ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к слитому белку, который включает вариант GDF15 с повышенной физиологической активностью и in vivo стабильностью, и к содержащей его фармацевтической композиции.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Фактор дифференцировки роста-15 (GDF15) также называют ингибирующим макрофаги цитокином-1 (MIC-1), плацентарным костным морфогенетическим белком (PBMP) или геном-1, активируемым нестероидными противовоспалительными препаратами (NAG-1), и представляет собой белок, который является членом суперсемейства трансформирующего фактора роста-бета (TGF-β).
Недавно в результате проведенных исследований было показано, что GDF15 ингибирует потребление пищи за счет связывания с альфа-подобным рецептором семейства GDNF (GFRAL) и протоонкогеном ret (RET), которые специфически экспрессируются в тканях головного мозга, и, таким образом, приводит к потере массы тела (Tsai VW et al., PLoS One 2013; 8(2):e55174; US 8,192,735). Кроме того, в нескольких исследованиях было показано, что GDF15, при введении различным животным с ожирением, использованным в качестве моделей, приводит к эффективному снижению массы тела, и дополнительно к этому демонстрирует метаболические преимущества, такие как снижение уровня глюкозы в крови, улучшение уровня липидов и улучшение резистентности к инсулину.
Однако использование GDF15 дикого типа в медицинских целях является проблематичным, поскольку из-за его короткого периода полувыведения in vivo требуется очень частое введения. Соответственно, предпринимаются усилия по разработке препаратов длительного действия, предназначенных для увеличения периода полувыведения GDF15 in vivo.
Между тем, среди нескольких методов получения составов пролонгированного действия наиболее широко используется метод слияния с Fc иммуноглобулина, поскольку он приводит к увеличению периода полувыведения in vivo, не вызывая особых опасений относительно побочных эффектов, таких как токсичность или индукция иммунных ответов. Для создания терапевтического лекарственного средства длительного действия на основе белка GDF15, слитого с Fc иммуноглобулина, необходимо выполнение следующих нескольких условий.
Во-первых, следует минимизировать снижение активности in vitro, вызванное слиянием. Известно, что активность слитых белков GDF15 сильно варьирует в зависимости от сайта слияния. Следовательно, активность Fc-слитых белков GDF15 с введенными в GDF15 мутациями может варьировать в зависимости от того, произошло ли слияние или от сайта слияния. Во-вторых, слияние должно приводить к увеличению периода полувыведения in vivo, и увеличенный период полувыведения in vivo должен отражать фармакокинетический профиль, позволяющий осуществлять введение людям с интервалом один раз в неделю. В-третьих, учитывая, что большинство биофармацевтических препаратов могут вызывать иммуногенность у пациентов, следует минимизировать риск иммуногенности, вызванной линкером слияния или мутацией. В-четвертых, не должно быть проблем со стабильностью, связанных с сайтом слияния или введенной мутацией. В-пятых, поскольку в зависимости от изотипов слитого иммуноглобулина может возникнуть нежелательный иммунный ответ, требуются альтернативные варианты.
В ходе работы по улучшению физиологической активности и стабильности GDF15, авторы настоящего изобретения определили, что при введении мутации в конкретное место GDF15 и связывании Fc-области иммуноглобулина в этом месте GDF15 демонстрирует повышенную активность и увеличенный период полувыведения in vivo, таким образом, обеспечивая достижение цели настоящего изобретения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая задача
Целью настоящего изобретения является предоставление варианта GDF15 с улучшенной физиологической активностью и стабильностью, и слитого белка GDF15 длительного действия.
Другой целью настоящего изобретения является создание фармацевтической композиции для профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома, содержащей в качестве активного ингредиента вариант GDF15 или слитый белок GDF15 длительного действия.
Решение технической задачи
Для достижения вышеуказанных целей в одном из аспектов настоящего изобретения предлагается вариант GDF15, представленный формулой (I).
N-концевой домен удлинения - коровый домен (I)
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается слитый белок GDF15 длительного действия, в котором вариант GDF15 связан с Fc человеческого IgG или его вариантом.
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается димер слитого белка, содержащий два слитых белка GDF15 длительного действия.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предлагается выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариант GDF15 или слитый белок GDF15.
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предлагается клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии.
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция для профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома, содержащая в качестве активного ингредиента вариант GDF15, слитый белок GDF15 длительного действия или димер слитого белка.
Полезные эффекты изобретения
Вариант GDF15 или слитый белок GDF15 длительного действия по настоящему изобретению превосходит обычные варианты GDF15 с точки зрения эффективности in vitro, сродства связывания с рецепторами GDF15 и эффекта потери массы тела. Таким образом, фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента вариант GDF15, слитый белок GDF15 длительного действия или димер слитого белка по настоящему изобретению, вызывает подавление аппетита и, таким образом, может быть эффективно использована в качестве терапевтического средства для лечения метаболических заболеваний или ожирения.
Кроме того, фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активного ингредиента вариант GDF15, слитый белок GDF15 длительного действия или димер слитого белка, можно использовать в комбинированной терапии или т.п. с химическими препаратами и другими терапевтическими средствами для лечения метаболических заболеваний, и можно эффективно использовать в комбинированной терапии с обычными терапевтическими средствами для лечения метаболических заболеваний или ожирения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM4, FM4-1, FM4-2 и FM4-3), в которых аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 56 в зрелом GDF15, и/или аспарагиновая кислота (D), представляющая собой аминокислоту в положении 103 в зрелом GDF15, заменена другой аминокислотой.
На фиг. 2 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM9, FM13, FM14, FM15 и FM16), в которых серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 64 в зрелом GDF15, заменен другой аминокислотой.
На фиг. 3 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM4, FM5 и FM9).
На фиг. 4 показаны результаты сравнения сродства связывания слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM4, FM5 и FM9) с рецепторами GDF15 (GFRAL и RET).
На фиг. 5 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM1 и FM10).
На фиг. 6 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM2 и FM11).
На фиг. 7 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM3 и FM12).
На фиг. 8 показаны результаты сравнения сродства связывания слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM10 и FM11) с рецепторами GDF15 (GFRAL и RET).
На фиг. 9 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM9-1, FM9-2, FM9-3, FM9-4, FM9-5 и FM9-6) в зависимости от типа и длины линкера.
На фиг. 10 показаны результаты сравнения активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM11-1, FM11-2, FM11-3, FM11-4, FM11-5 и FM11-6) в зависимости от типа и длины линкера.
На фиг. 11 показаны результаты сравнения слитых белков GDF15 длительного действия (димеры; FM9-4, FM9-6, FM11-4 и FM11-6) по их эффекту на изменение массы тела (%) у мышей с ожирением, индуцированным диетой (мышей DIO), при повторном введении.
На фиг. 12 показаны результаты сравнения слитых белков GDF15 длительного действия (димеры; FM9-6) по их эффекту на изменение массы тела (%) у мышей с ожирением, индуцированным диетой (мышей DIO), при однократном введении.
На фиг. 13 показаны результаты сравнения слитых белков GDF15 длительного действия (димеры; FM9-6) по их эффекту на изменение массы тела (%) у мышей ob/ob при повторном введении.
Наилучший режим осуществления изобретения
Ниже приведено более подробное описание настоящего изобретения.
Вариант GDF15
В одном из аспектов настоящего изобретения предлагается вариант GDF15, представленный формулой (I):
N-концевой домен удлинения - коровый домен (I).
В формуле (I)
N-концевой домен удлинения представляет собой полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 3-5; и
коровый домен представляет собой полипептид, представленный SEQ ID NO: 20, или полипептид, полученный из SEQ ID NO: 20, в котором любая одна аминокислота аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в положениях 15, 50, 58, 97 и их комбинаций, заменена другой аминокислотой;
где аргинин (R), представляющий собой аминокислоту в положении 15, может быть заменен аланином (A), аспарагиновой кислотой (D), аспарагином (N), цистеином (C), глутаминовой кислотой (E), глутамином (Q), глицином (G), гистидином (H), изолейцином (I), лейцином (L), лизином (K), метионином (M), фенилаланином (F), пролином (P), серином (S), треонином (T), триптофаном (W), тирозином (Y) или валином (V),
аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 50, может быть заменен аланином, аргинином (R), аспарагиновой кислотой, цистеином, глутаминовой кислотой, глутамином, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, серином, треонином, триптофаном, тирозином или валином,
серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58, может быть заменен аланином, аргинином, аспарагиновой кислотой, аспарагином, цистеином, глутаминовой кислотой, глутамином, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, треонином, триптофаном, тирозином или валином, и
аспарагиновая кислота (D), представляющая собой аминокислоту в положении 97, может быть заменена аланином, аргинином, аспарагиновой кислотой, цистеином, глутаминовой кислотой, глутамином, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, серином, треонином, триптофаном, тирозином или валином.
В контексте настоящего описания термин «коровый домен» относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность, соответствующую положениям 7-112 аминокислотной последовательности GDF15, представленной SEQ ID NO: 1, включая полипептид, представленный SEQ ID NO: 20, или полипептид, полученный из SEQ ID NO: 20, в котором любая одна аминокислота аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в положениях 15, 50, 58, 97 и их комбинаций, заменена другой аминокислотой. Первый коровый домен может состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В частности, коровый домен может включать любой вариант, выбранный из группы, состоящей из следующих вариантов (1)-(6):
(1) вариант, в котором аргинин (R), представляющий собой аминокислоту в положении 15 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аспарагином (N);
(2) вариант, в котором аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 50 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен лейцином (L);
(3) вариант, в котором серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен лизином (K), аргинином (R), аспарагином (N), аспарагиновой кислотой (D), глутаминовой кислотой (E), цистеином (C) или лейцином (L);
(4) вариант, в котором аспарагиновая кислота (D), представляющая собой аминокислоту в положении 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена лейцином (L);
(5) вариант, в котором каждая аминокислота из аспарагина (N), представляющего собой аминокислоту в положении 50 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, и аспарагиновой кислоты (D), представляющей собой аминокислоту в положении 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена цистеином (C) или серином (S); и
(6) вариант, в котором аргинин (R), представляющий собой аминокислоту в положении 15 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аспарагином (N), и серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен лизином (К) или аргинином (R).
В контексте настоящего описания коровый домен может состоять из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 6-19.
N-концевой домен удлинения представляет собой домен, связанный с N-концом вышеописанного корового домена, и может представлять собой полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 3-5.
В контексте настоящего описания выражение «ΔN2» также может быть обозначено как «дельта N2», что означает, что в аминокислотной последовательности человеческого GDF15, представленной SEQ ID NO: 1, удалены аминокислоты в положениях 1 и 2. В случае, когда ΔN2 экспрессируется в виде N-концевого домена удлинения, он может быть обозначен как «NGDH».
В контексте настоящего описания выражение «ΔN3, WS вставка, G4N, D5S, H6T» также может быть обозначено как «дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T», что означает, что в аминокислотной последовательности человеческого GDF15, представленной SEQ ID NO: 1, удалены аминокислоты в положениях с 1 по 3 и вставлены триптофан и серин; глицин, представляющий собой аминокислоту в положении 4, заменен аспарагином; аспарагиновая кислота, представляющая собой аминокислоту в положении 5, заменена серином; и гистидин, представляющий собой аминокислоту в положении 6, заменен треонином. В случае, когда «ΔN3, WS вставка, G4N, D5S, H6T» экспрессируется в виде N-концевого домена удлинения, он может быть обозначен как «WSNST».
В контексте настоящего описания выражение «ΔN3, G4N, D5S, H6T» также может быть обозначено как «дельта N3, G4N, D5S, H6T», что означает, что в аминокислотной последовательности человеческого GDF15, представленной SEQ ID NO: 1, аминокислоты в положениях с 1 по 3 удалены; глицин, представляющий собой аминокислоту в положении 4, заменен аспарагином; аспарагиновая кислота, представляющая собой аминокислоту в положении 5, заменена серином; и гистидин, представляющий собой аминокислоту в положении 6, заменен треонином. В случае, когда «ΔN3, G4N, D5S, H6T» экспрессируется в виде N-концевого домена удлинения, он может быть обозначен как «NST».
Вариант GDF15 может включать N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 3, и коровый домен, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 6-20. Кроме того, вариант GDF15 может включать N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 4, и коровый домен, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 6-20. Кроме того, вариант GDF15 может включать N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 5, и коровый домен, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 6-19.
Предпочтительно вариант GDF15 может включать N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 3, и коровый домен, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 8, 9 или 20. Кроме того, вариант GDF15 может включать N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 4, и коровый домен, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 8, 9 или 20. Кроме того, вариант GDF15 может включать N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 5, и коровый домен, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 6, 7 и 10-19. В этом случае вариант GDF15 может состоять из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 21-39.
Слитый белок GDF15 длительного действия
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается слитый белок GDF15 длительного действия, в котором вариант GDF15 связан с Fc человеческого IgG или его вариантом.
Fc человеческого IgG или его вариант могут представлять собой Fc IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или их вариант. В частности, Fc человеческого IgG или его вариант может представлять собой Fc человеческого IgG1 или его вариант, причем Fc человеческого IgG1 может состоять из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 41.
Fc человеческого IgG или его вариант может представлять собой непрерывную аминокислотную последовательность, которая на 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 41, или фрагмент Fc, включающий домен СН3. В некоторых вариантах осуществления Fc человеческого IgG или его вариант может представлять собой непрерывную аминокислотную последовательность, которая на 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 41, или фрагмент Fc, включающий домен СН2 и домен СН3. В некоторых вариантах осуществления Fc человеческого IgG или его вариант может представлять собой непрерывную аминокислотную последовательность, которая на 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 41, или фрагмент Fc, включающий неполный шарнирный участок, домен СН2 и домен СН3. В некоторых вариантах осуществления Fc человеческого IgG или его вариант может иметь аминокислотную последовательность, которая на 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 41.
Fc IgG или его вариант включает первый полипептид, включающий последовательность Fc IgG1, где последовательность Fc IgG включает последовательность CH3, включающую по меньшей мере одну сконструированную выпуклость; и второй полипептид, включающий последовательность Fc IgG1, где последовательность Fc IgG включает последовательность CH3, включающую по меньшей мере одну сконструированную полость, причем первый полипептид димеризуется со вторым полипептидом путем размещения выпуклости первого полипептида в полости второго полипептида.
В частности, первый полипептид может включать сконструированную выпуклость, которая позволяет связываться с другим полипептидом Fc IgG (например, вторым полипептидом), включающим сконструированную полость. Второй полипептид может включать сконструированную полость, которая позволяет связываться с другим полипептидом Fc IgG (например, первым полипептидом), включающим сконструированную выпуклость. Кроме того, и выпуклость первого полипептида, и полость второго полипептида могут быть созданы в домене СН3 Fc IgG. В этом случае выпуклость первого полипептида и полость второго полипептида не соединены и не связаны с вариантом GDF15.
Сконструированная выпуклость может включать по меньшей мере одну замену в аминокислотной последовательности Fc человеческого IgG1, где аминокислотная последовательность представлена SEQ ID NO: 41. В настоящем описании положения аминокислот пронумерованы в соответствии с нумерацией ЕU. Замена может находиться в положении, выбранном из группы, состоящей из аминокислотных остатков 347, 366 и 394. Например, замена может быть любой, выбранной из группы, состоящей из Q347W/Y, T366W/Y, T394W/Y и их комбинации. Кроме того, сконструированная полость может включать по меньшей мере одну замену в соответствующих аминокислотах в последовательности Fc человеческого IgG1, причем замена может присутствовать в положении, выбранном из группы, состоящей из аминокислотных остатков 366, 368, 394, 405 и 407. Например, замена может быть любой, выбранной из группы, состоящей из T366S, L368A, T394S, F405T/V/A, Y407T/V/A и их комбинаций.
Предпочтительно выпуклость может включать замену T366W/Y, а полость может включать любую замену, выбранную из группы, состоящей из T366S, L368A, Y407T/V/A и их комбинаций. Например, выпуклость может включать замену T366W/Y, а полость может включать замену Y407T/V/A. Кроме того, выпуклость может включать замену T366Y, а полость может включать замену Y407T. Кроме того, выпуклость может включать замену T366W, а полость может включать замену Y407A. Кроме того, выпуклость может включать замену T394Y, а полость может включать замену Y407T.
Первый полипептид может состоять из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 42, 44 и 46, и второй полипептид может состоять из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 43, 45 и 47.
Выпуклость называется «выступом» («knob»), а полость называется «впадиной» («hole»).
Первый полипептид представляет собой «выступ» Fc, включающий сконструированную выпуклость, а второй полипептид представляет собой «впадину» Fc, включающую сконтруированную выпуклость. Первый и второй полипептиды могут быть физически связаны друг с другом посредством нековалентных взаимодействий (например, гидрофобных эффектов, таких как гидрофобное взаимодействие между областями Fc с выпуклостью и полостью), ковалентных связей (например, дисульфидных связей, таких как одна или две, или более дисульфидных связей между шарнирными областями Fc в первом и втором полипептидах), или посредством того и другого.
В контексте настоящего описания термин «димер» относится к белковому комплексу, включающему по меньшей мере два полипептида. Каждый из этих полипептидов включает N-конец и С-конец. По меньшей мере два полипептида могут быть связаны друг с другом посредством ковалентных или нековалентных (например, электростатических, π-эффектов, сил Ван-дер-Ваальса и гидрофобных эффектов) взаимодействий или обоими типами взаимодействий. Два полипептида могут иметь одинаковую аминокислотную последовательность или могут отличаться друг от друга. В случае, когда два полипептида идентичны друг другу, димер называют (гомо)димером; и в случае, когда два полипептида отличаются друг от друга, димер называют гетеродимером.
Fc человеческого IgG или его вариант может представлять собой гетеродимер, включающий первый полипептид и второй полипептид; причем гетеродимер может представлять собой гетеродимер, образованный из A-1 (SEQ ID NO: 42) и A-2 (SEQ ID NO: 43), гетеродимер, образованный из B-1 (SEQ ID NO: 44) и B-2 (SEQ ID NO: 45), или гетеродимер, образованный из C-1 (SEQ ID NO: 46) и C-2 (SEQ ID NO: 47).
Кроме того, Fc IgG или его вариант может включать дополнительную мутацию для улучшения свойств слитого белка GDF15 длительного действия. В частности, гетеродимер, состоящий из первого полипептида и второго полипептида, может включать дополнительную мутацию.
Например, Fc IgG или его вариант могут включать мутацию(и), которая(ые) отменяет(ют) (например, уменьшает или устраняет) эффекторную функцию IgG. В частности, последовательность-партнер Fc может включать мутацию(и), которая(ые) устраняет(ют) эффекторные функции, такие как комплемент-зависимая цитотоксичность (CDC), антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC) и антителозависимый клеточный фагоцитоз (ADCP). Например, в Fc IgG, образованный из A-1 и A-2, или его вариант (который представляет собой гетеродимер) могут быть введены мутации E233A и L235A для устранения эффекторной функции IgG1. Гетеродимер, образованный из B-1 и B-2, который включает мутацию N297A, может быть использован для удаления N-связанных гликанов. В гетеродимер, образованный из С-1 и С-2, могут быть введены мутации L234A, L235A и N297A для устранения эффекторной функции IgG1 и N-связанных гликанов.
Связывание между вариантом GDF15 и Fc IgG или его вариантом может быть таким, при котором С-конец первого полипептида или С-конец второго полипептида в Fc IgG или его варианте связывается с N-концом варианта GDF15. Кроме того, связывание между вариантом GDF15 и Fc IgG или его вариантом может быть таким, при котором N-конец первого полипептида или N-конец второго полипептида в Fc IgG или его варианте связывается с С-концом варианта GDF15. Предпочтительно связывание между вариантом GDF15 и Fc IgG или его вариантом может быть таким, при котором С-конец первого полипептида в Fc IgG или его варианта связывается с N-концом варианта GDF15.
Кроме того, связывание между вариантом GDF15 и Fc IgG или его вариантом может осуществляться с помощью линкера. Линкер может представлять собой пептид, состоящий из 10-50 аминокислотных остатков, включая остатки глицина, серина, аланина и глутаминовой кислоты. Линкер может включать (G4S)n, где n может быть целым числом от 1 до 10 или целым числом от 2 до 7. Например, n может быть равно 2, 3, 4, 5, 6 или 7. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения используется линкер, включающий (G4S)5, который является случаем, когда n представляет собой целое число, равное 5.
В качестве примера подходящего линкера, отличного от линкера, включающего (G4S)n, может быть упомянут линкер, включающий GS(G4S)n, GS(EEEA)n, (EEEA)n, GS(EAAAK)n, (EAAAK)n или GSGGSS(PT)n, где n может быть целым числом от 1 до 10. Однако подходящий линкер этим не ограничен. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения используется линкер, включающий GS(EEEA)6, который является случаем, когда n представляет собой целое число, равное 6, или линкер, включающий GS(EAAAK)5, который является случаем, когда n представляет собой целое число, равное 5.
В частности, линкер может представлять собой GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 48), GSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 92), GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 93), GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 94), GSEEEAEEEAEEEAEEEAEEEAEEEA (SEQ ID NO: 95), GSGGSSPTPTPTPTPTPTPTPTPTPT (SEQ ID NO: 96) или GSEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK (SEQ ID NO: 97). Предпочтительно, линкер может представлять собой GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 48), GSEEEAEEEAEEEAEEEAEEEAEEEA (SEQ ID NO: 95) или GSEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK (SEQ ID NO: 97).
Слитый белок GDF15 длительного действия включает один вариант GDF15 на гетеродимер, состоящий из первого полипептида и второго полипептида. Вариант GDF15 может включать по меньшей мере один N-связанный гликан.
Слитый белок GDF15 длительного действия может включать i) вариант GDF15, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 21-39, ii) первый полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 42, 44 и 46, и iii) второй полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 43, 45 и 47.
Предпочтительно слитый белок GDF15 длительного действия может включать i) вариант GDF15, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 21-39, ii) линкер, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 48, iii) первый полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 42, и iv) второй полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43.
Также предпочтительным является слитый белок GDF15 длительного действия, который может включать i) вариант GDF15, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 21-39, ii) линкер, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 92-97, iii) первый полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46, и iv) второй полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
Димер слитого белка
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается димер слитого белка, содержащий два слитых белка GDF15 длительного действия. В частности, два слитых белка GDF15 длительного действия димеризованы посредством взаимодействия GDF15-GDF15 с образованием «димера слитого белка».
Молекула нуклеиновой кислоты, вектор экспрессии и клетка-хозяин
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариант GDF15 или слитый белок GDF15 длительного действия.
В контексте настоящего описания термин «выделенная молекула нуклеиновой кислоты» относится к молекуле нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, которая, в случае выделения указанной целой нуклеиновой кислоты из исходных клеток, отделена от по меньшей мере примерно 50% белков, липидов, углеводов или других материалов, с которыми она встречается в природе; функционально связана с полинуклеотидом, с которым она не связана в природе; или не встречается в природе как часть более крупной полинуклеотидной последовательности. В частности, выделенная молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению по существу свободна от каких-либо других молекул или других веществ, загрязняющих нуклеиновую кислоту, которые встречаются в ее естественной среде и могут мешать ее применению в производстве полипептидов или ее применению в терапевтических, диагностических, профилактических, или исследовательских целях.
В контексте настоящего описания выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариант GDF15 или слитый белок GDF15 длительного действия, может иметь разные последовательности вследствие избыточности кодонов. Кроме того, выделенная молекула нуклеиновой кислоты может быть соответствующим образом модифицирована или может иметь нуклеотид, добавленный к N-концу или С-концу, в зависимости от целей, при условии, что она может продуцировать вариант GDF15 или слитый белок GDF15 длительного действия.
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается вектор экспрессии, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариант GDF15 или слитый белок GDF15 длительного действия.
В контексте настоящего описания термин «вектор экспрессии» относится к вектору, подходящему для трансформации клетки-хозяина и содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, которая направляет или контролирует экспрессию встроенной последовательности гетерологичной нуклеиновой кислоты. Вектор включает линейные нуклеиновые кислоты, плазмиды, фагемиды, космиды, РНК-векторы, вирусные векторы и их аналоги. Примеры вирусного вектора включают, без ограничения, ретровирус, аденовирус и аденоассоциированный вирус.
В контексте настоящего описания термин «экспрессия гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты» или «экспрессия» целевого белка относится к транскрипции встроенной последовательности ДНК, трансляции транскрипта мРНК и получению продукта слитого белка, антитела или фрагмент антитела.
Полезным вектором экспрессии может быть RcCMV (Invitrogen, Carlsbad) или его вариант. Полезный вектор экспрессии может включать промотор цитомегаловируса человека (CMV) для стимуляции непрерывной транскрипции гена-мишени в клетках млекопитающих и сигнальную последовательность полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота для повышения уровня посттранскрипционной стабильности РНК.
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии.
В контексте настоящего описания термин «клетка-хозяин» относится к прокариотической или эукариотической клетке, в которую может быть введен рекомбинантный вектор экспрессии. В контексте настоящего описания термин «трансформированный» или «трансфицированный» означает введение нуклеиновой кислоты (например, вектора) в клетку несколькими способами, известными в данной области.
Клетка-хозяин может быть трансформирована или трансфицирована последовательностью ДНК по настоящему изобретению и может быть использована для экспрессии и/или секреции целевого белка. Примеры клеток-хозяев, которые можно использовать в настоящем изобретении, могут включать иммортализованные гибридомные клетки, клетки миеломы NS/0, клетки 293, клетки яичника китайского хомячка (CHO), клетки HeLa, клетки CAP (клетки, полученные из амниотической жидкости человека) и клетки COS.
Фармацевтическая композиция
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция для профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома, содержащая в качестве активного ингредиента вариант GDF15, слитый белок GDF15 длительного действия или димер слитого белка.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена любым путем. Композицию по настоящему изобретению можно вводить животному либо непосредственно (например, местно, путем инъекции, имплантации или локального введения в участок ткани), либо системно (например, путем парентерального или перорального введения) с помощью любых подходящих средств. В случае, когда композицию по настоящему изобретению вводят парентерально, например, путем внутривенного, подкожного, офтальмологического, внутрибрюшинного, внутримышечного, ректального, интраорбитального, интрацеребрального, внутричерепного, интраспинального, внутрижелудочкового, подоболочечного, интрацистернального, интракапсулярного, интраназального или аэрозольного введения, композиция может быть водной или включать часть в виде суспензии или раствора, физиологически совместимого с жидкостями организма. Соответственно, поскольку носитель или среда является физиологически совместимой, она может быть добавлена в композицию и доставлена в организм пациента. Таким образом, как правило, в качестве носителя в препараты может быть включен физиологический раствор, аналогичный жидкости организма.
Кроме того, частота введения может варьировать в зависимости от фармакокинетических параметров варианта GDF15 в используемом составе. Как правило, врачи вводят фармацевтическую композицию до тех пор, пока ее доза не достигнет дозы, обеспечивающей желаемый эффект. Таким образом, фармацевтическую композицию можно вводить в виде разовой дозы или в виде двух или более доз (которые могут содержать, или не содержать, равное количество целевого слитого белка) с временными интервалами, или ее можно вводить в виде непрерывной инфузии через имплантируемое устройство или катетер. Дальнейшее уточнение соответствующей дозы обычно осуществляется специалистами в данной области и входит в объем обычно выполняемых ими задач.
Кроме того, стандартная доза слитого белка для человека находится в пределах от 0,01 мкг до 100 мг/кг массы тела и, в частности, от 1 мкг до 10 мг/кг массы тела. Хотя указанное выше количество является оптимальным количеством, оно может варьировать в зависимости от заболевания, подлежащего лечению, или наличия или отсутствия неблагоприятных эффектов. Оптимальную дозу можно определить с помощью обычного эксперимента. Введение слитого белка можно осуществлять в виде периодических болюсных инъекций или непрерывных внутривенных, подкожных или внутрибрюшинных введений из внешнего резервуара (например, внутривенного мешка) или внутреннего резервуара (например, биоразлагаемого имплантата).
Кроме того, слитый белок по настоящему изобретению можно вводить субъекту-реципиенту вместе с другими биологически активными молекулами. Однако оптимальная комбинация слитого белка и других молекул, а также лекарственных форм и их точных доз может быть определена с помощью обычных экспериментов, хорошо известных в данной области.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предлагается применение варианта GDF15, слитого белка GDF15 длительного действия или димера слитого белка для профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома.
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается применение варианта GDF15, слитого белка GDF15 длительного действия или димера слитого белка для производства лекарственного средства для профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предлагается способ профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома, включающий этап введения индивидууму варианта GDF15, слитого белка GDF15 длительного действия или димера слитого белка.
Доза, частота введения и способ введения варианта GDF15, слитого белка GDF15 длительного действия или димера слитого белка являются такими, как описано выше. Индивидуум может быть индивидуумом, страдающим диабетом, ожирением, дислипидемией или метаболическим синдромом. Кроме того, индивидуум может быть млекопитающим, предпочтительно человеком.
Варианты осуществления изобретения
Далее, для лучшего понимания настоящего изобретения, приведено более подробное описание изобретения посредством примеров. Однако примеры, согласно настоящему изобретению, могут быть модифицированы различными способами, и объем настоящего изобретения не следует рассматривать как ограниченный приведенными ниже примерами.
Пример 1: Получение слитого белка GDF15 длительного действия
Пример 1.1: Клонирование генов
Как правило, при слиянии вещества с Fc длительного действия или альбумином для увеличения периода его полувыведения слияние приводит к снижению активности вещества. Для улучшения активности были разработаны различные варианты GDF15.
Сначала получали первые полипептиды путем замены соответствующих аминокислот в GDF15 в положениях 32, 51, 56, 60, 64, 90, 92, 93, 97, 101 и 103, которые, по прогнозам, согласно результатам анализа трехмерной структуры GDF15, оказывают большое влияние на активность белка, и связывания полученных GDF15 с Fc_knob IgG1, и эти первые полипептиды показаны в Таблице 1 ниже.
В частности, для получения первого полипептида (серии FM), имеющего структуру Fc_knob-(G4S)5-вариант GDF15, и второго полипептида, имеющего структуру Fc_hole, осуществляли клонирование гена с использованием вектора экспрессии pcDNA3.3 (Invitrogen), который включал ген, кодирующий первый полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 49, 60, 65 и 69-90, и ген, кодирующий второй полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43. В этом случае нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 43, 49, 60, 65 и 69-90, синтезировали в Macrogen, Inc. по запросу.
Пример 1.2: Экспрессия и очистка слитого белка GDF15 длительного действия (димера)
Вектор экспрессии pcDNA3.3, клонированный в примере 1.1, временно трансфицировали в клеточную линию ExpiCHO (Invitrogen). Затем, на 8-й день, культуру клеток собирали и очищали. Для очистки первого полипептида и второго полипептида в собранной жидкости культуры клеток (HCCF) выполняли аффинную очистку с использованием смолы с белком А.
В частности, HCCF наносили на смолу MabSelect SuRe с белком A (GE Healthcare), уравновешенную 1× PBS (pH 7,4), для индукции связывания. После завершения связывания между первым полипептидом и вторым полипептидом смолу MabSelect SuRe с белком A промывали 1× PBS (pH 7,4). Затем выполняли элюцию 0,1М раствором глицина (pH 3,0) с получением конечного вещества.
Первый полипептид и второй полипептид нейтрализовали до величины pH, равной примерно 8,0, с помощью 1М раствора Tris-HCl. Первый полипептид и второй полипептид были полностью димеризованы в результате взаимодействия «выступ-во-впадину», и полученный продукт был назван «слитым белком GDF15 длительного действия». Две молекулы слитого белка GDF15 длительного действия снова димеризовали посредством взаимодействия GDF15-GDF15, и полученный продукт был назван «димером слитого белка».
Пример 2: Измерение активности слитого белка GDF15 длительного действия (димера)
Используя в качестве контроля слитый белок, включающий зрелый GDF15, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49, полученные в примере 1 слитые белки GDF15 длительного действия сравнивали в отношении активности GDF15. Активность GDF15 измеряли с помощью набора для анализа гена люциферазы Bright-Glo™ (Promega), используя клеточную линию 293 (HEK293), полученную из клеток почек эмбриона человека, сверхэкспрессирующую GFRAL/RET/SRE-luc.
В частности, 1×105 клеток HEK293, сверхэкспрессирующих GFRAL/RET/SRE-luc, распределяли в каждую лунку 96-луночного планшета в среде DMEM, содержащей 10% FBS, а затем инкубировали в течение 24 часов при 37°C и 5% CO2. Через 24 часа среду в каждой лунке 96-луночного планшета заменяли 50 мкл бессывороточной среды, и планшет инкубировали в течение 4 часов при 37°C и 5% CO2.
Кроме того, каждый из слитых белков GDF15 длительного действия, полученных в примере 1, готовили путем 3-кратного серийного разведения бессывороточной средой, начиная с концентрации 2000 нМ. Затем в каждую лунку, содержащую 50 мкл замененной бессывороточной среды и клеточную линию GFRAL/RET/SRE-luc, добавляли по 50 мкл разведения слитого белка GDF15 длительного действия для получения фактической концентрации путем 3-кратного серийного разведения, начиная с 1000 нМ. Затем обеспечивали прохождение реакции при 37°C и 5% CO2 в течение 4 часов. Через 4 часа каждую лунку обрабатывали 100 мкл раствора Bright-Glo™, приготовленным путем добавления буфера Bright-Glo™ к субстрату Bright-Glo™, и оставляли на 1 минуту при комнатной температуре для осуществления реакции.
После этого выполняли измерение относительных световых единиц (RLU) с помощью микропланшетного ридера (Perkin Elmer, Wallac Victor X5), способного измерять люминесценцию. Результаты показаны в таблице 2 ниже. В этом эксперименте два улучшенных слитых белка GDF15 длительного действия отбирали согласно GDF15 активности in vitro (Emax 100%) слитого белка (FWT+Fc_hole), включающего зрелый GDF15, служившего в качестве контроля.
[относительно FWT 100%]
В результате два выбранных слитых белка GDF15 длительного действия представляли собой слитый белок GDF15 длительного действия (далее обозначаемый как FM4+Fc_hole), несущий мутации ΔN2, N56C и D103C, и слитый белок GDF15 длительного действия (далее обозначаемый как FM5+Fc_hole), несущий мутации ΔN2 и S64K; их GDF15 активность in vitro (Emax) составила 133,3% и 147,2%, соответственно. Согласно полученным результатам, FM4+Fc_hole и FM5+Fc_hole имели повышенную GDF15 активность in vitro.
Пример 3: Измерение активности слитого белка GDF15 длительного действия (димер: FM4+Fc_hole)
Исходя из результатов взаимодействия GDF15-GDF15 между слитыми белками GDF15 длительного действия в примере 2, было установлено, что FM4+Fc_hole с введенной дополнительной дисульфидной связью имел повышенную GDF15 активность in vitro. Для определения важности дисульфидной связи с учетом этих результатов, взяв за основу FM4+Fc_hole, дополнительно конструировали слитые белки GDF15 длительного действия, в которых аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 56 зрелого GDF15, и/или аспарагиновую кислоту (D), представляющую собой аминокислоту в положении 103 зрелом GDF15, заменяли другой аминокислотой, как показано в таблице 3 ниже, которые получали способом, описанным в примере 1. Затем оценивали GDF15 активность in vitro так же, как описано в примере 2.
[относительно FWT 100%]
(SEQ ID NO: 49 и 43)
(SEQ ID NO: 65 и 43)
(SEQ ID NO: 66 и 43)
(SEQ ID NO: 64 и 43)
(SEQ ID NO: 53 и 43)
В результате, как показано в таблице 3, было установлено, что только FM4+Fc_hole имел улучшенную GDF15 активность in vitro (Emax) по сравнению с FWT+Fc_hole (фиг. 1). Согласно полученным результатам, введение цистеина и, как следствие, введение дисульфидной связи играет важную роль в улучшении GDF15 активности in vitro у FM4+Fc_hole.
Пример 4: Измерение активности слитого белка GDF15 длительного действия (димер: FM5+Fc_hole)
В примере 2 было установлено, что FM5+Fc_hole, который является вариантом S64K GDF15, обладает улучшенной GDF15 активностью in vitro. С учетом этих результатов, взяв за основу FM5+Fc_hole, дополнительно конструировали слитые белки GDF15 длительного действия, в которых серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 64 зрелого GDF15, заменяли другой аминокислотой, как показано в таблице 4 ниже, которые получали способом, описанным в примере 1. Затем оценивали GDF15 активность in vitro так же, как описано в примере 2.
(SEQ ID NO)
[относительно FWT 100%]
(SEQ ID NO: 49 и 43)
(SEQ ID NO: 57 и 43)
(SEQ ID NO: 60 и 43)
(SEQ ID NO: 61 и 43)
(SEQ ID NO: 62 и 43)
(SEQ ID NO: 63 и 43)
В результате, как показано в таблице 4, было установлено, что только FM9+Fc_hole имеет улучшенную GDF15 активность in vitro (Emax) по сравнению с FWT (фиг. 2).
Пример 5: Измерение сродства связывания слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM4+Fc_hole, FM5+Fc_hole и FM9+Fc_hole)
Полученные в примерах 3 и 4 FM4+Fc_hole, FM5+Fc_hole и FM9+Fc_hole, обладающие повышенной GDF15 активностью in vitro, сравнивали по сродству связывания с GFRAL и RET, которые представляют собой рецепторы GDF15. Для измерения сродства связывания с рецепторами GDF15 выполняли клеточный твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) с использованием клеточной линии HEK293, сверхэкспрессирующей GFRAL и RET.
В частности, 1×105 клеток HEK293, сверхэкспрессирующих GFRAL/RET/SRE-luc, распределяли в каждую лунку 96-луночного планшета в среде DMEM, содержащей 10% FBS, и затем планшет инкубировали в течение 24 часов при 37°C и 5% CO2. Через 24 часа среду удаляли из каждой лунки 96-луночного планшета. Затем каждую среду обрабатывали 4% параформальдегидом и оставляли для протекания реакции на 20 минут при комнатной температуре. Затем параформальдегид удаляли. Выполняли обработку 0,6% раствором перекиси водорода, и снова оставляли на 20 мин для осуществления реакции. Затем следовала обработка буфером Tween 20 (PBST) с 3% бычьим сывороточным альбумином в (BSA)-фосфатном буферном растворе и блокирование в течение 2 часов.
Кроме того, FM4+Fc_hole, FM5+Fc_hole или FM9+Fc_hole подвергали 2-кратному серийному разведению, начиная с 200 мкг/мл, с использованием буфера PBS, содержащего 1% BSA. 100 мкл FM4+Fc_hole, FM5+Fc_hole или FM9+Fc_hole, каждый из которых был разбавлен до различных концентраций, вносили в 96-луночный планшет, содержащий клеточную линию, сверхэкспрессирующую GFRAL/RET, и осуществляли реакцию в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем каждую лунку обрабатывали конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP) антителом к человеческому IgG-Fc (Jackson ImmunoResearch #109-035-098), и для проявления реакции использовали 3,3,5,5-тетраметилбензидиновый (ТМВ) буфер (Bio-Rad #172-1066).
Каждую лунку обрабатывали 100 мкл раствора ТМВ и оставляли на 10 минут при комнатной температуре для осуществления реакции. Затем реакцию останавливали реагентом, представляющим собой 2н серную кислоту (H2SO4). После этого измеряли поглощение при 450 нм с помощью микропланшетного ридера (Perkin Elmer, Wallac Victor X5) для оценки способности варианта GDF15 в слитом белке GDF15 длительного действия (димере) связываться с рецепторами GDF15.
В результате, как показано на фиг. 4, FM9+Fc_hole показал значительно более высокое сродство связывания с рецепторами GDF15 относительно FWT+Fc_hole, использованного в качестве контроля, при этом FM4+Fc_hole и FM5+Fc_hole также продемонстрировали высокое сродство связывания с рецепторами GDF15.
Пример 6: Повышение чистоты после очистки слитого белка GDF15 длительного действия (димера)
Для улучшения выхода очистки, чистоты и т.п. каждого слитого белка GDF15 длительного действия в процессе его получения, вводили N-связанные гликаны в различные положения в GDF15. Известно, что присутствие N-связанных гликанов в последовательности GDF15 увеличивает время удерживания соответствующего белка в эндоплазматическом ретикулуме и аппарате Гольджи в процессе секреции белка, тем самым минимизируя продукты неправильной укладки и способствуя экспрессии белка. Увеличение времени удерживания благотворно влияет на кинетику сворачивания и может привести к значительному улучшению гетеродимерной (Fc/Fc) «выступ-во-впадину» сборки и извлечения из культуры тканей млекопитающих.
Оценку улучшения чистоты после очистки вещества, полученного введением N-связанных гликанов в слитый белок GDF15 длительного действия, по сравнению с димером слитого белка FWT+Fc_hole в качестве контроля, осуществляли по показателю чистоты правильно собранного димера слитого белка с помощью анализа методом эксклюзионной хроматографии.
В частности, дополнительно конструировали слитые белки GDF15 длительного действия, в которых в различные положения в GDF15 вводили N-связанные гликаны. Таким образом, варианты с повышенной чистотой правильно собранного димера слитого белка, полученной путем получения вариантов и их очисткой на первом этапе так, как описано в примере 1, по сравнению с чистотой димера слитого белка FWT+Fc_hole, показаны в таблице 6.
(SEQ ID NO)
(Интактные, %)
(SEQ ID NO: 49 и 43)
(SEQ ID NO: 50 и 43)
(SEQ ID NO: 51 и 43)
(SEQ ID NO: 52 и 43)
(SEQ ID NO: 58 и 43)
(SEQ ID NO: 59 и 43)
(SEQ ID NO: 68 и 43)
(см. последовательности в US 9920118)
В результате было установлено, что чистота правильно собранного димера слитого белка FWT+Fc_hole после первого этапа очистки составила 50,9%, тогда как чистота правильно собранного димера слитых белков FM1+Fc_hole, FM2+Fc_hole, FM3+Fc_hole, FM10+Fc_hole, FM11+Fc_hole и FM12+Fc_hole, в каждый из которых в GDF15 были введены N-связанные гликаны, была улучшена и составила 80,2%, 73,0%, 86,3%, 65,2% и 70,3%, соответственно.
Кроме того, измеренная чистота димера слитого белка NGM Biopharmaceuticals, Inc. (B13a/B13b (в который введены N-связанные гликаны) в патенте США № 9920118) составила 75,8%.
Пример 7: Оценка активности слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM10+Fc_hole, FM11+Fc_hole и FM12+Fc_hole)
Используя в качестве контролей FM1+Fc_hole, FM2+Fc_hole и FM3+Fc_hole, в каждый из которых в различные положения в GDF15 были введены N-связанные гликаны, оценивали FM10+Fc_hole, FM11+Fc_hole и FM12+Fc_hole в отношении активности GDF15 таким же образом, как описано в примере 2. Результаты показаны в таблице 7.
(SEQ ID NO)
(SEQ ID NO: 50 и 43)
(SEQ ID NO: 51 и 43)
(SEQ ID NO: 52 и 43)
(SEQ ID NO: 58 и 43)
(SEQ ID NO: 59 и 43)
(SEQ ID NO: 68 и 43)
В результате, как показано в таблице 7, было установлено, что FM10+Fc_hole, FM11+Fc_hole и FM12+Fc_hole имеют улучшенную активность GDF15 (Emax) по сравнению с FM1+Fc_hole, FM2+Fc_hole и FM3+Fc_hole (фиг.5-7).
Пример 8: Измерение сродства связывания слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM10+Fc_hole и FM11+ Fc_hole)
Сродство связывания FM10+Fc_hole или FM11+Fc_hole с рецепторами GDF15, GFRAL и RET, сравнивали и оценивали таким же образом, как описано в примере 5. В результате, как показано на фиг. 6, у FM10+Fc_hole и FM11+Fc_hole наблюдали заметно более высокое сродство к рецепторам GDF15 по сравнению с FWT+Fc_hole, использованным в качестве контроля (фиг. 8).
Пример 9: Получение слитых белков GDF15 длительного действия (димеры: FM6+Fc_hole, FM7+ Fc_hole и FM8+ Fc_hole)
С учетом результатов, полученных в примерах 1-8, дополнительно конструировали слитые белки GDF15 длительного действия, в которых заменяли аминокислоты в положениях 21 и/или 64 и в различные положения в GDF15 вводили N-связанные гликаны. Таким образом, варианты с повышенной чистотой правильно собранного димера слитого белка, полученной путем получения вариантов и их очисткой на первом этапе так, как описано в примере 1, по сравнению с чистотой димера слитого белка FWT+Fc_hole, показаны в таблице 8.
(SEQ ID NO)
(Интактные, %)
(SEQ ID NO: 49 и 43)
(SEQ ID NO: 55 и 43)
(SEQ ID NO: 56 и 43)
(SEQ ID NO: 67 и 43)
Пример 10: Оптимизация носителя слияния и линкера для слитых белков GDF15 длительного действия
Для осуществления исследований по оптимизации носителя слияния и линкера для двух вариантов (FM9+Fc_hole и FM11+Fc_hole), демонстрирующих превосходную активность и улучшенную чистоту после очистки, дополнительно конструировали слитые белки GDF15 длительного действия, в которых в соответствующие последовательности GDF15 вводили носители слияния (SEQ ID NO: 46 и 47) и различные линкеры (SEQ ID NO: 92, 93, 94, 95, 96 и 97) для минимизации эффекторной функции, которые показаны в таблице 9.
(SEQ ID NO)
(SEQ ID NO: 98 и 47)
(SEQ ID NO: 28)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NOs: 99 и 47)
(SEQ ID NO: 28)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 100 и 47)
(SEQ ID NO: 28)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 101 и 47)
(SEQ ID NO: 28)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 102 и 47)
(SEQ ID NO: 28)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 103 и 47)
(SEQ ID NO: 28)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 104 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 105 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 106 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 107 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 108 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 109 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
Пример 10.1: Экспрессия и очистка оптимизированных слитых белков GDF15 длительного действия (димеров)
Получали оптимизированные слитые белки GDF15 длительного действия, показанные в таблице 9, которые подвергали первому этапу очистки таким же образом, как описано в примере 1. Для получения слитого белка GDF15 длительного действия пул высокой чистоты, полученный после завершения первого этапа очистки, подвергали ионообменной очистке второго этапа (IEX) с использованием анионообменной (AEX) смолы и катионообменной (CEX) смолы.
В частности, для анионного обмена (AEX) пул после первого этапа загружали на 50-мкм сильнодействующую анионообменную смолу POROS HQ (Thermo Fisher Scientific), уравновешенную 1× PBS (pH 7,4), для индукции связывания. После завершения связывания между первым полипептидом и вторым полипептидом смолу с сильным анионообменником POROS HQ 50 мкм промывали 1× PBS (pH 7,4), и затем осуществляли элюцию в градиенте концентрации, используя 50 мМ раствор Tris-HCl (pH 8,0) с 1М хлоридом натрия, с получением конечного вещества. Фракции, отвечающие критерию чистоты 95% или выше, объединяли с помощью эксклюзионной хроматографии.
Кроме того, для катионного обмена (CEX) величину рН пула после первого этапа регулировали в зависимости от изоэлектрических точек, и затем загружали на катионообменную смолу POROS XS Strong (Thermo Fisher Scientific), уравновешенную 20 мМ фосфата натрия (рН 6,5), для инициации связывания. После завершения связывания между первым полипептидом и вторым полипептидом смолу с сильным катионообменником POROS XS промывали 20 мМ раствором фосфата натрия (рН 6,5), и затем осуществляли элюцию в градиенте концентрации, используя 20 мМ раствор фосфата натрия (рН 6,5) с 1М хлоридом натрия, с получением конечного вещества. Фракции, отвечающие критерию чистоты 95% или выше, объединяли с помощью эксклюзионной хроматографии.
Пример 10.2: Оценка активности оптимизированных слитых белков GDF15 длительного действия (димеров)
Два варианта (FM9+Fc_hole и FM11+Fc_hole), демонстрирующие превосходную активность и улучшенную чистоту после очистки, сравнивали и оценивали в отношении активности в зависимости от типа и длины линкера. Активность соответствующих слитых белков GDF15 длительного действия оценивали таким же образом, как описано в примере 2, и результаты показаны в таблице 10. В этом примере сравнивали активность слитых белков GDF15 длительного действия в зависимости от последовательности GDF15, а также типа и длины линкера, относительно GDF15 активности in vitro (Emax 100%) у FM9-6+Fc_hole.
(SEQ ID NO)
GDF15
(SEQ ID NO: 98 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 99 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 100 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 101 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 102 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 103 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 104 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 105 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 106 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 107 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 108 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
(SEQ ID NO: 109 и 47)
IgG1 Fc_hole (SEQ ID NO: 47)
В результате, как показано в таблице 10, было установлено, что соответствующие слитые белки GDF15 длительного действия имеют сходную активность, за исключением тех, в которых использовался линкер GS(EEEA)6 (SEQ ID NO: 95), причем слитые белки длительного действия GDF15 (FM9-4+Fc_hole и FM11-4+Fc_hole), в которых использовался линкер GS(EEEA)6 (SEQ ID NO: 95), имеют относительно низкое значение EC50 и высокое значение Emax (фиг. 9 и 10).
Пример 10.3: Фармакокинетическая оценка оптимизированных слитых белков GDF15 длительного действия (димеров)
В день обработки препаратом шестинедельных мышей-самцов линии C57BL/6, приобретенных у Orient BIO (Корея), делили по группам (n=3 на момент взятия крови) таким образом, чтобы каждая группа имела сходное среднее значение массы тела, и затем им вводили однократно подкожно FM9-4+Fc_hole, FM9-6+Fc_hole, FM11-4+Fc_hole и FM11-6+Fc_hole, соответственно, в дозе 1 мг/кг. Образцы крови собирали через 4, 24, 48, 72, 96, 120, 168 и 240 часов после введения, соответственно. Концентрацию каждого слитого белка (димера) GDF15 длительного действия в крови мышей измеряли с помощью иммунологического метода. На основании измеренных значений концентрации вычисляли полученные фармакокинетические параметры для соответствующих слитых белков (димеров) GDF15 длительного действия, которые показаны в таблице 11 ниже.
(SEQ ID NO)
(нг/мл)
(ч)
(мл/ч/кг)
(мл/кг)
(ч)
(SEQ ID NO: 101 и 47)
(SEQ ID NO: 103 и 47)
(SEQ ID NO: 107 и 47)
(SEQ ID NO: 109 и 47)
Пример 10.4: Оценка эффекта против ожирения оптимизированных слитых белков (димеров) GDF15 длительного действия у мышей с ожирением, индуцированным диетой (DIO), при повторном введении в зависимости от различных типов линкеров
Для мышей с индуцированным диетой (DIO) ожирением, вызванным кормлением пищей с высоким содержанием жиров, характерны ожирение, гипергликемия и резистентность к инсулину. Мышей DIO (Taconic, США), представляющих собой мышей C57BL/6N, которых держали на диете с высоким содержанием жиров (60 ккал% жира, Research Diets, № по каталогу D12492, США) в течение 8 недель, приобретали у Raon Bio (Animal Inc., Республика Кореи). После получения этих животных дополнительно кормили высокожировой диетой (60% жира) в течение 5 недель, а затем использовали в указанном исследовании. За день до начала дозирования животных делили по группам (n=6 в группе) на основе средней массы тела отдельных мышей, которым затем вводили подкожно FM9-4+Fc_hole, FM9-6+Fc_hole, FM11-4+Fc_hole и FM11-6+Fc_hole, соответственно, с 2-дневным интервалом (Q2D) в течение 4 недель в дозе 10 нмоль/кг. В качестве препаратов сравнения подкожно вводили B13a/B13b (патент США № 9920118) в дозе 10 нмоль/кг и семаглутид в дозе 30 нмоль/кг с интервалом в 2 дня (Q2D) всего в течение 4 недель. Для обработки носителем использовали фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS; Gibco, США), который вводили подкожно с интервалом 2 дня (Q2D). Массу тела измеряли каждые два дня с первого дня обработки лекарственным средством до дня 28; результаты представлены в таблице 12 ниже.
(SEQ ID NO: 101 и 47)
(SEQ ID NO: 103 и 47)
(SEQ ID NO: 107 и 47)
(SEQ ID NO: 109 и 47)
В результате было подтверждено, что все испытуемые изделия с разными типами линкеров (FM9-4+Fc_hole, FM9-6+Fc_hole, FM11-4+Fc_hole и FM11-6+Fc_hole) продемонстрировали заметный эффект потери массы тела по сравнению с 10 нмоль/кг B13a/B13b в качестве препарата сравнения. Кроме того, три испытуемых препарата, FM9-4+Fc_hole, FM9-6+Fc_hole и FM11-4+Fc_hole, продемонстрировали эффект снижения массы тела, сходный с действием семаглутида в группе, получавшей 30 нмоль/кг (фиг. 11).
Пример 10.5: Оценка эффекта против ожирения оптимизированных слитых белков (димеров) GDF15 длительного действия у мышей с ожирением, индуцированным диетой, при однократном введении
Самцов мышей C57BL/6N в возрасте 6 недель приобретали у Orient Bio (через Hallym Lab. Animal Inc., Республика Корея). После получения мышей C57BL/6N индуцировали DIO путем кормления рационом с высоким содержанием жиров (60 ккал% жира, Research Diets, кат. № D12492, США) в течение 13 недель. За день до начала дозирования животных делили по группам (n=6 в группе) на основании средней массы тела отдельных мышей, и затем им однократно подкожно вводили FM9-6+Fc_hole в дозах 1, 3, 10 и 30 нмоль/кг. В качестве препарата сравнения однократно подкожно вводили семаглутид в дозе 30 нмоль/кг. Для обработки носителем подкожно вводили забуференный фосфатом физиологический раствор Дульбекко (DPBS; Gibco, США). Массу тела измеряли ежедневно со дня обработки лекарственным средством до дня 42; результаты показаны в таблице 13 ниже.
Согласно результатам оценки эффекта потери массы тела при однократном введении, группа, получавшая семаглутид в дозе 30 нмоль/кг в качестве препарата сравнения продемонстрировала фармакологический эффект, который сохранялся в течение 2 дней, тогда как однократное введение FM9-6+Fc_hole в дозах 1, 3, 10 и 30 нмоль/кг продемонстрировало эффект против ожирения для каждой дозы, который сохранялся в течение 10 дней, 15 дней, 18 дней и 18 дней, соответственно (фиг. 12).
Пример 10.6: Оценка эффекта против ожирения оптимизированных слитых белков (димеров) GDF15 длительного действия у мышей ob/ob при повторном введении
Мыши ob/ob являются генетически дефицитными по гену лептина и характеризуются гипергликемией, резистентностью к инсулину, гиперорексией и ожирением. Самцов мышей ob/ob в возрасте 5 недель (Jackson Laboratory, США) приобретали у Raon Bio (Animal Inc., Республика Корея). Акклиматизацию мышей осуществляли в течение 4 недель с обычным рационом питания (Teklad Certified Irradiated Global 18% Protein Rodent Diet, 2918C, Harlan Co., США), и обработку лекарственным средством начинали в возрасте 9 недель. За день до начала введения дозы животных делили по группам (n=6 в группе) на основании средней массы тела и случайного определения уровня глюкозы в крови через хвостовую вену у каждой мыши. Затем подкожно вводили FM9-6+Fc_hole в дозах 0,1, 1 и 3 нмоль/кг и семаглутид в дозе 10 нмоль/кг с 3-дневным интервалом (Q3D), всего 10 раз, и в течение экспериментального периода (дни 1-29) измеряли массу тела и потребление пищи каждый день или каждые 3 дня, соответственно. Для обработки носителем использовали забуференный фосфатом физиологический раствор Дульбекко (DPBS; Gibco, США).
В результате было показано, что FM9-6+Fc_hole оказывает дозозависимое действие на снижение массы тела. Группа, получавшая 0,1 нмоль/кг FM9-6+Fc_hole, показала значительное снижение массы тела, аналогичное группе, получавшей 10 нмоль/кг семаглутида. FM9-6+Fc_hole в концентрации 1 нмоль/кг или более продемонстрировал максимальную эффективность у мышей ob/ob (фиг. 13).
--->
<110> ЮХАН КОРПОРЕЙШН
<120> СЛИТЫЙ БЕЛОК GDF15 ДЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
<130> PCC008069YUH
<150> KR 10-2019-0153680
<151> 2019-11-26
<160> 109
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 112
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 1
Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
1 5 10 15
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
20 25 30
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
35 40 45
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
50 55 60
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
65 70 75 80
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
85 90 95
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 2
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (R21X, N56X, S64X, D103X)
<400> 2
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Xaa Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Xaa Met His Ala Gln Ile Lys Thr Xaa Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Xaa Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 3
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> N-терминальный домен I удлинения
<400> 3
Trp Ser Asn Ser Thr
1 5
<210> 4
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> N-терминальный домен I удлинения I
<400> 4
Asn Ser Thr
1
<210> 5
<211> 4
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> N-терминальный домен I удлинения II
<400> 5
Asn Gly Asp His
1
<210> 6
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (R21N)
<400> 6
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Asn Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 7
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (N56L)
<400> 7
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Leu Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 8
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64K)
<400> 8
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 9
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64R)
<400> 9
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 10
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64N)
<400> 10
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Asn Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 11
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64D)
<400> 11
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Asp Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 12
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64E)
<400> 12
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Glu Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 13
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64C)
<400> 13
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Cys Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 14
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (S64L)
<400> 14
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Leu Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 15
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (D103L)
<400> 15
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Leu Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 16
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (N56C, D103C)
<400> 16
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Cys Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Cys Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 17
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (N56S, D103S)
<400> 17
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Ser Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Ser Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 18
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (R21N, S64R)
<400> 18
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Asn Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 19
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (R21N, S64K)
<400> 19
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Asn Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 20
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Коровый домен (человеческий GDF15 7-112aa)
<400> 20
Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala
1 5 10 15
Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu
20 25 30
Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala
35 40 45
Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro
50 55 60
Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met
65 70 75 80
Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp
85 90 95
Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 21
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T/FM1)
<400> 21
Trp Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
1 5 10 15
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
20 25 30
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
35 40 45
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
50 55 60
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
65 70 75 80
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
85 90 95
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 22
<211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T/FM2)
<400> 22
Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
1 5 10 15
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
20 25 30
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
35 40 45
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg
50 55 60
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
85 90 95
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 23
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, R21N/FM3)
<400> 23
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Asn Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 24
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, N56L/FM4-3)
<400> 24
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Leu Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 25
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, S64K/FM5)
<400> 25
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 26
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T, S64K/FM6)
<400> 26
Trp Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
1 5 10 15
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
20 25 30
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
35 40 45
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu
50 55 60
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
65 70 75 80
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
85 90 95
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 27
<211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64K/FM7)
<400> 27
Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
1 5 10 15
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
20 25 30
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
35 40 45
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu His Arg
50 55 60
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
85 90 95
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 28
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9)
<400> 28
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 29
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T, S64R/ FM10)
<400> 29
Trp Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
1 5 10 15
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
20 25 30
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
35 40 45
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu
50 55 60
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
65 70 75 80
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
85 90 95
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 30
<211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11)
<400> 30
Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr
1 5 10 15
Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser
20 25 30
Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln
35 40 45
Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg
50 55 60
Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln
85 90 95
Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105
<210> 31
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, S64N/FM13)
<400> 31
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Asn Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 32
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2,S64D/FM14)
<400> 32
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Asp Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 33
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2,S64E/FM15)
<400> 33
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Glu Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 34
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2,S64L/FM16)
<400> 34
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Leu Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 35
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, D103L/FM4-2)
<400> 35
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Leu Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 36
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, N56C, D103C/FM4)
<400> 36
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Cys Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Cys Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 37
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, N56S, D103S/FM4-1)
<400> 37
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Ser Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Ser Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 38
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, R21N, S64K/FM8)
<400> 38
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Asn Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 39
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариант GDF15 (дельта N2, R21N, S64R/FM12)
<400> 39
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Asn Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 40
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> GDF15 (дельта N2)
<400> 40
Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His
1 5 10 15
Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu
20 25 30
Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser
35 40 45
Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His
50 55 60
Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu
85 90 95
Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
100 105 110
<210> 41
<211> 227
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fc человеческого IgG1
<400> 41
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 42
<211> 217
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(A-1) с удаленной
шарнирной областью
<400> 42
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 43
<211> 217
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366S, L368A, Y407V)-(A-2)
с удаленной шарнирной областью
<400> 43
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 44
<211> 217
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A, N297A)(T366W)-(B-1)
с удаленной шарнирной областью
<400> 44
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 45
<211> 217
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A, N297A)(T366S, L368A,
Y407V)-(B-2) с удаленной шарнирной областью
<400> 45
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 46
<211> 217
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-(C-1)
с удаленной шарнирной областью
<400> 46
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 47
<211> 217
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366S, L368A,
Y407V)-(C-2) с удаленной шарнирной областью
<400> 47
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 48
<211> 25
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-(G4S)5
<400> 48
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 49
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15
(дельта N2) - FWT с удаленной шарнирной областью
<400> 49
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 50
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T)-FM1 с удаленной шарнирной
областью
<400> 50
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Trp Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<210> 51
<211> 351
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N3, G4N, D5S, H6T)-FM2 с удаленной шарнирной областью
<400> 51
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
245 250 255
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
260 265 270
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
275 280 285
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu
290 295 300
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
305 310 315 320
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
325 330 335
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 52
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, R21N)-FM3 с удаленной шарнирной областью
<400> 52
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Asn Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 53
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, N56L)-FM4-3 с удаленной шарнирной областью
<400> 53
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Leu Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 54
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, S64K)-FM5 с удаленной шарнирной областью
<400> 54
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 55
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T, S64K)-FM6 с удаленной
шарнирной областью
<400> 55
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Trp Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Lys Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<210> 56
<211> 351
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64K)-FM7 с удаленной шарнирной
областью
<400> 56
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
245 250 255
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
260 265 270
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
275 280 285
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys Leu
290 295 300
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
305 310 315 320
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
325 330 335
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 57
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, S64R)-FM9 с удаленной шарнирной областью
<400> 57
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 58
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N3, WS вставка, G4N, D5S, H6T, S64R)-FM10 с удаленной
шарнирной областью
<400> 58
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Trp Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<210> 59
<211> 351
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R)-FM11 с удаленной шарнирной
областью
<400> 59
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu
245 250 255
His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val
260 265 270
Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro
275 280 285
Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu
290 295 300
His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala
305 310 315 320
Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser
325 330 335
Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 60
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, S64N/ FM13) с удаленной шарнирной областью
<400> 60
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Asn
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 61
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2,S64D)-FM14 с удаленной шарнирной областью
<400> 61
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Asp
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 62
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2,S64E)-FM15 с удаленной шарнирной областью
<400> 62
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Glu
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 63
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2,S64L)-FM16 с удаленной шарнирной областью
<400> 63
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Leu
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 64
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, D103L)-FM4-2 с удаленной шарнирной областью
<400> 64
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Leu Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 65
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, N56C, D103C)-FM4 с удаленной шарнирной областью
<400> 65
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Cys Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Cys Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 66
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, N56S, D103S)-FM4-1 с удаленной шарнирной областью
<400> 66
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Ser Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Ser Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 67
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, R21N, S64K)-FM8 с удаленной шарнирной областью
<400> 67
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Asn Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Lys
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 68
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, R21N, S64R)-FM12 с удаленной шарнирной областью
<400> 68
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Asn Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 69
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, W32F) с удаленной шарнирной областью
<400> 69
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Phe
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 70
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, W32H) с удаленной шарнирной областью
<400> 70
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp His
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 71
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, W32Y) с удаленной шарнирной областью
<400> 71
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Tyr
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 72
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q51H) с удаленной шарнирной областью
<400> 72
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser His Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 73
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q51L) с удаленной шарнирной областью
<400> 73
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Leu Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 74
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q51E) с удаленной шарнирной областью
<400> 74
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Glu Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 75
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q51N) с удаленной шарнирной областью
<400> 75
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Asn Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 76
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q90H) с удаленной шарнирной областью
<400> 76
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile His Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 77
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q90E) с удаленной шарнирной областью
<400> 77
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Glu Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 78
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q90K) с удаленной шарнирной областью
<400> 78
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Lys Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 79
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, D93E) с удаленной шарнирной областью
<400> 79
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Glu Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 80
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, D93L) с удаленной шарнирной областью
<400> 80
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Leu Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 81
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, D93N) с удаленной шарнирной областью
<400> 81
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asn Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 82
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, D93Q) с удаленной шарнирной областью
<400> 82
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Gln Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 83
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Q60L) с удаленной шарнирной областью
<400> 83
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Leu Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 84
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2,Q60N) с удаленной шарнирной областью
<400> 84
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Asn Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 85
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, S64Q) с удаленной шарнирной областью
<400> 85
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Gln
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 86
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, T92S) с удаленной шарнирной областью
<400> 86
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Ser Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 87
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, T92E) с удаленной шарнирной областью
<400> 87
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Glu Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 88
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, S97N) с удаленной шарнирной областью
<400> 88
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Asn Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 89
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, S97Q) с удаленной шарнирной областью
<400> 89
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Gln Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 90
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2,Y101F) с удаленной шарнирной областью
<400> 90
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Phe Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 91
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(E233A, L235A)(T366W)-(G4S)5-GDF15 вариант
(дельта N2, Y101Q) с удаленной шарнирной областью
<400> 91
Ala Pro Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Gln Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 92
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-GS(G4S)3
<400> 92
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser
<210> 93
<211> 27
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-GS(G4S)5
<400> 93
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 94
<211> 37
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-GS(G4S)7
<400> 94
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser
35
<210> 95
<211> 26
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-GS(EEEA)6
<400> 95
Gly Ser Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala
20 25
<210> 96
<211> 26
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-GSGGSS(PT)10
<400> 96
Gly Ser Gly Gly Ser Ser Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr
1 5 10 15
Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr
20 25
<210> 97
<211> 27
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер-GS(EAAAK)5
<400> 97
Gly Ser Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala
1 5 10 15
Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
20 25
<210> 98
<211> 344
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(G4S)3-
вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9-1) с удаленной шарнирной
областью
<400> 98
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro
225 230 235 240
Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu
245 250 255
Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln
260 265 270
Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn
275 280 285
Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr
290 295 300
Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu
305 310 315 320
Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu
325 330 335
Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340
<210> 99
<211> 354
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(G4S)5-
вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9-2) с удаленной шарнирной
областью
<400> 99
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys
245 250 255
Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala
260 265 270
Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly
275 280 285
Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys
290 295 300
Thr Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys
305 310 315 320
Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr
325 330 335
Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His
340 345 350
Cys Ile
<210> 100
<211> 364
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(G4S)7-
вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9-3) с удаленной шарнирной
областью
<400> 100
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Gly
245 250 255
Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val
260 265 270
Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro
275 280 285
Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe
290 295 300
Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg Leu
305 310 315 320
Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn
325 330 335
Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr
340 345 350
Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
355 360
<210> 101
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(EEEA)6-
вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9-4) с удаленной шарнирной
областью
<400> 101
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu Glu Glu Ala Glu
210 215 220
Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu
225 230 235 240
Glu Glu Ala Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<210> 102
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GSGGSS(PT)10-
вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9-5) с удаленной шарнирной
областью
<400> 102
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Ser Ser Pro
210 215 220
Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro
225 230 235 240
Thr Pro Thr Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<210> 103
<211> 354
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(EAAAK)5-
вариант GDF15 (дельта N2, S64R/FM9-6) с удаленной шарнирной
областью
<400> 103
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu Ala Ala Ala Lys
210 215 220
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
225 230 235 240
Ala Ala Ala Lys Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys
245 250 255
Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala
260 265 270
Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly
275 280 285
Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys
290 295 300
Thr Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys
305 310 315 320
Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr
325 330 335
Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His
340 345 350
Cys Ile
<210> 104
<211> 343
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(G4S)3-
вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11-1) с
удаленной шарнирной областью
<400> 104
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu
225 230 235 240
Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu
245 250 255
Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val
260 265 270
Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met
275 280 285
His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val
290 295 300
Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile
305 310 315 320
Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu
325 330 335
Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340
<210> 105
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(G4S)5-
вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11-2) с
удаленной шарнирной областью
<400> 105
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<210> 106
<211> 363
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(G4S)7-
вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11-3) с
удаленной шарнирной областью
<400> 106
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ser
245 250 255
Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg
260 265 270
Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg
275 280 285
Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg
290 295 300
Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg Leu His Arg Leu Lys
305 310 315 320
Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro
325 330 335
Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr
340 345 350
Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
355 360
<210> 107
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(EEEA)6-
вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11-4) с
удаленной шарнирной областью
<400> 107
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu Glu Glu Ala Glu
210 215 220
Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu
225 230 235 240
Glu Glu Ala Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 108
<211> 352
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GSGGSS(PT)10-
вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11-5) с
удаленной шарнирной областью
<400> 108
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Gly Ser Ser Pro
210 215 220
Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro
225 230 235 240
Thr Pro Thr Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg
245 250 255
Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp
260 265 270
Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys
275 280 285
Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Arg
290 295 300
Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro
305 310 315 320
Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val
325 330 335
Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile
340 345 350
<210> 109
<211> 353
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Человеческий IgG1-Fc(L234A, L235A, N297A)(T366W)-GS(EAAAK)5-
вариант GDF15 (дельта N3, G4N, D5S, H6T, S64R/FM11-6) с
удаленной шарнирной областью
<400> 109
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Glu Ala Ala Ala Lys
210 215 220
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
225 230 235 240
Ala Ala Ala Lys Asn Ser Thr Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys
245 250 255
Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp
260 265 270
Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala
275 280 285
Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr
290 295 300
Arg Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val
305 310 315 320
Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly
325 330 335
Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys
340 345 350
Ile
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СЛИТЫЙ ПОЛИПЕПТИД, ВКЛЮЧАЮЩИЙ Fc ОБЛАСТЬ ИММУНОГЛОБУЛИНА И GDF15 | 2020 |
|
RU2797520C2 |
| СЛИТЫЙ ПОЛИПЕПТИД, ВКЛЮЧАЮЩИЙ GDF15 И ПОЛИПЕПТИДНУЮ ОБЛАСТЬ, СПОСОБНУЮ К О-ГЛИКОЗИЛИРОВАНИЮ | 2020 |
|
RU2812049C1 |
| СЛИТЫЙ БЕЛОК, ВКЛЮЧАЮЩИЙ IL-12 И АНТИТЕЛО ПРОТИВ FAP, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2021 |
|
RU2831612C1 |
| АНТИТЕЛО ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО СВЯЗЫВАНИЯ С N-КОНЦЕВЫМ ДОМЕНОМ ЛИЗИЛ-ТРНК-СИНТЕТАЗЫ, ЭКСПОНИРОВАННЫМ НА ВНЕКЛЕТОЧНОЙ МЕМБРАНЕ | 2019 |
|
RU2781304C1 |
| АНТИ-GDF15 АНТИТЕЛА, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2795457C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ГЕПАТИТА, ФИБРОЗА ПЕЧЕНИ И ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ СЛИТЫЕ БЕЛКИ | 2017 |
|
RU2795548C2 |
| АНТИТЕЛО ПРОТИВ LILRB1 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ | 2021 |
|
RU2813373C1 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ АНТИТЕЛО, СПЕЦИФИЧНО СВЯЗЫВАЮЩЕЕСЯ С N-КОНЦОМ ЛИЗИЛ-тРНК-СИНТЕТАЗЫ, В КАЧЕСТВЕ ЭФФЕКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОБУСЛОВЛЕННОГО МИГРАЦИЕЙ КЛЕТОК | 2018 |
|
RU2749591C1 |
| МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ДОМЕНЫ α1-α2 НЕПРИРОДНЫХ ЛИГАНДОВ NKG2D, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С НЕПРИРОДНЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ NKG2D | 2019 |
|
RU2815278C2 |
| ПОЛИВАЛЕНТНЫЕ МОДУЛЯТОРЫ РЕГУЛЯТОРНЫХ T-КЛЕТОК | 2017 |
|
RU2769871C2 |
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантным белкам фактора дифференцировки роста-15 (GDF15), и может быть использовано в медицине для профилактики или лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома. Предложены варианты GDF15, в структуре которых к коровому домену присоединен N-концевой домен удлинения с SEQ ID NO: 3, 4 или 5. При этом коровый домен представляет собой полипептид, полученный из SEQ ID NO: 20, в котором любая одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в положениях 15, 50, 58 и 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена другой аминокислотой. Изобретение обеспечивает получение варианта GDF15 с улучшенной физиологической активностью и стабильностью, а также слитого белка GDF15 длительного действия. 15 н. и 13 з.п. ф-лы, 13 ил., 13 табл., 10 пр.
1. Фактор дифференцировки роста-15 (GDF15), представленный формулой (I)
N-концевой домен удлинения - коровый домен, (I)
в формуле (I)
N-концевой домен удлинения представляет собой полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 3-5; и
коровый домен представляет собой полипептид, полученный из SEQ ID NO: 20, в котором любая одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в положениях 15, 50, 58 и 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена другой аминокислотой;
где аргинин (R), представляющий собой аминокислоту в положении 15 последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аспарагиновой кислотой (D), цистеином (C), глутаминовой кислотой (E), глутамином (Q), глицином (G), гистидином (H), изолейцином (I), лейцином (L), метионином (M), фенилаланином (F), пролином (P), серином (S), треонином (T), триптофаном (W), тирозином (Y) или валином (V),
аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 50 последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аргинином (R), аспарагиновой кислотой, цистеином, глутаминовой кислотой, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, треонином, триптофаном, тирозином или валином,
серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58 последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аргинином, аспарагиновой кислотой, цистеином, глутаминовой кислотой, глутамином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, треонином, триптофаном или валином, и
аспарагиновая кислота (D), представляющая собой аминокислоту в положении 97 последовательности SEQ ID NO: 20, заменена аланином, аспарагином, цистеином, глутамином, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, серином, треонином, триптофаном, тирозином или валином.
2. GDF15 по п. 1, где коровый домен включает любой вариант, выбранный из группы, состоящей из следующих вариантов (1)-(5):
(1) вариант, в котором аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 50 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен лейцином (L);
(2) вариант, в котором серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен лизином (K), аргинином (R), аспарагиновой кислотой (D), глутаминовой кислотой (E), цистеином (C) или лейцином (L);
(3) вариант, в котором аспарагиновая кислота (D), представляющая собой аминокислоту в положении 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена лейцином (L);
(4) вариант, в котором каждая аминокислота из аспарагина (N), представляющего собой аминокислоту в положении 50 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, и аспарагиновой кислоты (D), представляющей собой аминокислоту в положении 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена цистеином (C) или серином (S); и
(5) вариант, в котором аргинин (R), представляющий собой аминокислоту в положении 15 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аспарагином (N) и серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменен лизином (К) или аргинином (R).
3. GDF15 по п. 2, где коровый домен состоит из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 7-9, 11-19.
4. GDF15 по п. 1, включающий N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 3, и коровый домен, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 8 или 9.
5. GDF15 по п. 1, включающий N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 4, и коровый домен, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 8 или 9.
6. GDF15 по п. 1, включающий N-концевой домен удлинения, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 5, и коровый домен, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 7-9, 11-19.
7. GDF15 по п. 1, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 21, 22, 24-30, 32-39.
8. Слитый белок фактора дифференцировки роста-15 (GDF15) длительного действия, где GDF15 по п. 1 связан с Fc человеческого IgG,
где Fc человеческого IgG содержит
первый полипептид, содержащий одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 44 и 46; и
второй полипептид, содержащий одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43, 45 и 47; и
где С-конец первого полипептида Fc IgG или С-конец второго полипептида Fc IgG связан с N-концом GDF-15,
где GDF15 связан с Fc IgG через линкер, который представляет собой (G4S)n, GS(G4S)n, GS(EEEA)n, (EEEA)n, GS(EAAAK)n, (EAAAk)n, GSGGSS(PT)n, где n представляет собой целое число от 1 до 10.
9. Слитый белок GDF15 длительного действия по п. 8, где линкер представляет собой GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 48), GSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 92), GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 93), GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 94), GSEEEAEEEAEEEAEEEAEEEAEEEA (SEQ ID NO: 95), GSGGSSPTPTPTPTPTPTPTPTPTPT (SEQ ID NO: 96) или GSEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK (SEQ ID NO: 97).
10. Слитый белок GDF15 длительного действия по п. 8, где GDF15 содержит любую одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 24-30, 32-39.
11. Слитый белок GDF15 длительного действия, содержащий слитый белок GDF15 по п. 8 и по меньшей мере один N-связанный гликан.
12. Димер слитого белка, имеющий активность GDF15, содержащий
два слитых белка GDF15 длительного действия по п. 8.
13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GDF15 по п. 1.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок GDF15 длительного действия по любому из пп. 8-10.
15. Вектор для экспрессии в млекопитающем, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13.
16. Вектор для экспрессии в млекопитающем, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 14.
17. Клетка-хозяин млекопитающего для экспрессии GDF15, содержащая вектор экспрессии по п. 15.
18. Клетка-хозяин млекопитающего для экспрессии слитого белка GDF15 длительного действия, содержащая вектор экспрессии по п. 16.
19. Фармацевтическая композиция для профилактики диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома, содержащая в качестве активного ингредиента:
(a) GDF15 по п. 1,
(b) слитый белок GDF15 длительного действия по любому из пп. 8-11 или
(c) димер слитого белка по п. 12.
20. Фармацевтическая композиция для лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома, содержащая в качестве активного ингредиента:
(a) GDF15 по п. 1,
(b) слитый белок GDF15 длительного действия по любому из пп. 8-11 или
(c) димер слитого белка по п. 12.
21. Способ лечения диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома у индивидуума, нуждающегося в этом, включающий
этап введения индивидууму:
(a) GDF15 по п. 1,
(b) слитого белка GDF15 длительного действия по любому из пп. 8-11 или
(c) димера слитого белка по п. 12
в дозе от 0,01 мкг до 100 мг/кг массы тела.
22. Способ профилактики диабета, ожирения, дислипидемии или метаболического синдрома у индивидуума, нуждающегося в этом, включающий
этап введения индивидууму:
(a) GDF15 по п. 1,
(b) слитого белка GDF15 длительного действия по любому из пп. 8-11 или
(c) димера слитого белка по п. 12
в дозе от 0,01 мкг до 100 мг/кг массы тела.
23. Слитый белок GDF15 длительного действия по п. 10, где GDF15 связан с Fc IgG через линкер, причем указанный линкер представляет собой
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 48),
GSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 92),
GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 93),
GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 94),
GSEEEAEEEAEEEAEEEAEEEAEEEA (SEQ ID NO: 95),
GSGGSSPTPTPTPTPTPTPTPTPTPT (SEQ ID NO: 96) или
GSEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK (SEQ ID NO: 97).
24. Слитый белок GDF15 длительного действия по п. 23, где GDF15 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 или 30;
первый полипептид IgG Fc содержит последовательность SEQ ID NO: 46;
второй полипептид IgG Fc содержит последовательность SEQ ID NO: 47; и
линкер состоит из последовательности SEQ ID NO: 95 или 97.
25. Слитый белок GDF15 длительного действия по п. 23, где слитый белок GDF15 длительного действия содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108 или 109.
26. Комплекс, имеющий активность GDF15, содержащий фактор дифференциации роста-15 (GDF15) по п. 1 и Fc IgG, причем указанный комплекс представлен следующей формулой (II):
IgG Fc – (L)m – N-концевой домен удлиннения – коровый домен, (II)
где m представляет собой целое число от 0 до 1,
L представляет собой линкер, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 48, 92, 93, 94, 95, 96 и 97,
IgG Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, 44 или 46,
N-концевой домен удлинения представляет собой полипептид, состоящий из любой одной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 3-5, и
коровый домен представляет собой полипептид, полученный из SEQ ID NO: 20, в котором любая одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в положениях 15, 50, 58 и 97 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, заменена другой аминокислотой;
где аргинин (R), представляющий собой аминокислоту в положении 15 последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аспарагиновой кислотой (D), цистеином (C), глутаминовой кислотой (E), глутамином (Q), глицином (G), гистидином (H), изолейцином (I), лейцином (L), метионином (M), фенилаланином (F), пролином (P), серином (S), треонином (T), триптофаном (W), тирозином (Y) или валином (V),
аспарагин (N), представляющий собой аминокислоту в положении 50 последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аргинином (R), аспарагиновой кислотой, цистеином, глутаминовой кислотой, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, треонином, триптофаном, тирозином или валином,
серин (S), представляющий собой аминокислоту в положении 58 последовательности SEQ ID NO: 20, заменен аргинином, аспарагиновой кислотой, цистеином, глутаминовой кислотой, глутамином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, треонином, триптофаном или валином и
аспарагиновая кислота (D), представляющая собой аминокислоту в положении 97 последовательности SEQ ID NO: 20, заменена аланином, аспарагином, цистеином, глутамином, глицином, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метионином, фенилаланином, пролином, серином, треонином, триптофаном, тирозином или валином.
27. Комплекс по п. 26, где N-концевой домен удлинения - коровый домен содержит одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 22, 24-30, 32-39.
28. Комплекс по п. 26, где комплекс содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 50, 51, 53-59, 61-91 и 98-109.
| EA 201790405 A1, 29.09.2017 | |||
| WO 2016069925 A1, 06.05.2016 | |||
| US 2014213511 A1, 31.07.2014 | |||
| EP 3144320 A1, 22.03.2017 | |||
| US 2014378665 A1, 25.12.2014 | |||
| EA 201690297 A1, 30.06.2016 | |||
| КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВ | 2014 |
|
RU2704285C2 |
| YAMPOLSKY L.Y | |||
| et al., 1, The exchangeability of amino acids in proteins, Genetics, 2005,v.170, n.4, p.1459-1472 | |||
| PAKULA A.A | |||
| et al., Genetic | |||
