами в течение ночи при 37°С. Через 48 ч после трансфекции клетки подвергали пуромициновому отбору путем добавления в среду для роста пуромицина (1,5 мкг/мл для Н460 и 2 мкг/мл для Н1299). Стабильное подавление экспрессии генов подтверждалось посредством вестерн-блоттинга и RT-PCR.

Анализ образования колоний

В качестве эффекторных клеток РВМС человека очищали из крови здоровых добровольцев с использованием центрифугирования в градиенте фиколла (Solarbio, Пекин). Чистота выделенных клеток составляла > 95%, как определено с помощью проточной цитометрии (FCM). Линии клеток NSCLC высевали в 96-луночный планшет, обработанный или не обработанный с помощью HQP-1351. Мононуклеарные клетки периферической крови человека активировали с помощью 100 нг/мл антитела к CD3, 100 нг/мл антитела к CD28 и 10 нг/мл IL-2, а затем культивировали совместно с клетками NSCLC. Клетки обрабатывали или не обрабатывали с помощью Ab к PD-L1 и культивировали совместно с активированными PBMC при нескольких соотношениях мишень-эффектор (1:0, 1:1, 1:4, 1:16) (все образцы в трех повторах). После 4 дней совместной инкубации лунки 24-луночных планшетов промывали дважды с помощью PBS для удаления PBMC, а затем выжившие опухолевые клетки фиксировали и окрашивали окрашивающим раствором Гимза. Высушенные пластины сканировали и количественно определяли интенсивность.

Анализ методом проточной цитометрии

Активированные РВМС высевали при плотности 1 × 106/лунка в 6-луночные планшеты, а затем культивировали совместно с опухолевыми клетками, предварительно обработанными с помощью HQP-1351, при соотношении 4:1 в течение 24 ч. В соответствующие лунки добавляли антитело к человеческому PD-L1, атезолизумаб (Selleck Chemicals, США) (50 мкг/мл). После совместного культивирования выделяли PBMC и окрашивали с помощью антител к CD3 и к CD8 для оценки доли CD8+ клеток. Для анализа на IFN-γ, TNF-α и гранзим B собирали PBMC, а затем обрабатывали брефельдином A (Biolegend, США) при 37°C в течение дополнительных 3 ч для предупреждения внеклеточной секреции. Затем РВМС фиксировали и пермеабилизировали с помощью набора буферов для внутриклеточной фиксации и пермеабилизации Intracellular Fixation and Permeabilization Buffer Set Kit (eBioscience, США) в соответствии с инструкциями производителя. Затем осуществляли мечение посредством внутриклеточного окрашивания и выявление с помощью проточной цитометрии для определения процентного содержания клеток, положительных по IFN-γ, TNF или гранзиму B, среди CD8+ T-клеток. Антитела для анализа методом проточной цитометрии приобретали у eBiosciences, США. Совпадающие изотипические контроли использовали для каждого антитела для определения гейтов. Для анализа данных проточной цитометрии использовали программу FlowJo (Treestar, США). Стандартизированные значения интенсивности флуоресценции рассчитывали путем деления медианных значений интенсивности флуоресценции специфических антител на медианные значения интенсивности флуоресценции изотипических контролей. Результаты выражали как среднее ± стандартное отклонение по трем независимым экспериментам.

Исследования на мышах in vivo

Мышей C57BL/6 получали от Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd (Пекин, Китай) и содержали в специальном барьерном помещении, свободном от патогенов (SPF), в Центре животных Онкологического центра Университета Сунь Ятсена. Для всех экспериментов на животных использовали самок мышей в возрасте 8-12 недель. Эксперименты были одобрены институциональным комитетом Онкологического центра Университета Сунь Ятсена и проводились в соответствии с протоколами, одобренными Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных провинции Гуандун.

Клетки LLC (10 × 10⁵ клеток в 200 мкл среды для роста) вводили подкожно в правый бок иммунокомпетентным мышам C57BL/6. Рост опухоли измеряли штангенциркулем каждые 3 дня, а объемы опухоли рассчитывали по следующей формуле: 1/2 (длина х ширина2). Когда опухоли достигали приблизительно 100 мм3, мышей случайным образом распределяли в контрольную или экспериментальную группы. Терминальное событие определяли как опухоль, достигавшую размера 2000 мм3, после чего животных подвергали эвтаназии.

Мышей обрабатывали с помощью HQP-1351 или крысиного антитела к PD-L1 (αPD-L1, клон 10F.9G2; BioLegend, США) отдельно, с помощью комбинации HQP-1351 и αPD-L1 или физиологического раствора и IgG2bκ (клон RTK4530; BioLegend, США). HQP-1351 (50 мг/кг) вводили через желудочный зонд с дня 13 каждый день после имплантации опухоли. Средство терапии на основе антитела к PD-L1 (10 мг/кг) вводили внутрибрюшинно еженедельно в дни 16, 23, 30, 37 и 44. Анализ выживаемости выполняли с использованием анализа Каплана-Мейера и логарифмического рангового критерия.

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с использованием программного обеспечения IBM SPSS Statistics 19 или GraphPad Prism с использованием t-критерия Стьюдента, или однофакторного ANOVA, или критерия Даннета. Все эксперименты повторяли в трех повторах. Данные выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (SD). Статистическую значимость определяли как P < 0,05.

Результаты

HQP-1351 усиливает эффективность антитела к PD-L1 in vitro

Во-первых, чтобы исключить какие-либо основные отклонения, обусловленные изменчивостью уровня подавления роста, индуцируемого HQP-1351, авторы настоящего изобретения строили кривые ингибирования роста для различных линий клеток и установили ингибирующую концентрацию 50% (IC50) (фиг. 1а). Затем, чтобы выяснить, мог ли HQP-1351 в комбинации с блокадой PD-1/PD-L1 оказывать синергический иммунотерапевтический эффект, авторы настоящего изобретения протестировали эффективность комбинированного применения HQP-1351 и блокирующих антител к PD-L1 in vitro. HQP-1351 в комбинации с антителом к PD-L1 (атезолизумабом) продемонстрировал значительно более высокий уровень ингибирования роста опухоли по сравнению с HQP-1351 отдельно или блокадой PD-L1 отдельно. На фигурах 12A-C показано, что HQP-1351 усиливает эффективность антитела к PD-L1 in vitro. Цитотоксичность HQP-1351 в отношении различных человеческих раковых клеток определяли с помощью CCK8, как описано в материалах и способах. Каждая точка представляла собой среднее ± стандартное отклонение (SD) по проведенным трем независимым экспериментам. (B-C). Тест на цитотоксичность Т-клеток с помощью анализа образования колоний. Оценивали выживаемость клеток H460 и H1299, предварительно обработанных с помощью HQP-1351, клеток без предварительной обработки, обработанных с помощью Ab к PD-1 или без такой обработки и совместно культивируемых с РВМС (клетки-мишени:эффекторные клетки = 1:0, 1:1, 1:4, 1:8) в 24-луночных планшетах в течение 4 дней.

HQP-1351 усиливает эффективность антитела к PD-L1 in vivo

Среди несущих опухоли мышей с клетками LLC, у мышей, получавших лечение с помощью HQP-1351 плюс Ab к PD-L1, наблюдалась более значительная задержка роста опухоли (фиг. 2a-c) по сравнению с мышами, получавшими монотерапию с помощью HQP-1351 или Ab к PD-L1. Между тем, у подопытных мышей не наблюдалось значительной потери веса тела, что позволило предположить, что комбинированная схема относительно хорошо переносилась мышами. На фигурах 13A-F показано, что HQP-1351 усиливает эффективность антитела к PD-L1 in vivo. Объемы опухолей определяли в указанные дни при различных вариантах обработки у мышей C57BL/6 (n=5). Планки погрешностей представляют SEM по трем независимым экспериментам. (B) Изменение веса тела мышей C57BL/6 при различных вариантах обработки (n=5).

HQP-1351 подавляет экспрессию p-STAT3 и PD-L1 в зависимости от дозы и времени.

Для дальнейшего изучения потенциального механизма усиления антитела к PD-L1 с помощью HQP-1351 авторы настоящего изобретения дополнительно проверили ингибирующий эффект HQP-1351 в отношении экспрессии PD-L1. После обработки с помощью HQP-1351 в различных концентрациях авторы настоящего изобретения наблюдали, что HQP-1351 обеспечивал снижение уровня экспрессии PD-L1, а также фосфорилирования p-SRC в зависимости от концентрации в линиях клеток NSCLC (фигура 14A). Более того, клетки, обработанные с помощью 2 мкМ HQP-1351 в различные моменты времени, показали зависимое от времени подавление уровней PD-L1 и p-SRC (фигура 14B). Чтобы протестировать это, авторы настоящего изобретения также выполняли анализ методом ПЦР в реальном времени (RT-PCR) (фигура 14C). Эти результаты продемонстрировали, что HQP-1351 обеспечивал снижение уровня экспрессии p-SRC и PD-L1 в зависимости от времени и концентрации. На фигурах 14A-C показано, что HQP-1351 подавляет экспрессию p-SRC и PD-L1 в зависимости от дозы и времени. На фигуре 14A клетки H460 и A549 обрабатывали с помощью HQP-1351 в различных концентрациях в течение 24 ч, экспрессию p-SRC, SRC и PD-L1 измеряли с помощью вестерн-блота. На фигуре 14B клетки H460 и A549 обрабатывали 2 мкМ HQP-1351 в течение различных интервалов времени, измеряли экспрессию p-SRC, SRC и PD-L1 с помощью вестерн-блота. На фигуре 14C клетки H460 и A549 обрабатывали различными концентрациями HQP-1351 в течение 24 ч и обрабатывали 2 мкМ HQP-1351 в течение различных интервалов времени, измеряли экспрессию SRC и PD-L1 с помощью RT-PCR.

Заключение

Данные авторов настоящего изобретения продемонстрировали, что HQP1351 действует в качестве ингибитора SRC, усиливающего Т-клеточноопосредованные противоопухолевые иммунные ответы при NSCLC.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что ингибитор SRC, представляющий собой HQP-1351, обеспечивал надежное снижение уровня экспрессии PD-L1 в клетках NSCLC и в моделях на животных. Наблюдаемый ингибирующий эффект зависел от времени и концентрации. Кроме того, результаты авторов настоящего изобретения показали, что объединенные HQP-1351 и антитело к PD-L1 обеспечивали улучшение в отношении опосредованного Т-клетками уничтожения опухолевых клеток in vitro и in vivo, что было ассоциировано с повышенной выработкой цитокинов активированных CD8+ Т-цитотоксических клеток, включающих IFN-γ, TNF-α и гранзим-B. Кроме того, авторы настоящего изобретения также наблюдали, что мыши, получавшие HQP-1351 в комбинации с блокадой PD-L1, показывали более длительную выживаемость, чем мыши, получавшие одно лекарственное средство отдельно.

Авторы настоящего изобретения также предоставили доказательства, свидетельствующие в пользу применения комбинации HQP-1351 и антитела к PD-1/PD-L1 в качестве потенциального комбинированного терапевтического подхода для повышения эффективности иммунотерапии при NSCLC.

[0137] Пример 3. Противоопухолевая активность HQP-1351 в линии клеток пре-B All, положительной по филадельфийской хромосоме (Ph+ All SUP-B15)

Анализ жизнеспособности клеток

Клетки лейкоза высевали при плотности 10000 клеток в непрозрачный 96-луночный планшет и инкубировали с возрастающими концентрациями HQP1351 или с средой-носителем (DMSO). После обработки жизнеспособность клеток измеряли с помощью набора для 3D-анализа жизнеспособности клеток с использованием люминесценции Promega^® Cell-Titer Glo^® в соответствии с инструкциями производителя (Promega, Мэдисон, Висконсин, США, № по кат. G7571). Сигнал люминесценции регистрировали с помощью гибридного многорежимного (микропланшетного) ридера BioTek Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Reader (BioTek, Шанхай). Строили кривые пролиферативной активности клеток (т. е. жизнеспособности) и рассчитывали значения IC₅₀ антипролиферативного эффекта с использованием программного обеспечения Graphpad Prism версии 6.0 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США).

На фигуре 15 показана кривая жизнеспособности клеток SUP-B15, обработанных с помощью HQP1351 в течение 72 часов.

На фигуре 16 показаны значения IC₅₀ для антипролиферативного эффекта HQP1351 в линиях клеток лейкоза, положительных (Ph+ или BCR-ABL1+) и отрицательных по филадельфийской хромосоме (Ph- или BCR-ABL1-). Данные продемонстрировали, что HQP1351 избирательно ингибировал пролиферацию Ph+ клеток, включая SUP-B15.

Заключение

HQP1351 обеспечивает мощное ингибирование пролиферации Ph+ ALL SUP-B15 клеток и индуцирование апоптоза в первичных линиях клеток пре-B ALL и клеток ALL.

Группа изобретений относится к средствам комбинированного лечения пациентов с раком. Раскрыт способ лечения рака введением эффективного количества HQP-1351, где HQP-1351 имеет следующую структуру:

или его фармацевтически приемлемой соли и асциминиба. Также раскрыты способ ингибирования мутантов BCR-ABL, способ лечения немелкоклеточного рака легкого. Группа изобретений обеспечивает эффективные способы терапии и средства лечения рака. 3 н. и 17 з.п. ф-лы, 16 ил., 6 табл., 3 пр.

1. Способ лечения рака, включающий совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества:

a) HQP-1351 или его фармацевтически приемлемой соли и

b) асциминиба;

где рак представляет собой лейкоз;

где HQP-1351 имеет следующую структуру:

HQP-1351.

2. Способ по п. 1, где рак представляет собой хронический миелогенный лейкоз.

3. Способ по п. 1 или 2, где способ осуществляют при лечении пациента с хроническим миелоидным лейкозом, резистентным к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы.

4. Способ по п. 3, где хронический миелоидный лейкоз, резистентный к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы, у пациента вызван мутациями в BCR-ABL.

5. Способ по п. 4, где мутация в BCR-ABL представляет собой мутации T3151, E255K/V, G250E, H396P, M351T, Q252H, Y253F/H или BCR-ABL^WT.

6. Способ по п. 4, где мутация в BCR-ABL представляет собой мутацию T3151.

7. Способ ингибирования мутантов BCR-ABL, включающий приведение мутантов BCR-ABL в контакт с эффективным количеством совместно вводимых a) HQP-1351 или его фармацевтически приемлемой соли и b) асциминиба;

где HQP-1351 имеет следующую структуру:

HQP-1351.

8. Способ по п. 7, где ингибирование осуществляют in vitro или in vivo.

9. Способ по п. 8, где ингибирование осуществляют у пациента с хроническим миелоидным лейкозом, резистентным к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы.

10. Способ по п. 9, где хронический миелоидный лейкоз, резистентный к современным видам терапии ингибиторами тирозинкиназы, у пациента вызван мутациями в BCR-ABL.

11. Способ по п. 10, где мутация в BCR-ABL представляет собой мутации T3151, E255K/V, G250E, H396P, M351T, Q252H, Y253F/H или BCR-ABL^WT.

12. Способ по п. 10, где мутация в BCR-ABL представляет собой T3151.

13. Способ лечения немелкоклеточного рака легкого, включающий совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества:

a) HQP-1351 или его фармацевтически приемлемой соли и

b) PD-L1,

где HQP-1351 имеет следующую структуру:

HQP-1351.

14. Способ по п. 13, где PD-L1 представляет собой атезолизумаб, авелумаб или дурвалумаб.

15. Способ по любому из пп. 1-6 или 13, 14, где HQP-1351 или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально пациентам, нуждающимся в этом.

16. Способ по любому из пп. 1-6 или 13, 14, где HQP-1351 или его фармацевтически приемлемую соль вводят один раз в два дня (QOD) во время 28-дневного цикла лечения.

17. Способ по п. 16, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 4 мг или приблизительно 8 мг.

18. Способ по п. 16, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 12 мг или приблизительно 20 мг.

19. Способ по п. 16, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг или приблизительно 45 мг.

20. Способ по п. 16, где HQP-1351 вводят один раз в два дня в количестве, составляющем приблизительно 50 мг или приблизительно 60 мг.