СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ КОРОНАВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/506 A61K31/535 C07D401/10 A61P31/14 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к способам лечения пациентов с коронавирусными инфекциями, в том числе пациентов, страдающих коронавирусной болезнью 2019 (COVID-19).

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Коронавирусы представляют собой большое семейство вирусов, характеризующееся булавовидными шипами, выступающими из их поверхности, необычно большим РНК-геномом и уникальной стратегией репликации. Fehr et al., Methods Mol. Biol., 2015, 1282: 1-23. Коронавирусы обычно вызывают ряд заболеваний у млекопитающих и птиц в диапазоне от легкой до умеренной степени тяжести заболеваний верхних дыхательных путей, в том числе заболевания, вызываемые коронавирусами 229E, NL63, OC43 и HKU1. Common Human Coronaviruses, Centers for Disease Control and Prevention, доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/general-information.html (последнее обращение 27 апреля 2020 г.). Однако в последние два десятилетия у животных-резервуаров появились новые виды коронавирусов, вызывающие серьезные и широко распространенные заболевания и смерть у людей. Coronaviruses, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, доступно по адресу https://www.niaid.nih.gov/diseases-conditions/coronaviruses (последнее обращение 27 апреля 2020 г.).

[0003] В 2002 и 2003 гг. вспышки высокопатогенного тяжелого острого респираторного коронавирусного синдрома (SARS-CoV) вызвали более 8000 случаев во всем мире с уровнем смертности ~ 10%. В 2012 г. коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV) вызвал 2500 подтвержденных случаев со смертностью в 36%. Wit et al., Nature Reviews Microbiology, 2016, 14, 523-534.

[0004] В 2019 г. новый коронавирус, названный SARS-CoV-2, появился и вызвал острый респираторный синдром у людей, названный коронавирусной болезнью 2019 (COVID-19). Всемирная организация здравоохранения объявила глобальную пандемию 11 марта 2020 г. Coronaviruses, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, доступно по адресу https://www.niaid.nih.gov/diseases-conditions/coronaviruses (последнее обращение 27 апреля 2020 г.). По состоянию на 26 апреля 2020 г. насчитывалось в общей сложности 2992970 подтвержденных случаев COVID-19 и 207518 подтвержденных случаев смерти, вызванных SARS-CoV-2. John Hopkins University Coronavirus Resource Center, доступно по адресу https://coronavirus.jhu.edu/map.html (последнее обновление 27 апреля 2020 г., 10:31:17 утра).

[0005] Лечение коронавирусной инфекции, в особенности COVID-19, является острой необходимостью. Однако на сегодняшний момент нет клинически доступных противовирусных лекарственных средств, которые могут обеспечивать эффективное лечение заболеваний, вызванных SARS-CoV, SARS-CoV-2 или MERS-CoV. Эффективным подходом к изысканию новых лекарственных средств является тестирование существующих противовирусных лекарственных средств или лекарственных средств-кандидатов для новых показаний. С учетом сроков разработки и требований к изготовлению новых препаратов изменение назначения существующих лекарственных средств или лекарственных средств-кандидатов является перспективным решением для вспышек, вызванных появляющимися вирусами.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 1:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[0007] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 2:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[0008] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 3:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[0009] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения вирусной инфекции у пациента, включающим введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 4:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[0010] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 5:

Соединение 5,

или его фармацевтически приемлемой соли.

[0011] В определенных вариантах осуществления вирусная инфекция вызвана коронавирусом.

[0012] В определенных вариантах осуществления вирусная инфекция представляет собой коронавирусную инфекцию, вызванную коронавирусом.

[0013] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS-CoV, 229E, NL63, OC43 или HKU1.

[0014] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2.

[0015] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV.

[0016] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана MERS-CoV.

[0017] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения пациента, страдающего COVID-19.

[0018] В определенных вариантах осуществления COVID-19 вызван SARS-CoV-2.

[0019] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена лекарственная или фармацевтическая композиция, содержащая соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0020] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена лекарственная или фармацевтическая композиция, содержащая соединение 2 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0021] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена лекарственная или фармацевтическая композиция, содержащая соединение 3 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0022] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена лекарственная или фармацевтическая композиция, содержащая соединение 4 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0023] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена лекарственная или фармацевтическая композиция, содержащая соединение 5 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0024] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0025] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения 2 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0026] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения 3 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0027] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения 4 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

[0028] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения 5 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции, в частности коронавирусной инфекции.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0029] На фиг. 1 показан эффект соединения 2 в отношении индукции апоптоза, экспрессии IAP, а также репликации HBV и экспрессии генов в линии раковых клеток печени HepG2.2.15.

[0030] На фиг. 2 указано, что соединение 2 способствует очищению от вируса в модели pAAV-HBV 1.3 на мышах C57BL/6J.

[0031] На фиг. 3 показано, что соединение 2 специфично индуцирует апоптоз в гепатоцитах, инфицированных HBV (HBsAg+), в моделях HBV у мышей.

[0032] На фиг. 4 показано, что соединение 2 способствует экспрессии IFN-γ и TNF-α, а также увеличению количества CD4+ и CD8+ T-клеток в ткани печени в моделях HBV.

[0033] На фиг. 5 показана процедура тестирования противовирусной активности соединения 1 и соединения 2 при использовании иммунофлуоресцентного анализа (IFA) SARS-CoV-2. Иматиниб, ремдесивир, хлорохин и лопинавир использовались в качестве эталонов.

[0034] На фиг. 6 показаны результаты противовирусной активности соединения 1 и соединения 2 при использовании иммунофлуоресцентного анализа (IFA) SARS-CoV-2. Иматиниб, ремдесивир, хлорохин и лопинавир использовались в качестве эталонов.

[0035] На фиг. 7 показан способ ингибирования цитокинов, ассоциированных с цитокиновым штормом, индуцированным вирусом гриппа.

[0036] На фиг. 8 показаны результаты ингибирования цитокинов, ассоциированных с цитокиновым штормом, индуцированным вирусом гриппа.

[0037] На фиг. 9 показана выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа (IFV), получавших лечение с помощью соединения 1 или эталонных соединений (понатиниба, озельтамивира).

[0038] На фиг. 10 показаны результаты для соединения 1 и понатиниба в анализе RIPK1-киназы. GSK2982772 использовали в качестве эталона.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0039] Все опубликованные документы, цитируемые в данном документе, включены в данный документ в качестве ссылки во всей своей полноте.

[0040] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимает средний специалист в той области техники, к которой относится настоящее изобретение.

[0041] Термин «приблизительно» используется в данном документе в значении примерно, порядка, ориентировочно или около. При использовании термина «приблизительно» в сочетании с числовым диапазоном он модифицирует этот диапазон, расширяя пределы в большую и меньшую сторону от приведенных числовых значений. Как правило, термин «приблизительно» используется в данном документе для модификации числового значения в большую и меньшую сторону от указанного значения с отклонением на 10%.

[0042] Термин «содержит» означает «включающий без ограничения».

[0043] Термины «лечение», «лечить» и «осуществление лечения», используемые в данном документе, относятся к обращению вспять, смягчению, задержке начала проявления или подавлению прогрессирования заболевания или нарушения или одного или нескольких его симптомов, в том числе без ограничения терапевтическую пользу. В некоторых вариантах осуществления лечение проводится после развития одного или нескольких симптомов. В некоторых вариантах осуществления лечение можно проводить при отсутствии симптомов. Например, лечение можно проводить субъекту до появления симптомов (например, в свете наличия симптомов в анамнезе и/или в свете генетических или других факторов предрасположенности). Лечение также можно продолжать после устранения симптомов, например, для предупреждения или задержки их рецидива.

[0044] Терапевтическая польза включает искоренение и/или уменьшение интенсивности проявлений первопричинного нарушения, лечение которого осуществляют, такого как рак; она также включает искоренение и/или уменьшение интенсивности проявлений одного или нескольких симптомов, ассоциированных с первопричинным нарушением, так что у субъекта наблюдается улучшение, несмотря на то, что субъект все еще может быть поражен первопричинным нарушением. В некоторых вариантах осуществления «лечение» или «осуществление лечения» включает одно или несколько из следующего: (a) подавление нарушения (например, ослабление одного или нескольких симптомов, обусловленных нарушением, и/или уменьшение степени тяжести нарушения); (b) замедление или остановку развития одного или нескольких симптомов, ассоциированных с нарушением (например, стабилизацию нарушения и/или задержку усугубления или прогрессирования нарушения); и/или (c) облегчение нарушения (например, обеспечение регрессии клинических симптомов, уменьшение интенсивности проявлений нарушения, задержку прогрессирования нарушения и/или повышение качества жизни).

[0045] Как используется в данном документе, «осуществление введения» или «введение» соединения формулы (I) или формулы (I-A) или его фармацевтически приемлемой соли охватывает доставку пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли, или пролекарства, или другого его фармацевтически приемлемого производного с использованием любого подходящего состава или пути введения, например, как описано в данном документе.

[0046] Термин «терапевтически эффективное количество» или «эффективное количество», используемый в данном документе, относится к количеству, которое является эффективным для того, чтобы вызвать желаемый биологический или медицинский ответ, в том числе к количеству соединения, которое при введении субъекту для лечения нарушения является достаточным для осуществления такого лечения нарушения. Эффективное количество будет варьироваться в зависимости от нарушения и степени его тяжести, а также возраста, массы и т. д. субъекта, подлежащего лечению. Эффективное количество может быть представлено одной или несколькими дозами (например, могут потребоваться однократная доза или многократные дозы для достижения желаемой конечной точки лечения). Эффективное количество можно считать введенным в эффективном количестве, если в сочетании с одним или несколькими другими средствами может быть достигнут или достигается желаемый или благоприятный результат. Подходящие дозы любых совместно вводимых соединений могут быть необязательно снижены ввиду комбинированного действия, аддитивного или синергического действия соединения.

[0047] Как используется в данном документе, «пациент», которому предполагается введение, включает без ограничения людей (т. е. мужчину или женщину из любой возрастной группы, например, педиатрического субъекта (например, младенца, ребенка, подростка) или взрослого субъекта (например, молодого человека, человека среднего возраста или пожилого человека)) и/или других приматов (например, яванских макаков, макаков-резусов).

[0048] Как используется в данном документе, «фармацевтически приемлемый» или «физиологически приемлемый» относится к соединениям, солям, композициям, лекарственным формам и другим материалам, которые применимы при получении фармацевтической композиции, подходящей для фармацевтического применения в ветеринарии или медицине.

[0049] Термин «фармацевтически приемлемая соль», используемый в данном документе, относится к тем солям, которые в пределах здравого медицинского суждения подходят для применения в контакте с тканями людей и низших животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и т. п. соизмеримо с разумным соотношением польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны из уровня техники. Например, S. M. Berge и соавт. подробно описывают фармацевтически приемлемые соли в J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Фармацевтически приемлемые соли соединения 1 включают соли, полученные из подходящих неорганических и органических кислот и оснований. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных солей присоединения кислоты являются соли по аминогруппе, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и хлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или с использованием других способов, используемых в данной области техники, таких как ионный обмен. Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипатные, альгинатные, аскорбатные, аспартатные, бензолсульфонатные, бензоатные, бисульфатные, боратные, бутиратные, камфоратные, камфорсульфонатные, цитратные, циклопентанпропионатные, диглюконатные, додецилсульфатные, этансульфонатные, формиатные, фумаратные, глюкогептонатные, глицерофосфатные, глюконатные, гемисульфатные, гептаноатные, гексаноатные, гидройодидные, 2-гидроксиэтансульфонатные, лактобионатные, лактатные, лауратные, лаурилсульфатные, малатные, малеатные, малонатные, метансульфонатные, 2-нафталинсульфонатные, никотинатные, нитратные, олеатные, оксалатные, пальмитатные, памоатные, пектинатные, персульфатные, 3-фенилпропионатные, фосфатные, пивалатные, пропионатные, стеаратные, сукцинатные, сульфатные, тартратные, тиоцианатные, п-толуолсульфонатные, ундеканоатные, валератные соли и т. п. Хотя фармацевтически приемлемые противоионы будут предпочтительными для получения фармацевтических составов, другие анионы вполне приемлемы в качестве промежуточных продуктов синтеза. Таким образом, это могут быть фармацевтически нежелательные анионы, такие как йодид, оксалат, трифторметансульфонат и т. п., если такие соли являются промежуточными химическими соединениями.

[0050] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» используется в данном документе для обозначения материала, который совместим с получающим его субъектом, предпочтительно с млекопитающим, более предпочтительно с человеком, и подходит для доставки активного средства в участок-мишень без прекращения активности средства. Токсичность или нежелательные эффекты, связанные с носителем, если таковые имеются, должны быть предпочтительно соизмеримы с разумным соотношением риск/польза для предполагаемого применения активного средства.

[0051] Термин «перорально» относится к введению композиции, предназначенной для приема внутрь. Примеры пероральных форм включают без ограничения таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии и капли. Такие формы можно проглатывать целиком, или они могут быть представлены в жевательной форме.

[0052] Термин «алкил» означает алкильную группу с разветвленной цепью или прямой цепью с определенным количеством атомов углерода. Например, определение «C₁-C₅» в «C₁-C₅алкил» означает алкильную группу с прямой цепью или разветвленной цепью с 1, 2, 3, 4 или 5 атомами углерода. Например, «C₁-C₅алкил» включает метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, изобутил, пентил и т. д.

[0053] Термин «циклоалкил» относится к конкретному одиночному насыщенному алкильному кольцу с определенным количеством атомов углерода. Например, «циклоалкил» включает циклопропил-, метилциклопропил-, 2,2-диметилциклобутил, 2-этилциклопентил-, циклогексил и т. д.

[0054] Термин «гетероцикл» относится к ароматическому или неароматическому кольцу, содержащему 5-6 атомов, в котором содержатся 1-4 гетероатома, такие как O, N, S. «Гетероцикл» включает гетероароматическое кольцо, упомянутое выше; он также включает дигидро- и тетрагидроаналоги. «Гетероциклы» дополнительно включают без ограничения: имидазолил, индолил, изотиазолил, изоксазолил, оксадиазолил, оксазолил, оксетанил, пиранил, пиразинил, пиразолил, пиридазинил, пиридил, пиримидинил, пирролил, хиназолинил, тетразолил, тиадиазолил, тиазолил, тиенил, триазолил, 1,4-алкилдиоксинил, алкилпирролидинил, дигидроимидазолил, дигидроизоксазолил, дигидроизотиазолил, дигидрооксадиазолил, дигидрооксазолил, дигидропиразинил, дигидропиразолил, дигидропиридил, дигидропиримидинил, дигидропирролил, дигидротетразолил, дигидротиадиазолил, дигидротиазолил, дигидротиенил, дигидротриазолил, метилендиоксибензофенонацил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил и их N-оксиды и т. д. Связь с заместителем гетероцикла может осуществляться через атом C или гетероатом. В одном варианте осуществления гетероцикл выбран из имидазолила, пиридила, 1-пирролидона, 2-пиперидона, 2-пиримидона, 2-пирролидона, тиенила, оксазолила, триазолила, изоксазолила и т. д.

[0055] Термин «арил» относится к моноциклической или полициклической ароматической группе, предпочтительно моноциклической или бициклической ароматической группе, например, фенилу или нафтилу. Если не указано иное, арильная группа может быть незамещенной или замещенной одной или несколькими, в частности в количестве от одной до четырех, группами, в том числе, например, галогеном, алкилом, алкенилом, —OCF₃, —CF₃, —NO₂, —CN, —NC, —OH, алкокси, амино, алкиламино, —CO₂H, —CO₂алкилом, —OCO-алкилом, арилом и гетероарилом.

[0056] Термин «гетероарил» означает стабильное моноциклическое кольцо, содержащее вплоть до шести атомов, или стабильное бициклическое кольцо, в котором каждое кольцо содержит вплоть до шести атомов. По меньшей мере одно из колец представляет собой ароматическое кольцо, содержащее 1-4 атома, выбранные из O, N или S. Гетероарильные группы включают без ограничения: имидазолил, триазолил, пиразолил, фуранил, тиенил, оксазолил, изоксазолил, пиразинил, пиридазинил, пиридил, пиримидинил, пирролил. Что касается определения гетероарила, следует также добавить любые N-окисленные производные гетероарила, содержащие атом N. Если гетероарильная замещенная группа представляет собой бициклическое кольцо, и одно из двух колец является неароматическим кольцом или кольцом, не содержащим гетероатом, это бициклическое кольцо конденсировано через ароматическое кольцо или гетероатомы.

[0057] Термин «галоген» или «галогеновый радикал» означает хлор, фтор, бром и йод.

[0058] В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции, в том числе коронавирусной инфекции, у нуждающегося в этом человека, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I):

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

R₁ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил, C_1-4алкилокси или фенил; и

R₂ представляет собой водород, C_1-4алкил, C_3-6циклоалкил или галоген.

[0059] В одном варианте осуществления соединения формулы (I) R₁ представляет собой водород или C_1-4алкил.

[0060] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₁ представляет собой водород.

[0061] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₂ представляет собой водород или C_1-4алкил.

[0062] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₂ представляет собой C_1-4алкил.

[0063] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₂ представляет собой метил или этил. В другом варианте осуществления R₂ представляет собой метил.

[0064] В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R₁ представляет собой водород, и R₂ представляет собой C_1-4алкил.

[0065] В одном варианте осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение 1:

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0066] Соединения формулы (I) и соединение 1 представляют собой низкомолекулярные ингибиторы тирозинкиназы Абельсона (ABL). Среди лекарственных средств или лекарственных средств-кандидатов, подвергнутых скринингу в попытке изменения назначения существующих соединений для лечения коронавирусных инфекций, ингибиторы ABL продемонстрировали многообещающие формы активности против коронавирусов, в том числе SARS-CoV и MERS-CoV, посредством различных механизмов действия.

[0067] Сообщалось, что ингибиторы ABL первого и второго поколения — иматиниб и дазатиниб — ингибируют SARS-CoV и MERS-CoV с низкой цитотоксичностью в клетках Vero E6. Dyall et al., Antimicrob Agents Chemother, 58 (8), 4885-93.

[0068] В другом исследовании эффекта иматиниба в отношении коронавирусов иматиниб демонстрировал подавление продуцирования вируса SARS-CoV в клетках Vero E6 и Calu-3 или MERS-CoV в клетках Vero E6 и MRC5. Coleman et al., Journal of Virology, 90 (19), 8924-33.

[0069] Также сообщалось, что иматиниб может подавлять слияние вируса с мембраной. Coleman et al., Journal of Virology, 90 (19), 8924-33. Поскольку для репликации вируса требуется проникновение вирусов в клетки-хозяева путем слияния с клеточными мембранами, блокирование слияния, индуцируемого шиповидным белком коронавируса, может приводить к подавлению репликации вируса и лечению коронавирусных инфекций.

[0070] После вспышки COVID-19 сообщалось, что у подгруппы пациентов с тяжелой формой COVID-19, по-видимому, наблюдается синдром цитокинового шторма (CSS), который является основной причиной смерти. Mehta et al., The Lancet, 395, 10229, 1033-1034. Цитокиновый шторм вызывается чрезмерными или неконтролируемыми уровнями цитокинов, высвобождаемых иммунной системой. Это вызывает активацию большего количества иммунных клеток и приводит к гипервоспалению. Это может серьезно навредить пациенту или даже привести к его гибели. Таким образом, могут быть благоприятными варианты терапии, приводящие к иммуносупрессии, в том числе избирательная блокада цитокинов.

[0071] Сообщалось, что ингибиторы ABL-киназы нилотиниб и понатиниб подавляют продуцирование множества провоспалительных цитокинов. Chen et al., Front. Immunol. 10: 1393. В исследовании сообщается, что нилотиниб и понатиниб подавляют продуцирование трех важных цитокинов — интерлейкина 8 (IL-8), интерферон-гамма-индуцируемого белка 10 (IP-10), и моноцитарного хемоаттрактантного белка 1 (MCP-1), все из которых ассоциированы с цитокиновым штормом, индуцированным вирусом гриппа.

[0072] В качестве ингибитора ABL-киназы третьего поколения понатиниб дополнительно продемонстрировал продление выживаемости мышей со смертельной инфекцией, вызванной вирусом гриппа, в животных моделях. Chen et al., Front. Immunol. 10: 1393. Подавление продуцирования цитокинов и продленная выживаемость дополнительно указывают на потенциальное применение ингибиторов ABL для лечения пациентов с COVID-19 с тяжелыми симптомами посредством подавления цитокинового шторма.

[0073] В еще одном исследовании понатиниб демонстрировал ингибирование серин-треониновой протеинкиназы 1, взаимодействующей с рецепторами (RIPK1). Gordon et al., BioRxiv, 2020.03.22, 002386. В этом исследовании с помощью карты белок-белковых взаимодействий SARS-CoV-2 человека RIPK1 была идентифицирована в качестве средства, взаимодействующего с белком Nsp12 SARS-CoV-2. Поскольку понатиниб является ингибитором RIPK1, было, следовательно, высказано предположение, что у понатиниба можно изменить назначение, применяя его в качестве потенциального противовирусного лекарственного средства для лечения COVID-19.

[0074] Без ограничения вышеуказанными механизмами действия ингибиторов ABL в отношении коронавирусов и вирусных инфекций в настоящем изобретении предусмотрены способы лечения коронавирусных инфекций с помощью соединений формулы (I) или соединения 1 или их фармацевтически приемлемой соли, которые являются сильными ингибиторами ABL и, таким образом, являются потенциальными противовирусными соединениями для лечения коронавирусных инфекций.

[0075] Химическим названием соединения 1 является 3-(2-(1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-5-ил)этинил)-4-метил-N-(4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)-3-(трифторметил)фенил)бензамид.

[0076] Как используется в данном документе, соединения формулы (I) и соединение 1 включают в себя любые таутомерные формы. В качестве неограничивающего примера таутомеризация может происходить по пиразольным и пиримидиновым группам.

[0077] Соединения формулы (I) или соединение 1 или их фармацевтически приемлемая соль могут быть получены в соответствии со способами получения, описанными в патенте США № 8846671 B2, выданном 30 сентября 2014 г., который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте и для всех целей, или способом, аналогичным ему.

[0078] В определенных вариантах осуществления вирусная инфекция вызвана коронавирусом.

[0079] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана коронавирусом, в том числе SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS-CoV, 229E, NL63, OC43 и HKU1.

[0080] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана коронавирусом, в том числе SARS-CoV-2, SARS-CoV и MERS-CoV.

[0081] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2.

[0082] В определенных вариантах осуществления пациент страдает COVID-19.

[0083] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV.

[0084] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана MERS-CoV.

[0085] В определенных вариантах осуществления подавляется репликация коронавируса.

[0086] В определенных вариантах осуществления ингибируется полимераза коронавируса.

[0087] В определенных вариантах осуществления подавляется слияние коронавируса с мембраной.

[0088] В определенных вариантах осуществления ингибируется сигнальный путь ABL.

[0089] В определенных вариантах осуществления ингибируется специфический сигнальный путь ABL2.

[0090] В определенных вариантах осуществления ингибируется серин-треониновая протеинкиназа 1, взаимодействующая с рецепторами (RIPK1).

[0091] В определенных вариантах осуществления способ заключается в лечении пациента с синдромом цитокинового шторма.

[0092] В определенных вариантах осуществления подавляется продуцирование цитокинов у пациента.

[0093] В определенных вариантах осуществления подавляется продуцирование IL-8, IP-10 и MCP-1 у пациента.

[0094] В определенных вариантах осуществления ингибирование происходит in vitro или in vivo.

[0095] Аналогично понатинибу, соединение 1 по настоящему изобретению является ингибитором ABL третьего поколения, в равной степени ингибирующим как ABL1-, так и ABL2-киназу, и обладает более высокой активностью в сравнении с другими ингибиторами ABL, в том числе иматинибом, дазатинибом, нилотинибом и понатинибом. В таблице 1 показана активность ингибирования ABL-киназ соединением 1.

Таблица 1. Активность ингибирования киназ соединением 1

Соединение 1, Киназа % от контроля при 10 нM % от контроля при 100 нM % от контроля при 1000 нM Нефосфорилированная ABL1 4,4 0,1 0 Фосфорилированная ABL1 3 0 0 ABL2 2,6 0 0

[0096] В таблице 2 ниже показано, что соединение 1 обладает более высокой активностью в отношении ABL-киназ в сравнении с другими ингибиторами ABL, что является демонстрацией того, что соединение 1 может иметь более высокий потенциал в качестве противовирусного соединения против коронавирусов, в том числе SARS-CoV-2.

Таблица 2. Формы активности соединения 1

IC₅₀ (нМ) Ингибирование киназ
(BCR-ABL1-киназа) Активность в клетках
(Ba/F3, экспрессирующие BCR-ABL1) Иматиниб 210 ± 21 565 ± 656 Дазатиниб 0,13 ± 0,0039 31 ± 4 Нилотиниб 8,8 ± 0,45 10 ± 3 Понатиниб 0,33 ± 0,03 11 ± 3 Соединение 1, 0,30 ± 0,0045 6 ± 3

[0097] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции, в том числе коронавирусной инфекции, у нуждающегося в этом человека, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (II):

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

X выбран из -C(=O)-, -C(=S)-, -C(=NH)- и -SO₂-;

Y выбран из -NH-, -O-, -S- или отсутствует;

R выбран из -C_3-6циклоалкилена и;

R₁ выбран из и

Z представляет собой O, S или NH;

n равняется 0, 1 или 2;

кольцо A представляет собой C_4-8алифатическое кольцо; и

кольцо B представляет собой фенил, нафтил, пиридил, пиридазинил, пиразинил или пиримидинил, и кольцо B необязательно является замещенным.

[0098] В одном варианте осуществления соединения формулы (II) X представляет собой C=O или -SO₂-.

[0099] В одном варианте осуществления соединения формулы (II) X представляет собой -SO₂-.

[0100] В одном варианте осуществления соединения формулы (II) Y отсутствует.

[0101] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) R представляет собой

[0102] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) R представляет собой .

[0103] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) R₁ выбран из

[0104] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) R₁представляет собой .

[0105] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) R₁представляет собой .

[0106] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) n равняется 0 или 1.

[0107] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) кольцо A представляет собой C5-6-алифатическое кольцо.

[0108] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) кольцо В представляет собой фенил, пиридил, пиридазинил, пиразинил или пиримидинил.

[0109] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) кольцо В представляет собой фенил или пиридил.

[0110] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) кольцо B представляет собой фенил.

[0111] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) R представляет собой ; R₁ представляет собой ; и кольцо B представляет собой фенил.

[0112] В другом варианте осуществления соединения формулы (II) X представляет собой C=O или -SO₂-; Y отсутствует; R представляет собой ; R₁ представляет собой ; и кольцо B представляет собой фенил или пиридил.

[0113] В одном варианте осуществления соединение формулы (II) представляет собой соединение 2:

Соединение 2,

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0114] Соединения формулы (II) и соединение 2 представляют собой низкомолекулярные ингибиторы белков, представляющих собой ингибиторы белков апоптоза (IAP). Апоптоз, или запрограммированная гибель клеток, представляет собой клеточный процесс, критически важный для гомеостаза, нормального развития и иммунной защиты организма-хозяина. Было установлено, что неправильная регуляция апоптоза вовлечена во многие заболевания человека, в том числе вирусные инфекции. D. W. Nicholson, Nature 2000, 407, 810-816. Campbell GR et al., 2019, Autophagy, 15(4): 744-746. Как следствие, нацеливание на ключевые регуляторы апоптоза имеет большой потенциал для разработки новых подходов к лечению вирусных инфекций.

[0115] Одним из классов регуляторов апоптоза являются IAP. Этот класс включает такие белки, как XIAP, cIAP1, cIAP2, ML-IAP, HIAP, KIAP, TSIAP, NAIP, сурвивин, ливин, ILP-2, Apollon и BRUCE. Белки IAP сильно подавляют клеточный апоптоз. Среди IAP клеточный IAP1 (cIAP1) и cIAP2 играют ключевую роль в регуляции апоптоза, опосредованного рецепторами смерти, тогда как X-сцепленный IAP (XIAP) подавляет как апоптоз, опосредованный рецепторами смерти, так и апоптоз, опосредованный митохондриями, путем связывания и ингибирования каспазы-3/7 и каспазы-9 — трех цистеиновых протеаз, критически важных для осуществления апоптоза. G. S. Salvesen et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2002, 3, 401-410.

[0116] Таким образом, ингибиторы IAP являются полезными инструментами для выяснения антиапоптозной функции IAP. Сообщалось, что ингибиторы IAP обладают многообещающими формами активности против вирусных инфекций, в том числе инфекций, вызванных HIV и вирусом гепатита В (HBV).

[0117] В недавних исследованиях сообщалось, что ингибирование IAP является новой мишенью для очищения от вируса. Campbell GR et al., 2019, Autophagy, 15(4): 744-746. Результат показал, что ингибитор IAP избирательно уничтожает покоящиеся CD4+ Т-клетки памяти, инфицированные HIV-1, но не неинфицированные T_CM, что приводит к избирательному апоптозу только Т_CM, инфицированных HIV, сберегая при этом неинфицированные «фоновые» клетки при отсутствии вирусной инфекции.

[0118] Сообщалось также, что ингибиторы IAP избирательно уничтожают гепатоциты, инфицированные HBV. В одном исследовании в двух мышиных моделях индуцировали инфекцию, вызванную HBV, чтобы изучить значимость факторов организма-хозяина при контроле инфекции. Ebert G, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2015, 112(18): 5797-5802. Результат показал, что cIAP ограничивают гибель инфицированных гепатоцитов и способствуют персистенции HBV-вируса. Животные с печеночноспецифическим cIAP1 и полным дефицитом cIAP2 эффективно контролируют инфекцию, вызванную HBV, по сравнению с мышами дикого типа, что указывает на то, что антагонистическое воздействие на функцию cIAP может способствовать очищению от инфекции, вызванной HBV.

[0119] В другом исследовании ингибиторы cIAP демонстрировали потенциальную эффективность при лечении инфекции, вызванной HBV, и других внутриклеточных инфекций. Ebert G, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2015, 112(18): 5803-5808. В этом исследовании иммунокомпетентная мышиная модель хронической инфекции, вызванной HBV, использовалась для изучения эффективности ингибиторов cIAP in vivo при лечении инфекции, вызванной HBV. Данные показывают, что биринапант, низкомолекулярный ингибитор IPA, был способен быстро снижать уровень ДНК HBV в сыворотке крови и уровень поверхностного антигена HBV в сыворотке крови, а также способствовать устранению гепатоцитов, содержащих сердцевинный антиген HBV.

[0120] Без ограничения вышеуказанными механизмами действия ингибиторов IAP в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения коронавирусных инфекций с помощью соединений формулы (II) или соединения 2 или их фармацевтически приемлемой соли, которые являются сильными ингибиторами IAP и, таким образом, являются потенциальными противовирусными соединениями для лечения коронавирусных инфекций.

[0121] Химическим названием соединения 2 является (5S,5'S,8S,8'S,10aR,10a'R)-3,3'-(1,3-фенилендисульфонил)бис(N-бензгидрил-5-((S)-2-(метиламино)пропанамидо)-6-оксодекагидропирроло[1,2-а][1,5]диазоцин-8-карбоксамид.

[0122] Как используется в данном документе, соединения формулы (II) и соединение 2 включают в себя любые таутомерные формы. В качестве неограничивающего примера таутомеризация может происходить по пиразольным и пиримидиновым группам.

[0123] Соединение формулы (II) или соединение 2 или их фармацевтически приемлемая соль могут быть получены в соответствии со способами получения, описанными в патенте США № 8883771 B2, выданном 11 ноября 2014 г., который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте и для всех целей, или способом, аналогичным ему.

[0124] В определенных вариантах осуществления вирусная инфекция вызвана коронавирусом.

[0125] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана коронавирусом, в том числе SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS-CoV, 229E, NL63, OC43 и HKU1.

[0126] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана коронавирусом, в том числе SARS-CoV-2, SARS-CoV и MERS-CoV.

[0127] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2.

[0128] В определенных вариантах осуществления пациент страдает COVID-19.

[0129] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV.

[0130] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана MERS-CoV.

[0131] В определенных вариантах осуществления подавляется репликация коронавируса.

[0132] В определенных вариантах осуществления ингибируется полимераза коронавируса.

[0133] В определенных вариантах осуществления ингибируются белки IAP.

[0134] В определенных вариантах осуществления ингибируются белки cIAP.

[0135] В определенных вариантах осуществления в клетках, инфицированных коронавирусом, избирательно индуцируется апоптоз.

[0136] В определенных вариантах осуществления достигается очищение от коронавируса.

[0137] В определенных вариантах осуществления очищение от коронавируса достигается путем усиления противовирусного иммунитета, опосредованного Т-клетками.

[0138] В определенных вариантах осуществления ингибирование происходит in vitro или in vivo.

[0139] Аналогично вышеупомянутым ингибиторам IAP, соединение 2 по настоящему изобретению является сильным ингибитором IAP и может способствовать апоптозу и, таким образом, может быть потенциальным противовирусным соединением для лечения коронавирусной инфекции. На фиг. 1A-1C показан эффект соединения 2 в отношении индукции апоптоза, экспрессии IAP, а также репликации HBV и экспрессии генов в линии раковых клеток печени HepG2.2.15.

[0140] Как можно видеть на фиг. 1, соединение 2 подавляет экспрессию IAP дозозависимым образом. Комбинация соединения 2 и TNF-α значительно активирует путь апоптоза. Как показано на фиг. 1D, низкие концентрации соединения 2 и биринапанта приводят к увеличению репликации вируса посредством подавления экспрессии cIAP2, а высокие концентрации соединения 2 и биринапанта нарушают усиление репликации вируса посредством подавления клеточной пролиферации путем деактивации других белков IAP.

[0141] Инъекция соединения 2 также способствует очищению от вируса в модели pAAV-HBV 1.3 на мышах C57BL/6J, как показано на фиг. 2A-2D.

[0142] На фиг. 3A-3D показано, что соединение 2 специфично индуцирует апоптоз в гепатоцитах, инфицированных HBV (HBsAg+), в моделях HBV у мышей.

[0143] На фиг. 4A-4E показано, что соединение 2 способствует экспрессии IFN-γ и TNF-α, а также увеличению количества CD4+ и CD8+ T-клеток в ткани печени в моделях HBV.

[0144] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции, в том числе коронавирусной инфекции, у нуждающегося в этом человека, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (III), (IV) или (V):

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

кольцо А представляет собой

X, замещенный или незамещенный, выбран из группы, состоящей из алкилена, алкенилена, циклоалкилена, циклоалкенилена и гетероциклоалкилена;

Y выбран из группы, состоящей из (CH₂)_n-N(R^a)₂ и

Q выбран из группы, состоящей из O, O(CH₂)_1-3, NR^c_, NR^c(C_1-3алкилен), OC(=O)(C_1-3алкилен), C(=O)O, C(=O)O(C_1-3алкилен), NHC(=O)(C_1-3алкилен), C(=O)NH и C(=O)NH(C_1-3алкилен);

Z представляет собой O или NR^c_;

R₁ и R₂ независимо выбраны из группы, состоящей из H, CN, NO₂, галогена, алкила, циклоалкила, алкенила, циклоалкенила, алкинила, арила, гетероарила, гетероциклоалкила, OR', SR', NR'R'', COR', CO₂R', OCOR', CONR'R'', CONR'SO₂R'', NR'COR'', NR'CONR''R''', NR'C=SNR''R''', NR'SO₂R'', SO₂R' и SO₂NR'R'';

R₃ выбран из группы, состоящей из H, алкила, циклоалкила, алкенила, циклоалкенила, алкинила, арила, гетероарила, гетероциклоалкила, OR', NR'R'', OCOR', CO₂R', COR', CONR'R'', CONR'SO₂R'', C_1-3алкилен-CH(OH)CH₂OH, SO₂R' и SO₂NR'R'';

R', R'', и R''' независимо представляют собой H, алкил, циклоалкил, алкенил, циклоалкенил, алкинил, арил, гетероарил, C_1-3алкиленгетероциклоалкил или гетероциклоалкил;

R' и R'' или R'' и R''' могут быть взяты вместе с атомом, с которым они связаны, с образованием 3-7-членного кольца;

R₄ представляет собой водород, галоген, C_1-3алкил, CF₃ или CN;

R₅ представляет собой водород, галоген, C_1-3алкил, замещенный C_1-3алкил, гидроксиалкил, алкокси или замещенный алкокси;

R₆ выбран из группы, состоящей из H, CN, NO₂, галогена, алкила, циклоалкила, алкенила, циклоалкенила, алкинила, арила, гетероарила, гетероциклоалкила, OR', SR', NR'R'', CO₂R', OCOR', CONR'R'', CONR'SO₂R'', NR'COR'', NR'CONR''R''', NR'C=SNR''R''', NR'SO₂R'', SO₂R' и SO₂NR'R'';

R₇, замещенный или незамещенный, выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, (CH₂)_0-3циклоалкила, (CH₂)_0-3циклоалкенила, (CH₂)_0-3гетероциклоалкила, (CH₂)_0-3арила и (CH₂)_0-3гетероарила;

R₈ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, NO₂, CN, CF₃SO₂ и CF₃;

R_a выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, гетероалкила, алкенила, гидроксиалкила, алкокси, замещенного алкокси, циклоалкила, циклоалкенила и гетероциклоалкила;

R_b представляет собой водород или алкил;

R_c выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила, гидроксиалкила, алкокси и замещенного алкокси; и

n, r и s независимо равняются 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

[0145] В одном варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) кольцо A представляет собой

[0146] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) X представляет собой алкилен. В другом варианте осуществления X представляет собой C_1-4алкилен.

[0147] В одном варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) Y представляет собой

[0148] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или(V) Q представляет собой C(=O)O(C_1-3алкилен).

[0149] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) Z представляет собой O.

[0150] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₁ представляет собой SO₂R', и R' представляет собой алкил. В другом варианте осуществления R₁ представляет собой SO₂Me.

[0151] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₂ представляет собой алкил. В другом варианте осуществления SO₂ представляет собой метил, пропил или изопропил. В другом варианте осуществления SO₂ представляет собой метил.

[0152] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₃ представляет собой H или алкил. В другом варианте осуществления R₃ представляет собой C₁-C₄алкил. В другом варианте осуществления R₃ представляет собой метил, пропил или изопропил. В другом варианте осуществления R₃ представляет собой изопропил.

[0153] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₄ представляет собой водород или галоген. В другом варианте осуществления R₄ представляет собой галоген. В другом варианте осуществления R₄ представляет собой -Cl или-F. В другом варианте осуществления R₄ представляет собой -Cl.

[0154] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₅ представляет собой водород или галоген. В другом варианте осуществления R5 представляет собой галоген. В другом варианте осуществления R₅ представляет собой -Cl или -F. В другом варианте осуществления R₅ представляет собой -F.

[0155] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₆ представляет собой H или алкил. В другом варианте осуществления R₆ представляет собой H.

[0156] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R7 представляет собой H или алкил. В другом варианте осуществления R₇ представляет собой H.

[0157] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R₈ представляет собой водород, галоген или CF₃SO₂. В другом варианте осуществления R₈ представляет собой CF₃SO₂.

[0158] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) каждый из n, r и s независимо равняется 1 или 2. В другом варианте осуществления n, r, и s равняются 2. В другом варианте осуществления n равняется 1; а r и s равняются 2.

[0159] В другом варианте осуществления соединения формулы (III), (IV) или (V) R^b представляет собой H.

[0160] В одном варианте осуществления соединение формулы (III) или (IV) представляет собой соединение 3:

Соединение 3,

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0161] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 3.

[0162] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции, в том числе коронавирусной инфекции, у нуждающегося в этом человека, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (VI):

(VI),

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

SO₂₁ представляет собой SO₂SO₂',

SO₂₂ представляет собой алкил, предпочтительно C₁-C₄алкил, более предпочтительно метил, пропил или изопропил,

SO₂₃ представляет собой алкил, предпочтительно C₁-C₄алкил, более предпочтительно метил, пропил или изопропил,

SO₂₄ представляет собой галоген, предпочтительно фторид, хлорид,

SO₂₅ представляет собой галоген, предпочтительно фторид, хлорид,

SO₂₆ выбран из H, галогена, алкила, предпочтительно фторида, хлорида, C₁-C₄алкила, более предпочтительно метила, пропила, изопропила,

SO_21b представляет собой H или алкил, предпочтительно C₁-C₄алкил, более предпочтительно метил, пропил или изопропил,

n₂, SO₂ и s₂ независимо равняются 1, 2, 3, 4, 5 или 6, более предпочтительно оба из SO₂ и s₂ равняются 2, и n₂ равняется 3, 4 или 5,более предпочтительно все из n₂, SO₂ и s₂ равняются 2, и

SO₂' представляет собой алкил, предпочтительно C₁-C₄алкил, более предпочтительно метил, пропил или изопропил.

[0163] В одном варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₁ представляет собой SO₂(C₁-C₄алкил). В другом варианте осуществления SO₂₁ представляет собой SO₂Me.

[0164] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₂ представляет собой C₁-C₄алкил. В другом варианте осуществления SO₂₂ представляет собой метил.

[0165] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₃ представляет собой C₁-C₄алкил. В другом варианте осуществления SO₂₃ представляет собой изопропил.

[0166] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₄ представляет собой фторид или хлорид. В другом варианте осуществления SO₂₄ представляет собой хлорид.

[0167] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₅ представляет собой фторид или хлорид. В другом варианте осуществления SO₂₅ представляет собой фторид.

[0168] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₆ представляет собой H или C₁-C₄алкил. В другом варианте осуществления SO₂₆ представляет собой H.

[0169] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO_21b представляет собой H.

[0170] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) каждый из n₂, SO₂ и s₂ независимо равняется 1 или 2. IВ другом варианте осуществления n₂, SO₂ и s₂ равняются 2.

[0171] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₁ представляет собой SO₂(C₁-C₄ алкил); SO₂₂ представляет собой C₁-C₄алкил; и SO₂₃ представляет собой C₁-C₄алкил. В другом варианте осуществления SO₂₁ представляет собой SO₂Me; SO₂₂ представляет собой метил; и SO₂₃ представляет собой изопропил.

[0172] В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) SO₂₄ представляет собой -Cl, и SO₂₅ представляет собой -F.

[0173] В одном варианте осуществления соединение формулы (VI) включает в себя соединение 4:

Соединение 4,

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0174] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 4.

[0175] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 5:

Соединение 5,

[0176] Соединения формулы (III), (IV), (V) или (VI), соединение 3, соединение 4 и соединение 5 являются ингибиторами белков BCL-2. Белки BCL-2 функционируют в качестве критически важных регуляторов апоптоза в клетках. D. T. Chao, et al., Annu Rev Immunol 1998; 16:395-419. Белки Bcl-2 служат для проверки состояния апоптоза, позволяя выживать здоровым и полезным клеткам. Это семейство белков включает антиапоптозные белки, такие как BCL-2, BCL-xL и MCL-1, и проапоптозные молекулы, в том числе Bid, Bim, Bad, Bak и Bax. Репликация нескольких важных микроорганизмов человека, в том числе коронавирусов, вируса гриппа А (IAV), HBV, HCV и HIV, зависит от апоптоза, опосредованного BCL-2, BCL-xL и BCL-w и инициируемого митохондриями. Geng et al., Proc Natl Acad Sci U S A 2012; 109: 18471-18476. Park J et al., Hepatology 2012; 56: 831-840. Busca A et al., J Biol Chem 2012; 287: 15118-15133. Tan et al., J Virol. 2007, 81: 6346-6355.

[0177] Сообщалось, что ингибиторы BCL-xL, такие как ABT-737 и его перорально доступный аналог ABT-236, ускоряют апоптоз в клетках, инфицированных вирусом. Следовательно, ингибиторы BCL-xL могут быть потенциальными противовирусными соединениями для лечения вирусных инфекций.

[0178] В другом исследовании было обнаружено, что ABT-263 ускоряет апоптоз в клетках, инфицированных вирусом, активируя путь апоптоза, опосредованного каспазами, и тем самым инициируя гибель клеток, инфицированных вирусом гриппа А (IAV). Kakkola et al., Cell Death and Disease, 2013, 4, e742.

[0179] Без ограничения вышеуказанными механизмами действия ингибиторов BCL-xL в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения коронавирусных инфекций с помощью соединений формулы (III), (IV), (V) или (VI) или соединения 3, соединения 4 или соединения 5 или их фармацевтически приемлемой соли, которые являются сильными ингибиторами BCL-xL и, таким образом, являются потенциальными противовирусными соединениями для лечения коронавирусных инфекций.

[0180] Химическим названием соединения 3 является (R)-2-(1-(3-(4-(N-(4-(4-(3-(2-(4-хлорфенил)-1-изопропил-5-метил -4-(метилсульфонил)-1H-пиррол-3-ил)-5-фторфенил)пиперазин-1-ил)фенил)сульфамоил)-2-(трифторметилсульфонил)фениламино)-4-(фенилтио)бутил)пиперидин-4-карбонилокси)этилфосфоновая кислота.

[0181] Химическим названием соединения 4 является (R)-1-(3-(4-(N-(4-(4-(3-(2-(4-хлорфенил)-1-изопропил-5-метил-4-(метилсульфонил)-1H-пиррол-3-ил)-5-фторфенил)пиперазин-1-ил)фенил)сульфамоил)-2-(трифторметилсульфонил)фениламино)-4-(фенилтио)бутил)пиперидин-4-карбоновая кислота.

[0182] Химическим названием соединения 5 является (S)-N-((4-(((1,4-диоксан-2-ил)метил)амино)-3-нитрофенил)сульфонил)-2-((1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)окси)-4-(4-((6-(4-хлорфенил)спиро[3.5]нон-6-ен-7-ил)метил)пиперазин-1-ил)бензамид.

[0183] Как используется в данном документе, соединения формулы (III), (IV), (V) или (VI) и соединения 3, 4 и 5 включают в себя любые таутомерные формы. В качестве неограничивающего примера таутомеризация может происходить по пиразольным и пиримидиновым группам.

[0184] Соединение формулы (III), (IV) или (V) и соединения 3 и 4 или их фармацевтически приемлемая соль могут быть получены в соответствии со способами получения, описанными в патенте США № 9096625 B2, выданном 4 августа 2015 г., который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте и для всех целей, или способом, аналогичным ему.

[0185] Соединение 5 или его фармацевтически приемлемая соль могут быть получены в соответствии со способами получения, описанными в патенте США № 10221174 B, выданном 5 марта 2019 г., который включен в данный документ в качестве ссылки во всей своей полноте и для всех целей, или способом, аналогичным ему.

[0186] В определенных вариантах осуществления вирусная инфекция вызвана коронавирусом.

[0187] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана коронавирусом, в том числе SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS-CoV, 229E, NL63, OC43 и HKU1.

[0188] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана коронавирусом, в том числе SARS-CoV-2, SARS-CoV и MERS-CoV.

[0189] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2.

[0190] В определенных вариантах осуществления пациент страдает COVID-19.

[0191] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV.

[0192] В определенных вариантах осуществления коронавирусная инфекция вызвана MERS-CoV.

[0193] В определенных вариантах осуществления подавляется репликация коронавируса.

[0194] В определенных вариантах осуществления ингибируется полимераза коронавируса.

[0195] В определенных вариантах осуществления ингибируются белки BCL-2.

[0196] В определенных вариантах осуществления ингибируются белки BCL-xL.

[0197] В определенных вариантах осуществления в клетках, инфицированных коронавирусом, избирательно индуцируется апоптоз.

[0198] В определенных вариантах осуществления активируется путь апоптоза, опосредованный каспазами.

[0199] В определенных вариантах осуществления ингибирование происходит in vitro или in vivo.

[0200] Также в данном документе предусмотрены фармацевтические композиции и лекарственные формы, содержащие соединения формул (I)-(VI) или соединения 1-5 или их фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей. Композиции и лекарственные формы, предусмотренные в данном документе, могут дополнительно содержать один или несколько дополнительных активных ингредиентов. Соединения формул (I)-(VI) или соединения 1-5 или их фармацевтически приемлемую соль можно вводить в качестве части описанной фармацевтической композиции.

[0201] Соединение по настоящему изобретению можно вводить любым подходящим путем, например, посредством перорального, трансбуккального, ингаляционного, сублингвального, ректального, вагинального, интрацистернального или интратекального путем люмбальной пункции, трансуретрального, назального, чрескожного, т. е. трансдермального, или парентерального (включая внутривенную, внутримышечную, подкожную, внутрикоронарную, внутрикожную, интрамаммарную, внутрибрюшинную, внутрисуставную, интратекальную, ретробульбарную, внутрилегочную инъекцию и/или хирургическую имплантацию в конкретный участок). Парентеральное введение можно осуществлять с использованием иглы и шприца или с использованием методики высокого давления.

[0202] Фармацевтические композиции включают композиции, в которых соединение по настоящему изобретению вводят в количестве, эффективном для достижения предполагаемой цели. Точный состав, путь введения и дозировка определяются индивидуальным врачом с учетом диагностированного состояния или заболевания. Дозировка и интервал могут быть скорректированы индивидуально, чтобы обеспечить уровни соединения по настоящему изобретению, которые достаточны для поддержания терапевтических эффектов.

[0203] Токсичность и терапевтическую эффективность соединений по настоящему изобретению можно определить с помощью стандартных фармацевтических процедур в культурах клеток или у экспериментальных животных, например, для определения максимальной переносимой дозы (MTD) соединения, которая определяется как наиболее высокая доза, не вызывающая токсичности у животных. Соотношение доз между максимальной переносимой дозой и дозой, обеспечивающей терапевтические эффекты (например, подавление роста опухоли), представляет собой терапевтический индекс. Дозировка может варьироваться в данном диапазоне в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения. Определение терапевтически эффективного количества находится в пределах компетенции специалистов в данной области, особенно в свете подробного описания, представленного в данном документе.

[0204] Терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению, требуемое для применения в терапии, варьируется в зависимости от природы состояния, лечение которого осуществляют, продолжительности времени, в течение которого желательна активность, а также возраста и состояния субъекта и в конечном итоге определяется лечащим врачом. Величины доз и интервалы введения доз могут быть скорректированы индивидуально для обеспечения уровней соединения по настоящему изобретению в плазме крови, достаточных для поддержания желаемых терапевтических эффектов. Желаемую дозу можно вводить в виде однократной дозы или в виде многократных доз, вводимых с соответствующими интервалами, например, в виде одной, двух, трех, четырех или более частей дозы в день. Часто желательны или необходимы многократные дозы. Например, соединение по настоящему изобретению можно вводить со следующей частотой: четыре дозы доставляются по одной дозе в день с четырехдневными интервалами (q4d x 4); четыре дозы доставляются по одной дозе в день с трехдневными интервалами (q3d x 4); доставляется одна доза в день с пятидневными интервалами (qd x 5); одна доза в неделю в течение трех недель (qwk3); пять ежедневных доз с двухдневным периодом отдыха и еще пять ежедневных доз (5/2/5) или в любом режиме введения доз, определенном как подходящий для данных обстоятельств.

[0205] В определенных вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению обычно вводят в смеси с фармацевтическим носителем для получения фармацевтической композиции, выбранной с учетом предполагаемого пути введения и стандартной фармацевтической практики.

[0206] Фармацевтические композиции для применения в соответствии с настоящим изобретением составляют традиционным образом с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, включающих наполнители и/или вспомогательные вещества, которые облегчают обработку соединения по настоящему изобретению.

[0207] Эти фармацевтические композиции могут быть изготовлены, например, посредством традиционных способов смешивания, растворения, гранулирования, дражирования, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания или лиофилизации. Надлежащий состав зависит от выбранного пути введения. Если терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению вводят перорально, композиция обычно представлена в форме таблетки, капсулы, порошка, раствора или эликсира. В случае введения в форме таблетки композиция может дополнительно содержать твердый носитель, такой как желатин или вспомогательное средство. Таблетка, капсула и порошок содержат от приблизительно 0,01% до приблизительно 95% и предпочтительно от приблизительно 1% до приблизительно 50% соединения по настоящему изобретению. В случае введения в жидкой форме может быть добавлен жидкий носитель, такой как вода, нефтепродукт или масла животного или растительного происхождения. Жидкая форма композиции может дополнительно содержать физиологический солевой раствор, растворы декстрозы или других сахаридов или гликоли. В случае введения в жидкой форме композиция содержит от приблизительно 0,1% до приблизительно 90% и предпочтительно от приблизительно 1% до приблизительно 50% по весу соединения по настоящему изобретению.

[0208] Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активный ингредиент смешивают с по меньшей мере одним инертным фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем, таким как цитрат натрия или фосфат дикальция, и/или а) заполнителями или сухими разбавителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; b) связующими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидинон, сахароза и аравийская камедь; c) увлажнителями, такими как глицерин; d) разрыхлителями, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; e) замедлителями растворения, такими как парафин; f) ускорителями всасывания, такими как соединения четвертичного аммония; g) смачивающими средствами, такими как, например, цетиловый спирт и моностеарат глицерина; h) впитывающими веществами, такими как каолин и бентонитовая глина, и i) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма может также содержать буферные средства, такие как фосфаты или карбонаты.

[0209] Твердые композиции также можно использовать в качестве заполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах с использованием таких наполнителей, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и т. п. Твердые лекарственные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получать с покрытиями и оболочками, такими как кишечнорастворимые покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области составления фармацевтических препаратов. Они могут необязательно содержать замутнители, а также могут иметь такой состав, при котором они высвобождают активный(активные) ингредиент(ингредиенты) только или предпочтительно в определенной части кишечного тракта, необязательно отсроченным образом. Примеры заливочных композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воска.

[0210] В твердых лекарственных формах активные ингредиенты могут быть смешаны с по меньшей мере одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы могут также содержать, как это принято на практике, дополнительные вещества, отличные от инертных разбавителей, например, смазывающие вещества для таблетирования и другие добавки для таблетирования, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы могут также содержать буферные средства.

[0211] Активные ингредиенты также могут быть представлены в микроинкапсулированной форме с одним или несколькими наполнителями, указанными выше.

[0212] В случае введения терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению путем внутривенной, кожной или подкожной инъекции композиция представлена в форме апирогенного приемлемого для парентерального применения водного раствора. Получение таких приемлемых для парентерального применения растворов с соответствующим учетом pH, изотоничности, стабильности и т. п. находится в компетенции специалиста в данной области. Предпочтительная композиция для внутривенной, кожной или подкожной инъекции обычно содержит изотоническую среду-носитель.

[0213] Соединения по настоящему изобретению можно легко объединять с фармацевтически приемлемыми носителями, хорошо известными из уровня техники. Стандартные фармацевтические носители описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th ed. 1995. Такие носители обеспечивают возможность составления активных средств в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей, суспензий и т. п. для перорального приема внутрь субъектом, подлежащим лечению.

[0214] Фармацевтические препараты для перорального применения могут быть получены путем добавления соединения по настоящему изобретению к твердому наполнителю, необязательного измельчения полученной в результате смеси и обработки смеси гранул после добавления подходящих вспомогательных веществ, при желании, с получением сердцевин таблеток или драже. Подходящие наполнители включают, например, заполнители и препараты целлюлозы. При желании можно добавлять разрыхлители.

[0215] Соединения по настоящему изобретению могут быть составлены для парентерального введения путем инъекции, например, путем болюсной инъекции или непрерывной инфузии. Составы для инъекций могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы, например, в ампулах или в многодозовых контейнерах с добавленным консервантом. Композиции могут принимать такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных средах-носителях, и могут содержать средства для составления, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства.

[0216] Фармацевтические композиции для парентерального введения включают водные растворы активного средства в водорастворимой форме. Кроме того, суспензии соединения по настоящему изобретению могут быть получены в виде подходящих масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или среды-носители включают жирные масла или сложные эфиры синтетических жирных кислот. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, повышающие вязкость суспензии. Суспензия также необязательно может содержать подходящие стабилизаторы или средства, которые повышают растворимость соединений и обеспечивают возможность получения высококонцентрированных растворов. В качестве альтернативы композиция по настоящему изобретению может быть представлена в форме порошка для разбавления подходящей средой-носителем, например, стерильной апирогенной водой, перед применением.

[0217] Соединения по настоящему изобретению также могут быть составлены в виде композиций для ректального применения, таких как, например, суппозитории или удерживающие клизмы, содержащие традиционные основы для суппозиториев. В дополнение к составам, описанным ранее, соединение по настоящему изобретению также может быть составлено в виде депо-препарата. Такие составы длительного действия можно вводить путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Таким образом, например, соединение по настоящему изобретению может быть составлено с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионообменными смолами.

[0218] В частности, соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально, трансбуккально или сублингвально в форме таблеток, содержащих наполнители, такие как крахмал или лактоза, или в капсулах или вагинальных суппозиториях, в отдельности либо в смеси с наполнителями, или в форме эликсиров или суспензий, содержащих ароматизаторы или красители. Такие жидкие препараты могут быть получены с фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие средства. Соединение по настоящему изобретению также можно инъецировать парентерально, например, внутривенно, внутримышечно, подкожно или внутрикоронарно.

[0219] Для парентерального введения соединение по настоящему изобретению обычно применяют в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например, соли или моносахариды, такие как маннит или глюкоза, чтобы сделать раствор изотоничным по отношению к крови.

[0220] В определенных вариантах осуществления соединение формулы (I)-(VI) или соединения 1-5 или их фармацевтически приемлемую соль вводят перорально пациентам, нуждающимся в таком лечении.

[0221] В определенных вариантах осуществления соединение формулы (I)-(VI) или соединения 1-5 или их фармацевтически приемлемую соль вводят внутривенно пациентам, нуждающимся в таком лечении.

[0222] Соединение по настоящему изобретению, применяемое в способе по настоящему изобретению, можно вводить в количестве от приблизительно 0,005 до приблизительно 500 миллиграммов на дозу, от приблизительно 0,05 до приблизительно 250 миллиграммов на дозу или от приблизительно 0,5 до приблизительно 100 миллиграммов на дозу. Например, соединение по настоящему изобретению можно вводить в количестве приблизительно 0,005, приблизительно 0,05, приблизительно 0,5, приблизительно 5, приблизительно 10, приблизительно 20, приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50, приблизительно 100, приблизительно 150, приблизительно 200, приблизительно 250, приблизительно 300, приблизительно 350, приблизительно 400, приблизительно 450 или приблизительно 500 миллиграммов на дозу, включая все дозы от 0,005 до 500 миллиграммов.

[0223] Дозировка композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, или композиции, содержащей его, может составлять от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 200 мг/кг, от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 100 мг/кг или от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 50 мг/кг. Дозировка композиции может предусматривать любую дозировку, в том числе без ограничения приблизительно 1 мкг/кг. Дозировка композиции может предусматривать любую дозировку, в том числе без ограничения приблизительно 1 мкг/кг, приблизительно 10 мкг/кг, приблизительно 25 мкг/кг, приблизительно 50 мкг/кг, приблизительно 75 мкг/кг, приблизительно 100 мкг/кг, приблизительно 125 мкг/кг, приблизительно 150 мкг/кг, приблизительно 175 мкг/кг, приблизительно 200 мкг/кг, приблизительно 225 мкг/кг, приблизительно 250 мкг/кг, приблизительно 275 мкг/кг, приблизительно 300 мкг/кг, приблизительно 325 мкг/кг, приблизительно 350 мкг/кг, приблизительно 375 мкг/кг, приблизительно 400 мкг/кг, приблизительно 425 мкг/кг, приблизительно 450 мкг/кг, приблизительно 475 мкг/кг, приблизительно 500 мкг/кг, приблизительно 525 мкг/кг, приблизительно 550 мкг/кг, приблизительно 575 мкг/кг, приблизительно 600 мкг/кг, приблизительно 625 мкг/кг, приблизительно 650 мкг/кг, приблизительно 675 мкг/кг, приблизительно 700 мкг/кг, приблизительно 725 мкг /кг, приблизительно 750 мкг/кг, приблизительно 775 мкг/кг, приблизительно 800 мкг/кг, приблизительно 825 мкг/кг, приблизительно 850 мкг/кг, приблизительно 875 мкг/кг, приблизительно 900 мкг/кг, приблизительно 925 мкг/кг, приблизительно 950 мкг/кг, приблизительно 975 мкг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 50 мг/кг, приблизительно 60 мг/кг, приблизительно 70 мг/кг, приблизительно 80 мг/кг, приблизительно 90 мг/кг, приблизительно 100 мг/кг, приблизительно 125 мг/кг, приблизительно 150 мг/кг, приблизительно 175 мг/кг, приблизительно 200 мг/кг или больше.

[0224] В определенных вариантах осуществления соединение формулы (I)-(VI) или соединения 1-5 или их фармацевтически приемлемую соль вводят каждый день, один раз в день, два раза в день, три раза в день, один раз в два дня (QOD) или один раз в три дня. Вводимое количество составляет от 0,5 мг до 100 мг, предпочтительно от 1 мг до 80 мг, более предпочтительно от 1 мг до 60 мг. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления это количество составляет приблизительно 1 мг, 2 мг, 4 мг, 6 мг, 8 мг, 10 мг, 12 мг, 14 мг, 16 мг, 18 мг, 20 мг, 22 мг, 24 мг, 26 мг, 28 мг, 30 мг, 32 мг, 34 мг, 36 мг, 38 мг, 40 мг, 42 мг, 44 мг, 46 мг, 48 мг, 50 мг, 52 мг, 54 мг, 56 мг, 58 мг или 60 мг.

[0225] В определенных вариантах осуществления соединение формулы (I)-(VI) или соединения 1-5 представлены в твердой лекарственной форме.

[0226] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I)-(VI) или соединений 1-5 или их фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для лечения коронавирусной инфекции.

[0227] В настоящем изобретении описаны различные варианты осуществления. Средний специалист в данной области при рассмотрении настоящего раскрытия легко поймет, что различные варианты осуществления могут быть объединены в любом видоизменении. Например, варианты осуществления настоящего изобретения включают лечение различных нарушений, различных популяций пациентов, введение лекарственных форм в различных дозировках, сведение к минимуму различных нежелательных явлений и улучшение различных показателей эффективности и т. д. Любые комбинации различных вариантов осуществления входят в объем настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

[0228] Пример 1. Анализ кривой доза-ответ(DRC) методом иммунофлуоресценции

[0229] Для каждого лекарственного средства строили DRC по десяти точкам. Клетки Vero высевали при 1,2 × 10⁴ клеток на лунку в среде DMEM, дополненной 2% FBS и 1× раствором антибиотиков и антимикотиков (Gibco), в черные 384-луночные планшеты µClear (Greiner Bio-One) за 24 часа до эксперимента. Строили DRC по десяти точкам с концентрацией соединения в диапазоне от 0,1 до 50 мкМ. В случае вирусных инфекций планшеты переносили в лабораторию с условиями биоизоляции BSL3, и добавляли SARS-CoV-2 при множественности инфицирования (MOI) 0,0125. Клетки фиксировали через 24 часа после инфицирования (hpi) с помощью 4% PFA и анализировали методом иммунофлуоресценции. Полученные изображения анализировали с использованием собственного программного обеспечения для количественного определения количества клеток и степени инфицирования, и противовирусную активность нормализовали относительно положительного (ложная обработка) и отрицательного (0,5% DMSO) контролей в каждом планшете для анализа. DRC аппроксимировали с помощью сигмоидальных моделей зависимости доза-ответ со следующим уравнением: Y = нижнее значение + (верхнее значение − нижнее значение)/[1 + (IC₅₀/X)^{угловой коэффициент Хилла}] с использованием программного обеспечения XLFit 4 или Prism7.

[0230] Значения IC₅₀ рассчитывали по нормализованным кривым, аппроксимирующим набор данных об активности. Все значения IC₅₀ и 50% цитотоксической концентрации (CC₅₀) измеряли в двух повторностях, и качество каждого анализа контролировали с помощью Z'-фактора и коэффициента вариации в процентах (%CV).

[0231] Следуя процедуре, описанной выше, соединение 1 и соединение 2 тестировали в иммунофлуоресцентном анализе (IFA) SARS-CoV-2 в сравнении с иматинибом с использованием ремдесивира, хлорохина и лопинавира в качестве эталонов. Процедура и результаты показаны в таблице 3, на фиг. 5 и фиг. 6A-6F.

Таблица 3

Соединение Максимальная концентрация (мкМ) Максимальное ингибирование (%) IC₅₀ (мкМ) CC₅₀ (мкМ) SI₅₀ Тестируемое Соединение 1, 5 99,71 1,32 > 5 > 3,8 Иматиниб 50 99,50 19,59 > 50 > 2,6 Соединение 2, 50 25,93 > 50 > 50 NA Эталонное Ремдесивир 50 95,01 12,36 > 50 > 4,0 Хлорохин 150 100,01 13,00 > 150 > 11,5 Лопинавир 50 99,93 17,29 > 50 > 2,9

[0232] Пример 2. Ингибирование цитокинов, ассоциированных с цитокиновым штормом, индуцированным вирусом гриппа

[0233] Следуя способу, описанному в Front Immunol. 2019 June 21; 1393 и Am. J. Physiol., Lung Cell Mol. Physiol. 315: L52-L58, 2018, клетки U937 инфицировали вирусом гриппа при MOI, составляющей 0,1, и обрабатывали с помощью указанных концентраций соединения 1 и соединения 2. Надосадочную жидкость культуры клеток собирали после 24-часовой обработки, и определяли продуцирование указанных цитокинов с использованием анализа Luminex. Способ и результаты показаны ниже на фиг. 7 и фиг. 8A-8C. Выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа (IFV), показана в таблице 4 и на фиг. 9A-9B.

Исследуемая группа График введения доз Общее количество животных День 21 Логарифмический ранговый критерий (Кокса-Мантеля), p-значение Количество выживших Показатель выживаемости (%) Контроль в виде среды-носителя QD, за 2 часа до инфицирования 9 0 0 NA Озельтамивир, 10 мг/кг 9 9 100 ****, P < 0,0001 Соединение 1, 10 мг/кг 9 1 11,11 *, P = 0,0249 Соединение 1, 20 мг/кг 9 2 22,22 *, P = 0,0126 Понатиниб, 15 мг/кг 9 2 22,22 *, P = 0,0419 Понатиниб, 15 мг/кг QD, через 72 часа после инфицирования 9 1 11,11 NS, P = 0,3412

[0234] Как показано в примере 1 и примере 2, соединение 1 подавляет инфекцию, вызванную SARS-CoV-2, в клетках Vero, подавляет продуцирование цитокинов, ассоциированных с цитокиновым штормом, индуцированным вирусом гриппа, и в количествах 5 мг/кг или 10 мг/кг улучшает выживаемость мышей, инфицированных вирусом гриппа.

[0235] Пример 1 и пример 2 дополнительно указывают на то, что соединение 2 подавляет продуцирование цитокинов, ассоциированных с цитокиновым штормом, индуцированным вирусом гриппа.

[0236] Пример 3. Анализ ингибирования R1PK1-киназы

[0237] Следуя способу, описанному в инструкции производителя к набору RIPK1 Kinase Enzyme System (Promega, V6930), определяли ингибирующие эффекты соединения 1 и понатиниба в отношении киназной активности RIPK1. GSK2982772, избирательный ингибитор RIPK1, использовали в качестве положительного контроля. На фиг. 10 показаны результаты анализа. Результаты демонстрируют, что соединение 1 подавляет киназную активность RIPK1 в бесклеточном анализе со значением IC₅₀, составляющим 54 нМ, что свидетельствует о более высокой активности, чем у понатиниба (значение IC₅₀ 231 нМ).

[0238] Вышеизложенное изобретение было описано более подробно посредством иллюстрации и примера в целях ясности и понимания. Настоящее изобретение было описано со ссылкой на различные конкретные и предпочтительные варианты осуществления и методики. Однако следует понимать, что многие видоизменения и модификации могут быть сделаны без отступления от сущности и объема настоящего изобретения. Специалисту в данной области будет очевидно, что изменения и модификации могут быть осуществлены на практике в пределах объема прилагаемой формулы изобретения. Следовательно, следует понимать, что вышеприведенное описание предназначено для иллюстрации, а не для ограничения.

[0239] Таким образом, объем настоящего изобретения должен определяться не со ссылкой на приведенное выше описание, а вместо этого должен определяться со ссылкой на следующую прилагаемую формулу изобретения вместе с полным объемом эквивалентов, которым предоставляется правовая охрана в рамках такой формулы изобретения.

Изобретение относится к способу ингибирования вирусной инфекции у нуждающегося в этом пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли, причем вирусная инфекция представляет собой коронавирусную инфекцию, вызванную SARS-CoV-2. Кроме того, изобретение относится к применению фармацевтической композиции для ингибирования коронавирусной инфекции у нуждающегося в этом человека, к применению соединения 1 при ингибировании инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у человека, к применению соединения 1 при изготовлении лекарственного препарата для ингибирования коронавирусной инфекции. Технический результат изобретения заключается в ингибировании вирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 10 ил., 4 табл., 3 пр.

1. Способ ингибирования вирусной инфекции у нуждающегося в этом пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения 1:

или его фармацевтически приемлемой соли; причем вирусная инфекция представляет собой коронавирусную инфекцию, вызванную SARS-CoV-2.

2. Способ по п. 1, где пациент страдает COVID-19.

3. Способ по п. 1, где способ обеспечивает ингибирование полимеразы коронавируса.

4. Способ по п. 1, где способ обеспечивает ингибирование киназы Абельсона.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где способ обеспечивает подавление слияния коронавируса с мембраной.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где способ обеспечивает ингибирование серин-треониновой протеинкиназы 1, взаимодействующей с рецепторами.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где пациент страдает синдромом цитокинового шторма.

8. Способ по п. 7, где способ обеспечивает подавление продуцирования цитокинов у пациента.

9. Способ по любому из пп. 1-8, где соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль вводят один раз в день, два раза в день или три раза в день.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где терапевтически эффективное количество составляет от 0,5 мг до 100 мг, от 1 мг до 80 мг или от 1 мг до 60 мг.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где соединение 1 представлено в твердой лекарственной форме.

13. Применение фармацевтической композиции для ингибирования коронавирусной инфекции у нуждающегося в этом человека, при этом фармацевтическая композиция содержит эффективное количество соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли, причем коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2.

14. Применение соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли при ингибировании инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у человека.

15. Применение соединения 1 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного препарата для ингибирования коронавирусной инфекции, причем коронавирусная инфекция вызвана SARS-CoV-2.