ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ, И ЕЁ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ COVID-19 Российский патент 2024 года по МПК A61K39/39 A61K39/215 A61K31/7036 A61K45/06 A61K45/08 A61K47/02 A61P31/14 

[0001] Настоящее изобретение испрашивает приоритет заявки на патент Китая «Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотиды, и её применение для предотвращения или лечения COVID-19» (заявка № 202010475388.6), поданной 29 мая 2020 г.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0002] Настоящее изобретение относится к области медицины и, в частности, к предотвращению или лечению коронавирусной инфекции. Более конкретно, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, которая содержит полирибоинозиновую-полирибоцитидиловую кислоту (PIC), антибиотик (или полиаминосоединение), положительный ион и необязательный антиген, полученный из вируса (например, но без ограничений: вирусные частицы, белки, нуклеиновые кислоты, пептиды), и применению этой композиции для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] Новая коронавирусная инфекция в основном вызывается новым коронавирусом (SARS-CoV-2, также обозначаемым как 2019-nCOV). Путь заражения преимущественно воздушно-капельный, возможен контактный путь передачи. Люди, как правило, восприимчивы. Пожилые люди и люди с сопутствующими заболеваниями после инфицирования болеют в более тяжёлой форме, дети и младенцы также подвержены инфицированию.

[0004] Согласно текущим эпидемиологическим исследованиям, COVID-19 имеет латентный период от 1 до 14 дней, в основном от 3 до 7 дней, и в основном проявляется лихорадкой, сухим кашлем и гиподинамией. У меньшей части пациентов заболевание сопровождается такими симптомами, как заложенность носа, насморк, боль в горле, миалгия и диарея. У тяжелых пациентов через неделю после начала заболевания часто появляются симптомы одышки и/или гипоксемии, а в тяжелых случаях у пациентов может быстро развиваться острый респираторный дистресс-синдром, септический шок, некорригируемый метаболический ацидоз, кровотечения и нарушения свертывания крови, полиорганная недостаточность и т.д. Примечательно, что у тяжелых и критически больных пациентов может быть лихорадка от умеренной до слабой или даже без явной лихорадки в течение болезни. У болеющих в легкой форме заболевание проявляется лишь незначительной лихорадкой, легкой гиподинамией и т.п., без проявления пневмонии. Судя по ситуации с текущими случаями, у большинства пациентов прогноз благоприятный, а некоторые пациенты находятся в критическом состоянии. У пожилых людей и лиц с хроническими сопутствующими заболеваниями прогноз неблагоприятный. Детские случаи имеют относительно легкие симптомы. Источником инфекции, наблюдаемым до сих пор, в основном являются пациенты, инфицированные новым коронавирусом. Источником инфекции также могут стать бессимптомные носители. Вирус обладает сильной трансмиссивной способностью, а эффективного лекарства не существует, поэтому он чрезвычайно опасен.

[0005] Для лечения COVID-19 в настоящее время не создано эффективного способа противовирусного лечения. Большинство лекарств-кандидатов ограничено только экспериментами in vitro, и их терапевтические эффекты не проверены на животных или человеческом организме. Соответственно, в данной области техники все ещё существует потребность в создании эффективной композиции для противовирусного лечения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] Иммунная композиция

[0007] Ввиду этого настоящее изобретение относится к иммунной композиции, которая содержит полирибоинозиновую-полирибоцитидиловую кислоту (полиI:C, PIC), антибиотик (или полиаминосоединение), положительный ион и необязательный антиген, полученный из вируса; или состоит из PIC, антибиотика (или полиаминосоединения), положительного иона и необязательного вирусного антигена.

[0008] В некоторых вариантах осуществления изобретения вирус представляет собой коронавирус, такой как SARS-CoV-2 (включая его варианты или подвиды). В некоторых вариантах осуществления изобретения вирус является инактивированным и неочищенным или инактивированным и очищенным.

[0009] В некоторых вариантах осуществления изобретения вакцины или иммунные композиции, подходящие для настоящего изобретения, включают в себя без ограничений вакцины инактивированного типа, субъединичного типа, генетически рекомбинантного типа, полипептидного типа и нуклеотидного типа.

[0010] В некоторых вариантах осуществления изобретения PIC, подходящая для настоящего изобретения, может представлять собой коммерчески доступную PIC или адъювант на основе полиинозиновой кислоты-полицитидиловой кислоты, известный в данной области техники (например, в заявках 2006800007767 и 2006800010596), которые полностью включены в настоящее изобретение путём ссылки.

[0011] В некоторых вариантах осуществления изобретения PIC в иммунной композиции является гетерогенной по молекулярной массе и имеет молекулярную массу, по меньшей мере, 50000 дальтон. Например, числовое значение 66000 дальтон эквивалентно молекулярному размеру 6,4S единиц коэффициента седиментации (Сведберга). В некоторых вариантах осуществления изобретения PIC имеет молекулярную массу от 66000 дальтон до 1200000 дальтон (эквивалентно единицам коэффициента седиментации от 6,4 до 24,0). В некоторых других вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PIC составляет, по меньшей мере, 150000 дальтон. В некоторых других вариантах осуществления изобретения молекулярная масса PIC составляет от 100000 до 200000 дальтон, или от 300000 до 4000000 дальтон, или от 500000 до 1000000 дальтон, или от 1000000 до 1500000 дальтон, или от 1500000 до 2000000 дальтон, или от 2000000 до 2500000 дальтон, или от 2500000 до 3000000 дальтон, или от 3000000 до 3500000 дальтон, или от 3500000 до 4000000 дальтон, или от 4000000 до 4500000 дальтон, или от 4500000 до 5000000 дальтон.

[0012] Используемый в настоящем изобретении термин «гетерогенный» означает, что молекулы PIC, содержащиеся в иммунной композиции или вакцине, не являются гомогенными по физическим свойствам молекулярной массы, размера или того и другого.

[0013] В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация PIC в иммунной композиции/вакцине составляет от 250 мкг на разовую дозу до 5000 мкг на разовую дозу; например, концентрация PIC в композиции выбрана из группы, состоящей из 250 мкг на разовую дозу, 500 мкг на разовую дозу, 1000 мкг на разовую дозу, 1500 мкг на разовую дозу, 2000 мкг на разовую дозу, 3000 мкг на разовую дозу, 4000 мкг на разовую дозу, 5000 мкг на разовую дозу и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных.

[0014] В конкретном варианте осуществления изобретения концентрация PIC в иммунной композиции/вакцине составляет от 500 мкг на разовую дозу до 4000 мкг на разовую дозу, от 1000 мкг на разовую дозу до 3000 мкг на разовую дозу или 1000 мкг на разовую дозу до 2500 мкг на разовую дозу.

[0015] Когда иммунную композицию/вакцину настоящего изобретения вводят людям, концентрация PIC в иммунной композиции/вакцине выбрана из группы, состоящей из 500 мкг на разовую дозу, 1000 мкг на разовую дозу, 1500 мкг на разовую дозу, 2000 мкг на разовую дозу и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных. Когда иммунную композицию/вакцину настоящего изобретения вводят подросткам (например, детям), концентрация PIC в иммунной композиции/вакцине выбрана из группы, состоящей из 250 мкг на разовую дозу, 500 мкг на разовую дозу, 1000 мкг на разовую дозу, 1250 мкг на разовую дозу и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных.

[0016] В конкретном варианте осуществления изобретения содержащийся антибиотик выбран из группы, состоящей из тобрамицина, антрациклина, бутирозинсульфата, гентамицина, гигромицина, амикацина, канамицина (или дидезоксиканамицина), небрамицина, метрзамида, неомицина, пуромицина, стрептомицина, стрептозотоцина и их комбинации. Полиаминосоединение выбрано из группы, состоящей из соли спермидиновой кислоты, спермидина, N-(3-аминопропила), N-(3-аминопропил)-1,4-бутандиамина, спермина, OS-диметиламидотиофосфата, полилизина, аминогликозида, и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация антибиотика в композиции составляет от 10 единиц/мл до 100000 единиц/мл, предпочтительно от 100 единиц/мл до 10000 единиц/мл, более предпочтительно от 500 единиц/мл до 5000 единиц/мл.

[0017] В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация антибиотика или полиаминосоединения в иммунной композиции может быть указана как от 400 ЕД на разовую дозу до 1200 ЕД на разовую дозу, например, но без ограничений, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200 ЕД на разовую дозу.

[0018] В некоторых других вариантах осуществления изобретения концентрация антибиотика или полиаминосоединения в иммунной композиции может быть указана как от 400 ЕД/мл до 1200 ЕД/мл, например, но без ограничений, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200 ЕД/мл.

[0019] В некоторых вариантах осуществления изобретения содержащийся положительный ион представляет собой двухвалентный положительный ион и выбран из группы, состоящей из кальция, кадмия, лития, магния, церия, цезия, хрома, кобальта, дейтерия, галлия, йода, железа, цинка и их комбинации. В конкретном варианте осуществления изобретения положительный ион представляет собой ион кальция. Положительный ион может быть в форме любой подходящей соли или органического комплекса, включая, но без ограничений, хлорид, фторид, гидроксид, фосфат или сульфат. Например, когда положительный ион представляет собой кальций, ион кальция может быть в форме карбоната кальция, хлорида кальция, фторида кальция, гидроксида кальция, фосфата кальция или сульфата кальция. В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация положительного иона в композиции составляет от 10 мкмоль до 10 ммоль/мл, например, от 50 мкмоль до 5 ммоль/мл; или от 100 мкмоль до 1 ммоль/мл.

[0020] В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация положительного иона в иммунной композиции составляет от 0,01 мг на разовую дозу до 0,1 мг на разовую дозу, например, но без ограничений, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09 и 0,1 мг на разовую дозу.

[0021] В некоторых других вариантах осуществления изобретения концентрация положительного иона в иммунной композиции составляет от 0,01 мг/мл до 0,1 мг/мл, например, но без ограничений, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09 и 0,1 мг/мл.

[0022] В некоторых вариантах осуществления изобретения антиген, полученный из коронавируса, представляет собой вирус (например, аттенуированный, инактивированный вирус, искусственно собранный вирусный вектор или вирусную частицу).

[0023] В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения антиген, полученный из коронавируса, представляет собой инактивированный вирус SARS-CoV-2, аттенуированный вирус SARS-CoV-2 или вирус SARS-CoV-2, который не может размножаться у субъекта. Отношение вируса к PIC выбрано из группы, состоящей из 1 активная единица на 50 мкг, 1 активная единица на 60 мкг, 1 активная единица на 70 мкг, 1 активная единица на 80 мкг, 1 активная единица на 90 мкг, 1 активная единица на 100 мкг, 1 активная единица на 125 мкг, 1 активная единица на 200 мкг, 1 активная единица на 250 мкг, 1 активная единица на 300 мкг, 1 активная единица на 350 мкг, 1 активная единица на 400 мкг, 1 активная единица на 450 мкг, 1 активная единица на 500 мкг, 1 активная единица на 550 мкг, 1 активная единица на 600 мкг, 1 активная единица на 700 мкг, 1 активная единица на 800 мкг, 1 активная единица на 1000 мкг, 1 активная единица на 1500 мкг, 1 активная единица на 2000 мкг, 1 активная единица на 2500 мкг, 1 активная единица на 3000 мкг, 1 активная единица на 4000 мкг, 1 активная единица на 5000 мкг, 1 активная единица на 6000 мкг, 1 активная единица на 7000 мкг, 1 активная единица на 8000 мкг, 1 активная единица на 9000 мкг, 1 активная единица на 10000 мкг и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных.

[0024] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой вирус (например, аттенуированный, инактивированный вирус, искусственно собранный вирусный вектор или вирусную частицу), концентрация антигена в композиции составляет от 0,2 активных единиц на разовую дозу до 100 активных единиц на разовую дозу. Более конкретно, концентрация вируса или полученного из вируса антигена в композиции выбрана из группы, состоящей из 0,2 активных единиц на разовую дозу, 0,5 активных единиц на разовую дозу, 1,0 активных единиц на разовую дозу, 1,5 активных единиц на разовую дозу, 2,0 активных единиц на разовую дозу, 2,5 активных единиц на разовую дозу, 3,0 активных единиц на разовую дозу, 3,5 активных единиц на разовую дозу, 4,0 активных единиц на разовую дозу, 5,0 активных единиц на разовую дозу, 6,0 активных единиц на разовую дозу, 7,0 активных единиц на разовую дозу, 8,0 активных единиц на разовую дозу, 9,0 активных единиц на разовую дозу, 10,0 активных единиц на разовую дозу, 15,0 активных единиц на разовую дозу, 20,0 активных единиц на разовую дозу, 30,0 активных единиц на разовую дозу, 40,0 активных единиц на разовую дозу, 50,0 активных единиц на разовую дозу, 60,0 активных единиц на разовую дозу, 70,0 активных единиц на разовую дозу, 80,0 активных единиц на разовую дозу, 90,0 активных единиц на разовую дозу, 100,0 активных единиц на разовую дозу и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных. В конкретном варианте осуществления изобретения концентрация вируса или антигена, полученного из вируса, в композиции составляет от 0,5 активных единиц на разовую дозу до 3,0 активных единиц на разовую дозу; и предпочтительно от 1,0 активной единицы на разовую дозу до 2,5 активных единиц на разовую дозу.

[0025] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой вирус (например, аттенуированный, инактивированный вирус, искусственно собранный вирусный вектор или вирусную частицу), концентрация антигена в композиции составляет от 0,05 активных единиц/мл до 40,0 активных единиц/мл, предпочтительно 0,05 активных единиц/мл, 0,1 активных единиц/мл, 0,15 активных единиц/мл, 0,2 активных единиц/мл, 0,5 активных единиц/мл, 1,0 активных единиц/мл, 2,0 активных единиц/мл, 3,0 активных единиц/мл, 4,0 активных единиц/мл, 5,0 активных единиц/мл, 10 активных единиц/мл, 15 активных единиц/мл, 20 активных единиц/мл, 25 активных единиц/мл, 30 активных единиц/мл, 35 активных единиц/мл и 40 активных единиц/мл.

[0026] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, выбран из группы, состоящей из белка S SARS-CoV-2 или его иммуногенного фрагмента, белка М или его иммуногенного фрагмента, белка N или его иммуногенного фрагмента, белка Е или его иммуногенного фрагмента, а также белка, полипептида, ДНК и РНК, сконструированных в соответствии со структурой SARS-CoV-2, отношение антигена к PIC выбрано из группы, состоящей из 1 мкг на 10 мкг, 1 мкг на 20 мкг, 1 мкг на 30 мкг, 1 мкг на 40 мкг, 1 мкг на 50 мкг, 1 мкг на 60 мкг, 1 мкг на 70 мкг, 1 мкг на 80 мкг, 1 мкг на 90 мкг, 1 мкг на 100 мкг, 1 мкг на 125 мкг, 1 мкг на 200 мкг, 1 мкг на 250 мкг, 1 мкг на 300 мкг, 1 мкг на 350 мкг, 1 мкг на 400 мкг, 1 мкг на 450 мкг, 1 мкг на 500 мкг, 1 мкг на 550 мкг, 1 мкг на 600 мкг, 1 мкг на 700 мкг, 1 мкг на 800 мкг, 1 мкг на 1000 мкг, 1 мкг на 1500 мкг, 1 мкг на 2000 мкг, 1 мкг на 2500 мкг, 1 мкг на 3000 мкг, 1 мкг на 4000 мкг, 1 мкг на 5000 мкг, 1 мкг на 6000 мкг, 1 мкг на 7000 мкг, 1 мкг на 8000 мкг, 1 мкг на 9000 мкг, 1 мкг на 10000 мкг и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных.

[0027] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, выбран из группы, состоящей из белка S SARS-CoV-2 или его иммуногенного фрагмента, белка М или его иммуногенного фрагмента, белка N или его иммуногенного фрагмента, белка Е или его иммуногенного фрагмента, а также белка, полипептида, ДНК и РНК, сконструированных в соответствии со структурой SARS-CoV-2, его концентрация в иммунной композиции составляет от 0,1 мкг на разовую дозу до 1000,0 мкг на разовую дозу, например, но без ограничений, 0,5 мкг на разовую дозу, 1,0 мкг на разовую дозу, 2,0 мкг на разовую дозу, 3,0 мкг на разовую дозу, 4,0 мкг на разовую дозу, 5,0 мкг на разовую дозу, 6,0 мкг на разовую дозу, 7,0 мкг на разовую дозу, 8,0 мкг на разовую дозу, 9,0 мкг на разовую дозу, 10,0 мкг на разовую дозу, 15,0 мкг на разовую дозу, 20,0 мкг на разовую дозу, 30,0 мкг на разовую дозу, 40,0 мкг на разовую дозу, 50,0 мкг на разовую дозу, 60,0 мкг на разовую дозу, 70,0 мкг на разовую дозу, 80,0 мкг на разовую дозу, 90,0 мкг на разовую дозу, 100,0 мкг на разовую дозу, 200,0 мкг на разовую дозу, 300,0 мкг на разовую дозу, 400,0 мкг на разовую дозу, 500,0 мкг на разовую дозу, 600,0 мкг на разовую дозу, 700,0 мкг на разовую дозу, 800,0 мкг на разовую дозу, 900,0 мкг на разовую дозу, 1000,0 мкг на разовую дозу и диапазон между любыми двумя значениями из вышеперечисленных или, например, от 0,1 мкг/мл до 1000,0 мкг/мл; предпочтительно 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 3 мкг/мл, 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 20 мкг/мл, 30 мкг/мл, 40 мкг/мл, 50 мкг/мл, 100 мкг/мл, 200 мкг/мл, 500 мкг/мл и 1000 мкг/мл.

[0028] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой шиповидный белок SARS-CoV-2, концентрация антигена в иммунной композиции составляет от 2,5 мкг на разовую дозу до 20 мкг на разовую дозу.

[0029] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой мультимер шиповидного белка SARS-CoV-2 (например, гомотример), концентрация антигена в иммунной композиции составляет от 2,5 мкг на разовую дозу до 20 мкг на разовую дозу.

[0030] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой иммуногенный фрагмент шиповидного белка SARS-CoV-2, концентрация антигена в иммунной композиции составляет от 2,5 мкг на разовую дозу до 20 мкг на разовую дозу.

[0031] В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой область RBD шиповидного белка SARS-CoV-2, концентрация антигена в иммунной композиции составляет от 2,5 мкг на разовую дозу до 20 мкг на разовую дозу.

[0032] В некоторых вариантах осуществления изобретения разовая доза, описанная в настоящем раскрытии, выражена в форме объёма и выбрана из группы, состоящей из 0,1 мл, 0,15 мл, 0,2 мл, 0,5 мл, 1,0 мл, 1,5 мл, 2,0 мл, 2,5 мл, 3,0 мл, 4,0 мл, 5,0 мл, 10,0 мл, 20,0 мл, 30,0 мл, 40,0 мл, 50,0 мл, 60,0 мл, 70,0 мл, 80,0 мл, 90,0 мл, 100,0 мл, 150 мл, 200 мл, 250,00 мл и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных. Специалисту в данной области техники понятно, что слишком большая или слишком маленькая разовая доза приводит к неудобствам для клинической работы. Следовательно, когда иммунную композицию/вакцину настоящего изобретения вводят инъекцией и вводят человеку, разовая доза предпочтительно находится в диапазоне от 0,5 мл до 1,0 мл. Когда иммунную композицию/вакцину настоящего изобретения интраназально вводят субъекту-человеку, разовая доза предпочтительно находится в диапазоне от 0,15 мл до 0,2 мл. Когда иммунную композицию/вакцину настоящего изобретения внутривенно вводят субъекту-человеку, разовая доза предпочтительно находится в диапазоне от 30,0 мл до 1000 мл. Здесь следует понимать, что разовая доза, хотя и выраженная в объёме, не означает, что иммунная композиция/вакцина настоящего изобретения может быть только в жидкой форме. Когда иммунную композицию/вакцину настоящего изобретения готовят в виде твердого вещества (сухой порошок или лиофилизированный порошок), термин «объём разовой дозы» относится к объёму после восстановления сухого порошка или лиофилизированного порошка.

[0033] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунная композиция или вакцина настоящего изобретения может содержать желатин, сахарозу, белый гранулированный сахар, лактозу, мальтозу, трегалозу, глюкозу, низкомолекулярный декстран, сорбит, полисорбат 20, полисорбат 80, гидрохлорид аргинина, маннит, полиэтиленгликоль, человеческий сывороточный альбумин, рекомбинантный альбумин, каприлат натрия, мочевину, гидроксид алюминия, феноловый красный, фосфат алюминия, сквален, сапонин, олигонуклеотид, хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия, тиосульфат натрия, дигидрофосфат калия, аскорбиновую кислоту, хлороформ, фенол и тимеросал.

[0034] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунная композиция или вакцина настоящего изобретения может дополнительно содержать физиологически приемлемый буферный раствор, выбранный из группы, состоящей из ацетатного, трис-, бикарбонатного, карбонатного и фосфатного буферных растворов. Значения pH буферного раствора, подходящие для композиции настоящего изобретения, выбрано из группы, состоящей из: 6,50, 6,60, 6,70, 6,80, 6,90, 7,00, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,30, 7,35, 7,40, 7,45, 7,50, 7,55, 7,60, 7,65, 7,70, 7,75, 7,80, 7,85, 7,90, 7,95, 8,00 и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных. В конкретном варианте осуществления изобретения буферный раствор представляет собой ФСБ, а значение pH находится в диапазоне от 7,0 до 8,0.

[0035] В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация буферного раствора в композиции составляет от 5 мМ до 50 мМ, в частности, от 5 мМ до 20 мМ. Примеры, которые могут быть упомянуты: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50 мМ.

[0036] После получения буферного раствора в композиции или вакцине настоящего изобретения не исключено, что его значение pH изменится при добавлении других ингредиентов. Ввиду буферной емкости буферного раствора, в некоторых вариантах осуществления изобретения значение рН иммунной композиции или вакцины настоящего изобретения поддерживают в подходящем диапазоне, например: 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35, 7,4, 7,45, 7,5, 7,55, 7,6, 7,65, 7,7, 7,75, 7,8, 7,85, 7,9, 7,95, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0 и диапазон между любыми двумя значениями из вышеперечисленных. В конкретном варианте осуществления изобретения значение рН композиции находится в диапазоне от 7,0 до 8,0.

[0037] Иммунная композиция или вакцина настоящего изобретения может быть получена в виде сухого порошка, жидкого раствора (например, раствора для инъекций, водного или физиологического раствора или суспензии, мази, капель, эмульсии, геля, сиропа или суспензии, аэрозоля, спрея, назальных капель), таблетки, таблетки с покрытием, микрокапсулы, суппозитория, пилюли, гранулы, пастилки с сахарным покрытием и капсулы. Способ получения в целом описан в четвертом издании Vaccine Stanley A. Plotkin et al., W.B.Saunders Company 2003. Предпочтительно иммунную композицию или вакцину настоящего изобретения получают в виде раствора для инъекций.

[0038] В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения иммунную композицию получают в форме сухого порошка или лиофилизированного порошка, соответствующего вышеуказанной иммунной композиции. Специалисту в данной области техники понятно, что, когда иммунная композиция находится в форме сухого порошка или лиофилизированного порошка, она отличается от иммунной композиции в жидкой форме только содержанием воды. Например, когда иммунная композиция в виде сухого порошка или лиофилизированного порошка содержит 2 мг/мл PIC, специалисту в данной области техники понятно, что эта концентрация относится к концентрации PIC после преобразования иммунной композиции в жидкую форму.

[0039] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к иммунной композиции, которая содержит:

[0040] антиген, полученный из коронавируса,

[0041] от 0,5 мг/мл до 2 мг/мл PIC,

[0042] от 400 единиц/мл до 1200 единиц/мл канамицина,

[0043] от 0,01 мг/мл до 0,1 мг/мл хлорида кальция,

[0044] от 100 мМ до 200 мМ хлорида натрия и

[0045] от 5 мМ до 20 мМ фосфатного буферного раствора.

[0046] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к иммунной композиции, которая содержит:

[0047] антиген, полученный из коронавируса,

[0048] от 0,5 мг/мл до 2 мг/мл PIC,

[0049] от 400 ед/мл до 1200 ед/мл канамицина,

[0050] от 0,01 мг/мл до 0,1 мг/мл хлорида кальция,

[0051] от 100 мМ до 200 мМ хлорида натрия,

[0052] от 5 мМ до 20 мМ фосфатного буферного раствора,

[0053] необязательно, от 100 мМ до 200 мМ гидрохлорида аргинина,

[0054] необязательно, от 0,005 мас./об.% до 0,05 мас./об.% полисорбата 80, и

[0055] необязательно, от 0,1 мас./мас.% до 1,0 мас./мас.% фосфата алюминия.

[0056] Способ и применение

[0057] В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению комбинации вышеуказанной PIC, антибиотика (или полиаминосоединения) и положительного иона при получении лекарственного средства или вакцины для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции.

[0058] В соответствии с ещё одним аспектом настоящее изобретение относится к применению полинуклеотидной адъювантной композиции, раскрытой в заявке CN103405762A, для получения лекарственного средства или вакцины для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции.

[0059] В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению комбинации PIC, антибиотика (или полиаминосоединения), положительного иона и вируса для получения лекарственного средства или вакцины для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции.

[0060] В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к применению иммунной композиции или вакцины настоящего изобретения для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции.

[0061] Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению иммунной композиции или вакцины настоящего изобретения для получения лекарственного средства для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции.

[0062] В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение дополнительно включает в себя способ стимуляции иммунореакции у животного-хозяина, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение животному описанной здесь иммунной композиции в количестве, эффективном для индукции иммунореакции. Животное-хозяин предпочтительно представляет собой млекопитающее, более предпочтительно обезьяну и ещё более предпочтительно человека. Настоящее изобретение также относится к способу иммунизации животного-хозяина против вируса, отличающемуся тем, что указанный способ включает в себя введение животному описанной здесь иммунной композиции в количестве, эффективном для индукции защитной реакции. Животное-хозяин предпочтительно представляет собой млекопитающее, более предпочтительно обезьяну и ещё более предпочтительно человека.

[0063] «Иммунореакция» на антиген или композицию представляет собой реакцию, возникающую в результате гуморальной и/или клеточной иммунореакции субъекта на молекулы, присутствующие в соответствующей композиции. Термин «гуморальная иммунореакция» относится к иммунореакции, опосредованной молекулой антитела, тогда как «клеточная иммунореакция» представляет собой иммунореакцию, опосредованную Т-лимфоцитами и/или другими лейкоцитами.

[0064] В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения иммунная композиция или вакцина настоящего изобретения способна достигать любого действия, выбранного из группы, состоящей из усиления экспрессии костимулирующих молекул (например, CD80+, CD86+, CD40+) на дендритных клетках, активации дендритных клеток, увеличения экспрессии цитокинов (например, TNF-α, IFN-γ, KC, IFN-β) в легких, повышения титра антител IgG (например, IgG1, IgG2a, IgG3), увеличения доли IL-2-положительных клеток, увеличения доли IFN-γ-положительных клеток и уменьшения вирусной нагрузки в легких или их комбинации.

[0065] В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к способу предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, который включает в себя введение субъекту профилактически или терапевтически эффективного количества композиции или вакцины настоящего изобретения.

[0066] В некоторых вариантах осуществления изобретения введение композиции является систематическим (т.е. системным) или местным.

[0067] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунную композицию или вакцину настоящего изобретения вводят парентеральной (например, внутримышечной, внутрибрюшинной, внутривенной, подкожной и внутрикожной) инъекцией.

[0068] В других вариантах осуществления изобретения иммунную композицию или вакцину настоящего изобретения вводят внутрикожно способом, отличным от инъекции (например, способом, который не разрушает барьеры эпителиальных клеток с помощью механического устройства).

[0069] В некоторых других вариантах осуществления изобретения иммунную композицию вводят ректальным, вагинальным, назальным, пероральным, сублингвальным, дыхательным, глазным или трансдермальным путями.

[0070] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунную композицию вводят внутримышечно.

[0071] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунную композицию вводят капельно через нос.

[0072] В некоторых вариантах осуществления изобретения для ингаляционного введения композицию/вакцину настоящего изобретения можно вводить с помощью инсуффлятора, распылителя, упаковки под давлением или путём введения газового спрея. Упаковка под давлением может содержать подходящий пропеллент (например, дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан и диоксид углерода). В случае использования аэрозоля под давлением единица дозы может быть определена с помощью газового клапана.

[0073] Необязательно, для ингаляционного или инсуффляционного введения композиция/вакцина настоящего изобретения представляет собой композицию в форме сухого порошка, например, порошкообразной смеси модификатора и подходящей матрицы сухого порошка, такой как лактоза или крахмал. Порошкообразная смесь может содержаться в капсулах и картриджах в виде разовой дозы или, например, в желатиновой упаковке, из контейнеров которой лекарственный порошок может вводиться с помощью ингалятора или инсуффлятора. Для назальной доставки антитело можно вводить с помощью жидкого спрея или назальных капель, например, с помощью пластикового распылителя.

[0074] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунную композицию или вакцину настоящего изобретения вводят субъекту с частотой, выбранной из группы, состоящей из одного раза в месяц, двух раз в месяц, 3 раз в месяц, 4 раз в месяц, 5 раз в месяц, 6 раз в месяц, 7 раз в месяц, 8 раз в месяц, 1 раз в неделю, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 4 раза в неделю, 5 раз в неделю, 6 раз в неделю, 1 раз в три дня, два раза в три дня, 3 раза в три дня, один раз в два дня, два раза в два дня, один раз в день и два раза в день.

[0075] В некоторых вариантах осуществления изобретения способ предотвращения или лечения включает в себя введение иммунной композиции настоящего изобретения, содержащей антиген SARS-CoV-2, и также возможно введение композиции нуклеиновой кислоты, кодирующей антиген SARS-CoV-2. Специалисты в данной области знакомы с концепциями, применениями и эффективностью вакцин на основе нуклеиновых кислот, технологиями вакцин на основе нуклеиновых кислот и технологиями, основанными на белке и полипептиде. Технология, основанная на нуклеиновых кислотах, позволяет напрямую наносить незащищенную или инкапсулированную нуклеиновую кислоту, кодирующую шиповидный полипептид, на ткани и клетки. Эта технология основана на том факте, что эти нуклеиновые кислоты могут поглощаться и экспрессироваться клетками субъекта организма с образованием иммуногенных детерминант. Такие вакцины на белковой основе могут индуцировать нейтрализующий, защитный и антителозависимый иммунный ответ посредством однократных или многократных инъекций иммунной композиции настоящего изобретения (например, шиповидного белка, содержащего SARS-CoV-2).

[0076] В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к набору для выполнения вышеуказанного способа предотвращения или лечения, включающему в себя, по меньшей мере, один контейнер, содержащий иммунную композицию или вакцину настоящего изобретения. Ингредиенты и/или количества композиции в разных контейнерах могут быть одинаковыми или разными.

[0077] В некоторых вариантах осуществления изобретения иммунную композицию или вакцину настоящего изобретения получают в виде стерильной жидкости, и она содержится в стерильном контейнере (например, в пробирке, флаконе, ампуле и шприце). В некоторых других вариантах осуществления изобретения иммунная композиция или вакцина настоящего изобретения содержится в контейнере в виде сухого порошка или лиофилизированного порошка. Перед применением иммунную композицию или вакцину переводят в жидкую форму.

[0078] В некоторых вариантах осуществления изобретения набор настоящего изобретения дополнительно включает в себя набор, выбранный из группы, состоящей из иглы, воды для инъекций и инструкции по применению или их комбинации.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0079] На фиг. 1 показана фармацевтическая композиция настоящего изобретения, активирующая DC организма для усиления продукции костимулирующих молекул.

[0080] На фиг. 2А и фиг. 2В показано, что концентрация цитокинов в легких может быть эффективно повышена после введения мышам фармацевтической композиции настоящего изобретения путём закапывания в нос.

[0081] На фиг. 3 показаны титры антител подтипа IgG.

[0082] На фиг. 4 показаны титры антител IgG против белка S нового коронавируса в кроличьей сыворотке.

[0083] На фиг. 5 показано, что нейтрализующие антитела, индуцированные различными фармацевтическими композициями, имеют разные титры.

[0084] На фиг. 6А-6D показана доля клеток, экспрессирующих IL-2, IFN-γ.

[0085] На фиг. 7 показана вирусная нагрузка в легких после заражения мышей.

[0086] На фиг. 8 показана вирусная нагрузка в легких после заражения мышей.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0087] Термин «антиген» относится к любому веществу (например, белку, пептиду, раковой клетке, гликопротеину, гликолипиду, живому вирусу, убитому вирусу и ДНК), которое может распознаваться иммунной системой хозяина и индуцировать иммунный ответ при проникновении в хозяина. Антиген может быть предоставлен в очищенной или неочищенной форме. В настоящем изобретении антиген включает белок патогена, рекомбинантный белок, пептид, полисахарид, гликопротеин, гликолипид и полинуклеотид, живой вирус, рекомбинантный вирус, аттенуированный или инактивированный вирус.

[0088] Термин «иммуногенный фрагмент» относится к части вышеупомянутого «антигена» (например, когда антиген представляет собой белок или полипептид, иммуногенный фрагмент представляет собой неполноразмерный пептидный фрагмент белка или полипептида), которая ещё сохраняет (полностью или частично) способность распознаваться иммунной системой хозяина и индуцировать иммунный ответ.

[0089] Термин «инактивация» относится к удалению патогенной способности и способности к размножению вируса, но при этом сохраняется способность стимулировать организм человека к выработке иммунного ответа. Способы инактивации вирусов хорошо известны в данной области техники. Для инактивации вирусов можно использовать любой обычно используемый способ, который можно выбрать в зависимости от типа вируса. Эти способы инактивации вирусов включают в себя без ограничений, использование фотореактивного соединения, окислителя, облучения (например, УФ-лучи; γ-лучи), комбинации рибофлавина и УФ-лучей, обработку растворителем-детергентом (например, обработку органическим растворителем три-N-бутилфосфат и детергентом Твин 80), обработку полиэтиленгликолем, пастеризацию (термическая обработка), воздействие низким значением pH, обработку ферментами (пепсин или трипсин), обработку метиленовым синим светом, обработку диметилметиленовым синим и видимым светом, и обработку производным псоралена S-59 и облучение УФ спектра А.

[0090] Аттенуация: Аттенуированные вирусы все ещё остаются живыми, при этом такие вирусы теряют патогенность во время их получения, но все же сохраняют способность к размножению и способность стимулировать организм человека к выработке иммунного ответа.

[0091] Используемый здесь термин «шиповидный белок» (шипообразный или S-белок) включает в себя его варианты. Термин «вариант шиповидного белка» относится к полипептиду, который в значительной степени гомологичен природному шиповидному полипептиду, но имеет аминокислотную последовательность, отличную от природного шиповидного белка из-за делеции, вставки или замены одной или нескольких аминокислот. Вариант может содержать последовательность консервативной замены, при этом консервативная замена относится к замене данного аминокислотного остатка остатком, обладающим сходными биохимическими свойствами. Такая консервативная замена известна, и примеры консервативной замены включают в себя замену алифатических остатков друг другом, например, замену друг другом Ile, Val, Leu или Ala; или замену полярных остатков друг другом, например, между Lys и Arg; между Glu и Asp; и между Gln и Asn. Настоящее изобретение также включает в себя встречающиеся в природе варианты шиповидных полипептидов. Примерами таких вариантов являются белки, полученные в результате альтернативных событий сплайсинга мРНК или расщепления протеазой полипептида шипа. Вариации, которые могут быть связаны с протеолизом, включают в себя, например, вариации, имеющие различия в концевых участках при экспрессии в различных типах клеток-хозяев вследствие протеолитического удаления одной или нескольких концевых аминокислот из полипептида шипа.

[0092] Когда антиген SARS-CoV-2 настоящего изобретения представляет собой белок или полипептид, его можно получить в виде мультимера (гомомультимера или гетеромультимера), например, но без ограничений, димера, тримера, тетрамера и пентамера, что обеспечивает больше возможностей для контакта с антигеном. В конкретном примере специалист в данной области техники сливает сегмент укладки на N- или С-конце антигена SARS-CoV-2, этот сегмент укладки способствует формированию антигеном мультимерной формы. Такая укладка хорошо известна в данной области техники и не влияет на правильную укладку антигена в настоящем изобретении или на иммуногенность. Например, укладки, которые можно использовать для тримеризации, позволяют образовывать тримерные структуры при присоединении (также называемом слиянием) с белками или пептидами. В настоящем изобретении можно использовать любую известную укладку/домен тримеризации. Примеры укладок/доменов тримеризации включают в себя без ограничений домен тримеризации gp41 ВИЧ-1, домен тримеризации gp41 SIV, домен тримеризации gp-2 вируса Эбола, домен тримеризации HTLV-1gp-21, домен тримеризации фибрина T4, домен тримеризации фактора транскрипции теплового шока дрожжей и домен тримеризации коллагена человека. В качестве другого примера, в заявке раскрыты CN111560074A двадцать четыре полимерных наноантигена, которые могут быть образованы функцией самосборки HP_Ferritin; и в заявке CN111607605A пентамер слитого белка получают с помощью характеристики, заключающейся в том, что LTB26 может самособираться с образованием пентамера.

[0093] Используемый здесь термин «разовая доза» относится к единице, которая физически изолирована и подходит в качестве разовой дозы, используемой для субъекта. Каждая единица содержит заданное количество композиции настоящего изобретения, где заданное количество представляет собой количество, достаточное для получения желаемого эффекта, вместе с фармацевтически/физиологически приемлемым разбавителем, несущим агентом или носителем.

[0094] Используемый здесь термин «эффективное количество» композиции относится к количеству композиции, которое является нетоксичным, но достаточным для обеспечения желаемой реакции (например, иммунореакции) и получения соответствующего профилактического/терапевтического эффекта. Требуемое точное количество варьируется от субъекта к субъекту в зависимости от их вида, возраста, общего состояния субъектов, тяжести состояния, подлежащего лечению, и конкретных представляющих интерес макромолекул, способа введения и т.д. Подходящее «эффективное количество» в конкретном примере может быть определено специалистом в данной области техники с использованием обычных экспериментальных методов, например, путём определения эффективного количества у человека посредством исследований на животных.

[0095] Используемый здесь термин «лечение» относится к получению желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим с точки зрения полного и/или частичного предотвращения заболеваний или их симптомов, и/или эффект может быть лечебным с точки зрения полной и/или частичной стабилизации или лечения заболеваний и/или отрицательных последствий, вызванных этими заболеваниями.

[0096] В настоящем изобретении, когда описывается числовой диапазон, используемые термины «…до…», «в пределах диапазона» или «между диапазонами» включают в себя значения конечных точек.

[0097] В контексте настоящего изобретения термины «фармацевтическая композиция», «лекарственное средство (лекарство)», «иммунная композиция» и «вакцина» могут использоваться взаимозаменяемо.

[0098] ПРИМЕРЫ

[0099] Если не указано иное, то работа с подопытными животными в соответствии с настоящим изобретением осуществлялась в соответствии с Правилами содержания лабораторных животных, Руководством по гуманному обращению с лабораторными животными и Национальным стандартом GB/14925.

[0100] Пример 1: Способ получения фармацевтической композиции 1 настоящего изобретения

[0101] 1. Антиген: рекомбинантный S-тримерный белок нового коронавируса.

[0102] 2. Получение композиции настоящего изобретения со следующими ингредиентами:

[0103] Композиция 1 (с разовой дозой 1 мл) настоящего изобретения содержит:

[0104] рекомбинантный S-тримерный белок нового коронавируса (2,5 мкг, 5 мкг, 6 мкг, 10 мкг и 20 мкг),

[0105] PIC (1 мг/мл),

[0106] канамицин (800 единиц/мл) и

[0107] хлорид кальция (0,0472 мг/мл).

[0108] Приведённую выше композицию готовили в физиологически приемлемом буферном растворе (150 мМ хлорида натрия, 0,0043 М динатрия гидрофосфата и 0,0017 М дигидрофосфата натрия) в стерильных условиях.

[0109] Таблица 1

Ингредиенты Дозировка (1 мл) Концентрация рекомбинантный S-тримерный белок нового коронавируса 2,5 мкг,
5 мкг,
6 мкг,
10 мкг,
20 мкг, 2,5 мкг/мл,
5 мкг/мл,
6 мкг/мл,
10 мкг/мл,
20 мкг/мл, PIC 1 мг 1 мг/мл канамицин 800 единиц 800 единиц/мл хлорид кальция 0,0472 мг 0,0472 мг/мл хлорид натрия 8,77 мг 150 мМ гидрофосфат динатрия 0,61 мг 0,0043 М дигидрофосфат натрия 0,204 мг 0,0017 М

[0110] Пример 2: Способ получения фармацевтической композиции 2 настоящего изобретения

[0111] 1. Антиген: рекомбинантный S-тримерный белок нового коронавируса.

[0112] 2. Получение композиции настоящего изобретения со следующими ингредиентами:

[0113] Композиция 2 (с разовой дозой 1 мл) настоящего изобретения содержит:

[0114] рекомбинантный S-тримерный белок нового коронавируса (2,5 мкг, 5 мкг, 10 мкг и 20 мкг),

[0115] PIC (1 мг/мл),

[0116] канамицин (800 единиц/мл),

[0117] хлорид кальция (0,0472 мг/мл),

[0118] гидрохлорид аргинина (140 мМ) и

[0119] полисорбат 80 (0,01 мас./об.%).

[0120] Приведённую выше композицию готовили в физиологически приемлемом буферном растворе (150 мМ хлорида натрия, 0,0043 М динатрия гидрофосфата и 0,0017 М дигидрофосфата натрия) в стерильных условиях.

[0121] Таблица 2

Ингредиенты Дозировка (1 мл) Концентрация рекомбинантный S-тримерный белок нового коронавируса 2,5 мкг,
5 мкг,
10 мкг,
20 мкг, 2,5 мкг/мл,
5 мкг/мл,
10 мкг/мл,
20 мкг/мл, PIC 1 мг 1 мг/мл канамицин 800 единиц 800 единиц/мл хлорид кальция 0,0472 мг 0,0472 мг/мл аргинина гидрохлорид 29,492 мг 140 мМ полисорбат 80 0,1 мг 0,01 мас./об.% хлорид натрия 8,77 мг 150 мМ гидрофосфат динатрия 0,61 мг 0,0043 М дигидрофосфат натрия 0,204 мг 0,0017 М

[0122] Пример 3: Способ получения фармацевтической композиции 3 настоящего изобретения

[0123] 1. Антиген: рекомбинантный белок S1 нового коронавируса.

[0124] 2. Получение композиции настоящего изобретения со следующими ингредиентами:

[0125] Композиция 3 (с разовой дозой 1 мл) настоящего изобретения содержит:

[0126] рекомбинантный белок S1 нового коронавируса (2,5 мкг, 5 мкг, 6 мкг, 10 мкг и 20 мкг),

[0127] PIC (1 мг/мл),

[0128] канамицин (800 единиц/мл) и

[0129] хлорид кальция (0,0472 мг/мл).

[0130] Приведённую выше композицию готовили в физиологически приемлемом буферном растворе (150 мМ хлорида натрия, 0,0043 М динатрия гидрофосфата и 0,0017 М дигидрофосфата натрия) в стерильных условиях.

[0131] Таблица 3

Ингредиенты Дозировка (1 мл) Концентрация рекомбинантный белок S1 нового коронавируса 2,5 мкг,
5 мкг,
6 мкг,
10 мкг,
20 мкг, 2,5 мкг/мл,
5 мкг/мл,
6 мкг/мл,
10 мкг/мл,
20 мкг/мл, PIC 1 мг 1 мг/мл канамицин 800 единиц 800 единиц/мл хлорид кальция 0,0472 мг 0,0472 мг/мл хлорид натрия 8,77 мг 150 мМ гидрофосфат динатрия 0,61 мг 0,0043 М дигидрофосфат натрия 0,204 мг 0,0017 М

[0132] Пример 4: Способ получения фармацевтической композиции 4 настоящего изобретения

[0133] 1. Антиген: рекомбинантный белок RBD нового коронавируса (т.е. область RBD шиповидного белка SARS-CoV-2).

[0134] 2. Получение композиции настоящего изобретения со следующими ингредиентами:

[0135] Композиция 4 (с разовой дозой 1 мл) настоящего изобретения содержит:

[0136] рекомбинантный белок RBD нового коронавируса (2,5 мкг, 5 мкг, 6 мкг, 10 мкг и 20 мкг),

[0137] PIC (1 мг/мл),

[0138] канамицин (800 единиц/мл) и

[0139] хлорид кальция (0,0472 мг/мл).

[0140] Приведённую выше композицию готовили в физиологически приемлемом буферном растворе (150 мМ хлорида натрия, 0,0043 М динатрия гидрофосфата и 0,0017 М дигидрофосфата натрия) в стерильных условиях.

[0141] Таблица 4

Ингредиенты Дозировка (1 мл) Концентрация Рекомбинантный белок RBD нового коронавируса 2,5 мкг,
5 мкг,
6 мкг,
10 мкг,
20 мкг, 2,5 мкг/мл,
5 мкг/мл,
6 мкг/мл,
10 мкг/мл,
20 мкг/мл, PIC 1 мг 1 мг/мл канамицин 800 единиц 800 единий/мл хлорид кальция 0,0472 мг 0,0472 мг/мл хлорид натрия 8,77 мг 150 мМ гидрофосфат динатрия 0,61 мг 0,0043 М дигидрофосфат натрия 0,204 мг 0,0017 М

[0142] Пример 5: Способ получения фармацевтической композиции 5 настоящего изобретения

[0143] Композиция 5 (с разовой дозой 1 мл) настоящего изобретения содержит:

[0144] PIC (1 мг/мл),

[0145] канамицин (800 единиц/мл) и

[0146] хлорид кальция (0,0472 мг/мл).

[0147] Приведенную выше композицию готовили в физиологически приемлемом буферном растворе (150 мМ хлорида натрия, 0,0043 М динатрия гидрофосфата и 0,0017 М дигидрофосфата натрия) в стерильных условиях.

[0148] Таблица 5

Ингредиенты Дозировка (1 мл) Концентрация PIC 1 мг 1 мг/мл канамицин 800 единиц 800 единиц/мл хлорид кальция 0,0472 мг 0,0472 мг/мл хлорид натрия 8,77 мг 150 мМ гидрофосфат динатрия 0,61 мг 0,0043 М дигидрофосфат натрия 0,204 мг 0,0017 М

[0149] Пример 6: Способ получения фармацевтической композиции 6 настоящего изобретения

[0150] 1. Антиген: инактивированный и очищенный новый коронавирус.

[0151] 2. Получение композиции 6 (с разовой дозой 1 мл) настоящего изобретения со следующими ингредиентами, содержащей:

[0152] инактивированный и очищенный новый коронавирус (600 активных единиц),

[0153] PIC (1 мг/мл),

[0154] канамицин (800 единиц/мл),

[0155] хлорид кальция (0,0472 мг/мл) и

[0156] фосфат алюминия (с содержанием алюминия 0,5 мас./мас.%).

[0157] Приведённую выше композицию готовили в физиологически приемлемом буферном растворе (150 мМ хлорида натрия, 0,0043 М динатрия гидрофосфата и 0,0017 М дигидрофосфата натрия) в стерильных условиях.

[0158] Таблица 6

Ингредиенты Дозировка (1 мл) Концентрация инактивированный и очищенный новый коронавирус 600 активных единиц 600 активных единиц/мл PIC 1 мг 1 мг/мл канамицин 800 единиц 800 единиц/мл хлорид кальция 0,0472 мг 0,0472 мг/мл фосфат алюминия 0,005 мл 0,5 мас./мас.% хлорид натрия 8,77 мг 150 мМ гидрофосфат динатрия 0,61 мг 0,0043 М дигидрофосфат натрия 0,204 мг 0,0017 М

[0159] Тестовый пример 1: Фармацевтическая композиция 5 настоящего изобретения активирует дендритные клетки организма для активации костимулирующих молекул

[0160] Метод: Миелоидные дендритные клетки мышей линии C57BL/6 (BMDC) совместно инкубировали in vitro с фармацевтической композицией 5 настоящего изобретению в течение 18 часов. Пропорции и средние значения интенсивности флуоресценции клеток CD80+, CD86+ и CD40+ определяли с помощью проточной цитометрии.

[0161] Результат: Как показано на фиг. 1, после взаимодействия фармацевтической композиции 5 настоящего изобретения с мышиными BMDC доля клеток CD80+ увеличилась с 59,82% до 90,66%, доля клеток CD86+ увеличилась с 11,70% до 38,66%, а доля клеток CD40+ увеличилась с 16,98% до 58,62%, что значительно увеличило выработку костимулирующих молекул.

[0162] Заключение: Настоящий эксперимент доказывает, что фармацевтическая композиция 5 настоящего изобретения может в значительной степени индуцировать дендритные клетки организма для активации костимулирующих молекул и способствовать активации дендритных клеток.

[0163] Тестовый пример 2: После назальной доставки фармацевтическая композиция 5 настоящего изобретения может эффективно повышать концентрацию цитокинов в легких.

[0164] Метод: Мышам интраназально вводили ФСБ или фармацевтическую композицию 5 настоящего изобретения, соответственно, и умерщвляли в указанное время. Ткани легких собирали, и TNF-α, IFN-γ и KC в образце повторно тестировали с помощью системы белковой матрицы Bio-plex; и IFN-β определяли с помощью набора для ИФА.

[0165] Таблица 7. Группировка лабораторных животных

Образцы Вводимая доза Способ введения ФСБ 50 мкл на мышь интраназально фармацевтическая композиция 5 настоящего изобретения 50 мкл на мышь интраназально

[0166] Результат: См. фиг. 2A и 2B.

[0167] Заключение: После интраназального введения мышам фармацевтической композиции 5 настоящего изобретения уровень цитокинов TNF-α, IFN-γ, KC и IFN-β в легких мышей значительно увеличился, что указывает на то, что назальное введение мышам может эффективно активировать внутренний иммунитет дыхательных путей, заставляя иммунные клетки вырабатывать цитокины и хемокины. Эти цитокины и хемокины связаны с ингибированием репликации респираторного вируса мышей.

[0168] Тестовый пример 3: Фармацевтическая композиция 1 настоящего изобретения может эффективно индуцировать у мышей выработку антител IgG (IgG1, IgG2a, IgG3) против белка S1 нового коронавируса

[0169] Метод: Фармацевтическую композицию 1 настоящего изобретению использовали для иммунизации мышей. Брали кровь и выделяли сыворотку. Методом ИФА в сыворотке мышей определяли титры подтипов антител IgG против белка S1 нового коронавируса.

[0170] Таблица 8. Группировка лабораторных животных

Образец Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Количество фармацевтическая композиция 1 настоящего изобретения (антиген 10 мкг) 0,1 мл на мышь в/м иммунизация один раз в дни 0, 7 и 14 8

[0171] Заключение: Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может значительно повышать титры антител подтипа IgG против белка S1 нового коронавируса в сыворотке крови (фиг. 3).

[0172] Тестовый пример 4: Фармацевтическая композиция 1 настоящего изобретения может эффективно индуцировать у кроликов выработку антител IgG против белка S нового коронавируса

[0173] Кроликов иммунизировали фармацевтической композицией 1 настоящего изобретения. Брали кровь и выделяли сыворотку. Методом ИФА в сыворотке крови кроликов определяли титры антител класса IgG к белку S нового коронавируса.

[0174] Таблица 9. Группировка лабораторных животных

Образец Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Количество фармацевтическая композиция 1 (антиген 5 мкг) настоящего изобретения 1 мл на кролика в/м иммунизация один раз в дни 0 и 7 5

[0175] Заключение: Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может значительно повышать титры антител IgG против белка S нового коронавируса в кроличьей сыворотке (фиг. 4).

[0176] Тестовый пример 5: Фармацевтические композиции 1 и 3-4 настоящего изобретения могут эффективно индуцировать у кроликов выработку нейтрализующих антител против нового коронавируса

[0177] Метод: Фармацевтические композиции 1 и 3-4 настоящего изобретения использовали соответственно для иммунизации кроликов. Брали кровь и выделяли сыворотку. Титры нейтрализующих антител в кроличьей сыворотке определяли с помощью реакции нейтрализации псевдовирусов.

[0178] Таблица 10. Группировка лабораторных животных

Образцы Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Количество фармацевтическая композиция 1 (антиген 6 мкг) настоящего изобретения 1 мл на кролика в/м иммунизация один раз в дни 0, 7 и 14 3 фармацевтическая композиция 3 (антиген 6 мкг) настоящего изобретения 1 мл на кролика в/м иммунизация один раз в дни 0, 7 и 14 3 фармацевтическая композиция 4 (антиген 6 мкг) настоящего изобретения 1 мл на кролика в/м иммунизация один раз в дни 0, 7 и 14 3

[0179] Заключение: Фармацевтические композиции 1 и 3-4 настоящего изобретения могут значительно повышать титры нейтрализующих антител в кроличьей сыворотке, причем титры нейтрализующих антител, индуцированные и продуцируемые различными фармацевтическими композициями, различаются (Фиг. 5).

[0180] Тестовый пример 6: Фармацевтическая композиция 2 настоящего изобретения эффективно индуцирует у мышей специфичную в отношении нового коронавируса клеточную иммунореакцию

[0181] Метод: Фармацевтическую композицию 2 настоящего изобретения использовали для иммунизации мышей. Брали селезенку и выделяли суспензию клеток селезенки. Антигенспецифичную клеточную иммунореакцию выявляли методом иммуноферментных пятен.

[0182] Таблица 11. Группировка лабораторных животных

Образец Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Количество фармацевтическая композиция 2 (антиген: низкая доза 2,5 мкг, средняя доза: 5 мкг и высокая доза: 10 мкг) настоящего изобретения 0,1 мл
на мышь в/м иммунизация один раз в дни 0, 7 и 14 8

[0183] Заключение: Фармацевтическая композиция 2 настоящего изобретения может значительно улучшить клеточную иммунореакцию у мышей и значительно увеличить долю клеток, экспрессирующих IL-2 и IFN-γ (результаты см. на Фигурах 6A-6D).

[0184] Тестовый пример 7: Фармацевтическая композиция 1 настоящего изобретения эффективно снижает нагрузку новым коронавирусом у мышей hACE2

[0185] Метод: Трансгенных мышей hACE2 (6-недельный возраст, 18-26 г, трансгенная мышиная модель hACE2, инфицированная SARS-CoV-2) иммунизировали фармацевтической композицией 1 настоящего изобретению и подвергали заражению SARS-CoV-2 назальным путём через 14 дней после первичной иммунизации и через 5 дней после заражения брали легочные ткани для определения вирусной нагрузки в легких.

[0186] Таблица 12. Группировка лабораторных животных

Образы Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Время заражения Доза и объём заражения Количество фармацевтическая композиция 1 (антиген 5 мкг) настоящего изобретения 200 мкл на мышь в/м иммунизация один раз в дни 0 и 7 заражение через 14 дней после первичной иммунизации 10⁵ ЦПД₅₀ на мышь
50 мкл 6

[0187] Заключение: Фармацевтическая композиция 1 настоящего изобретения может значительно снизижать вирусную нагрузку в легких у мышей после заражения, в некоторой степени облегчать воспаление легких и оказывать хорошее профилактическое действие (см. результаты на фиг. 7).

[0188] Тестовый пример 8: Фармацевтическая композиция 2 настоящего изобретения эффективно снижает нагрузку новым коронавирусом у мышей hACE2

[0189] Метод: Мышей hACE2 подвергали интраназальному заражению SARS-CoV-2 и одновременно вводили фармацевтическую композицию 2 настоящего изобретения. Ткани легких брали через 5 дней после заражения для определения вирусной нагрузки в лёгких.

[0190] Таблица 13. Группировка лабораторных животных

Образец Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Время заражения Доза и объём заражения Количество фармацевтическая композиция 2 (антиген 10 мкг) настоящего изобретения 200 мкл на мышь в/м непрерывное введение за 5 дней до заражения и прекращение иммунизации на 4-й день после заражения на 6-й день после первой иммунизации 0,5*10⁶ ЦПД ₅₀ на мышь
50 мкл 6

[0191] Заключение: Фармацевтическая композиция 2 настоящего изобретения может значительно снижать вирусную нагрузку в легких у мышей после заражения и оказывать хорошее терапевтическое действие (см. результаты на фиг. 8).

[0192] Тестовый пример 9: Фармацевтическая композиция 2 настоящего изобретения может эффективно индуцировать выработку антител IgG против белка S нового коронавируса

[0193] Метод: Мышей иммунизировали фармацевтической композицией 2 настоящего изобретения. Брали кровь и выделяли сыворотку. Методом ИФА в мышиной сыворотке определяли титры антител IgG к белку S нового коронавируса.

[0194] Таблица 14. Группировка лабораторных животных

Образцы Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Количество фармацевтическая композиция 2 (низкая доза антигена 10 мкг) настоящего изобретения 1 мл на мышь в/м иммунизация один раз в дни 1, 8, 15, и 29 5 фармацевтическая композиция 2 (высокая доза антигена 30 мкг) настоящего изобретения 3 мл на мышь в/м иммунизация один раз в дни 1, 8, 15, и 29 5

[0195] Заключение: Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может значительно повышать титры антител IgG против белка S нового коронавируса в машинной сыворотке. Специфичные IgG-антитела можно обнаружить через 1 неделю после второй иммунизации животных в группах, получавших низкую дозу фармацевтической композиции 2 настоящего изобретения и высокую дозу фармацевтической композиции 2 настоящего изобретению (D15, до третьего введения), и встречаемость составляет 10/10 и 10/10 соответственно, а титр антител колеблется от 1:1600 до ˃1:102400. По мере увеличения количества раз введения титры специфичных IgG-антител животных как в группах с низкой дозой, так и в группе с высокой дозой заметно увеличиваются. После 4 недель отмены препарата и выздоровления (D57) титры специфических IgG-антител у всех животных как в группах с низкими дозами, так и в группах с высокими дозами не снижаются.

[0196] Тестовый пример 10: Фармацевтическая композиция 6 настоящего изобретения может эффективно индуцировать выработку нейтрализующих антител против нового коронавируса у кроликов.

[0197] Метод: Кроликов иммунизировали фармацевтической композицией 6 настоящего изобретения. Брали кровь и выделяли сыворотку. Титры нейтрализующих антител в сыворотке крови кроликов определяли с помощью нейтрализующего теста для штамма SARS-CoV-2 дикого типа.

[0198] Таблица 15. Группировка лабораторных животных

Образец Вводимая доза Способ введения Время иммунизации Количество фармацевтическая композиция 6 (антиген: 600 активных единиц) настоящего изобретения 1 мл на кролика в/м иммунизация один раз в дни 0 и 7 3

[0199] Заключение: Фармацевтическая композиция 6 настоящего изобретения может индуцировать титр нейтрализующих антител в сыворотке кролика.

[0200] Фармацевтические композиции для предотвращения и лечения новой коронавирусной инфекции SARS-CoV-2, представленные в настоящем изобретении, могут обеспечивать следующие эффекты.

[0201] 1. Фармацевтический эффект лучше, и эффективность значительна. Ингредиенты фармацевтических композиций настоящего изобретения могут активировать регуляторный фактор интерферона 3 и NF-kB, усиливать экспрессию интерферона I-типа и провоспалительных цитокинов, активировать естественный иммунитет и приобретенный иммунитет организма человека и играть важную роль в сопротивлении вирусу. Множество результатов испытаний на животных показывают, что ингредиенты фармацевтических композиций настоящего изобретения могут эффективно снижать титр вируса и вирусную нагрузку в дыхательных путях животных.

[0202] 2. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут одновременно обеспечивать профилактический и терапевтический эффекты.

[0203] 3. Лекарственная форма может быть гибкой, может использоваться инъекционная лекарственная форма, имеющая быстрое и надежное действие, жидкий лекарственный препарат можно вводить непосредственно в ткани, при этом он не подвергается влиянию pH, ферментов, пищи и т.д., на него не воздействует эффект первого прохождения, и содержание лекарственного средства нелегко потерять, поэтому фармацевтические композиции настоящего изобретения обладают надежной эффективностью и могут применяться для спасения пациентов в критическом состоянии. Также можно использовать аэрозольный препарат, который удобен для введения, легко переносится пациентами, быстро всасывается через слизистую оболочку, быстро действует, и режим его введения хорошо соблюдается пациентом.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины. 1 объект представляет собой иммунную композицию для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2, содержащую антиген, полученный из коронавируса, полирибоинозиновую-полирибоцитидиловую кислоту (PIC), канамицин, хлорид кальция, хлорид натрия и фосфатный буферный раствор. 2 объект – применение иммунной композиции для получения вакцины или лекарственного средства для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2. Технический результат заключается в повышении концентрации цитокинов в легких, активировании дендритных клеток организма для усиления регуляции костимулирующих молекул, индукции выработки антител IgG, индукции выработки нейтрализующих антител, индукции выработки специфичной для коронавируса клеточной иммунореакции, снижении нагрузки коронавирусом для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 8 ил., 15 табл., 16 пр.

1. Иммунная композиция для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2, содержащая:

антиген, полученный из коронавируса,

от 0,5 до 2 мг/мл полирибоинозиновой-полирибоцитидиловой кислоты (PIC),

от 400 до 1200 единиц/мл канамицина,

от 0,01 до 0,1 мг/мл хлорида кальция,

от 100 до 200 мМ хлорида натрия и

от 5 до 20 мМ фосфатного буферного раствора,

при этом антиген, полученный из коронавируса, выбран из группы, состоящей из инактивированного вируса SARS-CoV-2, аттенуированного вируса SARS-CoV-2, вируса SARS-CoV-2, который не может размножаться у субъекта, шиповидного белка вируса SARS-CoV-2 и белка, полипептида, РНК и ДНК, сконструированных в соответствии со структурой SARS-CoV-2, или их комбинации.

2. Иммунная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что,

когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой инактивированный вирус SARS-CoV-2, аттенуированный вирус SARS-CoV-2 или вирус SARS-CoV-2, который не может размножаться у субъекта, отношение антигена, полученного из коронавируса, к PIC является любым, выбранным из группы, состоящей из:

1 активная единица на 50 мкг, 1 активная единица на 60 мкг, 1 активная единица на 70 мкг, 1 активная единица на 80 мкг, 1 активная единица на 90 мкг, 1 активная единица на 100 мкг, 1 активная единица на 125 мкг, 1 активная единица на 200 мкг, 1 активная единица на 250 мкг, 1 активная единица на 300 мкг, 1 активная единица на 350 мкг, 1 активная единица на 400 мкг, 1 активная единица на 450 мкг, 1 активная единица на 500 мкг, 1 активная единица на 550 мкг, 1 активная единица на 600 мкг, 1 активная единица на 700 мкг, 1 активная единица на 800 мкг, 1 активная единица на 1000 мкг, 1 активная единица на 1500 мкг, 1 активная единица на 2000 мкг, 1 активная единица на 2500 мкг, 1 активная единица на 3000 мкг, 1 активная единица на 4000 мкг, 1 активная единица на 5000 мкг, 1 активная единица на 6000 мкг, 1 активная единица на 7000 мкг, 1 активная единица на 8000 мкг, 1 активная единица на 9000 мкг 1 активная единица на 10000 мкг и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных; или,

когда антиген, полученный из коронавируса, представляет собой любой антиген, выбранный из группы, состоящей из шиповидного белка SARS-CoV-2 и белка, полипептида, ДНК и РНК, сконструированных в соответствии со структурой SARS-CoV-2, отношение антигена к PIC является любым, выбранным из группы, состоящей из:

1 мкг на 10 мкг, 1 мкг на 20 мкг, 1 мкг на 30 мкг, 1 мкг на 40 мкг, 1 мкг на 50 мкг, 1 мкг на 60 мкг, 1 мкг на 70 мкг, 1 мкг на 80 мкг, 1 мкг на 90 мкг, 1 мкг на 100 мкг, 1 мкг на 125 мкг, 1 мкг на 200 мкг, 1 мкг на 250 мкг, 1 мкг на 300 мкг, 1 мкг на 350 мкг, 1 мкг на 400 мкг, 1 мкг на 450 мкг, 1 мкг на 500 мкг, 1 мкг на 550 мкг, 1 мкг на 600 мкг, 1 мкг на 700 мкг, 1 мкг на 800 мкг, 1 мкг на 1000 мкг, 1 мкг на 1500 мкг, 1 мкг на 2000 мкг, 1 мкг на 2500 мкг, 1 мкг на 3000 мкг, 1 мкг на 4000 мкг, 1 мкг на 5000 мкг, 1 мкг на 6000 мкг, 1 мкг на 7000 мкг, 1 мкг на 8000 мкг, 1 мкг на 9000 мкг, 1 мкг на 10000 мкг и диапазона между любыми двумя значениями из вышеперечисленных.

3. Иммунная композиция по п. 1, дополнительно содержащая любое соединение, выбранное из группы, состоящей из:

от 100 до 200 мМ аргинина гидрохлорида, от 0,005 до 0,05% мас./об. полисорбата 80 и от 0,1 до 1,0% по массе фосфата алюминия или их комбинации.

4. Иммунная композиция по любому из пп. 1-3, в которой значение рН иммунной композиции составляет от 6 до 9.

5. Иммунная композиция по любому из пп. 1-4, где иммунная композиция может быть получена в виде жидкой лекарственной формы, где

жидкая лекарственная форма представляет собой любую лекарственную форму, выбранную из группы, состоящей из раствора для инъекций, суспензии, спрея, аэрозоля, назальных капель, мази, эмульсии, капель, сиропа и геля.

6. Иммунная композиция по любому из пп. 1-5, в которой

PIC является гетерогенной по молекулярной массе и имеет молекулярную массу от 50000 до 1200000 дальтон; или

PIC является гетерогенной по молекулярной массе и имеет коэффициент седиментации от 5,0 до 24,0 единиц.

7. Применение иммунной композиции по любому из пп. 1-6 для получения вакцины или лекарственного средства для предотвращения или лечения коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2, где

коронавирус представляет собой SARS-CoV-2 или его вариант; и

вакцину или лекарственное средство получают в лекарственной форме, подходящей для любого из путей введения, выбранных из группы, состоящей из внутримышечного, внутрибрюшинного, внутривенного, подкожного, чрескожного, внутрикожного, перорального, подъязычного введения и респираторного введения через нос, глотку, трахею или бронхи.