СЛИТЫЙ БЕЛОК, ВКЛЮЧАЮЩИЙ IL-12 И АНТИТЕЛО ПРОТИВ FAP, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2024 года по МПК C07K14/54 C07K16/40 C07K19/00 C12N15/13 C12N15/62 A61K38/00 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новому слитому белку, включающему IL-12 или его вариант; и антитело против FAP, а также к включающей его противораковой фармацевтической композиции.

Уровень техники

Интерлейкин-12 (IL-12) - типичный воспалительный цитокин, играющий важную роль в эффективной индукции клеточного иммунного ответа. IL-12 связывается и продуцируется активированными макрофагами, моноцитами, дендритными клетками и активированными B-лимфоцитами. IL-12 может усиливать иммунный ответ T-хелперов 1, повышать цитотоксичность клеточных T-лимфоцитов и ингибировать ангиогенез. Как правило, IL-12 активирует продукцию IFN-γ в T-клетках и NK-клетках.

Локальная экспрессия IL-12 делает опухолевые клетки чувствительными к опосредованной T-клетками цитотоксичности, что приводит к ингибированию роста опухоли и запуску гуморального иммунитета. Однако недостатком клинического применения IL-12 является то, что при введении может проявляться системная токсичность, связанная с цитокинами. Эти клинические результаты показывают ограничения IL-12 в качестве монотерапевтического средства для лечения рака.

С другой стороны, белок активации фибробластов альфа (FAP) представляет собой желатиназу, экспрессируемую на активированных фибробластах. Известно, что FAP экспрессируется более чем на 90% связанных с раком фибробластов различных карцином человека, включая рак предстательной железы и рак поджелудочной железы. Таким образом, в последнее время быстро растет интерес к разработке иммунотерапии, направленной на FAP-экспрессирующие клетки (Fang J. et al., Mol. Ther. Oncolytics., 3:16007, 2016).

Подробное описание изобретения

Техническая задача

Таким образом, авторы настоящего изобретения провели исследование с целью разработки нового слитого белка, обладающего противоопухолевым действием. В результате авторы настоящего изобретения обнаружили, что слитый белок, включающий IL-12 и антитело против FAP, обладает повышенной противоопухолевой активностью с одновременным снижением системной токсичности, осуществив тем самым настоящее изобретение.

Решение задачи

В одном аспекте настоящего изобретения предложен слитый белок, включающий первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения рака, включающая слитый белок в качестве активного ингредиента.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен полинуклеотид, кодирующий первый мономер.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен полинуклеотид, кодирующий второй мономер.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен вектор, включающий полинуклеотид.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена трасформированная клетка, в которую был введен вектор.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ получения слитого белка, включающий: i) культивирование трансформированной клетки; и ii) выделение слитого белка, включающего первый мономер и второй мономер.

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения или предупреждения рака, включающий введение субъекту слитого белка, включающего первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение слитого белка, включающего первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, для лечения рака.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение слитого белка, включающего первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, для производства лекарственного средства для лечения рака.

Эффекты изобретения

Слитый белок, включающий IL-12 и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может проявлять противоопухолевое действие посредством IL-12. Кроме того, было обнаружено, что при реализации антитела против FAP в одном антителе, IL-12 специфично накапливается в опухоли с высокой экспрессией FAP, что снижает системное токсическое действие и демонстрирует опухолеспецифическое противоопухолевое действие. Таким образом, рак можно эффективно лечить путем специфического направленного воздействия на FAP, экспрессируемый на высоком уровне в опухоли, и специфической локализации IL-12 в очаге опухоли.

Краткое описание чертежей

ФИГ. 1 иллюстрирует результат, полученный при идентификации T1.01, T1.02, T1.03, T1.04, T1.05, T1.06 и T1.07 согласно одному варианту осуществления с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ.

ФИГ. 2 иллюстрирует результат, полученный при идентификации T1.08, T1.09, T1.10, T1.11, T1.12, T1.13, T1.14 и T1.15 согласно одному варианту осуществления с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ.

ФИГ. 3 иллюстрирует результат, полученный при идентификации T1.16, T1.17, T1.18, T1.19 и T1.21 согласно одному варианту осуществления с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ.

ФИГ. 4 иллюстрирует результат, полученный при идентификации T1.01m, T1.02m, T1.03m, T1.04m, T1.05m, T1.06m и T1.07m согласно одному варианту осуществления с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ.

ФИГ. 5 иллюстрирует результат, полученный при идентификации T1.08m, T1.09m, T1.10m, T1.11m, T1.12m, T1.13m и T1.15m согласно одному варианту осуществления с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ.

ФИГ. 6 иллюстрирует результат, полученный при идентификации T1.16m, T1.17m, T1.18m, T1.19m, T1.20m, T1.21m и T1.22m согласно одному варианту осуществления с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ.

ФИГ. 7 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.01 и T1.02 с рекомбинантным человеческим FAP (rhFAP) с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 8 иллюстрирует график, на котором показана аффинность связывания T1.03 с рекомбинантным человеческим FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 9 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.04 и T1.05 с рекомбинантным человеческим FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 10 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.06 и T1.07 с рекомбинантным человеческим FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 11 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.08 и T1.09 с рекомбинантным человеческим FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 12 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.10 и T1.11 с рекомбинантным человеческим FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 13 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.01m и T1.02m с рекомбинантным мышиным FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 14 иллюстрирует график, на котором показана аффинность связывания T1.03m с рекомбинантным мышиным FAP с помощью метода анализа на основе поверхностного плазмонного резонанса.

ФИГ. 15 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03 с клетками HEK293-hFAP и клетками HEK293 с помощью проточной цитометрии.

ФИГ. 16 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.12m, T1.01m, T1.02m и T1.03m с клетками B16F10-mFAP и клетками B16F10 с помощью проточной цитометрии.

ФИГ. 17 иллюстрирует график, на котором показаны аффинности связывания T1.01, T1.02, T1.03 и T1.12 с бета-1 субъединицей рецептора IL-12 с помощью твердофазного иммуноферментного анализа.

ФИГ. 18 иллюстрирует график, на котором показан результат, полученный при идентификации активности IL-12 T1.01m, T1.02m, T1.03m и T1.12m по оптической плотности в репортерных клетках HEKblue.

ФИГ. 19 иллюстрирует график, на котором показана активность IL-12 T1.01, T1.02, T1.03 и T1.12 по сигнальной способности человеческих T-клеток.

ФИГ. 20 иллюстрирует график, на котором показана активность IL-12 T1.01, T1.02 и T1.03 в присутствии низкомолекулярного гепарина (НМГ) по сигнальной способности человеческих T-клеток.

ФИГ. 21 иллюстрирует график, на котором показан результат, полученный при измерении способности человеческих T-клеток секретировать цитокин IFN-γ при воздействии T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03.

ФИГ. 22 иллюстрирует график, на котором показан результат, полученный при измерении способности человеческих NK-клеток секретировать цитокин IFN-γ при воздействии T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03.

ФИГ. 23 иллюстрирует график, на котором показана способность ингибировать рост опухоли T1.01m и T1.02m по измерению изменения размера опухоли в модели опухоли на мышах, получавших совместную инъекцию линии мышиных фибробластов NIH-3T3 с оверэкспрессией FAP и линии клеток рака толстой и прямой кишки CT26.

ФИГ. 24 иллюстрирует график, на котором показан результат, полученный при измерении размера опухоли у каждого субъекта с целью идентификации способности ингибировать рост опухоли T1.01m и T1.02m в модели опухоли на мышах, получвших совместную инъекцию линии мышиных фибробластов NIH-3T3 и линии клеток рака толстой и прямой кишки CT26 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 25 иллюстрирует график, на котором показана способность ингибировать рост опухоли при введении T1.01m и T1.02m для каждой концентрации при измерении изменения размера опухоли у каждого субъекта в модели опухоли на мышах после имплантации линию мышиных клеток рака толстой и прямой кишки CT26 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 26 иллюстрирует график, на котором показано изменение размера опухоли CT26 после конструирования модели с повторным введением опухоли путем трансплантации клеток CT26 и клеток 4T1 мышам, у которых был достигнут полный ответ при лечении T1.01m в модели опухоли на мышах, получавших совместную инъекцию линии мышиных фибробластов NIH-3T3 и линии клеток рака толстой и прямой кишки CT26 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 27 иллюстрирует график, на котором показано изменение размера опухоли 4T1 после конструирования модели с повторным введением опухоли путем трансплантации клеток CT26 и клеток 4T1 мышам, у которых был достигнут полный ответ при лечении T1.01m в модели опухоли на мышах, получавших совместную инъекцию линии мышиных фибробластов NIH-3T3 и линии клеток рака толстой и прямой кишки CT26 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 28 иллюстрирует график, на котором показана способность ингибировать рост опухоли при введении T1.01m, T1.02m и T1.03m у каждого субъекта при измерении размера опухоли для каждого субъекта в модели на мышах с имплантацией мышиных клеток CT26 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 29 иллюстрирует график, на котором показана способность ингибировать рост опухоли у каждого субъекта при введении T1.03m для каждой концентрации при измерении изменения размера опухоли для каждого субъекта в модели на мышах с имплантацией мышиных клеток CT26 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 30 иллюстрирует график, на котором показана способность ингибировать рост опухоли при введении T1,03m для каждой концентрации при измерении изменения размера опухоли для каждого субъекта в модели на мышах с имплантацией мышиных клеток B16F10 с оверэкспрессией FAP.

ФИГ. 31 представлен график, на котором показана способность ингибировать рост опухоли при введении T1,03m для каждой концентрации при измерении изменения размера опухоли для каждого субъекта в модели на мышах, получавших совместную инъекцию линии мышиных фибробластов NIH-3T3 и линии клеток рака легкого LLC1 с оверхэкспрессией FAP.

ФИГ. 32 представлен график, на котором показан результат, полученный при измерении размера опухоли через 10 дней после введения T1,16m, T1,17m, T1,03m или комбинации T1,16m и T1,17m в модели на мышах, получавших совместную инъекцию линии мышиных фибробластов NIH-3T3 и линии клеток рака легкого LLC1 с оверхэкспрессией FAP.

ФИГ. 33 представлена схематическая диаграмма слитого белка против FAP/IL-12 (первый слева; на фигуре слева показан мономер против FAP, а справа показан мономер, включающий IL-12), слитого белка против FAP/IL-12, содержащего двойной вариабельный домен (второй), двойного антитела против FAP/IL-12, с которым связан FAP-специфичный одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) (третий и четвертый), и слитого белка против FAP/IL-12, в котором IL-12 связан с С-концом Fc (пятый).

ФИГ. 34 представлена схематическая диаграмма FAP-специфического Fab/FAP-специфического одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv) и слитого белка IL-12 (слева), димера слитого белка, содержащего FAP-специфический Fab и IL-12 (в центре), и Димер слитого белка, содержащий FAP-специфический одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) и IL-12 (справа).

Способ осуществления изобретения

Слитый белок, включающий IL-12 и антитело против FAP

В одном аспекте настоящего изобретения предложен слитый белок, включающий IL-12 или его вариант и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP (белком активации фибробластов альфа). В частности, слитый белок может включать Fc-область иммуноглобулина. Кроме того, IL-12 или его вариант может быть вариантом, обладающим низкой гепаринсвязывающей способностью.

В одном варианте осуществления предложен слитый белок, включающий первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

В другом варианте осуществления предложен димер слитого белка, включающий IL-12 или его вариант и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

IL-12 или его вариант

При использовании в настоящем документе термин "IL-12" относится к гетеродимерному цитокину, состоящему из субъединиц p35 и p40, кодируемых двумя отдельными генами, IL-12A и IL-12B, соответственно. IL-12 продуцируется антигенпрезентирующими клетками, такими как макрофаги, и связывается с рецепторами на клеточной поверхности активированных T-клеток и NK-клеток. IL-12 вызывает пролиферацию T-клеток и NK-клеток, и усиливает цитотоксические эффекты T-клеток, NK-клеток и макрофагов. Кроме того, IL-12 вызывает продукцию IFN-γ, ФНО-α и ГМ-КСФ, и активацию Th1-клеток. С другой стороны, IL-12 связывается с рецептором IL-12, гетеродимерным рецептором, сформированным IL-12Rβ1 и IL-12Rβ2.

При использовании в настоящем документе термин "вариант" IL-12 включает аминокислотную последовательность, имеющую функцию, подобную или идентичную функции белка IL-12 дикого типа. В частности, аминокислотная последовательность субъединиц p35 и p40, из которых состоит IL-12, может иметь замену, вставку или делецию по сравнению с диким типом.

IL-12 или его вариант может включать IL-12A (p35) или его вариант и IL-12B (p40) или его вариант.

Кроме того, IL-12 или его вариант может включать структуру, в которой IL-12A или его вариант; и IL-12B или его вариант связаны пептидным линкером.

В одном варианте осуществления IL-12 или его вариант может быть слитым белком, включающим следующую структурную формулу (I) или (II):

N'-Y-[линкер (1)]o-Z-C' (I)

N'-Z-[линкер (1)]o-Y-C' (II)

в структурных формулах (I) и (II):

N' может быть N-концом слитого белка,

C' может быть C-концом слитого белка,

Y может быть IL-12A или его вариантом,

Z может быть IL-12B или его вариантом,

линкер (1) может быть пептидным линкером, и

o может быть 0 или 1.

Один вариант осуществления IL-12 или его варианта может быть структурой, в которой IL-12B или его вариант, пептидный линкер и IL-12A или его вариант связаны последовательно от N-конца. Кроме того, один вариант осуществления IL-12 или его варианта может быть структурой, в которой IL-12A или его вариант, пептидный линкер и IL-12B или его вариант связаны последовательно от N-конца.

При использовании в настоящем документе термин "IL-12A" относится к субъединице IL-12 массой 35 кДа (p35), которая связывается с субъединицей 40 кДа (p40) IL-12 через дисульфидный мостик с образованием активного цитокина.

Аминокислотная последовательность IL-12A может быть последовательностью, описанной в GenBank AAK84425 (для ознакомления с аминокислотной последовательности p35 мыши, см. GenBank AAA39292). Кроме того, ген IL-12A (p35) является последовательностью, кодирующей субъединицу IL-12A, и может быть нуклеотидной последовательностью, соответствующей кодирующей последовательности (CD), из последовательностей, описанных в GenBank AF404773 (в отношении мышиной последовательности см. GenBank M86672).

При использовании в настоящем документе термин "вариант" IL-12A включает аминокислотную последовательность, которая обладает функцией, подобной или идентичной функции белка дикого типа IL-12A. В частности, это означает, что аминокислот последовательность IL-12A содержит замену, вставку или делецию по сравнению с диким типом. В частности, вариант IL-12A может быть фрагментом IL-12A и может иметь аминокислотную последовательность, в которой с 1-ой по 22-ю аминокислоты SEQ ID NO: 122 удалены. Более конкретно, вариант IL-12A может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75.

Кроме того, IL-12A, применяемый в одном варианте осуществления настоящего изобретения, может быть аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 75, как человеческий IL-12A. В одном варианте осуществления мышиный IL-12A может быть аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 87.

При использовании в настоящем документе термин "IL-12B" относится к субъединице IL-12 массой 40 кДа (p40), которая связывается с субъединицей IL-12 массой 35 кДа (p35) через дисульфидную связь с образованием IL-12, а также связывается с субъединицей p19 IL-23 с образованием IL-23. С другой стороны, IL-12B также называют стимулирующим естественные киллерные клетки фактором 2.

Аминокислотная последовательность "IL-12B" может быть последовательностью, описанной под номером доступа в GenBank AAD56386 (для ознакомления с аминокислотной последовательностью p40 мыши см. последовательность под номером доступа GenBank AAA39296). Кроме того, ген IL-12B (p40) является последовательностью, кодирующей субъединицу IL-12B, и может быть нуклеотидной последовательностью, соответствующей кодирующей последовательности (CD) из последовательностей, описанных под номером доступа в GenBank AF180563 (для ознакомления с мышиной последовательностью см. последовательность под номером доступа GenBank M86671).

Кроме того, IL-12B, применяемый в одном варианте осуществления настоящего изобретения, может быть человеческим IL-12B, и, в частности, IL-12B может быть аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 74. В одном варианте осуществления мышиный IL-12B может иметь аминокислотную последовательностью SEQ ID NO: 86.

При использовании в настоящем документе термин "вариант" IL-12B включает аминокислотную последовательностью, имеющую функцию, подобную или идентичную функции белка IL-12B дикого типа. В частности, это означает, что аминокислотная последовательность IL-12B содержит замену, вставку или делецию по сравнению с диким типом.

В частности, вариант IL-12B может быть таким, в котором удалены с 1-й по 22-ю аминокислоту SEQ ID NO: 121. Более конкретно, вариант IL-12B может быть таким, в котором 1-8 аминокислот заменены в последовательности SEQ ID NO: 74. Кроме того, вариант IL-12B может быть таким, в котором удалены с 1-й по 22-ю аминокислоту SEQ ID NO: 123. Более конкретно, вариант IL-12B может быть таким, в котором заменены до 1-8 аминокислот в последовательности SEQ ID NO: 86.

Вариант IL-12B (p40) может быть таким, в котором заменена аминокислота, участвующая в связывании гепарина IL-12.

В одном варианте осуществления вариант IL-12B (p40) может быть формой, в которой лизин (K), связывающийся с гепарином в IL-12B, заменен другой аминокислотой. В частности, это может быть форма, в которой 258-й, 260-й, 263-й и 264-й лизины в SEQ ID NO: 74 заменены другими аминокислотами. В частности, вариант IL-12B (p40) может включать аминокислотную последовательность, полученную в результате по меньшей мере одной замены, выбранной из группы, состоящей из K258A, K260A, K263A и K264A, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 74. В частности, вариант IL-12B (p40) может включать аминокислотную последовательность, полученную при замене K258A и K263A в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 74, или может дополнительно включать мутацию K260A и/или K264A в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 74.

В одном варианте осуществления вариант IL-12B (p40) может быть формой, в которой аргинин (R) или лизин (K), связывающийся с гепарином в IL-12B, заменен другой аминокислотой. В частности, это может быть форма, в которой 254-й аргинин и/или 255-й, 256-й и 260-й лизины в SEQ ID NO: 86 заменены другими аминокислотами. В частности, вариант IL-12B (p40) может включать аминокислотную последовательность, полученную в результате по меньшей мере одной замены, выбранной из группы, состоящей из R254A, K255A, K256A и K260A, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 86. В частности, вариант IL-12B (p40) может включать аминокислотную последовательность, полученную в результате замены R254A и K260A в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 86, или может дополнительно включать мутацию K255A и/или K256A в последовательности SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления вариант IL-12B (p40) может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 89 или SEQ ID NO: 91.

В одном варианте осуществления вариант человеческого IL-12B может состоять из следующей структурной формулы A:

[Структурная формула A]

X₁-L-X₂

где, X₁ представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 125,

X₂ представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, и

L представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из V-A₁-A₂-Q-A₃-K*-A₄-A₅-A₆-A₇-K*-A₈.

A₁ представляет собой R или Q, A₂ представляет собой V, A или I, A₃ представляет собой G или R*, A₄ представляет собой S, N или K*, A₅ представляет собой K*, N или E, A₆ представляет собой R или K, A₇ представляет собой E, M или T, и A₈ представляет собой K* или E.

По меньшей мере один аминокислотный остаток, отмеченный символом "*", может быть заменен неполярным аминокислотным остатком, выбранным из группы, состоящей из A, G, I, L, M, F, P и V, но не ограничивается этим.

В одном варианте осуществления вариант IL-12B (p40) может включать замену аминокислот, участвующих в связывании гепарина, для уменьшения цитокин-ассоциированного токсического действия IL-12 при сохранении цитотоксического действия в отношении раковых клеток.

FAP и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP

При использовании в настоящем документе термин "FAP (белок активации фибробластов)" относится к белку активации фибробластов, который представляет собой белок, экспрессируемый на поверхности клеток и представленный в окружении опухолевых клеток различных типов опухолей или в опухолевых клетках различных типов опухолей. Известно, что FAP избирательно повышенно экспрессируется на поверхности опухолеассоциированных фибробластов (CAF) в микроокружении опухоли.

Кроме того, FAP представляет собой гомодимер, содержащий две N-гликозилированных субъединицы, имеющих C-концевой внеклеточный домен, в котором расположен ферментный каталитический домен, при этом гликозилированная форма FAP одновременно обладает и пост-пролилдипептидилпептидазной, и желатиназной активностью.

С другой стороны, FAP является пролилэндопептидазой, которая представляет собой мембраносвязанную желатиназу массой приблизительно 170 кДа. Пролилэндопептидаза FAP может распознавать и расщеплять специфическую аминокислотную последовательность. Таким образом, FAP также называют FAPα, сепаразой или циркулирующим антиплазмин-расщепляющим ферментом.

Аминокислотная последовательность FAP может быть последовательностью, описанной под номером в GenBank AAC51668, при этом человеческий FAP первоначально был обнаружен в культивируемых фибробластах с помощью моноклонального антитела (mAb) F19 (см. публикацию Международной заявки на патент WO 93/05804). FAP экспрессируется во многих злокачественных опухолях и применяется в качестве многообещающей антигенной мишени для визуализации, диагностики и лечения различных карцином из-за своей ограниченной экспрессии в нормальных тканях.

FAP включает любые варианты, изоформы и видоспецифические гомологи FAP человека, которые экспрессируются клеткой в естественных условиях, либо экспрессируются в клетке, трансфицированной геном FAP. Антитело согласно настоящему изобретению может связываться с FAP, присутствующим на мембране или клеточной поверхности раковых клеток (опухолевых клеток или клеток стромы опухоли), и может вызывать ADCC или другой эффектор-опосредованный лизис раковых клеток. Кроме того, оно может применяться для блокирования ферментативной активности FAP (например, серинпептидазной, желатиназной, коллагеназной активности), FAP-опосредованного расщепления ECM и FAP-опосредованной инвазии или миграции клеток.

При использовании в настоящем документе термин "специфичное связывание" относится к связыванию, которое в измеримой степени отличается от неспецифичного взаимодействия. Специфичное связывание может быть определено при конкуренции с контрольной молекулой, подобной мишени, которая не обладает связывающей активностью.

При использовании в настоящем документе термин "антигенсвязывающий участок (эпитоп)" относится к детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим участком в вариабельной области антитела. Антигенсвязывающий участок представляет собой группу молекул, таких как аминокислоты или углеводные боковые цепи, которые обычно обладают специфическими структурными характеристиками, а также специфическими зарядовыми характеристиками. Антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может быть общим термином для молекул, способных к специфичному связыванию с FAP по типу связывания антигена-антитела.

Кроме того, антитело или его фрагмент может применяться в любой форме, если оно содержит антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с FAP.

Антигенсвязывающий участок может включать другие аминокислоты, не участвующие непосредственно в связывании, или аминокислоты, эффекты которых блокируются аминокислотными остатками в антигенсвязывающем участке.

В частности, антигенсвязывающий участок может быть антителом, которое специфично связывается с FAP или его фрагментом.

При использовании в настоящем документе термин "антитело" относится к молекуле, содержащей антигенсвязывающий участок, а также к иммунологически активному фрагменту молекулы иммуноглобулина, содержащему антигенсвязывающий участок. Молекула иммуноглобулина может быть молекулой иммуноглобулина IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, IgY или их сукласса. Антитела включают синтетические антитела, моноклональные антитела, однодоменные антитела, одноцепочечные антитела, рекомбинантные антитела, мультиспецифичные антитела (в том числе биспецифичные антитела), человеческие антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, интратела, scFv (включая, например, моноспецифичные и биспецифичные и т.д.), Fab-фрагмент, F(ab')-фрагмент, дисульфид-связанный Fv (sdFv), антиидиотипические (анти-Id) антитела и антигенсвязывающий фрагмент антител, но не ограничиваются этим.

При использовании в настоящем документе термин "фрагмент антитела" может быть частью антитела, такой как F(ab')₂, F(ab)₂, Fab', Fab, Fv, scFv. Независимо от структуры фрагмент антитела связывается с таким же антигеном, который распознается интактным антителом.

В одном варианте осуществления антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 96, HCDR2 с SEQ ID NO: 97 и HCDR3 с SEQ ID NO: 98; и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 99, LCDR2 с SEQ ID NO: 100 и LCDR3 с SEQ ID NO: 101. Кроме того, в одном варианте осуществления антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может иметь вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 102 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 103.

Кроме того, в одном варианте осуществления антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 104, HCDR2 с SEQ ID NO: 105 и HCDR3 с SEQ ID NO: 106; и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 107, LCDR2 с SEQ ID NO: 108 и LCDR3 с SEQ ID NO: 109. Кроме того, в одном варианте осуществления антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может иметь вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 110 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 111.

В одном варианте осуществления антигенсвязывающим участком, который специфично связывается с FAP, может быть scFv. Затем scFv может включать вышеописанные CDR-области тяжелой цепи и легкой цепи. В одном варианте осуществления scFv, который специфично связывается с FAP, может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 84.

Кроме того, антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может включать известное антитело против FAP или его фрагмент. Антитело против FAP или его фрагмент может относиться к антителу, известному специалистам в данной области, без ограничения.

Антитело против FAP или его фрагмент может включать по меньшей мере одну вариабельную область, выбранную из группы, состоящей из NG-641, AMG-506/MP-0310, 28H1 RG-7827, 4B9 RG-7827, OMTX-705, 3F2, 4G8, 3D9, 4B3, 19G1, 20G8, 5B8, 5F1, 14B3, 16F1, 16F8, O3C9, 29B11, O2D7 и 23C10.

В другом примере в качестве антитела может использоваться антитело против FAP или его фрагмент, раскрытые в публикации заявки на патент Республики Корея KR 20200037826 A, публикации заявки на патент США US 2020-0385488 A1, патенте США US 3,924,445 B2, патенте США US 9,011,847 B2 или публикации заявки на патент США US 2017-007716 A1.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область NG-641. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 127, HCDR2 с SEQ ID NO: 128 и HCDR3 с SEQ ID NO: 129, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 130, LCDR2 с SEQ ID NO: 131 и LCDR3 с SEQ ID NO: 132. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 248 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 249.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 28H1. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 133, HCDR2 с SEQ ID NO: 134 и HCDR3 с SEQ ID NO: 135, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 136, LCDR2 с SEQ ID NO: 137 и LCDR3 с SEQ ID NO: 138. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 250 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 251.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 4B9. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 139, HCDR2 с SEQ ID NO: 140 и HCDR3 с SEQ ID NO: 141, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 142, LCDR2 с SEQ ID NO: 143 и LCDR3 с SEQ ID NO: 144. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 252 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 253.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область OMTX-705. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 145, HCDR2 с SEQ ID NO: 146 и HCDR3 с SEQ ID NO: 147, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 148, LCDR2 с SEQ ID NO: 149 и LCDR3 с SEQ ID NO: 150. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 254 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 255.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 3F2. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 151, HCDR2 с SEQ ID NO: 152 и HCDR3 с SEQ ID NO: 153, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 154, LCDR2 с SEQ ID NO: 155 и LCDR3 с SEQ ID NO: 156. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 256 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 257.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 4G8. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 157, HCDR2 с SEQ ID NO: 158 и HCDR3 с SEQ ID NO: 159, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 160, LCDR2 с SEQ ID NO: 161 и LCDR3 с SEQ ID NO: 162. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 258 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 259.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 3D9. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 163, HCDR2 с SEQ ID NO: 164 и HCDR3 с SEQ ID NO: 165, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 166, LCDR2 с SEQ ID NO: 167 и LCDR3 с SEQ ID NO: 168. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 260 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 261.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 4B3. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 169, HCDR2 с SEQ ID NO: 170 и HCDR3 с SEQ ID NO: 171, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 172, LCDR2 с SEQ ID NO: 173 и LCDR3 с SEQ ID NO: 174. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 262 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 263.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 19G1. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 175, HCDR2 с SEQ ID NO: 176 и HCDR3 с SEQ ID NO: 177, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 178, LCDR2 с SEQ ID NO: 179 и LCDR3 с SEQ ID NO: 180. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 264 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 265.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 20G8. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 181, HCDR2 с SEQ ID NO: 182 и HCDR3 с SEQ ID NO: 183, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 184, LCDR2 с SEQ ID NO: 185 и LCDR3 с SEQ ID NO: 186. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 266 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 267.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 5B8. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 187, HCDR2 с SEQ ID NO: 188 и HCDR3 с SEQ ID NO: 189, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 190, LCDR2 с SEQ ID NO: 191 и LCDR3 с SEQ ID NO: 192. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 268 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 269.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 5F1. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 193, HCDR2 с SEQ ID NO: 194 и HCDR3 с SEQ ID NO: 195, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 196, LCDR2 с SEQ ID NO: 197 и LCDR3 с SEQ ID NO: 198. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 270 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 271.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 14B3. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 199, HCDR2 с SEQ ID NO: 200 и HCDR3 с SEQ ID NO: 201, и вариабельную область легкой цепи, включаю включающую щая LCDR1 с SEQ ID NO: 202, LCDR2 с SEQ ID NO: 203 и LCDR3 с SEQ ID NO: 204. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 272 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 273.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 16F1. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 205, HCDR2 с SEQ ID NO: 206 и HCDR3 с SEQ ID NO: 207, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 208, LCDR2 с SEQ ID NO: 209 и LCDR3 с SEQ ID NO: 210. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 274 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 275.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 16F8. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 211, HCDR2 с SEQ ID NO: 212 и HCDR3 с SEQ ID NO: 213, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 214, LCDR2 с SEQ ID NO: 215 и LCDR3 с SEQ ID NO: 216. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 276 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 277.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область O3C9. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 217, HCDR2 с SEQ ID NO: 218 и HCDR3 с SEQ ID NO: 219, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 220, LCDR2 с SEQ ID NO: 221 и LCDR3 с SEQ ID NO: 222. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 278 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 279.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 22A3. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 223, HCDR2 с SEQ ID NO: 224 и HCDR3 с SEQ ID NO: 225, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 226, LCDR2 с SEQ ID NO: 227 и LCDR3 с SEQ ID NO: 228. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 280 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 281.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 29B11. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 229, HCDR2 с SEQ ID NO: 230 и HCDR3 с SEQ ID NO: 231, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 232, LCDR2 с SEQ ID NO: 233 и LCDR3 с SEQ ID NO: 234. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 282 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 283.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область O2D7. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 235, HCDR2 с SEQ ID NO: 236 и HCDR3 с SEQ ID NO: 237, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 238, LCDR2 с SEQ ID NO: 239 и LCDR3 с SEQ ID NO: 240. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 284 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 285.

В одном варианте осуществления антитело против FAP может включать вариабельную область 23C10. В частности, антитело может включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую HCDR1 с SEQ ID NO: 241, HCDR2 с SEQ ID NO: 242 и HCDR3 с SEQ ID NO: 243, и вариабельную область легкой цепи, включающую LCDR1 с SEQ ID NO: 244, LCDR2 с SEQ ID NO: 245 и LCDR3 с SEQ ID NO: 246. Кроме того, антитело против FAP может включать вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 286 и вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 287.

В одном варианте осуществления антителом против FAP может быть AMG-506/MP-0310. В частности, антитело может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 247.

Антитело против FAP специфично связывается с FAP, присутствующим на раковых клетках, при этом может применяться любое антитело при условии, что оно может вызывать гибель раковых клеток.

Структура первого мономера

Первый мономер включает IL-12 или его вариант.

Первый мономер может дополнительно включать антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

В одном варианте осуществления первый мономер может включать IL-12 или его вариант; и фрагмент Fc-области или его вариант.

В одном варианте осуществления первый мономер может включать IL-12 или его вариант, фрагмент Fc-области или его вариант и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

Первый мономер может включать следующую структурную формулу (III) или (IV):

N'-X-[линкер (2)]p-фрагмент Fc-области или его вариант-[линкер (3)]q-(T)r-C' (III)

N'-(T)r-[линкер (2)]q-фрагмент Fc-области или его вариант-[линкер (3)]p-X-C' (IV)

в структурных формулах (III) и (IV),

N' может быть N-концом слитого белка,

C' может быть C-концом слитого белка,

X может быть структурной формулой (I) или (II),

T может быть антигенсвязывающим участком, который специфично связывается с FAP,

линкеры (2) и (3) могут быть пептидными линкерами, и

каждое p, q и r может быть независимо 0 или 1.

В одном варианте осуществления, когда r равно 0, первый мономер может находиться в форме слитого белка, в котором IL-12 или его вариант и фрагмент Fc-области или его вариант соединены пептидным линкером.

Кроме того, первый мономер может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 32.

Кроме того, в структурной формуле (III), когда r равно 1, первый мономер может находиться в форме, в которой мономер антитела против FAP связан с IL-12 или его вариантом.

Кроме того, в структурной формуле (III), когда r равно 1, первый мономер может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 292, SEQ ID NO: 293, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 302 или SEQ ID NO: 303.

Кроме того, в структурной формуле (IV), когда r равно 1, первый мономер может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 300 или SEQ ID NO: 301.

В одном варианте осуществления, когда r равно 1, структурная формула (III) может включать следующие структурные формулы (III') и (III"):

N'-X-[линкер (2)]p-фрагмент Fc-области или его вариант-[линкер (3)]q-(T')-C' (III')

N'-(T'')-C' (III'')

в структурных формулах (III') и (III''),

T' представляет собой область тяжелой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, включающую вариабельную область и CH1-область, или область легкой цепи антитела;

T'' представляет собой область легкой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, или областью тяжелой цепи антитела, включающую вариабельную область и CH1-область;

где T' и T'' связываются друг с другом с образованием вариабельной области антитела, где вариабельная область специфично связывается с FAP;

линкеры (2)-(3) представляют собой пептидные линкеры,

каждое p и q независимо равно 0 или 1, и

N', X и C' имеют значение, которое определено выше.

В одном варианте осуществления, когда r равно 1, структурная формула (IV) может включать следующие структурные формулы (IV') и (IV''):

N'-(T')-[линкер (2)]q-фрагмент Fc-области или его вариант-[линкер (3)]p-X-C' (IV'); и

N'-(T'')-C' (IV'')

в структурных формулах (IV') и (IV''),

T' представляет собой область тяжелой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, включающую вариабельную область и CH1-область, или область легкой цепи антитела;

T'' представляет собой область легкой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, или область тяжелой цепи антитела, включающую вариабельную область и CH1-область;

где T' и T'' связываются друг с другом с образованием вариабельной области антитела, где вариабельная область специфично связывается с FAP;

линкеры (2)-(3) являются пептидным линкером,

каждое p и q независимо равно 0 или 1, и

N', X и C' имеют значение, которое определено выше.

Кроме того, первый мономер может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 295 и SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 300 и SEQ ID NO: 19; или SEQ ID NO: 301 и SEQ ID NO: 19.

Структура второго мономера

Второй мономер может дополнительно включать антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

В одном варианте осуществления второй мономер может включать первый FAP-связывающий участок; и второй FAP-связывающий участок.

Антигенсвязывающим участком, который специфично связывается с FAP, может быть Fab, scFv, Fv или их фрагмент. Кроме того, первым FAP-связывающим участком может быть Fab, а вторым FAP-связывающим участком может быть Fv или scFv.

Второй FAP-связывающий участок может быть связан с N-концом или C-концом второго мономера. В частности, второй FAP-связывающий участок может быть дополнительно связан с C-концом тяжелой цепи, C-концом легкой цепи или N-концом вариабельной области.

Второй мономер может включать следующую структурную формулу (V):

N'-(R)s-[линкер (4)]t-Q-[линкер (5)]u-фрагмент Fc-области или его вариант-[линкер (6)]v-(W)a-C' (V)

в структурной формуле (V),

N' может быть N-концом слитого белка,

C' может быть C-концом слитого белка,

R и Q может быть антигенсвязывающим участком, который специфично связывается с FAP,

W может быть scFv, который специфично связывается с FAP; или IL-12 структурной формулы (I) или (II) или его вариантом,

каждый из линкеров (4), (5) и (6) может быть пептидным линкером, и

каждое s, t, u, v и a может быть независимо 0 или 1.

В одном варианте осуществления структурная формула (V) может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 300 и SEQ ID NO: 301.

В одном варианте осуществления структурная формула (V) может включать следующие структурные формулы (V') и (V''):

N'-(R')s-[линкер (4)]t-Q'-[линкер (5)]u-фрагмент Fc-области или его вариант-[линкер (6)]p-(W)a-C' (V')

N'-(R'')s-[линкер (4)]t-Q''-[линкер (7)]x-(W)b-C' (V'')

в структурных формулах (V') и (V''),

R' может быть областью тяжелой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, включающей вариабельную область и CH1-область, или областью легкой цепи антитела;

R'' может быть областью легкой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, или областью тяжелой цепи антитела, включающей вариабельную область и CH1-область;

где R' и R'' могут связываться друг с другом с образованием вариабельной области антитела, где вариабельная область специфично связывается с FAP;

Q' может быть областью тяжелой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, включающей вариабельную область и CH1-область, или областью легкой цепи антитела;

Q'' может быть областью легкой цепи антитела, которое специфично связывается с FAP, или областью тяжелой цепи антитела, включающей вариабельную область и CH1-область;

где Q' и Q'' могут связываться друг с другом с образованием вариабельной области антитела, где вариабельная область специфично связывается с FAP,

W может быть scFv, который специфично связывается с FAP; или IL-12 структурной формулы (I) или (II) или его вариантом,

каждый из линкеров (4), (5), (6) и (7) может быть пептидным линкером, и

каждое s, t, u, x, a и b может быть независимо 0 или 1.

В одном варианте осуществления структурная формула (V') может быть SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 300 или SEQ ID NO: 301.

В одном варианте осуществления структурная формула (V'') может быть SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 24 или SEQ ID NO: 26.

В одном варианте осуществления второй мономер может включать тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 102, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 103; или тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 110, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 111.

Кроме того, когда W представляет собой scFv, W может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 84.

Пептидный линкер

При использовании в настоящем документе термин "пептидный линкер" относится к пептиду, используемому для обеспечения физико-химического расстояния или соединения между доменами в слитом белке. Линкер может включать шарнирную область иммуноглобулина.

Пептидные линкеры (1)-(7) относятся к пептидным линкерам, состоящим из аминокислот. В частности, пептидный линкер (2) или (5) может состоять из 5-80 последовательных аминокислот, 7-70 последовательных аминокислот или 10-60 последовательных аминокислот, или 12-50 аминокислот. Пептидный линкер может включать (G₄S)n (где n является целым числом от 1 до 10). Таким образом, в (G₄S)n n может быть равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

В одном варианте осуществления пептидный линкер (1) может быть пептидным линкером, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94 или SEQ ID NO: 95.

Пептидный линкер (2) или (5) может состоять из 5-80 последовательных аминокислот, 7-70 последовательных аминокислот или 10-60 последовательных аминокислот, или 12-50 аминокислот. В одном варианте осуществления пептидный линкер (2) может состоять из 30 аминокислот. Кроме того, пептидный линкер (2) может включать по меньшей мере один цистеин. В частности, он может включать один, два или три цистеина. Кроме того, пептидный линкер (2) может быть получен из шарнира иммуноглобулина и может дополнительно включать (G₄S)n (где n является целым числом от 1 до 10). В частности, пептидный линкер (2) может включать шарнирную область, состоящую из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO : 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 120.

Кроме того, пептидные линкеры (3), (4), (6) и (7) могут состоять из 1-30 последовательных аминокислот, 5-20 последовательных аминокислот или 10-15 последовательных аминокислот. Пептидный линкер может включать (G₄S)n (где n является целым числом от 1 до 10). Таким образом, в (G₄S)n n может быть равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

Кроме того, в частности, пептидный линкер (2), (3) или (5) может включать SEQ ID NO: 93 или SEQ ID NO: 94.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения пептидный линкер (2) или (5) может быть пептидным линкером, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118 или 120.

Fc-область или ее фрагмент

Таким образом, вышеописанный фрагмент иммуноглобулина может быть Fc-областью иммуноглобулина. Fc-область иммуноглобулина может быть как Fc-доменом дикого типа, так и вариантом Fc-домена. Кроме того, Fc-область может быть Fc-областью IgG, IgA, IgE, IgD или IgM. В частности, она может быть получена из IgG1 или IgG2a.

При использовании в настоящем документе термин "вариант Fc-домена" может относиться к форме, которая отличается от Fc-домена дикого типа профилем гликозилирования, имеет высокое гликозилирование по сравнению с Fc-доменом дикого типа, имеет низкое гликозилирование по сравнению с Fc-доменом дикого типа или имеет дегликозилированную форму. Кроме того, это включает агликозилированный Fc-домен. Fc-домен или его вариант могут иметь измененное количество сиаловых кислот, сайтов фукозилирования или гликозилирования в результате подбора условий культивирования или генетической манипуляции хозяина.

Кроме того, гликозилирование Fc-домена иммуноглобулина может быть модифицировано стандартным методами, такими как химические методы, ферментативные методы и методы генной инженерии с использованием микроорганизмов. Кроме того, вариант Fc-домена может находиться в смешанной форме соответствующих Fc-областей иммуноглобулина IgG, IgA, IgE, IgD или IgM. Кроме того, вариант Fc-домена может находиться в форме, в которой некоторые аминокислоты Fc-домена заменены другими аминокислотами.

"Аминокислота", введенная в результате замены и/или добавления, может быть любой аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из лизина (K), аланина (A), аргинина (R), аспарагина (N), аспарагиновой кислоты (D), цистеина (C), глутамина (Q), глутаминовой кислоты (E), глицина (G), гистидина (H), изолейцина (I), лейцина (L), метионина (M), фенилаланина (F), пролина (P), серина (S), треонина (T), триптофана (W), тирозина (Y) и валина (V).

Кроме того, Fc-область может включать структуру выступа или структуру впадины.

При использовании в настоящем документе термин "выступ во впадину" является стратегией инженерии при производстве антитела, котрое специфично связывается с разными областями, такого как биспецифичное антитело, мультиспецифичное антитело или гетеродимерное антитело. В целом данный метод включает введение выступа на поверхности контакта первого полипептида (например, первого CH3 домена первой тяжелой цепи антитела) и соответствующей впадины на поверхности контакта второго полипептида (например, второго CH3 домена второй тяжелой цепи антитела), в результате чего выступ может быть помещен во впадину, что способствует образованию гетеродимера и препятствует образованию гомодимера.

'Выступ' конструируют путем замены малых боковых цепей аминокислот на поверхности контакта первого полипептида (например, первого CH3 домена тяжелой цепи первого антитела) более крупными боковыми цепями (например, аргинина, фенилаланина, тирозина или триптофана). Комплементарную 'впадину' такого же или подобного размера, как размер выступа, получают путем замены крупных боковых цепей аминокислот на поверхности контакта второго полипептида (например, второго CH3 домена тяжелой цепи второго антитела) боковыми цепями меньшего размера (например, аланина, серина, валина или треонина). Выступ и впадина могут быть получены путем изменения нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, например, с помощью сайт-специфического мутагенеза или пептидного синтеза.

В одном варианте осуществления структура выступа в IgG1 может быть SEQ ID NO: 13 или 288, и структура впадины может быть SEQ ID NO: 12 или 289. Структура выступа или структура впадины могут быть формой, в которой 146-я, 148-я и 187-я аминокислота в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 304 заменена другими аминокислотами. В частности, в одном варианте осуществления настоящего изобретения структура выступа или структура впадины может быть формой, в которой аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 304 содержит замены T146W, T146S, L148A и Y187A. В частности, структура выступа может содержать замену T146W, и структура впадины может содержать замены T146S, L148A и Y148V.

С другой стороны, в одном варианте осуществления настоящего изобретения структура выступа в IgG2a может быть SEQ ID NO: 30 или 290, и структура впадины может быть SEQ ID NO: 29 или 291. Структура выступа или структура впадины может быть формой, в которой 152-я, 154-я и 193-я аминокислоты в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 305 заменены другими аминокислотами. В частности, в одном варианте осуществления настоящего изобретения структура выступа или структура впадины может быть формой, в которой аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 305 содержит замены T152W или T152S, M154A и Y193V. В частности, структура выступа может быть формой, в которой она содержит замену T152W, и структура впадины может быть формой, в которой она содержит замены T152S, M154A и Y193V.

В одном варианте осуществления вариант Fc-домена может включать мутацию DANG или мутацию NG. Таким образом, "мутация DANG" относится к мутации D265A/N297G для устранения эффекторной функции в IgG1 человека или IgG2a мыши.

Эффекторные функции, опосредуемые Fc-областью в молекуле IgG, включают связывание C1q, комплементзависимую цитотоксичность, связывание с Fc-рецептором, антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC), фагоцитоз, даунрегуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора, BCR) и т.п. Как правило, эти эффекторные функции требуют связывания Fc-области со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела).

Эффекторная функция может быть изменена путем замены аминокислотной последовательности немутантной Fc-области, при этом Fc-область, в которой изменена эффекторная функция, может быть сконструирована, например, путем модификации связывания с C1q и/или связывания с FcR, что приводит к изменению CDC активности и/или ADCC активности. То есть 'мутация DANG' означает, что эффекторную функцию, опосредуемую Fc-областью, удаляют из молекулы IgG, благодаря чему нежелательная эффекторная функция не появляется во время продукции антитела.

В одном варианте осуществления мутация DANG может быть формой, в которой аминокислота в IgG1 человека с SEQ ID NO: 289 содержит замену D45A/N77G. Кроме того, она может быть формой, в которой аминокислота в IgG2a мыши с SEQ ID NO: 291 содержит замену D51A/N83G.

Структура слитого белка

Слитый белок может быть антителом. В частности, антитело может быть гетеродимерным антителом, включающим структуру выступа во впадину.

Слитый белок может включать структурную формулу (III) и структурную формулу (V); или структурную формулу (IV) и структурную формулу (V).

В частности, один вариант осуществления слитого белка может включать первый мономер согласно (i) или (ii) ниже; и второй мономер согласно (iii), (iv), (v) или (vi) ниже:

Примеры первого мономера:

(i) когда r равно 0, структурная формула (III)

(ii) когда r равно 1, структурная формула (IV)

Примеры второго мономера:

(iii) когда s, a и b равны 0, структурная формула (V') и структурная формула (V'')

(iv) когда s равно 1, и a и b равны 0, структурная формула (V') и структурная формула (V'')

(v) когда s и b равны 0, и a равно 1, структурная формула (V') и структурная формула (V'')

(vi) когда b равно 1, и s и a равны 0, структурная формула (V') и структурная формула (V'').

В одном варианте осуществления слитый белок может включать первый мономер, включающий (i) выше; и второй мономер, включающий (iii) выше (первый слева на ФИГ. 33). Кроме того, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 21; или SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 22.

В одном варианте осуществления слитый белок может включать первый мономер, включающий (i) выше; и второй мономер, включающий (iv) выше (второй слева на ФИГ. 33). Кроме того, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO: 24. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO: 24; или SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO: 24.

В одном варианте осуществления слитый белок может включать первый мономер, включающий (i) выше; и второй мономер, включающий (v) выше (третий слева на ФИГ. 33). Кроме того, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 25. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 25; или SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 25.

В одном варианте осуществления слитый белок может включать первый мономер, включающий (i) выше; и второй мономер, включающий (vi) выше (четвертый слева на ФИГ. 33). Кроме того, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 26. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 26; или SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 26.

В одном варианте осуществления слитый белок может включать первый мономер, включающий (ii) выше; и второй мономер, включающий (iii) выше (пятый слева на ФИГ. 33). Кроме того, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 28. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 27; или SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 28.

Кроме того, в одном варианте осуществления, димер слитого белка, включающий IL-12 или его вариант и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может быть димером слитого белка, включающим мономер структурной формулы (III) и мономер структурной формулы (V) (слева на ФИГ. 34). Кроме того, в структурной формуле (III) r равно 1, а в структурной формуле (V) s, a и t равны 0. Кроме того, структурная формула (V) может включать (V') и (V''). Кроме того, в (V') и (V'') s, a, t и b равны 0. Кроме того, Fc-область димера содержит структуру выступа во впадину, посредством которой различные слитые белки могут быть связаны друг с другом.

В частности, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 292, SEQ ID NO: 293, SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 299. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 292; SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 293; SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 298; или SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 299.

Кроме того, димер слитого белка, включающий IL-12 или его вариант и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может быть димером слитого белка, включающим структуру структурной формулы (V) (в середине на ФИГ. 34). Кроме того, димер слитого белка может включать (V') и (V''). Кроме того, в структурной формуле (V) s и t равны 0, и a равно 1. Кроме того, в (V') и (V'') s, t и b равны 0, и a равно 1. Кроме того, димер слитого белка может быть димером слитого белка, включающим структуру структурной формулы (IV). Кроме того, в структурной формуле (IV) r равно 1.

В частности, слитый белок может включать по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 300 и SEQ ID NO: 301. В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 294; SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 295; SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 300; или SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 301.

В одном варианте осуществления димер слитого белка, включающий IL-12 или его вариант и антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, может быть димером слитого белка, включающим структуру структурной формулы (III) (справа на ФИГ. 34). Кроме того, в структурной формуле (III) r равно 1.

В частности, слитый белок может включать SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 302 или SEQ ID NO: 303.

Мультиопределенный слитый белок в настоящем документе может быть в химически модифицированной форме. В одном варианте осуществления слитый белок может быть химически модифицирован путем гликозилирования, ацетилирования, пэгилирования, фосфорилирования, амидирования, дериватизации известными защитными/блокирующими группами, протеолитического расщепления и/или связывания с клеточными лигандами или другими белками. Многие из таких химических модификаций могут быть выполнены с помощью известных методов.

Полинуклеотид, кодирующий слитый белок

В другом аспекте настоящего изобретения предложен полинуклеотид, кодирующий первый мономер, или полинуклеотид, кодирующий второй мономер.

В одном варианте осуществления полипептид первого мономера может включать аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 86%, по меньшей мере приблизительно 87%, по меньшей мере приблизительно 88%, по меньшей мере приблизительно 89%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 92%, по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 94%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или по меньшей мере приблизительно 100% идентичностью с SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 292, SEQ ID NO: 293, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 300, SEQ ID NO: 301, SEQ ID NO: 302 или SEQ ID NO: 303.

В одном варианте осуществления полинуклеотид, кодирующий первый мономер, может обладать по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 86%, по меньшей мере приблизительно 87%, по меньшей мере приблизительно 88%, по меньшей мере приблизительно 89%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 92%, по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 94%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или по меньшей мере приблизительно 100% идентичностью с SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63 или SEQ ID NO: 67.

В одном варианте осуществления полипептид второго мономера может включать аминокислотную последовательность, обладающую приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 86%, по меньшей мере приблизительно 87%, по меньшей мере приблизительно 88%, по меньшей мере приблизительно 89%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 92%, по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 94%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или по меньшей мере приблизительно 100% идентичностью с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 300 или SEQ ID NO: 301.

В одном варианте осуществления полинуклеотид, кодирующий второй мономер, может обладать по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 86%, по меньшей мере приблизительно 87%, по меньшей мере приблизительно 88%, по меньшей мере приблизительно 89%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 92%, по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 94%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или по меньшей мере приблизительно 100% идентичностью с SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 66.

Полинуклеотид может дополнительно включать нуклеиновую кислоту, кодирующую сигнальную последовательность или лидерную последовательность. При использовании в настоящем документе термин "сигнальная последовательность" относится к сигнальному пептиду, направляющему секрецию целевого белка. Сигнальный пептид транслируется и затем отщепляется в клетке-хозяине. В частности, сигнальная последовательность является аминокислотной последовательностью, инициирующей транспортировку белка через мембрану эндоплазматического ретикулума (ЭПР).

Сигнальные последовательности известны в уровне техники благодаря своим свойствам. Такие сигнальные последовательности обычно содержат от 16 до 30 аминокислотных остатков и могут содержать больше или меньше аминокислотных остатков, чем такие аминокислотные остатки. Типичный сигнальный пептид состоит из трех областей: основной N-концевой области, центральной гидрофобной области и более полярной С-концевой области. Центральная гидрофобная область содержит 4-12 гидрофобных остатков, которые обеспечивают иммобилизацию сигнальной последовательности при транспортировке незрелого полипептида через липидный бислой мембраны.

После инициации сигнальные последовательности отщепляются в просвете ЭПР клеточными ферментами, широко известными как сигнальные пептидазы. Таким образом, сигнальная последовательность может быть секреторной сигнальной последовательностью tPa (активатора тканевого плазминогена), gDs ВПГ (сигнальной последовательностью гликопротеина D вируса простого герпеса) или гормона роста. Предпочтительно может использоваться секреторная сигнальная последовательность, используемая в клетках высших эукариотов, включая млекопитающих и т.п. Кроме того, может использоваться сигнальная последовательность дикого типа или может использоваться сигнальная последовательность, которая содержит замену кодоном, имеющим высокую частоту экспрессии в клетке-хозяине.

Вектор с полинуклеотидом

В другом аспекте настоящего изобретения предложен вектор, включающий полинуклеотид.

Вектор может быть введен в клетку-хозяин для рекомбинации с ней и встроен в геном клетки-хозяина. Или же под вектором подразумевают нуклеиновую кислоту, содержащую полинуклеотидную последовательность, которая может автономно реплицироваться в виде эписомы. Векторы включают линейные нуклеиновые кислоты, плазмиды, фагемиды, космиды, РНК-векторы, вирусные векторы и их аналоги. Примеры вирусного вектора включают, без ограничения ими, ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы.

В частности, вектор может включать плазмидную ДНК, фаговую ДНК и т.п.; а также коммерчески разработанные плазмиды (pUC18, pBAD, pIDTSAMRT-AMP и т.п.), плазмиды, полученные из E. coli (pYG601BR322, pBR325, pUC118, pUC119 и подобные), плазмиды, полученные из Bacillus subtilis (pUB110, pTP5 и подобные) дрожжевые плазмиды (YEp13, YEp24, YCp50 и т.п.), фаговую ДНК (Charon4A, Charon21A, EMBL3, EMBL4, λgt10, λgt11, λZAP и т.п.), векторы на основе вирусов животных (ретровирусов, аденовирусов, вируса осповакцины и т.п.), векторы на основе вирусов насекомых (бакуловирусов и т.п.). Поскольку вектор демонстрирует разные уровни экспрессии и модификации белка в зависимости от клетки-хозяина, предпочтительно выбирать и использовать такую клетку-хозяина, которая более всего подходит для этой цели.

При использовании в настоящем документе под термином "экспрессия гена" или "экспрессия" целевого белка подразумевается транскрипция последовательностей ДНК, трансляция мРНК транскриптов и секреция продуктов в виде слитых белков или их фрагментов. Полезным вектором экспрессии может быть RcCMV (Invitrogen, Carlsbad) или его вариант. Векторы экспрессии могут содержать промотор цитомегаловируса человека (ЦМВ), который обеспечивает постоянную транскрипцию целевого гена в клетках млекопитающих, и сигнальную последовательность полиаденилирования из бычьего гормона роста для повышения уровня стабильности РНК после транскрипции.

Трансформированная клетка, экспрессирующая слитый белок

В другом аспекте настоящего изобретения предложена трансформированная клетка, в которую был введен вектор.

Клетки-хозяева для трансформированной клетки могут включать, без ограничения перечисленными, прокариотические клетки, эукариотические клетки и клетки млекопитающих, растений, насекомых, грибов или бактерий. В качестве примера прокариотических клеток может использоваться E. coli. Кроме того, в качестве примера эукариотических клеток могут использоваться дрожжи. Кроме того, в качестве клеток млекопитающих могут использоваться клетки СНО, клетки F2N, клетки CSO, клетки BHK, клетки меланомы Bowes, клетки HeLa, клетки 911, клетки AT1080, клетки A549, клетки HEK 293, клетки HEK293T и т.п. Впрочем, клетки млекопитающих не ограничиваются этим, и могут использоваться любые клетки, которые, как известно специалистам в данной области, можно использовать в качестве клеток-хозяев млекопитающих.

Кроме того, для введения вектора экспрессии в клетку-хозяина можно использовать осаждение с CaCl₂, метод Ханахана, эффективность которого была повышена благодаря применению такого восстановителя, как диметилсульфоксид (ДМСО), при осаждении с CaCl₂, электропорация, осаждение с фосфатом кальция, слияние протопластов, перемешивание с использованием карбидокремниевого волокна, агробактериальную трансформацию, трансформацию с использованием ПЭГ, декстрансульфата, липофектамина или сухую/опосредованную ингибированием трансформацию и т.п.

Как описано выше, для оптимизации свойств слитого белка в качестве терапевтического средства или для любой другой цели профиль гликозилирования слитого белка (например, сиаловые кислоты, фукозилирование, гликозилирование) можно изменять при манипуляции генами, связанными с гликозилированием, которые несут клетки-хозяева, с применением методов, известных специалистам в данной области.

Способ получения слитого белка

В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения слитого белка, включающий: i) культивирование трансформированной клетки; и ii) выделение слитого белка, включающего первый мономер и второй мономер.

Способ культивирования трансформированных клеток может быть проведен при использовании методов, хорошо известных в данной области. В частности, культивирование можно вести в периодическом процессе или непрерывно в процессе с подпиткой, или в периодическом процессе с подпиткой.

Применение слитого белка

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для профилактики или лечения рака, включающая слитый белок в качестве активного ингредиента.

Таким образом, рак может быть любым, выбранным из группы, состоящей из рака желудка, рака печени, рака легкого, рака толстой и прямой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака кожи, рака кости, множественной миеломы, глиомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака шейки матки, рака щитовидной железы, рака гортани, острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, хронического лимфобластного лейкоза, опухоли головного мозга, нейробластомы, ретинобластомы, рака головы и шеи, рака слюнных желез и лимфомы.

Предпочтительная доза фармацевтической композиции изменяется в зависимости от состояния и массы тела пациента, тяжести заболевания, формы лекарственного средства, пути и длительности введения и может быть надлежащим образом подобрана специалистом в данной области. В фармацевтической композиции для лечения или профилактики опухоли согласно настоящему изобретению активный ингредиент может содержаться в любом количестве (эффективном количестве) в зависимости от применения, лекарственной формы, цели смешивания и т.п., при условии, что активный ингредиент может проявлять активность при лечении опухоли или, в частности, терапевтическое действие в отношении рака. Его стандартное эффективное количество будут определять в пределах от 0,001% до 20,0% по весу в расчете на общую массу композиции. Таким образом, термин "эффективное количество" относится к количеству активного ингредиента, способного вызывать эффект улучшения или лечения патологического состояния и, в частности, вызывать эффект улучшения или лечения при онкологическом заболевании. Такое эффективное количество может быть определено экспериментально в рамках общих знаний специалистов в данной области.

При использовании в настоящем документе термин "лечение" может использоваться для обозначения как терапевтического, так и профилактического лечения. Таким образом, профилактика может использоваться для обозначения того, что патологическое состояние или заболевание у субъекта облегчается или уменьшается. В одном варианте осуществления термин "лечение" включает применение и любую форму введения для лечения заболевания у млекопитающего, в том числе человека. Кроме того, термин включает ингибирование или замедление прогрессирования заболевания; и включает значения восстановления или улучшения нарушенной или утраченной функции, в результате чего тяжесть заболевания частично или полностью снижается; стимулирование неэффективных процессов; или облегчение серьезного заболевания.

Фармакокинетические параметры, такие как биодоступность, и основные показатели, такие как скорость выведения, также могут влиять на эффективность. Следовательно, "повышенная эффективность" (например, улучшение эффективности) может быть обусловлена улучшением фармакокинеических параметров и повышенной эффективностью, которые можно измерять при сравнении таких параметров, как скорость выведения и лечение или уменьшение опухоли у подопытных животных или людей, участвующих в исследовании.

При использовании в настоящем документе термин "терапевтически эффективное количество" или "фармацевтически эффективное количество" относится к количеству соединения или композиции, эффективному для предупреждения или лечения рассматриваемого заболевания, которое является достаточным для лечения заболевания при разумном соотношении выгоды/риска, которое применимо к терапевтическому лечению и не вызывают побочных эффектов. Уровень эффективного количества может быть определен в зависимости от факторов, включающих состояние здоровья пациента, тип и тяжесть заболевания, активность лекарственного средства, чувствительность пациента к лекарственному средству, способ введения, время введения, путь введения и скорость выведения, длительность лечения, состав или одновременно применяемые лекарственные средства, а также другие факторы, хорошо известные в области медицины. В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество относится к количеству лекарственного средства, эффективному для лечения рака.

Таким образом, фармацевтическая композиция может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемым носителем может быть любой носитель при условии, что такой носитель является нетоксичным веществом, подходящим для доставки пациенту. В качестве носителя в состав могут входить дистиллированная вода, спирт, жир, воск и инертное твердое вещество. Фармацевтически приемлемый адъювант (буферное вещество, диспергирующее вещество) также может содержаться в фармацевтической композиции.

В частности, при включении фармацевтически приемлемого носителя в дополнение к активному ингредиенту фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде состава для парентерального введения в зависимости от пути введения, с использованием стандартных способов, известных в данной области. Таким образом, термин "фармацевтически приемлемый" означает, что носитель не обладает большей токсичностью, чем может переносить подлежащий введению (назначению) субъект, без ингибирования при этом активности активного ингредиента.

В случае приготовления фармацевтической композиции в виде состава для парентерального введения, она может быть приготовлена в виде препаратов в форме инъекций, трансдермальных пластырей, составов для назальной ингаляции или суппозиториев с подходящими носителями в соответствии со способами, известными в уровне техники. В случае приготовления в виде составов для инъекций в качестве подходящего носителя может использоваться стерильная вода, этанол, многоатомный спирт, такой как глицерин или пропиленгликоль, или их смесь; и предпочтительно может использоваться изотонический раствор, такой как раствор Рингера, фосфатно-солевой буфер (PBS), содержащий триэтаноламин или стерильную воду для инъекций, и 5% декстрозу и т.п. Изготовление фармацевтических композиций известно в уровне техники, при этом можно сделать конкретную ссылку на Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995) и т.п. Данный документ считается частью настоящего описания.

Предпочтительная доза фармацевтической композиции может составлять от 0,01 мкг/кг до 10 г/кг или от 0,01 мг/кг до 1 г/кг в сутки в зависимости от состояния пациента, массы тела, пола, возраста, тяжести состояния пациента и пути введения. Дозу можно вводить один раз в день или можно разделить на несколько раз в день. Такую дозу не следует считать ограничивающей объем настоящего изобретения в каком-либо аспекте.

Субъектами, которым могут вводить (назначать) фармацевтическую композицию, являются млекопитающие и человек, при этом человек является особенно предпочтительным. В дополнение к активному ингредиенту фармацевтическая композиция согласно настоящей заявке может дополнительно содержать любое соединение или природный экстракт, который, как известно, оказывает терапевтическое воздействие на опухоль.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение слитого белка, включающего первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, для лечения рака.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение слитого белка, включающего первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP, для производства лекарственного средства для лечения рака.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения или профилактики рака, включающий введение субъекту слитого белка, включающего первый мономер, включающий IL-12 или его вариант; и второй мономер, включающий антигенсвязывающий участок, который специфично связывается с FAP.

Таким образом, субъектом может быть субъект, страдающий раком. Кроме того, субъектом может быть млекопитающее, предпочтительно человек.

Путь введения, доза и частота введения слитого белка или димера слитого белка могут изменяться в зависимости от состояния пациента и присутствия или отсутствия побочных эффектов, и, таким образом, слитый белок или димер слитого белка можно вводить субъекту разными способами и в разных количествах. Оптимальный способ введения, доза и частота введения могут быть подобраны в соответствующем диапазоне специалистами в данной области. Кроме того, слитый белок или димер слитого белка можно вводить в комбинации с другими лекарственными средствами или физиологически активными веществами, терапевтическое действие которых известно в отношении заболевания, подлежащего лечению, или они могут быть включены в состав комбинированных препаратов с другими лекарственными средствами.

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно посредством следующих примеров. Однако следующие примеры предназначены лишь для иллюстрации настоящего изобретения, и объем настоящего изобретения этим не ограничивается.

Пример получения 1. Обзор человеческого слитого белка против FAP/IL-12 IgG1 DANG

[Таблица 1] БЕЛОК Формат Описание Соответствующая последовательность T1.01 K&H anti-hu FAP/hu IL-12, hu IgG1 DANG seq1, seq2, seq3 T1.02 K&H anti-hu FAP/hu IL-12 mut1, hu IgG1 DANG seq1, seq2, seq4 T1.03 K&H anti-hu FAP/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG seq1, seq2, seq5 T1.04 K&H anti-hu FAP/hu IL-12, hu IgG1 DANG (2+1) seq3, seq6, seq7 T1.05 K&H anti-hu FAP/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG (2+1) seq5, seq6, seq7 T1.06 K&H anti-hu FAP/hu IL-12, hu IgG1 DANG (2+1, HC scFv) seq2, seq3, seq8 T1.07 K&H anti-hu FAP/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG (2+1, HC scFv) seq2, seq5, seq8 T1.08 K&H anti-hu FAP/hu IL-12, hu IgG1 DANG (2+1, LC scFv) seq1, seq3, seq9 T1.09 K&H anti-hu FAP/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG (2+1, LC scFv) seq1, seq5, seq9 T1.10 K&H anti-hu FAP/anti-hu FAP-hu IL-12, hu IgG1 DANG (2+1) seq1, seq2, seq10 T1.11 K&H anti-hu FAP/anti-hu FAP-hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG (2+1) seq1, seq2, seq11 T1.12 K&H anti-hu FAP/null, hu IgG1 DANG seq1, seq2, seq12 T1.13 K&H null/hu IL-12, hu IgG1 DANG seq3, seq13 T1.14 K&H null/hu IL-12 mut1, hu IgG1 DANG seq4, seq13 T1.15 K&H null/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG seq5, seq13 T1.16 мАт anti-hu FAP, hu IgG1 DANG seq2, seq14 T1.17 Fc-слитый hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG seq15 T1.18 K&H anti-hu CD20/hu IL-12, hu IgG1 DANG seq3, seq16, seq17 T1.19 K&H anti-hu CD20/hu IL-12 mut1, hu IgG1 DANG seq4, seq16, seq17 T1.20 K&H anti-hu CD20/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG seq5, seq16, seq17 T1.21 K&H anti-hu CD20/null, hu IgG1 DANG seq12, seq16, seq17 T1.23 K&H anti-hu FAP/hu IL-12-anti-hu FAP scFv, hu IgG1 DANG (2+1) seq1, seq2, seq292 T1.24 K&H anti-hu FAP/hu IL-12 mut2-anti-hu FAP scFv, hu IgG1 DANG (2+1) seq1, seq2, seq293 T1.25 Fc-слитый anti-hu FAP-hu IL-12, hu IgG1 DANG seq2, seq294 T1.26 Fc-слитый anti-hu FAP-hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG seq2, seq295 T1.27 Fc-слитый hu IL-12-anti-hu FAP scFv, hu IgG1 DANG Seq296 T1.28 Fc-слитый hu IL-12 mut2-anti-hu FAP scFv, hu IgG1 DANG Seq297

[seq1] состоит из человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP и человеческого Fc IgG1, в котором эффекторная функция устранена в результате мутации DANG (D265A, N297G), а структура выступа сформирована в результате мутации T366W.

[seq2] состоит из последовательности человеческой легкой цепи против FAP.

[seq3] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 человека и линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) интерлейкина-12 человека, линкера GGGGSGGGGS и человеческого Fc IgG1, в котором эффекторная функция устранена в результате мутации DANG (D265A, N297G), и структура впадины сформирована в результате мутаций T366S, L368A и Y407V.

[seq4] состоит из последовательности, в которой лизин (K) в 280-м и 285-м аминокислотных положениях, участвующий в связывании гепарина в области p40 (бета) IL-12 человека, подвергнут мутации с заменой на аланин (A), линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS, и Fc IgG1 человека с выступом и мутациями DANG.

[seq5] состоит из последовательности, в которой лизин (K) в 280-м, 282-м, 285-м и 286-м аминокислотных положениях, участвующий в связывании гепарина в области p40 (бета) IL-12 человека, подвергнут мутации с заменой на аланин (A), линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS, и Fc IgG1 человека с впадиной и мутациями DANG.

[seq6] состоит из человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, и Fc IgG1 человека с выступом и мутациями DANG.

[seq7] состоит из человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGS и человеческой последовательности легкой цепи против FAP.

[seq8] состоит из человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, Fc IgG1 человека с выступом и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS, и человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq9] состоит из человеческой последовательности легкой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS, и человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq10] состоит из человеческой последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG1 человека с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, и последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека.

[seq11] состоит из человеческой последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG1 человека с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, и последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека.

[seq12] состоит только из Fc IgG1 человека с впадиной и мутациями DANG.

[seq13] состоит только из Fc IgG1 человека с выступом и мутациями DANG.

[seq14] состоит из человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP и Fc IgG1 человека с мутациями DANG.

[seq15] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS, и Fc IgG1 человека с мутациями DANG.

[seq16] состоит из последовательности тяжелой цепи человеческого антитела против CD20 и Fc IgG1 человека с выступом и мутациями DANG.

[seq17] является последовательностью легкой цепи человеческого антитела против CD20.

[seq292] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG1 человека с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq293] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG1 человека с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS, и человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq294] состоит из человеческой последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG1 DANG человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, и последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека.

[seq295] состоит из человеческой последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG1 DANG человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, и последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека.

[seq296] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG1 DANG человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq297] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 человека, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 человека, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG1 DANG человека, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, человеческой последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS, и человеческой последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

T1.01 (seq1, seq2, seq3) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, направленная против FAP человека, и последовательность IL-12 человека формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.02 (seq1, seq2, seq4) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, направленная против FAP человека, и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.03 (seq1, seq2, seq5) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, направленная против FAP человека, и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.04 (seq3, seq6, seq7) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP в форме иммуноглобулина с двойным вариабельным доменом (DVD-Ig) и последовательность IL-12 человека формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.05 (seq5, seq6, seq7) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP в форме DVD-Ig и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.06 (seq2, seq3, seq8) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, в которой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) человеческой последовательности против FAP, направленной против FAP человека, соединен с C-концом тяжелой цепи, и последовательность IL-12 человека формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.07 (seq2, seq5, seq8) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, в которой scFv человеческой последовательности против FAP, направленной против FAP человека, соединен с C-концом тяжелой цепи, и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.08 (seq1, seq3, seq9) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, в которой scFv человеческой последовательности FAP, направленной против FAP человека, соединен с C-концом легкой цепи, и последовательность IL-12 человека, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.09 (seq1, seq5, seq9) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая против FAP последовательность, в которой scFv человеческой последовательности против FAP, направленной против FAP человека, соединен с C-концом легкой цепи, и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.10 (seq1, seq2, seq10) представляет собой антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, направленная против FAP человека, и человеческая последовательность против FAP, в которой последовательность IL-12 человека соединена с C-концом тяжелой цепи, формируют структуру выступа во впадину.

T1.11 (seq1, seq2, seq11) представляет собой антитело, в котором человеческая последовательность против FAP, направленная против FAP человека, и человеческая последовательность против FAP, в которой последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, соединена с C-концом тяжелой цепи, формируют структуру выступа во впадину.

T1.12 (seq1, seq2, seq12) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только человеческую последовательность против FAP, направленную против FAP человека, устранена.

T1.13 (seq3, seq13) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только последовательность IL-12 человека, устранена.

T1.14 (seq4, seq13) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только последовательность IL-12 человека, содержащую мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, устранена.

T1.15 (seq5, seq13) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только последовательность IL-12 человека, содержащую мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, устранена.

T1.16 (seq2, seq14) представляет собой человеческое антитело против FAP, направленное против FAP человека.

T1.17 (seq15) представляет собой Fc-слитый белок, содержащий только последовательность IL-12 человека, содержащую мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина.

T1.18 (seq3, seq16, seq17) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против CD20, направленная против CD20 человека, и последовательность IL-12 человека формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.19 (seq4, seq16, seq17) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против CD20, направленная против CD20 человека, и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.20 (seq5, seq16, seq17) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против CD20, направленная против CD20 человека, и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.21 (seq12, seq16, seq17) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только человеческую последовательность против CD20, направленную против CD20 человека, устранена.

T1.23 (seq1, seq2, seq292) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность против FAP и последовательность IL-12 человека, в которой scFv человеческой последовательности против FAP соединен с C-концом, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.24 (seq1, seq2, seq293) представляет собой биспецифичное антитело, в котором человеческая последовательность тяжелой цепи против FAP и последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, в которой scFv человеческой последовательности против FAP соединен с C-концом, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.25 (seq2, seq294) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий человеческую последовательность против FAP, в которой последовательность IL-12 человека соединена с C-концом тяжелой цепи.

T1.26 (seq2, seq295) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий человеческую последовательность против FAP, в которой последовательность IL-12 человека, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, соединена с C-концом тяжелой цепи.

T1.27 (seq296) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий последовательность IL-12 человека, в которой scFv человеческой последовательности против FAP соединен с C-концом.

T1.28 (seq297) представляет собой димер Fc-слитого белка, состоящий из последовательности IL-12 человека, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, в котором scFv человеческой последовательности против FAP соединен с C-концом.

[seq1] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc knob DANG

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq2] anti-hu FAP LC

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

[seq3] hu scIL-12-hu IgG1 Fc hole DANG

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq4] hu scIL-12 mut1-hu IgG1 Fc hole DANG

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASKREAKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq5] hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc hole DANG

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq6] (anti-hu FAP VH)2-hu IgG1 Fc knob DANG

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq7] (anti-hu FAP VL)2

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

[seq8] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc knob DANG-anti-hu FAP scFv

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

[seq9] anti-hu FAP LC-anti-hu FAP scFv

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

[seq10] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc hole DANG-hu scIL-12

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

[seq11] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc hole DANG-hu scIL-12 mut2

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

[seq12] hu IgG1 Fc hole DANG

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq13] hu IgG1 Fc knob DANG

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq14] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc DANG

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq15] hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc DANG

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq16] anti-hu CD20 HC hu IgG1 Fc knob DANG

QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

[seq17] anti-hu CD20 LC

QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

[seq292] hu scIL-12-hu IgG1 Fc hole DANG-anti-hu FAP scFv

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

[seq293] hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc hole DANG-anti-hu FAP scFv

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

[seq294] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc DANG-hu scIL-12

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

[seq295] anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc DANG-hu scIL-12 mut2

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

[seq296] hu scIL-12-hu IgG1 Fc DANG-anti-hu FAP scFv

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

[seq297] hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc DANG-anti-hu FAP scFv

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGASAREAADRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSRYTFTEYTIHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGIPNYNQKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRRIAYGYDEGHAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSRNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFWASTRESGVPDRFSGSGFGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSYPLTFGQGTKVEIK

Пример получения 2. Обзор anti-FAP/IL-12 IgG2a DANG, мышиного слитого белка

[Таблица 2] Код Формат Описание Соответствующая последовательность T1.01m K&H anti-mu FAP/mu IL-12, mu IgG2a DANG seq18, seq19, seq20 T1.02m K&H anti-mu FAP/mu IL-12 mut1, mu IgG2a DANG seq18, seq19, seq21 T1.03m K&H anti-mu FAP/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG seq18, seq19, seq22 T1.04m K&H anti-mu FAP/mu IL-12, mu IgG2a DANG (2+1) seq20, seq23, seq24 T1.05m K&H anti-mu FAP/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG (2+1) seq22, seq23, seq24 T1.06m K&H anti-mu FAP/mu IL-12, mu IgG2a DANG (2+1, HC scFv) seq19, seq20, seq25 T1.07m K&H anti-mu FAP/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG (2+1, HC scFv) seq19, seq22, seq25 T1.08m K&H anti-mu FAP/mu IL-12, mu IgG2a DANG (2+1, LC scFv) seq18, seq20, seq26 T1.09m K&H anti-mu FAP/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG (2+1, LC scFv) seq18, seq22, seq26 T1.10m K&H anti-mu FAP/anti-mu FAP-mu IL-12, mu IgG2a DANG (2+1) seq18, seq19, seq27 T1.11m K&H anti-mu FAP/anti-mu FAP-mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG (2+1) seq18, seq19, seq28 T1.12m K&H anti-mu FAP/null, mu IgG2a DANG seq18, seq19, seq29 T1.13m K&H null/mu IL-12, mu IgG2a DANG seq20, seq30 T1.14m K&H null/mu IL-12 mut1, mu IgG2a DANG seq21, seq30 T1.15m K&H null/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG seq22, seq30 T1.16m мАт anti-mu FAP, mu IgG2a DANG seq19, seq31 T1.17m Fc-слитый mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG seq32 T1.18m K&H anti-mu CD20/mu IL-12, mu IgG2a DANG seq20, seq33, seq34 T1.19m K&H anti-mu CD20/mu IL-12 mut1, mu IgG2a DANG seq21, seq33, seq34 T1.20m K&H anti-mu CD20/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG seq22, seq33, seq34 T1.21m K&H anti-mu CD20/null, mu IgG2a DANG seq29, seq33, seq34 T1.22m Fc-слитый mu IgG2a Fc DANG seq35 T1.23m K&H anti-mu FAP/mu IL-12-anti-mu FAP scFv, mu IgG2a DANG (2+1) seq18, seq19, seq298 T1.24m K&H anti-mu FAP/mu IL-12 mut2-anti-mu FAP scFv, mu IgG2a DANG (2+1) seq18, seq19, seq299 T1.25m Fc-слитый anti-mu FAP-mu IL-12, mu IgG2a DANG seq19, seq300 T1.26m Fc-слитый anti-mu FAP-mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG seq19, seq301 T1.27m Fc-слитый mu IL-12-anti-mu FAP scFv, mu IgG2a DANG Seq302 T1.28m Fc-слитый mu IL-12 mut2-anti-mu FAP scFv, mu IgG2a DANG Seq303

[seq18] состоит из мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP и Fc IgG2a мыши, в которой эффекторная функция устранена посредством мутаций DANG (D265A, N297G), и сформирована структура выступа в результате мутации T321W.

[seq19] состоит из мышиной последовательности легкой цепи против FAP.

[seq20] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG2a мыши, в которой эффекторная функция устранена посредством мутаций DANG, и сформирована структура впадины в результате мутаций T321S, M323A, Y362V.

[seq21] состоит из последовательности, в которой лизин (K) в 277-м и 282-м аминокислотных положениях, участвующий в связывании гепарина в области p40 (бета) IL-12 мыши, подвергнут мутации с заменой на аланин (A), линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS, и Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG.

[seq22] состоит из последовательности, в которой аргинин (R) в 276-м аминокислотном положении и лизин (K) в 277-м, 278-м и 282-м аминокислотных положениях, участвующие в связывании гепарина в области p40 (бета) IL-12 мыши, подвергнуты мутации с заменой на аланин (A), линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG.

[seq23] состоит из мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP и Fc IgG2a мыши с выступом и мутациями DANG.

[seq24] состоит из мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности легкой цепи против FAP.

[seq25] состоит из мыши последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, Fc IgG2a мыши с выступом и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq26] состоит из мышиной последовательности легкой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq27] состоит из мышиной последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGSGGGGS и последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши.

[seq28] состоит из мышиной последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS и последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши.

[seq29] состоит только из Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG.

[seq30] состоит только из Fc IgG2a мыши с выступом и мутациями DANG.

[seq31] состоит из мышиной вариабельной области тяжелой цепи против FAP и Fc IgG2a мыши с мутациями DANG.

[seq32] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS, и Fc IgG2a мыши с мутациями DANG.

[seq33] состоит из последовательности вариабельной области тяжелой цепи мышиного антитела против CD20, 18B12, и мышиного IgG2a с выступом и мутациями DANG.

[seq34] состоит из последовательности легкой цепи мышиного антитела против CD20, 18B12.

[seq35] состоит только из Fc IgG2a мыши с мутациями DANG.

[seq298] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq299] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG2a мыши с впадиной и мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq300] состоит из мышиной последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG2a мыши с мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGSGGGGS и последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши.

[seq301] состоит из мышиной последовательности тяжелой цепи против FAP, Fc IgG1 мыши с мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS и последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши.

[seq302] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG2a мыши с мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

[seq303] состоит из последовательности области p40 (бета) IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, последовательности области p35 (альфа) IL-12 мыши, линкера GGGGSGGGGS и Fc IgG2a мыши с мутациями DANG, линкера GGGGSGGGGSGGGGS, мышиной последовательности вариабельной области тяжелой цепи против FAP, линкера GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS и мышиной последовательности вариабельной области легкой цепи против FAP.

T1.01m (seq18, seq19, seq20) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, и последовательность IL-12 мыши формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.02m (seq18, seq19, seq21) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.03m (seq18, seq19, seq22) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.04m (seq20, seq23, seq24) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, в форме иммуноглобулина с двойным вариабельным доменом (DVD-Ig) и последовательность IL-12 мыши, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.05m (seq22, seq23, seq24) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, в форме DVD-Ig и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.06m (seq19, seq20, seq25) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против FAP, в которой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) мышиной последовательности против FAP, направленной против FAP мыши, включен на C-конце тяжелой цепи, и последовательность IL-12 мыши, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.07m (seq19, seq22, seq25) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против FAP, в которой scFv мышиной последовательности против FAP, направленной против FAP мыши, включен на C-конце тяжелой цепи, и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.08m (seq18, seq20, seq26) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против FAP, в которой scFv мышиной последовательности против FAP, направленной против FAP мыши, включен на C-конце легкой цепи и последовательность IL-12 мыши формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.09m (seq18, seq22, seq26) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против FAP, в которой scFv мышиной последовательности против FAP, направленной против FAP мыши, включен на C-конце легкой цепи, и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формирует структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.10m (seq18, seq19, seq27) представляет собой антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, и мышиная последовательность против FAP, в которой последовательность IL-12 мыши соединена с C-концом тяжелой цепи, формируют структуру выступа во впадину.

T1.11m (seq18, seq19, seq28) представляет собой антитело, в котором мышиная последовательность FAP, направленная против FAP мыши, и мышиная последовательность против FAP, в которой последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, соединена с C-концом тяжелой цепи, формируют структуру выступа во впадину.

T1.12m (seq18, seq19, seq29) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только мышиную последовательность против FAP, направленную против FAP мыши, устранена.

T1.13m (seq20, seq30) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только последовательность IL-12 мыши, устранена.

T1.14m (seq21, seq30) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только последовательность IL-12 мыши, содержащую мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, устранена.

T1.15m (seq22, seq30) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только последовательность IL-12 мыши, содержащую мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, устранена.

T1.16m (seq19, seq31) представляет собой мышиное антитело против FAP, направленное против FAP мыши.

T1.17m (seq32) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий только последовательность IL-12 мыши, содержащую мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина.

T1.18m (seq20, seq33, seq34) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против CD20 (18B12), направленная против CD20 мыши, и последовательность IL-12 мыши формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.19m (seq21, seq33, seq34) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против CD20 (18B12), направленная против CD20 мыши, и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.20m (seq22, seq33, seq34) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против CD20, направленная против CD20 мыши, и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.21m (seq29, seq33, seq34) представляет собой антитело, в котором эффекторная функция структуры выступа во впадину, содержащей только мышиную последовательность против CD20, направленную CD20 мыши, устранена.

T1.22m (seq35) представляет собой белок, содержащий только последовательность Fc мыши, в которой устранена эффекторная функция.

T1.23m (seq18, seq19, seq298) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность против FAP, и последовательность IL-12 мыши, в которой scFv мышиной последовательности против FAP соединена с C-концом, формирует структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.24m (seq18, seq19, seq299) представляет собой биспецифичное антитело, в котором мышиная последовательность тяжелой цепи против FAP и последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, в которой scFv мышиной последовательности против FAP соединен с C-концом, формируют структуру выступа во впадину, и эффекторная функция устранена.

T1.25m (seq19, seq300) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий мышиную последовательность против FAP, в котором последовательность IL-12 мыши соединена с C-концом тяжелой цепи.

T1.26m (seq19, seq301) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий мышиную последовательность против FAP, в котором последовательность IL-12 мыши, содержащая мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, соединена с C-концом тяжелой цепи.

T1.27m (seq302) представляет собой димер Fc-слитого белка, содержащий последовательность IL-12 мыши, в котором scFv мышиной последовательности против FAP соединен с C-концом.

T1.28m (seq303) представляет собой димер Fc-слитого белка, состоящий из последовательности IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, в котором scFv мышиной последовательности против FAP соединен с C-концом.

[seq18] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc knob DANG

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq19] anti-mu FAP LC

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWK

IDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

[seq20] mu scIL-12-mu IgG2a Fc hole DANG

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq21] mu scIL-12 mut1-mu IgG2a Fc hole DANG

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRAKEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq22] mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc hole DANG

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq23] (anti-mu FAP VH)2, mu IgG2a Fc knob DANG

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq24] (anti-mu FAP VL)2

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

[seq25] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc knob DANG-anti-mu FAP scFv

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

[seq26] anti-mu FAP LC-anti-mu FAP scFv

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNECGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

[seq27] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc hole DANG-mu scIL-12

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

[seq28] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc hole DANG-mu scIL-12 mut2

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

[seq29] mu IgG2a Fc hole DANG

EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq30] mu IgG2a Fc knob DANG

EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq31] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc DANG

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq32] mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc DANG

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq33] anti-mu CD20 HC mu IgG2a Fc knob DANG

QVQLQQPGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWIKQRPGQGLEWIGVIDPSDNYTKYNQKFKGKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAREGYYGSSPWFAYWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLWCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq34] anti-mu CD20 LC

QIVMSQSPAILSASPGEKVTMTCRARSSVSYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPGRFSGSGSGTSYSLTITRVEAEDAATYYCQQWSSKPPTFGGGTKLEIKRTDAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

[seq35] mu IgG2a Fc DANG

EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

[seq298] mu scIL-12-mu IgG2a Fc hole DANG-anti-mu FAP scFv

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

[seq299] mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc hole DANG-anti-mu FAP scFv

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLSCAVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMVSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

[seq300] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc DANG-mu scIL-12

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

[seq301] anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc DANG-mu scIL-12 mut2

QVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSMWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSA

[seq302] mu scIL-12-mu IgG2a Fc DANG-anti-mu FAP scFv

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQRKKEKMKETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

[seq303] mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc DANG-anti-mu FAP scFv

MWELEKDVYVVEVDWTPDAPGETVNLTCDTPEEDDITWTSDQRHGVIGSGKTLTITVKEFLDAGQYTCHKGGETLSHSHLLLHKKENGIWSTEILKNFKNKTFLKCEAPNYSGRFTCSWLVQRNMDLKFNIKSSSSSPDSRAVTCGMASLSAEKVTLDQRDYEKYSVSCQEDVTCPTAEETLPIELALEARQQNKYENYSTSFFIRDIIKPDPPKNLQMKPLKNSQVEVSWEYPDSWSTPHSYFSLKFFVRIQAAAEKMAETEEGCNQKGAFLVEKTSTEVQCKGGNVCVQAQDRYYNSSCSKWACVPCRVRSGGGGSGGGGSGGGGSRVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDDMVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESCLATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAINAALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEADPYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVAVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYGSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVNLSCKASGYTFTNNGINWLKQRTGQGLEWIGEIYPRSTNTLYNEKFKGKATLTADRSSNTAYMELRSLTSEDSAVYFCARTLTAPFAFWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSGVNFMHWYQQKSGTSPKRWIFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIK

Пример производства 1. Производство слитых белков

Реагенты и оборудование описаны в Таблицах 3 и 4 ниже.

[Таблица 3] Реагент Производитель Номер по каталогу pTT5 chempartner Набор для клонирования In-Fusion HD Clontech 639648 ДНК-полимераза Accuprime pfx Invitrogen 12344-04 Набор для очистки фрагментов ДНК из геля TaKaRa D823A FastDigest® BamHI Fermentas FD0055 FastDigest® EcoRI Fermentas FD0275

[Таблица 4] Оборудование и приборы Производитель Наименование модели Бокс биозащиты NUAIRE LabGard class ± Центрифуга Eppendorf 5424 Система визуализации гелей Tanon 2500R

Синтезированный фрагмент ДНК амплифицировали с помощью ПЦР и очищали ПЦР-продукт из геля. Вектор pTT5 расщепляли рестриктазами EcoRI и BamHI, после чего очищали из геля. Каждый ПЦР-продукт и линейный вектор лигировали с использованием набора In-Fusion. Полученным вектором трансформировали компетентные клетки ECOS101 DH5α и культивировали клетки на чашках с 2xYT агаром, содержащим 100 мкг/мл ампициллина. Все процессы манипуляций выполняли в соответствии со стандартными протоколами трансформации. Положительные рекомбинанты идентифицировали с помощью ПЦР колоний и проверку последовательности рекомбинантной плазмиде проводили с помощью секвенирования. Отбирали одну колонию и инокулировали посевную культуру в 5 мл среды 2xYT, содержащей 100 мкг/мл ампициллина. Ее культивировали со встряхиванием при 37°C в течение 8 часов.

После этого посевную культуру разводили в 200 мл селективной среды 2xYT в соотношении 1:1000. Ее культивировали со встряхиванием при 37°C в течение 16 часов. Бактериальные клетки собирали с помощью центрифугирования при 4°C, 4700 об/мин в течение 10 минут. Бактериальный осадок ресуспендировали в 12 мл буфера RES-EF. После этого добавляли 12 мл буфера LYS-EF и энергично переворачивали закрытую пробирку для тщательного перемешивания, а затем инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре. К лизату добавляли 12 мл буфера NEU-EF и энергично переворачивали для тщательного и быстрого перемешивания.

Перед нанесением лизата на фильтр колонки NucleoBond® Xtra гомогенную суспензию осадка приготавливали путем переворачивания пробирки с лизатом 3 раза, чтобы предотвратить забивание фильтра. После этого фильтр колонки NucleoBond® Xtra и колонку NucleoBond® Xtra промывали 10 мл буфера FIL-EF для промывки фильтра. Фильтр колонки NucleoBond® Xtra извлекали или удаляли путем переворачивания колонки. Колонку NucleoBond® Xtra промывали 90 мл промывочного буфера ENDO.

Колонку NucleoBond® Xtra промывали 45 мл промывочного буфера WASH-EF. Плазмидную ДНК элюировали 15 мл элюирующего буфера ELU. Элюат собирали в центрифужную пробирку объемом 50 мл. Добавляли 10,5 мл изопропанола при комнатной температуре для осаждения элюированной плазмидной ДНК. После встряхивания на вортексе смесь оставляли на 2 минуты.

После этого к осадку добавляли 5 мл 70% этанола. Этанол тщательно и полностью удаляли из пробирки с помощью наконечника пипетки. Осадок сушили при комнатной температуре (20°C). После этого осадок ДНК растворяли в 1000 мкл H₂O.

Пример производства 2. Трансфекция клеток и экспрессия белка

Пример производства 2.1. Трансфекция клеток

Используемые материалы и реагенты описаны в Таблице 5 ниже.

[Таблица 5] Материалы и реагенты Производитель (номер продукта) Клетки 293F Invitrogen (R790-07) OPM 293 OPM (81075-001) Pluronic® F-68, 10% (100X) Gibco (24040-032) 1 мг/мл ПЭИ Polyscience (23966) OPTI MEM I Gibco (31985088) Пептон (20×) FLUKA (P0521-1KG) Колба качалочная Шейкер-инкубатор ISF1-X Kuhner shaker

Штамм 293F для посева, содержащий полную среду, выдерживали в шейкере-инкубаторе при 130 об/мин, 37°C и 8% CO₂. Его культивировали при плотности 0,3-0,4×10⁶ клеток/мл и меняли среду каждые 2-3 дня. За двадцать четыре часа до трансфекции подготавливали новый пассаж клеток 293F при плотности 2,6×10⁶ клеток/мл. Подготовленные клетки культивировали в шейкере-инкубаторе при 130 об/мин, 37°C и 8% CO₂. В день трансфекции плотность клеток доводили до плотности 5,0×10⁶ клеток/мл свежей средой. Эту операцию производили в общем объеме 1 л в качалочной колбе объемом 3 л. По 0,4 мг НС и по 0,6 мг LC плазмиды разводили в 50 мл OPTI MEM I и фильтровали через фильтр 0,22 мкм. После этого 2 мг ПЭИ разбавляли в 50 мл OPTI MEM I для приготовления реагента для трансфекции.

Разбавленный ПЭИ добавляли к смеси ДНК и сразу перемешивали. После этого смесь культивировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Смесь ДНК-ПЭИ добавляли к клеткам 293F, приготовленным при плотности 2,6×10⁶ клеток/мл. После этого клетки непрерывно культивировали в течение 24 часов в шейкере-инкубаторе при 130 об/мин, 37°C и 8% CO₂. Через двадцать четыре часа после трансфекции к 1/20 части культурального раствора добавляли 10% пептона до конечной концентрации 0,5%. После этого клетки непрерывно культивировали в шейкере-инкубаторе при 130 об/мин, 37°C и 8% CO₂. Плотность/жизнеспособность клеток измеряли и регистрировали ежедневно в течение 2-5 дней после трансфекции. Клетки собирали для очистки через 7 дней после трансфекции, или когда жизнеспособность клеток составляла меньше 70%.

Пример производства 2.2. Очистка белка

Реагенты, состав буферных растворов, а также оборудование, используемое для очистки белка, описаны в Таблицах 6-8 ниже.

[Таблица 6] Реагент Производитель Номер по каталогу Mabselect SuRe GE Healthcare 11003493 Tris SIGMA 77-86-1 NaCl ACROS ORGANIVS 7647-14-5 Цитран натрия Adamas-beta 76198B Лимонная кислота GENERAL-Reagent G83162B Аргинин VETEC V900343-500G Янтарная кислота Sigma-Aldrich S9512-500G Triton X-100 ABCONE X10010-1L Triton X-114 Sigma-Aldrich X114 Стерильный фильтрующий блок Millex-GP, 0,22 мкм MILLIPORE SLGP033RS NaOH Merck B146369740

[Таблица 7] Буфер A 25 мМ Трис, 150 мМ NaCl, pH 8,0 Буфер B 25 мМ Tris, 150 мМ NaCl, 0,1% Triton X-100, 0,1% Triton X-114 pH 8,0 Буфер C 100 мМ цитрата натрия, 150 мМ NaCl, pH 3,0 Буфер D 1 М аргинина, 400 мМ янтарной кислоты, pH 9,0 Буфер E 20 мМ PB, pH 6,5, 1 M (NH₄)₂SO₄ Буфер F 20 мМ PB, pH 6,5, 25% изопропиловый спир Конечный буфер 20 мМ HEPES, pH 7,5, 240 мМ сахарозы или 20 мМ his ацетата, pH 5,5, 240 мМ сахарозы

[Таблица 8] Оборудование Производитель Наименование модели AKTA Pure GE Healthcare 29-0182-24 центрифуга Beckman J-26xp Система визуализации гелей Tanon 2500R Фильтр Sartopore 2 Sartorius 5445307H9-OO-A

Белки очищали с использованием колонки Mabselect sure. В частности, супернатант собирали центрифугированием при 2000×g, 4°C в течение 20 минут. После этого супернатант фильтровали на фильтре Sartopore 2. На колонку MabSelect Sure объемом 5 мл, уравновешенную Буфером A, наносили осветленный супернатант. После этого колонку промывали Буфером A, пока оптическая плотность А280 не достигала базовой линии. Колонку промывали 10 колоночными объемами (КО) буфера B. Колонку промывали 10 КО Буфера A. Связавшиеся белки элюировали 6 КО Буфера C и добавляли 1/6 объема Буфера D для нейтрализации элюированного вещества. Проводили анализы с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ и эВЭЖХ. После этого белки очищали с использованием HIC колонки. Затем белки подвергали диализу против Буфера E при 4°C в течение ночи. На колонку HIC, уравновешенную Буфером E, наносили супернатант. После этого колонку промывали Буфером E, пока оптическая плотность A280 не достигала базовой линии. Связавшиеся белки элюировали в градиенте элюирования (10 КО Буфера F 0%-40%). Связавшиеся белки элюировали в 2 КО 100% Буфера F. Выполняли анализ методом электрофореза в ДСН-ПААГ.

Очищенные белки объединяли в пулы, и затем белки подвергали диализу против конечного буфера при 4°C в течение ночи. После этого проводили анализы с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ и эВЭЖХ.

В результате, как показано на ФИГ. 1-6, было обнаружено, что человеческие белки и мышиные белки согласно одному варианту осуществления были очищены.

Пример производства 3. Улучшение производства биспецифичного антитела

Пример производства 3.1. Идентификация улучшения при производстве слитого белка, включающего IL-12 человека

В Таблице 9 ниже представлены изменения продукции человеческого биспецифичного антитела против FAP/IL-12, соответствующего мутации IL-12 человека. Круглые скобки указывают на масштаб производства белка, и единицей измерения являются л. Число перед круглыми скобками указывает продукцию на литр, полученную при делении количества очищенного белка на масштаб производства.

[Таблица 9] БЕЛОК Описание Количество белка после пропускания через колонку с белком A (мг)
(масштаб производства, л) T1.01 anti-hu FAP/hu IL-12, hu IgG1 DANG 40 (1), 132 (1) T1.02 anti-hu FAP/hu IL-12 mut1, hu IgG1 DANG 45 (1), 139,7 (2) T1.03 anti-hu FAP/hu IL-12 mut2, hu IgG1 DANG 250 (1), 220 (5)

Как показано в Таблице 9 выше, при увеличении числа мутаций аминокислот, участвующих в связывании гепарина в области р40 (бета) IL-12 человека, количество белков, очищенных на колонке с белком A (колонка MabSelect Sure), возрастало. Было обнаружено, что биспецифичное антитело Т1.02, в котором лизин (K) в 280-м и 285-м аминокислотных положениях был заменен аланином (A), демонстрирует улучшенную продукцию по сравнению с Т1.01. Было обнаружено, что биспецифичное антитело Т1.03, в котором лизин (K) в 280-м, 282-м, 285-м и 286-м аминокислотных положениях был заменен аланином (A), демонстрирует улучшенную продукцию приблизительно в 2,5 раза по сравнению с Т1.01.

Пример производства 3.2. Идентификация улучшения продукции слитого белка, содержащего IL-12 мыши

В Таблице 10 ниже показаны изменения продукции мышиного биспецифичного антитела против FAP/IL-12, соответствующего мутации IL-12 мыши.

[Таблица 10] БЕЛОК Описание Количество белка после пропускания через колонку с белком A (мг)
(масштаб производства, л) T1,01m anti-mu FAP/mu IL-12, mu IgG2a DANG 5,725 (4), 3,967 (12), 3.667 (12) T1,02m anti-mu FAP/mu IL-12 mut1, mu IgG2a DANG 5,825 (4), 9,86 (2), 5,74 (20) T1,03m anti-mu FAP/mu IL-12 mut2, mu IgG2a DANG 9,54 (1), 126,8 (1)

Как показано в Таблице 10 выше, по мере увеличения количества мутаций аминокислот, участвующих в связывании гепарина в области p40 (бета) IL-12 мыши, количество белков, очищенных на колонке с белком A (колонка MabSelect Sure), возрастало.

В каждой таблице количество белка после пропускания через колонку с белком A сравнивали путем деления общей продукции белка на масштаб производства. Было обнаружено, что биспецифичное антитело T1.02m, в котором лизин (K) в 277-м и 282-м аминокислотных положениях был заменен аланином (A), и биспецифичное антитело T1.03m, в котором аргинин (R) в 276-м аминокислотном положении был заменен аланином (A), и лизин (K) в 277-м, 278-м и 282-м аминокислотных положениях был заменен аланином (A), демонстрировало постепенное улучшение продукции белка по сравнению с T1.01m и T1.02m. Кроме того, было обнаружено, что продукция T1.03m с использованием линии клеток CHO была улучшена приблизительно в 13 раз по сравнению с продукцией при использовании линии клеток HEK 293.

Пример прозводства 4. Линия клеток и культура линии клеток

Линия клеток HEK-Blue IL-12, трансформированная геном рецептора IL-12 и STAT4-индуцируемым репортерным геном SEAP в клетки HEK293, которые представляют собой эмбриональные фибробласты почек человека, была получена от Invivogen (San Diego, USA). Клетки HEK-Blue IL-12 поддерживали в среде DMEM (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO), 100 мкг/мл Нормоцина и 1XHEK-Blue selection.

Клеточная линия эмбриональных фибробластов почек человека HEK293, клеточная линия рака толстой и прямой кишки мыши CT26-WT, клеточная линия меланомы мыши B16F10 и клеточная линия фибробластов мыши NIH3T3 были получены из ATCC (Американской коллекции типовых культур, Manassas, VA, USA). Клетки HEK293, клетки B16F10 и клетки NIH3T3 поддерживали в среде DMEM (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO). Линию клеток (HEK293-hFAP) с оверэкспрессией человеческого FAP (белка активации фибробластов альфа) в клетках HEK293 получали с использованием лентивируса, способного доставлять ген FAP человека. Клетки HEK293-hFAP поддерживали в среде DMEM (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO) и 5 мкг/мл пуромицина.

Линии клеток (CT26-mFAP, B16F10-mFAP и NIH3T3-mFAP) с оверэкспрессией мышиного FAP (белка активации фибробластов альфа) в клетках CT26-WT, клетках B16F10 и клетках NIH3T3 получали с использованием лентивируса, способного доставлять ген FAP мыши. Клетки CT26-mFAP поддерживали в среде RPMI-1640 (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO) и 10 мкг/мл пуромицина. Клетки B16F10-mFAP поддерживали в среде DMEM (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO) и 10 мкг/мл пуромицина. Клетки NIH3T3-mFAP поддерживали в среде DMEM (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO) и 5 мкг/мл пуромицина.

Пример прозводства 5. Выделение и активация иммунных клеток человека

Контейнер для крови был получен из Красного Креста Республики Корея с одобрения Наблюдательного совета организации (IRB), и мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) были выделены и заморожены. Размороженные МКПК подвергали методу положительной селекции, и человеческие NK-клетки выделяли с использованием набора Easy sep (Stem cell, Vancouver, BC, CA). Выделенные NK-клетки активировали и поддерживали в среде RPMI-1640 (GIBCO) с 10% FBS, содержащей 50 МЕ/мл рекомбинантного человеческого IL-2 (rhIL-2, R&D systems, Minnesota, USA).

Размороженные МКПК подвергали методу отрицательной селекции, и человеческие T-клетки выделяли с использованием набора Easy sep (Stem cell). Человеческие T-клетки культивировали на планшете, покрытом 1 мкг/мл антитела к CD3 (OKT3, Invitrogen), и активировали в течение 72 часов. Человеческие T-клетки поддерживали в среде RPMI-1640 (GIBCO), содержащей 10% FBS (GIBCO).

Пример 1. Определение аффинности связывания слитого белка

Пример 1.1. Идентификация связывания слитого белка с рекомбинантным человеческим FAP

Связывание T1.01, T1.02 и T1.03 с рекомбинантным человеческим FAP идентифицировали с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR).

В частности, поверхность чипа CM5 активировали смесью 1:1 50 нМ NHS (N-гидроксисукцинимида) и 200 нМ EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида) и иммобилизовали 25 мкг/мл антитела против человеческого IgG (Fc) в течение 400 секунд со скоростью 10 мкл/мин. Оставшиеся активные сложноэфирные группы блокировали 1М этаноламином. Т1.01, Т1.02 и Т1.03 разбавляли до 2 мкг/мл и подвергали реакции на чипе СМ5 с иммобилизованным антителом против человеческого IgG (Fc). Рекомбинантный FAP человека разбавляли до 200 нМ в буферном растворе 1×HBS-EP+ и разбавляли методом серийных разведений. Разбавленный рекомбинантный человеческий FAP подвергали реакции со скоростью 30 мкл/мин. Время ассоциации и диссоциации составляло 180 секунд и 400 секунд соответственно. После диссоциации проводили стабилизацию в течение 60 секунд, а затем проводили регенерацию в течение 30 секунд 10 мМ раствором глицина, рН 1,5, со скоростью 30 мкл/мин.

В результате, как показано на ФИГ. 7 и 8, было обнаружено, что T1.01, T1.02 и T1.03 могут специфично связываться с рекомбинантным человеческим FAP.

Связывание T1.04, T1.05, T1.06, T1.07, T1.08, T1.09, T1.10 и T1.11 с рекомбинантным человеческим FAP идентифицировали методом поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Поверхность чипа СМ5 активировали смесью 1:1 50 нМ NHS (N-гидроксисукцинимида) и 200 нМ EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида) и иммобилизовали 25 мкг/мл антитела против человеческого IgG (Fc) в течение 400 секунд со скоростью 10 мкл/мин. Оставшиеся активные сложноэфирные группы блокировали 1М этаноламином.

В частности, человеческие белки T1.04, T1.05, T1.06, T1.07, T1.08, T1.09, T1.10 и T1.11 разбавляли до 1 мкг/мл, 1 мкг/мл, 1 мкг /мл, 1 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, 0,5 мкг/мл и 1 мкг/мл, соответственно, и подвергали реакции на чипе CM5 с иммобилизованным антителом против человеческого IgG (Fc). Рекомбинантный человеческий FAP разбавляли до 25 нМ или 50 нМ в буферном растворе 1xHBS-EP+ и разбавляли методом серийных разведений. Разбавленный рекомбинантный человеческий FAP подвергали реакции со скоростью 30 мкл/мин. Время ассоциации и диссоциации составляло 180 секунд и 400 секунд соответственно. После диссоциации проводили стабилизацию в течение 60 секунд, а затем проводили регенерацию в течение 30 секунд 10 мМ раствором глицина, рН 1,5, со скоростью 30 мкл/мин.

В результате, как показано в Таблице 11 и на ФИГ. 9 и 10, было обнаружено, что T1.04, T1.05, T1.06 и T1.07 могут связываться с рекомбинантным человеческим FAP со специфичным таргетингом FAP. Кроме того, как показано в Таблице 12 и на ФИГ. 11 и 12, было обнаружено, что T1.08, T1.09, T1.10 и T1.11 могут связываться с рекомбинантным человеческим FAP со специфичным таргетингом FAP.

[Таблица 11] Модель кинетики Раствор для захвата 1 Раствор аналита 1 Кинетика Хи² (RU²) ka (1/Мс) kd (1/с) KD (M) связывание 1:1 1 мкг/мл T1.04 FAP человека 2,70E-01 5,83E+05 1,50E-05 2,57E-11 связывание 1:1 1 мкг/мл T1.05 FAP человека 2,80E-01 6,25E+05 5,83E-05 9,32E-11 связывание 1:1 1 мкг/мл T1.06 FAP человека 1,32E-01 1,04E+05 6,22E-05 5,96E-10 связывание 1:1 1 мкг/мл T1.07 FAP человека 2,33E-01 5,97E+05 7,64E-05 1,28E-10

[Таблица 12] Модель кинетики Раствор для захвата 1 Раствор аналита 1 Кинетика Хи² (RU²) ka (1/Мс) kd (1/с) KD (M) связывание 1:1 0,5 мкг/мл T1.08 FAP человека 4,70E-01 4,46E+05 7,87E-05 1,77E-10 связывание 1:1 0,5 мкг/мл T1.09 FAP человека 3,31E-01 5,17E+05 1,11E-04 2,14E-10 связывание 1:1 0,5 мкг/мл T1.10 FAP человека 1,84E-01 1,56E+05 7,48E-05 4,79E-10 связывание 1:1 1 мкг/мл T1.11 FAP человека 2,85E-01 1,20E+05 3,19E-05 2,67E-10

Пример 1.2. Идентификация связывания мышиного белка с рекомбинантным мышиным FAP

Связывание T1.01m, T1.02m и T1.03m с рекомбинантным мышиным FAP идентифицировали с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR).

Поверхность чипа СМ5 активировали смесью 1:1 50 нМ NHS (N-гидроксисукцинимида) и 200 нМ EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида) и иммобилизовали 25 мкг/мл антитела против мышиного IgG (Fc) в течение 400 секунд со скоростью 10 мкл/мин. Оставшиеся активные сложноэфирные группы блокировали 1М этаноламином. T1.01m, T1.02m и T1.03m разбавляли до 2 мкг/мл и подвергали реакции на чипе CM5 с иммобилизованным антителом против мышиного IgG (Fc). Рекомбинантный мышиный FAP разводили до 200 нМ в буферном растворе 1xHBS-EP+ и разбавляли методом серийных разведений. Разбавленный рекомбинантный мышиный FAP подвергали реакции со скоростью 30 мкл/мин. Время ассоциации и диссоциации составляло 180 секунд и 400 секунд соответственно. После диссоциации проводили стабилизацию в течение 60 секунд, а затем проводили регенерацию в течение 30 секунд 10 мМ раствором глицина, рН 1,5, со скоростью 30 мкл/мин.

В результате, как показано на ФИГ. 13 и 14, было обнаружено, что T1.01m, T1.02m и T1.03m могут связываться с рекомбинантным мышиным FAP со специфичным таргетингом FAP.

Пример 1.3. Идентификация связывания с FAP-экспрессирующими клетками

Определяли степень связывания T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03 с клетками HEK293 и HEK293-hFAP.

В частности, линию клеток подготавливали путем суспендирования в буферном растворе FACS при плотности 1×10⁵ клеток/100 мкл и обрабатывали 1 мкг каждого из Т1.12, Т1.01, Т1.02 и Т1.03. Клетки два раза промывали буферным раствором FACS. Клетки окрашивали антителом против человеческого IgG (Biolegend). Отрицательный контроль окрашивали только антителом против человеческого IgG (Biolegend). Уровни экспрессии окрашенных клеток измеряли с помощью BD LSR и анализировали с использованием программы FlowJo.

В результате, как показано на ФИГ. 15, было обнаружено, что Т1.12, Т1.01, Т1.02 и Т1.03 связываются с линией клеток человека, экспрессирующих FAP, на 99% или больше. Эти результаты показывают, что слитый белок согласно одному варианту осуществления может связываться с линией клеток человека, экспрессирующих FAP, со специфичным таргетингом FAP.

Кроме того, определяли степень связывания T1.12m, T1.01m, T1.02m и T1.03m с клетками B16F10 и B16F10-mFAP.

В частности, линию клеток подготавливали путем суспендирования в буферном растворе FACS при плотности 1×10⁵ клеток/100 мкл и обрабатывали 1 мкг каждого T1.12m, T1.01m, T1.02m и T1.03m. Клетки два раза промывали буферным раствором FACS. Клетки окрашивали антителом против мышиного IgG2a (Biolegend). Отрицательный контроль окрашивали только антителом против мышиного IgG2a (Biolegend). Скорость экспрессии окрашенных клеток измеряли с помощью BD LSR и анализировали с использованием программы FlowJo.

В результате, как показано на ФИГ. 16, было обнаружено, что T1.12m, T1.01m, T1.02m и T1.03m связываются с линией клеток, экспрессирующих FAP, на 99% или больше. Эти результаты показывают, что слитый белок согласно одному варианту осуществления может связываться с линией клеток мыши, экспрессирующих FAP, со специфичным таргетингом FAP.

Пример 1.4. Идентификация связывания слитого белка с рекомбинантным человеческим рецептором IL-12

С учетом того, что IL-12 в слитом белке должен связываться с рецептором IL-12 для своего действия, было обнаружено, что T1.01, T1.02, T1.03 и T1.12 связываются с рекомбинантным рецептором IL-12 человека.

T1.01, T1.02 и T1.03 иммобилизовали на планшете и связывали рекомбинантный белок рецептора IL-12 человека, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRP). В частности, выполняли следующие этапы:

(i) Т1.01, Т1.02, Т1.03 и Т1.12 суспендировали в концентрации 5 мкг/мл и разбавляли методом серийных разведений. Разбавленные Т1.01, Т1.02, Т1.03 и Т1.12 делили на аликвоты в 96-луночном иммунном планшете и обрабатывали в течение 24 часов.

(ii) Лунки промывали промывочным раствором, а затем проводили блокирование в течение 1 часа с использованием 1% раствора BSA (бычьего сывороточного альбумина, Sigma).

(iii) Лунки промывали промывочным раствором, а затем обрабатывали 1 нМ конъюгата рецептора IL-12 бета-1-биотина (IL-12Rβ1-биотин; Acrobiosystems, Newark, USA) в течение 2 часов.

(iv) Лунки промывали промывочным раствором, а затем обрабатывали стрептавидином-HRP в течение 20 минут.

(v) Лунки промывали промывочным раствором, а затем обрабатывали раствором субстрата в течение 20 минут.

(vi) Лунки обрабатывали стоп-раствором и измеряли оптическую плотность при 450 нм.

В результате, как показано на ФИГ. 17, было обнаружено, что T1.01, T1.02 и T1.03 связываются с рекомбинантным белком рецептора IL-12 человека зависимым от концентрации образом. Т1.12 использовали в качестве контроля.

Пример 2. Определение способности слитого белка индуцировать сигнализацию

Пример 2.1. Идентификация сигнальной способности IL-12-распознающих клеток.

С учетом того, что IL-12, как известно, инициирует сигнализацию при индукции фосфорилирования STAT4 (сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 4), медиатора сигнализации, когда IL-12 связывается с рецептором IL-12, оценивали сигнальную способность слитого белка согласно одному варианту осуществления в IL-12-распознающих клетках, экспрессирующих рецептор IL-12.

В частности, линию клеток HEK-Blue IL-12, которые представляют собой IL-12-распознающие клетки, разбавляли до плотности 2,8×10⁵ клеток/мл и вносили по 180 мкл/лунка. Рекомбинантный человеческий IL-12, T1.01m, T1.02m, T1.03m и T1.12m суспендировали при 4 нМ и разбавляли методом серийных разведений. Клетки HEK-Blue IL-12 обрабатывали разведенным рекомбинантным человеческим IL-12, T1.01m, T1.02m, T1.03m и T1.12m. Через 24 часа обработки супернатант клеток собирали и смешивали с раствором QUANTI-Blue (Invivogen) в 96-луночном планшете. Уровень экспрессии репортера измеряли при 620 нм с помощью спектрофотометра (Thermo Fisher).

В результате, как показано на ФИГ. 18, по оптической плотности при 620 нм было определено, что в случае групп обработки IL-12, T1.01m, T1.02m и T1.03m происходило распознавание IL-12, а STAT4 экспрессировал репортерный ген при индукции фосфорилирования. С другой стороны, было установлено, что контроль, T1.12m, не распознавал IL-12 при обработке T1.12m клеток, распознающих IL-12. Эти результаты показывают, что слитый белок согласно одному варианту осуществления специфично связывается с рецептором IL-12, индуцируя сигнализацию.

Пример 2.2. Идентификация сигнальной способности T-клеток человека

Для определения, связывается ли IL-12 с рецептором IL-12 на человечских T-клетках, и инициирует ли IL-12 сигнализацию при индукции фосфорилирования сигнального медиатора STAT4, T-клетки человека, активированные антителом к CD3 (OKT3, Invitrogen), анализировали с использованием набора для анализа AlphaLISA SureFire Ultra p-STAT4 (Tyr693) (PerkinElmer, Massachusetts, USA).

В частности, человеческие белки IL-12, T1.01, T1.02, T1.03 и T1.12 суспендировали в концентрации 100 нг/мл и разбавляли методом серийных разведений. Человеческие T-клетки, активированные антителом к CD3 (OKT3, Invitrogen), обрабатывали разведенным рекомбинантным человеческим IL-12, T1.01, T1.02, T1.03 и T1.12. Через 2 часа обработки клетки лизировали и обрабатывали реагентом (PerkinElmer), который обнаруживает p-STAT4 (фосфорилированный STAT4). p-STAT4 детектировали при длине волны возбуждения 680 нм и длине волны испускания 615 нм с помощью спектрофотометра.

В результате, как показано на ФИГ. 19, было установлено, что полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) в группе обработки рекомбинантным человеческим IL-12 составляла 8,945 пМ; EC50 в группе обработки T1.01 составляла 14,48 пМ; EC50 в группе обработки T1.02 составляла 56,51 пМ; и EC50 в группе обработки T1.03 составляла 147,2 пМ. С другой стороны, фосфорилированный STAT4 не был обнаружен в группе обработки T1.12, которая является контролем.

Эти результаты показывают, что мутация IL-12 ослабляет сигнальную способность T-клеток.

Пример 2.3. Идентификация изменения сигнальной способности слитого белка под действием низкомолекулярного гепарина в T-клетках человека

Следующим этапом определение усиления сигнальной способности слитого белка с мутацией IL-12 (IL-12 mut1) под действием низкомолекулярного гепарина проводили с использованием T-клеток человека, активированных антителом к CD3 (OKT3, Invitrogen), и набора для анализа AlphaLISA SureFire Ultra p-STAT4 (Tyr693).

В частности, при наблюдении, ослабляется ли индукция фосфорилирования STAT4, сигнального медиатора, при связывании аттенуированного IL-12 mut2 с рецептором IL-12 T-клеток человека, определяли сигнальную способность в зависимости от присутствия или отсутствия низкомолекулярного гепарина (НМГ) в человеческих T-клетках.

В частности, рекомбинантные человеческие IL-12, T1.01, T1.02 и T1.03 суспендировали в концентрации 100 нг/мл и разбавляли методом серийных разведений. Активированные человеческие T-клетки обрабатывали разбавленным рекомбинантным человеческим IL-12, T1.01, T1.02 и T1.03 в комбинации с низкомолекулярным гепарином. Через 2 часа обработки клетки лизировали и обрабатывали реагентом для обнаружения p-STAT4 (PerkinElmer). p-STAT4 обнаруживали при длине волны возбуждения 680 нм и длине волны испускания 615 нм с помощью спектрофотометра.

В результате, как показано на ФИГ. 20, полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) в группе обработки T1.01 и низкомолекулярным гепарином была увеличена в 9,4 раза по сравнению с группой обработки T1.01, полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) в группе обработки Т1,02 и низкомолекулярным гепарином увеличилась в 5,5 раза по сравнению с группой обработки Т1,02, и полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) в группе обработки Т1,03 и низкомолекулярным гепарином увеличилась в 4 раза по сравнению с группой обработки Т1,03.

Эти результаты показывают, что при добавлении мутации IL-12 (IL-12 mut2) к существующей мутации IL-12 (IL-12 mut1) степень усиления сигнальной способности при добавлении низкомолекулярного гепарина снижалась, и при этом IL-12 был эффективно аттенуирован.

Пример 3. Идентификация способности гибридного белка вызывать секрецию цитокинов

Пример 3.1. Иммуноферментный анализ для измерения цитокинов

Для измерения цитокинов проводили твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА, R&D systems) супернатанта, хранившегося при температуре -20°C,включавший следующие этапы:

(i) Антитело для захвата разводили в соответствии с Сертификатом анализа (CoA) и наносили на 96-луночный планшет на 24 часа.

(ii) Лунки промывали промывочным раствором, а затем проводили блокирование в течение 1 часа с использованием 1% раствора BSA (бычьего сывороточного альбумина, Sigma).

(iii) Лунки промывали промывочным раствором, а затем обрабатывали образцы в течение 2 часов.

(iv) Лунки промывали промывочным раствором, затем детектирующее антитело разводили в соответствии с Сертификатом анализа и наносили аликвотами в лунки, после чего лунки обрабатывали им в течение 2 часов.

(v) Лунки промывали промывочным раствором, а затем обрабатывали стрептавидином-HRP в течение 20 минут.

(vi) Лунки промывали промывочным раствором, а затем обрабатывали раствором субстрата в течение 20 минут.

(vii) Лунки обрабатывали стоп-раствором и измеряли оптическую плотность при 450 нм.

Пример 3.2. Определение способности вызывать секрецию цитокинов в T-клетках человека

С учетом того, что секреция IFN-γ (гамма-интерферона), которая имеет решающее значение при иммунном ответе, возникает при обработке T-клеток человека IL-12, способность к секреции IFN-γ оценивали при обработке T-клеток человека рекомбинантным человеческим IL-12, Т1.12, Т1.01, Т1.02 и Т1.03.

В частности, T-клетки человека, активированные антителом к CD3 (OKT3, Invitrogen), разбавляли до плотности 5×10⁵ клеток/мл и наносили в 96-луночный планшет по 200 мкл/лунка. Рекомбинантный человеческий IL-12, T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03 разбавляли до 10 нМ и наносили по 20 мкл/лунка. После 48 часов обработки супернатант клеток собирали и хранили образцы при -80°C.

В результате, как показано на ФИГ. 21, было обнаружено, что образец, обработанный рекомбинантным человеческим IL-12, содержал в среднем 1640 пг/мл IFN-γ; образец, обработанный T1.01, содержал в среднем 1115 пг/мл IFN-γ; образец, обработанный T1.02, содержал в среднем 845 пг/мл IFN-γ; и образец, обработанный T1.03, содержал в среднем 607 пг/мл IFN-γ. С другой стороны, было обнаружено, что образец, обработанный T1.12 в качестве контроля, не содержал IFN-γ.

Эти результаты показывают, что Т1.01, Т1.02 и Т1.03 действуют на T-клетки человека, вызывая секрецию IFN-γ.

Пример 3.3. Идентификация способности вызвать секрецию цитокинов в NK-клетках человека

С учетом того, что секреция IFN-γ (интерферона гамма), которая имеет решающее значение при иммунном ответе, происходит при обработке NK-клеток человека IL-12, авторы настоящего изобретения оценивали способность к секреции IFN-γ при обработке активированных рекомбинантным IL-2 (R&D systems) NK-клеток человека рекомбинантным человеческим IL-12, T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03.

В частности, человеческие NK-клетки, активированные рекомбинантным человеческим IL-2 (R&D Systems), разбавляли до 5×10⁵ клеток/мл и наносили в 96-луночный планшет по 200 мкл/лунка. Рекомбинантный человеческий IL-12, T1.12, T1.01, T1.02 и T1.03 разбавляли до 10 нМ и наносили по 20 мкл/лунка. После 24 часов обработки супернатант клеток собирали и хранили образцы при -80°С.

В результате, как показано на ФИГ. 22, было обнаружено, что образец, обработанный рекомбинантным человеческим IL-12, содержал в среднем 180 пг/мл IFN-γ; образец, обработанный T1.01, содержал в среднем 205 пг/мл IFN-γ; образец, обработанный T1.02, содержал в среднем 133 пг/мл IFN-γ; и образец, обработанный T1.03, содержал в среднем 80 мкг/мл IFN-γ. С другой стороны, было обнаружено, что образец, обработанный T1.12 в качестве контроля, не содержал IFN-γ. Эти результаты показывают, что T1.01, T1.02 и T1.03 воздействуют на NK-клетки человека, вызывая секрецию IFN-γ.

Пример 4. Оценка противоопухолевой эффективности слитого белка в модели рака толстой и прямой кишки на животных

Пример 4.1. Оценка противоопухолевой эффективности в модели рака толстой и прямой кишки на животных при совместной инъекции FAP-экспрессирующих фибробластов

С учетом того, что слитый белок находится в форме двойного антитела, содержащего структуру последовательности против FAP и структуру последовательности IL-12, а FAP повышенно экспрессируется в фибробластах, присутствующих в микроокружении многих опухолей, после оверэкспрессии мышиного FAP в клетках NIH3T3, клеточной линии мышиных фибробластов, способность ингибировать рост опухоли оценивали в модели опухоли на животных при совместном введении 1:1 CT26, линии клеток рака толстой и прямой кишки мыши.

CT26, клеточную линию рака толстой и прямой кишки мыши, и NIH-3T3, клеточную линию мышиных фибробластов, использовали для получения модели FAP-экспрессирующей опухоли на животных. Затем получали NIH-3T3 в качестве линии FAP-экспрессирующих клеток.

В частности, мышиные клетки NIH-3T3 с оверэкспрессией FAP и клетки CT26 в культуре ресуспендировали в сбалансированном солевом растворе Хэнкса (HBSS, Gibco) в концентрации 1×10⁶ клеток/50 мкл соответственно и смешивали клетки в соотношении 1:1, а затем по 100 мкл на каждую мышь трансплантировали в подкожную область правого бока 6-недельным мышам BALB/c при использовании шприца (25G) объемом 1 см³ с получением FAP-экспрессирующей модели с совместной инъекцией фибробластов на животных. Размер опухоли измеряли с помощью цифрового штангенциркуля, производя измерение по короткой оси и длинной оси опухоли, и размер опухоли измеряли два раза в неделю по формуле расчета (короткая ось, мм)²×(длинная ось, мм)×0,5.

Затем для оценки эффективности лекарственного средства, когда размер опухоли достигал 100 мм³, мышей рандомизировано распределяли по группам. Каждая экспериментальная группа состояла из 10 животных, и в качестве контроля по 100 мкл 50 мкг Т1.24m вводили внутрибрюшинно три раза с интервалом в 3 дня. В тестируемой группе по 100 мкл 10 мкг и 50 мкг T1.02m и 50 мкг T1.01m соответственно вводили внутрибрюшинно три раза с интервалом в 3 дня для оценки ингибирующей способности в отношении роста опухоли.

В результате, как показано на ФИГ. 23, при сравнении размера опухоли на 14-й день было обнаружено, что группы, которым вводили по 10 мкг и 50 мкг T1.02m, обладали превосходной способностью ингибировать рост опухоли на уровне 93,2% и 92,7% соответственно по сравнению с группой, которой вводили 50 мкг T1.24m в качестве контроля. Кроме того, было отмечено, что в группе, в которой вводили 50 мкг T1.01m, наблюдали ингибирование роста опухоли 91,9% по сравнению с группой, в которой вводили 50 мкг T1.24m в качестве контроля.

Кроме того, как показано на ФИГ. 24, на 24-й день после введения в группе, в которой вводили T1,01m и T1,02m, наблюдали субъектов с полным ответом по сравнению с контролем.

Эти результаты показывают, что слитый белок в соответствии с одним вариантом осуществления обладает превосходной противоопухолевой эффективностью в модели рака толстой и прямой кишки на животных.

Пример 4.2. Оценка противоопухолевой эффективности в FAP-экспрессирующей модели рака толстой и прямой кишки на животных

В случае рака толстой и прямой кишки, учитывая высокую экспрессию FAP в самих опухолевых клетках, для оценки противоопухолевого эффекта способность ингибировать рост опухоли оценивали в модели опухоли, в которой оверэкспрессию FAP мыши индуцировали в клетках CT26, т.е. линии клеток рака толстой и прямой кишки мыши.

Для получения модели FAP-экспрессирующей опухоли на мышах, оверэкспрессию FAP индуцировали в CT26, линии клеток рака толстой и прямой кишки мыши. В частности, клетки CT26 с оверэкспрессией FAP в культуре ресуспендировали в сбалансированном солевом растворе Хэнкса (HBSS, Gibco), а затем по 100 мкл 1×10⁶ опухолевых клеток на каждую мышь трансплантировали в подкожную область с левой стороны спины 6-недельных мышей BALB/c при использовании шприца (25G) объемом 1 см³ с получением животной FAP-экспрессирующей модели рака толстой и прямой кишки на мышах. Размер опухоли измеряли с помощью цифрового штангенциркуля, производя измерение по короткой оси и длинной оси опухоли, и размер опухоли измеряли два раза в неделю по формуле расчета (короткая ось, мм)²×(длинная ось, мм)×0,5.

Затем для оценки эффективности лекарственного средства, когда размер опухоли достигал 100 мм³, мышей рандомизированно распределяли по группам. Каждая экспериментальная группа состояла из 8 животных, и в качестве контроля по 100 мкл 50 мкг Т1.24m вводили внутрибрюшинно четыре раза с интервалом в 3 дня. В тестируемой группе по 100 мкл 10 мкг и 100 мкг T1.01m и 2 мкг, 10 мкг и 100 мкг T1.02m соответственно вводили внутрибрюшинно четыре раза с интервалом в 3 дня для оценки ингибирующей способности в отношении роста опухоли.

В результате, как показано на ФИГ. 25, было обнаружено, что группа, в которой вводили 10 мкг и 100 мкг T1.01m, обладала высокой способностью ингибировать рост опухоли на 84,9% и 85,6% соответственно по сравнению с группой, в которой вводили 50 мкг T1.24m в качестве контроля. Кроме того, было отмечено, что группа, в которой вводили T1.02m, обладала высокой способностью ингибировать рост опухоли на 80,1%, 90,5% и 89,8%, соответственно, в зависимости от дозы по сравнению с группой, в которой вводили T1.24m в качестве контроля.

Кроме того, было установлено, что субъекты с полным ответом (CR) присутствовали в каждой группе введения на 30-й день после введения в сочетании с ингибированием роста опухоли, при этом во время исследования не наблюдали изменения массы тела, которое было связано с введением. Эти результаты показывают, что слитый белок согласно одному варианту осуществления обладает превосходной противоопухолевой эффективностью в модели рака толстой и прямой кишки на животных.

Пример 4.3. Оценка ингибирования роста рецидивирующей солидной злокачественной опухоли у мышей с полным ответом при воздействии слитого белка

Чтобы оценить, можно ли ингибировать рецидив опухоли путем индукции долговременного иммунного ответа после лечения слитым белком, повторное введение опухоли проводили у субъектов, у которых полный ответ был достигнут при введении T1.01m в модели опухоли с совместной инъекцией фибробластов NIH-3T3 и клеток CT26. Мышей BALB/c, ранее не подвергавшихся лечению, использовали в качестве контрольных мышей.

Клетки 4T1 вводили подкожно в левый бок, а клетки CT26 вводили подкожно в правый бок контрольным мышам и мышам, у которых полный ответ был достигнут при введении T1.01m, с получением модели рецидива опухоли.

В частности, в модели, в которой совместно вводили фибробласты NIH-3T3 с оверэкспрессией FAP и клетки CT26, модель рецидива опухоли индуцировали у мышей, у которых полный ответ был продемонстрирован при введении T1.01m. Клетки СТ26 и клетки 4Т1 суспендировали в сбалансированном солевом растворе Хенкса (HBSS, Gibco) в концентрации 1×10⁶ клеток/100 мкл соответственно, и клетки СТ26 трансплантировали в подкожную область правого бока мышей при использовании шприца (25G) объемом 1 см³. Формирование и рост опухолей оценивали при подкожной трансплантации клеток 4T1 в левый бок тем же мышам.

В результате, как показано на ФИГ. 26 и 27, было обнаружено, что трансплантированная опухоль 4T1 и опухоль CT26 росли у контрольных мышей без анамнеза лечения, тогда как у мышей, у которых был достигнут полный ответ после введения T1.01m, опухоль 4T1 росла, но рост опухоли CT26 был подавлен. Эти результаты показывают, что слитый белок согласно одному варианту осуществления может ингибировать рецидив опухоли.

Пример 4.4. Оценка снижения активности, соответствующей аминокислотной мутации IL-12 слитого белка

Чтобы уменьшить токсичность in vivo из-за чрезмерной активации иммунной системы под действием IL-12, авторы настоящего изобретения использовали структуру последовательности IL-12, содержащую мутацию в аминокислотной последовательности, связывающейся с гепарином, чтобы вызвать снижение активности в результате блокирования связывания с рецептором IL-12, и это было идентифицировано посредством модели опухоли на животных.

Из антител против FAP, T1.02m и T1.03m, в которых были подвергнуты мутации аминокислоты, участвующие в связывании гепарина, сравнивали с T1.01m, а в качестве контроля использовали фосфатно-солевой буфер (PBS). К тому же, T1.02m содержит структуру последовательности IL-12 мыши, содержащую мутации (двух) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, вместе со структурой последовательности против FAP. T1.03m представляет собой слитый белок, содержащий структуру последовательности IL-12, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, вместе со структурой последовательности против FAP.

Для оценки изменения активности IL-12 в зависимости от присутствия и степени аминокислотной мутации, мышиный рак толстой и прямой кишки CT26 с оверэкспрессией FAP получали путем ресуспендирования в PBS в концентрации 5×10⁵ клеток/100 мкл, и способность ингибирования роста опухоли оценивали в модели опухоли на животных, полученной путем трансплантации клеток 5-недельным самкам мышей BALB/c.

В частности, когда размер опухоли в модели достигал 100 мм³, мышей рандомизированно распределяли по группам. Каждая экспериментальная группа состояла из 8 животных, и 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS) вводили однократно путем инъекции в хвостовую вену в качестве контроля, и каждый из T1.01m, T1.02m и T1.03m вводили внутривенно однократно в дозе 10 мкг.

В результате, как показано на ФИГ. 28, было обнаружено, что все группы введения T1.01m, T1.02m и T1.03m обладали превосходной способностью ингибировать рост опухоли по сравнению с контролем через 15 дней после введения.

Кроме того, было обнаружено, что была снижена способность ингибировать рост опухоли в группе, в которой вводили T1.03m с IL-12, содержащим мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, вместе с мышиной последовательностью против FAP, в сравнении с группой, в которой вводили T1.01m. Эти результаты показывают, что активность IL-12 была снижена в группе, в которой вводили T1.03m, имеющий структуру последовательности IL-12 мыши, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, по сравнению с другими экспериментальными группами и контролем.

Пример 4.5. Оценка противоопухолевой эффективности при однократном введении слитого белка с аминокислотной мутацией IL-12

Для оценки противоопухолевого эффекта слитого белка, имеющего сниженную активность IL-12 из-за структуры последовательности, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, способность ингибировать рост опухоли оценивали в модели опухоли с трансплантацией линии FAP-оверэкспрессирующих клеток рака толстой и прямой кишки мыши CT26.

В частности, опухолевые клетки трансплантировали в правую сторону спины 6-недельным мышам BALB/c, и когда размер опухоли животной модели достигал 70-100 мм³, мышей рандомизированно распределяли по группам и проводили введение. В качестве контроля вводили PBS, а в качестве тестируемой группы однократно внутривенно вводили 100 мкл T1.03m в дозе 2 мкг, 10 мкг и 100 мкг. Размер опухоли измеряли так же, как в Примере 4.1.

В результате, как показано на ФИГ. 29, наблюдали, что группа, в которой вводили 2 мкг, 10 мкг и 100 мкг T1.03m, обладала высокой способностью ингибировать рост опухоли по сравнению с контролем. Изменений массы тела в течение периода исследования не наблюдали. Эти результаты показывают, что T1.03m, у которого снижена активность IL-12 из-за структуры последовательности, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, обладает отличной противоопухолевой эффективностью при некоторой или более высокой концентрации.

Пример 5. Оценка противоопухолевой эффективности слитого белка в модели меланомы на животных

Для обнаружения противоопухолевого эффекта при иммунной активации слитого белка мышиный FAP оверэкспрессировали в линии клеток мышиной меланомы B16F10, которая, как известно, демонстрирует слабую инфильтрацию иммунными клетками, а затем трансплантировали мышам C57BL/6J и оценивали способность ингибирования роста опухоли.

В частности, клетки в культуре ресуспендировали в сбалансированных растворах Хэнкса раствор (HBSS, Gibco), а затем 100 мкл 1×10⁶ опухолевых клеток на каждую мышь трансплантировали в подкожную область с левой боковой стороны спины 6-недельным мышам C57BL/6J.

Затем для оценки эффективности лекарственного средства, когда размер опухоли достигал 70-100 мм³, мышей рандомизированно разделяли по группам. В качестве контроля вводили PBS, а в качестве тестируемой группы однократно внутривенно вводили T1.03m в дозе 10 мкг и 100 мкг.

В результате, как показано на ФИГ. 30, наблюдали, что обе группы, в которых вводили 10 мкг и 100 мкг T1.03m, обладали высокой способностью ингибировать рост опухоли по сравнению с контролем. Изменений массы тела в течение периода исследования не наблюдали. Эти результаты показывают, что T1.03m, который обладает сниженной активностью IL-12 из-за структуры последовательности, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, обладает превосходной противоопухолевой эффективностью даже в модели меланомы на животных.

Пример 6. Оценка противоопухолевой эффективности слитого белка в модели рака легкого на животных

Пример 6.1. Оценка противоопухолевой эффективности слитого белка с аминокислотной мутацией IL-12 в модели рака легкого на животных

С учетом того, что FAP повышенно экспрессируется в фибробластах, присутствующих в микроокружении вокруг опухоли, FAP оверэкспрессировали в NIH-3T3, клеточной линии мышиных фибробластов, а затем совместно вводили с LLC1, линией клеток рака легкого мыши, в соотношении 1:1 с получением модели опухоли на животных, и оценивали способность ингибировать рост опухоли.

В частности, линию клеток NIH-3T3 с оверэкспрессией FAP и клетки LLC1 ресуспендировали в сбалансированном солевом растворе Хэнкса (HBSS, Gibco) в концентрации 1×10⁶ клеток/50 мкл соответственно и смешивали клетки в соотношении 1:1, а затем по 100 мкл на каждую мышь трансплантировали в подкожную область в правый бок 6-недельным мышам C57BL/6J при использовании шприца (25G) объемом 1 см³.

Затем для оценки эффективности лекарственного средства, когда размер опухоли достигал 70-100 мм³, мышей рандомизированно распределяли по группам. В качестве контроля вводили PBS, а в качестве тестируемой группы однократно внутривенно вводили T1.03m в дозе 10 мкг и 100 мкг.

В результате, как показано на ФИГ. 31, наблюдали, что обе группы, в которых вводили 10 мкг или 100 мкг T1.03m, обладали превосходной способностью ингибировать рост опухоли по сравнению с контролем. Изменений массы тела в течение периода исследования не наблюдали. Эти результаты показывают, что T1.03m, который обладает сниженной активностью IL-12 из-за структуры последовательности, содержащей мутации (четырех) аминокислот, участвующих в связывании гепарина, распознает фактор-мишень в микроокружении опухоли и, таким образом, обладает превосходной противоопухолевой эффективностью даже в модель рака легкого на животных.

Пример 6.2. Оценка эффективности направленного воздействия на опухоль в модели рака легкого на животных посредством совместной инъекции слитого белка

Для сравнения противоопухолевой эффективности в соответствии с направленным воздействием на опухоль слитого белка по типу двойного антитела, в котором структура последовательности против FAP и структура последовательности IL-12 образуют структуру "выступа во впадину", была определена способность ингибировать рост опухоли в модели на животных, которым совместно вводили клеточную линию мышиных фибробластов NIH-3T3 с оверэкспрессией FAP и клеточную линию LLC1 рака легкого мыши, в соотношении 1:1.

В частности, для оценки эффективности лекарственного средства, когда размер опухоли достигал 70-100 мм³, мышей рандомизированно распределяли по группам. В качестве контроля два раза в неделю внутрибрюшинно вводили PBS. Группу, в которой вводили только T1.16m или T1.17m, группу, в которой вводили T1.16m и T1.17m в комбинации (T1.16m+T1.17m), и группу, в которой вводили T1.03m, использовали в качестве тестируемых групп для оценки способности ингибирования роста опухоли. T1.16m и T1.17m, которые представляют собой димеры против FAP и IL-12, соответственно, вводили внутрибрюшинно два раза в неделю в дозе 0,01 мкг, и T1.03m, который представляет собой мономерный слитый белок, вводили внутрибрюшинно два раза в неделю в дозе 0,02 мкг для наблюдения способности ингибировать рост опухоли.

В результате, как показано на ФИГ. 32, было отмечено, что группа, в которой вводили T1.03m, обладала превосходной способностью ингибировать рост опухоли через 10 дней после введения по сравнению с контролем. Группу, которой вводили только T1.16m или T1.17m, и каждую группу комбинированного введения сравнивали, и при этом было обнаружено, что группа, в которой вводили только T1.03m, обладала превосходной способностью ингибировать рост опухоли. Эти результаты показывают, что синергетический эффект слитого белка согласно одному варианту осуществления является значимым в сравнении со случаем, когда мишенью является только FAP, или по сравнению с IL-12 без опухоли-мишени.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> KANAPH THERAPEUTICS INC.

<120> СЛИТЫЙ БЕЛОК, ВКЛЮЧАЮЩИЙ IL-12 И АНТИТЕЛО ПРОТИВ FAP, И ЕГО

ПРИМЕНЕНИЕ

<130> SPO21-021KNP_PCT

<150> KR 10-2020-0100229

<151> 2020-08-11

<160> 305

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 454

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 1

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 2

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP LC

<400> 2

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 3

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12-hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 3

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 4

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut1-hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 4

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Lys Arg Glu Ala Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 5

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 5

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Ala Arg Glu Ala Ala Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 6

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> (anti-hu FAP VH)2-hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 6

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

130 135 140

Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser

145 150 155 160

Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Ile His Trp Val

165 170 175

Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Asn Pro

180 185 190

Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr

195 200 205

Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser

210 215 220

Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Ile

225 230 235 240

Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

260 265 270

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

275 280 285

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

290 295 300

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

305 310 315 320

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

325 330 335

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

340 345 350

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 7

<211> 348

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> (anti-hu FAP VL)2

<400> 7

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

130 135 140

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

145 150 155 160

Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

165 170 175

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

210 215 220

Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

225 230 235 240

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

245 250 255

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

260 265 270

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

275 280 285

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

290 295 300

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

305 310 315 320

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

325 330 335

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

340 345

<210> 8

<211> 726

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc knob DANG-anti-hu FAP scFv

<400> 8

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

450 455 460

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

465 470 475 480

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr

485 490 495

Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

500 505 510

Arg Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn

515 520 525

Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser

530 535 540

Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

545 550 555 560

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu

565 570 575

Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

580 585 590

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

595 600 605

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu

610 615 620

Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln

625 630 635 640

Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln

645 650 655

Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr

660 665 670

Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr

675 680 685

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val

690 695 700

Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly

705 710 715 720

Thr Lys Val Glu Ile Lys

725

<210> 9

<211> 492

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP LC-anti-hu FAP scFv

<400> 9

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

225 230 235 240

Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser

245 250 255

Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Ile His Trp Val

260 265 270

Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Asn Pro

275 280 285

Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr

290 295 300

Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser

305 310 315 320

Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Ile

325 330 335

Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

340 345 350

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

355 360 365

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr

370 375 380

Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile

385 390 395 400

Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn

405 410 415

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

420 425 430

Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

435 440 445

Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

450 455 460

Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Ser Tyr Pro

465 470 475 480

Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

485 490

<210> 10

<211> 986

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc hole DANG-hu scIL-12

<400> 10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Gly Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

465 470 475 480

Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys

485 490 495

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser

500 505 510

Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe

515 520 525

Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser

530 535 540

His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr

545 550 555 560

Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg

565 570 575

Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr

580 585 590

Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser

595 600 605

Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu

610 615 620

Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln

625 630 635 640

Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val

645 650 655

Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser

660 665 670

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

675 680 685

Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr

690 695 700

Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

705 710 715 720

Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe

725 730 735

Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile

740 745 750

Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp

755 760 765

Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

770 775 780

Gly Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

785 790 795 800

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

805 810 815

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

820 825 830

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

835 840 845

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

850 855 860

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

865 870 875 880

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

885 890 895

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

900 905 910

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

915 920 925

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

930 935 940

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

945 950 955 960

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

965 970 975

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

980 985

<210> 11

<211> 986

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc hole DANG-hu scIL-12 mut2

<400> 11

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Gly Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

465 470 475 480

Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys

485 490 495

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser

500 505 510

Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe

515 520 525

Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser

530 535 540

His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr

545 550 555 560

Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg

565 570 575

Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr

580 585 590

Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser

595 600 605

Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu

610 615 620

Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln

625 630 635 640

Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val

645 650 655

Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser

660 665 670

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

675 680 685

Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr

690 695 700

Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

705 710 715 720

Val Gln Val Gln Gly Ala Ser Ala Arg Glu Ala Ala Asp Arg Val Phe

725 730 735

Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile

740 745 750

Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp

755 760 765

Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

770 775 780

Gly Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

785 790 795 800

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

805 810 815

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

820 825 830

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

835 840 845

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

850 855 860

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

865 870 875 880

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

885 890 895

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

900 905 910

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

915 920 925

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

930 935 940

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

945 950 955 960

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

965 970 975

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

980 985

<210> 12

<211> 227

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 12

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 13

<211> 227

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 13

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 14

<211> 454

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc DANG

<400> 14

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 15

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc DANG

<400> 15

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Ala Arg Glu Ala Ala Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 16

<211> 451

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu CD20 HC hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 16

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 17

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu CD20 LC

<400> 17

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 18

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 18

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser

245 250 255

Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp

260 265 270

Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln

275 280 285

Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser

290 295 300

Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

340 345 350

Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Trp Cys Met

355 360 365

Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn

370 375 380

Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn

405 410 415

Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu

420 425 430

His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 19

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP LC

<400> 19

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro

100 105 110

Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn

130 135 140

Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn

145 150 155 160

Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr

180 185 190

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys

210

<210> 20

<211> 764

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12-mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 20

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Lys Lys

245 250 255

Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

515 520 525

Gly Gly Ser Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys

530 535 540

Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe

545 550 555 560

Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val

565 570 575

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile

580 585 590

Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr

595 600 605

His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro

610 615 620

Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val

625 630 635 640

Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro

645 650 655

Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu

660 665 670

Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Ser Cys Ala Val Thr Asp

675 680 685

Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr

690 695 700

Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

705 710 715 720

Tyr Phe Met Val Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu

725 730 735

Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His

740 745 750

His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

755 760

<210> 21

<211> 764

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut1-mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 21

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Ala Lys

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

515 520 525

Gly Gly Ser Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys

530 535 540

Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe

545 550 555 560

Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val

565 570 575

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile

580 585 590

Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr

595 600 605

His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro

610 615 620

Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val

625 630 635 640

Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro

645 650 655

Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu

660 665 670

Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Ser Cys Ala Val Thr Asp

675 680 685

Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr

690 695 700

Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

705 710 715 720

Tyr Phe Met Val Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu

725 730 735

Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His

740 745 750

His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

755 760

<210> 22

<211> 764

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 22

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Ala Ala Ala

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

515 520 525

Gly Gly Ser Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys

530 535 540

Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe

545 550 555 560

Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val

565 570 575

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile

580 585 590

Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr

595 600 605

His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro

610 615 620

Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val

625 630 635 640

Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro

645 650 655

Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu

660 665 670

Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Ser Cys Ala Val Thr Asp

675 680 685

Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr

690 695 700

Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

705 710 715 720

Tyr Phe Met Val Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu

725 730 735

Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His

740 745 750

His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

755 760

<210> 23

<211> 579

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> (anti-mu FAP VH)2, mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 23

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala

130 135 140

Arg Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr

145 150 155 160

Phe Thr Asn Asn Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly

165 170 175

Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr

180 185 190

Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser

195 200 205

Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala

210 215 220

Val Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser

245 250 255

Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val

260 265 270

Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu

275 280 285

Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

290 295 300

Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr

305 310 315 320

Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro

325 330 335

Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr

340 345 350

Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly

355 360 365

Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met

370 375 380

Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu

385 390 395 400

Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val

405 410 415

His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu

420 425 430

Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly

435 440 445

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile

450 455 460

Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val

465 470 475 480

Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr

485 490 495

Leu Trp Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu

500 505 510

Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro

515 520 525

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val

530 535 540

Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val

545 550 555 560

His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr

565 570 575

Pro Gly Lys

<210> 24

<211> 334

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> (anti-mu FAP VL)2

<400> 24

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly

100 105 110

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser

115 120 125

Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

130 135 140

Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser

145 150 155 160

Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

165 170 175

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser

180 185 190

Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

195 200 205

Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

210 215 220

Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro

225 230 235 240

Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu

245 250 255

Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly

260 265 270

Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser

275 280 285

Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp

290 295 300

Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr

305 310 315 320

Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

325 330

<210> 25

<211> 705

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc knob DANG-anti-mu FAP scFv

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser

245 250 255

Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp

260 265 270

Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln

275 280 285

Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser

290 295 300

Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

340 345 350

Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Trp Cys Met

355 360 365

Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn

370 375 380

Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn

405 410 415

Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu

420 425 430

His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys Gly

435 440 445

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val

450 455 460

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

465 470 475 480

Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn Gly Ile

485 490 495

Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu

500 505 510

Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly

515 520 525

Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Glu

530 535 540

Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg

545 550 555 560

Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

565 570 575

Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

580 585 590

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala

595 600 605

Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala

610 615 620

Ser Ser Gly Val Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr

625 630 635 640

Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val

645 650 655

Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr

660 665 670

Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

675 680 685

Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

690 695 700

Lys

705

<210> 26

<211> 471

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP LC-anti-mu FAP scFv

<400> 26

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro

100 105 110

Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn

130 135 140

Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn

145 150 155 160

Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr

180 185 190

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

210 215 220

Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala

225 230 235 240

Arg Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr

245 250 255

Phe Thr Asn Asn Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly

260 265 270

Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr

275 280 285

Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser

290 295 300

Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala

305 310 315 320

Val Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly

325 330 335

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

340 345 350

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val

355 360 365

Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val

370 375 380

Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met His Trp Tyr

385 390 395 400

Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser

405 410 415

Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

420 425 430

Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala

435 440 445

Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly

450 455 460

Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

465 470

<210> 27

<211> 982

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc hole DANG-mu scIL-12

<400> 27

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser

245 250 255

Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp

260 265 270

Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln

275 280 285

Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser

290 295 300

Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

340 345 350

Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Ser Cys Ala

355 360 365

Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn

370 375 380

Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Tyr Phe Met Val Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn

405 410 415

Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu

420 425 430

His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Trp Glu

450 455 460

Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala

465 470 475 480

Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp

485 490 495

Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly Ser Gly Lys

500 505 510

Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly Gln Tyr Thr

515 520 525

Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His

530 535 540

Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys Asn Phe Lys

545 550 555 560

Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe

565 570 575

Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn Ile

580 585 590

Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met

595 600 605

Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu

610 615 620

Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu

625 630 635 640

Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys

645 650 655

Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro

660 665 670

Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val

675 680 685

Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr

690 695 700

Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met

705 710 715 720

Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu

725 730 735

Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln

740 745 750

Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val

755 760 765

Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

770 775 780

Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg Cys

785 790 795 800

Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val Lys

805 810 815

Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp Ile

820 825 830

Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr Cys

835 840 845

Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg Glu

850 855 860

Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr Ser

865 870 875 880

Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

885 890 895

Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His Asn

900 905 910

His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp Glu

915 920 925

Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys Pro

930 935 940

Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys Leu Cys Ile

945 950 955 960

Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn Arg Val Met

965 970 975

Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

980

<210> 28

<211> 982

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc hole DANG-mu scIL-12 mut2

<400> 28

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser

245 250 255

Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp

260 265 270

Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln

275 280 285

Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser

290 295 300

Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

340 345 350

Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Ser Cys Ala

355 360 365

Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn

370 375 380

Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Tyr Phe Met Val Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn

405 410 415

Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu

420 425 430

His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Gly Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Trp Glu

450 455 460

Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala

465 470 475 480

Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp

485 490 495

Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly Ser Gly Lys

500 505 510

Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly Gln Tyr Thr

515 520 525

Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His

530 535 540

Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys Asn Phe Lys

545 550 555 560

Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe

565 570 575

Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn Ile

580 585 590

Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met

595 600 605

Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu

610 615 620

Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu

625 630 635 640

Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys

645 650 655

Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro

660 665 670

Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val

675 680 685

Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr

690 695 700

Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Ala Ala Ala Glu Lys Met

705 710 715 720

Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu

725 730 735

Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln

740 745 750

Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val

755 760 765

Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

770 775 780

Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg Cys

785 790 795 800

Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val Lys

805 810 815

Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp Ile

820 825 830

Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr Cys

835 840 845

Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg Glu

850 855 860

Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr Ser

865 870 875 880

Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

885 890 895

Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His Asn

900 905 910

His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp Glu

915 920 925

Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys Pro

930 935 940

Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys Leu Cys Ile

945 950 955 960

Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn Arg Val Met

965 970 975

Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

980

<210> 29

<211> 233

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 29

Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe

50 55 60

Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu

65 70 75 80

Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His

85 90 95

Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys

100 105 110

Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser

115 120 125

Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met

130 135 140

Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Ser Cys Ala Val Thr Asp Phe Met Pro

145 150 155 160

Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn

165 170 175

Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met

180 185 190

Val Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser

195 200 205

Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr

210 215 220

Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

225 230

<210> 30

<211> 233

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 30

Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe

50 55 60

Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu

65 70 75 80

Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His

85 90 95

Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys

100 105 110

Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser

115 120 125

Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met

130 135 140

Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Trp Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro

145 150 155 160

Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn

165 170 175

Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser

195 200 205

Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr

210 215 220

Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

225 230

<210> 31

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc DANG

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser

245 250 255

Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp

260 265 270

Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln

275 280 285

Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser

290 295 300

Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

340 345 350

Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met

355 360 365

Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn

370 375 380

Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn

405 410 415

Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu

420 425 430

His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 32

<211> 764

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc DANG

<400> 32

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Ala Ala Ala

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

515 520 525

Gly Gly Ser Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys

530 535 540

Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe

545 550 555 560

Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val

565 570 575

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile

580 585 590

Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr

595 600 605

His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro

610 615 620

Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val

625 630 635 640

Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro

645 650 655

Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu

660 665 670

Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp

675 680 685

Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr

690 695 700

Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

705 710 715 720

Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu

725 730 735

Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His

740 745 750

His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

755 760

<210> 33

<211> 451

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu CD20 HC mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 33

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Asn Tyr Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser

115 120 125

Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val

130 135 140

Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu

145 150 155 160

Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr

180 185 190

Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr

210 215 220

Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met

245 250 255

Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Glu

260 265 270

Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val

275 280 285

His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Gly Ser Thr Leu

290 295 300

Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly

305 310 315 320

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr

355 360 365

Leu Trp Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu

370 375 380

Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val

405 410 415

Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val

420 425 430

His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 34

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu CD20 LC

<400> 34

Gln Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Thr Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Asp Ala Ala Pro

100 105 110

Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn

130 135 140

Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn

145 150 155 160

Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr

180 185 190

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys

210

<210> 35

<211> 233

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IgG2a Fc DANG

<400> 35

Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Ala Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe

50 55 60

Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu

65 70 75 80

Asp Tyr Gly Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His

85 90 95

Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys

100 105 110

Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser

115 120 125

Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met

130 135 140

Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro

145 150 155 160

Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn

165 170 175

Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser

195 200 205

Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr

210 215 220

Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

225 230

<210> 36

<211> 1362

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 36

caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaagc caggagcctc tgtgaaggtg 60

agctgcaaga cctccagata caccttcaca gagtatacaa tccactgggt gcgccaggca 120

cctggacagc ggctggagtg gatcggaggc atcaacccca acaatggcat ccctaactac 180

aatcagaagt ttaagggcag agtgaccatc acagtggaca cctccgcctc tacagcctat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggat accgccgtgt actattgcgc ccggagaagg 300

atcgcctacg gctatgacga gggccacgcc atggattact ggggccaggg caccctggtg 360

acagtgtcta gcgcctctac caagggacca agcgtgttcc cactggcacc atcctctaag 420

agcacctccg gaggaacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactattt cccagagccc 480

gtgacagtgt cctggaactc tggcgccctg acctccggag tgcacacatt tcctgccgtg 540

ctgcagagct ccggcctgta cagcctgtct agcgtggtga ccgtgccatc ctctagcctg 600

ggcacccaga catatatctg caacgtgaat cacaagccta gcaatacaaa ggtggacaag 660

aaggtggagc caaagtcctg tgataagacc cacacatgcc ccccttgtcc tgcaccagag 720

ctgctgggag gaccaagcgt gttcctgttt ccacccaagc ccaaggacac cctgatgatc 780

tctcgcaccc cagaggtgac atgcgtggtg gtggccgtga gccacgagga ccccgaggtg 840

aagtttaact ggtacgtgga tggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa gccaagagag 900

gagcagtacg gctccaccta tagggtggtg tctgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 960

ctgaacggca aggagtataa gtgcaaggtg tccaataagg ccctgcccgc ccctatcgag 1020

aagaccatct ctaaggcaaa gggacagcct agggagccac aggtgtacac cctgcctcca 1080

tcccgggacg agctgacaaa gaaccaggtg tctctgtggt gtctggtgaa gggcttctat 1140

ccctctgata tcgccgtgga gtgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ttacaagacc 1200

acaccccctg tgctggacag cgatggctcc ttctttctgt atagcaagct gaccgtggat 1260

aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttt tcttgtagcg tgatgcacga ggccctgcac 1320

aatcactaca cacagaagtc cctgtctctg agccctggca ag 1362

<210> 37

<211> 660

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP LC

<400> 37

gacatcgtga tgacccagtc ccctgattct ctggccgtga gcctgggaga gagggcaaca 60

atcaactgca agagctccca gagcctgctg tactcccgca accagaagaa ttacctggcc 120

tggtatcagc agaagcccgg ccagccccct aagctgctga tcttctgggc atctaccagg 180

gagagcggag tgcctgacag attttctggc agcggcttcg gcacagactt caccctgaca 240

atctctagcc tgcaggccga ggacgtggcc gtgtactatt gccagcagta cttctcctat 300

cctctgacct ttggccaggg cacaaaggtg gagatcaaga ggaccgtggc agcaccaagc 360

gtgttcatct ttccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc tgtggtgtgc 420

ctgctgaaca atttctaccc aagggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga taacgccctg 480

cagagcggca attcccagga gtctgtgacc gagcaggaca gcaaggattc cacatattct 540

ctgtcctcta ccctgacact gtctaaggcc gattacgaga agcacaaggt gtatgcatgc 600

gaggtgaccc accagggact gagctcccca gtgacaaagt cctttaatcg gggcgagtgt 660

660

<210> 38

<211> 2265

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК hu scIL-12-hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 38

atctgggagc tgaagaagga cgtgtacgtg gtggagctgg actggtatcc tgatgcccca 60

ggcgagatgg tggtgctgac ctgcgacaca cccgaggagg atggcatcac ctggacactg 120

gatcagagct ccgaggtgct gggcagcggc aagaccctga caatccaggt gaaggagttc 180

ggcgacgccg gccagtacac ctgtcacaag ggaggagagg tgctgagcca ctccctgctg 240

ctgctgcaca agaaggagga cggcatctgg agcacagaca tcctgaagga tcagaaggag 300

ccaaagaaca agaccttcct gcggtgcgag gccaagaatt attccggccg gttcacctgt 360

tggtggctga ccacaatctc caccgatctg acattttctg tgaagtctag caggggctcc 420

tctgaccccc agggagtgac atgcggagca gccaccctga gcgccgagcg ggtgagaggc 480

gataacaagg agtacgagta ttccgtggag tgccaggagg actctgcctg tcctgcagca 540

gaggagtccc tgccaatcga agtgatggtg gatgccgtgc acaagctgaa gtacgagaat 600

tatacaagct ccttctttat cagggacatc atcaagcctg atccccctaa gaacctgcag 660

ctgaagccac tgaagaatag ccgccaggtg gaggtgtcct gggagtaccc agacacctgg 720

tccacacccc actcttattt cagcctgacc ttttgcgtgc aggtgcaggg caagtccaag 780

agggagaaga aggaccgcgt gttcaccgat aagacatctg ccaccgtgat ctgtcggaag 840

aacgcctcta tcagcgtgcg ggcccaggat agatactatt ctagctcctg gagcgagtgg 900

gcctccgtgc cttgttctgg aggaggaggc agcggcggag gaggctccgg aggaggaggc 960

tctagaaatc tgccagtggc aacccctgac ccaggaatgt tcccttgcct gcaccactct 1020

cagaacctgc tgcgggccgt gagcaatatg ctgcagaagg ccagacagac actggagttt 1080

tacccctgta ccagcgagga gatcgaccac gaggatatca caaaggataa gacctccaca 1140

gtggaggcct gcctgcctct ggagctgacc aagaacgaga gctgtctgaa cagccgggag 1200

acatctttca tcaccaacgg cagctgcctg gcctccagaa agacatcttt tatgatggcc 1260

ctgtgcctgt ctagcatcta cgaggacctg aagatgtatc aggtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctgatgga cccaaagcgg cagatctttc tggatcagaa tatgctggcc 1380

gtgatcgacg agctgatgca ggccctgaac ttcaatagcg agacagtgcc ccagaagtcc 1440

tctctggagg agcctgactt ctacaagacc aagatcaagc tgtgcatcct gctgcacgcc 1500

ttccggatca gagccgtgac catcgataga gtgatgagct atctgaacgc aagcggcggc 1560

ggaggctctg gaggaggcgg cagcgacaag acccacacat gcccaccatg tccagcacct 1620

gagctgctgg gaggaccatc cgtgttcctg tttcctccaa agcccaagga tacactgatg 1680

atcagccgca cacctgaggt gacctgcgtg gtggtggccg tgtcccacga ggaccccgag 1740

gtgaagttta actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 1800

gaggagcagt acggctctac atatcgcgtg gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac 1860

tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtgtctaata aggccctgcc agcccccatc 1920

gagaagacca tcagcaaggc aaagggacag ccaagggagc ctcaggtgta tacactgccc 1980

cctagccgcg atgagctgac caagaaccag gtgtccctgt cttgtgccgt gaagggcttc 2040

tacccatccg acatcgccgt ggagtgggag tctaatggcc agcccgagaa caattataag 2100

accacaccac ccgtgctgga ctccgatggc tctttctttc tggtgagcaa gctgacagtg 2160

gacaagtcca gatggcagca gggcaacgtg tttagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 2220

cacaatcact acacccagaa gtctctgagc ctgtcccctg gcaag 2265

<210> 39

<211> 2265

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК hu scIL-12 mut1-hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 39

atctgggagc tgaagaagga cgtgtacgtg gtggagctgg actggtatcc tgatgcccca 60

ggcgagatgg tggtgctgac ctgcgacaca cccgaggagg atggcatcac ctggacactg 120

gatcagagct ccgaggtgct gggcagcggc aagaccctga caatccaggt gaaggagttc 180

ggcgacgccg gccagtacac ctgtcacaag ggaggagagg tgctgagcca ctccctgctg 240

ctgctgcaca agaaggagga cggcatctgg agcacagaca tcctgaagga tcagaaggag 300

ccaaagaaca agaccttcct gcggtgcgag gccaagaatt attccggccg gttcacctgt 360

tggtggctga ccacaatctc caccgatctg acattttctg tgaagtctag caggggctcc 420

tctgaccccc agggagtgac atgcggagca gccaccctga gcgccgagcg ggtgagaggc 480

gataacaagg agtacgagta ttccgtggag tgccaggagg actctgcctg tcctgcagca 540

gaggagtccc tgccaatcga agtgatggtg gatgccgtgc acaagctgaa gtacgagaat 600

tatacaagct ccttctttat cagggacatc atcaagcctg atccccctaa gaacctgcag 660

ctgaagccac tgaagaatag ccgccaggtg gaggtgtcct gggagtaccc agacacctgg 720

tccacacccc actcttattt cagcctgacc ttttgcgtgc aggtgcaggg agcatccaag 780

agggaggcaa aggaccgcgt gttcaccgat aagacatctg ccaccgtgat ctgtcggaag 840

aacgcctcta tcagcgtgcg ggcccaggat agatactatt ctagctcctg gagcgagtgg 900

gcctccgtgc cttgttctgg aggaggaggc agcggcggag gaggctccgg aggaggaggc 960

tctagaaatc tgccagtggc aacccctgac ccaggaatgt tcccttgcct gcaccactct 1020

cagaacctgc tgcgggccgt gagcaatatg ctgcagaagg ccagacagac actggagttt 1080

tacccctgta ccagcgagga gatcgaccac gaggatatca caaaggataa gacctccaca 1140

gtggaggcct gcctgcctct ggagctgacc aagaacgaga gctgtctgaa cagccgggag 1200

acatctttca tcaccaacgg cagctgcctg gcctccagaa agacatcttt tatgatggcc 1260

ctgtgcctgt ctagcatcta cgaggacctg aagatgtatc aggtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctgatgga cccaaagcgg cagatctttc tggatcagaa tatgctggcc 1380

gtgatcgacg agctgatgca ggccctgaac ttcaatagcg agacagtgcc ccagaagtcc 1440

tctctggagg agcctgactt ctacaagacc aagatcaagc tgtgcatcct gctgcacgcc 1500

ttccggatca gagccgtgac catcgataga gtgatgagct atctgaacgc aagcggcggc 1560

ggaggctctg gaggaggcgg cagcgacaag acccacacat gcccaccatg tccagcacct 1620

gagctgctgg gaggaccatc cgtgttcctg tttcctccaa agcccaagga tacactgatg 1680

atcagccgca cacctgaggt gacctgcgtg gtggtggccg tgtcccacga ggaccccgag 1740

gtgaagttta actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 1800

gaggagcagt acggctctac atatcgcgtg gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac 1860

tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtgtctaata aggccctgcc agcccccatc 1920

gagaagacca tcagcaaggc aaagggacag ccaagggagc ctcaggtgta tacactgccc 1980

cctagccgcg atgagctgac caagaaccag gtgtccctgt cttgtgccgt gaagggcttc 2040

tacccatccg acatcgccgt ggagtgggag tctaatggcc agcccgagaa caattataag 2100

accacaccac ccgtgctgga ctccgatggc tctttctttc tggtgagcaa gctgacagtg 2160

gacaagtcca gatggcagca gggcaacgtg tttagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 2220

cacaatcact acacccagaa gtctctgagc ctgtcccctg gcaag 2265

<210> 40

<211> 2265

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 40

atctgggagc tgaagaagga cgtgtacgtg gtggagctgg actggtatcc tgatgcccca 60

ggcgagatgg tggtgctgac ctgcgacaca cccgaggagg atggcatcac ctggacactg 120

gatcagagct ccgaggtgct gggcagcggc aagaccctga caatccaggt gaaggagttc 180

ggcgacgccg gccagtacac ctgtcacaag ggaggagagg tgctgagcca ctccctgctg 240

ctgctgcaca agaaggagga cggcatctgg agcacagaca tcctgaagga tcagaaggag 300

ccaaagaaca agaccttcct gcggtgcgag gccaagaatt attccggccg gttcacctgt 360

tggtggctga ccacaatctc caccgatctg acattttctg tgaagtctag caggggctcc 420

tctgaccccc agggagtgac atgcggagca gccaccctga gcgccgagcg ggtgagaggc 480

gataacaagg agtacgagta ttccgtggag tgccaggagg actctgcctg tcctgcagca 540

gaggagtccc tgccaatcga agtgatggtg gatgccgtgc acaagctgaa gtacgagaat 600

tatacaagct ccttctttat cagggacatc atcaagcctg atccccctaa gaacctgcag 660

ctgaagccac tgaagaatag ccgccaggtg gaggtgtcct gggagtaccc agacacctgg 720

tccacacccc actcttattt cagcctgacc ttttgcgtgc aggtgcaggg cgcctccgct 780

agggaggccg ctgaccgcgt gttcaccgat aagacatctg ccaccgtgat ctgtcggaag 840

aacgcctcta tcagcgtgcg ggcccaggat agatactatt ctagctcctg gagcgagtgg 900

gcctccgtgc cttgttctgg aggaggaggc agcggcggag gaggctccgg aggaggaggc 960

tctagaaatc tgccagtggc aacccctgac ccaggaatgt tcccttgcct gcaccactct 1020

cagaacctgc tgcgggccgt gagcaatatg ctgcagaagg ccagacagac actggagttt 1080

tacccctgta ccagcgagga gatcgaccac gaggatatca caaaggataa gacctccaca 1140

gtggaggcct gcctgcctct ggagctgacc aagaacgaga gctgtctgaa cagccgggag 1200

acatctttca tcaccaacgg cagctgcctg gcctccagaa agacatcttt tatgatggcc 1260

ctgtgcctgt ctagcatcta cgaggacctg aagatgtatc aggtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctgatgga cccaaagcgg cagatctttc tggatcagaa tatgctggcc 1380

gtgatcgacg agctgatgca ggccctgaac ttcaatagcg agacagtgcc ccagaagtcc 1440

tctctggagg agcctgactt ctacaagacc aagatcaagc tgtgcatcct gctgcacgcc 1500

ttccggatca gagccgtgac catcgataga gtgatgagct atctgaacgc aagcggcggc 1560

ggaggctctg gaggaggcgg cagcgacaag acccacacat gcccaccatg tccagcacct 1620

gagctgctgg gaggaccatc cgtgttcctg tttcctccaa agcccaagga tacactgatg 1680

atcagccgca cacctgaggt gacctgcgtg gtggtggccg tgtcccacga ggaccccgag 1740

gtgaagttta actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 1800

gaggagcagt acggctctac atatcgcgtg gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac 1860

tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtgtctaata aggccctgcc agcccccatc 1920

gagaagacca tcagcaaggc aaagggacag ccaagggagc ctcaggtgta tacactgccc 1980

cctagccgcg atgagctgac caagaaccag gtgtccctgt cttgtgccgt gaagggcttc 2040

tacccatccg acatcgccgt ggagtgggag tctaatggcc agcccgagaa caattataag 2100

accacaccac ccgtgctgga ctccgatggc tctttctttc tggtgagcaa gctgacagtg 2160

gacaagtcca gatggcagca gggcaacgtg tttagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 2220

cacaatcact acacccagaa gtctctgagc ctgtcccctg gcaag 2265

<210> 41

<211> 1779

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК (anti-hu FAP VH)2-hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 41

caagtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaaaaagc ctggcgcttc tgtgaaggtg 60

tcttgcaaga cctccagata cacattcacc gagtacacca tccactgggt gcggcaggcc 120

cctggacagc ggctggaatg gatcggaggc atcaacccca acaacggcat tccaaattac 180

aaccagaagt tcaagggcag agtgacaatc accgttgaca ccagcgccag caccgcttat 240

atggaactga gcagcctgag aagcgaggat acagccgtgt actactgtgc cagaagacgg 300

atcgcctacg gctacgacga gggccacgcc atggactact ggggccaggg cacactggtc 360

accgtgtcct ctggcggcgg cggcagcggc ggcggcggca gcggaggagg aggtagccag 420

gtccagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aagaagccag gagcctctgt gaaggtgagc 480

tgcaagacct ccagatacac cttcacagag tatacaatcc actgggtgcg ccaggcacct 540

ggacagcggc tggagtggat cggaggcatc aaccccaaca atggcatccc taactacaat 600

cagaagttta agggcagagt gaccatcaca gtggacacct ccgcctctac agcctatatg 660

gagctgagct ccctgaggag cgaggatacc gccgtgtact attgcgcccg gagaaggatc 720

gcctacggct atgacgaggg ccacgccatg gattactggg gccagggcac cctggtgaca 780

gtgtctagcg cctctaccaa gggaccaagc gtgttcccac tggcaccatc ctctaagagc 840

acctccggag gaacagccgc cctgggctgt ctggtgaagg actatttccc agagcccgtg 900

acagtgtcct ggaactctgg cgccctgacc tccggagtgc acacatttcc tgccgtgctg 960

cagagctccg gcctgtacag cctgtctagc gtggtgaccg tgccatcctc tagcctgggc 1020

acccagacat atatctgcaa cgtgaatcac aagcctagca atacaaaggt ggacaagaag 1080

gtggagccaa agtcctgtga taagacccac acatgccccc cttgtcctgc accagagctg 1140

ctgggaggac caagcgtgtt cctgtttcca cccaagccca aggacaccct gatgatctct 1200

cgcaccccag aggtgacatg cgtggtggtg gccgtgagcc acgaggaccc cgaggtgaag 1260

tttaactggt acgtggatgg cgtggaggtg cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag 1320

cagtacggct ccacctatag ggtggtgtct gtgctgacag tgctgcacca ggattggctg 1380

aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc aataaggccc tgcccgcccc tatcgagaag 1440

accatctcta aggcaaaggg acagcctagg gagccacagg tgtacaccct gcctccatcc 1500

cgggacgagc tgacaaagaa ccaggtgtct ctgtggtgtc tggtgaaggg cttctatccc 1560

tctgatatcg ccgtggagtg ggagagcaat ggccagcctg agaacaatta caagaccaca 1620

ccccctgtgc tggacagcga tggctccttc tttctgtata gcaagctgac cgtggataag 1680

tcccggtggc agcagggcaa cgtgttttct tgtagcgtga tgcacgaggc cctgcacaat 1740

cactacacac agaagtccct gtctctgagc cctggcaag 1779

<210> 42

<211> 1044

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК (anti-hu FAP VL)2

<400> 42

gatatcgtga tgacccagag ccccgacagc ctggccgtgt ccctgggcga acgggccaca 60

atcaactgca agtccagcca gtctctgctg tacagcagaa accagaagaa ttacctggct 120

tggtatcagc agaaacctgg ccaacctcca aagctgctga tcttctgggc cagcaccaga 180

gagagcggcg tgcctgatag attcagcggc agcggatttg gcaccgactt caccctgacc 240

atcagcagcc tccaggccga ggacgtggcc gtctactact gtcagcaata cttcagctac 300

cccctgacat tcggccaggg cacaaaggtg gaaatcaagg gcggcggagg ctctggcggc 360

ggcggatctg gaggtggcgg ctccgacatc gtgatgacac agtctcctga ttctctggcc 420

gtgagcctgg gagagagggc aacaatcaac tgcaagagct cccagagcct gctgtactcc 480

cgcaaccaga agaattacct ggcctggtat cagcagaagc ccggccagcc ccctaagctg 540

ctgatcttct gggcatctac cagggagagc ggagtgcctg acagattttc tggcagcggc 600

ttcggcacag acttcaccct gacaatctct agcctgcagg ccgaggacgt ggccgtgtac 660

tattgccagc agtacttctc ctatcctctg acctttggcc agggcacaaa ggtggagatc 720

aagaggaccg tggcagcacc aagcgtgttc atctttccac cctccgacga gcagctgaag 780

tccggcaccg cctctgtggt gtgcctgctg aacaatttct acccaaggga ggccaaggtg 840

cagtggaagg tggataacgc cctgcagagc ggcaattccc aggagtctgt gaccgagcag 900

gacagcaagg attccacata ttctctgtcc tctaccctga cactgtctaa ggccgattac 960

gagaagcaca aggtgtatgc atgcgaggtg acccaccagg gactgagctc cccagtgaca 1020

aagtccttta atcggggcga gtgt 1044

<210> 43

<211> 2178

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc knob

DANG-anti-hu FAP scFv

<400> 43

caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaagc caggagcctc tgtgaaggtg 60

agctgcaaga cctccagata caccttcaca gagtatacaa tccactgggt gcgccaggca 120

cctggacagc ggctggagtg gatcggaggc atcaacccca acaatggcat ccctaactac 180

aatcagaagt ttaagggcag agtgaccatc acagtggaca cctccgcctc tacagcctat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggat accgccgtgt actattgcgc ccggagaagg 300

atcgcctacg gctatgacga gggccacgcc atggattact ggggccaggg caccctggtg 360

acagtgtcta gcgcctctac caagggacca agcgtgttcc cactggcacc atcctctaag 420

agcacctccg gaggaacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactattt cccagagccc 480

gtgacagtgt cctggaactc tggcgccctg acctccggag tgcacacatt tcctgccgtg 540

ctgcagagct ccggcctgta cagcctgtct agcgtggtga ccgtgccatc ctctagcctg 600

ggcacccaga catatatctg caacgtgaat cacaagccta gcaatacaaa ggtggacaag 660

aaggtggagc caaagtcctg tgataagacc cacacatgcc ccccttgtcc tgcaccagag 720

ctgctgggag gaccaagcgt gttcctgttt ccacccaagc ccaaggacac cctgatgatc 780

tctcgcaccc cagaggtgac atgcgtggtg gtggccgtga gccacgagga ccccgaggtg 840

aagtttaact ggtacgtgga tggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa gccaagagag 900

gagcagtacg gctccaccta tagggtggtg tctgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 960

ctgaacggca aggagtataa gtgcaaggtg tccaataagg ccctgcccgc ccctatcgag 1020

aagaccatct ctaaggcaaa gggacagcct agggagccac aggtgtacac cctgcctcca 1080

tcccgggacg agctgacaaa gaaccaggtg tctctgtggt gtctggtgaa gggcttctat 1140

ccctctgata tcgccgtgga gtgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ttacaagacc 1200

acaccccctg tgctggacag cgatggctcc ttctttctgt atagcaagct gaccgtggat 1260

aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttt tcttgtagcg tgatgcacga ggccctgcac 1320

aatcactaca cacagaagtc cctgtctctg agccctggca agggcggcgg cggcagcggc 1380

ggcggcggca gcggaggagg aggtagccaa gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggtg 1440

aaaaagcctg gcgcttctgt gaaggtgtct tgcaagacct ccagatacac attcaccgag 1500

tacaccatcc actgggtgcg gcaggcccct ggacagcggc tggaatggat cggaggcatc 1560

aaccccaaca acggcattcc aaattacaac cagaagttca agggcagagt gacaatcacc 1620

gttgacacca gcgccagcac cgcttatatg gaactgagca gcctgagaag cgaggataca 1680

gccgtgtact actgtgccag aagacggatc gcctacggct acgacgaggg ccacgccatg 1740

gactactggg gccagggcac actggtcacc gtgtcctctg gtggaggtgg ctcaggagga 1800

ggcggttctg gcggaggagg tagtggaggt ggcggctccg atatcgtgat gacccagagc 1860

cccgacagcc tggccgtgtc cctgggcgaa cgggccacaa tcaactgcaa gtccagccag 1920

tctctgctgt acagcagaaa ccagaagaat tacctggctt ggtatcagca gaaacctggc 1980

caacctccaa agctgctgat cttctgggcc agcaccagag agagcggcgt gcctgataga 2040

ttcagcggca gcggatttgg caccgacttc accctgacca tcagcagcct ccaggccgag 2100

gacgtggccg tctactactg tcagcaatac ttcagctacc ccctgacatt cggccagggc 2160

acaaaggtgg aaatcaag 2178

<210> 44

<211> 1476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP LC-anti-hu FAP scFv

<400> 44

gacatcgtga tgacccagtc ccctgattct ctggccgtga gcctgggaga gagggcaaca 60

atcaactgca agagctccca gagcctgctg tactcccgca accagaagaa ttacctggcc 120

tggtatcagc agaagcccgg ccagccccct aagctgctga tcttctgggc atctaccagg 180

gagagcggag tgcctgacag attttctggc agcggcttcg gcacagactt caccctgaca 240

atctctagcc tgcaggccga ggacgtggcc gtgtactatt gccagcagta cttctcctat 300

cctctgacct ttggccaggg cacaaaggtg gagatcaaga ggaccgtggc agcaccaagc 360

gtgttcatct ttccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc tgtggtgtgc 420

ctgctgaaca atttctaccc aagggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga taacgccctg 480

cagagcggca attcccagga gtctgtgacc gagcaggaca gcaaggattc cacatattct 540

ctgtcctcta ccctgacact gtctaaggcc gattacgaga agcacaaggt gtatgcatgc 600

gaggtgaccc accagggact gagctcccca gtgacaaagt cctttaatcg gggcgagtgt 660

ggcggcggcg gcagcggcgg cggcggcagc ggaggaggag gtagccaagt gcagctggtg 720

cagagcggcg ccgaggtgaa aaagcctggc gcttctgtga aggtgtcttg caagacctcc 780

agatacacat tcaccgagta caccatccac tgggtgcggc aggcccctgg acagcggctg 840

gaatggatcg gaggcatcaa ccccaacaac ggcattccaa attacaacca gaagttcaag 900

ggcagagtga caatcaccgt tgacaccagc gccagcaccg cttatatgga actgagcagc 960

ctgagaagcg aggatacagc cgtgtactac tgtgccagaa gacggatcgc ctacggctac 1020

gacgagggcc acgccatgga ctactggggc cagggcacac tggtcaccgt gtcctctggt 1080

ggaggtggct caggaggagg cggttctggc ggaggaggta gtggaggtgg cggctccgat 1140

atcgtgatga cccagagccc cgacagcctg gccgtgtccc tgggcgaacg ggccacaatc 1200

aactgcaagt ccagccagtc tctgctgtac agcagaaacc agaagaatta cctggcttgg 1260

tatcagcaga aacctggcca acctccaaag ctgctgatct tctgggccag caccagagag 1320

agcggcgtgc ctgatagatt cagcggcagc ggatttggca ccgacttcac cctgaccatc 1380

agcagcctcc aggccgagga cgtggccgtc tactactgtc agcaatactt cagctacccc 1440

ctgacattcg gccagggcac aaaggtggaa atcaag 1476

<210> 45

<211> 2958

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc hole

DANG-hu scIL-12

<400> 45

caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaagc caggagcctc tgtgaaggtg 60

agctgcaaga cctccagata caccttcaca gagtatacaa tccactgggt gcgccaggca 120

cctggacagc ggctggagtg gatcggaggc atcaacccca acaatggcat ccctaactac 180

aatcagaagt ttaagggcag agtgaccatc acagtggaca cctccgcctc tacagcctat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggat accgccgtgt actattgcgc ccggagaagg 300

atcgcctacg gctatgacga gggccacgcc atggattact ggggccaggg caccctggtg 360

acagtgtcta gcgcctctac caagggacca agcgtgttcc cactggcacc atcctctaag 420

agcacctccg gaggaacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactattt cccagagccc 480

gtgacagtgt cctggaactc tggcgccctg acctccggag tgcacacatt tcctgccgtg 540

ctgcagagct ccggcctgta cagcctgtct agcgtggtga ccgtgccatc ctctagcctg 600

ggcacccaga catatatctg caacgtgaat cacaagccta gcaatacaaa ggtggacaag 660

aaggtggagc caaagtcctg tgacaagacc cacacatgcc caccatgtcc agcacctgag 720

ctgctgggag gaccatccgt gttcctgttt cctccaaagc ccaaggatac actgatgatc 780

agccgcacac ctgaggtgac ctgcgtggtg gtggccgtgt cccacgagga ccccgaggtg 840

aagtttaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa gcccagggag 900

gagcagtacg gctctacata tcgcgtggtg agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 960

ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg tctaataagg ccctgccagc ccccatcgag 1020

aagaccatca gcaaggcaaa gggacagcca agggagcctc aggtgtatac actgccccct 1080

agccgcgatg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgtctt gtgccgtgaa gggcttctac 1140

ccatccgaca tcgccgtgga gtgggagtct aatggccagc ccgagaacaa ttataagacc 1200

acaccacccg tgctggactc cgatggctct ttctttctgg tgagcaagct gacagtggac 1260

aagtccagat ggcagcaggg caacgtgttt agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac 1320

aatcactaca cccagaagtc tctgagcctg tcccctggcg gtggaggtgg ctcaggagga 1380

ggcggttctg gcggaggagg tagtatctgg gagctgaaga aggacgtgta cgtggtggag 1440

ctggactggt atcctgatgc cccaggcgag atggtggtgc tgacctgcga cacacccgag 1500

gaggatggca tcacctggac actggatcag agctccgagg tgctgggcag cggcaagacc 1560

ctgacaatcc aggtgaagga gttcggcgac gccggccagt acacctgtca caagggagga 1620

gaggtgctga gccactccct gctgctgctg cacaagaagg aggacggcat ctggagcaca 1680

gacatcctga aggatcagaa ggagccaaag aacaagacct tcctgcggtg cgaggccaag 1740

aattattccg gccggttcac ctgttggtgg ctgaccacaa tctccaccga tctgacattt 1800

tctgtgaagt ctagcagggg ctcctctgac ccccagggag tgacatgcgg agcagccacc 1860

ctgagcgccg agcgggtgag aggcgataac aaggagtacg agtattccgt ggagtgccag 1920

gaggactctg cctgtcctgc agcagaggag tccctgccaa tcgaagtgat ggtggatgcc 1980

gtgcacaagc tgaagtacga gaattataca agctccttct ttatcaggga catcatcaag 2040

cctgatcccc ctaagaacct gcagctgaag ccactgaaga atagccgcca ggtggaggtg 2100

tcctgggagt acccagacac ctggtccaca ccccactctt atttcagcct gaccttttgc 2160

gtgcaggtgc agggcaagtc caagagggag aagaaggacc gcgtgttcac cgataagaca 2220

tctgccaccg tgatctgtcg gaagaacgcc tctatcagcg tgcgggccca ggatagatac 2280

tattctagct cctggagcga gtgggcctcc gtgccttgtt ctggaggagg aggcagcggc 2340

ggaggaggct ccggaggagg aggctctaga aatctgccag tggcaacccc tgacccagga 2400

atgttccctt gcctgcacca ctctcagaac ctgctgcggg ccgtgagcaa tatgctgcag 2460

aaggccagac agacactgga gttttacccc tgtaccagcg aggagatcga ccacgaggat 2520

atcacaaagg ataagacctc cacagtggag gcctgcctgc ctctggagct gaccaagaac 2580

gagagctgtc tgaacagccg ggagacatct ttcatcacca acggcagctg cctggcctcc 2640

agaaagacat cttttatgat ggccctgtgc ctgtctagca tctacgagga cctgaagatg 2700

tatcaggtgg agttcaagac catgaacgcc aagctgctga tggacccaaa gcggcagatc 2760

tttctggatc agaatatgct ggccgtgatc gacgagctga tgcaggccct gaacttcaat 2820

agcgagacag tgccccagaa gtcctctctg gaggagcctg acttctacaa gaccaagatc 2880

aagctgtgca tcctgctgca cgccttccgg atcagagccg tgaccatcga tagagtgatg 2940

agctatctga acgcaagc 2958

<210> 46

<211> 2958

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc hole DANG-hu

scIL-12 mut2

<400> 46

caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaagc caggagcctc tgtgaaggtg 60

agctgcaaga cctccagata caccttcaca gagtatacaa tccactgggt gcgccaggca 120

cctggacagc ggctggagtg gatcggaggc atcaacccca acaatggcat ccctaactac 180

aatcagaagt ttaagggcag agtgaccatc acagtggaca cctccgcctc tacagcctat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggat accgccgtgt actattgcgc ccggagaagg 300

atcgcctacg gctatgacga gggccacgcc atggattact ggggccaggg caccctggtg 360

acagtgtcta gcgcctctac caagggacca agcgtgttcc cactggcacc atcctctaag 420

agcacctccg gaggaacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactattt cccagagccc 480

gtgacagtgt cctggaactc tggcgccctg acctccggag tgcacacatt tcctgccgtg 540

ctgcagagct ccggcctgta cagcctgtct agcgtggtga ccgtgccatc ctctagcctg 600

ggcacccaga catatatctg caacgtgaat cacaagccta gcaatacaaa ggtggacaag 660

aaggtggagc caaagtcctg tgacaagacc cacacatgcc caccatgtcc agcacctgag 720

ctgctgggag gaccatccgt gttcctgttt cctccaaagc ccaaggatac actgatgatc 780

agccgcacac ctgaggtgac ctgcgtggtg gtggccgtgt cccacgagga ccccgaggtg 840

aagtttaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa gcccagggag 900

gagcagtacg gctctacata tcgcgtggtg agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 960

ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg tctaataagg ccctgccagc ccccatcgag 1020

aagaccatca gcaaggcaaa gggacagcca agggagcctc aggtgtatac actgccccct 1080

agccgcgatg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgtctt gtgccgtgaa gggcttctac 1140

ccatccgaca tcgccgtgga gtgggagtct aatggccagc ccgagaacaa ttataagacc 1200

acaccacccg tgctggactc cgatggctct ttctttctgg tgagcaagct gacagtggac 1260

aagtccagat ggcagcaggg caacgtgttt agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac 1320

aatcactaca cccagaagtc tctgagcctg tcccctggcg gtggaggtgg ctcaggagga 1380

ggcggttctg gcggaggagg tagtatctgg gagctgaaga aggacgtgta cgtggtggag 1440

ctggactggt atcctgatgc cccaggcgag atggtggtgc tgacctgcga cacacccgag 1500

gaggatggca tcacctggac actggatcag agctccgagg tgctgggcag cggcaagacc 1560

ctgacaatcc aggtgaagga gttcggcgac gccggccagt acacctgtca caagggagga 1620

gaggtgctga gccactccct gctgctgctg cacaagaagg aggacggcat ctggagcaca 1680

gacatcctga aggatcagaa ggagccaaag aacaagacct tcctgcggtg cgaggccaag 1740

aattattccg gccggttcac ctgttggtgg ctgaccacaa tctccaccga tctgacattt 1800

tctgtgaagt ctagcagggg ctcctctgac ccccagggag tgacatgcgg agcagccacc 1860

ctgagcgccg agcgggtgag aggcgataac aaggagtacg agtattccgt ggagtgccag 1920

gaggactctg cctgtcctgc agcagaggag tccctgccaa tcgaagtgat ggtggatgcc 1980

gtgcacaagc tgaagtacga gaattataca agctccttct ttatcaggga catcatcaag 2040

cctgatcccc ctaagaacct gcagctgaag ccactgaaga atagccgcca ggtggaggtg 2100

tcctgggagt acccagacac ctggtccaca ccccactctt atttcagcct gaccttttgc 2160

gtgcaggtgc agggcgcctc cgctagggag gccgctgacc gcgtgttcac cgataagaca 2220

tctgccaccg tgatctgtcg gaagaacgcc tctatcagcg tgcgggccca ggatagatac 2280

tattctagct cctggagcga gtgggcctcc gtgccttgtt ctggaggagg aggcagcggc 2340

ggaggaggct ccggaggagg aggctctaga aatctgccag tggcaacccc tgacccagga 2400

atgttccctt gcctgcacca ctctcagaac ctgctgcggg ccgtgagcaa tatgctgcag 2460

aaggccagac agacactgga gttttacccc tgtaccagcg aggagatcga ccacgaggat 2520

atcacaaagg ataagacctc cacagtggag gcctgcctgc ctctggagct gaccaagaac 2580

gagagctgtc tgaacagccg ggagacatct ttcatcacca acggcagctg cctggcctcc 2640

agaaagacat cttttatgat ggccctgtgc ctgtctagca tctacgagga cctgaagatg 2700

tatcaggtgg agttcaagac catgaacgcc aagctgctga tggacccaaa gcggcagatc 2760

tttctggatc agaatatgct ggccgtgatc gacgagctga tgcaggccct gaacttcaat 2820

agcgagacag tgccccagaa gtcctctctg gaggagcctg acttctacaa gaccaagatc 2880

aagctgtgca tcctgctgca cgccttccgg atcagagccg tgaccatcga tagagtgatg 2940

agctatctga acgcaagc 2958

<210> 47

<211> 681

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК hu IgG1 Fc hole DANG

<400> 47

gacaagaccc acacatgccc accttgtcca gcaccagagc tgctgggagg accatccgtg 60

ttcctgtttc cacccaagcc caaggatacc ctgatgatca gcaggacccc agaggtgaca 120

tgcgtggtgg tggccgtgtc ccacgaggac cctgaggtga agttcaactg gtacgtggat 180

ggcgtggagg tgcacaatgc caagacaaag ccacgggagg agcagtacgg cagcacctat 240

agagtggtgt ccgtgctgac agtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 300

tgcaaggtgt ctaataaggc cctgcctgcc ccaatcgaga agaccatcag caaggcaaag 360

ggacagccaa gggagcctca ggtgtatacc ctgcctccaa gccgcgacga gctgacaaag 420

aaccaggtga gcctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cttccgatat cgccgtggag 480

tgggagtcta atggccagcc agagaacaat tataagacca caccccctgt gctggactcc 540

gatggctctt tctttctggt gtctaagctg accgtggata agagcaggtg gcagcagggc 600

aacgtgtttt cttgtagcgt gatgcacgag gccctgcaca atcactatac acagaagtcc 660

ctgtctctga gccctggcaa g 681

<210> 48

<211> 681

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 48

gacaagaccc acacatgccc accttgtcca gcaccagagc tgctgggagg accatccgtg 60

ttcctgtttc cacccaagcc caaggatacc ctgatgatca gcaggacccc agaggtgaca 120

tgcgtggtgg tggccgtgtc ccacgaggac cctgaggtga agttcaactg gtacgtggat 180

ggcgtggagg tgcacaatgc caagacaaag ccacgggagg agcagtacgg ctccacctat 240

agagtggtgt ctgtgctgac agtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtataag 300

tgcaaggtgt ctaataaggc cctgcctgcc ccaatcgaga agaccatcag caaggcaaag 360

ggacagccaa gggagcctca ggtgtacacc ctgcctccat cccgcgacga gctgacaaag 420

aaccaggtgt ctctgtggtg tctggtgaag ggcttctatc cttctgatat cgccgtggag 480

tgggagagca atggccagcc agagaacaat tacaagacca caccccctgt gctggactct 540

gatggcagct tctttctgta tagcaagctg accgtggata agtccaggtg gcagcagggc 600

aacgtgttta gctgttccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac acagaagtct 660

ctgagcctgt cccctggcaa g 681

<210> 49

<211> 1365

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu FAP HC hu IgG1 Fc DANG

<400> 49

caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaagc caggagcctc tgtgaaggtg 60

agctgcaaga cctccagata caccttcaca gagtatacaa tccactgggt gcgccaggca 120

cctggacagc ggctggagtg gatcggaggc atcaacccca acaatggcat ccctaactac 180

aatcagaagt ttaagggcag agtgaccatc acagtggaca cctccgcctc tacagcctat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggat accgccgtgt actattgcgc ccggagaagg 300

atcgcctacg gctatgacga gggccacgcc atggattact ggggccaggg caccctggtg 360

acagtgtcta gcgcctctac caagggacca agcgtgttcc cactggcacc atcctctaag 420

agcacctccg gaggaacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactattt cccagagccc 480

gtgacagtgt cctggaactc tggcgccctg acctccggag tgcacacatt tcctgccgtg 540

ctgcagagct ccggcctgta cagcctgtct agcgtggtga ccgtgccatc ctctagcctg 600

ggcacccaga catatatctg caacgtgaat cacaagccta gcaatacaaa ggtggacaag 660

aaggtggagc caaagtcctg tgataagacc cacacatgcc ccccttgtcc tgcaccagag 720

ctgctgggag gaccaagcgt gttcctgttt ccacccaagc ccaaggacac cctgatgatc 780

tctcgcaccc cagaggtgac atgcgtggtg gtggccgtga gccacgagga ccccgaggtg 840

aagtttaact ggtacgtgga tggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa gccaagagag 900

gagcagtacg gctccaccta tagggtggtg tctgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 960

ctgaacggca aggagtataa gtgcaaggtg tccaataagg ccctgcccgc ccctatcgag 1020

aagaccatct ctaaggcaaa gggacagcct agggagccac aggtgtacac cctgcctcca 1080

tcccgggacg agctgacaaa gaaccaggtg tctctgacgt gtctggtgaa gggcttctat 1140

ccctctgata tcgccgtgga gtgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ttacaagacc 1200

acaccccctg tgctggacag cgatggctcc ttctttctgt atagcaagct gaccgtggat 1260

aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttt tcttgtagcg tgatgcacga ggccctgcac 1320

aatcactaca cacagaagtc cctgtctctg agccctggca agtga 1365

<210> 50

<211> 2268

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК hu scIL-12 mut2-hu IgG1 Fc DANG

<400> 50

atctgggagc tgaagaagga cgtgtacgtg gtggagctgg actggtatcc tgatgcccca 60

ggcgagatgg tggtgctgac ctgcgacaca cccgaggagg atggcatcac ctggacactg 120

gatcagagct ccgaggtgct gggcagcggc aagaccctga caatccaggt gaaggagttc 180

ggcgacgccg gccagtacac ctgtcacaag ggaggagagg tgctgagcca ctccctgctg 240

ctgctgcaca agaaggagga cggcatctgg agcacagaca tcctgaagga tcagaaggag 300

ccaaagaaca agaccttcct gcggtgcgag gccaagaatt attccggccg gttcacctgt 360

tggtggctga ccacaatctc caccgatctg acattttctg tgaagtctag caggggctcc 420

tctgaccccc agggagtgac atgcggagca gccaccctga gcgccgagcg ggtgagaggc 480

gataacaagg agtacgagta ttccgtggag tgccaggagg actctgcctg tcctgcagca 540

gaggagtccc tgccaatcga agtgatggtg gatgccgtgc acaagctgaa gtacgagaat 600

tatacaagct ccttctttat cagggacatc atcaagcctg atccccctaa gaacctgcag 660

ctgaagccac tgaagaatag ccgccaggtg gaggtgtcct gggagtaccc agacacctgg 720

tccacacccc actcttattt cagcctgacc ttttgcgtgc aggtgcaggg cgcctccgct 780

agggaggccg ctgaccgcgt gttcaccgat aagacatctg ccaccgtgat ctgtcggaag 840

aacgcctcta tcagcgtgcg ggcccaggat agatactatt ctagctcctg gagcgagtgg 900

gcctccgtgc cttgttctgg aggaggaggc agcggcggag gaggctccgg aggaggaggc 960

tctagaaatc tgccagtggc aacccctgac ccaggaatgt tcccttgcct gcaccactct 1020

cagaacctgc tgcgggccgt gagcaatatg ctgcagaagg ccagacagac actggagttt 1080

tacccctgta ccagcgagga gatcgaccac gaggatatca caaaggataa gacctccaca 1140

gtggaggcct gcctgcctct ggagctgacc aagaacgaga gctgtctgaa cagccgggag 1200

acatctttca tcaccaacgg cagctgcctg gcctccagaa agacatcttt tatgatggcc 1260

ctgtgcctgt ctagcatcta cgaggacctg aagatgtatc aggtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctgatgga cccaaagcgg cagatctttc tggatcagaa tatgctggcc 1380

gtgatcgacg agctgatgca ggccctgaac ttcaatagcg agacagtgcc ccagaagtcc 1440

tctctggagg agcctgactt ctacaagacc aagatcaagc tgtgcatcct gctgcacgcc 1500

ttccggatca gagccgtgac catcgataga gtgatgagct atctgaacgc aagcggcggc 1560

ggaggctctg gaggaggcgg cagcgacaag acccacacat gcccaccatg tccagcacct 1620

gagctgctgg gaggaccatc cgtgttcctg tttcctccaa agcccaagga tacactgatg 1680

atcagccgca cacctgaggt gacctgcgtg gtggtggccg tgtcccacga ggaccccgag 1740

gtgaagttta actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 1800

gaggagcagt acggctctac atatcgcgtg gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac 1860

tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtgtctaata aggccctgcc agcccccatc 1920

gagaagacca tcagcaaggc aaagggacag ccaagggagc ctcaggtgta tacactgccc 1980

cctagccgcg atgagctgac caagaaccag gtgtccctga cttgtctcgt gaagggcttc 2040

tacccatccg acatcgccgt ggagtgggag tctaatggcc agcccgagaa caattataag 2100

accacaccac ccgtgctgga ctccgatggc tctttctttc tgtacagcaa gctgacagtg 2160

gacaagtcca gatggcagca gggcaacgtg tttagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 2220

cacaatcact acacccagaa gtctctgagc ctgtcccctg gcaagtga 2268

<210> 51

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu CD20 HC hu IgG1 Fc knob DANG

<400> 51

caggtgcagc tgcagcagcc aggagcagag ctggtgaagc ctggagcctc tgtgaagatg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca agctataaca tgcactgggt gaagcagacc 120

ccaggaaggg gactggagtg gatcggagcc atctaccctg gcaacggcga cacatcctat 180

aatcagaagt ttaagggcaa ggccaccctg acagccgata agagctcctc taccgcctac 240

atgcagctga gctccctgac aagcgaggac tccgccgtgt actattgcgc cagaagcacc 300

tactatggcg gcgattggta cttcaacgtg tggggagcag gaaccacagt gaccgtgtct 360

gccgccagca caaagggacc atccgtgttt ccactggcac catctagcaa gtctaccagc 420

ggaggaacag ccgccctggg atgtctggtg aaggactact tcccagagcc cgtgaccgtg 480

tcctggaact ctggcgccct gacctccgga gtgcacacat ttcccgccgt gctgcagtcc 540

tctggcctgt actctctgag ctccgtggtg accgtgcctt ctagctccct gggcacccag 600

acatatatct gcaacgtgaa tcacaagcct tccaatacaa aggtggacaa gaaggtggag 660

ccaaagtctt gtgataagac ccacacatgc cccccttgtc ctgcaccaga gctgctggga 720

ggaccaagcg tgttcctgtt tccacccaag cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780

cctgaggtga catgcgtggt ggtggccgtg tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac 840

tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcacaat gccaagacaa agccacggga ggagcagtac 900

ggctctacct atagagtggt gagcgtgctg acagtgctgc accaggattg gctgaacggc 960

aaggagtata agtgcaaggt gtctaataag gccctgcccg cccctatcga gaagaccatc 1020

agcaaggcca agggccagcc tagggagcca caggtgtaca ccctgcctcc atctcgcgac 1080

gagctgacaa agaaccaggt gagcctgtgg tgtctggtga agggcttcta tccaagcgat 1140

atcgccgtgg agtgggagtc caatggccag cccgagaaca attacaagac cacaccccct 1200

gtgctggaca gcgatggctc cttctttctg tattccaagc tgaccgtgga taagtctaga 1260

tggcagcagg gcaacgtgtt ttcctgttct gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320

acacagaaga gcctgtccct gtctcctggc aag 1353

<210> 52

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-hu CD20 LC

<400> 52

cagatcgtgc tgagccagtc cccagcaatc ctgtctgcca gccctggaga gaaggtgacc 60

atgacatgcc gggccagctc ctctgtgagc tacatccact ggttccagca gaagccaggc 120

agctccccta agccatggat ctatgccaca agcaacctgg catccggagt gcccgtgcgg 180

ttttccggct ctggcagcgg cacctcctac tctctgacaa tcagcagagt ggaggcagag 240

gacgcagcaa cctactattg ccagcagtgg acctccaatc cccctacatt cggcggcggc 300

accaagctgg agatcaagag gacagtggcc gccccttccg tgttcatctt tccaccctct 360

gacgagcagc tgaagtctgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccca 420

cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggat aacgccctgc agagcggcaa ttcccaggag 480

tctgtgacag agcaggacag caaggattcc acctattctc tgtctagcac cctgacactg 540

agcaaggccg attacgagaa gcacaaggtg tatgcctgcg aggtgacaca ccagggcctg 600

tcctctcccg tgaccaagtc cttcaacagg ggcgagtgt 639

<210> 53

<211> 1341

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 53

caggtgcagc tgcagcagtc cggagcagag ctggcaaggc ctggagcctc tgtgaacctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca aacaatggca tcaattggct gaagcagagg 120

accggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccaa gatctaccaa cacactgtat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagcagacc ggagctccaa caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgac atccgaggat tctgccgtgt atttttgtgc acgcaccctg 300

acagcaccct tcgccttttg gggacagggc accctggtga cagtgagcgc cgccaagacc 360

acagcaccaa gcgtgtatcc actggcaccc gtgtgcggcg ataccacagg ctctagcgtg 420

accctgggct gtctggtgaa gggctacttc cctgagccag tgaccctgac atggaacagc 480

ggctctctgt cctctggcgt gcacaccttt cctgccgtgc tgcagtccga tctgtataca 540

ctgagctcct ctgtgaccgt gacaagctcc acctggccca gccagtccat cacatgcaac 600

gtggcccacc ctgcctctag caccaaggtg gacaagaaga tcgagccacg gggccccaca 660

atcaagccat gtccaccttg caagtgtcca gcacctaatc tgctgggagg acctagcgtg 720

ttcatctttc cacccaagat caaggacgtg ctgatgatct ctctgagccc tatcgtgacc 780

tgcgtggtgg tggccgtgtc tgaggacgat ccagatgtgc agatcagctg gttcgtgaac 840

aatgtggagg tgcacaccgc ccagacccag acacaccggg aggactacgg ctccacactg 900

agagtggtgt ctgccctgcc catccagcac caggactgga tgtccggcaa ggagtttaag 960

tgcaaggtga acaataagga tctgccagcc cccatcgaga ggaccatctc taagcctaag 1020

ggcagcgtgc gcgcaccaca ggtgtatgtg ctgcctccac ccgaggagga gatgaccaag 1080

aagcaggtga cactgtggtg tatggtgacc gacttcatgc cagaggatat ctacgtggag 1140

tggaccaaca atggcaagac agagctgaac tataagaata cagagcccgt gctggacagc 1200

gatggctcct actttatgta tagcaagctg agggtggaga agaagaactg ggtggagcgc 1260

aattcctact cttgtagcgt ggtgcacgag ggcctgcaca accaccacac cacaaagtcc 1320

ttttctagaa cccccggcaa g 1341

<210> 54

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP LC

<400> 54

cagatcgtgc tgacacagtc ccctgccatc atgtctgcca gcccaggcga gaaggtgacc 60

atgacatgct ctgccagctc cggcgtgaac ttcatgcact ggtaccagca gaagtctggc 120

acaagcccca agcggtggat cttcgacacc tccaagctgg cctctggcgt gcctgccaga 180

ttttccggct ctggcagcgg cacatcctat tctctgacca tctctagcat ggaggccgag 240

gacgccgcca cctactattg ccagcagtgg agcttcaatc cccctacatt tggcggcggc 300

accaagctgg agatcaagag ggcagatgca gcaccaacag tgtccatctt tccaccctcc 360

tctgagcagc tgaccagcgg aggagcatcc gtggtgtgct tcctgaacaa cttctacccc 420

aaggacatca acgtgaagtg gaagatcgat ggctctgaga ggcagaacgg cgtgctgaat 480

agctggacag accaggattc caaggactct acctatagca tgagctccac cctgacactg 540

accaaggatg agtacgagag gcacaatagc tatacatgcg aggccaccca caagacaagc 600

acctccccta tcgtgaagtc cttcaaccgc aatgagtgt 639

<210> 55

<211> 2292

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu scIL-12-mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 55

atgtgggagc tggagaagga cgtgtacgtg gtggaggtgg attggacacc tgacgccccc 60

ggcgagacag tgaacctgac atgcgatacc cctgaggagg atgatatcac atggacctcc 120

gatcagagac acggcgtgat cggcagcggc aagaccctga caatcaccgt gaaggagttt 180

ctggatgccg gccagtacac ctgtcacaag ggcggcgaga cactgagcca ctcccacctg 240

ctgctgcaca agaaggagaa tggcatctgg tccaccgaga tcctgaagaa cttcaagaac 300

aagaccttcc tgaagtgtga ggcccctaat tactccggca ggtttacatg ctcctggctg 360

gtgcagagaa acatggacct gaagtttaat atcaagagct cctcctccag ccccgatagc 420

agagccgtga cctgtggcat ggccagcctg agcgccgaga aggtgaccct ggatcagagg 480

gattacgaga agtactccgt gtcctgtcag gaggatgtga catgtcctac agccgaggag 540

acactgccta tcgagctggc cctggaggcc aggcagcaga ataagtacga gaactacagc 600

acaagctttt tcatcaggga catcatcaag cccgatcccc ccaagaacct gcagatgaag 660

cccctgaaga acagccaggt ggaggtgtcc tgggagtacc ctgatagctg gtccacccct 720

cactcctact tctccctgaa gttctttgtg agaatccaga gaaagaagga gaagatgaag 780

gagacagagg agggctgcaa tcagaagggc gccttcctgg tggagaagac atccaccgag 840

gtgcagtgta agggcggcaa cgtgtgcgtg caggcccagg acagatacta caattccagc 900

tgtagcaagt gggcctgtgt gccttgtaga gtgagatccg gcggcggcgg ctccggagga 960

ggaggaagcg gaggaggcgg ctccagagtg atccctgtgt ccggccctgc cagatgtctg 1020

tcccagagca gaaacctgct gaagaccaca gacgacatgg tgaagacagc cagagagaag 1080

ctgaagcact acagctgcac cgccgaggac atcgaccacg aggatatcac aagagaccag 1140

acatccaccc tgaagacatg tctgcctctg gagctgcaca agaatgagtc ctgcctggcc 1200

accagagaga cctccagcac caccaggggc agctgcctgc cccctcagaa gacctccctg 1260

atgatgacac tgtgcctggg cagcatctac gaggacctga agatgtacca gaccgagttc 1320

caggccatca atgccgccct gcagaaccac aaccaccagc agatcatcct ggataagggc 1380

atgctggtgg ccatcgacga gctgatgcag agcctgaacc acaatggcga gaccctgagg 1440

cagaagcctc ctgtgggcga ggccgatccc tacagagtga agatgaagct gtgtatcctg 1500

ctgcacgcct tttccacaag ggtggtgacc atcaacaggg tcatgggcta cctgtccagc 1560

gccggcggcg gcggcagcgg aggaggaggc tccgagccac gcggccccac aatcaagcca 1620

tgcccccctt gcaagtgtcc tgcaccaaat ctgctgggag gaccatccgt gttcatcttt 1680

ccacccaaga tcaaggacgt gctgatgatc agcctgtccc caatcgtgac ctgcgtggtc 1740

gtggccgtga gcgaggacga tcctgatgtg cagatctcct ggttcgtgaa caatgtggag 1800

gtgcacaccg cccagaccca gacacaccgg gaggactacg gctccacact gagagtggtg 1860

tctgccctgc ccatccagca ccaggactgg atgagcggca aggagtttaa gtgcaaggtg 1920

aacaataagg atctgcccgc ccctatcgag cggacaatct ctaagcctaa gggcagcgtg 1980

agagccccac aggtgtatgt gctgcctcca cccgaggagg agatgaccaa gaagcaggtg 2040

acactgtctt gtgccgtgac cgacttcatg cctgaggata tctatgtgga gtggaccaac 2100

aatggcaaga cagagctgaa ctacaagaat acagagccag tgctggactc cgatggctct 2160

tacttcatgg tgagcaagct gagggtggag aagaagaact gggtggagcg caattcttac 2220

agctgctccg tggtgcacga gggcctgcac aaccaccaca ccacaaagtc ttttagccgg 2280

acccctggca ag 2292

<210> 56

<211> 2292

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu scIL-12 mut1-mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 56

atgtgggagc tggagaagga cgtgtacgtg gtggaggtgg attggacacc tgacgccccc 60

ggcgagacag tgaacctgac atgcgatacc cctgaggagg atgatatcac atggacctcc 120

gatcagagac acggcgtgat cggcagcggc aagaccctga caatcaccgt gaaggagttt 180

ctggatgccg gccagtacac ctgtcacaag ggcggcgaga cactgagcca ctcccacctg 240

ctgctgcaca agaaggagaa tggcatctgg tccaccgaga tcctgaagaa cttcaagaac 300

aagaccttcc tgaagtgtga ggcccctaat tactccggca ggtttacatg ctcctggctg 360

gtgcagagaa acatggacct gaagtttaat atcaagagct cctcctccag ccccgatagc 420

agagccgtga cctgtggcat ggccagcctg agcgccgaga aggtgaccct ggatcagagg 480

gattacgaga agtactccgt gtcctgtcag gaggatgtga catgtcctac agccgaggag 540

acactgccta tcgagctggc cctggaggcc aggcagcaga ataagtacga gaactacagc 600

acaagctttt tcatcaggga catcatcaag cccgatcccc ccaagaacct gcagatgaag 660

cccctgaaga acagccaggt ggaggtgtcc tgggagtacc ctgatagctg gtccacccct 720

cactcctact tctccctgaa gttctttgtg agaatccaga gagccaagga gaagatggcc 780

gagacagagg agggctgcaa tcagaagggc gccttcctgg tggagaagac atccaccgag 840

gtgcagtgta agggcggcaa cgtgtgcgtg caggcccagg acagatacta caattccagc 900

tgtagcaagt gggcctgtgt gccttgtaga gtgagatccg gcggcggcgg ctccggagga 960

ggaggaagcg gaggaggcgg ctccagagtg atccctgtgt ccggccctgc cagatgtctg 1020

tcccagagca gaaacctgct gaagaccaca gacgacatgg tgaagacagc cagagagaag 1080

ctgaagcact acagctgcac cgccgaggac atcgaccacg aggatatcac aagagaccag 1140

acatccaccc tgaagacatg tctgcctctg gagctgcaca agaatgagtc ctgcctggcc 1200

accagagaga cctccagcac caccaggggc agctgcctgc cccctcagaa gacctccctg 1260

atgatgacac tgtgcctggg cagcatctac gaggacctga agatgtacca gaccgagttc 1320

caggccatca atgccgccct gcagaaccac aaccaccagc agatcatcct ggataagggc 1380

atgctggtgg ccatcgacga gctgatgcag agcctgaacc acaatggcga gaccctgagg 1440

cagaagcctc ctgtgggcga ggccgatccc tacagagtga agatgaagct gtgtatcctg 1500

ctgcacgcct tttccacaag ggtggtgacc atcaacaggg tcatgggcta cctgtccagc 1560

gccggcggcg gcggcagcgg aggaggaggc tccgagccac gcggccccac aatcaagcca 1620

tgcccccctt gcaagtgtcc tgcaccaaat ctgctgggag gaccatccgt gttcatcttt 1680

ccacccaaga tcaaggacgt gctgatgatc agcctgtccc caatcgtgac ctgcgtggtc 1740

gtggccgtga gcgaggacga tcctgatgtg cagatctcct ggttcgtgaa caatgtggag 1800

gtgcacaccg cccagaccca gacacaccgg gaggactacg gctccacact gagagtggtg 1860

tctgccctgc ccatccagca ccaggactgg atgagcggca aggagtttaa gtgcaaggtg 1920

aacaataagg atctgcccgc ccctatcgag cggacaatct ctaagcctaa gggcagcgtg 1980

agagccccac aggtgtatgt gctgcctcca cccgaggagg agatgaccaa gaagcaggtg 2040

acactgtctt gtgccgtgac cgacttcatg cctgaggata tctatgtgga gtggaccaac 2100

aatggcaaga cagagctgaa ctacaagaat acagagccag tgctggactc cgatggctct 2160

tacttcatgg tgagcaagct gagggtggag aagaagaact gggtggagcg caattcttac 2220

agctgctccg tggtgcacga gggcctgcac aaccaccaca ccacaaagtc ttttagccgg 2280

acccctggca ag 2292

<210> 57

<211> 2292

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 57

atgtgggagc tggagaagga cgtgtacgtg gtggaggtgg attggacacc tgacgccccc 60

ggcgagacag tgaacctgac atgcgatacc cctgaggagg atgatatcac atggacctcc 120

gatcagagac acggcgtgat cggcagcggc aagaccctga caatcaccgt gaaggagttt 180

ctggatgccg gccagtacac ctgtcacaag ggcggcgaga cactgagcca ctcccacctg 240

ctgctgcaca agaaggagaa tggcatctgg tccaccgaga tcctgaagaa cttcaagaac 300

aagaccttcc tgaagtgtga ggcccctaat tactccggca ggtttacatg ctcctggctg 360

gtgcagagaa acatggacct gaagtttaat atcaagagct cctcctccag ccccgatagc 420

agagccgtga cctgtggcat ggccagcctg agcgccgaga aggtgaccct ggatcagagg 480

gattacgaga agtactccgt gtcctgtcag gaggatgtga catgtcctac agccgaggag 540

acactgccta tcgagctggc cctggaggcc aggcagcaga ataagtacga gaactacagc 600

acaagctttt tcatcaggga catcatcaag cccgatcccc ccaagaacct gcagatgaag 660

cccctgaaga acagccaggt ggaggtgtcc tgggagtacc ctgatagctg gtccacccct 720

cactcctact tctccctgaa gttctttgtg agaatccagg ctgccgccga gaagatggcc 780

gagacagagg agggctgcaa tcagaagggc gccttcctgg tggagaagac atccaccgag 840

gtgcagtgta agggcggcaa cgtgtgcgtg caggcccagg acagatacta caattccagc 900

tgtagcaagt gggcctgtgt gccttgtaga gtgagatccg gcggcggcgg ctccggagga 960

ggaggaagcg gaggaggcgg ctccagagtg atccctgtgt ccggccctgc cagatgtctg 1020

tcccagagca gaaacctgct gaagaccaca gacgacatgg tgaagacagc cagagagaag 1080

ctgaagcact acagctgcac cgccgaggac atcgaccacg aggatatcac aagagaccag 1140

acatccaccc tgaagacatg tctgcctctg gagctgcaca agaatgagtc ctgcctggcc 1200

accagagaga cctccagcac caccaggggc agctgcctgc cccctcagaa gacctccctg 1260

atgatgacac tgtgcctggg cagcatctac gaggacctga agatgtacca gaccgagttc 1320

caggccatca atgccgccct gcagaaccac aaccaccagc agatcatcct ggataagggc 1380

atgctggtgg ccatcgacga gctgatgcag agcctgaacc acaatggcga gaccctgagg 1440

cagaagcctc ctgtgggcga ggccgatccc tacagagtga agatgaagct gtgtatcctg 1500

ctgcacgcct tttccacaag ggtggtgacc atcaacaggg tcatgggcta cctgtccagc 1560

gccggcggcg gcggcagcgg aggaggaggc tccgagccac gcggccccac aatcaagcca 1620

tgcccccctt gcaagtgtcc tgcaccaaat ctgctgggag gaccatccgt gttcatcttt 1680

ccacccaaga tcaaggacgt gctgatgatc agcctgtccc caatcgtgac ctgcgtggtc 1740

gtggccgtga gcgaggacga tcctgatgtg cagatctcct ggttcgtgaa caatgtggag 1800

gtgcacaccg cccagaccca gacacaccgg gaggactacg gctccacact gagagtggtg 1860

tctgccctgc ccatccagca ccaggactgg atgagcggca aggagtttaa gtgcaaggtg 1920

aacaataagg atctgcccgc ccctatcgag cggacaatct ctaagcctaa gggcagcgtg 1980

agagccccac aggtgtatgt gctgcctcca cccgaggagg agatgaccaa gaagcaggtg 2040

acactgtctt gtgccgtgac cgacttcatg cctgaggata tctatgtgga gtggaccaac 2100

aatggcaaga cagagctgaa ctacaagaat acagagccag tgctggactc cgatggctct 2160

tacttcatgg tgagcaagct gagggtggag aagaagaact gggtggagcg caattcttac 2220

agctgctccg tggtgcacga gggcctgcac aaccaccaca ccacaaagtc ttttagccgg 2280

acccctggca ag 2292

<210> 58

<211> 1737

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК (anti-mu FAP VH)2, mu IgG2a knob DANG

<400> 58

caggtgcagc tgcagcagtc cggagcagag ctggcaaggc ctggagcctc tgtgaacctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca aacaatggca tcaattggct gaagcagagg 120

accggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccaa gatctaccaa cacactgtat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagcagacc ggagctccaa caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgac atccgaggat tctgccgtgt atttttgtgc acgcaccctg 300

acagcaccct tcgccttttg gggacagggc accctggtga cagtgagcgc cggaggtgga 360

ggctcaggtg gtggcggatc tggaggaggc ggtagtcagg tgcagctgca gcagtccgga 420

gcagagctgg caaggcctgg agcctctgtg aacctgagct gcaaggcctc cggctacacc 480

ttcacaaaca atggcatcaa ttggctgaag cagaggaccg gacagggact ggagtggatc 540

ggcgagatct acccaagatc taccaacaca ctgtataatg agaagttcaa gggcaaggcc 600

accctgacag cagaccggag ctccaacacc gcctacatgg agctgagaag cctgacatcc 660

gaggattctg ccgtgtattt ttgtgcacgc accctgacag cacccttcgc cttttgggga 720

cagggcaccc tggtgacagt gagcgccgcc aagaccacag caccaagcgt gtatccactg 780

gcacccgtgt gcggcgatac cacaggctct agcgtgaccc tgggctgtct ggtgaagggc 840

tacttccctg agccagtgac cctgacatgg aacagcggct ctctgtcctc tggcgtgcac 900

acctttcctg ccgtgctgca gtccgatctg tatacactga gctcctctgt gaccgtgaca 960

agctccacct ggcccagcca gtccatcaca tgcaacgtgg cccaccctgc ctctagcacc 1020

aaggtggaca agaagatcga gccacggggc cccacaatca agccatgtcc accttgcaag 1080

tgtccagcac ctaatctgct gggaggacct agcgtgttca tctttccacc caagatcaag 1140

gacgtgctga tgatctctct gagccctatc gtgacctgcg tggtggtggc cgtgtctgag 1200

gacgatccag atgtgcagat cagctggttc gtgaacaatg tggaggtgca caccgcccag 1260

acccagacac accgggagga ctacggctcc acactgagag tggtgtctgc cctgcccatc 1320

cagcaccagg actggatgtc cggcaaggag tttaagtgca aggtgaacaa taaggatctg 1380

ccagccccca tcgagaggac catctctaag cctaagggca gcgtgcgcgc accacaggtg 1440

tatgtgctgc ctccacccga ggaggagatg accaagaagc aggtgacact gtggtgtatg 1500

gtgaccgact tcatgccaga ggatatctac gtggagtgga ccaacaatgg caagacagag 1560

ctgaactata agaatacaga gcccgtgctg gacagcgatg gctcctactt tatgtatagc 1620

aagctgaggg tggagaagaa gaactgggtg gagcgcaatt cctactcttg tagcgtggtg 1680

cacgagggcc tgcacaacca ccacaccaca aagtcctttt ctagaacccc cggcaag 1737

<210> 59

<211> 1002

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК (anti-mu FAP VL)2

<400> 59

cagatcgtgc tgacacagtc ccctgccatc atgtctgcca gcccaggcga gaaggtgacc 60

atgacatgct ctgccagctc cggcgtgaac ttcatgcact ggtaccagca gaagtctggc 120

acaagcccca agcggtggat cttcgacacc tccaagctgg cctctggcgt gcctgccaga 180

ttttccggct ctggcagcgg cacatcctat tctctgacca tctctagcat ggaggccgag 240

gacgccgcca cctactattg ccagcagtgg agcttcaatc cccctacatt tggcggcggc 300

accaagctgg agatcaaggg aggtggaggc tcaggtggtg gcggatctgg aggaggcggt 360

agtcagatcg tgctgacaca gtcccctgcc atcatgtctg ccagcccagg cgagaaggtg 420

accatgacat gctctgccag ctccggcgtg aacttcatgc actggtacca gcagaagtct 480

ggcacaagcc ccaagcggtg gatcttcgac acctccaagc tggcctctgg cgtgcctgcc 540

agattttccg gctctggcag cggcacatcc tattctctga ccatctctag catggaggcc 600

gaggacgccg ccacctacta ttgccagcag tggagcttca atccccctac atttggcggc 660

ggcaccaagc tggagatcaa gagggcagat gcagcaccaa cagtgtccat ctttccaccc 720

tcctctgagc agctgaccag cggaggagca tccgtggtgt gcttcctgaa caacttctac 780

cccaaggaca tcaacgtgaa gtggaagatc gatggctctg agaggcagaa cggcgtgctg 840

aatagctgga cagaccagga ttccaaggac tctacctata gcatgagctc caccctgaca 900

ctgaccaagg atgagtacga gaggcacaat agctatacat gcgaggccac ccacaagaca 960

agcacctccc ctatcgtgaa gtccttcaac cgcaatgagt gt 1002

<210> 60

<211> 2115

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc knob

DANG-anti-mu FAP scFv

<400> 60

caggtgcagc tgcagcagtc cggagcagag ctggcaaggc ctggagcctc tgtgaacctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca aacaatggca tcaattggct gaagcagagg 120

accggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccaa gatctaccaa cacactgtat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagcagacc ggagctccaa caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgac atccgaggat tctgccgtgt atttttgtgc acgcaccctg 300

acagcaccct tcgccttttg gggacagggc accctggtga cagtgagcgc cgccaagacc 360

acagcaccaa gcgtgtatcc actggcaccc gtgtgcggcg ataccacagg ctctagcgtg 420

accctgggct gtctggtgaa gggctacttc cctgagccag tgaccctgac atggaacagc 480

ggctctctgt cctctggcgt gcacaccttt cctgccgtgc tgcagtccga tctgtataca 540

ctgagctcct ctgtgaccgt gacaagctcc acctggccca gccagtccat cacatgcaac 600

gtggcccacc ctgcctctag caccaaggtg gacaagaaga tcgagccacg gggccccaca 660

atcaagccat gtccaccttg caagtgtcca gcacctaatc tgctgggagg acctagcgtg 720

ttcatctttc cacccaagat caaggacgtg ctgatgatct ctctgagccc tatcgtgacc 780

tgcgtggtgg tggccgtgtc tgaggacgat ccagatgtgc agatcagctg gttcgtgaac 840

aatgtggagg tgcacaccgc ccagacccag acacaccggg aggactacgg ctccacactg 900

agagtggtgt ctgccctgcc catccagcac caggactgga tgtccggcaa ggagtttaag 960

tgcaaggtga acaataagga tctgccagcc cccatcgaga ggaccatctc taagcctaag 1020

ggcagcgtgc gcgcaccaca ggtgtatgtg ctgcctccac ccgaggagga gatgaccaag 1080

aagcaggtga cactgtggtg tatggtgacc gacttcatgc cagaggatat ctacgtggag 1140

tggaccaaca atggcaagac agagctgaac tataagaata cagagcccgt gctggacagc 1200

gatggctcct actttatgta tagcaagctg agggtggaga agaagaactg ggtggagcgc 1260

aattcctact cttgtagcgt ggtgcacgag ggcctgcaca accaccacac cacaaagtcc 1320

ttttctagaa cccccggcaa gggaggtgga ggctcaggtg gtggcggatc tggaggaggc 1380

ggtagtcagg tgcagctgca gcagtccgga gcagagctgg caaggcctgg agcctctgtg 1440

aacctgagct gcaaggcctc cggctacacc ttcacaaaca atggcatcaa ttggctgaag 1500

cagaggaccg gacagggact ggagtggatc ggcgagatct acccaagatc taccaacaca 1560

ctgtataatg agaagttcaa gggcaaggcc accctgacag cagaccggag ctccaacacc 1620

gcctacatgg agctgagaag cctgacatcc gaggattctg ccgtgtattt ttgtgcacgc 1680

accctgacag cacccttcgc cttttgggga cagggcaccc tggtgacagt gagcgccggt 1740

ggcggaggat caggaggagg cggtagtggc ggcggaggtt ctggtggagg aggtagccag 1800

atcgtgctga cacagtcccc tgccatcatg tctgccagcc caggcgagaa ggtgaccatg 1860

acatgctctg ccagctccgg cgtgaacttc atgcactggt accagcagaa gtctggcaca 1920

agccccaagc ggtggatctt cgacacctcc aagctggcct ctggcgtgcc tgccagattt 1980

tccggctctg gcagcggcac atcctattct ctgaccatct ctagcatgga ggccgaggac 2040

gccgccacct actattgcca gcagtggagc ttcaatcccc ctacatttgg cggcggcacc 2100

aagctggaga tcaag 2115

<210> 61

<211> 1413

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP LC-anti-mu FAP scFv

<400> 61

cagatcgtgc tgacacagtc ccctgccatc atgtctgcca gcccaggcga gaaggtgacc 60

atgacatgct ctgccagctc cggcgtgaac ttcatgcact ggtaccagca gaagtctggc 120

acaagcccca agcggtggat cttcgacacc tccaagctgg cctctggcgt gcctgccaga 180

ttttccggct ctggcagcgg cacatcctat tctctgacca tctctagcat ggaggccgag 240

gacgccgcca cctactattg ccagcagtgg agcttcaatc cccctacatt tggcggcggc 300

accaagctgg agatcaagag ggcagatgca gcaccaacag tgtccatctt tccaccctcc 360

tctgagcagc tgaccagcgg aggagcatcc gtggtgtgct tcctgaacaa cttctacccc 420

aaggacatca acgtgaagtg gaagatcgat ggctctgaga ggcagaacgg cgtgctgaat 480

agctggacag accaggattc caaggactct acctatagca tgagctccac cctgacactg 540

accaaggatg agtacgagag gcacaatagc tatacatgcg aggccaccca caagacaagc 600

acctccccta tcgtgaagtc cttcaaccgc aatgagtgtg gaggtggagg ctcaggtggt 660

ggcggatctg gaggaggcgg tagtcaggtg cagctgcagc agtccggagc agagctggca 720

aggcctggag cctctgtgaa cctgagctgc aaggcctccg gctacacctt cacaaacaat 780

ggcatcaatt ggctgaagca gaggaccgga cagggactgg agtggatcgg cgagatctac 840

ccaagatcta ccaacacact gtataatgag aagttcaagg gcaaggccac cctgacagca 900

gaccggagct ccaacaccgc ctacatggag ctgagaagcc tgacatccga ggattctgcc 960

gtgtattttt gtgcacgcac cctgacagca cccttcgcct tttggggaca gggcaccctg 1020

gtgacagtga gcgccggtgg cggaggatca ggaggaggcg gtagtggcgg cggaggttct 1080

ggtggaggag gtagccagat cgtgctgaca cagtcccctg ccatcatgtc tgccagccca 1140

ggcgagaagg tgaccatgac atgctctgcc agctccggcg tgaacttcat gcactggtac 1200

cagcagaagt ctggcacaag ccccaagcgg tggatcttcg acacctccaa gctggcctct 1260

ggcgtgcctg ccagattttc cggctctggc agcggcacat cctattctct gaccatctct 1320

agcatggagg ccgaggacgc cgccacctac tattgccagc agtggagctt caatccccct 1380

acatttggcg gcggcaccaa gctggagatc aag 1413

<210> 62

<211> 2946

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc hole

DANG-mu scIL-12

<400> 62

caggtgcagc tgcagcagtc cggagcagag ctggcaaggc ctggagcctc tgtgaacctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca aacaatggca tcaattggct gaagcagagg 120

accggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccaa gatctaccaa cacactgtat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagcagacc ggagctccaa caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgac atccgaggat tctgccgtgt atttttgtgc acgcaccctg 300

acagcaccct tcgccttttg gggacagggc accctggtga cagtgagcgc cgccaagacc 360

acagcaccaa gcgtgtatcc actggcaccc gtgtgcggcg ataccacagg ctctagcgtg 420

accctgggct gtctggtgaa gggctacttc cctgagccag tgaccctgac atggaacagc 480

ggctctctgt cctctggcgt gcacaccttt cctgccgtgc tgcagtccga tctgtataca 540

ctgagctcct ctgtgaccgt gacaagctcc acctggccca gccagtccat cacatgcaac 600

gtggcccacc ctgcctctag caccaaggtg gacaagaaga tcgagccacg cggccccaca 660

atcaagccat gccccccttg caagtgtcct gcaccaaatc tgctgggagg accatccgtg 720

ttcatctttc cacccaagat caaggacgtg ctgatgatca gcctgtcccc aatcgtgacc 780

tgcgtggtcg tggccgtgag cgaggacgat cctgatgtgc agatctcctg gttcgtgaac 840

aatgtggagg tgcacaccgc ccagacccag acacaccggg aggactacgg ctccacactg 900

agagtggtgt ctgccctgcc catccagcac caggactgga tgagcggcaa ggagtttaag 960

tgcaaggtga acaataagga tctgcccgcc cctatcgagc ggacaatctc taagcctaag 1020

ggcagcgtga gagccccaca ggtgtatgtg ctgcctccac ccgaggagga gatgaccaag 1080

aagcaggtga cactgtcttg tgccgtgacc gacttcatgc ctgaggatat ctatgtggag 1140

tggaccaaca atggcaagac agagctgaac tacaagaata cagagccagt gctggactcc 1200

gatggctctt acttcatggt gagcaagctg agggtggaga agaagaactg ggtggagcgc 1260

aattcttaca gctgctccgt ggtgcacgag ggcctgcaca accaccacac cacaaagtct 1320

tttagccgga cccctggcgg tggaggtggc tcaggaggag gcggttctgg cggaggaggt 1380

agtatgtggg agctggagaa ggacgtgtac gtggtggagg tggattggac acctgacgcc 1440

cccggcgaga cagtgaacct gacatgcgat acccctgagg aggatgatat cacatggacc 1500

tccgatcaga gacacggcgt gatcggcagc ggcaagaccc tgacaatcac cgtgaaggag 1560

tttctggatg ccggccagta cacctgtcac aagggcggcg agacactgag ccactcccac 1620

ctgctgctgc acaagaagga gaatggcatc tggtccaccg agatcctgaa gaacttcaag 1680

aacaagacct tcctgaagtg tgaggcccct aattactccg gcaggtttac atgctcctgg 1740

ctggtgcaga gaaacatgga cctgaagttt aatatcaaga gctcctcctc cagccccgat 1800

agcagagccg tgacctgtgg catggccagc ctgagcgccg agaaggtgac cctggatcag 1860

agggattacg agaagtactc cgtgtcctgt caggaggatg tgacatgtcc tacagccgag 1920

gagacactgc ctatcgagct ggccctggag gccaggcagc agaataagta cgagaactac 1980

agcacaagct ttttcatcag ggacatcatc aagcccgatc cccccaagaa cctgcagatg 2040

aagcccctga agaacagcca ggtggaggtg tcctgggagt accctgatag ctggtccacc 2100

cctcactcct acttctccct gaagttcttt gtgagaatcc agagaaagaa ggagaagatg 2160

aaggagacag aggagggctg caatcagaag ggcgccttcc tggtggagaa gacatccacc 2220

gaggtgcagt gtaagggcgg caacgtgtgc gtgcaggccc aggacagata ctacaattcc 2280

agctgtagca agtgggcctg tgtgccttgt agagtgagat ccggcggcgg cggctccgga 2340

ggaggaggaa gcggaggagg cggctccaga gtgatccctg tgtccggccc tgccagatgt 2400

ctgtcccaga gcagaaacct gctgaagacc acagacgaca tggtgaagac agccagagag 2460

aagctgaagc actacagctg caccgccgag gacatcgacc acgaggatat cacaagagac 2520

cagacatcca ccctgaagac atgtctgcct ctggagctgc acaagaatga gtcctgcctg 2580

gccaccagag agacctccag caccaccagg ggcagctgcc tgccccctca gaagacctcc 2640

ctgatgatga cactgtgcct gggcagcatc tacgaggacc tgaagatgta ccagaccgag 2700

ttccaggcca tcaatgccgc cctgcagaac cacaaccacc agcagatcat cctggataag 2760

ggcatgctgg tggccatcga cgagctgatg cagagcctga accacaatgg cgagaccctg 2820

aggcagaagc ctcctgtggg cgaggccgat ccctacagag tgaagatgaa gctgtgtatc 2880

ctgctgcacg ccttttccac aagggtggtg accatcaaca gggtcatggg ctacctgtcc 2940

agcgcc 2946

<210> 63

<211> 2946

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc hole

DANG-mu scIL-12 mut2

<400> 63

caggtgcagc tgcagcagtc cggagcagag ctggcaaggc ctggagcctc tgtgaacctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca aacaatggca tcaattggct gaagcagagg 120

accggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccaa gatctaccaa cacactgtat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagcagacc ggagctccaa caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgac atccgaggat tctgccgtgt atttttgtgc acgcaccctg 300

acagcaccct tcgccttttg gggacagggc accctggtga cagtgagcgc cgccaagacc 360

acagcaccaa gcgtgtatcc actggcaccc gtgtgcggcg ataccacagg ctctagcgtg 420

accctgggct gtctggtgaa gggctacttc cctgagccag tgaccctgac atggaacagc 480

ggctctctgt cctctggcgt gcacaccttt cctgccgtgc tgcagtccga tctgtataca 540

ctgagctcct ctgtgaccgt gacaagctcc acctggccca gccagtccat cacatgcaac 600

gtggcccacc ctgcctctag caccaaggtg gacaagaaga tcgagccacg cggccccaca 660

atcaagccat gccccccttg caagtgtcct gcaccaaatc tgctgggagg accatccgtg 720

ttcatctttc cacccaagat caaggacgtg ctgatgatca gcctgtcccc aatcgtgacc 780

tgcgtggtcg tggccgtgag cgaggacgat cctgatgtgc agatctcctg gttcgtgaac 840

aatgtggagg tgcacaccgc ccagacccag acacaccggg aggactacgg ctccacactg 900

agagtggtgt ctgccctgcc catccagcac caggactgga tgagcggcaa ggagtttaag 960

tgcaaggtga acaataagga tctgcccgcc cctatcgagc ggacaatctc taagcctaag 1020

ggcagcgtga gagccccaca ggtgtatgtg ctgcctccac ccgaggagga gatgaccaag 1080

aagcaggtga cactgtcttg tgccgtgacc gacttcatgc ctgaggatat ctatgtggag 1140

tggaccaaca atggcaagac agagctgaac tacaagaata cagagccagt gctggactcc 1200

gatggctctt acttcatggt gagcaagctg agggtggaga agaagaactg ggtggagcgc 1260

aattcttaca gctgctccgt ggtgcacgag ggcctgcaca accaccacac cacaaagtct 1320

tttagccgga cccctggcgg tggaggtggc tcaggaggag gcggttctgg cggaggaggt 1380

agtatgtggg agctggagaa ggacgtgtac gtggtggagg tggattggac acctgacgcc 1440

cccggcgaga cagtgaacct gacatgcgat acccctgagg aggatgatat cacatggacc 1500

tccgatcaga gacacggcgt gatcggcagc ggcaagaccc tgacaatcac cgtgaaggag 1560

tttctggatg ccggccagta cacctgtcac aagggcggcg agacactgag ccactcccac 1620

ctgctgctgc acaagaagga gaatggcatc tggtccaccg agatcctgaa gaacttcaag 1680

aacaagacct tcctgaagtg tgaggcccct aattactccg gcaggtttac atgctcctgg 1740

ctggtgcaga gaaacatgga cctgaagttt aatatcaaga gctcctcctc cagccccgat 1800

agcagagccg tgacctgtgg catggccagc ctgagcgccg agaaggtgac cctggatcag 1860

agggattacg agaagtactc cgtgtcctgt caggaggatg tgacatgtcc tacagccgag 1920

gagacactgc ctatcgagct ggccctggag gccaggcagc agaataagta cgagaactac 1980

agcacaagct ttttcatcag ggacatcatc aagcccgatc cccccaagaa cctgcagatg 2040

aagcccctga agaacagcca ggtggaggtg tcctgggagt accctgatag ctggtccacc 2100

cctcactcct acttctccct gaagttcttt gtgagaatcc aggctgccgc cgagaagatg 2160

gccgagacag aggagggctg caatcagaag ggcgccttcc tggtggagaa gacatccacc 2220

gaggtgcagt gtaagggcgg caacgtgtgc gtgcaggccc aggacagata ctacaattcc 2280

agctgtagca agtgggcctg tgtgccttgt agagtgagat ccggcggcgg cggctccgga 2340

ggaggaggaa gcggaggagg cggctccaga gtgatccctg tgtccggccc tgccagatgt 2400

ctgtcccaga gcagaaacct gctgaagacc acagacgaca tggtgaagac agccagagag 2460

aagctgaagc actacagctg caccgccgag gacatcgacc acgaggatat cacaagagac 2520

cagacatcca ccctgaagac atgtctgcct ctggagctgc acaagaatga gtcctgcctg 2580

gccaccagag agacctccag caccaccagg ggcagctgcc tgccccctca gaagacctcc 2640

ctgatgatga cactgtgcct gggcagcatc tacgaggacc tgaagatgta ccagaccgag 2700

ttccaggcca tcaatgccgc cctgcagaac cacaaccacc agcagatcat cctggataag 2760

ggcatgctgg tggccatcga cgagctgatg cagagcctga accacaatgg cgagaccctg 2820

aggcagaagc ctcctgtggg cgaggccgat ccctacagag tgaagatgaa gctgtgtatc 2880

ctgctgcacg ccttttccac aagggtggtg accatcaaca gggtcatggg ctacctgtcc 2940

agcgcc 2946

<210> 64

<211> 699

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu IgG2a Fc hole DANG

<400> 64

gagccaaggg gccccaccat caagccatgc cccccttgca agtgtcctgc accaaacctg 60

ctgggaggac caagcgtgtt catctttcca cccaagatca aggacgtgct gatgatcagc 120

ctgtccccca tcgtgacatg cgtggtggtg gccgtgtccg aggacgatcc tgatgtgcag 180

atctcttggt tcgtgaacaa tgtggaggtg cacaccgccc agacccagac acaccgggag 240

gactatggct ctacactgag agtggtgagc gccctgccca tccagcacca ggactggatg 300

agcggcaagg agtttaagtg caaggtgaac aataaggatc tgcccgcccc tatcgagcgg 360

accatcagca agcctaaggg ctccgtgaga gccccacagg tgtacgtgct gcctccaccc 420

gaggaggaga tgaccaagaa gcaggtgaca ctgagctgtg ccgtgaccga cttcatgcct 480

gaggatatct acgtggagtg gaccaacaat ggcaagacag agctgaacta taagaataca 540

gagccagtgc tggactccga tggctcttac tttatggtgt ccaagctgag ggtggagaag 600

aagaactggg tggagcgcaa ttcttatagc tgctccgtgg tgcacgaggg cctgcacaat 660

caccacacca caaagtcttt cagcagaacc cctggcaag 699

<210> 65

<211> 699

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 65

gagccaaggg gccccaccat caagccatgc cccccttgca agtgtcctgc accaaacctg 60

ctgggaggac caagcgtgtt catctttcca cccaagatca aggacgtgct gatgatcagc 120

ctgtccccca tcgtgacatg cgtggtggtg gccgtgtccg aggacgatcc tgatgtgcag 180

atctcttggt tcgtgaacaa tgtggaggtg cacaccgccc agacccagac acaccgggag 240

gactacggct ctacactgag agtggtgagc gccctgccca tccagcacca ggactggatg 300

tccggcaagg agtttaagtg caaggtgaac aataaggatc tgcccgcccc tatcgagcgg 360

accatcagca agcctaaggg ctccgtgaga gccccacagg tgtatgtgct gcctccaccc 420

gaggaggaga tgaccaagaa gcaggtgaca ctgtggtgta tggtgaccga cttcatgcct 480

gaggatatct acgtggagtg gaccaacaat ggcaagacag agctgaacta taagaataca 540

gagccagtgc tggactccga tggctcttac tttatgtatt ctaagctgag ggtggagaag 600

aagaactggg tggagcgcaa ttcttacagc tgctccgtgg tgcacgaggg cctgcacaat 660

caccacacca caaagtcttt cagcagaacc cctggcaag 699

<210> 66

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu FAP HC mu IgG2a Fc DANG

<400> 66

caggtgcagc tgcagcagtc cggagcagag ctggcaaggc ctggagcctc tgtgaacctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca aacaatggca tcaattggct gaagcagagg 120

accggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccaa gatctaccaa cacactgtat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagcagacc ggagctccaa caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgac atccgaggat tctgccgtgt atttttgtgc acgcaccctg 300

acagcaccct tcgccttttg gggacagggc accctggtga cagtgagcgc cgccaagacc 360

acagcaccaa gcgtgtatcc actggcaccc gtgtgcggcg ataccacagg ctctagcgtg 420

accctgggct gtctggtgaa gggctacttc cctgagccag tgaccctgac atggaacagc 480

ggctctctgt cctctggcgt gcacaccttt cctgccgtgc tgcagtccga tctgtataca 540

ctgagctcct ctgtgaccgt gacaagctcc acctggccca gccagtccat cacatgcaac 600

gtggcccacc ctgcctctag caccaaggtg gacaagaaga tcgagccacg gggccccaca 660

atcaagccat gtccaccttg caagtgtcca gcacctaatc tgctgggagg acctagcgtg 720

ttcatctttc cacccaagat caaggacgtg ctgatgatct ctctgagccc tatcgtgacc 780

tgcgtggtgg tggccgtgtc tgaggacgat ccagatgtgc agatcagctg gttcgtgaac 840

aatgtggagg tgcacaccgc ccagacccag acacaccggg aggactacgg ctccacactg 900

agagtggtgt ctgccctgcc catccagcac caggactgga tgtccggcaa ggagtttaag 960

tgcaaggtga acaataagga tctgccagcc cccatcgaga ggaccatctc taagcctaag 1020

ggcagcgtgc gcgcaccaca ggtgtatgtg ctgcctccac ccgaggagga gatgaccaag 1080

aagcaggtga cactgacgtg tatggtgacc gacttcatgc cagaggatat ctacgtggag 1140

tggaccaaca atggcaagac agagctgaac tataagaata cagagcccgt gctggacagc 1200

gatggctcct actttatgta tagcaagctg agggtggaga agaagaactg ggtggagcgc 1260

aattcctact cttgtagcgt ggtgcacgag ggcctgcaca accaccacac cacaaagtcc 1320

ttttctagaa cccccggcaa gtga 1344

<210> 67

<211> 2292

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu scIL-12 mut2-mu IgG2a Fc DANG

<400> 67

atgtgggagc tggagaagga cgtgtacgtg gtggaggtgg attggacacc tgacgccccc 60

ggcgagacag tgaacctgac atgcgatacc cctgaggagg atgatatcac atggacctcc 120

gatcagagac acggcgtgat cggcagcggc aagaccctga caatcaccgt gaaggagttt 180

ctggatgccg gccagtacac ctgtcacaag ggcggcgaga cactgagcca ctcccacctg 240

ctgctgcaca agaaggagaa tggcatctgg tccaccgaga tcctgaagaa cttcaagaac 300

aagaccttcc tgaagtgtga ggcccctaat tactccggca ggtttacatg ctcctggctg 360

gtgcagagaa acatggacct gaagtttaat atcaagagct cctcctccag ccccgatagc 420

agagccgtga cctgtggcat ggccagcctg agcgccgaga aggtgaccct ggatcagagg 480

gattacgaga agtactccgt gtcctgtcag gaggatgtga catgtcctac agccgaggag 540

acactgccta tcgagctggc cctggaggcc aggcagcaga ataagtacga gaactacagc 600

acaagctttt tcatcaggga catcatcaag cccgatcccc ccaagaacct gcagatgaag 660

cccctgaaga acagccaggt ggaggtgtcc tgggagtacc ctgatagctg gtccacccct 720

cactcctact tctccctgaa gttctttgtg agaatccagg ctgccgccga gaagatggcc 780

gagacagagg agggctgcaa tcagaagggc gccttcctgg tggagaagac atccaccgag 840

gtgcagtgta agggcggcaa cgtgtgcgtg caggcccagg acagatacta caattccagc 900

tgtagcaagt gggcctgtgt gccttgtaga gtgagatccg gcggcggcgg ctccggagga 960

ggaggaagcg gaggaggcgg ctccagagtg atccctgtgt ccggccctgc cagatgtctg 1020

tcccagagca gaaacctgct gaagaccaca gacgacatgg tgaagacagc cagagagaag 1080

ctgaagcact acagctgcac cgccgaggac atcgaccacg aggatatcac aagagaccag 1140

acatccaccc tgaagacatg tctgcctctg gagctgcaca agaatgagtc ctgcctggcc 1200

accagagaga cctccagcac caccaggggc agctgcctgc cccctcagaa gacctccctg 1260

atgatgacac tgtgcctggg cagcatctac gaggacctga agatgtacca gaccgagttc 1320

caggccatca atgccgccct gcagaaccac aaccaccagc agatcatcct ggataagggc 1380

atgctggtgg ccatcgacga gctgatgcag agcctgaacc acaatggcga gaccctgagg 1440

cagaagcctc ctgtgggcga ggccgatccc tacagagtga agatgaagct gtgtatcctg 1500

ctgcacgcct tttccacaag ggtggtgacc atcaacaggg tcatgggcta cctgtccagc 1560

gccggcggcg gcggcagcgg aggaggaggc tccgagccac gcggccccac aatcaagcca 1620

tgcccccctt gcaagtgtcc tgcaccaaat ctgctgggag gaccatccgt gttcatcttt 1680

ccacccaaga tcaaggacgt gctgatgatc agcctgtccc caatcgtgac ctgcgtggtc 1740

gtggccgtga gcgaggacga tcctgatgtg cagatctcct ggttcgtgaa caatgtggag 1800

gtgcacaccg cccagaccca gacacaccgg gaggactacg gctccacact gagagtggtg 1860

tctgccctgc ccatccagca ccaggactgg atgagcggca aggagtttaa gtgcaaggtg 1920

aacaataagg atctgcccgc ccctatcgag cggacaatct ctaagcctaa gggcagcgtg 1980

agagccccac aggtgtatgt gctgcctcca cccgaggagg agatgaccaa gaagcaggtg 2040

acactgactt gtatggtgac cgacttcatg cctgaggata tctatgtgga gtggaccaac 2100

aatggcaaga cagagctgaa ctacaagaat acagagccag tgctggactc cgatggctct 2160

tacttcatgt acagcaagct gagggtggag aagaagaact gggtggagcg caattcttac 2220

agctgctccg tggtgcacga gggcctgcac aaccaccaca ccacaaagtc ttttagccgg 2280

acccctggca ag 2292

<210> 68

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu CD20 HC mu IgG2a Fc knob DANG

<400> 68

caggtgcagc tgcagcagcc aggagcagag ctggtgaggc caggcacctc tgtgaagctg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca tcttattgga tgcactggat caagcagagg 120

ccaggacagg gactggagtg gatcggcgtg atcgacccct ccgataacta caccaagtac 180

aaccagaagt ttaagggcaa ggccaccctg acagtggaca ccagctcctc tacagcctac 240

atgcagctga gctccctgac atccgaggat tctgccgtgt atttctgtgc ccgggagggc 300

tactatggct ctagcccatg gtttgcctac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360

tctgccaaga ccacagcccc cagcgtgtat cctctggccc cagtgtgcgg cgataccaca 420

ggcagctccg tgaccctggg ctgtctggtg aagggctact tccctgagcc agtgaccctg 480

acatggaact ctggcagcct gtctagcgga gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540

gatctgtata cactgtcctc tagcgtgacc gtgacatcct ctacctggcc ctcccagtct 600

atcacatgca acgtggccca ccctgccagc tccaccaagg tggacaagaa gatcgagccc 660

cggggcccta caatcaagcc atgtccacct tgcaagtgtc cagcacctaa tctgctggga 720

ggacctagcg tgttcatctt tccacccaag atcaaggacg tgctgatgat cagcctgtcc 780

cctatcgtga cctgcgtggt ggtggccgtg agcgaggacg atccagatgt gcagatctcc 840

tggttcgtga acaatgtgga ggtgcacacc gcccagaccc agacacaccg ggaggactac 900

ggctccacac tgagagtggt gtctgccctg cctatccagc accaggactg gatgtccggc 960

aaggagttta agtgcaaggt gaacaataag gatctgccag cccccatcga gcggaccatc 1020

tctaagccta agggcagcgt gagagcccca caggtgtatg tgctgcctcc acccgaggag 1080

gagatgacca agaagcaggt gacactgtgg tgtatggtga ccgacttcat gcctgaggat 1140

atctacgtgg agtggaccaa caatggcaag acagagctga actataagaa tacagagcca 1200

gtgctggaca gcgatggctc ctactttatg tatagcaagc tgagggtgga gaagaagaac 1260

tgggtggagc gcaattctta cagctgttcc gtggtgcacg agggcctgca caatcaccac 1320

accacaaagt ctttcagcag aacccccggc aag 1353

<210> 69

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК anti-mu CD20 LC

<400> 69

cagatcgtga tgagccagtc ccctgccatc ctgtccgcca gccctggcga gaaggtgaca 60

atgacctgca gggccagatc ctccgtgtcc tacatccact ggtaccagca gaagcccggc 120

agcagcccta agccctggat ctacgccacc agcaacctgg ccagcggcgt gcctggcaga 180

ttttccggct ccggcagcgg caccagctac agcctgacaa tcacaagggt ggaggccgag 240

gatgccgcca catactactg ccagcagtgg agctccaagc ctcccacctt cggcggcggc 300

accaagctgg agatcaagag gaccgacgcc gcccccaccg tgtccatctt tcccccttcc 360

tccgagcagc tgacctccgg cggcgcttcc gtggtgtgtt tcctgaataa tttctaccct 420

aaggatatca acgtgaagtg gaagatcgat ggcagcgaga ggcagaatgg cgtgctgaat 480

agctggaccg accaggacag caaggatagc acctacagca tgagctccac actgaccctg 540

acaaaggacg agtacgagag gcacaattcc tacacatgtg aggccacaca caagacctcc 600

acctccccta tcgtgaagtc cttcaacagg aacgagtgc 639

<210> 70

<211> 702

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательности ДНК mu IgG2a Fc DANG

<400> 70

gagcccagag gccccacaat caagccttgc cccccttgca aatgtcccgc ccccaatctg 60

ctgggaggcc cttccgtctt catcttcccc cccaagatca aggacgtgct gatgatctct 120

ctgagcccca tcgtgacatg cgtggtggtg gccgtgagcg aggacgatcc cgacgtgcag 180

atcagctggt tcgtcaacaa cgtggaggtg cataccgccc aaacacagac ccatagagag 240

gactacggct ccacactgag agtggtgtcc gctctgccca tccagcatca agactggatg 300

agcggcaagg agttcaagtg caaggtgaac aacaaggatc tgcccgcccc tatcgagagg 360

accatctcca agcccaaagg ctccgtgaga gctccccaag tgtatgtgct gcctcccccc 420

gaggaggaga tgaccaagaa gcaagtgaca ctgacatgca tggtgaccga tttcatgccc 480

gaagacatct acgtggagtg gaccaacaac ggcaagaccg agctcaacta caagaacacc 540

gagcccgtgc tcgacagcga cggcagctac ttcatgtaca gcaagctgag ggtcgagaag 600

aaaaactggg tggagaggaa cagctacagc tgtagcgtgg tgcacgaggg actgcacaac 660

caccatacca ccaagagctt ctccagaaca cccggcaagt ga 702

<210> 71

<211> 222

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HC

<400> 71

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val

210 215 220

<210> 72

<211> 257

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP scFv

<400> 72

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

145 150 155 160

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

165 170 175

Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

180 185 190

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

195 200 205

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

210 215 220

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

225 230 235 240

Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

245 250 255

Lys

<210> 73

<211> 518

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12

<400> 73

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515

<210> 74

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 p40

<400> 74

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 75

<211> 197

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 p35

<400> 75

Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu

1 5 10 15

His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys

20 25 30

Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp

35 40 45

His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu

50 55 60

Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr

65 70 75 80

Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe

85 90 95

Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr

100 105 110

Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys

115 120 125

Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu

130 135 140

Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser

145 150 155 160

Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu

165 170 175

Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser

180 185 190

Tyr Leu Asn Ala Ser

195

<210> 76

<211> 518

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut1

<400> 76

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Lys Arg Glu Ala Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515

<210> 77

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut1 p40

<400> 77

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Lys Arg Glu Ala Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 78

<211> 518

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut2

<400> 78

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Ala Arg Glu Ala Ala Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515

<210> 79

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu scIL-12 mut2 p40

<400> 79

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Ala Ser Ala Arg Glu Ala Ala Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 80

<211> 224

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu CD20 HC

<400> 80

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

<210> 81

<211> 361

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> (anti-hu FAP VH)2

<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

130 135 140

Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser

145 150 155 160

Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Ile His Trp Val

165 170 175

Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Asn Pro

180 185 190

Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr

195 200 205

Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser

210 215 220

Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Ile

225 230 235 240

Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

260 265 270

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

275 280 285

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

290 295 300

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

305 310 315 320

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

325 330 335

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

340 345 350

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val

355 360

<210> 82

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Fc DANG

<400> 82

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 83

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HC

<400> 83

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile

210

<210> 84

<211> 243

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP scFv

<400> 84

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

145 150 155 160

Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser

165 170 175

Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser

195 200 205

Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

210 215 220

Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys

<210> 85

<211> 521

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12

<400> 85

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Lys Lys

245 250 255

Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

515 520

<210> 86

<211> 313

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 p40

<400> 86

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Lys Lys

245 250 255

Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser

305 310

<210> 87

<211> 193

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 p35

<400> 87

Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg

1 5 10 15

Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys

20 25 30

Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile

35 40 45

Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu

50 55 60

His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr

65 70 75 80

Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu

85 90 95

Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe

100 105 110

Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile

115 120 125

Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu

130 135 140

Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala

145 150 155 160

Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe

165 170 175

Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser

180 185 190

Ala

<210> 88

<211> 521

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut1

<400> 88

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Ala Lys

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

515 520

<210> 89

<211> 313

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut1 p40

<400> 89

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Ala Lys

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser

305 310

<210> 90

<211> 521

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut2

<400> 90

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Ala Ala Ala

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro

325 330 335

Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp

340 345 350

Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala

355 360 365

Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu

370 375 380

Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala

385 390 395 400

Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln

405 410 415

Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp

420 425 430

Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln

435 440 445

Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala

450 455 460

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg

465 470 475 480

Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys

485 490 495

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn

500 505 510

Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

515 520

<210> 91

<211> 313

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu scIL-12 mut2 p40

<400> 91

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Glu Phe Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Ala Ala Ala

245 250 255

Glu Lys Met Ala Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser

305 310

<210> 92

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu CD20 HC

<400> 92

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Asn Tyr Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser

115 120 125

Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val

130 135 140

Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu

145 150 155 160

Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr

180 185 190

Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile

210 215

<210> 93

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> линкер 1

<400> 93

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 94

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> линкер 2

<400> 94

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 95

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> линкер 3

<400> 95

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 96

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HCDR1

<400> 96

Glu Tyr Thr Ile His

1 5

<210> 97

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HCDR2

<400> 97

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 98

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HCDR3

<400> 98

Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 99

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP LCDR1

<400> 99

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 100

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP LCDR2

<400> 100

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 101

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP LCDR3

<400> 101

Gln Gln Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 102

<211> 124

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP HCVR

<400> 102

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Arg Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 103

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-hu FAP LCVR

<400> 103

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 104

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HCDR1

<400> 104

Asn Asn Gly Ile Asn

1 5

<210> 105

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HCDR2

<400> 105

Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 106

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HCDR3

<400> 106

Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe

1 5

<210> 107

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP LCDR1

<400> 107

Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met His

1 5 10

<210> 108

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP LCDR2

<400> 108

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 109

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP LCDR3

<400> 109

Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

1 5

<210> 110

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP HCVR

<400> 110

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Thr Asn Thr Leu Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Leu Thr Ala Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 111

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> anti-mu FAP LCVR

<400> 111

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Phe Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Phe

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 112

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge

<400> 112

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

20

<210> 113

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge-core 1

<400> 113

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5 10

<210> 114

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge-core 2

<400> 114

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5

<210> 115

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge-core 3

<400> 115

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 116

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge-core 4

<400> 116

Cys Pro Pro Cys Pro

1 5

<210> 117

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge-core 5

<400> 117

Cys Pro Pro Cys

1

<210> 118

<211> 28

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IgG1 Hinge линкер

<400> 118

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

1 5 10 15

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

20 25

<210> 119

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IgG2a Hinge

<400> 119

Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro

1 5 10 15

<210> 120

<211> 26

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IgG2a Hinge линкер

<400> 120

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Arg Gly Pro Thr

1 5 10 15

Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro

20 25

<210> 121

<211> 328

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IL-12 p40 wt_AAD56386

<400> 121

Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu

1 5 10 15

Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val

20 25 30

Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu

35 40 45

Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln

50 55 60

Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys

65 70 75 80

Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val

85 90 95

Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp

100 105 110

Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe

115 120 125

Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp

130 135 140

Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg

145 150 155 160

Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser

165 170 175

Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu

180 185 190

Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile

195 200 205

Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr

210 215 220

Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn

225 230 235 240

Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp

245 250 255

Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr

260 265 270

Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg

275 280 285

Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala

290 295 300

Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser

305 310 315 320

Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

325

<210> 122

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IL-12 p35 wt_AAK84425

<400> 122

Met Cys Pro Ala Arg Ser Leu Leu Leu Val Ala Thr Leu Val Leu Leu

1 5 10 15

Asp His Leu Ser Leu Ala Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro

20 25 30

Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val

35 40 45

Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys

50 55 60

Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser

65 70 75 80

Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys

85 90 95

Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala

100 105 110

Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr

115 120 125

Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys

130 135 140

Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu

145 150 155 160

Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr

165 170 175

Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys

180 185 190

Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr

195 200 205

Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

210 215

<210> 123

<211> 335

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IL-12 p40 wt_AAA39296

<400> 123

Met Cys Pro Gln Lys Leu Thr Ile Ser Trp Phe Ala Ile Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Ser Pro Leu Met Ala Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val

20 25 30

Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu

35 40 45

Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln

50 55 60

Arg His Gly Val Ile Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys

65 70 75 80

Glu Phe Leu Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr

85 90 95

Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp

100 105 110

Ser Thr Glu Ile Leu Lys Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys

115 120 125

Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln

130 135 140

Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro

145 150 155 160

Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys

165 170 175

Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln

180 185 190

Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu

195 200 205

Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser

210 215 220

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

225 230 235 240

Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro

245 250 255

Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val

260 265 270

Arg Ile Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys

275 280 285

Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln

290 295 300

Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn

305 310 315 320

Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser

325 330 335

<210> 124

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mu IL-12 p35 wt_AAK39292

<400> 124

Met Cys Gln Ser Arg Tyr Leu Leu Phe Leu Ala Thr Leu Ala Leu Leu

1 5 10 15

Asn His Leu Ser Leu Ala Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg

20 25 30

Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val

35 40 45

Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp

50 55 60

Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr

65 70 75 80

Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg

85 90 95

Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr

100 105 110

Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys

115 120 125

Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His

130 135 140

Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp

145 150 155 160

Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys

165 170 175

Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys Leu Cys

180 185 190

Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn Arg Val

195 200 205

Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

210 215

<210> 125

<211> 252

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IL-12 p40_X1

<400> 125

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

245 250

<210> 126

<211> 42

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hu IL-12 p40_X2

<400> 126

Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys

1 5 10 15

Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser

20 25 30

Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

35 40

<210> 127

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> NG-641 HCDR1

<400> 127

Glu Tyr Thr Ile His

1 5

<210> 128

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> NG-641 HCDR2

<400> 128

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 129

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> NG-641 HCDR3

<400> 129

Arg Arg Ile Ala Tyr Gly Tyr Asp Glu Gly His Ala Met Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 130

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> NG-641 LCDR1

<400> 130

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 131

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> NG-641 LCDR2

<400> 131

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 132

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> NG-641 LCDR3

<400> 132

Gln Gln Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 133

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 28H1 HCDR1

<400> 133

Ser His Ala Met Ser

1 5

<210> 134

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 28H1 HCDR2

<400> 134

Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 135

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 28H1 HCDR3

<400> 135

Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr

1 5

<210> 136

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 28H1 LCDR1

<400> 136

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 137

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 28H1 LCDR2

<400> 137

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 138

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 28H1 LCDR3

<400> 138

Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro Pro Thr

1 5

<210> 139

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B9 HCDR1

<400> 139

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 140

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B9 HCDR2

<400> 140

Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 141

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B9 HCDR3

<400> 141

Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr

1 5

<210> 142

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B9 LCDR1

<400> 142

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 143

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B9 LCDR2

<400> 143

Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr

1 5

<210> 144

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B9 LCDR3

<400> 144

Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro Thr

1 5

<210> 145

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> OMTX-705 HCDR1

<400> 145

Glu Asn Ile Ile His

1 5

<210> 146

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> OMTX-705 HCDR2

<400> 146

Trp Phe His Pro Gly Ser Gly Ser Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 147

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> OMTX-705 HCDR3

<400> 147

His Gly Gly Thr Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 148

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> OMTX-705 LCDR1

<400> 148

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ala Tyr Ser Tyr Met His

1 5 10 15

<210> 149

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> OMTX-705 LCDR2

<400> 149

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 150

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> OMTX-705 LCDR3

<400> 150

Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 151

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3F2 HCDR1

<400> 151

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 152

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3F2 HCDR2

<400> 152

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 153

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3F2 HCDR3

<400> 153

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 154

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3F2 LCDR1

<400> 154

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 155

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3F2 LCDR2

<400> 155

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 156

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3F2 LCDR3

<400> 156

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 157

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4G8 HCDR1

<400> 157

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 158

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4G8 HCDR2

<400> 158

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 159

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4G8 HCDR3

<400> 159

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Leu Gly

1 5

<210> 160

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4G8 LCDR1

<400> 160

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 161

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4G8 LCDR2

<400> 161

Ile Gly Ala Ser Thr Arg Ala

1 5

<210> 162

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4G8 LCDR3

<400> 162

Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro Pro

1 5

<210> 163

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3D9 HCDR1

<400> 163

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 164

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3D9 HCDR2

<400> 164

Ala Ile Gly Val Ser Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 165

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3D9 HCDR3

<400> 165

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Leu Gly

1 5

<210> 166

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3D9 LCDR1

<400> 166

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 167

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3D9 LCDR2

<400> 167

Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala

1 5

<210> 168

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3D9 LCDR3

<400> 168

Cys Gln Gln Gly Gln Leu Ile Pro Pro

1 5

<210> 169

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B3 HCDR1

<400> 169

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 170

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B3 HCDR2

<400> 170

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 171

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B3 HCDR3

<400> 171

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Leu Gly

1 5

<210> 172

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B3 LCDR1

<400> 172

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu

1 5 10

<210> 173

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B3 LCDR2

<400> 173

Tyr Gly Ala Tyr Ile Arg Ala

1 5

<210> 174

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 4B3 LCDR3

<400> 174

Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro Pro

1 5

<210> 175

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 19G1 HCDR1

<400> 175

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 176

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 19G1 HCDR2

<400> 176

Ala Ile Ile Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 177

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 19G1 HCDR3

<400> 177

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 178

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 19G1 LCDR1

<400> 178

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 179

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 19G1 LCDR2

<400> 179

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 180

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 19G1 LCDR3

<400> 180

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 181

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20G8 HCDR1

<400> 181

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 182

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20G8 HCDR2

<400> 182

Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 183

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20G8 HCDR3

<400> 183

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 184

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20G8 LCDR1

<400> 184

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 185

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20G8 LCDR2

<400> 185

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 186

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20G8 LCDR3

<400> 186

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 187

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5B8 HCDR1

<400> 187

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 188

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5B8 HCDR2

<400> 188

Ala Ile Trp Gly Gly Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 189

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5B8 HCDR3

<400> 189

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 190

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5B8 LCDR1

<400> 190

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 191

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5B8 LCDR2

<400> 191

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 192

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5B8 LCDR3

<400> 192

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 193

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5F1 HCDR1

<400> 193

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 194

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5F1 HCDR2

<400> 194

Ala Ile Ile Ser Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 195

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5F1 HCDR3

<400> 195

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 196

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5F1 LCDR1

<400> 196

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 197

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5F1 LCDR2

<400> 197

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 198

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5F1 LCDR3

<400> 198

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 199

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 14B3 HCDR1

<400> 199

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 200

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 14B3 HCDR2

<400> 200

Ala Ile Leu Ala Ser Gly Ala Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 201

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 14B3 HCDR3

<400> 201

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 202

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 14B3 LCDR1

<400> 202

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 203

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 14B3 LCDR2

<400> 203

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 204

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 14B3 LCDR3

<400> 204

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 205

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F1 HCDR1

<400> 205

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 206

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F1 HCDR2

<400> 206

Gly Ile Ile Gly Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 207

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F1 HCDR3

<400> 207

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 208

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F1 LCDR1

<400> 208

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 209

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F1 LCDR2

<400> 209

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 210

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F1 LCDR3

<400> 210

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 211

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F8 HCDR1

<400> 211

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 212

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F8 HCDR2

<400> 212

Ala Ile Leu Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 213

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F8 HCDR3

<400> 213

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 214

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F8 LCDR1

<400> 214

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 215

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F8 LCDR2

<400> 215

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 216

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 16F8 LCDR3

<400> 216

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 217

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> O3C9 HCDR1

<400> 217

Ser Phe Ala Met Ser

1 5

<210> 218

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> O3C9 HCDR2

<400> 218

Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 219

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> O3C9 HCDR3

<400> 219

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 220

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> O3C9 LCDR1

<400> 220

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 221

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> O3C9 LCDR2

<400> 221

Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala

1 5

<210> 222

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> O3C9 LCDR3

<400> 222

Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro

1 5

<210> 223

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 22A3 HCDR1

<400> 223

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 224

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 22A3 HCDR2

<400> 224

Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ser Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

<210> 225

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 22A3 HCDR3

<400> 225

Tyr Cys Ala Lys Gly Trp Phe Gly

1 5

<210> 226

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 22A3 LCDR1

<400> 226

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu

1 5 10

<210> 227