ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ КОМБИНАЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЛЕГОЧНЫЙ СУРФАКТАНТ И СТЕРОИД, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ БЛД Российский патент 2024 года по МПК A61K9/08 A61K31/42 A61K31/573 A61P11/06 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к композициям для профилактики болезней недоношенных. Настоящее изобретение также относится к способам профилактики заболеваний недоношенных.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Легкое человека состоит из большого числа маленьких воздушных мешочков, называемых альвеолами, в которых происходит обмен газов между кровью и воздушным пространством легких. У здоровых людей этот обмен опосредуется белок-содержащим сурфактантным комплексом, который предотвращает спадение легких в конце выдоха.

Комплекс легочного сурфактанта состоит в основном из липидов и содержит незначительное количество разных белков. Отсутствие достаточного содержания данного комплекса приводит к нарушению работы легких. Этот синдром называется респираторным дистресс-синдромом (РДС) и обычно поражает недоношенных новорожденных.

Основой лечения РДС является заместительная терапия препаратами экзогенного легочного сурфактанта, извлеченного из легких животных, известными как модифицированные природные сурфактанты. Например, модифицированные природные сурфактанты, используемые в клинической практике, включают порактант альфа, полученный из легких свиньи и продаваемый под торговой маркой Curosurf®, берактант (Surfacten® или Survanta®) и бовактант (Alveofact®), полученные из легких крупного рогатого скота, и кальфактант, полученный из легких телят (Infasurf®).

Экзогенные легочные сурфактанты в настоящее время вводят путем эндотрахеальной инстилляции в виде суспензии в водном растворе соли интубированным недоношенным детям, находящимся на искусственной вентиляции легких кислородом.

Хотя указанная терапия значительно увеличила постнатальную выживаемость, дети, пережившие РДС, имеют высокий риск развития бронхолегочной дисплазии (БЛД), распространенного и серьезного осложнения недоношенности, сопровождающегося значительной смертностью, заболеваемостью и использованием ресурсов здравоохранения. Несмотря на успехи в развитии дородового и послеродового ухода, заболеваемость данным состояним продолжает расти. Лечение БЛД и контролирование связанных с ней проблем остается основной задачей неонатологов и педиатров. Было предложено множество способов вмешательства с целью профилактики и лечения БЛД, но многие из них до сих пор не имеют доказательной базы. Современные способы лечения, по-видимому, уменьшают тяжесть БЛД, но мало влияют на частоту ее возникновения. БЛД представляет собой прогрессирующий процесс повреждения легких, причем его патофизиология варьирует в зависимости от стадии заболевания. Таким образом, его лечение вряд ли будет включать в себя один способ вмешательства, а скорее будет представлять собой комбинированный подход с использованием разных стратегий, направленных на разные факторы и/или стадии заболевания.

По этой причине при разработке общей схемы ведения больного полезно разделить вмешательство с целью лечения БЛД на три последовательные стадии. Они включают в себя: i) профилактику БЛД; ii) лечение прогресирующей БЛД; и iii) лечение развитой БЛД (см. Bowen P et al., Pediatrics and Child Health 2013, 24:1, 27-31).

Профилактику БЛД у новорожденных, страдающих РДС, осуществляют путем системного введения кортикостероидов до рождения или в течение нескольких часов после родов. Однако эффективность постнатального введения кортикостероидов нивелируется возможными неблагоприятными системными эффектами, такими как гипертензия, гипергликемия, желудочно-кишечные осложнения и нарушения формирования нервной системы.

В качестве альтернативы системному введению для профилактики БЛД была предложена доставка кортикостероидов путем ингаляции или интратрахеальной инстилляции.

Например, в US 2010/0317636 описан способ профилактики БЛД у младенца, страдающего от респираторного дистресс-синдрома, путем введения младенцу сочетания кортикостероида, обладающего высокой местной или системной противовоспалительной активностью, и легочного сурфактанта.

Yeh et al (Pediatrics 2008, 121(5), e1310-e13l8) предлагают интратрахеальную инстилляцию будесонида с использованием легочного сурфактанта Survanta® в качестве носителя, тогда как Dani et al (Pediatr Pulmonol 2009, 44, 1159-1167) предлагают интратрахеальную инстилляцию беклометазона дипропионата в сочетании с Cursurf®.

Однако при использовании таких подходов большое число недоношенных новорожденных будет подвергаться воздействию кортикостероидов, причем у многих из них будет отсутствовать полезный эффект, если у них разовьется БЛД (см. Bancalari E. Am J Respir Crit Care Med 2016, 193:1, 12).

Постнатальное введение кортикостероидов может найти свое место в способе профилактики БЛД, поскольку в данном случае они будут назначаться пациентам, нуждающимся в них.

Однако из-за наблюдаемых побочных эффектов или из-за отсутствия четких признаков эффективности системное постнатальное введение дексаметазона и гидрокортизона в настоящее время обычно не рекомендуют.

Вышеизложенные обстоятельства свидетельствуют о том, что все еще существует потребность в разработке более подходящего лекарственного средства на основе кортикостероидов для профилактики БЛД у недоношенных новорожденных, характеризующегося пониженным риском неблагоприятных побочных эффектов.

Кроме того, предпочтительно получить лекарственное средство, которое можно было бы вводить местно либо путем ингаляции, либо путем интратрахеальной инстилляции.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соответственно, одной целью настоящего изобретения является получение новых композиций для профилактики заболеваний недоношенных.

Другой целью настоящего изобретения является разработка новых способов профилактики заболеваний недоношенных.

Эти и другие цели, которые станут очевидными из последующего подробного описания, были достигнуты благодаря открытию авторами изобретения того факта, что введение легочного сурфактанта в сочетании с будесонидом оказывает профилактический эффект в отношении бронхолегочной дисплазии (БЛД) у недоношенных новорожденных.

Таким образом, настоящее изобретение предлагает сочетание легочного сурфактанта со стероидом для применения в способе профилактики бронхолегочной дисплазии у недоношенных новорожденных.

Соответственно, в одном варианте осуществления изобретение относится к легочному сурфактанту в сочетании с будесонидом в дозе примерно от 0,01 до 0,1 мг/кг массы тела для применения в способе профилактики бронхолегочной дисплазии (BPD) у недоношенных новорожденных.

Предпочтительно указанное сочетание вводят с рождения (с 1 дня жизни) до 4 дня жизни.

Изобретение также относится к легочному сурфактанту в сочетании с будесонидом в дозе примерно от 0,01 до 0,1 мг/кг массы тела для применения в способе лечения тяжелой хронической легочной недостаточности недоношенных у недоношенных новорожденных.

Изобретение также направлено на применение легочного сурфактанта в сочетании с будесонидом в дозе примерно от 0,01 до 0,1 мг/кг массы тела в способе промышленного получения лекарственного средства для профилактики бронхолегочной дисплазии (БЛД) у недоношенных новорожденных.

Предпочтительно указанное сочетание вводят с рождения (с 1 дня жизни) до 4 дня жизни.

Изобретение также относится к применению легочного сурфактанта в сочетании с будесонидом в дозе примерно от 0,01 до примерно 0,1 мг/кг массы тела в способе промышленного получения лекарственного средства для лечения тяжелой хронической легочной недостаточности недоношенных у недоношенных новорожденных.

Лекарственный препарат по настоящему изобретению можно вводить одновременно, последовательно или отдельно, предпочтительно он разработан для одновременного введения в виде фиксированного сочетания.

В конкретном варианте осуществления указанное лекарственное средство находится в виде фармацевтической композиции для ингаляции или интратрахеального введения, содержащей указанное фиксированное сочетание.

В другом варианте осуществления изобретение направлено на способ профилактики бронхолегочной дисплазии или лечения тяжелой хронической легочной недостаточности недоношенных, включающий введение недоношенному новорожденному, нуждающемуся в такой профилактике, легочного сурфактанта в сочетании с будесонидом в дозе примерно от 0,01 до примерно 0,1 мг/кг массы тела, где указанное сочетание вводят с рождения (с 1 дня жизни) до 4 дня жизни.

В другом варианте осуществления изобретение направлено на способ улучшения функции легких у недоношенного новорожденного, включающий введение композиции по настоящему изобретению.

В следующем варианте осуществления изобретение направлено на способ уменьшения воспаления легких у недоношенного новорожденного, получавшего искусственную вентиляцию легких, включающий введение композиции по настоящему изобретению указанному недоношенному новорожденному, где указанное введение осуществляют во время, до или после указанной искусственной вентиляции легких.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Преимущества, обеспечиваемые изобретением, станут очевидными из нижеследующего подробного описания и чертежей, где:

На фиг.1 показаны результаты примера 5.

На фиг.2 показаны результаты измерений среднего давления в дыхательных путях (MAP) и объема при 40 см H₂O (V40/кг), полученные в примере 6.

На фиг.3 показаны результаты анализа мРНК легких для повреждающей вентилляции, полученные в примере 6.

На фиг.4 показаны результаты ответов мРНК печени на искусственную вентиляцию легких, полученные в примере 6.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Термин "бронхолегочная дисплазия (БЛД)" относится к хроническому заболеванию легких, также известному как хроническая болезнь легких (ХБЛ), которое является следствием невылеченного или аномально восстановленного повреждения легких. БЛД также можно отнести к тяжелой хронической легочной недостаточности недоношенных.

БЛД обычно встречается у младенцев с очень низкой массой тела при рождении (ОНМТ), у которых в раннем возрасте развивается повреждение легких в результате кислородного отравления и баротравмы от искусственной вентиляции. Определение и классификация БЛД изменились с момента его первоначального описания Northway et al. в 1967 г. Национальный институт здоровья ребенка и развития человеческого организма (NICHD) определил БЛД в консенсусном заключении в 2001 году. Данное определение учитывает дополнительную потребность в кислороде в течение 28 дней и затем описывает 3 степени тяжести, в зависимости от необходимости респираторной поддержки, определяемой либо в постконцептуальном возрасте (PMA) 36 недель или при выписке у детей, родившихся на сроке беременности <32 недель, или на 56 день жизни или при выписке у детей, родившихся на сроке беременности >32 недель.

В 2001 г. Jobe A et al (Am J Respir Crit Care Med; 163(7) 1723-1729) предложили новое определение, включающее конкретные критерии для "легкой", "умеренной" и "тяжелой" БЛД.

Легкую БЛД определяют как заболевание, при котором дополнительный кислород требуется в течение ≥28 дней и ребенок может находиться в комнатном воздухе на 36 неделе PMA или при выписке (для младенцев, родившихся на сроке беременности <32 недель), либо на 56 день или при выписке (для младенцев, родившихся на сроке беременности >32 недель).

Умеренную BDP определяют как заболевание, при котором дополнительный кислород требуется в течение ≥28 дней, причем потребность в дополнительном кислороде составляет <30% на 36 неделе PMA/при выписке (для младенцев, родившихся на сроке беременности <32 недель), или на 56 день/при выписке (для младенцев, родившихся на сроке беременности >32 недель).

Тяжелую БЛД определяют как заболевание, при котором дополнительный кислород требуется в течение ≥28 дней, причем потребность в кислороде ≥30%, или назальном CPAP, или искусственной вентиляции, сохраняется на 36 неделе PMA/при выписке (<32 недель), либо через 56 дней/при выписке (>32 недель).

Термин "прогрессирующая БЛД", иногда известный как ранняя БЛД, относится к начальной фазе хронического процесса, приводящего к развитой БЛД, и указывает на заболевание, характеризующееся зависимостью от кислорода и/или вентилляции с 7 по 14 день жизни (Walsh MC et al Pediatrics 2006, 117, S52-S5). В последнее время прогрессирующую БЛД также называют хроническая легочная недостаточность недоношенных (см. Steinhom R et al. J Peds 2017,8, 15-21.).

Термин "модифицированный природный сурфактант" относится к липидному экстракту измельченного легкого млекопитающего. В процессе экстракции липидов, используемом в промышленном способе, устраняются гидрофильные белки SP-A и SP-D. Полученные в результате препараты содержат разные количества двух гидрофобных, сурфактант-ассоциированных белков, SP-B и SP-C, и, в зависимости от метода экстракции, могут содержать отличные от сурфактанта липиды, белки или другие компоненты.

Термин "порактант альфа" относится к модифицированному природному сурфактанту, экстрагируемому из легких свиньи, который в основном состоит из полярных липидов, в основном фосфолипидов, и белков SP-B и SP-C. Poractant alfa выпускается под торговой маркой Curosurf®.

Термин "искусственные легочные сурфактанты" относится к смесям синтетических соединений, в первую очередь фосфолипидов и других липидов, которые составлены так, чтобы имитировать липидный состав и свойства природного легочного сурфактанта. Они не содержат белков легочного сурфактанта.

Термин "восстановленные легочные сурфактанты" относится к искусственным легочным сурфактантам, к которым были добавлены легочные поверхностно-активные белки/пептиды, выделенные из животных, или белки/пептиды, полученные с помощью рекомбинантной технологии, такой как описанная в WO 95/32992, или синтетические аналоги сурфактантов, например, описанные в WO 89/06657, WO 92/22315 и WO 00/47623.

Термин "неинвазивная процедура вентиляции (НИВ)" относится к способу вентиляции, который поддерживает дыхание без интубации, такому как создание назального постоянного положительного давления в дыхательных путях (назальное CPAP). Другие неинвазивные процедуры вентиляции включают назальную перемежающуюся вентиляцию с положительным давлением (NIPPV), высокопоточную назальную оксигенотерапию с использованием канюли (HFNC) и двухуровневое положительное давление в дыхательных путях (BiPAP).

Термин "респираторная поддержка" включает в себя любое вмешательство с целью лечения респираторного заболевания, включая, например, введение дополнительного кислорода, искусственную вентиляцию легких и назальный CPAP.

Термин "лечение" относится к излечению, облегчению симптомов, уменьшению симптомов заболевания или состояния, например, БЛД у пациента.

Термин "профилактика" относится к замедлению прогрессирования, отсрочке начала и/или снижению риска возникновения заболевания или состояния, такого как БЛД, у пациента.

Термин "недоношенные новорожденные", или недоношенные дети, относится к новорожденным с крайне низкой массой тела при рождении (ELBW), очень низкой массой тела при рождении (VLBW) и низкой массой тела при рождении (LBW) в гестационном возрасте от 24 до 35 недель.

Термин "фиксированная комбинация" относится к сочетанию, в котором активные вещества находятся в фиксированном количественном соотношении.

Термин "фармацевтически приемлемый" в данном описании относится к среде, которая не вызывает аллергической или подобной нежелательной реакции при введении младенцу.

"Сурфактантная активность" в применении к препарату сурфактанта означает способность снижать поверхностное натяжение.

Эффективность препаратов экзогенного сурфактанта in vitro обычно тестируют путем измерения их способности снижать поверхностное натяжение с помощью подходящего устройства, такого как весы Вильгельми, сурфактометр с пульсирующим пузырьком, сурфактометр с прилипшим пузырьком и капиллярный сурфактометр.

Эффективность препаратов экзогенного сурфактанта in vivo тестируют путем измерения легочной механики на животных моделях недоношенных в соответствии с известными методами.

В контексте настоящего описания термин "синергический" означает, что сумма активностей легочного сурфактанта и будесонида превышает ожидаемую активность сурфактанта или будесонида, используемых отдельно.

Термин "биоподобный порактанту альфа" относится к модифицированному природному легочному сурфактанту, который имеет такой же профиль безопасности,, как и порактант альфа, терапевтически эквивалентен ему, имеет сходство с ним в качественно-количественном составе не менее 80% (в частности, по фосфолипидам и поверхностно-активным белкам SP-B и SP-C), и имеет вязкость, равную или меньшую 15 мПа (сП) при комнатной температуре, если его суспендируют в водном растворе с концентрацией 80мг/мл. Вязкость можно определить известными методами.

Настоящее изобретение частично основано на неожиданном открытии, заключающемся в том, что будесонид в дозе примерно от 0,01 мг/кг до примерно 0,1 мг/кг массы тела можно сочетать с легочным сурфактантом, таким как порактант альфа, с целью предотвращения бронхолегочной дисплазии (БЛД) без изменения поверхностной активности сурфактанта.

Преимущества сочетания легочного сурфактанта с заявленной дозой будесонида будут очевидны из нижеследующих результатов.

Действительно, в исследовании на модели недоношенных кроликов, подвергшихся гипероксии с целью имитации БЛД, было неожиданно обнаружено, что применение легочного сурфактанта, такого как порактант альфа, в сочетании с более низкой дозой будесонида, чем доза, используемая, например, Yeh et al., 2008, приводит к практически эквивалентной податливости легких. Поскольку будесонид является высоколипофильным кортикостероидом, это может способствовать его всасыванию слизистой оболочкой и захвату через фосфолипидные клеточные мембраны с незначительной системной абсорбцией, что делает сочетание безопасным для терапевтического применения у недоношенных новорожденных.

Кроме того, в исследовании на модели новорожденного ягненка у животных, получавших порактант альфа в сочетании с 0,04 и 0,1 мг/кг будесонида, наблюдался более высокий объем при 40 см H₂O, чем у животных, получавших сурфактант в сочетании с дозой будесонида, используемой Yeh et al., 2008.

Вследствие возможной возрастной изменчивости ADME-свойств будесонида было невозможно предсказать, что более низкая доза все еще может быть эффективной.

Объем при 40 см H₂O, в свою очередь, является маркером повреждения легких, поскольку белок, высвобождаемый в легкие, или в участок воспаления, вызывает отек и дезактивирует сурфактант, что способствует возникновению БЛД.

С другой стороны, легочный сурфактант может способствовать распространению кортикостероида за счет эффекта Марангони, способствуя его распределению и, следовательно, достижению представляющей интерес области легких.

Любой легочный сурфактант, используемый в настоящее время, или разрабатываемый для использования в будущем при респираторном дистресс-синдроме и других легочных состояниях, можно использовать в настоящем изобретении. Такой легочный сурфактант включает модифицированные природные, искусственные и восстановленные легочные сурфактанты.

Используемые в настоящее время модифицированные природные легочные сурфактанты включают, без ограничения, бычий липидный легочный сурфактант (BLES™, BLES Biochemicals, Inc. London, Ont), калфактант (Infasurf™, Forest Pharmaceuticals, St. Louis, Mo.), бовактант (Alveofact™, Thomae, Germany), бычий легочный сурфактант (легочный сурфактант TA™, Tokyo Tanabe, Japan), порактант альфа (Curosurf™, Chiesi Farmaceutici SpA, Parma, Italy) и берактант (Survanta™, Abbott Laboratories, Inc., Abbott Park, 111).

Примеры восстановленных поверхностно-активных веществ включают композиции, раскрытые в EP 212 288, WO 2008/011559, WO 2013/120058, продукты люцинактан (Surfaxin™, Windtree-Discovery Laboratories Inc., Warrington, Pa.) и продукт, имеющий состав, раскрытый в таблице 2 примера 2 WO 2010/139442, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки, т.е.

1,5% ацетата SP-C33(leu);

0,2% ацетата мини-B(leu); и

DPPC:POPG в массовом соотношении 50:50.

Указанный восстановленный сурфактант далее называют CGF 5633.

Легочный сурфактант, выбранный для использования в лекарственном средстве по настоящему изобретению, может быть таким же, как легочный сурфактант, используемым для RDS, или отличаться от него. В предпочтительном варианте осуществления используется такой же легочный сурфактант.

В предпочтительном варианте осуществления легочный сурфактант представляет собой модифицированный природный легочный сурфактант.

Более предпочтительно легочный сурфактант представляет собой порактант альфа (Curosurf™), поскольку он обладает очень низкой вязкостью и, следовательно, его можно вводить в высоких концентрациях с использованием небольшого объема водного носителя.

В другом варианте осуществления легочный сурфактант представляет собой восстановленный сурфактант, имеющий состав, раскрытый в таблице 2 примера 2 WO 2010/139442.

Вводимая доза легочного сурфактанта будет зависеть от массы и гестационного возраста недоношенного новорожденного, а также от тяжести состояния новорожденного. Специалисты в соответствующей области легко смогут определить эти факторы и соответствующим образом скорректировать дозировку.

Предпочтительно доза легочного сурфактанта может составлять примерно от 100 до 200 мг/кг массы тела.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения можно использовать порактант альфа в дозе примерно от 100 до 200 мг/кг массы тела.

В предпочтительном варианте осуществления доза может составлять примерно 100 мг/кг массы тела, тогда как в другом предпочтительном варианте доза может составлять примерно 200 мг/кг массы тела.

Предпочтительно доза будесонида составляет примерно от 0,01 до 0,1 мг/кг массы тела. Нижний предел дозы будесонида может составлять примерно 0,02 мг/кг массы тела, примерно 0,03 мг/кг массы тела, примерно 0,04 мг/кг массы тела или примерно 0,05 мг/кг массы тела. Верхний предел дозы будесонида может составлять примерно 0,09 мг/кг массы тела, примерно 0,08 мг/кг массы тела или примерно 0,07 мг/кг массы тела.

Для профилактики БЛД легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенному новорожденному в любое время между: (а) временем, максимально близким к рождению или началу жизни, и (б) любым временем в течение четвертого дня жизни. В пределах указанного выше интервала времени введение можно продолжать в течение периода времени, который врач или другой практикующий специалист сочтет подходящим для достижения желаемого эффекта.

В другом варианте осуществления легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенному новорожденному в любое время в течение первых трех дней жизни. В другом варианте осуществления легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенному новорожденному в любое время в течение первых двух дней жизни. В другом варианте осуществления легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенному новорожденному в любое время в течение первого дня жизни. В другом варианте осуществления легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенному новорожденному в любое время в течение первых 8 часов жизни. В другом варианте осуществления легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенному новорожденному в любое время в течение первых четырех часов жизни.

Частота введения зависит от размера и гестационного возраста недоношенного новорожденного, а также от тяжести состояния новорожденного и способа введения. Специалисты в соответствующей области легко смогут ее определить. Например, лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить один или два раза.

Частота введения зависит от размера и гестационного возраста недоношенного новорожденного, а также от тяжести состояния новорожденного и способа введения. Например, лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить один или два раза.

Для профилактики БЛД легочный сурфактант и будесонид вводят недоношенным новорожденным с гестационным возрастом от 26 до 35 недель, предпочтительно с гестационным возрастом от 28 до 32 недель.

Сочетание по настоящему изобретению предпочтительно вводят недоношенным новорожденным, содержащимся в условиях неинвазивной вентиляции, более предпочтительно в условиях назального CPAP, еще более предпочтительно с использованием назального устройства при давлении от 1 до 12 см водного столба.

Активные вещества сочетания легочного сурфактанта и будесонида в заявленных дозах можно вводить последовательно, отдельно или совместно. Предпочтительно, если два активных вещества вводят вместе, их вводят в виде фиксированного сочетания.

Следовательно, настоящее изобретение также предлагает применение сочетания по настоящему изобретению в виде фиксированного сочетания в способе промышленного получения лекарственного средства для профилактики БЛД. Лекарственное средство может входить в состав фармацевтической композиции.

Указанные композиции можно вводить в виде раствора, дисперсии, суспензии или сухого порошка. Предпочтительно указанные композиции содержат заявленное сочетание, суспендированное в подходящем физиологически переносимом растворителе.

Более предпочтительно, композиция содержит водный раствор, предпочтительно стерильный, который может также содержать pH-буферные средства и другие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как полисорбат 20, полисорбат 80 или монолаурат сорбитана в качестве увлажняющих средств и хлорид натрия в качестве изотонического средства.

Композиции можно распределить в однодозовые или многодозовые контейнеры, например, в запаянные ампулы или флаконы, или их можно хранить в замороженном виде или высушенными из замороженного состояния (лиофилизированными), в этом случае требуется только добавление стерильного жидкого носителя непосредственно перед применением.

Предпочтительно композицию поставляют в виде стерильной суспензии в забуференном физиологическом растворе (0,9% масс./об. хлорида натрия) в одноразовых флаконах.

Введение заявленной композиции можно осуществлять известными способами, например посредством эндотрахеальной инстилляции, спрея или распыления струйным ультразвуковым распылителем или распылителем с вибрирующим ситом, обычно доступными на рынке.

При введении композиции путем эндотрахеальной инстилляции, в зависимости от тяжести респираторного дистресс-синдрома можно использовать разные методы. Например, заявленную композицию можно вводить через эндотрахеальную трубку недоношенным новорожденным, находящимся на искусственной вентиляции легких.

Альтернативно композицию можно вводить с помощью тонкого катетера, помещенного в трахею, поддерживая дыхание новорожденного через специально разработанные назальные устройства, такие как маски, канюли или трубки, в соответствии с методологией, известной как назальное постоянное положительное давление в дыхательных путях (nCPAP), в соответствии с процедурой, описанной в WO 2008/148469.

Последний подход возможен только при использовании экзогенного сурфактанта, такого как порактант альфа, имеющего низкую вязкость, поскольку высокая вязкость затрудняет прохождение сурфактанта через тонкий катетер.

Объем водного раствора, в котором суспендированы два активных вещества, входящих в состав сочетания, зависит от желаемой концентрации.

Предпочтительно объем композиции должен составлять не более, чем примерно 5,0 мл, предпочтительно он составляет примерно от 4,5 до 2,0 мл, более предпочтительно примерно от 3,5 до 2,5 мл.

В других вариантах осуществления, когда легочный сурфактант и будесонид вводят раздельно, индивидуальные активные вещества можно получить в виде разных препаратов. В этом случае два индивидуальных активных вещества не обязательно вводить одновременно.

В случае раздельного введения композицию из двух индивидуальных активных веществ можно упаковать одновременно в подходящий контейнер с получением набора.

Следовательно, изобретение также относится к набору для профилактики бронхолегочной дисплазии, где указанный набор содержит: a) легочный сурфактант в дозе примерно от 100 до 200 мг/кг и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель в первой стандартной лекарственной форме; b) будесонид в дозе примерно от 0,01 до 0,1 мг/кг массы тела и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель во второй стандартной лекарственной форме; и c) контейнеры для размещения указанных первой и второй лекарственных форм.

Любую форму из легкой, средней или тяжелой БЛД, потенциально влияющую на недоношенного новорожденного, можно предотвратить с помощью композиции настоящего изобретения.

У недоношенного новорожденного, нуждающегося в лекарственном средстве настоящего изобретения, может присутствовать или отсутствовать респираторный дистресс-синдром (RDS). В одном варианте осуществления введение лекарственного средства по настоящему изобретению начинают у новорожденного с RDS после лечения указанного синдрома легочным сурфактантом, или другими средствами (такими как вентиляция), или их сочетанием.

В некоторых вариантах осуществления новорожденным, подлежащим лечению лекарственным средством по настоящему изобретению, требуется респираторная поддержка, однако у них может не проявляться респираторный дистресс-синдром. У таких младенцев либо не диагностирован РДС, либо они не получают легочные сурфактанты против РДС.

Лекарственные средства по настоящему изобретению можно вводить всем недоношенным новорожденным, включая новорожденных с крайне низкой массой тела при рождении (ELBW), очень низкой массой тела при рождении (VLBW) и низкой массой тела при рождении (LBW) в гестационном возрасте от 24 до 35 недель. Предпочтительно лекарственное средство вводят новорожденным с VLBW с тяжелым РДС, которые имеют повышенный риск возникновения БЛД.

В общих чертах, поскольку лечение БЛД редко проводят в виде одного вмешательства, чаще в виде комбинированного подхода, врач должен оценить, нуждаются ли недоношенные новорожденные в сопутствующей респираторной поддержке и/или других подходящих лекарственных средствах, таких как витамин А и антибиотики.

В зависимости от доз легочного сурфактанта и будесонида, объема подлежащей введению композиции, описанной выше, и типичной массы недоношенного новорожденного, получающего введение, композиция в виде раствора или суспензии обычно содержит будесонид в концентрации примерно от 0,005 до 0,05 мг/мл, предпочтительно примерно от 0,01 до 0,05 мг/мл, и легочный сурфактант в концентрации примерно от 20 до 100 мг/мл, предпочтительно примерно от 40 до 80 мг/мл.

Другие признаки изобретения станут очевидными из нижеследующего описания примеров вариантов осуществления, которые приведены для иллюстрации изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Оценка поверхностной активности порактанта альфа in vitro в присутствии будесонида с помощью капиллярного сурфактометра

Поверхностную активность порактанта альфа (в присутствии будесонида, 2 мл, 1,0 мг) оценивают по сравнению с одним порактантом альфа с помощью капиллярного сурфактометра, коммерчески доступного от Calmia Medical, Inc., USA.

Получают два образца: один путем разведения содержимого флакона с порактантом альфа (1,5 мл, 80 мг/мл) физиологическим раствором до концентрации 1 мг/мл в фосфолипидах, а другой путем разведения содержимого флакона с порактантом альфа (1,5 мл, 80 мг/мл). мл), смешанного с содержимым флакона с будесонидом (2 мл, 1,0 мг), физиологическим раствором до такой же концентрации (1 мг/мл фосфолипидов). Затем образцы обоих растворов объемом 0,5 мл анализируют с помощью капиллярного сурфактометра.

Принцип капиллярного сурфактометра заключается в моделировании конечных дыхательных путей человека. Образец вводят в узкую часть стеклянного капилляра, внутренний диаметр которого составляет 0,25 мм, аналогично конечному дыхательному пути человека. На одном конце капилляр соединяется с сильфоном и датчиком давления. Когда сильфон медленно сжимается, давление повышается и регистрируется. Повышение давления приводит к выдавливанию образца из узкого участка капилляра. По мере прохождения воздуха давление резко понижается. Если образец содержит хорошо функционирующий легочный сурфактант, жидкость образца не возвращается в узкую часть капилляра. Постоянный воздушный поток, полученный путем непрерывного сжатия сильфона, не встречает сопротивления, и регистрируемое давление равно нулю. С другой стороны, если образец не содержит хорошо функционирующий легочный сурфактант, жидкость образца циклически возвращается.

Поведение порактанта альфа в присутствии будесонида статистически не отличается от поведения одного порактанта альфа, свидетельствуя о том, что будесонид не влияет на поверхностную активность сурфактанта.

Пример 2. Композиция в виде водной суспензии согласно настоящему изобретению.

Ингредиенты Количество в лекарственной форме Порактант альфа 160 мг Микронизированный будесонид 0,1 мг Полисорбат (твин) 20 2,0 мг Монолаурат сорбитана 0,4 мг Натрия хлорид 18 мг Вода для инъекций q. s. до 2,0 мл

Пример 3. Композиция в виде водной суспензии согласно настоящему изобретению.

Ингредиенты Количество в лекарственной форме Порактант альфа 160 мг Микронизированный будесонид 0,04 мг Полисорбат (твин) 20 2,0 мг Монолаурат сорбитана 0,4 мг

Пример 4. Композиция в виде водной суспензии согласно настоящему изобретению.

Ингредиенты Количество в лекарственной форме CHF 5633 160 мг Микронизированный будесонид 0,04 мг Полисорбат (твин) 20 2,0 мг Монолаурат сорбитана 0,4 мг

Пример 5. Эффект in vivo на кроличьей модели

В этом эксперименте используют модель недоношенного кролика с бронхолегочной дисплазией (БЛД), подвергшегося гипероксии. Данная модель подробно описана в других документах (см. Richter J, et al. (2014) Functional assessment of hyperoxia-induced lung injury after preterm birth in the rabbit. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 306: L277-283; Jimenez J, et al. (2016) Progressive vascular functional and structural damage in a bronchopulmonary dysplasia model in preterm rabbits exposed to hyperoxia. Int J Mol Sci 17:E1776; and Salaets T, et al., (2015). Transcriptome analysis of the preterm rabbit lung after seven days of hyperoxic exposure. PLoS One 10:e0136569). Коротко говоря, недоношенных кроликов получают посредством кесарева сечения на 28 день (ранняя фаза развития мешковидного легкого) беременности (срок=31 день). Сразу после родов детенышей помещают в инкубатор (32°C) и случайным образом распределяют в три группы по 5-6 животных в каждой (см. ниже). Недоношенных кроликов содержат в условиях гипероксии (95% кислорода) в течение четырех дней, кормят два раза в день молочной смесью через орогастральный зонд и дают профилактические антибиотики и витамин K. На 3-й день каждое животное получало однократную интратрахеальную инъекцию одного сурфактанта 100 мг/кг массы тела (группа 1), или сурфактанта 100 мг/кг и будесонида 0,05 мг/кг (группа 2), или сурфактанта 100 мг/кг и будесонида 0,25 мг/кг массы тела ( группа 3). Дозу 0,25 мг/кг Yeh et al, 2008, описывают как оптимальную.

Через 24 часа, на 4-й день после рождения, недоношенных кроликов подвергают глубокой анестезии, в трахею каждого животного помещают канюлю и проводят инвазивное исследование функции легких с использованием системы Flexivent (FlexiVent 5.2; SCIREQ), как описано ранее ((см. Richter J, et al. (2014) Functional assessment of hyperoxia-induced lung injury after preterm birth in the rabbit. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 306: L277-283; Jimenez J, et al. (2016) Progressive vascular functional and structural damage in a bronchopulmonary dysplasia model in preterm rabbits exposed to hyperoxia. Int J Mol Sci 17:E1776; и Salaets T. et al., (2015) Transcriptome analysis of the preterm rabbit lung after seven days of hyperoxic exposure. PLoS One 10:e0136569,). Отклонение кривой объем-давление (PVr-V) используют для измерения статической эластичности (давление упругой отдачи легкого при заданном объеме легких). На каждом детеныше осуществляют три измерения (коэффициент детерминации> 0,95). Среднее значение трех измерений нормализуют по массе тела и используют в анализе. После этого детенышей подвергают эвтаназии.

После воздействия гипероксии в течение 4 дней и через 24 часа после интратрахеального введения сурфактанта±будесонида животных подвергают глубокой анестезии. Статическую эластичность легких измеряют, как описано в методах. Результаты показаны в таблице 1 и на фиг.1. Средние значения±стандартное отклонение представлены на фиг.1 и показаны в таблице 1 (черные кружки обозначают только сурфактант 100 мг/кг; черные квадраты обозначают сурфактант 100 мг/кг плюс будесонид, 0,05 мг/кг; черные треугольники обозначают сурфактант 100 мг/кг плюс будесонид, 0,25 мг/кг). Результаты анализируют с помощью однофакторного дисперсионного анализа и критерия Тьюки для множественных сравнений (# p=0,0004; * p=0,03, при сравнении группы, получающей только сурфактант, с группами, получающими сурфактант плюс будесонид).

Таблица 1.

Сурфактант Сурфактант+будесонид 0,05 мг/кг Сурфактант+будесонид 0,25 мг/кг Статическая эластичность (мл/см H₂0)/кг 1,62±0,19 1,95±0,16^* 2,25±0,25^#

Как можно понять из таблицы 1, достигается практически такой же эффект, как и при использовании дозы будесонида, указанной в Yeh et al, 2008.

Пример 6. Эффект in vivo на овечьей модели

Целью данного исследования является проверка на овечьей модели гипотезы, заключающейся в том, что низкие дозы будесонида в порактанте альфа являются сравнительно эффективными для улучшения физиологии и показателей воспаления при меньших системных эффектах.

Экспериментальная процедура

Овец спаривают в определенное время, чтобы подтвердить срок беременности примерно 50 дней. До родоразрешения путем оперативного вмешательства манипуляции с овцами не проводят. Овцам вводят кетамин внутривенно в качестве седативного средства, после чего их подвергают спинальной анестезии. Голову и шею плода обнажают, затем плод получает в.м. 10 мг кетамина/кг рассчитанной массы плода в качестве дополнительного седативного средства и инфильтрацию лидокаином кожи над трахеей. Эндотрахеальную трубку диаметром 4,5 мм закрепляют в трахее с последующей аспирацией жидкости из легких плода через ET-трубку путем осторожного отсасывания с помощью шприца на 50 мл. Ягненка достают, подсушивают снаружи, взвешивают и помещают на искусственную вентиляцию легких с начальным периодом, в котором положение тела способствует равномерному распределению сурфактанта/будесонида в легких.

Новорожденных ягнят случайным образом распределяют в 2 группы лечения:

куросурф 200 мг/кг (2,5 мл/кг) + будесонид 0,1 мг/кг (0,5 мл/кг)

куросурф 200 мг/кг (2,5 мл/кг) + будесонид 0,04 мг/кг (0,5 мл/кг)

Для сравнения используют куросурф в дозе 200 мг/кг+будесонид в дозе 0,25 мг/кг.

Сурфактант (7,5 мл при расчетной массе 3 кг) набирают в шприц объемом 10 мл, затем добавляют будесонид или физиологический раствор до получения общего объема 9 мл. Смесь переворачивают вручную несколько раз, чтобы перемешать компоненты. Перед введением сочетание сурфактанта и лекарственного средства снова переворачивают. Непосредственно перед началом искусственной вентиляции ягнят подвергают трахейной инстилляции при таком положении грудной клетки, которое способствует распределению сурфактанта.

Каждого ягненка помещают на детскую грелку. Вентиляцию проводят с помощью детского вентилятора Fabian, настроенного на подачу 40% нагретого и увлажненного кислорода с начальным пиковым давлением на вдохе 30 см H₂O, положительным давлением в конце выдоха 5 см H₂O, при частоте 50 вдохов/мин и времени вдоха 0,5 с. Дыхательный объем контролируют, регулируя пиковое давление дыхания, чтобы оно не превышало 8 мл/кг, если только PCO₂ не превышает 50 ммHg. Ягнята получают кетамин, полностью находятся под действием седативных средств, у них отсутствует спонтанное дыхание. Измерения газов крови проводят с интервалами 15 мин, 30 минут и 1 час в течение 6 ч и по мере необходимости. Сразу после рождения ягнятам делают переливание плацентарной крови 10 мл/кг для поддержания артериального давления и проведения забора крови. У ягнят постоянно регистрируют температуру, частоту сердечных сокращений и артериальное давление.

Через 6 часов ягнят подвергают эвтаназии путем внутривенного введения пентобарбитала для забора тканей.

Для анализа сложных эфиров будесонида используют высокочувствительный анализ будесонида методом ЖХ-МС и процедуру гидролиза. Ткани из других органов контрольных ягнят используют для анализа исходной мРНК. У групп животных 2018 г. берут кровь для определения уровней будесонида в плазме в следующие моменты времени: 15 мин, 30 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч и 6 ч. У тех животных, у которых берут образцы ткани в момент времени 6 ч, измеряют будесонид в альвеолярных смывах левого легкого и остаточный будесонид в левом легком. Если указано, будесонид также измеряют в других органах. Авторы изобретения ранее измеряли уровни будесонида только в плазме, легких и BALF (жидкости бронхоальвеолярного лаважа).

Образцы плазмы и стандарты бетаметазона экстрагируют из плазмы овец следующим образом: 20 мкл образца или стандарта добавляют к 50 мкл внутреннего стандарта (будесонид-d8, 50 нг/мл) в стеклянной пробирке объемом 10 мл. Пробирки герметично закрывают, встряхивают в течение 10 секунд и затем инкубируют при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем к каждому образцу добавляют 1 мл этилацетата. Образцы встряхивают в течение 2 минут, затем центрифугируют (5 минут, 3000 об/мин, 24 градуса Цельсия). 700 мкл супернатанта переносят в стеклянный флакон для автосамплера объемом 1,5 мл и сушат в вакууме (30 минут, 3000 об/мин, 37 градусов Цельсия). Образцы повторно суспендируют в 70 мкл раствора, содержащего метанол и воду (1:1), и затем инкубируют их в течение 10 минут при 50°C при осторожном встряхивании.

Образцы легких, подвергнутых воздействию будесонида, экстрагируют следующим образом: 50 мкл внутреннего стандарта (будесонид-d8, 50 нг/мл) добавляют к 100 мг образца, помещенного в пробирку для мацерации ткани объемом 2 мл. Затем к каждому образцу добавляли 1 мл этилацетата. Образцы подвергают мацерации, используя два цикла 6500 об/мин×2 мин. Затем образцы инкубируют в течение 1 часа при 50 градусах Цельсия, центрифугируют (5 мин, 3000 об/мин, 24 градуса Цельсия) и фильтруют. 700 мкл осветленного супернатанта переносят в стеклянный флакон для автосамплера объемом 1,5 мл и сушат в вакууме (30 минут, 3000 об/мин, 37 градусов Цельсия). Образцы повторно суспендируют в 70 мкл раствора, содержащего метанол и воду (1:1), и затем инкубируют их (10 мин при 50 градусах Цельсия) при осторожном встряхивании. Стандарты для анализа легких экстрагируют с помощью идентичного метода, за исключением того, что 50 мкл внутреннего стандарта и 20 мкл стандарта плазмы добавляют к 100 мг ткани фетального легкого, полученного от животного, не получавшего будесонид. Гидролиз легочной ткани проводят с использованием холестеринэстеразы бычьей поджелудочной железы, растворенной в буфере, содержащем 0,1 М K₂HPO₄, pH 7,5, в концентрации 0,0125 мг/мл, в присутствии 10 мМ таурохолата, за 15 минут до экстракции.

Анализ проводят с использованием насосов Agilent Technologies 1290 Infinity и трехквадрупольной системы ЖХ/МС серии 6400 с ионизацией электрораспылением в режиме положительных ионов. В масс-спектрометр вводят 20 мкл образца, для хроматографического разделения аналитов используют колонку Agilent Poroshell 2,1×50 мм C18, 2,6 мкм и колонку Phenomenex Biphenyl 3×150 мм, 2,6 мкм. Подвижная фаза для градиентного элюирования двумя растворителями содержит: (A1) вода+0,1% муравьиной кислоты, затем (B1) метанол+0,1% муравьиной кислоты, при скорости потока 0,5 мл/мин, с градиентом от 50% до 98% B в течение 10 минут, с последующим уравновешиванием в течение 2 минут перед последующим введением. МС настраивают на обнаружение ионов-предшественников и -продуктов будесонида (время обнаружения 3,9 мин) с массой 431,5 и 323,0 соответственно, и ионов будесонида-d8 (время обнаружения 3,83 мин) с массой 439,5 и 421,5 соответственно. Используя соотношение сигнал-шум 10:1 в качестве порогового значения, можно надежно измерять концентрацию будесонида до таких низких уровней, как 0,01 нг/мл.

Кривую давление-объем для легких получают, чтобы определить статическую эластичность легких. Левое легкое используют для промывки альвеол и для измерения остаточного будесонида.

Правую верхнюю долю фиксируют формалином в наполненном воздухом состоянии для гистопатологии, а из правой средней доли берут образцы для анализа мРНК. Ткани мозга, кишечника и печени собирают выборочно для анализа экспрессии мРНК с помощью mRNA-Seq, чтобы проверить, изменяет ли будесонид экспрессию белков клеточного деления, клеточной гибели, воспаления и ранних маркеров повреждения. Данный подход является более чувствительным и точным, чем измерение уровней будесонида в тканях. Группы животных предназначены для анализа воспаления легких и оценки воздействия будесонида на другие органы.

В данном исследовании оценивают влияние более низких доз будесонида на вызванные искусственной вентиляцией повреждения легких и системные повреждения. На основе предыдущих результатов временную точку 6 ч выбирают как время максимального воздействия будесонида на маркеры повреждения и физиологические процессы. Используют как повреждающую, так и не повреждающую вентиляцию животных. Группы животных, сформированные ранее в 2017 г., используют для сравнения с некоторыми перекрывающимися группами. Физиологические переменные и маркеры повреждения сравнивают между группами и предыдущими годами. Результаты приведены в виде средних значений±SEM и показаны как кратное увеличение по сравнению с контрольными значениями, где контрольные значения принимаются за 1. Индекс эффективности вентиляции (VEI) [3800/(PIP×скорость×PaCO₂)] и индекс оксигенации (OI) [FiO₂×среднее давление в дыхательных путях)/PaO₂] были рассчитаны (см. Notter, R.H., et al., “Lung surfactant replacement in premature lambs with extracted lipids from bovine lung lavage: effects of dose, dispersion technique, and gestational age,” Pediatr Res, 1985. 19(6): p. 569-77 и Polglase, G.R., et al., “Lung and systemic inflammation in preterm lambs on continuous positive airway pressure or conventional ventilation,” Pediatr Res, 2009. 65(1): p. 67-71). Статистический анализ проводят с помощью Prism 6 (GraphPad), используя t-тест Стьюдента, непараметрический критерий Манна-Уитни или тесты ANOVA, в зависимости от ситуации. Результаты считают значимыми, если p <0,05.

Кроме того, матричную РНК (мРНК) экстрагируют из периферической легочной ткани правой средней доли и из печени с помощью TRIzol (Invitrogen). кДНК получают из 1 мкг мРНК с использованием набора Verso для синтеза кДНК (Thermoscientific). Изготовленные по заказу праймеры Taqman (Life Technologies) для овечьих последовательностей эпителиального натриевого канала (ENaC), эпирегулина (EREG), интерлейкина 1β (IL-1β), IL-6, IL-8, хемоаттрактантного белка моноцитов-1 (MCP-1), сывороточного амилоида A3 (SAA3), поверхностно-активного белка B (SFTPB) и TNF-a. Количественную ОТ-ПЦР проводят с использованием смеси iTaq Universal (Bio-Rad) в реакционном объеме 15 мкл с помощью прибора и программного обеспечения CFX Connect (Bio-Rad). Праймеры 18S (Life Technologies) используют в качестве внутреннего контроля нагрузки.

Результаты

Среднее давление в дыхательных путях (MAP) и объем при 40 см H₂O (V40/кг) приведены на фиг.2. Экстраполяцию V40/кг из кривой давление-объем осуществляют с помощью известных методов.

Центральное место в патогенезе бронхолегочной дисплазии (БЛД) занимает индукция масштабного легочного воспалительного ответа вследствие постнатальной механической вентиляции легких и кислородного отравления. Степень провоспалительной реакции, нарушение дальнейшего альвеолярного роста и васкулогенез действительно могут повлиять на легочную функцию и вентиляцию в первые 24 часа.

В данной связи объем при 40 см H₂O из кривой давление-объем в момент времени 6 часов, как ценный интегрированный маркер повреждения легких (белок, высвобожденный в легкое, или воспаление вызывают отек и дезактивируют сурфактант, запуская порочный круг, в котором стимулируются ателектаз, волютравма и воздействие высокого уровня кислорода), представляет собой экспериментальный показатель острого риска развития БЛД.

Результаты показывают, что V40/кг было значительно выше у животных, получавших будесонид в дозе 0,1 мг/кг и 0,04 мг/кг, чем у животных, получавших только сурфактант.

Кроме того, у животных, получавших 0,25 мг/кг или 0,1 мг/кг, наблюдалось снижение требуемого значения среднего давления в дыхательных путях. Однако, несмотря на положительную тенденцию, указанная величина не достигает значимого изменения в группе, получавшей 0,04 мг/кг.

Результаты оценки мРНК легких на предмет повреждения приведены на фиг.3.

Повреждающая искусственная вентиляция вызывает большее увеличение уровня мРНК провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-6 и MCP-1, чем неповреждающая вентиляция . Будесонид в дозе 0,25 мг/кг снижает уровни мРНК IL-1β, IL-6 и MCP-1. Будесонид в дозе 0,1 мг/кг снижает уровень мРНК IL-6 и демонстрирует сильную тенденцию к снижению мРНК MCP-1 (p=0,06). Хотя существуют большие различия в ответах, небольшая тенденция к снижению также наблюдается для дозы 0,04 мг/кг.

По сравнению с одним сурфактантом все дозы будесонида дополнительно увеличивают уровень мРНК ENaC, который увеличивается при искусственной вентиляции легких. Для всех доз отсутствуют изменения в SFTPB или SAA3 по сравнению с животными, получавшими только сурфактант.

Результаты ответов мРНК печени на искусственную вентиляцию легких приведены на фиг.4.

Искусственная вентиляция увеличивает мРНК SAA3, MCP-1 и IF-6 в печени. Значительные вариации в увеличении уровней мРНК в печени обнаружены при не повреждающей искусственной вентиляции и повреждающей искусственной вентиляции. Будесонид в дозе 0,1 мг/кг снижает мРНК SAA3 в печени. Будесонид в дозе 0,25 мг/кг и 0,1 мг/кг уменьшает мРНК MCP-1 в печени при не повреждающей вентиляции, но только в дозе 0,25 мг/кг уменьшает MCP-1 при повреждающей вентиляции (из-за большого разброса у животных, подвергавшихся повреждающей вентиляции).

Если указывается числовой предел или диапазон, конечные точки, а также все значения и поддиапазоны, попадающие в указанный диапазон, считаются конкретно включенными и раскрытыми.

Термины, используемые в единственном числе следует интерпретировать как означающие "один или несколько".

Все процитированные документы предшествующего уровня техники полностью включены в настоящий документ посредством ссылки.

Группа изобретений относится к области заболеваний недоношенных, а именно к применению комбинации легочного сурфактанта порактанта альфа. Применение комбинации легочного сурфактанта порактанта альфа, доставляемого в дозе 200 мг/кг массы тела, с будесонидом, доставляемым в дозе 0,1 мг/кг массы тела, для профилактики бронхолегочной дисплазии (БЛД) у недоношенных новорожденных. Использование группы изобретений обеспечивает снижение дозы будесонида в порактанте при сохранении эффективности для улучшения физиологии и показателей воспаления при меньших системных эффектах, повышения безопасности при сохранении эффективности в качестве лекарственного средства для профилактики БЛД у недоношенных новорожденных, а также повышение объема при 40 см H₂О и снижение среднего давления в дыхательных путях. 8 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 6 пр.

1. Применение комбинации легочного сурфактанта порактанта альфа, доставляемого в дозе 200 мг/кг массы тела, с будесонидом, доставляемым в дозе 0,1 мг/кг массы тела, для профилактики бронхолегочной дисплазии (БЛД) у недоношенных новорожденных.

2. Применение по п. 1, где указанный легочный сурфактант и будесонид вводят с первого по четвертый день жизни недоношенного новорожденного.

3. Применение по п. 1 или 2, где указанный недоношенный новорожденный подвергается процедуре неинвазивной вентиляции.

4. Применение по п. 3, где указанная процедура неинвазивной вентиляции представляет собой назальный CPAP.

5. Применение по любому из пп. 1-4, где легочный сурфактант и будесонид вводят одновременно.

6. Применение по любому из пп. 1-4, где легочный сурфактант и будесонид вводят последовательно.

7. Применение по любому из пп. 1-4, где легочный сурфактант и будесонид вводят отдельно.

8. Применение по любому из предшествующих пунктов, где легочный сурфактант и будесонид вводят путем ингаляции или интратрахеально.

9. Применение по п. 8, где легочный сурфактант и будесонид вводят в виде водной суспензии, содержащей фармацевтически приемлемый носитель.