СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ФОРМ STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Российский патент 2024 года по МПК C12N1/20 C12Q1/14 C12N1/02 C12R1/46 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для восстановления ростовых свойств и выделения некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae.

Уровень техники

Известен способ выделения некультивируемых бактерий Staphylococcus spp. предусматривающий культивирование исследуемого материала на мясопептонном агаре в течение 24 часов при температуре 37°С. Затем выросшую культуру бактерий выдерживают при температуре +4°С в течение 48 часов. [Патент РФ № 2470074 от 14.11.2011 на изобретение (МПК C12Q 1/04)].

Недостатком данного метода является неэффективность использования твердых питательных сред для восстановления ростовых свойств некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae.

Известен способ выделения некультивируемых форм стафилококков, включающий посев исследуемого биоматериала, отличающийся тем, что тампон с биоматериалом предварительно инкубируют от 18 до 24 часов в термостате при температуре +37°С в 2,0 мл жидкой питательной среды (ГРМ-бульоне), содержащем от 1% до 4% глюкозы. Затем осуществляют посев полученной взвеси микроорганизмов самим тампоном или калибровочной петлей по методу Голда параллельно на 3 чашки Петри с мясопептонным агаром, 5% кровяным агаром и 10% желточно-солевым агаром, после чего посевы культивируют от 24 до 48 часов при температуре +37°С. [Патент РФ № 2738858 от 07.07.2020 на изобретение (МПК C12Q 1/04, МПК C12N 1/02)].

Недостатком данного метода является неэффективность использования предварительной инкубации в ГРМ-бульоне с последующем посевом на плотные питательные среды для восстановления ростовых свойств некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является улучшение выделения некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae с помощью восстановления ростовых свойств.

Это достигается тем, что в отличие от известных способов, выделение некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae осуществляется с помощью предварительной инкубации штаммов в пробирке с 5,0 мл бульона Мюллер-Хинтон с добавлением 20% крови бараньей дефибринированной при температуре +37°С в течении 24 часов. Затем производится перемешивание содержимого пробирок вихревым шейкером в течении 30 секунд, отбор 100 мкл полученной смеси и посев на 5% кровяной агар. Полученные чашки инкубируют при +37°С и в условиях 7% концентрации углекислого газа до появления видимых колоний.

Осуществление изобретения

Сущность предложенного метода заключается в следующем: производится предварительная подготовка пробирок с 5,0 мл бульона Мюллер-Хинтона с добавлением 20% крови бараньей дефибринированной. Затем осуществляется инокуляция штаммов некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae с последующим перемешиванием содержимого пробирок вихревым шейкером в течение 30 секунд. После производится инкубация полученной смеси при температуре +37°С в течении 24 часов. Полученная суточная культура в пробирках повторно перемешивается вихревым шейкером, после чего осуществляется отбор 100 мкл содержимого пробирок для посева истощающим штрихом на 5% кровяной агар. Полученные чашки инкубируют при +37°С и в условиях 7% концентрации углекислого газа до появления видимых колоний. Предлагаемый нами способ был апробирован на 10 штаммах некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1. Оценка выделения некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae на 5% кровяном агаре и при использовании предлагаемого способа

Титр (КОЕ/мл) Номер штамма Посев на 5% кровяном агаре без использования предлагаемого способа Посев на 5% кровяном агаре с использованием предлагаемого способа 1 Роста нет 10⁴ 2 Роста нет 10⁶ 3 Роста нет 10⁵ 4 Роста нет 10⁴ 5 Роста нет 10³ 6 Роста нет 10³ 7 Роста нет 10⁴ 8 Роста нет 10³ 9 Роста нет 10⁴ 10 Роста нет 10⁵

Из представленной таблицы видно, что использование предлагаемого нами способа эффективно в восстановлении ростовых свойств у штаммов некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae.

Таким образом, предлагаемый способ может быть использован в микробиологии для выделения некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ выделения некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae, характеризующийся тем, что производят инокуляцию штаммов некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae в пробирке с 5,0 мл бульона Мюллер-Хинтон с добавлением 20% крови бараньей дефибринированной, перемешивают содержимое пробирок вихревым шейкером в течение 30 с, после чего производят инкубацию полученной смеси при температуре +37°С в течение 24 ч, в результате которой полученную суточную культуру в пробирках повторно перемешивают вихревым шейкером, осуществляют отбор 100 мкл содержимого пробирок для посева истощающим штрихом на 5% кровяной агар, далее повторно инкубируют при +37°С и в условиях 7% концентрации углекислого газа до появления видимых колоний. Изобретение обеспечивает восстановление ростовых свойств некультивируемых форм Streptococcus pneumonia и их выделение. 1 табл.

Способ выделения некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae, характеризующийся тем, что производят инокуляцию штаммов некультивируемых форм Streptococcus pneumoniae в пробирке с 5,0 мл бульона Мюллер-Хинтон с добавлением 20% крови бараньей дефибринированной, перемешивают содержимое пробирок вихревым шейкером в течение 30 с, после чего производят инкубацию полученной смеси при температуре +37°С в течение 24 ч, в результате которой полученную суточную культуру в пробирках повторно перемешивают вихревым шейкером, осуществляют отбор 100 мкл содержимого пробирок для посева истощающим штрихом на 5% кровяной агар, далее повторно инкубируют при +37°С и в условиях 7% концентрации углекислого газа до появления видимых колоний.