Способ выделения фикоцианинов Российский патент 2024 года по МПК C12N1/12 A23L33/195 C07K1/30 C07K14/405 

Область техники

Изобретение относится к новому способу выделения и очистки фикоцианинов, продуцируемых ферментацией микроводорослей, в частности продуцируемых Galdieria sulphuraria, путем селективного осаждения.

Уровень техники

Очистка фикобилипротеинов, выделенных из Galdieria sulphuraria и Spirulina путем осаждения сульфатом аммония уже описана в литературе (Moon et al., 2015; Cruz de Jesus et al., 2006, CN106190853), но ее очень трудно применять в промышленном масштабе, потому что для этого требуется большое количество сульфата аммония, что создает значительные проблемы при переработке сульфата аммония и надосадочной жидкости.

Другие способы очистки, описанные для получения высокой степени чистоты, такие как хроматография или очистка ионообменной смолой (JP 2004359638), очень дороги в реализации.

Описано осаждение фикоцианина Spirulina с добавлением кислоты к неочищенному раствору фикоцианина (TN 2009000406, JP 2004359638, JP06271783, CN106190853). Однако, учитывая изоэлектрическую точку фикоцианина Spirulina, равную примерно 4,5 и близкую к изоэлектрической точке большого количества других белков, этот метод не позволяет осуществлять селективное осаждение и, следовательно, очистку фикоцианина. Аналогично, в некоторых документах описано использование салициловой кислоты для осаждения фикоцианина (ФЦ) из Spirulina (WO 2016/030643). Использование этой кислоты приводит к неселективному осаждению ФЦ, и образовавшийся осадок особенно трудно повторно растворить. Тот же результат был получен с ФЦ Galdieria.

Способы выделения фикоцианина обычно заключаются в осаждении органических веществ, отличных от фикоцианинов, присутствующих в водном неочищенном экстракте от ферментации микроводорослей, для сохранения фикоцианинов в надосадочной жидкости, которую отфильтровывают перед осаждением фикоцианинов (JP 2004359638). Однако некоторые органические соединения, в частности сложные полисахариды, такие как гликоген, остаются растворимыми в тех же условиях, что и фикоцианины.

В промышленном способе очистки фикоцианина для удаления воды можно использовать стадию фильтрации (ультрафильтрации), чтобы сконцентрировать фикоцианин и удалить небольшие молекулы (белки, ионы, органическую кислоту и т.д.), размер которых меньше порога отсечки фильтра, используемого для получения максимально чистого фикоцианина. Однако если порог отсечки фильтра ниже, чем размер гликогена, он не удаляется и увеличивает вязкость ретентата, снижая скорость фильтрации. Зависящий от концентрации эффект вязкости гликогена был продемонстрирован с использованием очищенного гликогена из Galdieria sulphuraria (Martinez-Garcia et al., 2017).

Более того, полученные очищенные фикоцианины сохраняют высокое содержание этих Сахаров, что может изменять качества фикоцианинов, в частности их красящую способность, что требует производства и/или использования большего количества фикоцианинов для достижения того же эффекта. Эти остаточные полисахариды действуют как наполнитель, который увеличивает затраты на производство фикоцианина и может ограничивать промышленное применение полученного фикоцианина, например, при приготовлении пищевых продуктов с низким содержанием сахара.

Цель состоит в том, чтобы улучшить способы выделения и очистки фикоцианинов, экстрагированных из биомассы, как с качественной, так и с промышленной и экономической точки зрения, в частности, благодаря снижению остаточного содержания Сахаров в конечном продукте, в частности, остаточного содержания гликогена.

Краткое описание изобретения Способ в соответствии с изобретением состоит в выполнении селективного осаждения фикоцианинов непосредственно из неочищенного экстракта, который их содержит, в условиях, обеспечивающих целостность фикобилипротеинов, и которые позволяют сохранять в растворе основные примеси, в частности полисахариды, включая гликоген.

Это селективное осаждение является результатом комбинированного действия двух факторов, одновременно или последовательно в любом порядке, с одной стороны, рН раствора и, с другой стороны, концентрации фикоцианина.

Способ в соответствии с изобретением особенно подходит для очистки стойких к кислотному рН фикоцианинов, вырабатываемых Galdieria sulphuraria.

Подробное описание изобретения Изобретение относится к способу извлечения фикоцианинов из раствора, содержащего фикоцианин(ы), также называемого исходным раствором фикоцианина, включающему стадию селективного осаждения, которая состоит, с одной стороны, в регулировании рН исходного раствора до выбранного значения в интервале значений рН, в котором фикоцианины менее растворимы (также называемый интервалом нестабильности), и, с другой стороны, в концентрировании фикоцианинов в растворе, чтобы способствовать их осаждению, а затем стадию извлечения осажденного фикоцианина.

Два действия, регулирование рН и концентрирование, можно выполнять одновременно или последовательно, либо путем регулирования рН исходного раствора перед концентрированием, либо путем концентрирования исходного раствора перед регулированием рН.

Неожиданно было обнаружено, что условия дифференциального концентрирования означают, что осаждают только фикоцианины; другие продукты, которые можно описать как примеси, в частности полисахариды, остаются в растворе.

Таким образом, можно выделить осажденные фикоцианины путем отделения их от раствора и, если необходимо, высушить их для получения очищенного порошка фикоцианина.

Способ в соответствии с изобретением не только позволяет извлекать фикоцианины из раствора, но также позволяет очистить их на той же стадии, причем полученные фикоцианины являются особенно чистыми с низким остаточным содержанием Сахаров.

Способ в соответствии с изобретением особенно подходит для очистки раствора фикоцианина, экстрагированного из культуры продуцирующих фикоцианин микроорганизмов, которая также продуцирует гликоген, в частности, в случае промышленного способа производства фикоцианина, который включает культивирование микроорганизмов с последующим выделением произведенной биомассы для извлечения фикоцианина, и извлечения фикоцианина из этой биомассы.

Этот способ особенно подходит для фикоцианинов, продуцируемых микроорганизмами, которые продуцируют гликоген на высоком уровне, особенно для извлечения и очистки фикоцианинов из биомассы, которая содержит более 10% гликогена в пересчете на общее количество сухого вещества.

Микроорганизмы, продуцирующие фикоцианин, хорошо известны и включают водоросли (или микроводоросли) отряда Cyanidiales. Отряд Cyanidiales включает семейства Cyanidiaceae или Galdieriaceae, которые подразделяются на роды Cyanidioschyzon, Cyanidium или Galdieria, к которым относятся среди других видов Cyanidioschyzon merolae 10D, Cyanidioschyzon merolae DBV201, Cyanidium caldarium, Cyanidium daedalum, Cyanidium maximum, Cyanidium partitum, Cyanidium rumpens, Galdieria daedala, Galdieria maxima, Galdieria partita или Galdieria sulphuraria. Особо следует отметить штамм Galdieria sulphuraria (также известный как Cyanidium caldarium) UTEX 2919.

Можно также отметить известные продуценты фикоцианина, такие как нитчатые цианобактерии из рода Arthrospira, которые промышленно культивируют под общим названием спирулина.

Микроорганизмы, которые продуцируют фикоцианин с высоким содержанием гликогена, особенно идентифицированы среди указанных выше микроорганизмов, особенно видов родов Cyanidioschyzon, Cyanidium и Galdieria, в частности Galdieria sulphuraria.

Промышленные способы культивирования микроорганизмов, продуцирующих фикоцианин, хорошо известны специалистам в данной области техники. Особо следует отметить патентные заявки WO 2017/093345, WO 2017/050917.

Извлечение фикоцианина из биомассы также известно специалисту в данной области техники. Особо следует отметить патентную заявку WO 2018/178334. Обычно требуется стадия механического или ферментативного лизиса клеток для высвобождения продуцируемого фикоцианина в клеточных компартментах микроорганизмов. Этот лизис преимущественно проводят при рН, благоприятном для солюбилизации фикоцианинов. В результате лизиса клеток обычно образуется раствор фикоцианина, который содержит органическую массу в суспензии (называемой неочищенной суспензией), которую можно разделить обычными методами фильтрации. Затем получают раствор неочищенного фикоцианина, который можно дополнительно очистить для удаления низкомолекулярных органических остатков обычными методами ультрафильтрации для получения очищенного раствора, из которого фикоцианин может быть получен обычными методами осаждения и сушки. Особо следует отметить тангенциальную фильтрацию на керамических мембранах или органических мембранах, таких как полые волокна из полиэфирсульфона. Пороги этих фильтров могут быть выбраны для отделения молекул с молекулярной массой выше или ниже целевых фикобилипротеинов.

Способ в соответствии с изобретением особенно подходит для очистки стойких к кислотному рН растворов фикоцианинов, в частности фикоцианинов, описанных в WO 2017/050918.

В частности, способ в соответствии с изобретением используют для очистки стойких к кислому рН фикоцианинов, продуцируемых Galdieria sulphuraria, в частности, в промышленном способе производства этих фикоцианинов ферментерной культурой Galdieria sulphuraria.

Этот способ преимущественно применяют для извлечения фикоцианина из неочищенного сока, полученного из биомассы микроорганизмов, продуцирующих фикоцианин.

Предпочтительно исходный раствор фикоцианина, в частности неочищенный сок, содержит от 0,1 до 10 г/л фикоцианина.

Концентрирование заключается в удалении воды так, чтобы получить содержание фикоцианина по меньшей мере 15 г/л, предпочтительно по меньшей мере 20 г/л, более предпочтительно по меньшей мере 30 г/л или даже по меньшей мере 40 г/л.

Эту концентрацию можно определить как % потери объема из расчета на содержание фикоцианина в исходном растворе.

В промышленном способе производства фикоцианина неочищенный сок преимущественно содержит по меньшей мере 1 г/л фикоцианинов. В этом случае концентрирование заключается в удалении не менее 93% исходного объема жидкости.

Концентрирование осуществляют любым известным способом, позволяющим удалить воду в условиях, сохраняющих целостность фикоцианинов. Можно отметить способы испарения воды, в частности, при пониженном давлении, чтобы способствовать этому испарению в температурных условиях, которые сохраняют целостность фикоцианинов, не влияя на их окрашивающую способность. Можно также отметить способы, которые позволяют удалять жидкость, такие как тангенциальная фильтрация с размерами пор, которые позволяют проходить воде и небольшим молекулам в растворе, но удерживают белки.

Эти способы фильтрации и устройства для их проведения хорошо известны специалистам в данной области техники, в частности, системы Spectrum LabsTFF от Repligen. Для фикоцианинов предпочтительно выбирать фильтры с порами от 50 кДа до 100 кДа, в частности, фильтры из полиэфирсульфона или полисульфона.

Регулировка рН заключается в добавлении кислоты или основания к исходному раствору или к концентрированному раствору для достижения значения рН в интервале нестабильности. Интервал нестабильности зависит от фикоцианинов, подлежащих очистке, и, в частности, от микроорганизма, который их продуцирует. Как правило, этот интервал нестабильности составляет от 4,5 до 5,5, в частности, для стойких к кислому рН фикоцианинов, описанных выше.

Для этих фикоцианинов, стойких к кислому рН, лизис клеток проводят при кислом рН, предпочтительно ниже 4,5, обычно примерно 4 или даже до 3.

Тогда регулировка рН заключается в добавлении основания для достижения рН в интервале нестабильности.

Согласно первому воплощению изобретения способ начинают с концентрирования исходного сока. В этом случае концентрирование проводят при рН, благоприятном для солюбилизации фикоцианинов, то есть вне интервала нестабильности. Для стойких к кислому рН фикоцианинов, описанных выше, эти рН, благоприятные для солюбилизации фикоцианинов, составляют преимущественно ниже 4 или выше 5.

Согласно другому предпочтительному воплощению изобретения способ начинают с регулирования рН до интервала нестабильности, а затем в концентрировании раствора до тех пор, пока фикоцианины не выпадут в осадок.

В этом случае способ может состоять в получении раствора с нестабильным рН из исходного раствора с последующим концентрированием раствора с нестабильным рН, чтобы вызвать осаждение фикоцианинов. Уменьшения объема в процентах достигают, когда наблюдается осаждение фикоцианинов.

Эту стадию селективного осаждения преимущественно проводят при комнатной температуре. Конечно, специалист в данной области техники сможет изменить температуру таким образом, чтобы способствовать осаждению, например, путем понижения температуры, чтобы осуществить вторую часть стадии (концентрирование или регулирование рН), во время которой происходит осаждение.

Полисахариды в растворе, в частности гликоген, затем можно извлечь с помощью обычных методов осаждения полисахаридов, например, путем добавления этанола (Martinez-Garcia et al., 2016), эти полисахариды также можно впоследствии очистить.

Согласно конкретному воплощению изобретения полисахариды, содержащиеся в исходном растворе с фикоцианинами, подвергают ферментативному лизису, который способствует их удержанию в растворе. Следовые количества этих полисахаридов, которые, вероятно, уносятся с осаждением фикоцианина, уже будучи низкими, снижаются еще больше, когда полисахариды подвергают лизису до низкомолекулярных олигосахаридов, которые еще более растворимы. Более того, когда выполняют стадию концентрирования посредством тангенциальной фильтрации, низкомолекулярные олигосахариды удаляют вместе с другими небольшими молекулами в растворе, что способствует получению раствора с еще более высоким содержанием фикоцианина.

В частности, ферментативный лизис гликогена проводят при рН меньше или равном 5, предпочтительно примерно 4,5, при комнатной температуре.

Эти условия температуры и рН особенно подходят для сохранения фикоцианина во время ферментативной реакции.

Ферменты, активные в условиях кислого рН и при комнатной температуре, выбирают из ферментов, которые обладают известной активностью α1-4-глюкуронидазы, α1-4-глюкозидазы (или альфа-глюкозидазы). Особо следует отметить пектиназы, которые, как известно, разлагают пектин, и, в частности, пектиназы, экстрагированные из нитчатых грибов, таких как Aspergillus, в частности пектиназы, экстрагированные из Aspergillus aculeatus, такие как ферменты, продаваемые под названием Pectinex® компанией Novozymes.

Ферментативный лизис гликогена также может быть достигнут с помощью α1-6-глюкозидазы в дополнение к α1-4-глюкуронидазе или α1-4-глюкозидазе. α1-6-глюкозидазы, активные в указанных выше условиях рН и температуры, также известны специалисту в данной области техники. В частности, это пуллуланазы, которые, как известно, гидролизуют α1-6-гликозидные связи пуллулана, в частности, как известно, удаляют разветвления крахмала.

Обычно это ферменты, извлеченные из бактерий, особенно из рода Bacillus. В US 6074854, US 5817498 и WO 2009/075682 описаны такие пуллуланазы, экстрагированные из Bacillus deramificans, или Bacillus acidopullulyticus. Коммерчески доступные пуллуланазы также известны под названиями «Promozyme D2» (Novozymes), «Novozym 26062» (Novozymes) и «Optimax L 1000» (DuPont - Genencor).

Следует отметить, что смеси пуллуланазы и альфа-амилазы описаны в предшествующем уровне техники, но, в частности, для получения сиропа глюкозы из крахмала (US 2017/159090).

Специалист в данной области техники понимает, как определить подходящие условия реакции для наилучшего снижения количества гликогена в зависимости от начального содержания гликогена в обрабатываемом растворе, количества используемых ферментов и требуемой чистоты продуцируемого фикоцианина.

Извлечение твердых осажденных фикоцианинов осуществляют любым способом, известным специалисту в данной области техники, таким как фильтрация или центрифугирование.

Специалист в данной области техники сможет предусмотреть любой способ извлечения твердых веществ, чтобы уменьшить объем, подлежащий обработке, путем фильтрации или центрифугирования.

Такое извлечение можно осуществлять периодически, партиями, или непрерывно с добавлением исходного раствора для компенсации извлечения твердых фикоцианинов.

Такую стадию непрерывного извлечения предпочтительно осуществляют с концентрированием путем тангенциальной фильтрации на растворе с нестабильным рН, при этом специалист в данной области сможет регулировать соответствующие скорости потока удаления воды и подачи раствора с нестабильным рН, чтобы способствовать осаждению фикоцианинов.

Такой непрерывный процесс особенно приспособлен для обработки исходных растворов, в которых полисахариды и, в частности, гликоген подвергают ферментативному лизису, который способствует их удалению путем тангенциальной фильтрации с водой и другими небольшими растворимыми молекулами.

Изобретение также относится к способу получения фикоцианинов путем ферментации микроорганизмов, включающему следующие стадии: (i) культивирование микроорганизмов для получения биомассы, богатой фикоцианином, (ii) выделение биомассы и лизис клеток для солюбилизации высвобожденных фикоцианинов в суспензии клеточных частиц, (iii) осветление ранее полученной суспензии для получения неочищенного раствора фикоцианина и (iv) выделение фикоцианина из ранее полученного неочищенного раствора, отличающееся тем, что выделение фикоцианина включает стадию селективного осаждения, как определено выше.

Затем извлеченное твердое вещество можно высушить любым подходящим способом и, при необходимости, измельчить.

Извлеченное твердое вещество, содержащее фикоцианин, также можно подвергнуть очистке способами, известными специалисту в данной области техники, такими как диафильтрация.

Способы ферментативного культивирования, выделения биомассы, лизиса и осветления хорошо известны специалистам в данной области техники, в частности, способы, которые описаны в WO 2017/050917, WO 2017/093345 и WO 2018/178334.

Селективное осаждение, осуществляемое в соответствии с изобретением, глобально снижает энергию, необходимую для производства порошка фикоцианина из исходного раствора, в частности из неочищенного сока, как с точки зрения количества обрабатываемого материала, так и энергии, необходимой для сушки твердого фикоцианина и его измельчения.

Фикоцианин, полученный этим способом, имеет индекс чистоты по меньшей мере 2, предпочтительно по меньшей мере 3 или даже выше 4.

Индекс чистоты измеряют путем измерения оптической плотности методом, описанным Moon et al. (2014).

Преимущественно полученный фикоцианин представляет собой фикоцианин, который имеет отношение гликоген/фикоцианин (по массе сухого вещества) ниже 6, преимущественно ниже 4, предпочтительно ниже 3, более предпочтительно ниже 2,5, еще более предпочтительно ниже 1.

Изобретение также относится к применению полученных фикоцианинов в качестве красителей, в частности, в качестве пищевых красителей. Оно также относится к твердым или жидким пищевым продуктам, в частности к напиткам, которые содержат фикоцианин с низким содержанием гликогена в соответствии с изобретением.

Описание чертежей

На фиг. 1 показана масса осадка, полученного при различных концентрациях фикоцианина и различных рН исходного раствора.

На фиг. 2 показана концентрация фикоцианина в надосадочной жидкости после извлечения осадка в зависимости от рН для различных концентраций фикоцианина.

Примеры Материалы и методы Штамм: Galdieria sulphuraria (также называемый Cyanidium caldarium) UTEX#2919.

Условия культивирования:

Биомассу получали путем периодической ферментации с подпиткой в условиях, описанных в WO2017050918 А1. Условия выделения:

Клетки механически измельчали с использованием шаровой мельницы DYNO® MILL KD (Willy A. Bachofen AG Maschinenfabrik). Поскольку фикоцианин (ФЦ) является гидрофильной молекулой, его экстрагируют водой, регулируя рН до требуемого значения с помощью основания (NaOH, KOH, NH₄OH и т.д.) или кислоты (H₂SO₄, лимонная кислота и т.д.). Неочищенный экстракт ФЦ выделяли после отделения частиц клеток центрифугированием при 10000 g в течение 10 мин при комнатной температуре. Неочищенный экстракт концентрировали путем тангенциальной фильтрации через керамическую или органическую мембрану с порогом отсечки, позволяющим удерживать фикоцианин. Затем образцы центрифугировали, чтобы отделить осадок от надосадочной жидкости. Массу пеллеты измеряли на точных весах. Осадок повторно суспендировали в водном растворе с рН, составляющим 7, обеспечивая возможность его повторной солюбилизации, чтобы количественно определить осажденный фикоцианин. Определение ФЦ:

Оценку содержания фикоцианина и индекса чистоты проводили путем измерения оптической плотности с использованием метода, описанного Moon et al. (Moon et al., Korean J. Chem. Eng., 2014, 1-6).

Пример 1. Влияние концентрации и рН на осаждение и очистку фикоцианина (ФЦ)

Неочищенный раствор фикоцианина с начальной концентрацией 1 г/л ФЦ и начальной чистотой 1,6 концентрировали посредством тангенциальной фильтрации при рН, составляющем 4, с получением ретентата с концентрацией 20 г/л, затем 30 г/л, а затем 45 г/л. Во время фильтрации можно наблюдать повышение чистоты продукта, однако эта чистота не превышает значения 2, несмотря на степень концентрирования продукта. На фиг.1 можно увидеть, что для концентрации 20 г/л осаждение фикоцианина низкое при рН, составляющем 4, и немного увеличивается по мере увеличения рН в сторону более высоких значений (фиг. 1). В то же время измерение концентрации растворимого фикоцианина в надосадочной жидкости во время этого повышения рН показывает относительно небольшое снижение. Для концентрации ФЦ 30 г/л это явление осаждения при изменении рН гораздо более выражено и оказывается максимальным при значениях 4,5 и 5,5 (фиг. 1 и фиг. 2). При дальнейшей фильтрации и концентрировании фикоцианина до значения 40 г/л растворимого, во время фильтрации наблюдается образование значительного осадка даже до изменения рН (фиг. 1). Как и прежде, изменение рН увеличивает явление осаждения фикоцианина.

Путем тангенциальной фильтрации чистота фикоцианина снижается, в отличие от чистоты осадка, собираемого и повторно солюбилизируемого при рН, составляющем 7. Это указывает на преимущественное осаждение фикоцианина, который может быть повторно солюбилизирован при более благоприятных условиях рН.

В таблице 1 представлены результаты измерения чистоты фикоцианина после повторной солюбилизации осадка фикоцианина для осаждения при рН, составляющем 7,5.

Пример 2: Влияние концентрации и рН на осаждение и очистку ФЦ из ферментативно обработанного образца

В этом примере неочищенный раствор подвергали ферментативной обработке для разложения присутствующего гликогена. Ферментативное расщепление осуществляли при комнатной температуре и рН, равном 4, с помощью ферментов альфа-1,4-глюкуронидазы («Pectinex Ultra SP-L») и альфа-1,6-глюкозидазы («Novozyme 26062»).

Для достижения концентрации фикоцианина в несколько десятков г/л проводили обогащение путем тангенциальной фильтрации, затем проводили корректировку рН, приводящую к осаждению. Отбирали образцы с рН, составляющим 4,5, 5 и 5,5 с измерением остаточного растворимого фикоцианина и измерением осажденного фикоцианина после сбора и повторной обработки пеллеты буферным раствором с рН, составляющим 7,5.

Как и в предыдущем примере, осаждение является значительным для интервала рН от 4,5 до 5,5, и уровень чистоты в этом случае достигает значений выше 3,8 после повторной солюбилизации осажденного фикоцианина. Ферментативная обработка гликогена не влияет на очистку осаждением. В таблице 2 ниже приведены значения индекса чистоты фикоцианина после осаждения путем регулирования до нестабильного рН, а также после повторной солюбилизации осадка фикоцианина.

Список литературы

- Cruzde al., Int J Food NutrSci (2016) 3(3): 1-0

- Martinez-Garcia et al., Int J Biol Macromol. (2016) 89:12-8

- Martinez-Garcia et al., Carbohydrate Polymers (2017) 169: 75-82

- Moon et al., 2014 Korean J. Chem. Eng., 2014, 1-6

- TN 2009000406, US 6074854, US 5817498, US 2017/159090, WO 2009/075682, WO 2016/030643, WO 2017/050917, WO 2017/050918, WO 2017/093345, WO 2018/178334

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ выделения фикоцианинов из исходного раствора фикоцианинов, характеризующийся тем, что он включает следующие стадии: а) селективное осаждение, которое состоит в регулировании рН исходного раствора до выбранного значения в интервале значений pH от 4,5 до 5,5, и концентрировании фикоцианинов в растворе, чтобы способствовать их осаждению, путем удаления воды или посредством тангенциальной фильтрации с порогом отсечки, позволяющим удерживать фикоцианин, и b) выделение осажденного фикоцианина. Изобретение позволяет получать фикоцианин с высокой степенью эффективности. 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 2 пр.

1. Способ выделения фикоцианинов из исходного раствора фикоцианинов, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:

а) селективное осаждение, которое состоит в:

- регулировании рН исходного раствора до выбранного значения в интервале значений pH от 4,5 до 5,5, и

- концентрировании фикоцианинов в растворе, чтобы способствовать их осаждению,

путем удаления воды или посредством тангенциальной фильтрации с порогом отсечки, позволяющим удерживать фикоцианин, и

b) выделение осажденного фикоцианина.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что две стадии регулирования рН исходного раствора и концентрирования фикоцианина в растворе выполняют одновременно или последовательно, либо путем регулирования pH исходного раствора перед концентрированием, либо путем концентрирования исходного раствора перед регулированием pH.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что исходный раствор фикоцианина представляет собой неочищенный раствор, полученный после лизиса биомассы микроорганизмов, культивированных для продуцирования фикоцианина.

4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что исходный раствор фикоцианина содержит от 0,1 до 10 г/л фикоцианинов.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что микроорганизмы также продуцируют гликоген.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что биомасса микроорганизмов содержит более 10 мас. % гликогена в пересчете на общее количество сухого вещества.

7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что фикоцианин представляет собой фикоцианин, стабильный при кислом рН.

8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что фикоцианин представляет собой фикоцианин микробного происхождения, продуцируемый микроорганизмом, выбранным из видов рода Cyanidioschyzon, Cyanidium или Galdieria.

9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что концентрирование состоит в удалении воды так, чтобы получить содержание фикоцианина по меньшей мере 15 г/л, предпочтительно по меньшей мере 20 г/л, более предпочтительно по меньшей мере 30 г/л или даже по меньшей мере 40 г/л.

10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что извлеченный фикоцианин сушат и возможно измельчают.

11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что извлеченный фикоцианин имеет индекс чистоты по меньшей мере 2, предпочтительно по меньшей мере 3.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что извлеченный фикоцианин имеет индекс чистоты выше 4.