ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОКОНЪЮГАТОВ К CEACAM5 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА ЛЕГКОГО Российский патент 2024 года по МПК C07K16/30 A61K47/68 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к области терапевтического воздействия на типы рака, такие как неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легкого (NSQ NSCLC), при котором экспрессируется CEACAM5. Определенные аспекты настоящего изобретения относятся к применению антагонистов CEACAM5, таких как антитела и иммуноконъюгаты к CEACAM5, для лечения рака легкого.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Механизм действия конъюгатов антитела и лекарственного средства (ADC) начинается с его связывания со специфическим антигеном, в достаточной степени экспрессируемым на опухолевых клетках для достижения селективной и эффективной интернализации лекарственного средства. Эффективные цитотоксические средства, селективно направленные на опухолевые клетки, с применением ADC, как недавно было показано, являются частью эффективной стратегии лечения рака, как продемонстрировано недавними утверждениями брентуксимаба ведотина для лечения лимфомы Ходжкина и трастузумаба эмтанзина (T-DM1) для лечения рецидивирующего метастатического HER2+ рака молочной железы. В случае многих других злокачественных заболеваний с нереализованной медицинской потребностью, таких как формы рака в виде солидной опухоли, можно было бы получить пользу от таких возможных способов лечения.

Рак легкого, например, представляет собой агрессивную форму рака, которая является причиной сотен тысяч смертей в Соединенных Штатах. К сожалению, он имеет склонность рецидивировать после начальной стадии лечения и становиться более устойчивым к последующему лечению. Хотя комплексные способы лечения применяются для лечения индивидуумов с раком легкого, необходимы более эффективные способы лечения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

В настоящем изобретении предусмотрены inter alia способы лечения рака легкого (например, NSQ NSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, включающие введение эффективного количества антитела или иммуноконъюгата (содержащего антитело), которые специфически связывают CEACAM5.

В настоящем изобретении предусмотрены inter alia антитела или иммуноконъюгаты, содержащие антитела (также называемые ADC или конъюгат антитела и лекарственного средства), и способы лечения рака, при котором экспрессируется CEACAM5, у субъекта, нуждающегося в этом, включающие введение эффективного количества антитела или иммуноконъюгата, которые специфически связывают CEACAM5. Например, при раке экспрессируется родственная раковоэмбриональному антигену молекула клеточной адгезии 5 человека (hCEACAM5). В различных вариантах осуществления при раке на высоком уровне экспрессируется hCEACAM5. Например, при раке экспрессируется домен A3-B3 hCEACAM5, содержащий SEQ ID NO: 10 и 11, таким образом, что антитело или иммуноконъюгат связывают домен.

В настоящем изобретении предусмотрено антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, для применения в лечении рака, характеризующегося высокими уровнями родственной раковоэмбриональному антигену молекулы клеточной адгезии 5, у субъекта, нуждающегося в этом. В различных вариантах осуществления антитело специфически связывает родственную раково-эмбриональному антигену молекулу клеточной адгезии 5 человека (hCEACAM5) и антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 (GFVFSSYD); HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 (ISSGGGIT); HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5 (AAHYFGSSGPFAY); LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6 (ENIFSY); LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7 (QHHYGTPFT).

В настоящем изобретении предусмотрено антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, для применения в лечении неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQNSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где антитело специфически связывает hCEACAM5 и где антитело содержит VH и VL, где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7.

В настоящем изобретении предусмотрено антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, для применения у субъекта, который предварительно подвергался лечению противораковым терапевтическим средством, где антитело специфически связывает hCEACAM5, и где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7. В определенных вариантах осуществления субъект представляет собой субъекта, в организме которого с высокими уровнями экспрессируется родственная раковоэмбриональному антигену молекула клеточной адгезии. В других вариантах осуществления субъект предварительно подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого. В других вариантах осуществления средство или лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из: химиотерапевтического средства, ингибитора ангиогенеза, ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитора рецептора тирозинкиназы (ROS1) и ингибитора контрольных точек иммунного ответа. В определенных аспектах данных вариантов осуществления ингибитор контрольных точек иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1 и/или ингибитор PD-L1.

В различных вариантах осуществления рак представляет собой NSQ NSCLC.

В различных вариантах осуществления VH содержит SEQ ID NO: 1

В различных вариантах осуществления тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8

В различных вариантах осуществления VL содержит SEQ ID NO: 2

В различных вариантах осуществления легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9

В различных вариантах осуществления антитело конъюгировано или связано с по меньшей мере одним средством для подавления роста. В варианте осуществления средство для подавления роста представляет собой цитотоксическое средство. В различных вариантах осуществления антитела средство для подавления роста выбрано из группы, состоящей из химиотерапевтических средств, ферментов, антибиотиков и токсинов, таких как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины, таксоидов, алкалоидов барвинка, таксанов, майтанзиноида или аналогов майтанзиноида, производных томаймицина или пирролбензодиазепина, производных криптофицина, производных лептомицина, аналогов ауристатина и доластатина, пролекарств, ингибиторов топоизомеразы II, алкилирующих ДНК средств, антитубулиновых средств и аналогов CC-1065 или CC-1065. В различных вариантах осуществления антитела средство для подавления роста представляет собой N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин (DM1) или N2'-деацетил-N-2'(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM4). Например, средство для подавления роста представляет собой DM4.

В различных вариантах осуществления антитело ковалентно присоединено посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста. В различных вариантах осуществления антитела линкер выбран из группы, состоящей из N-сукцинимидилпиридилдитиобутирата (SPDB), 4-(пиридин-2-илдисульфанил)-2-сульфомасляной кислоты (сульфо-SPDB) и сукцинимидил-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата (SMCC). Например, линкер представляет собой SPDB.

В различных вариантах осуществления антитело представляет собой huMAb2-3.

В различных вариантах осуществления настоящего изобретения субъект характеризуется показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50 (состоящий из интенсивностей 2+ или 3+) в популяциях опухолевых клеток, например, экспрессия hCEACAM5 в процентах, составляет более по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно от 50 до приблизительно до 80, по меньшей мере приблизительно 80 или приблизительно 100 (состоящая из 2+ или 3+ интенсивностей). В различных вариантах осуществления процент экспрессии hCEACAM5 составляет по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 80% в популяции опухолевых клеток, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или приблизительно 100% в популяции опухолевых клеток. В различных вариантах осуществления рак представляет собой неплосококлеточную немелкоклеточную карциному легкого, при которой на высоком уровне экспрессируется hCEACAM5 по меньшей мере в приблизительно 50%, по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или приблизительно 100% популяции опухолевых клеток.

В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят внутривенно, например, путем внутривенной инфузии.

В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят со скоростью, составляющей 2,5 мг/мин. в течение первых 30 минут. В различных вариантах осуществления после приблизительно 30 минут скорость введения антитела повышают до 5 мг/мин.

В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят при уровне дозы 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 или 210 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта. В соответствии с вариантом осуществления иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят при уровне дозы 100 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта, который соответствует максимально переносимой дозе (MTD), определенной на протяжении фазы повышения дозы.

В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в дозе от приблизительно 2,5 мг/м² до приблизительно 5 мг/м². Например, антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в течение одного часа в дозе от приблизительно 2,5 мг/м² до приблизительно 5 мг/м². Доза включает 2,5 мг/м² антитела, 5 мг/м² антитела и все дозы от 2,5 мг/м² до 5 мг/м², например, 2,75, 3, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,25, 4,5 и 4,75 мг/м². В различных вариантах осуществления площадь поверхности тела рассчитывается с применением роста и фактической массы тела субъекта.

В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят каждые 14 дней. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят каждые три недели.

В варианте осуществления в настоящем изобретении предусмотрен иммуноконъюгат huMAb2-3-SPDB-DM4 для применения в лечении неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQNSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где иммуноконъюгат huMAb2-3-SPDB-DM4 вводят каждые две недели при уровне дозы 100 мг/м².

В варианте осуществления в настоящем изобретении предусмотрен иммуноконъюгат huMAb2-3-SPDB-DM4 для применения в лечении неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQNSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где иммуноконъюгат huMAb2-3-SPDB-DM4 вводят каждые три недели при уровне дозы 100 мг/м².

В другом варианте осуществления в настоящем изобретении предусмотрен иммуноконъюгат huMAb2-3-SPDB-DM4 для применения в лечении неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQNSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где иммуноконъюгат huMAb2-3-SPDB-DM4 вводят при первом уровне дозы 150 мг/м² или 170 мг/м² и затем каждые две недели при уровне дозы 100 мг/м².

В различных вариантах осуществления перед введением антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело субъекту вводят средство для премедикации. Например, средство для премедикации представляет собой антагонист Н1-гистаминового рецептора.

В различных вариантах осуществления антагонист Н1-гистаминового рецептора представляет собой дифенилгидрамин или дексхлорфенирамин.

В различных вариантах осуществления субъект ранее подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого. Например, субъект предварительно подвергался интенсивному и/или неэффективному лечению средством или лекарственным средством. В различных вариантах осуществления настоящего изобретения средство или лекарственное средство выбраны из группы, состоящей из: химиотерапевтического средства, ингибитора ангиогенеза, ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитора рецептора тирозинкиназы (ROS1) и ингибитора контрольных точек иммунного ответа. В различных вариантах осуществления настоящего изобретения ингибитор контрольных точек иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1 и/или ингибитор PD-L1.

В некоторых вариантах осуществления антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, для применения, описанного выше, прогрессирование по меньшей мере одного симптома рака снижается, замедляется, останавливается или иным образом уменьшается. В определенных аспектах данных вариантов осуществления скорость роста опухоли или размер опухоли снижаются после лечения антителом. В других аспектах данных вариантов осуществления профиль экспрессии, интенсивность и доля экспрессирующих клеток указывают на снижение, замедление или остановку проявления симптомов рака.

В настоящем изобретении предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая антитело, описанное в данном документе, или иммуноконъюгат, содержащий антитело, и фармацевтически приемлемый носитель.

В настоящем изобретении предусмотрен иммуноконъюгат для применения в лечении рака, характеризующегося высокими уровнями родственной раковоэмбриональному антигену молекулы клеточной адгезии, у субъекта, нуждающегося в этом, где иммуноконъюгат предусматривает конъюгат антитела и лекарственного средства (ADC), который специфически связывает hCEACAM5 и содержит антитело, как описано выше, где прогрессирование по меньшей мере одного симптома рака снижается, замедляется или иным образом уменьшается.

В настоящем изобретении предусмотрен иммуноконъюгат для применения в лечении NSQ NSCLC у субъекта, нуждающегося в этом, где иммуноконъюгат содержит ADC, который специфически связывает hCEACAM5 и содержит антитело, как описано выше, где прогрессирование по меньшей мере одного симптома рака снижается, замедляется или иным образом уменьшается.

В настоящем изобретении предусмотрен иммуноконъюгат для применения в лечении субъекта, который представляет собой субъекта, предварительно подвергавшегося интенсивному лечению, в организме которого с высокими уровнями экспрессируется родственная раковоэмбриональному антигену молекула клеточной адгезии, где иммуноконъюгат содержит ADC, который специфически связывает hCEACAM5 и содержит антитело, как описано выше, где прогрессирование по меньшей мере одного симптома рака снижается, замедляется или иным образом уменьшается.

В различных вариантах осуществления иммуноконъюгат содержит антитело huMAb2-3,

при этом средство для подавления роста предусматривает DM4; и при этом линкер предусматривает SPDB. В различных вариантах осуществления ADC содержит huMAb2-3-SPDB-DM4.

В различных вариантах осуществления скорость роста опухоли или размер опухоли снижаются после лечения иммуноконъюгатом.

В различных вариантах осуществления профиль экспрессии, интенсивность и доля экспрессирующих клеток указывают на снижение, замедление или остановку проявления симптомов рака.

В настоящем изобретении предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая антитело, описанное в данном документе, или описанный иммуноконъюгат и фармацевтически приемлемый носитель.

В настоящем изобретении предусмотрен способ лечения рака, характеризующегося высокими уровнями родственных раковоэмбриональному антигену молекулы клеточной адгезии 5, у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ, включает введение антитела, которое специфически связывает hCEACAM5, где антитело содержит VH и VL, где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7.

В настоящем изобретении предусмотрен способ лечения NSQ NSCLC у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ включает введение антитела, которое специфически связывает hCEACAM5, где антитело содержит VH и VL, где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7.

В настоящем изобретении предусмотрен способ лечения субъекта, который предварительно подвергался лечению противораковым терапевтическим средством, где антитело специфически связывает hCEACAM5, где антитело содержит VH и VL, где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7. В определенных вариантах осуществления субъект представляет собой субъекта, в организме которого с высокими уровнями экспрессируется родственная раковоэмбриональному антигену молекула клеточной адгезии. В других вариантах осуществления субъект предварительно подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого. В других вариантах осуществления средство или лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из: химиотерапевтического средства, ингибитора ангиогенеза, ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитора рецептора тирозинкиназы (ROS1) и ингибитора контрольных точек иммунного ответа. В определенных аспектах данных вариантов осуществления ингибитор контрольных точек иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1 и/или ингибитор PD-L1.

В различных вариантах осуществления способов, описанных выше, рак представляет собой NSQ NSCLC.

В различных вариантах осуществления способа VH содержит SEQ ID NO: 1. В различных вариантах осуществления способа тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8.

В различных вариантах осуществления способа VL содержит SEQ ID NO: 2. В различных вариантах осуществления способа легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9.

В различных вариантах осуществления способа антитело является конъюгированным или связанным с по меньшей мере одним средством для подавления роста. Например, средство для подавления роста представляет собой цитотоксическое средство.

В различных вариантах осуществления способа средство для подавления роста выбрано из группы, состоящей из химиотерапевтических средств, ферментов, антибиотиков и токсинов, таких как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины, таксоидов, алкалоидов барвинка, таксанов, майтанзиноида или аналогов майтанзиноида, производных томаймицина или пирролбензодиазепина, производных криптофицина, производных лептомицина, аналогов ауристатина и доластатина, пролекарств, ингибиторов топоизомеразы II, алкилирующих ДНК средств, антитубулиновых средств и аналогов CC-1065 или CC-1065. В различных вариантах осуществления способа средство для подавления роста представляет собой DM1 или DM4. Например, средство для подавления роста представляет собой DM4.

В различных вариантах осуществления способа антитело ковалентно присоединено посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста. В различных вариантах осуществления способа линкер выбран из группы, состоящей из SPDB, сульфо-SPDB и SMCC. В одном варианте осуществления линкер представляет собой SPDB.

В различных вариантах осуществления способа антитело представляет собой huMAb2-3. В различных вариантах осуществления способа субъект характеризуется показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50 (состоящая из интенсивностей 2+ и 3+) в популяциях опухолевых клеток. Например, экспрессия hCEACAM5 в процентах больше или равна по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере от приблизительно 50 до приблизительно 80, по меньшей мере приблизительно 80 или приблизительно 100 (состоящая из интенсивностей 2+ и 3+). В различных вариантах осуществления процент экспрессии hCEACAM5 составляет по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 80% популяции опухолевых клеток, по меньшей мере приблизительно 80% или приблизительно 100% популяции опухолевых клеток. В различных вариантах осуществления рак представляет собой неплосококлеточную немелкоклеточную карциному легкого, при которой на высоком уровне экспрессируется hCEACAM5 по меньшей мере в приблизительно 50%, по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 80% или приблизительно 100% популяции опухолевых клеток.

В различных вариантах осуществления антитело вводят внутривенно, например, путем внутривенной инфузии.

В различных вариантах осуществления способа антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят со скоростью, составляющей 2,5 мг/мин. в течение первых 30 минут. В различных вариантах осуществления способа после 30 минут скорость введения антитела повышают до 5 мг/мин.

В различных вариантах осуществления способа антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят при уровне дозы 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 или 210 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта. В различных вариантах осуществления способа антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в дозе от приблизительно 2,5 мг/м² до приблизительно 5 мг/м². Например, антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в течение одного часа в дозе от приблизительно 2,5 мг/м² до приблизительно 5 мг/м². Доза включает 2,5 мг/м² антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, 5 мг/м² антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, и все дозы от 2,5 мг/м² до 5 мг/м², например, 2,75, 3, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,25, 4,5 и 4,75 мг/м². В различных вариантах осуществления площадь поверхности тела рассчитывается с применением роста и фактической массы тела субъекта.

В различных вариантах осуществления способа антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят каждые 14 дней. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят каждые три недели.

В различных вариантах осуществления способа перед введением антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, субъекту вводят средство для премедикации, например, в случае премедикации субъекта антагонистом H1-гистаминовых рецепторов. В различных вариантах осуществления способа антагонист Н1-гистаминового рецептора представляет собой дифенилгидрамин или дексхлорфенирамин.

В различных вариантах осуществления способа субъекта ранее подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого. Например, средство или лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из: химиотерапевтического средства, ингибитора ангиогенеза, ингибитора EGFR, ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитора рецептора тирозинкиназы (ROS1) и ингибитора контрольных точек иммунного ответа. Например, ингибитор контрольных точек иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1 и/или ингибитор PD-L1.

В некоторых вариантах осуществления способа, описанного выше, прогрессирование по меньшей мере одного симптома рака снижается, замедляется, останавливается или иным образом уменьшается. В определенных аспектах данных вариантов осуществления скорость роста опухоли или размер опухоли снижаются после лечения антителом. В других аспектах данных вариантов осуществления профиль экспрессии, интенсивность и доля экспрессирующих клеток указывают на снижение, замедление или остановку проявления симптомов рака.

В настоящем изобретении предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая антитело, описанное в данном документе, или иммуноконъюгат, содержащий антитело, и фармацевтически приемлемый носитель.

В различных вариантах осуществления способа антитело вводят в качестве ADC, который специфически связывает hCEACAM5 и предусматривает любое антитело, описанное в данном документе, где прогрессирование по меньшей мере одного симптома рака снижается, замедляется, останавливается или иным образом уменьшается после введения/лечения ADC.

В различных вариантах осуществления способа ADC содержит антитело huMAb2-3;

при этом средство для подавления роста предусматривает DM4; и при этом линкер предусматривает SPDB. В различных вариантах осуществления ADC содержит huMAb2-3-SPDB-DM4.

В различных вариантах осуществления скорость роста опухоли и/или размер опухоли снижаются после лечения антителом и/или иммуноконъюгатом.

В различных вариантах осуществления способа профиль экспрессии, интенсивность и доля экспрессирующих клеток указывают на снижение, замедление или остановку проявления симптомов рака после лечения антителом и/или иммуноконъюгатом.

В различных вариантах осуществления способа антитело и/или иммуноконъюгат вводят в качестве фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фиг. 1A, 1B и 1C показаны примеры интенсивностей окрашивания 1+, 2+, 3+ соответственно.

На фиг. 2 показана гистограмма наибольшего относительного уменьшения размера опухоли у пациентов, подвергавшихся лечению с помощью huMAb2-3-SPDB-DM4, в соответствии с категорией централизованной экспрессии CEACAM5 в архивном образце. Экспрессия CEACAM5 (2+/3+) пациентов составляет <50%, от 50% до 80% или ≥ или. PR означает частичный ответ. SD означает стабильное заболевание. PD означает прогрессирующее заболевание.

На фиг. 3 показано наибольшее относительное уменьшени размера опухоли, наблюдаемое у 32 пациентов, подвергавшихся лечению в когорте с высокими уровнями экспрессии CEACAM5 (легкое), и у пациентов в когорте, у которых с умеренными уровнями происходит экспрессия. Экспрессия CEACAM5 (2+/3+) пациентов составляет <50% или ≥50%. PR означает частичный ответ. SD означает стабильное заболевание. PD означает прогрессирующее заболевание.

На фиг. 4 показано время до прогрессирования заболевания (TTP) у 32 пациентов, подвергавшихся лечению в когорте, в организме которых с высокими уровнями происходит экспрессия CEACAM5 (когорта легкого).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции и способы применения этих композиций для лечения NSQ NSCLC и улучшения в отношении по меньшей мере одного симптома заболевания. Эти композиции содержат по меньшей мере одно антитело, которое специфически связывает (CEACAM5), например, антитело представляет собой антитело huMAb2-3. ADC huMAb2-3-SPDB-DM4 представляет собой иммуноконъюгат, объединяющий антитело huMAb2-3 (антитело к CEACAM5) и производное майтанзиноида 4 (DM4), эффективное антимикотическое средство, которое подавляет сборку микротрубочек. DM4 ковалентно связано с huMAb2-3 посредством оптимизированного линкера SPDB [N-сукцинимидил-4-(2-пиридилдитио)-бутирата], который является стабильным в плазме крови и расщепляемым внутри клеток. После связывания и интернализации в целевых раковых клетках huMAb2-3-SPDB-DM4 разрушается, высвобождая цитотоксические метаболиты DM4.

Применяемое в данном документе выражение "рак, при котором с высокими уровнями продуцируется CEACAM5" относится к нескольким типам рака, в том числе раку легкого. В некоторых вариантах осуществления рак легкого представляет собой неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легкого. В определенных вариантах осуществления субъекты, в организме которых с высокими уровнями экспрессируется CEACAM5, имеют интенсивность, составляющую более чем 2+, в по меньшей мере 50% популяции экспрессирующих опухолевых клеток. Субъекты, в организме которых с высокими уровнями экспрессируется CEACAM5, соответствуют ~20% случаев рака легкого. ADC, описанный в данном документе, содержащий цитотоксическое средство DM4, линкер SPDB и гуманизированное антитело huMAb2-3, вводят в рамках исследования по проверке концепции. Данные демонстрируют, что ADC достиг проверки концепции в подгруппе рака легкого.

ADC анализировали в исследовании 1/2 фазы у субъектов, в организме которых с высокими уровнями экспрессируется CEACAM5, предварительно подвергавшихся интенсивному лечению. ADC демонстрировал конкурентную общую частоту ответов (ORR) и продолжительность ответа (DoR) для установки 3L. Наиболее частыми нежелательными лекарственными реакциями (ADR) были офтальмологическая токсичность (обратимая без прекращения лечения) и минимальная гематологическая токсичность/токсичность со стороны нервной системы.

Применяемое в данном документе выражение "предварительно подвергавшийся интенсивному лечению" относится к предварительному лечению субъекта в течение более чем 1 месяца. В других вариантах осуществления субъект, который предварительно подвергался интенсивному лечению, подвергался лечению в течение более чем 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 месяцев. В определенных вариантах осуществления предварительное лечение представляет собой введение одного или более противораковых терапевтических средств.

Немелкоклеточный рак легкого (NSCLC)

Немелкоклеточный рак легкого представляет собой заболевание, при котором злокачественные (раковые) клетки образуются в тканях легкого. Курение является главной причиной заболевания. Это тип эпителиального рака легкого, отличного от мелкоклеточной карциномы легкого. Существуют несколько типов немелкоклеточного рака легкого. Каждый тип немелкоклеточного рака легкого характеризуется разными видами раковых клеток. Раковые клетки каждого типа растут и распространяются различным образом. Типы немелкоклеточного рака легкого называют в зависимости от видов клеток, обнаруженных в случае рака, и в зависимости от того, как клетки выглядят под микроскопом. (1) Плоскоклеточная карцинома. Рак, распространение которого начинается из плоских клеток, которые представляют собой тонкие, плоские клетки, которые выглядят как чешуя рыбы. Ее также называют эпидермоидной карциномой. (2) Крупноклеточная карцинома. Рак, распространение которого может начинаться из нескольких типов больших клеток. И (3) аденокарцинома. Рак, распространение которого начинается из клеток, которые выстилают альвеолы и вырабатывают вещества, такие как слизь.

Эффективные цитотоксические средства, селективно направленные на опухолевые клетки, с применением ADC, как недавно было показано, являются частью эффективной стратегии лечения рака, как продемонстрировано недавними утверждениями брентуксимаба ведотина для лечения лимфомы Ходжкина и трастузумаба эмтанзина (T-DM1) для лечения рецидивирующего метастатического HER2+ рака молочной железы. В случае многих других злокачественных заболеваний с нереализованной медицинской потребностью можно было бы получить пользу от таких возможных способов лечения. Механизм действия ADC начинается с его связывания со специфическим антигеном, в достаточной степени экспрессируемым на опухолевых клетках для достижения селективной и эффективной интернализации лекарственного средства.

Радикальное хирургическое вмешательство является стандартом лечения для пациентов, соответствующих стадии I NSCLC (например, пульмонэктомия, лобэктомия, сегментэктомия или клиновидная резекция, циркулярная резекция). Лечение вспомогательными лекарственными средствами следует предлагать только в качестве части исследовательского испытания. Вспомогательная химиотерапия на основе цисплатина стадии II и IIIA остается общепринятым стандартом для опухолей NSCLC, подвергнутых полной резекции. Другие химиотерапевтические средства, применяемые в комбинации с цисплатином или друг с другом, могут включать карбоплатин, паклитаксел (Таксол), паклитаксел, стабилизированный альбумином (наб-паклитаксел, Абраксан), доцетаксел (Таксотер), гемцитабин (Гемзар), винорелбин (Навельбин), иринотекан (Камптозар), этопозид (VP-16), винбластин и пеметрексед (Алимта). Дополнительно можно применять лучевую терапию у пациентов с лимфатическими узлами N2. У пациентов на поздних стадиях IIIB/IV или с неоперабельным NSCLC лечение может включать несколько циклов химиотерапии на основе цисплатина с цитотоксическим средством 3-го поколения или цитостатическим лекарственным средством (к EGFR, к VEGFR).

Средства лечения видов рака, в том числе видов рака легкого, могут включать ингибиторы ангиогенеза, ингибиторы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибиторы киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибиторы рецептора тирозинкиназы ROS1 и ингибиторы контрольных точек иммунного ответа.

Ингибиторы ангиогенеза могут включать без ограничения акситиниб (Инлита), бевацизумаб (Авастин), кабозантиниб (Кометрик), эверолимус (Афинитор, Зортресс), леналидомид (Ревлимид), пазопаниб (Вотриент), рамуцирумаб (Цирамза), регорафениб (Стиварга), сорафениб (Нексавар), сунитиниб (Сутент), талидомид (Синовир, Таломид), вандетаниб (Капрелса), афлиберцепт и зив-афлиберцепт (Залтрап).

Ингибиторы рецептора эпидермального фактора роста могут включать без исключения гефитиниб (Иресса), эрлотиниб (Тарцева), лапатиниб (Тайкерб), цетуксимаб (Эрбитукс), нератиниб (Нерлинкс), осимертиниб (Тагриссо), панитумумаб (Вектибикс), вандетаниб (Капрельса), нецитумумаб (Протразза) и дакомитиниб (Визимпро).

Ингибиторы контрольных точек иммунного ответа могут включать без ограничения средства, связывающие рецептор программируемой смерти 1 (PD-1) (например, пембролизумаб, ниволумаб, цемиплимаб), средства, связывающие лиганд-1 программируемой смерти (PD-L1) (например, атезолизумаб, дурвалумаб), средства, связывающие CTLA-4 (например, ипилимумаб), средства, связывающие OX40 или OX40L, средства, связывающие аденозиновый рецептор А2А, средства, связывающие B7-H3, средства, связывающие B7-H4, средства, связывающие BTLA, средства, связывающие индоламин-2,3-диоксигеназу, средства, связывающие иммуноглобулиноподобный рецептор клеток-киллеров (KIR), средства, связывающие ген-3 активации лимфоцитов (LAG-3), средства, связывающие оксидазную изоформу никотинамидадениндинуклеотидфосфата НАДФ (NOX2), средства, связывающие домен иммуноглобулина Т-клеток и домен 3 муцина (TIM-3), средства, связывающие V-доменный Ig-супрессор активации Т-клеток (VISTA), средства, связывающие глюкокортикоид-индуцированный TNFR-родственный ген (GITR), и средства, связывающие лектин 7 иммуноглобулинового типа, связывающийся с сиаловой кислотой (SIGLEC7).

CEA и CEACAM

Раковоэмбриональный антиген (CEA) представляет собой гликопротеин, участвующий в адгезии клеток. CEA впервые определили в 1965 году (Gold and Freedman, J Exp Med, 121, 439, 1965) как белок, обычно экспрессируемый кишечником плода в течение первых шести месяцев беременности, и обнаруженный при раке поджелудочной железы, печени и толстой кишки. Семейство CEA относится к суперсемейству иммуноглобулинов. Семейство СЕА, которое состоит из 18 генов, подразделяется на две подгруппы белков: подгруппа родственных раковоэмбриональному антигену молекул клеточной адгезии (CEACAM) и подгруппа гликопротеинов, специфических для периода беременности.

У людей подгруппа CEACAM состоит из 7 представителей: CEACAM1, CEACAM3, CEACAM4, CEACAM5, CEACAM6, CEACAM7 и CEACAM8. Многочисленные исследования продемонстрировали, что CEACAM5, идентичный первоначально определенному CEA, с высокими уровнями экспрессируется на поверхности опухолевых клеток толстой кишки, желудка, легкого, молочной железы, предстательной железы, яичника, шейки матки и мочевого пузыря и на низких уровнях экспрессируется в нескольких нормальных эпителиальных тканях, например в столбчатых эпителиальных клетках и бокаловидных клетках в толстой кишке, слизистых шеечных клетках в желудке и плоских эпителиальных клетках в пищеводе и шейке матки. Таким образом, CEA-CAM5 могут представлять собой терапевтическую мишень, подходящую для подходов, обеспечивающих опухолеспецифическое нацеливание, например подходов с использованием иммуноконъюгатов. В настоящем изобретении предусмотрены антитела, направленные против CEACAM5, и продемонстрировано, что они могут быть конъюгированы с цитотоксическими средствами с применением линкера in vivo и безопасно вводиться субъектам, имеющим NSQ NSCLC. Данные демонстрируют, что экспрессия hCEACAM5 в различных раковых клетках при раке легкого в процентах составляла более приблизительно 50, от приблизительно 50 до приблизительно 80 или приблизительно 100 (состоящая из интенсивностей 2+ и 3+) или равнялась указанным значениям. Внеклеточные домены представителей семейства CEACAM состоят из повторяющихся иммуноглобулиноподобных (Ig-подобных) доменов, которые разделили на 3 типа, A, B и N, в соответствии с гомологиями последовательностей. CEACAM5 содержит семь таких доменов, а именно N, A1, B1, A2, B2, A3 и B3.

Домены A1, A2 и A3 CEACAM5, с одной стороны, и домены B1, B2 и B3 CEACAM5 с другой стороны, демонстрируют высокие уровни гомологии последовательностей, домены A CEACAM5 человека, представляющие от 84% до 87% попарных сходств последовательностей, и домены B - от 69% до 80%. Кроме того, другие представители CEACAM человека, представляющие домены А и/или В в их структуре, а именно CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 и CEACAM8, демонстрируют гомологию с CEACAM5 человека. В частности домены А и В белка CEACAM6 человека отображают уровни гомологии последовательностей с доменами А1 и А3 и любыми из доменов В1 и В3 CEACAM5 человека соответственно, которые даже выше, чем наблюдаемые среди доменов А и доменов В CEA-CAM5 человека.

Многочисленные антитела к CEA получали ввиду диагностических и терапевтических целей, направленных на CEA. Специфичность к родственным антигенам всегда упоминали в качестве опасения в данной области техники, как, например, Sharkey et al. (1990, Cancer Research 50, 2823). Вследствие вышеупомянутых уровней гомологии некоторые из ранее описываемых антител могут демонстрировать связывание с повторяющимися эпитопами CEACAM5, представленными в разных доменах иммуноглобулина, демонстрируют перекрестную реактивность по отношению к другим представителям CEACAM, таким как CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 или CEACAM8, не обладая специфичностью к CEACAM5. Специфичность антитела к CEACAM5 является необходимой ввиду средств терапии, направленных на CEА так, что оно связывается с опухолевыми клетками человека, экспрессирующими CEACAM5, но не связывается с некоторыми нормальными тканями, экспрессирующими другие представители CEACAM. Примечательно, что CEACAM1, CEACAM6 и CEACAM8 были описаны как экспрессируемые нейтрофилами человекоподобных приматов и любых приматов, отличных от человека, где, как было показано, они регулируют гранулопоэз и играют роль в иммунном ответе.

Конъюгат антитела и лекарственного средства к CEACAM6 описывали как конъюгат майтанзиноида и антитела к CEACAM6, разработанное Genentech (Strickland et al, 2009 J Pathol, 218, 380), которое, как было показано, индуцирует CEACAM6-зависимую гемопоэтическую токсичность у любых приматов, отличных от человека. Данная токсичность, связанная с накоплением конъюгата антитела и лекарственного средства в костном мозге и истощением гранулоцитов и их клеток-предшественников, считалась авторами главной проблемой безопасности. Так, более точно, для терапевтических целей перекрестная реактивность антитела к CEACAM5 с CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 или CEACAM8 может снижать терапевтический индекс соединения путем повышения токсичности на нормальных тканях. Таким образом, получение антител, специфически направленных на CEACAM5, которые не будут перекрестно реагировать с другими молекулами семейства CEACAM, обеспечивает сильное преимущество, особенно для применения в качестве конъюгата антитела и лекарственного средства (ADC) или с любым другим механизмом действия, приводящим к уничтожению клеток-мишеней.

Кроме того, поскольку описано, что CEACAM5 экспрессируется, хоть и на низком уровне, в некоторых нормальных клеточных тканях, критически важной является разработка антител к CEACAM5, способных к связыванию с CEACAM5 человека, а также с CEACAM5 яванского макака (Macaca fascicularis), поскольку такие антитела можно легко тестировать в доклинических исследованиях токсичности на яванских макаках для оценки их профиля безопасности. Поскольку было показано, что эффективность терапевтических антител может зависеть от локализации эпитопа в мишени, как в случае функциональных антител (Doern et al. 2009, J. Biol. Chem 284 10254), так и в случае, где участвуют эффектор или функции (Beers et al. Semin Hematol 47:107-114), должно быть показано, что перекрестно-реактивное антитело человека/обезьяны связывает эпитопы в том же повторяющемся Ig-подобном гомологичном домене белков человека и яванского макака.

Сочетание потребности в межвидовой перекрестной реактивности таких антител со специфичностью для CEACAM5 человека и Macaca fascicularis, т. е. без перекрестной реактивности с другими представителями CEACAM Macaca fascicularis и человека, добавляет дополнительную степень сложности, выраженную в общих уровнях гомологии последовательностей между белками CEACAM человека и Macaca fascicularis.

Действительно, глобальное попарное выравнивание последовательности CEACAM5 Macaca fascicularis с последовательностью CEACAM5 человека (AAA51967.1/GI:180223, 702 аминокислоты) указало только на 78,5% идентичность. Были клонированы гены CEACAM1, CEACAM5 и CEACAM6 Macaca fascicularis и выполнено глобальное выравнивание доменов A, B и N человека и Macaca fascicularis. Это выравнивание прогнозировало, что существует только несколько областей, если таковые имеются, для локализации идеального эпитопа, который был бы общим для CEACAM5 человека и макаки и не был бы общим с любыми другими представителями семейства. По этим причинам ожидалось, что разрабатывающиеся антитела, перекрестно реактивные между CEACAM5 человека и Macaca fascicu-laris без перекрестной реактивности с другими представителями CEACAM человека или Macaca fascicularis, имеют низкую вероятность успеха. Примечательно, ранее описанные антитела к CEACAM5 почти никогда не были задокументированы в отношении перекрестной реактивности Macaca fascicularis за очень немногими исключениями (MT111).

Антитела к CEACAM5 человека уже применяли в клинических испытаниях, такие как лабетузумаб от Immunomedics (также известен как hMN14, Sharkey et al, 1995, Cancer Research 55, 5935). Это антитело, как было показано, не связывается с родственными антигенами, но не реагирует перекрестно с CEACAM5 от Macaca fascicularis. Примечательно, антитело MT111 от Micromet (также известное как антитело MEDI-565 от MedImmune) представляет собой биспецифическое антитело, связывающееся с CEA-CAM5 человека и CD3 человека (Peng et al., PLoS ONE 7(5): e3641; WO 2007/071426). Считается, что MT111 получили путем слияния одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv) антитела, который распознает CEACAM5 человека и яванского макака, с scFv антитела, который распознает CD3 человека. Также сообщалось о том, что MT111 не связывает других представителей семейства CEACAM (Peng et al., PLoS ONE 7(5): e3641). MT111 связывается с конформационным эпитопом в домене A2 CEACAM5 человека. Этот конформационный эпитоп пропущен в сплайс-варианте CEACAM5 человека, который экспрессируется одновременно с полноразмерным CEACAM5 на опухолях (Peng et al., PLoS ONE 7(5): e3641). В дополнение, доказательства того, что MT111 связывается с тем же эпитопом в CEACAM5 Macaca fascicularis, отсутствуют.

В попытке получить новые антитела к поверхностному белку CEACAM5 с оптимальными характеристиками для терапевтических целей мышей иммунизировали рекомбинантными белками и опухолевыми клетками. Сотни гибридом подвергали скринингу с применением ELISA на нескольких рекомбинантных белках семейства CEACAM и проточной цитометрии с соответствующими линиями клеток для отбора только иммуноглобулинов с преимущественным профилем. Неожиданно, оказалось возможным отобрать клоны гибридомы и получить соответствующие зрелые IgG, которые имеют все требуемые признаки. Они специфически связываются с доменом A3-B3 CEACAM5 человека с высокой аффинностью и не распознают белки CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 и CEACAM8 человека. В клеточном окружении эти антитела показывают высокую аффинность для опухолевых клеток (в наномолярном диапазоне). Кроме того, эти антитела также связываются с белком CEACAM5 Macaca fascicularis с соотношением аффинности обезьяна/человек менее чем или равным 10.

Путем нацеливания на A3-B3 домен CEACAM5 эти антитела повышают потенциал нацеливания на опухоль, поскольку они обладают способностью связываться как с полноразмерным CEACAM5 человека, так и с его сплайс-вариантом, идентифицированным Peng et al. см.

В конечном итоге, CEACAM5 описан в литературе как слабо поглощаемый поверхностный белок (рассмотрен в Schmidt et al, 2008, Cancer Immunol. Immunother. 57, 1879) и, следовательно, не может быть благоприятной мишенью для конъюгатов антитела и лекарственного средства. Несмотря на то, о чем сообщалось в предыдущем уровне техники, авторы настоящего изобретения продемонстрировали, что антитела, полученные ими, способны поглощать комплекс CEACAM5-антитело после связывания и индуцировать цитотоксичную активность на опухолевых клетках in vitro в комбинации с цитотоксическим средством. Те же антитела в комбинации с цитотоксическим средством также способны заметно подавлять рост опухоли у мышей, несущих первичные опухоли толстой кишки и желудка человека. См. WO2014079886, который включен в данный документ во всей своей полноте.

Определения

Применяемый в данном документе термин "приблизительно" в количественных терминах относится к величине, составляющей плюс или минус 10% от значения, которое он изменяет (с округлением к ближайшему целому числу, если значение не является делимым, таким как число молекул или нуклеотидов). Например, фраза "приблизительно 100 мг" будет охватывать от 90 мг до 110 мг включительно, фраза "приблизительно 2500 мг" будет охватывать от 2250 мг до 2750 мг. При применении процента термин "приблизительно" относится к величине, составляющей плюс или минус 10% относительно этого процента. Например, фраза "приблизительно 20%" будет охватывать 18-22%, а фраза "приблизительно 80%" будет охватывать 72-88% включительно. Кроме того, в тех местах, где выражение "приблизительно" применяется в данном документе в сочетании с количественным термином, следует понимать, что в дополнение к значению плюс или минус 10% также предполагается и описывается точное значение количественного термина. Например, термин "приблизительно 23%" явно предполагает, описывает и включает точно 23%.

Следует отметить, что форма единственного числа относится к одному или нескольким из таких объектов; например, под термином "симптом" понимают один или несколько симптомов. В связи с этим формы единственного числа, термины "один или несколько" и "по меньшей мере один" могут применяться в данном документе взаимозаменяемо.

Кроме того, выражение "и/или", применяемое в данном документе, следует рассматривать в качестве конкретного раскрытия каждого из двух указанных признаков или компонентов с другим или без другого. Таким образом, термин "и/или", применяемый во фразе, такой как "А и/или В", в данном документе, предназначен для включения "А и В", "А или В", "А" (отдельно) и "В" (отдельно). Подобным образом термин "и/или", применяемый во фразе, такой как "А, В и/или С", предназначен для охвата каждого из следующих аспектов: А, В и С; A, B или C; A или C; A или B; B или C; A и C; A и B; B и C; A (отдельно); B (отдельно) и C (отдельно).

Следует понимать, что во всех случаях, где аспекты описываются в данном документе словами "содержащий", также предусмотрены иные аналогичные аспекты, описываемые с использованием терминов "состоящий из" и/или "состоящий по сути из".

Применяемый в данном документе термин "CEACAM5" обозначает "родственную раковоэмбриональному антигену молекулу клеточной адгезии 5", также известную как "CD66e" (кластер дифференцировки 66e) или CEA. CEACAM5 представляет собой гликопротеин, участвующий в адгезии клеток. CEACAM5 является экспрессируемым на высоком уровне, в частности, на поверхности опухолевых клеток толстой кишки, желудка, легкого и матки.

Эталонная последовательность полноразмерного CEACAM5 человека, в том числе сигнального пептида (положения 1-34) и пропептида (положения 686-702) доступны из базы данных GenBank под номером доступа AAA51967.1 (SEQ ID NO:52). Пять несинонимичных SNP определяли с частотой выше чем 2% в популяции европеоидов, четыре из них локализованы в домене N (в положениях 80, 83, 112, 113), последний - в домене А2 (в положении 398) CEACAM5 человека (SEQ ID NO:58). В GenBank под номером AAA51967.1 содержится главный гаплотип (I80, V83, I112, I113 и E398).

Последовательность внеклеточного домена CEACAM5 Macaca fascicularis, клонированная авторами настоящего изобретения, раскрыта под SEQ ID NO: 12. См. также WO2014079886, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

SEQ ID NO: 12

QLTIESRPFNVAEGKEVLLLAHNVSQNLFGYIWYKGERVDASRRIGSCVIRTQQITPGPAHSGRETIDFNASLLIQNVTQSDTGSYTIQVIKEDLVNEEATGQFRVYPELPKPYITSNNSNPIEDKDAVALTCEPETQDTTYLWWVNNQSLPVSPRLELSSDNRTLTVFNIPRNDTTSYKCETQNPVSVRRSDPVTLNVLYGPDAPTISPLNTPYRAGEYLNLTCHAASNPTAQYFWFVNGTFQQSTQELFIPNITVNNSGSYMCQAHNSATGLNRTTVTAITVYAELPKPYITSNNSNPIEDKDAVTLTCEPETQDTTYLWWVNNQRLSVSSRLELSNDNRTLTVFNIPRNDTTFYECETQNPVSVRRSDPVTLNVLYGPDAPTISPLNTPYRAGENLNLSCHAASNPAAQYFWFVNGTFQQSTQELFIPNITVNNSGSYMCQAHNSATGLNRTTVTAITVYVELPKPYISSNNSNPIEDKDAVTLTCEPVAENTTYLWWVNNQSLSVSPRLQLSNGNRILTLLSVTRNDTGPYECGIQNSESAKRSDPVTLNVTYGPDTPIISPPDLSYRSGANLNLSCHSDSNPSPQYSWLINGTLRQHTQVLFISKITSNNNGAYACFVSNLATGRNNSIVKNISVSSGDSAPGSSGLSA

"Домен" может представлять собой любую область белка, как правило, определяемую на основании гомологии последовательностей и зачатую связанную с определенным структурным или функциональным единством. Представители семейства CEACAM, как известно, состоят из Ig-подобных доменов. Термин "домен" применяется в этом документе для обозначения отдельных Ig-подобных доменов, таких как "N-домен", либо для группы последовательных доменов, таких как "домен A3-B3".

Доменная организация CEACAM5 человека выглядит следующим образом (на основе данных из GenBank AAA51967.1; SEQ ID NO: 13):

SEQ ID NO: 13 MESPSAPPHRWCIPWQRLLLTASLLTFWNPPTTAKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGERVDGNRQIIGYVIGTQQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRVYPELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPETQDATYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDTASYKCETQNPVSARRSDSVILNVLYGPDAPTISPLNTSYRSGENLNLSCHAASNPPAQYSWFVNGTFQQSTQELFIPNITVNNSGSYTCQAHNSDTGLNRTTVTTITVYAEPPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYECGIQNELSVDHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAASNPPAQYSWLIDGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCQANNSASGHSRTTVKTITVSAELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWVNGQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDARAYVCGIQNSVSANRSDPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRINGIPQQHTQVLFIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGTSPGLSAGATVGIMIGVLVGVALI

Таблица 1A. Домены CEACAM5 человека

Домены CEACAM5 человека Положения в SEQ ID NO: 13 Домен N 35-142 Домен A1 143-237 Домен B1 238-320 Домен A2 321-415 Домен B2 416-498 Домен A3 499-593 Домен B3 594-685

Соответственно, домен A3-B3 CEACAM5 человека состоит из аминокислот в положениях 499-685 из SEQ ID NO:13.

Доменная организация CEACAM5 Macaca fascicularis выглядит следующим образом (на основе клонированной последовательности внеклеточного домена; SEQ ID NO:12).

Таблица 1B. Домены CEACAM5 Macaca fascicularis

Домены CEACAM5 Macaca fascicularis Положения в SEQ ID NO: 12 Домен N-A1-B1 -1-286 Домен A2-B2 -287-464 Домен A3-B3 465-654

Соответственно, домен A3-B3 CEACAM5 Macaca fascicularis состоит из аминокислот в положениях 465-654 из SEQ ID NO:53.

"Кодирующая последовательность" или последовательность, "кодирующая" продукт экспрессии, такой как РНК, полипептид, белок или фермент, представляет собой нуклеотидную последовательность, которая при экспрессии приводит к продуцированию РНК, полипептида, белка или фермента, т. е. нуклеотидная последовательность кодирует аминокислотную последовательность для этого полипептида, белка или фермента. Кодирующая последовательность для белка может содержать инициирующий кодон (обычно ATG) и стоп-кодон.

Применяемые в данном документе ссылки на специфические белки (например, антитела) могут включать полипептид, содержащий нативную аминокислотную последовательность, а также варианты и модифицированные формы, независимо от их происхождения или способа получения. Белок, содержащий нативную аминокислотную последовательность, представляет собой белок, содержащий такую же аминокислотною последовательность, как полученный от природы. Такие белки с нативной последовательностью можно выделять из природного источника или можно получать с помощью стандартных рекомбинантных способов или способов синтеза. Белки с нативной последовательностью специфически охватывают усеченные и растворимые формы природного происхождения, вариантные формы природного происхождения (например, альтернативно сплайсированные формы), аллельные варианты и формы, встречающиеся в природе, в том числе посттрансляционные модификации. Белки с нативной последовательностью включают белки, несущие посттрансляционные модификации, такие как результат гликозилирования, или фосфорилирования, или других модификаций некоторых аминокислотных остатков.

Термин "ген" означает последовательность ДНК, которая кодирует или соответствует конкретной последовательности из аминокислот, которая представляет собой весь или часть одного или нескольких белков или ферментов, и может включать или не включать регуляторные последовательности ДНК, такие как промоторные последовательности, которые определяют, например, условия, при которых ген экспрессируется. Некоторые гены, которые не представляют собой структурные гены, могут транскрибироваться из ДНК в РНК, но не транслируются в аминокислотную последовательность. Другие гены могут функционировать в качестве регуляторов структурных генов или в качестве регуляторов транскрипции ДНК. В частности, термин "ген" может предназначаться для геномной последовательности, кодирующей белок, т. е. последовательности, содержащей последовательности регулятора, промотора, интронов и экзонов.

Процент "идентичности последовательностей" можно определить путем сравнения двух последовательностей, оптимальным образом выровненных в окне сравнения, где часть полинуклеотидной или полипептидной последовательности в окне сравнения может содержать добавления или делеции (т. е. гэпы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит добавлений или делеций) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент рассчитывают путем определения количества положений, в которых в обеих последовательностях встречается идентичное основание нуклеиновой кислоты или идентичный аминокислотный остаток, с получением количества положений с совпадениями, деления количества положений с совпадениями на общее количество положений в окне сравнения и умножения результата на 100 с получением процента идентичности последовательностей. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения проводят путем глобального попарного выравнивания, например, с помощью алгоритма Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970). Процент идентичности последовательностей можно легко определить, например, с применением программы Needle с помощью матрицы BLOSUM62 и следующих параметров: штраф за открытие гэпа=10, штраф за продолжение гэпа=0,5.

"Консервативная аминокислотная замена" представляет собой замену, при которой аминокислотный остаток заменен другим аминокислотным остатком, содержащим R-группу боковой цепи со сходными химическими свойствами (например, зарядом, размером или гидрофобностью). Как правило, консервативная аминокислотная замена практически не будет изменять функциональные свойства белка. Примеры групп аминокислот, которые содержат боковые цепи со сходными химическими свойствами, включают: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатические боковые цепи с гидроксильными группами: серин и треонин; 3) амидосодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислые боковые цепи: аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота; и 7) серосодержащие боковые цепи: цистеин и метионин. Группы консервативной аминокислотной замены можно также определить на основании размера аминокислот.

Настоящее изобретение предусматривает способы, которые включают введение субъекту антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которыей специфически связываются с CEACAM5. Применяемый в данном документе термин "hCEACAM5" означает цитокиновый рецептор человека, который специфически связывает CEACAM5 человека. В определенных вариантах осуществления антитело, которое вводят пациенту, специфически связывается с по меньшей мере одним доменом hCEACAM5.

Исследования проводили для получения, скрининга и отбора специфических антител к CEACAM5 мыши, которые проявляют высокую аффинность к белку CEACAM5 как человека, так и Macaca fascicularis, и которые не являются в значительной степени перекрестно-реактивными в отношении белков CEACAM1, CEACAM6, CEACAM7 и CEACAM8 человека и белков CEACAM1, CEACAM6 и CEACAM8 Macaca fascicularis.

Так называемое "антитело MAb1" содержит:

- вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из последовательности EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGSYIYYLDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARPAYYGNPAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO:14, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-H охватывает положения аминокислот от 1 до 25, CDR1-H охватывает положения аминокислот от 26 до 33, FR2-H охватывает положения аминокислот от 34 до 50, CDR2-H охватывает положения аминокислот от 51 до 58, FR3-H охватывает положения аминокислот от 59 до 96, CDR3-H охватывает положения аминокислот от 97 до 109 и FR4-H охватывает положения аминокислот от 110 до 120, и

- вариабельный домен легкой цепи, состоящий из последовательности DILMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNsYPLYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:15, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-L охватывает положения аминокислот от 1 до 26, CDR1-L охватывает положения аминокислот от 27 до 32, FR2-L охватывает положения аминокислот от 33 до 49, CDR2-L охватывает положения аминокислот от 50 до 52, FR3-L охватывает положения аминокислот от 53 до 88, CDR3-L охватывает положения аминокислот от 89 до 98 и FR4-L охватывает положения аминокислот от 99 до 108.

Так называемое "антитело MAb2" содержит:

- вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из последовательности EVQLQESGGVLVKPGGSLKLSCAASGFvFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVAYIsSgGGiTYFPDTVQGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLKSEDTAIYYCaAHYFGsSGPFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:16, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-H охватывает положения аминокислот от 1 до 25, CDR1-H охватывает положения аминокислот от 26 до 33, FR2-H охватывает положения аминокислот от 34 до 50, CDR2-H охватывает положения аминокислот от 51 до 58, FR3-H охватывает положения аминокислот от 59 до 96, CDR3-H охватывает положения аминокислот от 97 до 109 и FR4-H охватывает положения аминокислот от 110 до 120, и

- вариабельный домен легкой цепи, состоящий из последовательности DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIFSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNTKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO:17, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-L охватывает положения аминокислот от 1 до 26, CDR1-L охватывает положения аминокислот от 27 до 32, FR2-L охватывает положения аминокислот от 33 до 49, CDR2-L охватывает положения аминокислот от 50 до 52, FR3-L охватывает положения аминокислот от 53 до 88, CDR3-L охватывает положения аминокислот от 89 до 97 и FR4-L охватывает положения аминокислот от 98 до 107.

[001] Вариант антитела MAb2 также получали путем введения замены K52R в CDR2-L. Этот вариант, который в данном документе называется "Mab2_K52R", имеет практически ту же аффинность для CEACAM5 человека и Macaca fascicularis, как и MAb2.

[002] Так называемое "антитело MAb3" содержит:

- вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из последовательности EVKLVESGGGLVKPGGSLTLPCAASGFTFSrYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGdtYYPDSVKGRFTVSRDNARNILFLQMSSLRSEDTGMYYCARvnYYdssflDwWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO:18, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-H охватывает положения аминокислот от 1 до 25, CDR1-H охватывает положения аминокислот от 26 до 33, FR2-H охватывает положения аминокислот от 34 до 50, CDR2-H охватывает положения аминокислот от 51 до 57, FR3-H охватывает положения аминокислот от 58 до 95, CDR3-H охватывает положения аминокислот от 96 до 108 и FR4-H охватывает положения аминокислот от 109 до 119, и

- вариабельный домен легкой цепи, состоящий из последовательности DIVMTQSQRFMSTLEGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNnYPLYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:19, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-L охватывает положения аминокислот от 1 до 26, CDR1-L охватывает положения аминокислот от 27 до 32, FR2-L охватывает положения аминокислот от 33 до 49, CDR2-L охватывает положения аминокислот от 50 до 52, FR3-L охватывает положения аминокислот от 53 до 88, CDR3-L охватывает положения аминокислот от 89 до 98 и FR4-L охватывает положения аминокислот от 99 до 108.

[003] Так называемое "антитело MAb4" содержит:

- вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из последовательности EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFtFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVAFIsSyGGrTYYADTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMFYCaAHYFGtSGPFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:20, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-H охватывает положения аминокислот от 1 до 25, CDR1-H охватывает положения аминокислот от 26 до 33, FR2-H охватывает положения аминокислот от 34 до 50, CDR2-H охватывает положения аминокислот от 51 до 58, FR3-H охватывает положения аминокислот от 59 до 96, CDR3-H охватывает положения аминокислот от 97 до 109 и FR4-H охватывает положения аминокислот от 110 до 120, и

- вариабельный домен легкой цепи, состоящий из последовательности DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYFAWYQQKQGKSPQLLVYNaKILAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGiPFTFGSGTKLELK (SEQ ID NO:21, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-L охватывает положения аминокислот от 1 до 26, CDR1-L охватывает положения аминокислот от 27 до 32, FR2-L охватывает положения аминокислот от 33 до 49, CDR2-L охватывает положения аминокислот от 50 до 52, FR3-L охватывает положения аминокислот от 53 до 88, CDR3-L охватывает положения аминокислот от 89 до 97 и FR4-L охватывает положения аминокислот от 98 до 107.

[004] Так называемое "антитело MAb5" содержит:

- вариабельный домен тяжелой цепи, состоящий из последовательности ELQLVESGGVLVKPGGSLKLSCAASGFaFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVTYInSgGGiTYYPDTVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLKSEDTAIYYCtAHYFGsSGPFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:22, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-H охватывает положения аминокислот от 1 до 25, CDR1-H охватывает положения аминокислот от 26 до 33, FR2-H охватывает положения аминокислот от 34 до 50, CDR2-H охватывает положения аминокислот от 51 до 58, FR3-H охватывает положения аминокислот от 59 до 96, CDR3-H охватывает положения аминокислот от 97 до 109 и FR4-H охватывает положения аминокислот от 110 до 120, и

- вариабельный домен легкой цепи, состоящий из последовательности DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNaKTLTEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGtPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO:23, с CDR, показанными символами с полужирным начертанием), в которой FR1-L охватывает положения аминокислот от 1 до 26, CDR1-L охватывает положения аминокислот от 27 до 32, FR2-L охватывает положения аминокислот от 33 до 49, CDR2-L охватывает положения аминокислот от 50 до 52, FR3-L охватывает положения аминокислот от 53 до 88, CDR3-L охватывает положения аминокислот от 89 до 97 и FR4-L охватывает положения аминокислот от 98 до 107.

Множественные вариации и варианты этих антител описаны в WO2014079886, который включен посредством ссылки во всей своей полноте. В варианте осуществления антитело по настоящему изобретению представляет собой антитело huMAb2-3 или его вариант, т. е. выделенное антитело, которое связывается с доменом A3-B3 белков CEACAM5 человека и Macaca fascicularis и которое содержит:

a) тяжелую цепь, состоящую из последовательности под SEQ ID NO:8 или последовательности, на по меньшей мере 85% идентичной к ней; или

b) легкую цепь, состоящую из последовательности под SEQ ID NO:9 или последовательности, на по меньшей мере 85% идентичной к ней, или тяжелую цепь и легкую цепь.

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к антителу, которое связывается с CEACAM5 человека и Macaca fascicularis. В варианте осуществления антитело по настоящему изобретению связывается с доменами A3-B3 CEACAM5 человека и Macaca fascicularis. Более конкретно, антитело может связываться с доменами A3-B3 человека и Macaca fascicularis вне зависимости от того, экспрессируется ли он в виде выделенной формы, или присутствует в виде растворимого внеклеточного домена или заякоренного в мембране, полноразмерного белка CEACAM5.

Специфичность антител для домена A3-B3 CEACAM5 человека является преимущественной, поскольку не сообщалось о SNP с частотой выше чем 2% в популяции европеоидов в этом домене, что минимизирует риск того, что эпитоп(эпитопы) антител на CEACAM5 может(могут) быть изменен(изменены) в части популяции.

В соответствии с вариантом осуществления антитело в соответствии с настоящим изобретением является специфичным для поверхностных белков CEACAM5 человека и Macaca fascicularis. В варианте осуществления антитело по настоящему изобретению не связывается с белками CEACAM1 человека, CEACAM6 человека, CEACAM7 человека, CEACAM8 человека, CEACAM1 Macaca fascicularis, CEACAM6 Macaca fascicularis и CEACAM8 Macaca fascicularis или не является в значительной степени перекрестно-реактивным в их отношении.

В различных вариантах осуществления антитело не связывается с внеклеточным доменом вышеупомянутых белков CEACAM человека и Macaca fascicularis или не является в значительной степени перекрестно-реактивным в их отношении.

Полноразмерный белок CEACAM1 человека доступен в базе данных GenBank под номером доступа NP_001703.2 Внеклеточный домен CEACAM1 человека состоит из аминокислот в положениях 35-428 этого белка. Полноразмерный белок CEACAM6 человека доступен в базе данных GenBank под номером доступа NP_002474.3 Внеклеточный домен CEACAM6 человека состоит из аминокислот в положениях 35-327 этого белка.

Полноразмерный белок CEACAM7 человека доступен в базе данных GenBank под номером доступа NP_008821.1 Внеклеточный домен CEACAM7 человека состоит из аминокислот в положениях 36-248 этого белка.

Полноразмерный белок CEACAM8 человека доступен в базе данных GenBank под номером доступа NP_001807.2 Внеклеточный домен CEACAM8 человека состоит из аминокислот в положениях 35-332 этого белка.

Внеклеточный домен CEACAM1 M. fascicularis состоит из аминокислот в положениях 35-428 полноразмерного белка, т. е. аминокислот 1-394 белка.

Внеклеточный домен CEACAM6 M. fascicularis состоит из аминокислот в положениях 35-327 полноразмерного белка, т. е. аминокислот 1-293 белка.

Внеклеточный домен CEACAM8 M. fascicularis состоит из аминокислот в положениях 35-332 полноразмерного белка, т. е. аминокислот 1-298 белка.

Термин "антитело", применяемый в данном документе, относится к молекулам иммуноглобулина, содержащим четыре полипептидные цепи, две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями, а также их мультимерам (например, IgM). Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (в данном документе обозначенную аббревиатурой HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена: CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (в данном документе обозначенную аббревиатурой LCVR или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (CL1). Области VH и VL могут быть дополнительно подразделены на гипервариабельные области, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), которые чередуются с более консервативными областями, называемыми каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В некоторых вариантах осуществления FR антитела (или его антигенсвязывающей части) могут быть идентичны последовательностям зародышевой линии человека или могут быть изменены естественным или искусственным путем. Аминокислотная консенсусная последовательность может быть определена на основании анализа "бок-о-бок" двух или более CDR.

Термин "антитело", применяемый в данном документе, также включает антигенсвязывающие фрагменты целых молекул антител. Термины "антигенсвязывающая часть" антитела, "антигенсвязывающий фрагмент" антитела и т. п., применяемые в данном документе, включают любой встречающийся в природе, получаемый ферментативным путем, синтетический или полученный с помощью генной инженерии полипептид или гликопротеин, который специфически связывает антиген с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из целых молекул антител с помощью любых подходящих стандартных методик, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантные технологии генной инженерии, включающие манипуляцию с ДНК, кодирующей вариабельные и необязательно константные домены антител, и ее экспрессию. Такая ДНК известна и/или легкодоступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (в том числе, например, библиотек "фаг-антитело"), или ее можно синтезировать. ДНК можно секвенировать и с ней можно проводить химические манипуляции или манипуляции с помощью методик молекулярной биологии, например, для расположения одного или нескольких вариабельных и/или константных доменов в подходящей конфигурации или для введения кодонов, создания цистеиновых остатков, модификации, добавления или удаления аминокислот и т. д.

Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) Fab-фрагменты; (ii) F(ab')2-фрагменты; (iii) Fd-фрагменты; (iv) Fv-фрагменты; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) dAb-фрагменты и (vii) минимальные распознающие единицы, состоящие из аминокислотных остатков, имитирующих гипервариабельную область антитела (например, выделенную определяющую комплементарность область (CDR), такую как пептид CDR3 или пептид c ограниченной конформационной свободой FR3-CDR3-FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфические антитела, однодоменные антитела, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, минитела, нанотела (например, моновалентные нанотела, бивалентные нанотела), иммунофармацевтические препараты на основе модульного белка малого размера (SMIP) и вариабельные домены IgNAR акулы, также включены в выражение "антигенсвязывающий фрагмент", применяемое в данном документе.

Антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, будет содержать по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может быть любого размера или аминокислотного состава и будет, как правило, содержать по меньшей мере одну CDR, которая прилегает к рамке считывания с одной или несколькими каркасными последовательностями или находится в ней. В антигенсвязывающих фрагментах, содержащих домен VH, связанный с доменом VL, домены VH и VL могут располагаться относительно другу друга в любом подходящем порядке. Например, вариабельный участок может быть димерным и содержать димеры VH-VH, VH-VL или VL-VL. В качестве альтернативы антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен VH или VL.

В определенных вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный с по меньшей мере одним константным доменом. Неограничивающие иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые можно выявить в антигенсвязывающем фрагменте антитела, включают: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3 и (xiv) VL-CL. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, в том числе любых иллюстративных конфигурациях, перечисленных выше, вариабельные и константные домены могут быть либо непосредственно связаны друг с другом, либо могут быть связаны с помощью целой или неполной шарнирной или линкерной области. Шарнирная область в различных вариантах осуществления может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или больше) аминокислот, что приводит к образованию гибкой или полугибкой связи между смежными вариабельными и/или константными доменами в одной молекуле полипептида. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела в различных вариантах осуществления может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) из любых конфигураций вариабельных и константных доменов, перечисленных выше, в нековалентной ассоциации друг с другом и/или с одним или более мономерными доменами VH или VL (например, с помощью дисульфидной(дисульфидных) связи(связей)).

В конкретных вариантах осуществления антитело или фрагмент антитела для применения в способе по настоящему изобретению могут представлять собой мультиспецифическое антитело, которое может быть специфическим по отношению к различным эпитопам одного целевого полипептида или может содержать антигенсвязывающие домены, специфические по отношению к эпитопам более одного целевого полипептида. Иллюстративное антитело в биспецифическом формате, которое можно применять в контексте настоящего изобретения, включает применение C_H3-домена первого иммуноглобулина (Ig) и C_H3-домена второго иммуноглобулина Ig, где C_H3-домены первого и второго Ig отличаются друг от друга по меньшей мере одной аминокислотой и где различие по меньшей мере в одну аминокислоту уменьшает связывание биспецифического антитела с белком A по сравнению с биспецифическим антителом, в котором отсутствует различие по аминокислотам. В одном варианте осуществления первый C_H3-домен Ig связывает белок А и второй C_H3-домен Ig содержит мутацию, которая уменьшает или устраняет связывание с белком А, такую как модификация H95R (по нумерации экзонов по IMGT; H435R по нумерации по EU). Второй C_H3 может дополнительно содержать модификацию Y96F (по IMGT; Y436F по EU). Дополнительные модификации, которые можно выявить во втором C_H3, включают: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (по IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M и V422I по EU) в случае с антителами IgG1; N44S, K52N и V82I (IMGT; N384S, K392N и V422I по EU) в случае с антителами IgG2 и Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q и V82I (по IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q и V422I по EU) в случае с антителами IgG4. Варианты формата биспецифических антител, описанные выше, рассматриваются в объеме настоящего изобретения. Любой формат мультиспецифических антител, в том числе форматы иллюстративных биспецифических антител, раскрытых в данном документе, в различных вариантах осуществления могут быть адаптированы для применения в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела к CEACAM5 с помощью стандартных методик, доступных в уровне техники.

Антитела CEACAM5, раскрытые в данном документе, могут содержать одну или несколько аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных областях и/или областях CDR вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии. Такие мутации можно легко определить посредством сравнения аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из публичных баз данных последовательностей антител. Настоящее изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, полученные из любых аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, где одна или несколько аминокислот в пределах одной или нескольких каркасных областей и/или областей CDR подвергнуты обратной мутации в соответствующий(соответствующие) остаток(остатки) зародышевой линии или в консервативную аминокислотную замену (природную или неприродную) соответствующего(соответствующих) остатка(остатков) зародышевой линии (такие изменения последовательностей упоминаются в данном документе как "обратные мутации зародышевой линии"). Специалист в данной области техники, начиная с последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, раскрытых в данном документе, может легко получить множество антител и антигенсвязывающих фрагментов, которые содержат одну или несколько отдельных обратных мутаций зародышевой линии или их комбинации. В определенных вариантах осуществления все остатки каркасных областей и/или остатки CDR в доменах VH и/или VL подвергнуты обратной мутации в последовательность зародышевой линии. В других вариантах осуществления только определенные остатки подвергнуты обратной мутации в последовательность зародышевой линии, например, только подвергнутые мутации остатки, обнаруженные в первых 8 аминокислотах FR1 или в последних 8 аминокислотах FR4, или только подвергнутые мутации остатки, обнаруженные в CDR1, CDR2 или CDR3. Кроме того, антитела по настоящему изобретению могут содержать любую комбинацию из двух или более обратных мутаций зародышевой линии в пределах каркасных областей и/или областей CDR, т. е. где определенные отдельные остатки подвергнуты обратной мутации до последовательности зародышевой линии, в то время как определенные другие остатки, которые отличаются от последовательности зародышевой линии, поддерживаются. Сразу после получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько обратных мутаций зародышевой линии, могут быть легко протестированы в отношении одного или нескольких требуемых свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, повышенная аффинность связывания, улучшенные или усиленные биологические антагонистические или агонистические свойства (в случае необходимости), сниженная иммуногенность и т. д. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные при помощи этого общего способа, охвачены настоящим изобретением.

Константная область антитела важна с точки зрения способности антитела связывать комплемент и опосредовать клеточнозависимую цитотоксичность. Таким образом, изотип антитела может быть выбран на основании того, требуется ли антителу опосредовать цитотоксичность.

Термин "антитело человека", применяемый в данном документе, предназначен для включения антител, содержащих вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Антитела человека, представленные в настоящем изобретении, в различных вариантах осуществления при этом могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, вводимые случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo), например, в CDR и, в некоторых вариантах осуществления, в CDR3. Однако термин "антитело человека", применяемый в данном документе, не предназначен для включения антител, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающего, такого как мышь, привиты на каркасные последовательности человека.

Термин "рекомбинантное антитело человека", применяемый в данном документе, предназначен для включения всех антител человека, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены посредством рекомбинантных способов, таких как антитела, экспрессируемые с помощью рекомбинантного вектора экспрессии, трансфицированного в клетку-хозяина (описанные дополнительно ниже), антитела, выделенные из комбинаторной библиотеки рекомбинантных антител человека (описанные дополнительно ниже), антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным по генам иммуноглобулинов человека (см., например, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295, включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте), или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные посредством любых других способов, которые предусматривают сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулинов человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. В определенных вариантах осуществления, однако, такие рекомбинантные антитела человека подвергают мутагенезу in vitro (или, если применяют животное, трансгенное по последовательностям Ig человека, то соматическому мутагенезу in vivo) и, таким образом, аминокислотные последовательности областей VH и VL рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые хотя и получены из последовательностей VH и VL зародышевой линии человека и родственны им, могут не существовать в природе в пределах репертуара антител зародышевой линии человека in vivo.

Антитела человека могут встречаться в двух формах, что связано с гетерогенностью шарнирных участков. В варианте осуществления молекула иммуноглобулина содержит стабильную четырехцепочечную конструкцию массой примерно 150-160 кДа, в которой димеры удерживаются вместе посредством межцепочечной дисульфидной связи, которая связывает тяжелые цепи. В другом варианте осуществления димеры не соединены межцепочечными дисульфидными связями, и образуется молекула массой приблизительно 75-80 кДа, состоящая из ковалентно связанных легкой и тяжелой цепей (полуантитело). Эти варианты осуществления/формы крайне сложно разделить даже после аффинной очистки.

Термин "гуманизированное антитело" относится к антителу, которое полностью или частично происходит не от человека и которое было модифицировано для замены определенных аминокислот, например, в каркасных областях доменов VH и VL для избежания или минимизации иммунного ответа у человека. Константные домены гуманизированного антитела в большинстве случаев представляют собой CH- и CL-домены человека.

Из уровня техники известны многочисленные способы гуманизации последовательности антитела; см., например, обзор в Almagro & Fransson (2008) Front Biosci. 13: 1619-1633. Один широко применяемый способ представляет собой привитие CDR, или реконструирование антитела, предусматривающее привитие последовательностей CDR антитела донорского типа, как правило антитела мыши, в остов из каркасной области антитела человека с отличающейся специфичностью. Поскольку привитие CDR может снижать специфичность и аффинность связывания и, таким образом, биологическую активность CDR-привитого антитела, отличного от антитела человека, в выбранные положения CDR-привитого антитела можно вводить обратные мутации, чтобы сохранить специфичность и аффинность связывания исходного антитела. Идентификацию положений для возможных обратных мутаций можно осуществлять с применением информации, доступной в литературе и в базе данных антител. Аминокислотные остатки, которые являются кандидатами на проведение обратных мутаций, как правило, представляют собой остатки, расположенные на поверхности молекулы антитела, в то время как остатки, которые погружены вглубь или характеризуются низкой степенью нахождения на поверхности, обычно изменять не будут. Методикой гуманизации, служащей альтернативой привитию CDR и проведению обратных мутаций, является изменение поверхности, при котором не находящиеся на поверхности остатки, отличного от человеческого происхождения, оставляют, при этом поверхностные остатки изменяют на человеческие остатки. Другая альтернативная методика известна как "направляемый отбор" (Jespers et al. (1994) Biotechnology 12, 899), и ее можно применять для получения из антитела мыши полностью человеческого антитела с сохранением эпитопа и характеристик связывания исходного антитела.

Частота появления второй формы в различных изотипах интактных IgG обусловлена без ограничения структурными различиями, связанными с изотипом шарнирной области антитела. Единственная аминокислотная замена в шарнирной области шарнира IgG4 человека может значительно снизить появление второй формы (Angal et al., (1993) Molecular Immunology 30:105, включен посредством ссылки во всей своей полноте) до уровней, обычно наблюдаемых при применении шарнира IgG1 человека. Настоящее изобретение охватывает в различных вариантах осуществления антитела с одной или несколькими мутациями в шарнирной области, области CH2 или CH3, что может быть необходимым, например, в получении, для повышения выхода необходимой формы антитела.

Термин "выделенное антитело", применяемый в данном документе, означает антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из по меньшей мере одного компонента своего естественного окружения. Например, антитело, которое было отделено или удалено из по меньшей мере одного компонента организма, или из ткани или клетки, в которой антитело изначально присутствует или продуцируется естественным путем, представляет собой "выделенное антитело". В различных вариантах осуществления выделенное антитело также включает антитело in situ в рекомбинантной клетке. В других вариантах осуществления выделенные антитела представляют собой антитела, которые были подвергнуты по меньшей мере одной стадии очистки или выделения. В различных вариантах осуществления выделенное антитело может практически не содержать другого клеточного материала и/или других химических соединений.

Термин "специфически связывает" и т. п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образуют комплекс с антигеном, который является сравнительно устойчивым в физиологических условиях. Способы определения наличия специфического связывания антитела с антигеном хорошо известны из уровня техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т. п. Например, антитело, которое "специфически связывает" CEACAM5, применяемое в данном документе, включает антитела, которые связывают CEACAM5 или его часть с KD менее приблизительно 1000 нМ, менее приблизительно 500 нМ, менее приблизительно 300 нМ, менее приблизительно 200 нМ, менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 90 нМ, менее приблизительно 80 нМ, менее приблизительно 70 нМ, менее приблизительно 60 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 40 нМ, менее приблизительно 30 нМ, менее приблизительно 20 нМ, менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 4 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 2 нМ, менее приблизительно 1 нМ или менее приблизительно 0,5 нМ, измеренной в анализе поверхностного плазмонного резонанса. Специфическое связывание можно также характеризовать с помощью константы диссоциации, составляющей по меньшей мере приблизительно 1×10^-6 M или меньше. В других вариантах осуществления константа диссоциации составляет по меньшей мере приблизительно 1×10^-7 M, 1×10^-8 M или 1×10^-9 M. Выделенное антитело, которое специфически связывает CEACAM5 человека, может, однако, характеризоваться перекрестной реактивностью к другим антигенам, таким как молекулы CEACAM5 от других (отличных от человека) видов.

Термин "поверхностный плазмонный резонанс", применяемый в данном документе, относится к оптическому феномену, который обеспечивает возможность анализа взаимодействий в режиме реального времени посредством выявления изменений концентраций белков в биосенсорной матрице, например, с помощью системы BIACORE (отдел Biacore Life Sciences в GE Healthcare, Пискатауэй, Нью-Джерси).

Предполагается, что термин "KD", применяемый в данном документе, относится к равновесной константе диссоциации взаимодействия антитела и антигена.

Теоретически, "аффинность" определяется путем равновесной связи между цельным антителом и антигеном. Ее можно оценивать экспериментально с помощью множества известных способов, таких как измерение скорости ассоциации и диссоциации с помощью поверхностного плазмонного резонанса или измерение EC50 (или кажущейся KD) в иммунохимическом анализе (ELISA, FACS). В этих анализах EC50 представляет собой концентрацию антитела, которая индуцирует ответ, лежащий посередине между ответом в начальный момент времени и максимальным ответом после некоторого определенного времени воздействия определенной концентрации антигена посредством ELISA (ферментный иммуносорбентный анализ) или экспрессии антигена клеткой при FACS (сортировка клеток с активированной флуоресценцией).

Связывание моноклонального антитела с антигеном 1(Ag1) является "перекрестно-реактивным" в отношении антигена 2 (Ag2), когда EC50 находятся в аналогичном диапазоне для обоих антигенов. В данной заявке связывание моноклонального антитела с Ag1 является перекрестно-реактивным в отношении Ag2, если соотношение аффинности к Ag2 и аффинности к Ag1 равно 10 или меньше (например, 5, 2, 1 или 0,5), при этом значения аффинности измеряют с помощью одного и того же метода для обоих антигенов.

Аффинность к CEACAM5 человека или к CEACAM5 Macaca fascicularis можно определить как значение EC50 в ELISA с применением растворимой рекомбинантной формы CEACAM5 в качестве захватывающего антигена.

Антитело по настоящему изобретению может также иметь кажущуюся константу диссоциации (кажущуюся KD), которую можно определить посредством анализа FACS на линии опухолевых клеток MKN45 (DSMZ, ACC 409) или ксенотрансплантатах опухолевых клеток, полученных от пациента (CR-IGR-034P доступна из Oncodesign Biotechnology, опухолевая коллекция CReMEC), которая составляет ≤25 нМ, например, ≤20 нМ, ≤10 нМ, ≤5 нМ, ≤3 нМ или ≤1 нМ. Кажущаяся KD может находиться в диапазоне 0,01-20 нМ или может находиться в диапазоне 0,1-20 нМ, 0,1-10 нМ или 0,1-5 нМ.

Дополнительно, антитела, как было показано, в соответствии с настоящим изобретением способны выявлять экспрессию CEACAM5 в рамках иммуногистохимического исследования в замороженных и фиксированных в формалине и заключенных в парафин (FFPE) тканевых срезах.

Термин "эпитоп" относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим сайтом в вариабельной области молекулы антитела, известной как паратоп. Один антиген может иметь более одного эпитопа. Таким образом, различные антитела могут связываться с различными областями на антигене и могут оказывать различные биологические эффекты. Эпитопы могут быть конформационными или линейными. Конформационный эпитоп образован пространственно сближенными аминокислотами из различных сегментов линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп образован смежными аминокислотными остатками в полипептидной цепи. При определенных условиях эпитоп может включать фрагменты сахаридов, фосфорильных групп или сульфонильных групп антигена.

Антитела к CEACAM5, применимые для способов, описываемых в данном документе, в различных вариантах осуществления могут включать одну или несколько аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных областях и/или областях CDR вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых были получены антитела. Такие мутации можно легко определить посредством сравнения аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из публичных баз данных последовательностей антител. В различных вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы, предусматривающие применение антител и их антигенсвязывающих фрагментов, полученных из любых аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, где одна или несколько аминокислот в одной или нескольких каркасных областях и/или областях CDR подвергаются мутации по отношению к соответствующему(соответствующим) остатку(остаткам) последовательности зародышевой линии, из которой антитело получено, или в соответствующий(соответствующие) остаток(остатки) другой последовательности зародышевой линии человека, или по отношению к консервативной аминокислотной замене соответствующего(соответствующих) остатка(остатков) зародышевой линии (такие изменения последовательностей упоминаются в данном документе собирательно как "мутации зародышевой линии"). Можно конструировать многочисленные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько отдельных мутаций зародышевой линии или их комбинации. В определенных вариантах осуществления все остатки каркасных областей и/или CDR в доменах VH и/или VL подвергнуты обратной мутации в остатки, встречающиеся в исходной последовательности зародышевой линии, из которой было получено антитело. В других вариантах осуществления только определенные остатки подвергнуты обратной мутации в исходную последовательность зародышевой линии, например, подвергнуты мутации только остатки, расположенные в первых 8 аминокислотах FR1 или в последних 8 аминокислотах FR4, или подвергнуты мутации только остатки, расположенные в CDR1, CDR2 или CDR3. В других вариантах осуществления один или несколько остатков каркасных областей и/или CDR подвергнуты мутации в соответствующий(соответствующие) остаток(остатки) последовательности другой зародышевой линии (т. е. последовательности зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой изначально получено антитело). Кроме того, антитела могут содержать любую комбинацию из двух или более мутаций зародышевой линии в каркасных областях и/или областях CDR, например, где определенные отдельные остатки подвергнуты мутации в соответствующий остаток последовательности определенной зародышевой линии, в то время как определенные другие остатки, которые отличаются от последовательности исходной зародышевой линии, сохраняются или подвергнуты мутации в соответствующий остаток последовательности другой зародышевой линии. Сразу после получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько мутаций зародышевой линии, могут быть легко протестированы в отношении одного или нескольких требуемых свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, повышенная аффинность связывания, улучшенные или усиленные биологические антагонистические или агонистические свойства (в случае необходимости), сниженная иммуногенность и т. д. Настоящее изобретение охватывает применение антител и антигенсвязывающих фрагментов, полученных с помощью этого общего способа.

Настоящее изобретение также включает способы, предусматривающие применение антител к CEACAM5, содержащие варианты любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых в данном документе, с одной или несколькими консервативными заменами. Например, настоящее изобретение включает применение антител к CEACAM5 с аминокислотными последовательностями HCVR, LCVR и/или CDR, например, с 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и т. д. консервативными аминокислотными заменами относительно любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых в данном документе.

В соответствии с настоящим изобретением в различных вариантах осуществления антитело к CEACAM5 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие любые из аминокислотных последовательностей антител к CEACAM5, описанные в Intl. Patent Pub. № WO 2014/079886 A1, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Предусмотрена модификация(модификации) аминокислотной последовательности антител, описываемых в данном документе. Например, может потребоваться усилить аффинность связывания и/или другие биологические свойства антитела. Известно, что, когда гуманизированное антитело получают путем простого привития только CDR из VH и VL антитела, полученного от животного, отличного от человека, в FR из VH и VL антитела человека, антигенсвязывающая активность может снижаться по сравнению с таковой исходного антитела, полученного от животного, отличного от человека. Считается, что несколько аминокислотных остатков VH и VL отличного от человеческого антитела не только в CDR, но также в FR могут быть непосредственно или опосредованно ассоциированы с антигенсвязывающей активностью Следовательно, замена этих аминокислотных остатков на другие аминокислотные остатки, полученные из FR из VH и VL антитела человека, будет снижать активность связывания. Для решения проблемы, касающейся антител человека с привитыми CDR нечеловеческого происхождения, были сделаны попытки идентифицировать среди аминокислотных последовательностей FR из VH и VL антител человека аминокислотный остаток, который непосредственно ассоциирован со связыванием антитела, или который взаимодействует с аминокислотным остатком CDR, или который поддерживает трехмерную структуру антитела и который непосредственно ассоциирован со связыванием с антигеном. Сниженную антигенсвязывающую активность можно повышать путем замещения идентифицированных аминокислот аминокислотными остатками исходного антитела, полученного из животного, отличного от человека.

Можно осуществлять модификации и изменения в структуру антител по настоящему

изобретению и в последовательности ДНК, кодирующие их, и все еще получать функциональные антитела или полипептиды с требуемыми характеристиками.

Дополнительная цель по настоящему изобретению также охватывает варианты с консервативной функцией полипептидов по настоящему изобретению. Например, определенные аминокислоты можно заменять другими аминокислотами в структуре белка без существенной потери активности. Поскольку способность к взаимодействию и природа белка определяют его биологическую функциональную активность, можно осуществлять определенные аминокислотные замены в белковой последовательности и, конечно же, в его кодирующей последовательности ДНК, при этом все же получая белок с подобными свойствами. Таким образом, предусматривается, что можно производить различные изменения в последовательностях антител по настоящему изобретению или соответствующих последовательностях ДНК, которые кодируют указанные полипептиды, без существенной потери их биологической активности. Из уровня техники известно, что определенные аминокислоты можно заменять другими аминокислотами, характеризующимися аналогичным индексом или баллом гидропатичности, и все еще получать белок с аналогичной биологической активностью, т. е. все еще получать белок с эквивалентной биологической функцией. Также возможно применять хорошо известные технологии, такие как подходы аланинового сканирования, для идентификации в антителе или полипептиде по настоящему изобретению всех аминокислот, которые можно заменить без значительной потери связывания с антигеном. Такие остатки можно характеризовать как нейтральные, поскольку они не вовлечены в связывание антигена или в поддержание структуры антитела. В одно или несколько этих нейтральных положений можно вводить замену на аланин или другую аминокислоту без изменения основных характеристик антитела или полипептида по настоящему изобретению.

Нейтральные положения можно наблюдать в качестве положений, где любая аминокислотная замена может быть включена в антитела. Действительно, в принципе аланинового сканирования аланин выбран, поскольку его остаток не имеет специфических структурных или химических признаков. Обычно допускается, что, если аланин можно заменить специфической аминокислотой без изменения свойств белка, многие другие, если не все аминокислотные замены, вполне вероятно также являются нейтральными. В противоположном случае, где аланин представляет собой аминокислоту дикого типа, если специфическую замену можно показать как нейтральную, вполне вероятно, что другие замены также будут являться нейтральными. Следовательно, как указывалось выше, аминокислотные замены, как правило, основаны на относительном сходстве заместителей в боковой цепи аминокислоты, например, их гидрофобности, гидрофильности, заряде, размере и т. п. Иллюстративные замены, которые учитывают любые из вышеупомянутых особенностей, хорошо известны специалистам в данной области техники и включают: аргинин и лизин; глутамат и аспартат; серин и треонин; глутамин и аспарагин; и валин, лейцин и изолейцин.

Также может потребоваться модифицировать антитело по настоящему изобретению с учетом эффекторной функции, например, чтобы усилить антигензависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) и/или комплементзависимую цитотоксичность (CDC) антитела. Это может быть достигнуто путем введения одной или нескольких аминокислотных замен в Fc-область антитела. В качестве альтернативы или дополнительно, в Fc-область можно вводить цистеиновый(цистеиновые) остаток(остатки), тем самым обеспечивая возможность образования межцепочечной дисульфидной связи в данной области. Полученное таким образом гомодимерное антитело может характеризоваться улучшенной способностью к интернализации, и/или увеличенным опосредованным комплементом уничтожением клеток, и/или увеличенной антителозависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC) (Caron, P.C. et al. 1992; and Shopes B. 1992).

Другой тип модификации аминокислот антитела по настоящему изобретению может быть применимым для изменения исходного профиля гликозилирования антитела, т. е. путем удаления одного или нескольких углеводных фрагментов, находящихся в антителе, и/или путем добавления одного или более участков гликозилирования, которые не присутствуют в антителе. Наличие одной из трипептидных последовательностей: аспарагин-X-серин и аспарагин-X-треонин, где X представляет собой любую аминокислоту, за исключением пролина, создает потенциальный участок гликозилирования. Добавление участков гликозилирования в антитело или их делецию удобно выполнять путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы она содержала одну или несколько из вышеописанных трипептидных последовательностей (для N-сцепленных участков гликозилирования).

Другой тип модификации предусматривает удаление последовательностей, идентифицированных либо in silico, либо экспериментальным путем, как потенциально приводящих к образованию продуктов распада или гетерогенности продуктов на основе антитела. В качестве примеров, дезамидирование аспарагинового и глутаминового остатков может происходить в зависимости от таких факторов, как pH и доступность на поверхности. Аспарагиновые остатки особенно подвержены дезамидированию в основном, когда находятся в последовательности Asn-Gly, и в меньшей степени в других дипептидных последовательностях, таких как Asn-Ala. Если такой участок дезамидирования, в частности Asn-Gly, присутствует в антителе или полипептиде по настоящему изобретению, следовательно, может потребоваться удалить участок, как правило, путем консервативной замены для удаления одного из участвующих остатков. Подразумевается, что такие замены в последовательности для удаления одного или нескольких участвующих остатков также охватываются настоящим изобретением.

Другой тип ковалентной модификации предусматривает связывание гликозидов с антителом химическим или ферментативным путем. Эти процедуры имеют преимущество в том, что они не требуют производства антител в клетке-хозяине, которая обладает способностью к гликозилированию с целью N- или О-сцепленного гликозилирования. В зависимости от применяемого режима связывания сахар(сахара) можно прикреплять к (a) аргинину и гистидину, (b) свободным карбоксильным группам, (c) свободным сульфгидрильным группам, таким как группы цистеина, (d) свободным гидроксильным группами, таким как группы серина, треонина или гидроксипролина, (e) ароматическим остаткам, таким как фенилаланин, тирозин или триптофан, или (f) амидной группе глутамина. Например, такие способы описаны в WO87/05330.

Удаление любых углеводных фрагментов, присутствующих в антителе, может быть достигнуто химическим или ферментативным путем. При химическом дегликозилировании антитело необходимо подвергать воздействию соединения трифторметансульфоновой кислоты или эквивалентного соединения. Данная обработка приводит к отщеплению большинства или всех сахаров, за исключением сшивающих сахаров (N-ацетилглюкозамина или N-ацетилгалактозамина), при этом оставляя антитело интактным. Химическое дегликозилирование описано в Sojahr H. et al. (1987) и в Edge, AS. et al. (1981). Ферментативное расщепление углеводных фрагментов антител может достигаться с применением различных эндо- и экзогликозидаз, описываемых в Thotakura, NR. et al. (1987).

Другой тип ковалентной модификации антитела включает связывание антитела с одним из множества небелковых полимеров, например, с полиэтиленгликолем, полипропиленгликолем или полиоксиалкиленами, с помощью способов, изложенных в патентах США №№ 4640835; 4496689; 4301144; 4670417; 4791192 или 4179337.

В варианте осуществления антитело по настоящему изобретению представляет собой антитело huMAb2-3 или его вариант. Различные последовательности аминокислот для антитела huMAb2-3 показаны ниже под SEQ ID NO: 1-9.

Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи под SEQ ID NO: 1 представляет собой

EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSS.

Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи под SEQ ID NO: 2 представляет собой

DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIK.

Последовательности CDR SEQ ID NO: 1 и 2 перечислены ниже и охватывают SEQ ID NO: 3-7.

Аминокислотная последовательность под SEQ ID NO: 3 представляет собой GFVFSSYD.

Аминокислотная последовательность под SEQ ID NO: 4 представляет собой ISSGGGIT.

Аминокислотная последовательность под SEQ ID NO: 5 представляет собой AAHYFGSSGPFAY.

Аминокислотная последовательность под SEQ ID NO: 6 представляет собой ENIFSY.

Аминокислотная последовательность CDR2 легкой цепи представляет собой NTR.

Аминокислотная последовательность под SEQ ID NO: 7 представляет собой QHHYGTPFT.

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи под SEQ ID NO: 8 представляет собой

EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG.

Аминокислотная последовательность легкой цепи под SEQ ID NO: 9 представляет собой

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYYCQQANSFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.

В соответствии с настоящим изобретением антитела, раскрытые в данном документе, связываются с эпитопом домена A3-B3 белка CEACAM5 человека. Аминокислотные последовательности эпитопов домена A3-B3, связанные посредством антител по настоящему изобретению, включают SGANLNL (SEQ ID NO: 10) и INGIPQQHTQVLF (SEQ ID NO: 11).

Термин "биологический эквивалент", применяемый в данном документе, относится к молекуле, характеризующейся аналогичной биологической доступностью (коэффициентом и степенью доступности) после введения в той же молярной дозе и в аналогичных условиях (например, одинаковый путь введения), c тем, чтобы с учетом как эффективности, так и безопасности ожидаемый эффект был, по сути, таким же, как и у сопоставляемой молекулы. Две фармацевтические композиции, содержащие антитело к CEACAM5 или иммуноконъюгат, содержащий антитело, являются биологически эквивалентными, если они являются фармацевтически эквивалентными, то есть это означает, что они содержат одинаковое количество активного ингредиента в одинаковой лекарственной форме, при одинаковом пути введения, и соответствуют одинаковым или сопоставимым стандартам.

Настоящее изобретение в определенных вариантах осуществления относится к способам, включающим введение субъекту антитела, содержащего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 2.

В настоящем изобретении предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие такое антитело, и способы применения этих композиций.

В различных вариантах осуществления антитело содержит CDR в вариабельной области/домене тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и CDR в вариабельной области/домене легкой цепи SEQ ID NO: 2. В различных вариантах осуществления антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 2, представляет собой антитело, которое специфически связывает CEACAM5. См. номер международной публикации WO 2014/079886 A1, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 8, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 9.

Иммуноконъюгаты

Настоящее изобретение также включает цитотоксические конъюгаты, или иммуноконъюгаты, или конъюгаты антитела и лекарственного средства, или конъюгаты. Применяемые в данном документе, все эти термины обладают одинаковым значением и являются взаимозаменяемыми.

Соответственно, настоящее изобретение относится к "иммуноконъюгатам", содержащим антитело по настоящему изобретению, связанное или конъюгированное с по меньшей мере одним средством для подавления роста, таким как цитотоксическое средство или радиоактивный изотоп.

Выражения "средство для подавления роста" или "антипролиферативное средство", которые можно применять индифферентно, относятся к соединению или композиции, которые подавляют рост клетки, особенно опухолевой клетки, in vitro или in vivo.

Термин "цитотоксическое средство", применяемый в данном документе, относится к веществу, которое подавляет или блокирует функцию клеток и/или вызывает разрушение клеток. Термин "цитотоксическое средство" предназначен для включения химиотерапевтических средств, ферментов, антибиотиков и токсинов, таких как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, в том числе их фрагменты и/или варианты, и различные противоопухолевых или противораковых средств, раскрытых ниже. В некоторых вариантах осуществления цитотоксическое средство представляет собой таксоид, алкалоид барвинка, майтанзиноид или аналог майтанзиноида, такой как DM1 или DM4, низкомолекулярное лекарственное средство, производное томаймицина или пирролбензодиазепина, аналог ауристатина или доластатина, пролекарство, ингибиторы топоизомеразы II, алкилирующее ДНК средство, антитубулиновое средство, аналог CC-1065 или CC-1065.

Применяемый в данном документе термин "майтанзиноиды" означает майтанзиноиды и аналоги майтанзиноида. Майтанзиноиды представляют собой лекарственные средства, подавляющие образование микротрубочек и являющиеся высокотоксичными для клеток млекопитающих.

Примеры подходящих майтанзиноидов включают майтанзинол и аналоги майтанзинола.

Примеры подходящих аналогов майтанзинола включают те, которые имеют модифицированное ароматическое кольцо, и те, которые имеют модификации в других положениях. Такие подходящие майтанзиноиды раскрыты в патентах США №№ 4424219; 4256746; 4294757; 4307016; 4313946; 4315929; 4331598; 4361650; 4362663; 4364866; 4450254; 4322348; 4371533; 6333410; 5475092; 5585499 и 5846545.

Конкретные примеры подходящих аналогов майтанзинола, имеющих модифицированное ароматическое кольцо, включают:

(1) C-19-дехлорпроизводное (патент США № 4256746) (получаемое путем восстановления ансамитоцина P2 с помощью LAH);

(2) C-20-гидроксипроизводное (или C-20-деметилпроизводное) +/-С-19-дехлорпроизводное (патент США №№ 4361650 и 4307016) (получаемое посредством деметилирования с помощью Streptomyces или Actinomyces или дехлорирования с помощью LAH); и

(3) C-20-деметоксипроизводное, C-20-ацилоксипроизводное (-OCOR), +/-дехлорпроизводное (патент США № 4294757) (получаемое посредством ацилирования с помощью хлорангидридов).

Конкретные примеры подходящих аналогов майтанзинола, имеющих модификации в других положениях, включают:

(1) C-9-SH-производное (патент США № 4424219) (получаемое посредством реакции майтанзинола с H₂S или P₂S₅);

(2) C-14-алкоксиметиловое (деметокси/CH₂OR) производное (патент США № 4331598);

(3) C-14-гидроксиметиловое или ацилоксиметиловое (CH₂OH или CH₂OAc) производное (патент США № 4450254) (получаемое из Nocardia);

(4) C-15-гидрокси/ацилоксипроизводное (патент США № 4364866) (получаемое посредством конверсии майтанзинола с помощью Streptomyces);

(5) C-15-метоксипроизводное (патент США №№ 4313946 и 4315929) (выделенное из Trewia nudiflora);

(6) C-18-N-деметиловое производное (патент США №№ 4362663 и 4322348) (получаемое посредством деметилирования майтанзинола с помощью Streptomyces); и

(7) 4,5-деоксипроизводное (патент США № 4371533) (получаемое путем восстановления майтанзинола с помощью трихлорида титана/LAH).

В варианте осуществления настоящего изобретения в цитотоксических конъюгатах по настоящему изобретению применяется тиолсодержащий майтанзиноид (DM1), имеющий официальное название N^2'-дезацетил-N^2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин, в качестве цитотоксического средства. DM1 представлен следующей структурной формулой (I):

В другом варианте осуществления в цитотоксических конъюгатах по настоящему изобретению применяется тиолсодержащий майтанзиноид DM4, имеющий официальное название N^2'-дезацетил-N^2'-(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин, в качестве цитотоксического средства. DM4 представлен следующей структурной формулой (II):

В дополнительных вариантах осуществления настоящего изобретения можно применять другие майтанзины, в том числе тиол- и дисульфидсодержащие майтанзиноиды, которые имеют моно- или диалкильное замещение атома углерода, несущего атом серы. К ним относятся майтанзиноид, имеющий в C-3 C-14-гидроксиметил, С-15-гидрокси или С-20-дезметил, ацилированную боковую цепь аминокислоты с ацильной группой, несущей пространственно затрудненную сульфгидрильную группу, где атом углерода ацильной группы, несущий тиольную функциональную группу, имеет два или три заместителя, при этом указанные заместители представляют собой CH₃, C₂H₅, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 реагентов, и любой агрегат, который может присутствовать в растворе.

Примеры этих цитотоксических средств и способов конъюгирования дополнительно приведены в заявке WO2008/010101, которая включена посредством ссылки.

Термин "радиоактивный изотоп" предназначен для включения радиоактивных изотопов, подходящих для лечения рака, таких как At²¹¹, Bi²¹², Er¹⁶⁹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, In¹¹¹, P³², Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Sr⁸⁹ и радиоактивные изотопы Lu. Такие радиоактивные изотопы, как правило, излучают преимущественно бета-излучение. В варианте осуществления радиоактивный изотоп представляет собой изотоп, излучающий альфа-частицы, более точно, торий 227, который излучает альфа-излучение. Можно получать иммуноконъюгаты в соответствии с настоящим изобретением, как описано в заявке WO2004/091668.

В различных вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению ковалентно присоединены непосредственно или посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста.

"Линкер", применяемый в данном документе, означает химический компонент, содержащий ковалентную связь или цепь атомов, ковалентно присоединяющую полипептид к компоненту-лекарственному средству.

Конъюгаты можно получать с помощью способов in vitro. Для соединения лекарственного средства или пролекарства с антителом применяют связывающую группу. Подходящие связывающие группы хорошо известны из уровня техники и включают дисульфидные группы, тиоэфирные группы, кислотонеустойчивые группы, фотолабильные группы, группы, неустойчивые к действию пептидаз, и группы, неустойчивые к действию эстераз. Конъюгирование антитела по настоящему изобретению с цитотоксическими средствами или со средствами для подавления роста можно осуществлять с применением разнообразных бифункциональных средств соединения белков, включающих, без ограничения N-сукцинимидилпиридилдитиобутират (SPDB), 4-[(5-нитро-2-пиридинил)дитио]-2,5-диоксо-1-пирролидиниловый сложный эфир бутановой кислоты (нитро-SPDB), 4-(пиридин-2-илдисульфанил)-2-сульфомасляную кислоту (сульфо-SPDB), N-сукцинимидил-(2-пиридилдитио)-пропионат (SPDP), сукцинимидил-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные имидоэфиров (такие как диметиладипимидат-HCL), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаровый альдегид), бис-азидосоединения (такие как бис-(п-азидобензоил)-гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(п-диазонийбензоил)-этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат) и бисфторсоединения активного фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицина можно получать, как описано в Vitetta et al. (1987). Меченая углеродом 1-изотиоцианатобензил-метилдиэтилен триаминпентауксусная кислота (MX-DTPA) представляет собой иллюстративное хелатирующее средство для конъюгирование радионуклеотида с антителом (WO 94/11026).

Линкер может представлять собой "расщепляемый линкер", облегчающий высвобождение цитотоксического средства или средства для подавления роста в клетку. Например, можно применять кислотонеустойчивый линкер, линкер, лабильный к действию пептидаз, линкер, неустойчивый к действию эстераз, фотолабильный линкер или дисульфидсодержащий линкер (см, например, патент США № 5208020). Линкер также может представлять собой "нерасщепляемый линкер" (например, SMCC-линкер), который может в некоторых случаях приводить к лучшей переносимости.

В качестве альтернативы можно получать слитый белок, содержащий антитело по настоящему изобретению и цитотоксический полипептид или полипептид для подавления роста, посредством рекомбинантных методик или синтеза пептидов. ДНК в своей длине может содержать соответствующие области, кодирующие две части конъюгата, прилегающие друг к другу или разделенные областью, кодирующей линкерный пептид, который не лишает конъюгат требуемых свойств.

Антитела по настоящему изобретению можно применять в зависимой опосредованной ферментами пролекарственной терапии путем конъюгирования полипептида с ферментом, активирующим пролекарство, который превращает пролекарство (например, пептидильное химиотерапевтическое средство, см. WO81/01145) в активное противораковое лекарственное средство (см., например, WO88/07378 и патент США № 4975278). Ферментный компонент иммуноконъюгата, применимый в ADEPT, включает любой фермент, способный к воздействию на пролекарство таким образом, чтобы превратить его в его более активную цитотоксическую форму. Ферменты, применимые в способе по настоящему изобретению, включают без ограничения щелочную фосфатазу, применимую для превращения фосфатсодержащих пролекарств в свободные лекарственные средства; арилсульфатазу, применимую для превращения сульфатсодержащих пролекарств в свободные лекарственные средства; цитозиндезаминазу, применимую для превращения нетоксичного фторцитозина в противораковое лекарственное средство 5-фторурацил; протеазы, такие как протеаза serratia, термолизин, субтилизин, карбоксипептидазы и катепсины (такие как катепсины B и L), применимые для превращения пептидсодержащих пролекарств в свободные лекарственные средства; D-аланилкарбоксипептидазы, применимые для превращения пролекарств, содержащих D-аминокислотные заместители; ферменты, отщепляющие углеводы, такие как O-галактозидаза и нейраминидаза, применимые для превращения гликозилированных пролекарств в свободные лекарственные средства; P-лактамазу, применимую для превращения лекарственных средств, дериватизированных с помощью P-лактамов, в свободные лекарственные средства; и пенициллинамидазы, такие как пенициллин-V-амидаза или пенициллин-G-амидаза, применимые для превращения лекарственных средств, дериватизированных по их аминным атомам азота с феноксиацетильными или фенилацетильными группами, соответственно, в свободные лекарственные средства. Ферменты могут быть ковалентно связаны с полипептидами по настоящему изобретению с помощью методик, хорошо известных из уровня техники, таких как применение гетеробифункциональных сшивающих реагентов, обсуждаемых выше.

В соответствии с вариантом осуществления в конъюгате по настоящему изобретению средство для подавления роста может представлять собой майтанзиноид, в варианте осуществления - DM1 или DM4.

В указанном конъюгате антитело конъюгировано с указанным по меньшей мере одним средством для подавления роста с помощью связывающих групп. В варианте осуществления указанная связывающая группа представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер, такой как SPDB, сульфо-SPDB или SMCC.

Конъюгат можно выбрать из группы, состоящей из:

конъюгата антитело-SPDB-DM4 формулы (III):

(III);

конъюгата антитело-сульфо-SPDB-DM4 формулы (IV)

(IV);

и

конъюгата антитело-SMCC-DM1 формулы (V)

(V).

В варианте осуществления конъюгат представляет собой конъюгат формулы (III), (IV) или (V), определенный выше, в котором антитело представляет собой антитело, описанное в данном документе.

Как правило, конъюгат можно получить с помощью способа, включающего стадии:

(i) приведения необязательно забуференного водного раствора средства, связывающегося с клетками (например, антитела в соответствии с настоящим изобретением), в контакт с растворами линкера и цитотоксического соединения;

(ii) последующего необязательного отделения конъюгата, образовавшегося на (i) от непрореагировавшего средства, связывающегося с клетками.

Водный раствор средства, связывающегося с клетками, можно буферизировать буферами, такими как, например, фосфат калия, ацетат, цитрат или N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота (буфер Hepes). Буфер зависит от природы средства, связывающегося с клетками. Цитотоксическое соединение находится в растворе в органическом полярном растворителе, например, диметилсульфоксиде (DMSO) или диметилацетамиде (DMA).

Температура реакции обычно составляет от 20 до 40°C. Время реакции может варьироваться от 1 до 24 часов. Реакция между средством, связывающимся с клетками, и цитотоксическим средством может контролироваться посредством эксклюзионной хроматографии (SEC) с рефрактометрическим и/или УФ-детектором. Если выход конъюгата является слишком низким, время реакции можно увеличить.

Специалист в данной области может применять ряд различных хроматографических способов для осуществления разделения на стадии (ii): конъюгат можно очистить, например, посредством SEC, адсорбционной хроматографии (такой как ионообменная хроматография, IEC), хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC), аффинной хроматографии, хроматографии на смешанных носителях, такой как хроматография на гидроксиапатите, или высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Также можно применять очистку посредством диализа или диафильтрации.

Применяемый в данном документе термин "агрегаты" означает скопления, которые могут образовывать два или более средств, связывающихся с клетками, при этом указанные средства являются или не являются модифицированными посредством конъюгирования. Агрегаты могут образовываться под влиянием большого количества параметров, таких как высокая концентрация средства, связывающегося с клетками, в растворе, pH раствора, высокие сдвиговые усилия, количество связанных димеров и их гидрофобная природа, температура (см. Wang and Gosh (2008) J. Membrane Sci. 318: 311-316 и литературные источники, цитируемые там); следует отметить, что относительное влияние некоторых из этих параметров четко не установлено. В случае белков и антител специалист в данной области обратится к Cromwell et al. (2006) AAPS Journal, 8(3): E572-E579). Содержимое агрегатов можно определить с помощью методик, хорошо известных специалисту в данной области, таких как SEC (см. Walter et al., 1993, Anal. Biochem., 212(2): 469-480).

После стадии (i) или (ii) раствор, содержащий конъюгат, можно подвергнуть дополнительной стадии (iii) хроматографии, ультрафильтрации и/или диафильтрации.

Конъюгат извлекают в конце данных стадий в водном растворе.

В соответствии с вариантом осуществления конъюгат в соответствии с настоящим изобретением характеризуется "соотношением лекарственного средства и антитела" (или "DAR") в диапазоне от 1 до 10, например, от 2 до 5, в частности, от 3 до 4. Как правило, это случай, в котором конъюгаты содержат молекулы майтанзиноидов.

Этот показатель DAR может варьировать в зависимости от природы антитела и лекарственного средства (т. е. средства для подавления роста), применяемых наряду с экспериментальными условиями, применяемыми для конъюгирования (таких как соотношение средство для подавления роста/антитело, время реакции, природа растворителя и сорастворителя, если таковой имеется). Таким образом, контакт между антителом и средством для подавления роста приводит к образованию смеси, содержащей несколько конъюгатов, отличающихся друг от друга различными соотношениями лекарственного средства и антитела; необязательно "голое" антитело, необязательно агрегаты. Определяемое DAR, таким образом, является средним значением.

Способ, который можно применять для определения DAR, заключается в спектрофотометрическом измерении соотношения поглощения раствора практически очищенного конъюгата при λ_D и 280 нм. 280 нм является длиной волны, обычно применяемой для измерения концентрации белка, такой как концентрация антитела. Длина волны λ_D выбрана таким образом, чтобы обеспечить проведение различий между лекарственным средством и антителом, т. е., как хорошо известно специалисту в данной области, λ_D представляет собой длину волны, при которой лекарственное средство характеризуется высокой величиной поглощения, и значение λ_D достаточно удалено от 280 нм во избежание значительного перекрытия пиков поглощения лекарственного средства и антитела. В случае молекул майтанзиноидов может быть выбрана λ_D, составляющая 252 нм. Способ расчета DAR может быть получен из Antony S. Dimitrov (ed), LLC, 2009, Therapeutic Antibodies and Protocols, vol 525, 445, Springer Science.

Величины поглощения для конъюгата при λ_D (A_λD) и при 280 нм (A₂₈₀) измеряются либо на мономерных пиках анализа эксклюзионной хроматографии (SEC) (обеспечивая расчет параметра "DAR(SEC)"), либо с применением классического спектрофотометрического аппарата (обеспечивая расчет параметра "DAR(UV)"). Величины поглощения можно выразить следующим образом:

A_λD = (c_D x ε_DλD) + (c_A x ε_AλD)

A₂₈₀ = (c_D x ε_D280) + (c_A x ε_A280),

где:

c_D и c_A представляют собой, соответственно, значения концентрации лекарственного средства и антитела в растворе,

ε_DλD и ε_D280 представляют собой, соответственно, молярные коэффициенты экстинкции лекарственного средства при λ_D и 280 нм,

ε_AλD и ε_A280 представляют собой, соответственно, молярные коэффициенты экстинкции антитела при λ_D и 280 нм.

Решение этих двух уравнений с двумя неизвестными приводит к следующим уравнениям:

c_D = [(ε_A280 x A_λD) - (ε_AλD x A₂₈₀)] / [(ε_DλD x ε_A280) - (ε_AλD x ε_D280)]

c_A = [A₂₈₀ - (c_D x ε_D280)] / ε_A280.

Среднее DAR затем рассчитывают из соотношения концентрации лекарственного средства и концентрации антитела: DAR=c_D/c_A.

Фармацевтические композиции

Антитела и иммуноконъюгаты по настоящему изобретению можно объединять с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами и необязательно матриксами с замедленным высвобождением, такими как биоразлагаемые полимеры, для образования терапевтических композиций.

Таким образом, другая цель настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело или иммуноконъюгат по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

Настоящее изобретение также относится к полипептиду или иммуноконъюгату в соответствии с настоящим изобретением для применения в качестве лекарственного препарата.

"Фармацевтическими" или "фармацевтически приемлемыми" называют молекулярные объекты и композиции, не вызывающие побочную, аллергическую или другую нежелательную реакцию при введении млекопитающему, в частности человеку, в соответствующих случаях. Фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным средством называют нетоксичный твердый, полутвердый или жидкий наполнитель, разбавитель, инкапсулирующий материал или вспомогательное вещество для составления любого типа.

Как используется в данном документе, "фармацевтически приемлемые носители" включают все возможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства и т. п., которые являются физиологически совместимыми. Примеры подходящих носителей, разбавителей и/или вспомогательных веществ включают один или несколько из воды, аминокислот, солевого раствора, забуференного фосфатом физиологического раствора, фосфатного буфера, ацетата, цитрата, сукцината; аминокислот и производных, таких как гистидин, аргинин, глицин, пролин, глицил-глицин; неорганических солей NaCl, хлорида кальция; сахаров и многоатомных спиртов, таких как декстроза, глицерин, этанол, сахароза, трегалоза, маннитол; поверхностно-активных веществ, таких как Полисорбат 80, полисорбат 20, полоксамер 188; и т. п., а также их комбинаций. Во многих случаях предпочтительным будет включение в композицию изотонических средств, таких как сахара, многоатомные спирты или хлорид натрия, и состав может также содержать антиоксидант, такой как триптамин, и стабилизирующее средство, такое как Tween 20.

Форма фармацевтических композиций, путь введения, дозировка и схема в норме зависят от состояния, подлежащего лечению, тяжести болезни, возраста, веса и пола пациента и т. д.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно составлять для местного, перорального, парентерального, интраназального, внутривенного, внутримышечного, подкожного или внутриглазного введения и т. п.

В варианте осуществления фармацевтические композиции содержат среды-носители, которые являются фармацевтически приемлемыми для состава, подлежащего инъецированию. Они могут представлять собой изотонические стерильные солевые растворы (мононатрий- или динатрийфосфата, хлорида натрия, калия, кальция или магния и т. п. или смесей таких солей) или сухие, в частности лиофилизированные композиции, которые при добавлении, в зависимости от случая, стерилизованной воды или физиологического раствора обеспечивают получение инъекционных растворов.

Фармацевтическую композицию можно вводить с помощью устройств для комбинации лекарственных средств.

Дозы, применяемые для введения, можно адаптировать в зависимости от различных параметров и, например, в зависимости от применяемого способа введения, от соответствующей патологии или, в качестве альтернативы, от требуемой продолжительности лечения.

Для получения фармацевтических композиций эффективное количество антитела или иммуноконъюгата по настоящему изобретению можно растворить или диспергировать в фармацевтически приемлемом носителе или водной среде.

Фармацевтические формы, подходящие для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы или дисперсии, составы, включающие кунжутное масло, арахисовое масло или водный раствор пропиленгликоля; и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий для немедленного приема. Во всех случаях форма должна быть стерильной и готовой к инъекции с помощью соответствующего устройства или системы для доставки без расщепления. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения, и ее необходимо предохранять от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы.

Растворы активных соединений в качестве свободного основания или фармакологически приемлемых солей можно получать в воде путем смешивания с поверхностно-активным веществом. Дисперсии также можно получать в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях, а также в маслах. В обычных условиях хранения и применения эти препараты содержат консервант для предупреждения роста микроорганизмов.

Антитело или иммуноконъюгат по настоящему изобретению можно составлять в композицию в нейтральной или солевой форме. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислот (образованные с помощью свободных аминогрупп белка), и они образуются с помощью неорганических кислот, таких как, например, соляная или фосфорная кислоты, или таких органических кислот, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и т. п. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и органических оснований, таких как изопропиламин, триметиламин, глицин, гистидин, прокаин и т. п.

Носитель также может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащие, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т. п.), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем применения покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем применения поверхностно-активных веществ. Предупреждение действия микроорганизмов можно обеспечить с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимерозала и т. п. Во многих случаях будет предпочтительно включать изотонические средства, например, сахара или хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций можно обеспечить путем применения в композициях средств, задерживающих всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина.

Стерильные инъекционные растворы получают путем включения активных соединений в требуемом количестве в соответствующий растворитель вместе с любыми из ингредиентов, перечисленных выше, в случае необходимости, с последующей стерилизацией путем фильтрации. Как правило, дисперсии получают путем включения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильную среду-носитель, которая содержит основную дисперсионную среду и другие требуемые ингредиенты из тех перечисленных выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов предпочтительные способы получения представляют собой методики вакуумной сушки и лиофильной сушки, которые обеспечивают получение порошка активного ингредиента с любым дополнительным требуемым ингредиентом из его раствора, предварительно подвергнутого стерилизации путем фильтрации.

Также предусмотрен препарат с более концентрированными или высококонцентрированными растворами для непосредственной инъекции, где предполагается, что применение DMSO в качестве растворителя приводит к крайне быстрому проникновению, доставке высоких концентраций активных средств в небольшую область опухоли.

После составления растворы будут вводить способом, соответствующим дозированному составу, и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Составы легко вводят в разнообразных дозированных формах, таких как тип инъекционных растворов, описанных выше, но также можно использовать капсулы с высвобождением лекарственного средства и т. п.

Для парентерального введения в виде водного раствора, например, раствор следует надлежащим образом забуферить при необходимости, а жидкий разбавитель вначале сделать изотоническим с помощью достаточного количества солевого раствора или глюкозы. Данные водные растворы особенно подходят для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В связи с этим стерильные водные среды, которые можно использовать, будут известны специалистам в данной области техники в свете настоящего изобретения. Например, одну дозу можно растворить в 1 мл изотонического раствора NaCl и либо добавить к 1000 мл жидкости гиподермоклизиса, либо инъецировать в предполагаемое место инфузии (см., например, "Remington’s Pharmaceutical Sciences", 15-е издание, стр. 1035-1038 и 1570-1580). Неизбежно будет иметь место некоторое изменение дозы в зависимости от состояния субъекта, подлежащего лечению. Лицо, ответственное за введение, в любом случае будет определять соответствующую дозу для отдельного субъекта.

Антитело или иммуноконъюгат по настоящему изобретению можно составлять в терапевтическую смесь, чтобы она содержала приблизительно 0,01-100 миллиграммов на дозу или около того.

В дополнение к антителу или иммуноконъюгату, составленному для парентерального введения, такого как внутривенная или внутримышечная инъекция, другие фармацевтически приемлемые формы включают, например, таблетки или другие твердые вещества для перорального введения; капсулы с замедленным высвобождением; и любую другую форму, применяемую в настоящее время.

В определенных вариантах осуществления применение липосом и/или наночастиц предусмотрено для введения полипептидов в клетки-хозяева. Состав и применение липосом и/или наночастиц известны специалистам в данной области техники.

Нанокапсулы обычно могут удерживать соединения стабильным и воспроизводимым способом. Чтобы избежать побочных эффектов, обусловленных внутриклеточной перегрузки полимером, обычно разрабатывают такие сверхмелкие частицы (размером около 0,1 мкм) с применением полимеров, которые могут распадаться in vivo. Биоразлагаемые полиалкил-цианокрилатные наночастицы или биоразлагаемые наночастицы полилактида или сополимера полилактида и гликолида, которые соответствуют этим требованиям, предусмотрены для применения в настоящем изобретении, и такие частицы можно легко получить.

Липосомы образуются из фосфолипидов, которые диспергированы в водной среде и самопроизвольно образуют многослойные концентрические двухслойные везикулы (также называемые многослойные везикулы (MLV)). MLV обычно имеют диаметр от 25 нм до 4 мкм. Обработка ультразвуком MLV приводит к образованию малых однослойных везикул (SUV) с диаметром в диапазоне 200-500 Å, содержащих водный раствор в сердцевине. Физические характеристики липосом зависят от pH, ионной силы и присутствия двухвалентных катионов.

Способы введения и составы

Способы, описываемые в данном документе, включают введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело. Применяемый в данном документе термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" представляет собой терапевтичекую дозу, которая приводит к лечению рака легкого (например, NSQ NSCLC). Применяемый в данном документе термин "лечение" относится к вызыванию выявляемого улучшения одного или нескольких симптомов, ассоциированных с раком легкого, или вызыванию биологического эффекта (например, снижения уровня определенного биомаркера), который коррелирует с лежащим(лежащими) в основе патологическим(патологическими) механизмом(механизмами), вызывающим(вызывающими) состояние или симптом(симптомы). Например, доза антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, которая вызывает улучшение любого из следующих симптомов или состояний, ассоциированных с раком легкого, считается "терапевтически эффективным количеством".

В другом примере лечение не являлось эффективным, когда доза антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, не приводит к выявляемому улучшению одного или нескольких параметров или симптомов, ассоциированных с раком (например, раком легкого), или которая не вызывает биологического эффекта, который коррелирует с лежащим(лежащими) в основе патологическим(патологическими) механизмом(механизмами), вызывающим(вызывающими) состояние или симптом(симптомы) рака.

В соответствии с некоторыми из этих вариантов осуществления антитело к CEACAM5 или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят внутривенно.

В соответствии со способами настоящего изобретения терапевтически эффективное количество антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, которое вводят субъекту, будет варьировать в зависимости от возраста и размера (например, веса тела или площади поверхности тела) субъекта, а также пути введения и других факторов, хорошо известных специалистам в данной области техники.

В определенных вариантах осуществления доза антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, варьирует в зависимости от площади поверхности тела субъекта. В определенных вариантах осуществления доза антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, вводимая субъекту, составляет от приблизительно 1 мг/м² до приблизительно 500 мг/м². В некоторых вариантах осуществления доза антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, вводимая субъекту, составляет от приблизительно 5 мг до приблизительно 300 мг/м². В различных вариантах осуществления доза антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, вводимая субъекту, составляет от приблизительно 5 до приблизительно 250 мг/м². В различных вариантах осуществления доза составляет 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 или 210 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в дозе от приблизительно 2,5 мг/м² до приблизительно 5 мг/м². Например, антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в течение периода времени (например, 30 минут и один час) в дозе от приблизительно 2,5 мг/м² до приблизительно 5 мг/м². Доза включает 2,5 мг/м² антитела, 5 мг/м² антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, и все дозы от 2,5 мг/м² до 5 мг/м², например, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8 и 4,9 мг/м².

Например, настоящее изобретение включает (без ограничения) способы, где приблизительно 1 мг/м², приблизительно 5 мг/м², приблизительно 10 мг/м², приблизительно 15 мг/м², приблизительно 20 мг/м², приблизительно 25 мг/м², приблизительно 30 мг/м², приблизительно 35 мг/м², приблизительно 40 мг/м², приблизительно 45 мг/м², приблизительно 50 мг/м², приблизительно 55 мг/м², приблизительно 60 мг/м², приблизительно 65 мг/м², приблизительно 70 мг/м², приблизительно 75 мг/м², приблизительно 80 мг/м², приблизительно 85 мг/м², приблизительно 90 мг/м², приблизительно 95 мг/м², приблизительно 100 мг/м², приблизительно 105 мг/м², приблизительно 110 мг/м², приблизительно 115 мг/м², приблизительно 120 мг/м², приблизительно 125 мг/м², приблизительно 130 мг/м², приблизительно 135 мг/м², приблизительно 140 мг/м², приблизительно 145 мг/м², приблизительно 150 мг/м², приблизительно 155 мг/м², приблизительно 160 мг/м², приблизительно 165 мг/м², приблизительно 170 мг/м², приблизительно 175 мг/м², приблизительно 180 мг/м², приблизительно 185 мг/м², приблизительно 190 мг/м², приблизительно 195 мг/м², приблизительно 200 мг/м², приблизительно 205 мг/м², приблизительно 210 мг/м², приблизительно 215 мг/м², приблизительно 220 мг/м², приблизительно 225 мг/м², приблизительно 230 мг/м², приблизительно 235 мг/м², приблизительно 240 мг/м², приблизительно 245 мг/м², приблизительно 250 мг/м², приблизительно 255 мг/м², приблизительно 260 мг/м², приблизительно 265 мг/м², приблизительно 270 мг/м², приблизительно 275 мг/м², приблизительно 280 мг/м², приблизительно 285 мг/м², приблизительно 290 мг/м², приблизительно 295 мг/м², приблизительно 300 мг/м², приблизительно 325 мг/м², приблизительно 350 мг/м², приблизительно 375 мг/м², приблизительно 400 мг/м², приблизительно 425 мг/м², приблизительно 450 мг/м², приблизительно 475 мг/м² или приблизительно 500 мг/м² антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, вводят пациенту в неделю или один раз каждые две недели. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в количестве приблизительно 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 или 210 мг/м² каждые две недели исходя из площади поверхности тела субъекта.

Применяемое в данном документе выражение "вводимый от приблизительно 1 до приблизительно 500 мг/кг" означает, что указанное вещество вводят при любом значении в пределах установленного диапазона, включая конечные точки диапазона. Например, выражение "доза антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, вводимая пациенту, составляет от 1 мг/м² до 500 мг/м²" включает введение 1 мг/м² антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, 500 мг/м² антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, и все дозы между ними. В варианте осуществления антитело к CEACAM5 или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят в дозе приблизительно 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180 или 210 мг/м² в течение периода времени, например, один раз каждые 14 дней (т. е. каждые две недели) или 3 недели. В различных вариантах осуществления способа антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, применяют в дозе, перечисленной в примере 1.

В различных вариантах осуществления дозу вводят с постоянной скоростью. В качестве альтернативы дозу вводят с меняющейся скоростью. В различных вариантах осуществления дозу вводят с постоянной скоростью, составляющей приблизительно 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 2,5 или 5 мг/мин. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят со скоростью в течение первых 30 минут или в течение первого 1 часа. В различных вариантах осуществления после приблизительно 30 минут или 1 часа скорость введения антитела изменяют. Например, скорость снижают. В различных вариантах осуществления скорость повышают. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят со скоростью 2,5 мг/мин. в течение первых 30 минут или 1 часа. В различных вариантах осуществления после приблизительно 30 минут или 1 часа скорость введения антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, повышают до 5 мг/мин.

Способы по настоящему изобретению включают введение пациенту многократных доз антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, в течение определенного периода времени. Например, антитело к CEACAM5 или иммуноконъюгат, содержащий антитело, можно вводить приблизительно 1-5 раз в день, приблизительно 1-5 раз в неделю, приблизительно 1-5 раз каждые две недели, приблизительно 1-5 раз в месяц или приблизительно 1-5 раз в год. В определенных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение пациенту первой дозы антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, в первой временной точке с последующим введением пациенту по меньшей мере второй дозы антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, во второй временной точке. В определенных вариантах осуществления первая и вторая дозы могут содержать одинаковое количество антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело. Период времени между первой и второй дозами может составлять от приблизительно нескольких часов до нескольких недель. Например, вторая временная точка (т. е. время, когда вводят вторую дозу) может располагаться через от приблизительно 1 часа до приблизительно 7 недель после первой временной точки (т. е. времени, когда вводят первую дозу). В соответствии с определенными иллюстративными вариантами осуществления настоящего изобретения вторая временная точка может располагаться через приблизительно 1 час, приблизительно 4 часа, приблизительно 6 часов, приблизительно 8 часов, приблизительно 10 часов, приблизительно 12 часов, приблизительно 24 часа, приблизительно 2 дня, приблизительно 3 дня, приблизительно 4 дня, приблизительно 5 дней, приблизительно 6 дней, приблизительно 7 дней, приблизительно 2 недели, приблизительно 3 недели, приблизительно 4 недели, приблизительно 6 недель, приблизительно 8 недель, приблизительно 10 недель, приблизительно 12 недель, приблизительно 14 недель или более после первой временной точки. В определенных вариантах осуществления вторая временная точка располагается через приблизительно 1 неделю или приблизительно 2 недели. Третью и последующие дозы можно вводить аналогичным образом в течение курса лечения пациента. В настоящем изобретении предусмотрены способы применения терапевтических композиций, содержащих антитела к CEACAM5, или их антигенсвязывающие фрагменты, иммуноконъюгаты, содержащие антитела, и необязательно одно или несколько дополнительных терапевтических средств. Терапевтические композиции по настоящему изобретению будут вводить с подходящими носителями, вспомогательными веществами и другими средствами, которые включены в составы, для обеспечения улучшенных переноса, доставки, переносимости и т. п. Большое количество соответствующих составов можно найти в справочнике, известном всем химикам-фармацевтам: Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, везикулы, содержащие липиды (катионные или анионные) (такие как LIPOFECTIN), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсии типа "масло в воде" и "вода в масле", эмульсии карбовакс (полиэтиленгликоли с различной молекулярной массой), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. См. также Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Известны различные системы доставки, и их можно применять для введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению, например, инкапсуляция в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, опосредованный рецепторами эндоцитоз (см., например, Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429-4432, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Способы введения включают без ограничения внутрикожные, внутримышечные, внутрибрюшинные, внутривенные, подкожные, интраназальные, эпидуральные и пероральные пути. Композицию можно вводить любым удобным путем, например, путем инфузии или болюсной инъекции, путем абсорбции через эпителиальные или слизистые оболочки (например, слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку прямой кишки и кишечника и т. д.) и можно вводить вместе с другими биологически активными средствами. Введение может быть системным или местным. Антитело к CEACAM5 или иммуноконъюгат, содержащий антитело, можно вводить подкожно.

Фармацевтическую композицию также можно доставлять в везикуле, такой как липосома (см. Langer (1990) Science 249:1527-1533, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В определенных ситуациях фармацевтическую композицию можно доставлять в системе с контролируемым высвобождением, например, с применением насоса или полимерных материалов. В другом варианте осуществления систему с контролируемым высвобождением можно поместить вблизи от мишени композиции, при этом требуется лишь часть системной дозы.

Инъекционные препараты могут включать лекарственные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, для местной инъекции, капельных инфузий и т. д. Эти инъекционные препараты можно получать посредством известных способов. Например, инъекционные препараты можно получать, например, растворением, суспендированием или эмульгированием антитела или его соли, описанных выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно применяемых для инъекций. В качестве водной среды для инъекций существуют, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства, и т. д., которые можно применять в комбинации с соответствующим солюбилизирующим средством, таким как спирт (например, этанол), многоатомный спирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионогенное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, HCO-50 (полиоксиэтиленовый (50 моль) аддукт гидрогенизированного касторового масла)] и т. д.). В качестве масляной среды применяют, например, кунжутное масло, соевое масло и т. д., которые могут применять в комбинации с солюбилизирующим средством, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т. д. Раствор для инъекции, полученный таким образом, можно помещать в соответствующую ампулу.

Преимущественно фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, получают в лекарственных формах в стандартной дозе, подходящей для подбора дозы активных ингредиентов. Такие лекарственные формы в стандартной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекционные формы (ампулы), суппозитории и т. д.

В соответствии со способами, раскрытыми в данном документе, антитело к CEACAM5 или иммуноконъюгат, содержащий антитело, (или фармацевтический состав, содержащий антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело) можно вводить пациенту с применением любого приемлемого устройства или механизма. Например, введение можно выполнять с применением шприца и иглы или с помощью шприца-ручки многократного использования и/или автоинъекторного устройства доставки. Способы по настоящему изобретению включают применение многочисленных шприцов-ручек многократного применения и/или автоинъекторных устройств доставки для введения антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело (или фармацевтического состава, содержащего антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело). Примеры таких устройств включают без ограничения AUTOPEN (Owen Mumford, Inc., Вудсток, Великобритания), шприц-ручку DISETRONIC (Disetronic Medical Systems, Бургдорф, Швейцария), шприц-ручку HUMALOG MIX 75/25, шприц-ручку HUMALOG, шприц-ручку HUMALIN 70/30 (Eli Lilly and Co., Индианаполис, Индиана), NOVOPEN I, II и III (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), NOVOPEN JUNIOR (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), шприц-ручку BD (Becton Dickinson, Франклин-Лэйкс, Нью-Джерси), OPTIPEN, OPTIPEN PRO, OPTIPEN STARLET и OPTICLIK (Sanofi-Aventis, Франкфурт, Германия). Примеры шприцов-ручек однократного применения и/или автоинъекторных устройств доставки, применяемых при подкожной доставке фармацевтической композиции по настоящему изобретению, включают без ограничения шприц-ручку SOLOSTAR (Sanofi-Aventis), FLEXPEN (Novo Nordisk) и KWIKPEN (Eli Lilly), автоинъектор SURECLICK (Amgen, Таузанд-Окс, Калифорния), PENLET (Haselmeier, Штутгарт, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и шприц-ручку HUMIRA (Abbott Labs, Норт-Чикаго, Иллинойс), при этом упомянуты только несколько.

В одном варианте осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят с помощью предварительно заполненного шприца. В другом варианте осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят с помощью предварительно заполненного шприца с защитным устройством. Например, защитное устройство предупреждает случайное ранение, полученное медработником. В различных вариантах осуществления антитело вводят с помощью предварительно заполненного шприца с защитным устройством ÈRIS (West Pharmaceutical Services Inc.). См. также патенты США №№ 5215534 и 9248242, включенные в данный документ посредством ссылки во всей их полноте.

В другом варианте осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят с помощью автоинъектора. В различных вариантах осуществления антитело или иммуноконъюгат, содержащий антитело, вводят с помощью автоинъектора с технологией PUSHCLICK (SHL Group). В различных вариантах осуществления автоинъектор представляет собой устройство, состоящее из шприца, которое обеспечивает введение субъекту дозы композиции и/или антитела. См. также патенты США №№ 9427531 и 9566395, включенные в данный документ посредством ссылки во всей их полноте.

Применение микроинфузора для доставки антитела к CEACAM5 или иммуноконъюгата, содержащего антитело, (или фармацевтического состава, содержащего антитело или иммуноконъюгата, содержащего антитело) пациенту также предусмотрено в данном документе. Применяемый в данном документе термин "микроинфузор" означает устройство для подкожной доставки, разработанное для медленного введения больших объемов (например, до приблизительно 2,5 мл или больше) терапевтического состава в течение продолжительного периода времени (например, приблизительно 10, 15, 20, 25, 30 или более минут). См., например, U.S. 6629949; US 6659982; и Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996), включенные в данный документ посредством ссылки во всей их полноте. Микроинфузоры являются особенно полезными для доставки больших доз терапевтических белков, содержащихся в растворах с высокой концентрацией и/или вязких растворах.

Все публикации, упомянутые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте для всех предназначений.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. TED13751 - первое исследование препарата с участием человека для оценки безопасности фармакокинетических показателей и противоопухолевой активности huMAb2-3-SPDB-DM4 у пациентов с распространенными солидными опухолями - план исследования

Первое исследование препарата с участием человека (FIH) для оценки безопасности и фармакокинетики ADC, идентифицированного в качестве huMAb2-3-SPDB-DM4, вводимого в качестве отдельного средства каждые 2 недели (q2w; 14 дней) посредством внутривенного пути, проводили у взрослых с распространенными неоперабельными или метастатическими солидными опухолями.

Исследование делили на две части: фаза повышения дозы и фаза применения препарата в стабильной дозе.

На протяжении фазы повышения дозы популяцию, подлежащую лечению, дополняли без ограничения пациентами с типами опухолей, при которых, как известно, экспрессируется CEACAM5; подтверждение экспрессии CEACAM5 осуществляли ретроспективно с применением IHC на наиболее поздних архивных образцах ткани и в центральной лаборатории. Экспрессию циркулирующих CEACAM5 также применяли для обогащения. Максимально переносимую дозу (MTD) 100 мг/м² определяли исходя из площади поверхности тела субъекта на протяжении фазы повышения дозы.

На протяжении фазы применения препарата в стабильной дозе популяция, подлежащая лечению, была ограничена пациентами с NSQ NSCLC, с показателем экспрессии CEACAM5 ≥2+ по интенсивности, с задокументированным участием 50% популяции опухолевых клеток на протяжении предварительной проверки на наиболее позднем архивном образце ткани и с применением местной оценки IHC для пациентов, потенциально подходящих для лечения в рамках исследования в когорте с аденокарциномой желудка.

Были 2 независимые когорты с NSQ NSCLC в фазе применения препарата в стабильной дозе. Первая (когорта легкого) включала пациентов с показателем экспрессии CEACAM5 ≥2+ по интенсивности с участием по меньшей мере 50% популяции опухолевых клеток. Вторая когорта (вторая когорта легкого) включала пациентов, у которых был положительный результат предварительной проверки с интенсивностью ≥2+ от 21% до <50% популяции опухолевых клеток. Для исследовательских центров, у которых на основании результатов анализа, выполненного на их местной платформе IHC, не было CEACAM5 на моноклональном антителе huMAb2-3-SPDB-DM4, предварительную оценку экспрессии CEACAM5 в опухоли проводили централизованно. Полный скрининг выполняли для архивных случаев, соответствующих вышеуказанному определению.

Уровень экспрессии CEACAM5 был задокументирован по сути ретроспективно и централизованно как на архивных, так и на свежих (исходный образец) опухолевых тканях.

Подтверждение экспрессии CEACAM5 в опухоли выполняли ретроспективно в центральной лаборатории на свежих опухолевых тканях, собранных на исходном уровне (обязательная биопсия только в фазе применения препарата в стабильной дозе при NSQ NSCLC). Если достаточный архивный опухолевый материал являлся доступным, центральную оценку также выполняли ретроспективно для получения знаний об изменчивости в оценке экспрессии. Результаты ретроспективных анализов не влияли на лечение пациентов. Это выполняли для лучшей интерпретации общего ответа и в качестве исходного уровня для сравнения с экспрессией CEACAM5 при прогрессировании (исследования потери CEACAM5 в качестве механизма приобретенной устойчивости).

Максимально 60 пациентов включали в когорту с NSQ NSCLC (легкого) и максимально 28 пациентов включали в когорту с NSQ NSCLC (вторичную когорту легкого). Только пациенты с измеряемыми параметрами при злокачественном заболевании являлись подходящими. Пациенты с NSQ NSCLC со злокачественным заболеванием, соответствующим строгим критериям экспрессии CEACAM5, на протяжении процедуры предварительной проверки дополнительно были проверены для его или ее пригодности в отношении лечения максимально переносимой дозой (MTD) без нагрузочной дозы.

Безопасность первых 6 пациентов, включенных в фазу применения препарата в стабильной дозе, была рассмотрена исследовательским комитетом, когда 6-ого пациента лечили в течение двух циклов до включения следующих пациентов. MTD (без нагрузочной дозы) была подтверждена, если треть или менее из пациентов, получавших лечение (включенных в 3 когорты), испытывала дозолимитирующую токсичность (DLT) в конце цикла 2 при плановой дозе huMAb2-3-SPDB-DM4. В то же время предварительная оценка заключалась в наличии или отсутствии пользы от первичной профилактики корнеальной токсичности при предупреждении корнеальной токсичности. В дополнение, оценивали возникновение кумулятивной токсичности, если таковая имелась. Противоопухолевую активность лекарственного средства оценивали согласно RECIST 1.1.

Продолжительность исследования для отдельного пациента включала период включения не более 4 недель (базовый период), период лечения, составляющий по меньшей мере 1 цикл (2 недели), визит окончания лечения (EOT) около 30 дней после последнего введения исследуемого медицинского изделия (lMP) и по меньшей мере один визит последующего наблюдения (около 30 дней после визита EOT) для оценки иммуногенности.

КРИТЕРИИ ВКЛЮЧЕНИЯ

I 1. Местно распространенное или метастатическое солидное злокачественное опухолевое заболевание, для которого, по суждению исследователя, нет доступной стандартной альтернативной терапии, и которое соответствует последующим критериям включения.

I 2. По меньшей мере 6×5 мкм препараты и дополнительное количество препаратов, которые могут иметь размеры либо 3×10 мкм (лучше всего), либо 6×5 мкм, либо эквивалент для сохранения такого же общего количества необходимого материала из архивной ткани FFPE, должны быть доступны для местного тестирования на месте и/или транспортировки заказчику клинического исследования, или в лабораторию, обозначенную заказчиком клинического исследования, оценки экспрессии CEACAM5 в опухоли (ретроспективно в фазу повышения дозы и проспективно в фазу применения препарата в стабильной дозе) и исследования других прогностических биомаркеров ответа. Если меньше материала доступно, пациент все еще может быть подходящим после обсуждения с заказчиком клинического исследования, который оценивал и подтверждал, что было достаточно соответствующего материала для основных оценок.

I 3. Для участников когорт фазы повышения дозы (главной и вторичной). Включение было расширено (хотя без ограничения) для опухолей, экспрессирующих или способных экспрессировать CEACAM5, которые предусматривали злокачественные заболевания с высоким показателем распространения экспрессии CEACAM5 (т. е NSQ NSCLC). Для участников когорт фазы применения препарата в стабильной дозе включение было ограничено пациентами либо с подтипами NSQ NSCLC, либо другими подтипами рака легкого. На основании местной или центральной оценки экспрессии CEACAM5 на архивной опухолевой ткани были две независимые когорты в фазе применения препарата в стабильной дозе NSQ NSCLC. Первая (когорта легкого), участие которой началось до поправки #4, включала пациентов с показателем экспрессии CEACAM5 ≥2+ по интенсивности с участием по меньшей мере 50% популяции опухолевых клеток. Вторая независимая когорта (вторая когорта легкого) включала пациентов, у которых был положительный результат предварительной проверки с интенсивностью ≥2+ от 21% до <50% популяции опухолевых клеток.

I 4. По меньшей мере один измеряемый очаг поражения согласно RECIST v1.1 только в фазе применения препарата в стабильной дозе.

I 5. По меньшей мере один очаг поражения, подлежащий биопсии (только когорта, принимающая участие в фазе применения препарата в стабильной дозе). Пациент должен быть согласен с исходной биопсией для ретроспективного подтверждения экспрессии CEACAM5 в опухоли до начала лечения, за исключением если NSCLC или SCLC протекают без очага поражения, подлежащего биопсии).

ИССЛЕДУЕМЫЙ ПРЕПАРАТ

Лекарственная форма

huMAb2-3-SPDB-DM4 ADC поставляли в виде 25 мл извлекаемого объема концентрата для раствора для инфузий 125 мг (5 мг/мл), содержащегося в стеклянном флаконе типа I на 30 мл.

Доза лекарственного средства за введение

Лекарственное средство вводят каждые 2 недели в MTD (100 мг/м²), как определено на протяжении фазы повышения дозы.

Площадь поверхности тела пациентов (BSA) рассчитывали с помощью их роста и фактического веса тела. Для пациентов с BSA >2,2 м² дозу будут рассчитывать исходя из 2,2 м² BSA.

Премедикация антагонистом H1-гистаминовых рецепторов (дифенилгидрамином 50 мг PO или эквивалентом [например, дексхлорфенирамином], осуществляемая примерно за 1 час до введения huMAb2-3-SPDB-DM4), необходима для всех пациентов.

С применением насоса для контролируемой инфузии huMAb2-3-SPDB-DM4 будут вводить путем внутривенной инфузии со скоростью 2,5 мг/мин. в течение первых 30 минут и затем повышать до 5 мг/мин. при отсутствии реакций гиперчувствительности.

Точная доза и время вводимого IMP (день/месяц/год ч:мин.) будут задокументированы в eCRF.

Продолжительность лечения

huMAb2-3-SPDB-DM4 вводили в день 1 и повторяли каждые 14 дней; этот период 14 дней представлял собой один цикл лечения (1 цикл). Пациенты могут продолжать лечение до прогрессирования заболевания, неприемлемой токсичности или готовности прекратить лечение.

Способ разведения и инфузии

Бактериостатическое средство не присутствовало в продукте; следовательно, требовалось соблюдение асептической методики. Перед дозированием фармацевт-исследователь должен отдельно приготовить дозу для каждого пациента, начиная с предварительно заполненного пакета разбавителя (0,9% хлорида натрия).

Как только раствор был приготовлен, дозу вводили пациенту в пределах 7,5 часов от момента приготовления пакета до конца инфузии дозы.

Применяли два типа введения.

· Инфузия посредством шприцевой помпы для низких доз (до 30 мг/м²).

· Инфузия посредством насоса для других доз.

Внутривенную систему для введения с 0,2-микронным фильтрующим устройством, прикрепленным к ней, применяли для инфузий. Исследуемое лекарственное средство не вводили с любыми другими внутривенными жидкостями. Однако, инфузионную трубку необязательно примировали изотоническим раствором или huMAb2-3-SPDB-DM4. Для инфузионных объемов ≤25 мл промывание и разрушение 25 мл huMAb2-3-SPDB-DM4 необходимо обеспечить до инфузии дозы. В конце инфузии с использованием насоса, капельницу промывали изотоническим раствором, как необходимо для обеспечения доставки полной дозы. В конце инфузии посредством шприцевой помпы оставшееся количество huMAb2-3-SPDB-DM4 в шприце разрушали.

ОЦЕНКА ОТВЕТА ОПУХОЛИ

Для оценки объективного ответа или будущей прогрессии было необходимо оценить общую опухолевую нагрузку на исходном уровне и применить это в качестве показателя сравнения для последующих измерений. Только пациенты с измеряемыми проявлениями болезни на исходном уровне были включены в протоколы, где объективный ответ опухоли являлся первичной конечной точкой. Измеряемые проявления заболевания определяли посредством наличия по меньшей мере одного измеряемого очага поражения. В исследованиях, где первичная конечная точка представляла собой прогрессирование опухоли (либо время до прогрессирования, либо доля прогрессирования в установленный срок), в протоколе было указано, если включение является ограниченным пациентами с измеряемыми проявлениями болезни или пациенты с неизмеряемыми проявлениями болезни также являются подходящими. См. таблицу 2 и таблицу 3.

Критерии ответа

Таблица 2

Оценка целевых очагов поражения

Полный ответ (CR) Исчезновение всех целевых очагов поражения. Любые патологические лимфатические узлы (как целевые, так и нецелевые) должны демонстрировать уменьшение по короткой оси до <10 мм.

Частичный ответ (PR): по меньшей мере 30% уменьшение суммы диаметров целевых очагов поражения, если принимать в качестве эталона сумму диаметров на исходном уровне.

Прогрессирование заболевания (PD): по меньшей мере 20% увеличение суммы диаметров целевых очагов поражения, если принимать в качестве эталона наименьшую сумму в исследовании (она включает сумму на исходном уровне, если она является наименьшей в исследовании). Помимо относительного увеличения на 20%, сумма также должна демонстрировать абсолютное увеличение на по меньшей мере 5 мм. (Примечание: появление одного или нескольких новых очагов поражения также считается прогрессированием).

Стабилизация заболевания (SD): отсутствует как достаточное уменьшение размеров, соответствующее критериям PR, так и достаточное увеличение размеров, соответствующее критериям PD, если принимать в качестве эталона наименьшую сумму диаметров во время исследования.

Таблица 3

Оценка нецелевых очагов поражения

Исчезновение всех нецелевых очагов поражения и нормализация уровня опухолевого маркера. Все лимфатические узлы должны иметь непатологический размер (короткая ось < 10 мм).

Недостаточный Сохранение одного или нескольких нецелевых очагов поражения и/или поддержание уровня опухолевого маркера.

Ответ/стабилизация заболевания выше нормального диапазона значений.

(SD):

Прогрессирование заболевания (PD): Очевидное прогрессирование (см. комментарии ниже) существующих нецелевых очагов поражения. (Примечание: появление одного или нескольких новых очагов поражения также считается прогрессированием).

Хотя чистое прогрессирование только "нецелевых" очагов поражения является исключением, в таких обстоятельствах мнение лечащего врача. Должно преобладать и статус прогрессирования должен быть подтвержден позже с помощью экспертной группы (или руководителя исследования).

ОЦЕНКА НАИЛУЧШЕГО ОБЩЕГО ОТВЕТА

В следующей таблице представлено краткое описание расчета статуса общего ответа в каждый момент времени для пациентов, характеризующихся измеряемыми проявлениями болезни на исходном уровне.

Таблица 4

Целевые очаги поражения Нецелевые очаги поражения Новые очаги поражения Общий ответ CR CR Нет CR CR Отсутствие CR/Отсутствие PD Нет PR CR Не оценено Нет PR PR Отсутствие PD или не все оценены Нет PR SD Отсутствие PD или не все оценены Нет SD Не все оценены Отсутствие PD Нет NE PD Любой Да или нет PD Любой PD Да или нет PD Любой Любой Да PD

Таблица 5

Общий ответ Общий ответ НАИЛУЧШИЙ общий ответ

Первый момент времени Последующий момент времени

CR CR CR

CR PR SD, PD или PRa

CR SD SD предусмотрены минимальные критерии для продолжительности SD, соответствующие, иным образом, PD

CR PD SD предусмотрены минимальные критерии для продолжительности SD, соответствующие, иным образом, PD

CR NE SD предусмотрены минимальные критерии для продолжительности SD, соответствующие, иным образом, PD

PR CR PR

PR PR PR

PR SD SD

PR PD SD предусмотрены минимальные критерии для продолжительности SD, соответствующие, иным образом, PD

PR NE SD предусмотрены минимальные критерии для продолжительности SD, соответствующие, иным образом, PD

NE NE NE

a Если CR точно соответствует в первый момент времени, тогда любое заболевание, наблюдаемое в последующий момент времени, даже заболевание, соответствующее критериям PR относительно исходного уровня, создает PD заболевания в этот момент (поскольку заболевание должно было появиться снова после CR). Наилучший ответ будет зависеть от того, соответствовала ли минимальная продолжительность для SD. Однако, иногда ‘CR’ может требоваться, когда последующие снимки свидетельствуют, что малые очаги поражения скорее всего все еще присутствуют и, если точнее, у пациента был PR, а не CR в первый момент времени. В этих обстоятельствах исходный CR должен быть изменен на PR и наилучший ответ представляет собой PR.

Наилучший общий ответ определяли, как только все данные для пациента были известны.

Определение наилучшего ответа в испытаниях, где подтверждение полного или частичного ответа не требовалось. Наилучший ответ в этих испытаниях определяется как наилучший ответ по всем моментам времени (например, пациент с SD при первой оценке, PR при второй оценке и PD при последней оценке характеризуется наилучшим общим ответом PR). Когда считается, что SD представляет собой наилучший ответ, она также соответствует предусмотренному протоколом минимальному времени от исходного уровня. Если минимальное время не соответствует, когда SD представляет собой, иным образом, наилучший ответ в момент времени, наилучший ответ пациента зависит от последующих оценок. Например, пациент с SD при первой оценке, PD при второй и который не соответствовал минимальной продолжительности для SD, будет характеризоваться наилучшим ответом PD. Тот же пациент, выбывший из обследования после первой оценки SD, будет считаться не подлежащим оценке.

Определение наилучшего ответа в испытаниях, где подтверждение полного или частичного ответа

требовалось. Полный или частичный ответы могут требоваться только в том случае, если критерии для каждого из них соответствуют в последующий момент времени, как предусмотрено в протоколе (как правило, через 4 недели). В этих обстоятельствах наилучший общий ответ был интерпретирован в таблице 5.

CEACAM5 - (IHC) СПОСОБ ПОДСЧЕТА С ПОМОЩЬЮ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Окрашенные иммуногистохимические препараты CEACAM5 оценивает патоморфолог посредством световой микроскопии.

Положительный результат исследования на CEACAM5 определяется посредством процента жизнеспособных опухолевых клеток, экспрессирующих CEACAM5, и являющихся положительными в отношении окрашивания мембран.

Опухолевые клетки являются CEACAM5-положительными, если они демонстрируют частичное либо полное циркулярное окрашивание цитоплазматической мембраны с интенсивностями 2+ и 3+. Они считаются отрицательными, если они демонстрируют окрашивание с интенсивностью 1+ (слабое окрашивание) или не демонстрируют окрашивание (интенсивность 0).

Все опухолевые клетки, наблюдаемые на срезе, оценивали на предмет CEACAM5.

Минимум 100 жизнеспособных опухолевых клеток должны присутствовать на срезе для определения процента CEACAM5-положительных клеток.

Подсчет охватывает процент опухолевых клеток, окрашенных с каждым показателем интенсивности, измеренной, как указано ниже:

% CEACAM5-положительных клеток=100 ×# опухолевых клеток с окрашенной мембраной, экспрессирующих CEACAM5, с интенсивностью ≥ 2+/общее # жизнеспособных опухолевых клеток, присутствующих в срезе.

На фиг. 1A, 1B и 1C показаны примеры интенсивностей окрашивания 1+, 2+, 3+ соответственно. Показатели интенсивности окрашивания мембраны 2+ и 3+ считаются CEACAM5-положительными. Общее описание способа IHC, включающего подсчет, предоставляется So-Woon Kim et al (Journal of Pathology and Translational Medicine 2016; 50: 411-418).

Пример 2. TED13751 - фаза применения препарата в стабильной дозе - когорта с NSQ NSCLC - начальная фаза промежуточного анализа

Как обсуждалось в примере 1, на основании местной или центральной оценки экспрессии CEACAM5 на архивной опухолевой ткани были две независимые когорты в фазе применения препарата в стабильной дозе без NSQ NSCLC: первая когорта включала пациентов с экспрессией CEACAM5 ≥2+ по интенсивности с участием по меньшей мере 50% популяции опухолевых клеток. Вторая независимая когорта (вторая когорта легкого) включала пациентов, у которых был положительный результат предварительной проверки с интенсивностью ≥2+ от 21% до <50% популяции опухолевых клеток. Обе когорты были выбраны для лечения 100 мг/м² huMAb2-3-SPDB-DM4.

Для когорты с NSQ NSCLC (легкого) с экспрессией CEACAM5 ≥50% в популяции опухолевых клеток с интенсивностью ≥2+ минимум 30 пациентов, предварительно подвергавшихся лечению антителами к PD1/PDL1 были включены для оценки противоопухолевой активности huMAb2-3-SPDB-DM4 у пациентов, предварительно подвергавшихся лечению антителом к PDL1, и для обеспечения минимальной мощности для анализа в подгруппах в этой субпопуляции. Для когорты с NSQ NSCLC (второй когорты легкого) с экспрессией CEACAM5 от ≥1% до ≥50% в популяции опухолевых клеток с интенсивностью ≥2+ взаимосвязь между уровнем экспрессии CEACAM5 и исходом эффективности можно оценить посредством добавления когорты из 28 подвергавшихся лечению пациентов, у которых в опуховевых клетках с легким окрашиванием мембраны экспрессируется CEACAM5 (по меньшей мере 1% положительных опухолевых клеток и <50% опухолевых клеток с интенсивностью >2+).

Как показано в таблицах 1 и 2, объективный ответ 25,9% наблюдали в когорте с высокими уровнями экспрессии CEACAM5 (когорта легкого) при этом объективный ответ не наблюдали в когорте с низкой экспрессией (вторая когорта легкого). В таблицах 1 и 2 обобщены результаты объективного ответа пациентов с немелкоклеточным раком легкого, подвергавшихся лечению huMAb2-3-SPDB-DM4. В таблицах сравнивается объективный ответ между пациентами с NSCLC с показателем экспресси hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50 (состоящий из интенсивностей 2+ и 3+) и пациентами с показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который равняется 1-49.

Таблица 1. Объективный ответ пациентов с показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50 (состоящий из интенсивностей 2+ и 3+)

(CEACAM5 > 50%) (N=27) Объективный ответ (CR+PR) 7 (25,9%) Полный ответ 0 Частичный ответ 7 (*25,9%) Стабилизация заболевания 12 (44,4%) Прогрессирование заболевания 8 (29,6% Частота контроля заболевания (PR+SD) 19 (70,3%)

* 90% доверительный интервал: 14,7% - 41,52%.

Таблица 2. Объективный ответ пациентов с показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который равняется 1-49 (состоящий из интенсивностей 2+ и 3+)

(CEACAM5 1- 49%) (N=11) Объективный ответ (CR+PR) 0 Стабилизация заболевания 5 (45,5%) Прогрессирование заболевания 6 (54,6%)

Дополнительно, как изображено на фиг. 2, наилучшее относительное уменьшение массы опухоли наблюдали у пациентов с показателем экспрессии CEACAM5, который равняется 50-80%, или больше 80%.

Как изображено в таблице 3 и 4, продолжительность ответа (DoR) и время до прогрессирования (TTP) также улучшились в когорте с высокими уровнями экспрессии (когорта легкого).

Таблица 3. Продолжительность ответа для пациентов с NSCLC, подвергавшихся лечению huMAb2-3 - SPDB-DM4, с показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50 (состоящий из интенсивностей 2+ и 3+)

Продолжительность ответа (месяцы) (N=27) Количество ответов 7 Медианное значение 4,5 90% CI 3,68 до 8,51

Таблица 4. Время до прогрессирования для пациентов с NSCLC, подвергавшихся лечению huMAb2-3 - SPDB-DM4, с показателем экспрессии hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50 (состоящий из интенсивностей 2+ и 3+)

Время до прогрессирования (месяцы) (N=27) Медианное значение 3,7 90% CI 2,60 до 5,39

Кроме того, из этих пациентов с высокими уровнями экспрессии (показатель экспрессии hCEACAM5 в процентах, который больше или равняется 50) аналогичный объективный ответ получали у тех пациентов, которые предварительно подвергались лечению антителами к PD1/PDL1, и тех, которые предварительно не подвергались лечению антителами к PD1/PDL1 (таблицы 5 и 6).

Таблица 5. Наилучший объективный ответ ICI (антитело к PD1/PDL1) у пациентов с NSCLC, предварительно подвергавшихся лечению (CEACAM5)

Предварительно подвергавшиеся лечению антителами к PD1/PDL1 (N=17) Объективный ответ (CR+PR) 4 (23,5%) Полный ответ 0 Частичный ответ 4 (*23,5%) Стабилизация заболевания 9(52,9%) Прогрессирование заболевания 4 (23,6%) Частота контроля заболевания (PR+SD) 13 (76,4%)

* 90% доверительный интервал: 11,3% - 43,30%

Таблица 6. Наилучший объективный ответ ICI (антитела к PD1/PDL1) у пациентов с NSCLC, предварительно не подвергавшихся лечению (CEACAM5 ≥ 50%)

Предварительно не подвергавшиеся лечению антителами к PD1/PDL1 (N=10) Объективный ответ (CR+PR) 3 (30,0%) Полный ответ 0 Частичный ответ 3 (**30,0%) Стабилизация заболевания 3 (30,0%) Прогрессирование заболевания 4 (40,0%) Частота контроля заболевания (PR+SD) 6 (60,0%)

* 90% доверительный интервал: 12,69% - 55,83%.

Пример 3. TED13751 - фаза применения препарата в стабильной дозе - когорта субъектов с высокими уровнями экспрессии с NSQ NSCLC - начальная фаза полного когортного анализа у 32 подвергавшихся лечению пациентов

Полный анализ когорты 32 пациентов подтверждает промежуточный анализ примера 2.

Он демонстрирует обнадеживающую противоопухолевую активность у пациентов, предварительно подвергавшихся интенсивному лечению, с NSQ NSCLC CEACAM5 ≥ 50%. Эта противоопухолевая активность была ассоциирована с частотой ответов 25% по RECIST1.1 (90% CI 14,70-39,20%).

Как показано в таблице 7, объективный ответ 25% наблюдали у 32 пациентов, подвергавшихся лечению в когорте с высокими уровнями экспрессии CEACAM5 (когорта легкого).

Таблица 7. Наилучший объективный ответ у 32 пациентов, подвергавшихся лечению в когорте с высокими уровнями экспрессии CEACAM5 (когорта легкого).

(CEACAM5 > 50%)
"Субъекты, в организме которых с высокими уровнями происходит экспрессия" (N=32) Объективный ответ (CR+PR)
Полный ответ
Частичный ответ 8 (*25,0%)
0
8 (*25,0%) Стабилизация заболевания
Прогрессирование заболевания
Частота контроля заболевания (PR+SD) 12 (37,5%)
12** (37,5%)
20 (62,5%)

Дополнительно, как изображено на фиг. 3, наилучшее относительное уменьшение массы опухоли, как правило, наблюдали у пациентов с показателем экспрессии CEACAM5, который равняется 50-80%, или больше 80%. Как изображено на фиг. 4, время до прогрессирования (TTP) также улучшились в когорте с высокими уровнями экспрессии (когорта легкого). Кроме того, среди этих пациентов с высокими уровнями экспрессии аналогичный объективный ответ получали у тех пациентов, которые предварительно подвергались лечению антителами к PD1/PDL1, и тех, которые предварительно не подвергались лечению антителами к PD1/PDL1, как показано в таблице 8 ниже.

Таблица 8. Наилучший объективный ответ у пациентов, предварительно подвергавшихся лечению или предварительно не подвергавшихся лечениюантителами к PD1/PDL1

Прогностический фактор Количество Ответы (n[%]) 90%CIa Любые предшествующие средства терапии антителами к PD1/PDL1 Количество 32 Предшествующие антитела к PD1/PDL1 20 5 (25,0%) (от 12,74% до 43,22%) Без предшествующих антител к PD1/PDL1 12 3 (25,0%) (от 10,47% до 48,73%) Оцененный посредством интервала счета Уилсона
* Исключая первичный очаг опухоли
Анализы в подгруппах будут выполнены, только если достаточно пациентов в каждой подкатегории

Пример 4. TED13751 - фаза применения препарата в стабильной дозе - когорта субъектов, в организме которых с умеренными уровнями происходит экспрессия, с NSQ NSCLC

Как показано в таблице 9, только один объективный ответ (у 20 пациентов) наблюдали в когорте с низкими уровнями экспрессии (вторая когорта легкого)

Таблица 9. Объективный ответ у 20 пациентов, наблюдаемый в когорте с умеренными уровнями экспрессии (вторая когорта легкого)

(CEACAM5 1- 49%)
"Субъекты, в организме которых с умеренными уровнями происходит экспрессия" (N=20) Объективный ответ (CR+PR) 1 (**5,0%) Полный ответ 0 Частичный ответ 1 (**5,0%) Стабилизация заболевания 11 (55,0%) Прогрессирование заболевания 7 (35,0%) Не подлежащий оценке 1 (5,0%) Частота контроля заболевания (PR+SD) 12 (60,0%)

В заключение, эти данные демонстрируют, что проверка обоснованности концепции была достигнута в субпопуляции типов рака легкого NSCLC, подвергавшейся лечению с помощью huMAb2-3-SPDB-DM4. В частности, эти данные поддерживают заключение, что huMAb2-3-SPDB-DM4 является эффективным в лечении NSQ NSCLC, подтипа, который составляет примерно 60% типов рака легкого. Кроме того, эти данные поддерживают заключение, что huMAb2-3-SPDB-DM4 является, в частности, эффективным в лечении NSQ NSCLC с высокими уровнями экспрессии CEACAM5, типов опухолей, которые составляют примерно 20% типов рака NSQ NSCLC.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SANOFI

<120> ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОКОНЪЮГАТОВ К CEACAM5 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА ЛЕГКОГО

<130> FR2019/003 EP

<160> 23

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH1a из гуманизированного антитела MAb2

<400> 1

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL1c из гуманизированного антитела MAb2

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 3

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1

<400> 3

Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr Asp

1 5

<210> 4

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2

<400> 4

Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr

1 5

<210> 5

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3

<400> 5

Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 6

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1

<400> 6

Glu Asn Ile Phe Ser Tyr

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3

<400> 7

Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 8

<211> 449

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь

<400> 8

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 9

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь

<400> 9

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 10

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> домен A3-B3 белка CEACAM5 человека

<400> 10

Ser Gly Ala Asn Leu Asn Leu

1 5

<210> 11

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> эпитопы домена A3-B3

<400> 11

Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu Phe

1 5 10

<210> 12

<211> 654

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> внеклеточный домен CEACAM5 Macaca fascicularis

<400> 12

Gln Leu Thr Ile Glu Ser Arg Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly Lys Glu

1 5 10 15

Val Leu Leu Leu Ala His Asn Val Ser Gln Asn Leu Phe Gly Tyr Ile

20 25 30

Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Ala Ser Arg Arg Ile Gly Ser Cys

35 40 45

Val Ile Arg Thr Gln Gln Ile Thr Pro Gly Pro Ala His Ser Gly Arg

50 55 60

Glu Thr Ile Asp Phe Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Val Thr Gln

65 70 75 80

Ser Asp Thr Gly Ser Tyr Thr Ile Gln Val Ile Lys Glu Asp Leu Val

85 90 95

Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu Pro Lys

100 105 110

Pro Tyr Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Ile Glu Asp Lys Asp Ala

115 120 125

Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Thr Thr Tyr Leu Trp

130 135 140

Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Glu Leu Ser

145 150 155 160

Ser Asp Asn Arg Thr Leu Thr Val Phe Asn Ile Pro Arg Asn Asp Thr

165 170 175

Thr Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Val Arg Arg Ser

180 185 190

Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro Thr Ile

195 200 205

Ser Pro Leu Asn Thr Pro Tyr Arg Ala Gly Glu Tyr Leu Asn Leu Thr

210 215 220

Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Thr Ala Gln Tyr Phe Trp Phe Val Asn

225 230 235 240

Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn Ile Thr

245 250 255

Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Met Cys Gln Ala His Asn Ser Ala Thr

260 265 270

Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Ala Ile Thr Val Tyr Ala Glu Leu

275 280 285

Pro Lys Pro Tyr Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Ile Glu Asp Lys

290 295 300

Asp Ala Val Thr Leu Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Thr Thr Tyr

305 310 315 320

Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Arg Leu Ser Val Ser Ser Arg Leu Glu

325 330 335

Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Val Phe Asn Ile Pro Arg Asn

340 345 350

Asp Thr Thr Phe Tyr Glu Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Val Arg

355 360 365

Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro

370 375 380

Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Pro Tyr Arg Ala Gly Glu Asn Leu Asn

385 390 395 400

Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Ala Ala Gln Tyr Phe Trp Phe

405 410 415

Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn

420 425 430

Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Met Cys Gln Ala His Asn Ser

435 440 445

Ala Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Ala Ile Thr Val Tyr Val

450 455 460

Glu Leu Pro Lys Pro Tyr Ile Ser Ser Asn Asn Ser Asn Pro Ile Glu

465 470 475 480

Asp Lys Asp Ala Val Thr Leu Thr Cys Glu Pro Val Ala Glu Asn Thr

485 490 495

Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Ser Val Ser Pro Arg

500 505 510

Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Ile Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr

515 520 525

Arg Asn Asp Thr Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Ser Glu Ser

530 535 540

Ala Lys Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Thr Tyr Gly Pro Asp

545 550 555 560

Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Leu Ser Tyr Arg Ser Gly Ala Asn

565 570 575

Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Asp Ser Asn Pro Ser Pro Gln Tyr Ser

580 585 590

Trp Leu Ile Asn Gly Thr Leu Arg Gln His Thr Gln Val Leu Phe Ile

595 600 605

Ser Lys Ile Thr Ser Asn Asn Asn Gly Ala Tyr Ala Cys Phe Val Ser

610 615 620

Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Asn Ile Ser Val

625 630 635 640

Ser Ser Gly Asp Ser Ala Pro Gly Ser Ser Gly Leu Ser Ala

645 650

<210> 13

<211> 702

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CEACAM5 человека

<400> 13

Met Glu Ser Pro Ser Ala Pro Pro His Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln

1 5 10 15

Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr

20 25 30

Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly

35 40 45

Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly

50 55 60

Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile

65 70 75 80

Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser

85 90 95

Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile

100 105 110

Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp

115 120 125

Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu

130 135 140

Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys

145 150 155 160

Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr

165 170 175

Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln

180 185 190

Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn

195 200 205

Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg

210 215 220

Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro

225 230 235 240

Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Ser Tyr Arg Ser Gly Glu Asn Leu Asn

245 250 255

Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe

260 265 270

Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn

275 280 285

Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys Gln Ala His Asn Ser

290 295 300

Asp Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Thr Ile Thr Val Tyr Ala

305 310 315 320

Glu Pro Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu

325 330 335

Asp Glu Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr

340 345 350

Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg

355 360 365

Leu Gln Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr

370 375 380

Arg Asn Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Glu Leu Ser

385 390 395 400

Val Asp His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp

405 410 415

Asp Pro Thr Ile Ser Pro Ser Tyr Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn

420 425 430

Leu Ser Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser

435 440 445

Trp Leu Ile Asp Gly Asn Ile Gln Gln His Thr Gln Glu Leu Phe Ile

450 455 460

Ser Asn Ile Thr Glu Lys Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Cys Gln Ala Asn

465 470 475 480

Asn Ser Ala Ser Gly His Ser Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Thr Val

485 490 495

Ser Ala Glu Leu Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro

500 505 510

Val Glu Asp Lys Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Ala Gln

515 520 525

Asn Thr Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser

530 535 540

Pro Arg Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn

545 550 555 560

Val Thr Arg Asn Asp Ala Arg Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser

565 570 575

Val Ser Ala Asn Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asp Val Leu Tyr Gly

580 585 590

Pro Asp Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly

595 600 605

Ala Asn Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gln

610 615 620

Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu

625 630 635 640

Phe Ile Ala Lys Ile Thr Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe

645 650 655

Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile

660 665 670

Thr Val Ser Ala Ser Gly Thr Ser Pro Gly Leu Ser Ala Gly Ala Thr

675 680 685

Val Gly Ile Met Ile Gly Val Leu Val Gly Val Ala Leu Ile

690 695 700

<210> 14

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен тяжелой цепи MAb1

<400> 14

Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Leu Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 15

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен легкой цепи MAb1

<400> 15

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 16

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен тяжелой цепи MAb2

<400> 16

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Phe Pro Asp Thr Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 17

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен легкой цепи MAb2

<400> 17

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Thr Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 18

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен тяжелой цепи MAb3

<400> 18

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Pro Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Phe Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Val Asn Tyr Tyr Asp Ser Ser Phe Leu Asp Trp Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен легкой цепи MAb3

<400> 19

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Arg Phe Met Ser Thr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Leu

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 20

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен тяжелой цепи MAb4

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Ser Ser Tyr Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Phe Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala His Tyr Phe Gly Thr Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 21

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен легкой цепи MAb4

<400> 21

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Ile Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 22

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен тяжелой цепи MAb5

<400> 22

Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Tyr Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 23

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вариабельный домен легкой цепи MAb5

<400> 23

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Thr Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<---

Изобретение относится к области биохимии, в частности к применению антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, для лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого. Также раскрыт способ лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого. Изобретение позволяет эффективно лечить неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легкого. 6 н. и 24 з.п. ф-лы, 4 ил., 9 табл., 4 пр.

1. Применение антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, для лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQ NSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где антитело специфически связывает hCEACAM5 и где антитело содержит VH и VL, где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 (GFVFSSYD); HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 (ISSGGGIT); HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5 (AAHYFGSSGPFAY); LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6 (ENIFSY); LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7 (QHHYGTPFT), где субъект характеризуется экспрессией hCEACAM5, состоящей из интенсивностей 2+ и 3+, в более чем или равном 50% популяций опухолевых клеток, где иммуноконъюгат составлен для введения при уровне дозы 80, 100 или 120 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта.

2. Применение по п. 1, где субъект представляет собой субъекта, в организме которого с высокими уровнями экспрессируется родственная раковоэмбриональному антигену молекула клеточной адгезии 5 (CEACAM5).

3. Применение по любому из пп. 1 или 2, где субъект предварительно подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого.

4. Применение по п. 3, где средство или лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из: химиотерапевтического средства, ингибитора ангиогенеза, ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитора рецептора тирозинкиназы (ROS1) и ингибитора контрольных точек иммунного ответа.

5. Применение по п. 4, где ингибитор контрольных точек иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1 и/или ингибитор PD-L1.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где VH содержит SEQ ID NO: 1 (EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSS).

7. Применение по п. 6, где тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8

(EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWV

AYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFG

SSGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV

TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT

KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV

DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN

GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK

GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS

CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG).

8. Применение по любому из пп. 1-7, где VL содержит SEQ ID NO: 2 (DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIK).

9. Применение по п. 8, где легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9

(DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVY

NTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLE

IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS

QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE

C).

10. Применение по любому из пп. 1-9, где антитело в иммуноконъюгате является конъюгированным или связанным с по меньшей мере одним средством для подавления роста.

11. Применение по п. 10, где указанное средство для подавления роста представляет собой цитотоксическое средство.

12. Применение по п. 10 или 11, где указанное средство для подавления роста выбрано из группы, состоящей из химиотерапевтических средств, ферментов, антибиотиков и токсинов, таких как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины, таксоидов, алкалоидов барвинка, таксанов, майтанзиноида или аналогов майтанзиноида, производных томаймицина или пирролбензодиазепина, производных криптофицина, производных лептомицина, аналогов ауристатина и доластатина, пролекарств, ингибиторов топоизомеразы II, алкилирующих ДНК средств, антитубулиновых средств и аналогов CC-1065 или CC-1065.

13. Применение по п. 10 или 11, где указанное средство для подавления роста представляет собой N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин (DM1) или N2'-деацетил-N-2'(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM4).

14. Применение по любому из пп. 10-13, где антитело ковалентно присоединено посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста.

15. Применение по п. 14, где указанный линкер выбран из группы, состоящей из N-сукцинимидилпиридилдитиобутирата (SPDB), 4-(пиридин-2-илдисульфанил)-2-сульфомасляной кислоты (сульфо-SPDB) и сукцинимидил-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата (SMCC).

16. Применение по любому из пп. 1-15, где иммуноконъюгат составлен для введения каждые 14 дней или каждые 3 недели.

17. Способ лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQ NSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ включает введение антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, которые специфически связывают hCEACAM5, где антитело содержит VH и VL, где VH содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и где VL содержит три CDR LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3 (GFVFSSYD); HCDR2 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4 (ISSGGGIT); HCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5 (AAHYFGSSGPFAY); LCDR1 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 6 (ENIFSY); LCDR2 содержит аминокислотную последовательность NTR; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7 (QHHYGTPFT), где субъект характеризуется экспрессией hCEACAM5, состоящей из интенсивностей 2+ и 3+, в более чем или равном 50% популяций опухолевых клеток,

где антитело вводят при уровне дозы 80, 100 или 120 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта.

18. Способ по п. 17, где субъект представляет собой субъекта, в организме которого с высокими уровнями экспрессируется родственная раковоэмбриональному антигену молекула клеточной адгезии 5 (CEACAM5).

19. Способ по п. 17, где субъект ранее подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого.

20. Способ по п. 17, где средство или лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из: химиотерапевтического средства, ингибитора ангиогенеза, ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), ингибитора рецептора тирозинкиназы (ROS1) и ингибитора контрольных точек иммунного ответа.

21. Способ по п. 20, где ингибитор контрольных точек иммунного ответа представляет собой ингибитор PD-1 и/или ингибитор PD-L1.

22. Способ по любому из пп. 17-21, где антитело является конъюгированным или связанным с по меньшей мере одним средством для подавления роста.

23. Способ по п. 22, где указанное средство для подавления роста представляет собой N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин (DM1) или N2'-деацетил-N-2'(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM4).

24. Способ по любому из пп. 17-23, где антитело ковалентно присоединено посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста.

25. Способ по п. 24, где указанный линкер выбран из группы, состоящей из N-сукцинимидилпиридилдитиобутирата (SPDB), 4-(пиридин-2-илдисульфанил)-2-сульфомасляной кислоты (сульфо-SPDB) и сукцинимидил-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата (SMCC).

26. Способ по любому из пп. 17-25, где антитело вводят каждые 14 дней или каждые 3 недели.

27. Применение иммуноконъюгата, содержащего антитело, для лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQ NSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где антитело специфически связывается с hCEACAM5, и где антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8 (EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISS

GGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGP

FAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS

WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV

DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV

SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFY

PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSPG), и где легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9

(DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTL

AEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIKRTV

AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT

EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC), где иммуноконъюгат вводят при уровне дозы 80, 100 или 120 мг/м²_, исходя из площади поверхности тела субъекта, каждые 14 дней или каждые 3 недели.

28. Способ лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQ NSCLC), где способ содержит введение иммуноконъюгата, содержащего антитело, где антитело специфически связывается с hCEACAM5, и где антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8

(EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISS

GGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGP

FAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS

WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV

DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV

SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFY

PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSPG), и где легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9

(DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTL

AEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIKRTV

AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT

EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC), где иммуноконъюгат вводят при уровне дозы 80, 100 или 120 мг/м², исходя из площади поверхности тела субъекта, каждые 14 дней или каждые 3 недели.

29. Применение антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, для лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQ NSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, где антитело специфически связывает hCEACAM5 и где антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8

(EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWV

AYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCA

AHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC

LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG

TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP

PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR

EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG

QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY

KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS

LSLSPG), легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9

(DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVY

NTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGS

GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV

DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ

GLSSPVTKSFNRGEC),

где антитело ковалентно присоединено посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста, и указанный линкер выбирают из группы, состоящей из N-сукцинимидилпиридилдитиобутирата (SPDB), 4-(пиридин-2-илдисульфанил)-2-сульфомасляной кислоты (сульфо-SPDB) и сукцинимидил-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата (SMCC),

где средство для подавления роста представляет собой (N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин) DM1 или N2'-деацетил-N-2'(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM4),

где иммуноконъюгат вводят в виде отдельного средства,

где субъект характеризуется экспрессией hCEACAM5, состоящей из интенсивностей 2+ и 3+, в более чем или равном 50% популяций опухолевых клеток,

где субъект предварительно подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого, где средство или лекарственное средство выбраны из химиотерапевтического средства и ингибитора контрольных точек иммунного ответа,

где иммуноконъюгат вводят при уровне дозы 80, 100 или 120 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта, каждые 14 дней или каждые 3 недели.

30. Способ лечения неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSQ NSCLC) у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ включает введение иммуноконъюгата, содержащего антитело, где антитело специфически связывает hCEACAM5 и где антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 8

(EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWV

AYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCA

AHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC

LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG

TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP

PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR

EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG

QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY

KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS

LSLSPG), легкая цепь содержит SEQ ID NO: 9

(DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVY

NTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGS

GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV

DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ

GLSSPVTKSFNRGEC),

где антитело ковалентно присоединено посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера к по меньшей мере одному средству для подавления роста, и указанный линкер выбирают из группы, состоящей из N-сукцинимидилпиридилдитиобутирата (SPDB), 4-(пиридин-2-илдисульфанил)-2-сульфомасляной кислоты (сульфо-SPDB) и сукцинимидил-(N-малеимидометил)-циклогексан-1-карбоксилата (SMCC),

где средство для подавления роста представляет собой (N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин) DM1 или N2'-деацетил-N-2'(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM4),

где иммуноконъюгат вводят в виде отдельного средства,

где субъект характеризуется экспрессией hCEACAM5, состоящей из интенсивностей 2+ и 3+, в более чем или равном 50% популяций опухолевых клеток,

где субъект предварительно подвергался лечению средством или лекарственным средством для лечения немелкоклеточного рака легкого, где средство или лекарственное средство выбраны из химиотерапевтического средства и ингибитора контрольных точек иммунного ответа,

где иммуноконъюгат вводят при уровне дозы 80, 100 или 120 мг/м² исходя из площади поверхности тела субъекта, каждые 14 дней или каждые 3 недели.