КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ 15-HEPE, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ И/ИЛИ СВЯЗАННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2025 года по МПК A61K31/202 A61P7/00 A61P7/06 A61P35/00 A61P35/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0001] Настоящая заявка в целом относится к композициям, содержащим 15-HEPE, и к способам их применения.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Настоящее описание включает в себя перечень последовательностей, который был подан в формате ASCII посредством EFS-Web и полностью включен в данный документ путем ссылки. Копия ASCII, созданная 1 апреля 2020 г., называется Sequence Listing 124318-8014.US00_ST25.txt и имеет размер 3 килобайта.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] Гематологические нарушения включают заболевания эритроцитов и тромбофилию. Заболевания эритроцитов - это класс состояний, которые влияют на выработку, продолжительность жизни и форму эритроцитов и их молекулы, транспортирующей кислород, а также гемоглобина. Указанные состояния препятствуют переносу кислорода из легких в остальные части тела. Тромбофилия - это класс заболеваний, которые повышают риск образования тромбов в венах и артериях. Такие сгустки могут оторваться от кровеносного сосуда и пройти с током крови к органу, тем самым препятствуя притоку крови к нему, что приводит к ишемии. Эти состояния приводят к повышенному риску инсульта и/или тромбоэмболии легочной артерии.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] Заявка относится к композициям, включающим 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE), и к способам применения таких композиций при лечении различных заболеваний и нарушений.

[0005] В некоторых аспектах настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического нарушения у нуждающегося в этом субъекта, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0006] В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0007] В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики гематологического заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по весу всех жирных кислот в композиции, и у субъекта имеется одно или более из следующего: (a) увеличение числа эритроцитов; (b) уменьшение ширины распределения эритроцитов; и/или (c) снижение числа ретикулоцитов.

[0008] В различных вариантах осуществления гематологическое заболевание выбрано из группы, состоящей из наследственной гемолитической анемии, приобретенной гемолитической анемии, анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и миелодиспластического синдрома.

[0009] В некоторых аспектах настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики нарушения гемоглобина у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0010] В других аспектах настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0011] В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15-НЕРЕ, где 15-НЕРЕ составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0012] В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по весу всех жирных кислот в композиции, и субъект проявляет один или более из: (a) увеличение числа эритроцитов; (b) уменьшение ширины распределения эритроцитов; и/или (c) снижение числа ретикулоцитов.

[0013] В различных вариантах осуществления гематологическое нарушение, нарушение гемоглобина и/или нарушение эритроцитов выбирают из группы, состоящей из наследственной гемолитической анемии, приобретенной гемолитической анемии, анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и миелодиспластического синдрома.

[0014] В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики гемолитической анемии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0015] В некоторых вариантах осуществления гемолитическая анемия представляет собой наследственную гемолитическую анемию или приобретенную гемолитическую анемию. В другом варианте осуществления приобретенная гемолитическая анемия развивается в результате расстройства или состояния, выбранного из группы, состоящей из состояния, вторичного по отношению к первичной инфекции, приему лекарственного препарата, гематологическому злокачественному новообразованию, аутоиммунному заболеванию, гиперспленизму, механическому искусственному сердечному клапану и переливанию крови или их комбинации. В еще одном варианте осуществления серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом, секвестрацией селезенки или их комбинацией.

[0016] В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и уменьшение числа ретикулоцитов. В некоторых аспектах настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики тромбофилических расстройств у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0017] В других аспектах настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики тромбофилии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0018] В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики тромбофилии у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции, и у субъекта наблюдается одно или более из: (a) увеличение протромбинового времени; (b) увеличение активированного частичного тромбопластинового времени; и/или (c) снижение концентрации фибриногена.

[0019] В еще одном аспекте настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики венозной тромбоэмболии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0020] В одном аспекте настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики артериального тромбоза у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0021] В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы предотвращения эмболии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0022] В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается увеличение протромбинового времени, увеличение активированного частичного тромбопластинового времени и снижение концентрации фибриногена.

[0023] В другом варианте осуществления 15-HEPE находится в форме свободной кислоты, в этерифицированной форме или в форме соли. В еще одном варианте осуществления этерифицированная форма представляет собой форму алкилового эфира или форму триглицерида. В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE включает 15(S)-HEPE, 15(R)-HEPE или их комбинации.

[0024] В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE находится в форме этилового эфира (15-HEPE EE) или 15-HEPE находится в форме оптически активного сложного эфира (15(S)-HEPE EE).

[0025] В некоторых вариантах осуществления композиция содержит от около 10 мг до около 10000 мг 15-HEPE. В другом варианте осуществления композиция содержит от около 1 г до около 2 г 15-HEPE. В другом варианте осуществления композиция содержит около 2 г или более 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления композиция составлена таким образом, чтобы обеспечить субъекту около 5 мг 15-HEPE на кг массы тела (мг/кг), около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг. В различных вариантах реализации 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот, присутствующих в композиции.

[0026] В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE вводят перорально. В различных вариантах реализации композицию вводят в 1-8 капсулах в день.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0027] На ФИГ. 1 представлено схематическое изображение исследования, описанного в примере 1, и его продолжительности.

[0028] На ФИГ. 2 показаны изменения массы тела животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[0029] На ФИГ. 3 показана масса тела в день умерщвления подопытных животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[0030] На ФИГ. 4A-4D показана масса почек и отношение массы почек к массе тела животных в день умерщвления в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[0031] На ФИГ. 5 показано содержание гидроксипролина в почках животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[0032] На ФИГ. 6A-6G показано окрашивание животных сириусом красным в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[0033] На ФИГ. 7 показан график, изображающий положительную область (%) у животных, окрашенную сириусом красным, в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[0034] На ФИГ. 8A-8D показаны анализы экспрессии генов α-SMA, TIMP-1, TGF-β и коллагена типа 1 у животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 1, соответственно.

[0035] На ФИГ. 9 представлено схематическое изображение исследования, описанного в примере 2, и его продолжительности.

[0036] На ФИГ. 10 показаны изменения массы тела животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 2.

[0037] На ФИГ. 11 показана масса тела в день умерщвленных подопытных животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 2.

[0038] На ФИГ. 12A и 12B представлена масса печени и отношение массы печени к массе тела животных в день умерщвления согласно исследованию, описанному в примере 2, соответственно.

[0039] На ФИГ. 13 показаны изменения уровней АЛТ в сыворотке животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 2.

[0040] На ФИГ. 14 показаны изменения общего билирубина в сыворотке животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 2.

[0041] На ФИГ. 15A-15E показано окрашивание сириусом красным и область фиброза животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 2.

[0042] На ФИГ. 16 показан график, изображающий положительную область (%) у животных, окрашенную сириусом красным, в соответствии с исследованием, описанным в примере 2.

[0043] На ФИГ. 17A-17D показаны анализы экспрессии генов α-SMA, TIMP-1, TGF-β и коллагена типа 1 у животных в соответствии с исследованием, описанным в примере 2, соответственно.

[0044] На ФИГ. 18A и 18B показано индуцированное DS102 (15-HEPE) ингибирование TGF-β в соответствии с исследованием, описанным в примере 3.

[0045] На ФИГ. 18C-18G показано влияние DS102 на мембранную транслокацию и деградацию рецептора TGF-β типа I, рецептора TGF-β типа II, рецептора TGF-β типа III, EGFR и кавеолина-1 согласно исследованию, описанному в примере 3, соответственно.

[0046] На ФИГ. 19 представлено схематическое изображение исследования, описанного в примере 4, и его продолжительности.

[0047] На ФИГ. 20 показан исходный липидный профиль пациентов в соответствии с исследованием, описанным в примере 4.

[0048] На ФИГ. 21A-21C представлены графики, изображающие изменения уровней инсулина, глюкозы и свободных жирных кислот у пациентов, которым вводили эпелеутон (15-HEPE) и плацебо соответственно.

[0049] На ФИГ. 22A и 22B представлены графики, на которых показаны изменения в уровнях HOMA-IR и апидо-ИК у пациентов, которым вводили эпелеутон и плацебо соответственно.

[0050] На ФИГ. 23A и 23B представлены графики, изображающие изменения средних уровней HbA1C у пациентов и долю пациентов, имеющих уровни HbA1C ≥ 6,5% на 16-й неделе, которым вводили эпелеутон и плацебо, соответственно.

[0051] На ФИГ. 24A и 24B представлены графики, изображающие среднее изменение и медианное (%) изменение профиля липидов у пациентов, которым вводили эпелеутон и плацебо, соответственно.

[0052] На ФИГ. 25A-25C представлены графики, изображающие изменения уровней холестерина, триглицеридов и VLDL-C у пациентов, которым вводили эпелеутон и плацебо, соответственно.

[0053] На ФИГ. 26 представлена схема, изображающая изменения профиля гепатоксического липида у пациентов, которым вводили DS102.

[0054] На ФИГ. 27 представлены графики, подтверждающие, что введение DS102 устраняет НАСГ с использованием теста OWL liver care.

[0055] На ФИГ. 28 представлены графики, изображающие изменения содержания жира в печени по контролируемому параметру затухания у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0056] На ФИГ. 29A-29C представлена диаграмма, изображающая изменения уровней воспалительного и профибротического белка у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0057] На ФИГ. 30 представлены графики, на которых показаны изменения экспрессии белка, включая целевые показатели развития НАСГ у пациентов, которым вводят DS102 и плацебо.

[0058] На ФИГ. 31 представлена вулканная диаграмма, изображающая снижение воспалительных и профиброзных белков у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0059] На ФИГ. 32 представлены графики, изображающие изменения молекул сосудистой адгезии у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0060] На ФИГ. 33 представлены графики, изображающие изменения в белках сердечно-сосудистого риска у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0061] На ФИГ. 34 представлены графики, изображающие изменения хемокинов у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0062] На ФИГ. 35 представлены графики, изображающие изменения членов суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0063] На ФИГ. 36A и 36B представлены графики, показывающие снижение уровней ALP у пациентов, которым вводили DS102 и плацебо.

[0064] На ФИГ. 37 представлена прямоугольная диаграмма зависимости этилового эфира 15-HEPE от относительных концентраций в плазме.

[0065] На ФИГ. 38A-38C представлены гистограммы, изображающие среднее изменение и стандартное отклонение количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и числа ретикулоцитов у крыс, которым вводили 15(S)-HEPE EE и плацебо соответственно.

[0066] На ФИГ. 39A-39C представлены гистограммы, изображающие среднее изменение и стандартное отклонение протромбинового времени, активированного частичного тромбопластинового времени и концентрации фибриногена у крыс, которым вводили 15(S)-HEPE EE и плацебо соответственно.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0067] Хотя настоящее изобретение может быть реализовано в различных формах, приведенное ниже описание нескольких вариантов осуществления выполнено исходя из предположения, что настоящее описание следует рассматривать как пример изобретения и оно не предназначено для ограничения изобретения конкретными проиллюстрированными вариантами осуществления. Заголовки представлены только для удобства и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Варианты осуществления, приведенные под любым заголовком, могут быть объединены с вариантами осуществления, приведенными под любым другим заголовком.

[0068] Предполагается, что числа в различных количественных значениях, приведенных в настоящей заявке, если явно не указано иное, являются приблизительными, как если бы минимальным и максимальным значениям в пределах указанных диапазонов предшествовало слово «около». Таким образом, незначительные отклонения от заявленного значения могут быть использованы для получения практически таких же результатов, как заявленное значение. Кроме того, под диапазоном подразумевается непрерывный диапазон, включающий каждое значение между указанными минимальным и максимальным значениями, а также любые диапазоны, которые могут быть образованы такими значениями. В настоящем документе также описаны любые и все соотношения (и диапазоны любых таких соотношений), которые могут быть получены путем деления указанного числового значения на любое другое указанное числовое значение. Соответственно, специалисту в данной области будет понятно, что многие такие соотношения, диапазоны и диапазоны соотношений могут быть однозначно получены из числовых значений, представленных в настоящем документе; и во всех случаях такие соотношения, диапазоны и диапазоны соотношений представляют различные варианты осуществления настоящего изобретения.

[0069] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое как правило известно специалистам в области техники, к которой относится данное изобретение. Несмотря на то, что способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе, могут быть использованы для практического применения настоящего описания, ниже описаны подходящие способы и материалы. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем документе, явным образом включены в настоящий документ посредством ссылки. В случае конфликта настоящая спецификация, включая определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, материалы, способы и примеры, описанные в настоящем документе, являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.

Определения

[0070] Используемый здесь термин «15-HEPE» представляет собой 15-гидроксиэйкоза-5Z,8Z,11Z,13E,17Z-пентаеновую кислоту. 15-HEPE, также иногда называемый 15-OHEPA, может быть синтезирован из эйкозапентаеновой кислоты («EPA», эйкоза-5,8,11,14,17-пентаеновая кислота или 20:5n-3), омега-3 жирной кислоты в соответствии со способами, известными в данной области техники. Например, 15-HEPE можно синтезировать путем воздействия на EPA фермента 15-липоксигеназы. Используемый в настоящем документе термин «15-HEPE» относится к 15-HEPE в форме свободной кислоты (например, 15-гидроксиэйкоза-5Z,8Z,11Z,13E,17Z-пентаеновая кислота) и/или к его фармацевтически приемлемому сложному эфиру, конъюгату или соли, или к смесям любого из вышеперечисленного. Вместо этого можно использовать производное 15-HEPE, хотя оно не включает какие-либо производные соединения, в которых отсутствует гидроксильная группа 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE используется в форме свободной кислоты. Альтернативно, в описании используются фармацевтически приемлемые сложные эфиры или соли 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE находится в форме C_1-4 алкилового эфира, такого как метиловый эфир, этиловый эфир или комбинация метилового эфира и этилового эфира. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE находится в форме глицерида (например, диглицерида или триглицерида). В другом варианте осуществления 15-HEPE находится в форме этилового эфира (также называемого в настоящем документе E-15-HEPE, 15-HEPE EE или этил-15-HEPE).

[0071] 15-HEPE представляет собой хиральную молекулу и может использоваться в (S)- или (R)-энантиомерной форме или в виде рацемической смеси. Используемый здесь термин «15-HEPE» включает все такие формы без ограничения стереоспецифичности. В другом варианте осуществления 15-HEPE включает (S) форму: 15(S)-гидрокси-(5Z,8Z,11Z,13E,17Z)-эйкозапентаеновой кислоты или (R) форму: 15(R)-гидрокси-(5Z,8Z,11Z,13E,17Z)-эйкозапентаеновой кислоты. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE EE содержит (S) форму: 15(S)-HEPE EE.

[0072] Используемый в данном документе термин «DS102» относится к 15-HEPE, 15-HEPE EE, композиции, содержащей 15-HEPE, композиции, содержащей 15-HEPE EE, или композиции, содержащей 15-HEPE и 15-HEPE EE.

[0073] Используемый здесь термин «эпелеутон» относится к 15-HEPE, 15-HEPE EE, композиции, содержащей 15-HEPE, композиции, содержащей 15-HEPE EE, или композиции, содержащей 15-HEPE и 15-HEPE EE.

[0074] Используемый здесь термин «лечение» заболевания, расстройства или состояния включает, по меньшей мере, частично: (1) подавление заболевания, расстройства или состояния, т. е. остановку или уменьшение развития заболевания, нарушения или состояния или его клинических симптомов; или (2) облегчение заболевания, расстройства или состояния, т. е. регрессию заболевания, нарушения или состояния или его клинических симптомов. Термин «профилактика» в отношении данного заболевания или расстройства означает: предотвращение начала развития заболевания, если оно еще не произошло, предотвращение возникновения заболевания или расстройства у субъекта, который может быть предрасположен к расстройству или заболеванию, которому еще не был поставлен диагноз расстройства или заболевания и/или предотвращение дальнейшего развития заболевания/расстройства, если оно уже присутствует.

[0075] «Эффективное количество» в настоящем документе относится к количеству активной композиции, которое необходимо для обеспечения терапевтического эффекта у субъекта. Термин «терапевтически эффективное количество» в настоящем документе относится к достаточному количеству агента или вводимого соединения, которое в некоторой степени ослабляет один или более симптомов заболевания, расстройства или состояния, подлежащего лечению. В некоторых вариантах осуществления результат представляет собой уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания или любое другое требуемое изменение биологической системы. Например, в некоторых вариантах осуществления «эффективное количество» для терапевтического применения представляет собой количество композиции, включающую в себя соединение, описанное в настоящем документе, необходимое для обеспечения клинически значимого снижения симптомов заболевания без нежелательных побочных эффектов. В некоторых вариантах осуществления подходящее «эффективное количество» в любом отдельном случае определяют с использованием методик, таких как исследование с повышением дозы. Термин «терапевтически эффективное количество» включает, например, профилактически эффективное количество. В других вариантах осуществления «эффективное количество» соединения, описанного в настоящем документе, такого как соединение формулы (А) или формулы (I), представляет собой количество, эффективное для достижения требуемого фармакологического эффекта или терапевтического улучшения без нежелательных побочных эффектов. В других вариантах осуществления подразумевается, что «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» варьируется от субъекта к субъекту из-за различий в метаболизме, возрасте, весе, общем состоянии субъекта, состоянии, подлежащему лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, и врачебного мнения лечащего врача. Термин «фармацевтически приемлемый» в данном контексте означает, что рассматриваемое вещество не вызывает неприемлемой токсичности для субъекта или взаимодействия с другими компонентами композиции.

[0076] Другие особенности и преимущества изобретения будут понятны из последующего подробного описания.

Композиции

[0077] В одном варианте осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 15-HEPE в качестве активного ингредиента. Термин «фармацевтически приемлемый» в данном контексте означает, что рассматриваемое вещество не вызывает неприемлемой токсичности для субъекта или взаимодействия с другими компонентами композиции.

[0078] В одном варианте осуществления 15-HEPE находится в форме сложного эфира (также называемого здесь E-15-HEPE, этил-15-HEPE или 15-HEPE EE). В другом варианте осуществления 15-HEPE содержит C₁-C₅ алкиловый эфир 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE включает метиловый эфир 15-HEPE, пропиловый эфир 15-HEPE или бутиловый эфир 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE включает оптически активную 15(S)-гидрокси-(5Z,8Z,11Z,13E,17Z)-эйкозапентаеновую кислоту. Этот изомер можно использовать в любой из обсуждавшихся выше форм.

[0079] В другом варианте осуществления 15-HEPE включает литий 15-HEPE, моно-, ди- или триглицерид 15-HEPE или любой другой сложный эфир или соль 15-HEPE, или форму 15-HEPE в виде свободной кислоты.

[0080] В различных вариантах осуществления изобретение относится к фармацевтическим композициям, например композициям для перорального введения, содержащим 15-. В одном варианте осуществления композиции содержат терапевтически эффективное количество 15-HEPE. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит от около 0,1% до около 99%, от около 1% до около 95%, от около 5% до около 90% по массе 15-HEPE. В настоящем документе термин «композиция» и фраза «фармацевтическая композиция» используются взаимозаменяемо.

[0081] В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит около по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80% или по меньшей мере около 90% по массе 15-HEPE. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80% или по меньшей мере около 90% по массе 15-HEPE.

[0082] В другом варианте осуществления 15-HEPE присутствует в композиции по настоящему изобретению в количестве от около 1 мг до около 10 000 мг, от около 25 мг до около 7500 мг, от около 25 мг до около 5000 мг, от около 50 мг до около 5000 мг, от около 50 мг до около 3000 мг, от около 75 мг до около 2500 мг или от около 100 мг до около 1000 мг, например, около 1 мг, около 2 мг, около 3 мг, около 4 мг, около 5 мг, около 6 мг, около 7 мг, около 8 мг, около 9 мг, около 10 мг, около 11 мг, около 12 мг, около 13 мг, около 14 мг, около 15 мг, около 16 мг, около 17 мг, около 18 мг, около 19 мг, около 20 мг, около 21 мг, около 22 мг, около 23 мг, около 24 мг, около 25 мг, около 50 мг, около 75 мг, около 100 мг, около 125 мг, около 150 мг, около 175 мг, около 200 мг, около 225 мг, около 250 мг, около 275 мг, около 300 мг, около 325 мг, около 350 мг, около 375 мг, около 400 мг, около 425 мг, около 450 мг, около 475 мг, около 500 мг, около 525 мг, около 550 мг, около 575 мг, около 600 мг, около 625 мг, около 650 мг, около 675 мг, или до 700 мг, около 725 мг, около 750 мг, около 775 мг, около 800 мг, около 825 мг, около 850 мг, около 875 мг, около 900 мг, около 925 мг, около 950 мг, около 975 мг, около 1000 мг, около 1025 мг, около 1050 мг, около 1075 мг, около 1100 мг, около 1025 мг, около 1050 мг, около 1075 мг, около 1200 мг, около 1225 мг, около 1250 мг, около 1275 мг, около 1300 мг, около 1325 мг, около 1350 мг, около 1375 мг, около 1400 мг, около 1425 мг, около 1450 мг, около 1475 мг, около 1500 мг, около 1525 мг, около 1550 мг, около 1575 мг, около 1600 мг, около 1625 мг, около 1650 мг, около 1675 мг, около 1700 мг, около 1725 мг, около 1750 мг, около 1775 мг, около 1800 мг, около 1825 мг, около 1850 мг, около 1875 мг, около 1900 мг, около 1925 мг, около 1950 мг, около 1975 мг, около 2000 мг, около 2025 мг, около 2050 мг, около 2075 мг, около 2100 мг, около 2125 мг, около 2150 мг, около 2175 мг, около 2200 мг, около 2225 мг, около 2250 мг, около 2275 мг, около 2300 мг, около 2325 мг, около 2350 мг, около 2375 мг, около 2400 мг, около 2425 мг, около 2450 мг, около 2475 мг, около 2500 мг, 2525 мг, около 2550 мг, около 2575 мг, около 2600 мг, около 2625 мг, около 2650 мг, около 2675 мг, около 2700 мг, около 2725 мг, около 2750 мг, около 2775 мг, около 2800 мг, около 2825 мг, около 2850 мг, около 2875 мг, около 2900 мг, около 2925 мг, около 2950 мг, около 2975 мг, около 3000 мг, около 3025 мг, около 3050 мг, около 3075 мг, около 3100 мг, около 3125 мг, около 3150 мг, около 3175 мг, около 3200 мг, около 3225 мг, около 3250 мг, около 3275 мг, около 3300 мг, около 3325 мг, около 3350 мг, около 3375 мг, около 3400 мг, около 3425 мг, около 3450 мг, около 3475 мг, около 3500 мг, около 3525 мг, около 3550 мг, около 3575 мг, около 3600 мг, около 3625 мг , около 3650 мг, около 3675 мг, около 3700 мг, около 3725 мг, около 3750 мг, около 3775 мг, около 3800 мг, около 3825 мг, около 3850 мг, около 3875 мг, около 3900 мг, около 3925 мг, около 3950 мг, около 3975 мг, около 4000 мг, около 4025 мг, около 4050 мг, около 4075 мг, около 4100 мг, около 4125 мг, около 4150 мг, около 4175 мг, около 4200 мг, около 4225 мг, около 4250 мг, около 4275 мг, около 4300 мг, около 4325 мг, около 4350 мг, около 4375 мг, около 4400 мг, около 4425 мг, около 4450 мг, около 4475 мг, около 4500 мг, около 4525 мг, около 4550 мг, около 4575 мг, около 4600 мг, около 4625 мг, около 4650 мг, около 4675 мг, около 4700 мг, около 4725 мг, около 4750 мг, около 4775 мг, около 4800 мг, около 4825 мг, около 4850 мг, около 4875 мг, около 4900 мг, около 4925 мг, около 4950 мг, около 4975 мг, около 5000 мг, около 5025 мг, около 5050 мг, около 5075 мг, около 5100 мг, около 5125 мг, около 5150 мг, около 5175 мг, около 5200 мг, около 5225 мг, около 5250 мг, около 5275 мг, около 5300 мг мг, около 5325 мг, около 5350 мг, около 5375 мг, около 5400 мг, около 5425 мг, около 5450 мг, около 5475 мг, около 5500 мг, около 5525 мг, около 5550 мг, около 5575 мг, около 5600 мг, около 5625 мг, около 5650 мг, около 5675 мг, около 5700 мг, около 5725 мг, около 5750 мг, около 5775 мг, около 5800 мг, около 5825 мг, около 5850 мг, около 5875 мг, около 5900 мг, около 5925 мг, около 5950 мг, около 5975 мг, около 6000 мг, около 6025 мг , около 6050 мг, около 6075 мг, около 6100 мг, около 6125 мг, около 6150 мг, около 6175 мг, около 6200 мг, около 6225 мг, около 6250 мг, около 6275 мг, около 6300 мг, около 6325 мг, около 6350 мг, около 6375 мг, около 6400 мг, около 6425 мг, около 6450 мг, около 6475 мг, около 6500 мг, около 6525 мг, около 6550 мг, около 6575 мг, около 6600 мг, около 6625 мг, около 6650 мг , около 6675 мг, около 6700 мг, около 6725 мг, около 6750 мг, около 6775 мг, около 6800 мг, около 6825 мг, около 6850 мг, около 6875 мг, около 6900 мг, около 6925 мг, около 6950 мг, около 6975 мг, около 7000 мг, около 7025 мг, около 7050 мг, около 7075 мг, около 7100 мг, около 7125 мг, около 7150 мг, около 7175 мг, около 7200 мг, около 7225 мг, около 7250 мг, около 7275 мг , около 7300 мг, около 7325 мг, около 7350 мг, около 7375 мг, а около 7400 мг, около 7425 мг, около 7450 мг, около 7475 мг, около 7500 мг, около 7525 мг, около 7550 мг, около 7575 мг, около 7600 мг, около 7625 мг, около 7650 мг, около 7675 мг, около 7700 мг, около 7725 мг, около 7750 мг, около 7775 мг, около 7800 мг, около 7825 мг, около 7850 мг, около 7875 мг, около 7900 мг, около 7925 мг, около 7950 мг, около 7975 мг, около 8000 мг, около 8025 мг, около 8050 мг, около 8075 мг, около 8100 мг, около 8125 мг, около 8150 мг, около 8175 мг, около 8200 мг, около 8225 мг, около 8250 мг, около 8275 мг, около 8300 мг, около 8325 мг, около 8350 мг, около 8375 мг, около 8400 мг, около 8425 мг, около 8450 мг, около 8475 мг, около 8500 мг, около 8525 мг, около 8550 мг, около 8575 мг, около 8600 мг, около 8625 мг, около 8650 мг, около 8675 мг, около 8700 мг, около 8725 мг, около 8750 мг, около 8775 мг, около 8800 мг, около 8825 мг, около 8850 мг, около 8875 мг, около 8900 мг, около 8925 мг, около 8950 мг, около 8975 мг, около 9000 мг, около 9025 мг, около 9050 мг, около 9075 мг, около 9100 мг, около 9125 мг, около 9150 мг, около 9175 мг, около 9200 мг, около 9225 мг, около 9250 мг, около 9275 мг, около 9300 мг, около 9325 мг, около 9350 мг, около 9375 мг, около 9400 мг, около 9425 мг, около 9450 мг, около 9475 мг, около 9500 мг, около 9525 мг, около 9550 мг, около 9575 мг, около 9600 мг, около 9625 мг, около 9650 мг, около 9675 мг, около 9700 мг, около 9725 мг, около 9750 мг, около 9775 мг, около 9800 мг, около 9825 мг, около 9850 мг, около 9875 мг, около 9900 мг, около 9925 мг, около 9950 мг, около 9975 мг, или около 10000 мг.

[0083] В одном варианте осуществления 15-HEPE, присутствующий в композиции согласно настоящему изобретению, содержит по меньшей мере около 90% по массе 15-HEPE (как определено и проиллюстрировано в настоящем документе). Композиции 15-HEPE могут содержать 15-HEPE даже более высокой чистоты, например, по меньшей мере около 95% по массе, 15-HEPE или по меньшей мере около 97% по массе 15-HEPE, причем 15-HEPE представляет собой любую форму 15-HEPE, как описано в настоящем документе. Чистота 15-HEPE может быть дополнительно определена (например, профиль примесей) любым из представленных в настоящем документе описаний 15-HEPE.

[0084] Выше обсуждались количества 15-HEPE в фармацевтической композиции и их чистота. Природа незаменимых жирных кислот и их синтез таковы, что композиция 15-HEPE может включать остатки других незаменимых жирных кислот в каскаде метаболизма незаменимых жирных кислот.

[0085] В одном варианте осуществления композиция согласно настоящему изобретению содержит не более чем около 10%, не более чем около 9%, не более чем около 8%, не более чем около 7%, не более чем около 6%, не более чем около 5%, не более чем около 4%, не более чем около 3%, не более чем около 2%, не более чем около 1%, или не более около 0,5%, по массе других омега-3 жирных кислот, включая альфа-линоленовую кислоту, стеаридоновую кислоту, докозагексаеновую кислоту (DHA) или их производные. В других вариантах осуществления такие другие омега-3 жирные кислоты по существу или полностью отсутствуют.

[0086] В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98%, по меньшей мере около 99% или 100% по массе всех жирных кислот, присутствующих в композиции согласно настоящему изобретению.

[0087] В одном варианте осуществления форма соли 15-HEPE, присутствующая в композиции изобретения, содержит по меньшей мере 90% по массе солевой формы 15-HEPE. Композиции, содержащие форму соли 15-HEPE, могут иметь даже более высокую степень чистоты, например, по меньшей мере 91% по массе, по меньшей мере 92% по массе, по меньшей мере 93% по массе, по меньшей мере 94% по массе, по меньшей мере 95% по массе, по меньшей мере 96% по массе или по меньшей мере 97% по массе солевой формы 15-HEPE.

[0088] Может присутствовать некоторое количество остаточной эйкозапентаеновой кислоты от синтеза 15-HEPE. Может присутствовать не более около 10%, не более около 9%, не более около 8%, не более около 7%, не более около 6%, не более около 5%, не более около 4%, не более около 3%, не более около 2%, не более около 1% или не более около 0,5% по массе ЭПК. В качестве альтернативы ЭПК, по существу, отсутствует или отсутствует в форме, которая не была модифицирована до гидроксильной формы.

[0089] В одном варианте осуществления в настоящем описании предложена фармацевтическая композиция, содержащая 15-HEPE или ее производное, инкапсулированное в оболочку капсулы. В одном варианте осуществления композицию вводят субъекту в количестве, достаточном для обеспечения до около 1 г, около 2 г, около 3 г, около 4 г, около 5 г, около 6 г, около 7 г, около 8 г, около 9 г или около 10 г 15-HEPE E или его производного в день. В одном варианте осуществления композицию вводят субъекту в количестве, достаточном для обеспечения от около 4 г до около 8 г, от около 1 г до около 2 г, от около 2 г до около 4 г, от около 3 г до около 8 г, от около 4 г до около 6 г 15-HEPE или его производного в день. В одном варианте осуществления в оболочку капсулы инкапсулировано от около 500 мг до около 1 г 15-HEPE или его производного.

[0090] В одном варианте осуществления оболочка капсулы содержит желатин (например, желатин RXL или костный желатин с более низкой молекулярной массой). В другом варианте осуществления оболочка капсулы содержит желатин RXL, который был обработан протеолитическим ферментом для разрезания структуры желатина и эффективного уменьшения его молекулярной массы. В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит сложные эфиры 15-HEPE D-сорбита и 1,4-сорбитана. В одном варианте осуществления оболочка капсулы содержит (a) желатин и (b) пластификаторы, выбранные из одного или более из D-сорбита и 1,4-сорбитана. В одном варианте осуществления желатин соответствует описанию патента США 7,485,323 и полностью включен в настоящее описание посредством ссылки.

[0091] В одном варианте осуществления пластификатор включает 1,4-сорбитаны в количестве от около 20% до около 30%, например, от около 24% до около 28%, 24% или 28% (в пересчете на сухое вещество), и содержание D-сорбита от около 30% до около 50%, например, от около 35% до около 45% (в пересчете на сухое вещество).

[0092] В некоторых вариантах осуществления капсула представляет собой твердую желатиновую капсулу. В другом варианте осуществления капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу.

[0093] В некоторых вариантах осуществления оболочка капсулы содержит модифицированный крахмал, каррагинан (например, экстракт красных морских водорослей), динатрийфосфат, глицерин и/или сорбит. В некоторых вариантах осуществления оболочка капсулы дополнительно содержит воду. В некоторых вариантах осуществления оболочка капсулы стабильна до температуры около 65 °C и/или pH около 12.

[0094] В некоторых вариантах осуществления оболочка капсулы не имеет запаха и имеет нейтральный цвет (например, бесцветный, белый или прозрачный).

[0095] В некоторых вариантах осуществления оболочка капсулы дополнительно содержит глицерин, очищенную воду, диоксид титана, триглицериды со средней длиной цепи и лецитин.

Дополнительные активные агенты

[0096] В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или более дополнительных активных агентов. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит количество дополнительного активного агента, которое меньше общепризнанного терапевтически эффективного количества для этого агента. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит количество дополнительного активного агента, которое равно или больше общепризнанного терапевтически эффективного количества для этого агента. Если необходимо использовать дополнительный активный агент, 15-HEPE может быть составлен в виде одной единицы дозы или может быть составлен в виде от двух до множества единиц дозы для скоординированного, комбинированного или одновременного введения.

[0097] ЭПК сама по себе обладает благоприятными свойствами при лечении жировой болезни печени и/или сердечно-сосудистых заболеваний, и в альтернативном варианте осуществления можно комбинировать 15-НЕРЕ с ЭПК.

[0098] В одном варианте осуществления 15-HEPE и один или более активных агентов присутствуют в композиции по настоящему изобретению или вводятся совместно в массовом соотношении 15-HEPE: дополнительный агент от около 1:1000 до около 1000:1, от около 1:500 до около 500:1, от около 1:100 до около 100:1, от около 1:50 до около 50:1, от около 1:25 до около 25:1, от около 1:10 до около 10:1, от около 1:5 до около 5:1, от около 1:4 до около 4:1, от около 1:3 до около 3:1, от около 1:2 до около 2:1 или около 1:1.

Лекарственные формы

[0099] Композиция для применения в соответствии с изобретением может быть составлена в виде одной или более единиц дозы. Термины «единица дозы» и «единица дозирования» в данном документе относятся к части композиции, которая содержит количество терапевтического агента, подходящее для однократного введения для обеспечения терапевтического эффекта. Такие единицы дозирования можно вводить от одной до множества (например, от 1 до около 10, от 1 до 8, от 1 до 6, от 1 до 4 или от 1 до 2) раз в день или столько раз, сколько необходимо для получения терапевтического ответа.

[0100] В некоторых вариантах осуществления композиции согласно настоящему изобретению находятся в форме перорально доставляемых лекарственных форм или единиц. Не имеющие ограничительного характера примеры подходящих лекарственных форм включают таблетки (например, суспензионные таблетки, таблетки для суспензии, таблетки быстрого диспергирования, жевательные таблетки, и т. д), капли, капсулы (например, мягкую или твердую желатиновую капсулу или капсулу ГПМЦ), таблетки для рассасывания, саше, облатки, пастилки, гранулы, суспензию, эликсиры, сиропы или любую другую твердую лекарственную форму, подходящую для перорального введения. Термины «пероральная доставка» и «пероральное введение» в данном документе включают любую форму доставки, при которой агент или композиция помещаются в рот субъекта, проходящего лечение, с проглатыванием или без. Таким образом, это включает трансбуккальное и сублингвальное введение, а также доставку через пищевод.

[0101] В качестве альтернативы, композиции по настоящему изобретению также могут быть приготовлены для ректальной, местной или парентеральной (например, подкожной, внутримышечной, внутривенной и внутрикожной или инфузионной) доставки.

[0102] При обсуждении количества 15-HEPE в композиции по настоящему изобретению его можно разделить на несколько лекарственных форм. Существует ограничение в отношении размера для перорального введения. Если субъекту необходимо вводить от около 1 до около 4 г 15-HEPE в день, это может быть до 4 капсул, каждая из которых содержит около 1 г 15-HEPE.

[0103] Композиции согласно настоящему изобретению могут быть в форме жидких дозированных форм или единиц дозирования для непосредственного приема внутрь или их можно смешивать с пищей или напитком перед приемом внутрь. Не имеющие ограничительного характера примеры подходящих жидких лекарственных форм включают растворы, суспензии, эликсиры, сиропы, жидкие аэрозольные композиции и т.п.

[0104] В другом варианте осуществления композиции согласно настоящему изобретению содержат одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. Термин «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» в настоящем документе означает любое вещество, которое само по себе не является терапевтическим средством, используемое в качестве носителя или наполнителя для доставки терапевтического агента субъекту или добавляемое в композицию для улучшения свойств при обработке или хранении, или для обеспечения или облегчения формирования единицы дозы композиции, не вызывающее неприемлемой токсичности или взаимодействия с другими компонентами композиции. Только в качестве примера, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может содержать один или более антиоксидантов, поверхностно-активных веществ, консервантов, ароматизаторов, сорастворителей, добавок, повышающих вязкость, суспендирующих добавок и липофильных фаз.

[0105] В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит один или более антиоксидантов, таких как аскорбиновая кислота, пальмитиновая кислота, аскорбилпальмитат, α-токоферол, идебенон, убихинон, феруловая кислота, коэнзим Q10, ликопин, зеленый чай, катехины, эпигаллокатехин-3-галлат (ЭГКГ), полифенолы зеленого чая (ПЗЧ), силимарин, ягоды кофе, ресвератрол, экстракты виноградных косточек, экстракты граната, генистен, пикногенол, ниацинамид и т. п. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит от около 0,01% масс. до около 2% масс. антиоксиданта, например, около 0,01% масс., около 0,02% масс., около 0,03% масс., около 0,04% масс., около 0,05% масс., около 0,06% масс., около 0,07% масс., около 0,08% масс., около 0,09% масс., около 0,1% масс., около 0,11% масс., около 0,12% масс., около 0,13 масс.%, около 0,14% масс., около 0,15% масс., около 0,16% масс., около 0,17% масс., около 0,18% масс., около 0,19% масс., около 0,2% масс., около 0,21% масс. , около 0,22% масс., около 0,23% масс., около 0,24% масс., около 0,25% масс., около 0,26% масс., около 0,27% масс., около 0,28% масс., около 0,29% масс., около 0,3% масс., около 0,31% масс., около 0,32% масс., около 0,33% масс., около 0,34% масс., около 0,35% масс., около 0,36% масс., около 0,37% масс., около 0,38 масс. .%, около 0,39% масс., около 0,4% масс., около 0,41% масс., около 0,42% масс., около 0,43% масс., около 0,44% масс., около 0,45% масс., около 0,46% масс. , около 0,47% масс., около 0,48% масс., около 0,49% масс., около 0,5% масс., около 0,51% масс., около 0,52% масс. , около 0,53% масс., около 0,54% масс., около 0,55% масс., около 0,56% масс., около 0,57% масс., около 0,58% масс., около 0,59% масс., около 0,6% масс., около 0,61% масс., около 0,62% масс., около 0,63% масс., около 0,64% масс., около 0,65% масс., около 0,66% масс., около 0,67% масс., около 0,68% масс., около 0,69 масс.%, около 0,7% масс., около 0,71% масс., около 0,72% масс., около 0,73% масс., около 0,74% масс., около 0,75% масс., около 0,76% масс., около 0,77% масс. , около 0,78% масс., около 0,79% масс., около 0,8% масс., около 0,81% масс., около 0,82% масс., около 0,83% масс., около 0,84% масс., около 0,85% масс., около 0,86% масс., около 0,87% масс., около 0,88% масс., около 0,89% масс., около 0,9% масс., около 0,91% масс., около 0,92% масс., около 0,93% масс., около 0,94% масс.%, около 0,95% масс., около 0,96% масс., около 0,97% масс., около 0,98% масс., около 0,99% масс., около 1% масс., около 1,1% масс., около 1,2% масс., около 1,3% масс., около 1,4% масс., около 1,5% масс., около 1,6% масс., около 1,7% масс., около 1,8% масс., около 1,9% масс. или около 2% масс. один или более антиоксидантов.

Терапевтические способы

[0106] Композиции и составы, описанные в настоящем документе, могут быть использованы для лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления гематологическое заболевание представляет собой нарушение гемоглобина, нарушение эритроцитов, гемолитическую анемию, тромбофилическое нарушение, венозную тромбоэмболию, артериальный тромбоз, эмболию или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE).

[0107] Композиции и составы, раскрытые в настоящем документе, могут быть использованы для лечения и/или профилактики гематологических нарушений, нарушений гемоглобина и/или нарушений эритроцитов. Гематологические расстройства относятся к классу состояний, поражающих кровь и кроветворные органы. В то время как нарушения гемоглобина и нарушения эритроцитов аналогичны гематологическим нарушениям, нарушения гемоглобина и нарушения эритроцитов представляют собой более узкий класс нарушений. В частности, нарушения гемоглобина относятся к дефектам белка, переносящего кислород в эритроцитах. Нарушения эритроцитов относятся к дефектам самих эритроцитов. Не имеющие ограничительного характера примеры факторов риска гематологических нарушений, нарушений гемоглобина и нарушений эритроцитов включают снижение количества эритроцитов, увеличение ширины распределения эритроцитов и увеличение числа ретикулоцитов. Не имеющие ограничительного характера примеры гематологических нарушений, нарушений гемоглобина и нарушений эритроцитов включают анемию (нутритивную анемию и анемию, не связанную с дефицитом железа, наследственную гемолитическую анемию, например, серповидноклеточную болезнь, серповидноклеточную анемию, β-талассемию и наследственный сфероцитоз, приобретенную гемолитическую анемию, например, вторичную по отношению к инфекции, приему лекарств, гематологическому злокачественному новообразованию, аутоиммунному заболеванию, гиперспленизму, механическому клапану сердца и переливанию крови, анемию Фанкони, железодефицитную анемию), злокачественное заболевание крови (лимфому, лейкоз и миелому), дефекты коагуляции (тромбофилию, гемофилию, болезнь фон Виллебранда и тромбоцитопению), дефицит фолиевой кислоты, дефицит B12 и миелодиспластический синдром. В некоторых вариантах осуществления серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом и/или секвестрацией селезенки.

[0108] В некоторых вариантах осуществления у субъекта снижено количество эритроцитов по меньшей мере на 10% ниже нормы, по меньшей мере на 15% ниже нормы, по меньшей мере на 20% ниже нормы, по меньшей мере на 25% ниже нормы или по меньшей мере на 30% ниже нормы.

[0109] В некоторых вариантах осуществления у субъекта увеличена ширина распределения эритроцитов, при этом эритроциты различаются по размеру около на 15-20%, около на 20-25%, около на 25-30%, около на 30-35% или около на 35-40%.

[0110] В другом варианте осуществления субъект имеет повышенное число ретикулоцитов по меньшей мере около 5% от общего количества эритроцитов, по меньшей мере около 10% от общего количества эритроцитов, по меньшей мере около 15% от общего количества эритроцитов, или по меньшей мере около 20% от общего количества эритроцитов.

[0111] В некоторых вариантах осуществления субъект имеет повышенный исходный уровень триглицеридов от около 135 мг/дл до около 2000 мг/дл, например, от около 135 мг/дл до около 500 мг/дл, от около 150 мг/дл до около 500 мг/дл, от около 200 мг/дл до около 499 мг/дл, от около 200 мг/дл до <500 мг/дл, от около 300 мг/дл до около 1800 мг/дл, от около 500 мг/дл до около 1500 мг/дл, около 500 мг/дл до около <2000 мг/дл или от около 500 мг/дл до около 2000 мг/дл. В некоторых вариантах осуществления субъект имеет исходный уровень триглицеридов натощак от около 50 мг/дл до около 2000 мг/дл, например, от около 50 мг/дл до около 1500 мг/дл, от около 80 мг/дл до около 1500 мг/дл от около 50 мг/дл до около 190 мг/дл, от около 80 мг/дл до около 190 мг/дл, от около 190 мг/дл до около 250 мг/дл, от около 250 мг/дл до около 1400 мг/дл, около от 500 мг/дл до около 1200 мг/дл, от около 500 мг/дл до около 1500 мг/дл, от около 500 мг/дл до около <2000 мг/дл или от около 500 мг/дл до около 2000 мг/дл. В одном варианте осуществления у субъекта уровень триглицеридов натощак составляет от около 80 мг/дл до около 1400 мг/дл. В некоторых вариантах осуществления субъект или группа субъектов имеют исходный уровень триглицеридов (или средний исходный уровень триглицеридов в случае группы субъектов) натощак или после еды около 50 мг/дл, около 55 мг/дл, около 60 мг/дл, около 65 мг/дл, около 70 мг/дл, около 75 мг/дл, около 80 мг/дл, около 85 мг/дл, около 90 мг/дл, около 95 мг/дл, около 100 мг/дл, около 105 мг/дл, около 110 мг/дл, около 115 мг/дл, около 120 мг/дл, около 125 мг/дл, около 130 мг/дл, около 135 мг/дл, около 140 мг/дл, около 145 мг/дл, около 150 мг/дл, около 155 мг/дл, около 160 мг/дл, около 165 мг/дл, около 170 мг/дл, около 175 мг/дл, около 180 мг/дл, около 185 мг/дл, около 190 мг/дл, около 195 мг/дл, около 200 мг/дл, около 205 мг/дл, около 210 мг/дл, около 215 мг/дл, около 220 мг/дл, около 225 мг/дл, около 230 мг/дл, около 235 мг/дл, около 240 мг/дл, около 245 мг/дл, около 250 мг/дл, около 255 мг/дл, около 260 мг/дл, около 265 мг/дл, около 270 мг/дл, около 275 мг/дл, около 280 мг/дл, около 285 мг/дл, около 290 мг/дл, около 295 мг/дл, около 300 мг/дл, около 305 мг/дл, около 310 мг/дл, около 315 мг/дл, около 320 мг/дл, около 325 мг/дл, около 330 мг/дл, около 335 мг/дл, около 340 мг/дл, около 345 мг/дл, около 350 мг/дл, около 355 мг/дл, около 360 мг/дл, около 365 мг/дл, около 370 мг/дл, около 375 мг/дл, около 380 мг/дл, около 385 мг/дл, около 390 мг/дл, около 395 мг/дл, около 400 мг/дл, около 405 мг/дл, около 410 мг/дл, около 415 мг/дл, около 420 мг/дл, около 425 мг/дл, около 430 мг/дл, около 435 мг/дл, около 440 мг/дл, около 445 мг/дл, около 450 мг/дл, около 455 мг/дл, около 460 мг/дл, около 465 мг/дл, около 470 мг/дл, около 475 мг/дл, около 480 мг/дл, около 485 мг/дл, около 490 мг/дл, около 495 мг/дл, около 500 мг/дл, около 1000 мг/дл, около 1100 мг/дл, около 1200 мг/дл, около 1300 мг/дл, около 1400 мг/дл, около 1500 мг/дл, около 2000 мг/дл, около 2500 мг/дл, около 3000 мг/дл, около 3500 мг/дл, около 4000 мг/дл, около 4500 мг/дл, около 5000 мг/дл или больше около 5000 мг/дл. В некоторых вариантах осуществления исходный уровень триглицеридов (или средний исходный уровень триглицеридов в случае группы субъектов) субъекта или группы субъектов после приема пищи или натощак больше или равен 80 мг/дл, больше или равен около 100 мг/дл, больше или равен около 120 мг/дл больше или равен около 150 мг/дл, больше или равен около 175 мг/дл, больше или равен около 250 мг/дл или больше равен около 500 мг/дл, например, от около 190 мг/дл до около 250 мг/дл, от около 80 мг/дл до около 190 мг/дл, от около 250 мг/дл до около 1400 мг/дл, около 200 мг/дл до около 500 мг/дл, от около 300 мг/дл до около 1800 мг/дл, от около 500 мг/дл до около 1500 мг/дл, от около 80 мг/дл до около 1500 мг/дл, от около 80 мг/дл до менее около 2000 мг/дл, от около 80 мг/дл до около 2000 мг/дл, от около 500 мг/дл до менее чем около 2000 мг/дл или от около 500 мг/дл до около 2000 мг/дл.

[0112] В другом варианте осуществления у субъекта исходное артериальное давление повышено на по меньшей мере около 100 мм рт.ст., по меньшей мере около 115 мм рт.ст., по меньшей мере около 120 мм рт.ст., по меньшей мере около 125 мм рт.ст., по меньшей мере около 130 мм рт.ст., по меньшей мере около 135 мм рт.ст., по меньшей мере около 140 мм рт.ст., по меньшей мере около 145 мм рт.ст., по меньшей мере около 150 мм рт.ст., по меньшей мере около 155 мм рт.ст., по меньшей мере около 160 мм рт.ст., по меньшей мере около 165 мм рт.ст. или по меньшей мере около 170 мм рт.ст.

[0113] В некоторых вариантах осуществления повышенный исходный уровень глюкозы натощак у субъекта составляет по меньшей мере около 100 мг/дл, по меньшей мере около 115 мг/дл, по меньшей мере около 120 мг/дл, по меньшей мере около 125 мг/дл, по меньшей мере около 130 мг/дл, по меньшей мере около 135 мг/дл, по меньшей мере около 140 мг/дл, по меньшей мере около 145 мг/дл, по меньшей мере около 150 мг/дл, по меньшей мере около 155 мг/дл, по меньшей мере около 160 мг/дл, по меньшей мере около 165 мг/дл или по меньшей мере около 170 мг/дл.

[0114] В некоторых вариантах осуществления у субъекта снижены исходные уровни ХС-ЛПВП менее около 60 мг/дл, менее около 55 мг/дл, менее около 50 мг/дл, менее около 45 мг/дл, менее около 40 мг/дл, менее около 35 мг/дл, менее около 30 мг/дл, менее около 25 мг/дл, менее около 20 мг/дл, менее около 15 мг/дл, менее около 10 мг/дл или менее около 5 мг/дл.

[0115] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики гематологического заболевания у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0116] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики гематологического заболевания у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0117] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0118] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики гематологического заболевания у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска гематологического заболевания перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение исходного количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и/или числа ретикулоцитов у субъекта перед введением 15-HEPE. В одном варианте осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0119] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска гематологического заболевания перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение исходного количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и/или числа ретикулоцитов у субъекта перед введением 15-HEPE. В одном варианте осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0120] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0121] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска гематологического нарушения перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение исходного количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и/или числа ретикулоцитов у субъекта перед введением 15-HEPE. В одном варианте осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0122] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0123] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска нарушения эритроцитов перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение исходного количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и/или числа ретикулоцитов у субъекта перед введением 15-HEPE. В одном варианте осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0124] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического заболевания, нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0125] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического заболевания, нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска для гематологического нарушения, нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов, до введения 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один фактор риска представляет собой сниженное количество эритроцитов, увеличение ширины распределения эритроцитов и/или увеличение числа ретикулоцитов. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается одно или более из следующих явлений: увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или снижение числа ретикулоцитов.

[0126] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гематологического заболевания, нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции. В другом варианте осуществления гематологическое нарушение, нарушение гемоглобина и/или нарушение эритроцитов выбирают из группы, состоящей из наследственной гемолитической анемии, приобретенной гемолитической анемии, анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и миелодиспластического синдрома. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска наследственной гемолитической анемии, приобретенной гемолитической анемии, анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и/или миелодиспластического синдрома перед введением 15-НЕРЕ или композиции, содержащей 15-НЕРЕ. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение исходного количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и/или числа ретикулоцитов у субъекта перед введением 15-HEPE. В одном варианте осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов.

[0127] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гемолитической анемии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0128] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гемолитической анемии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска гемолитической анемии перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один фактор риска представляет собой сниженное количество эритроцитов, увеличение ширины распределения эритроцитов и/или увеличение числа ретикулоцитов. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается одно или более из следующих явлений: увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или снижение числа ретикулоцитов.

[0129] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гемолитической анемии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции. В некоторых вариантах осуществления гемолитическая анемия представляет собой наследственную гемолитическую анемию или приобретенную гемолитическую анемию. В другом варианте осуществления наследственная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из серповидноклеточной болезни, серповидноклеточной анемии, β-талассемии и наследственного сфероцитоза. В еще одном варианте осуществления приобретенная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из вторичной и развившейся на фоне инфекции, медикаментозной терапии, гематологического злокачественного новообразования, аутоиммунного заболевания, гиперспленизма, механического искусственного клапана сердца и переливания крови. В различных вариантах осуществления серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом и/или секвестрацией селезенки. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и уменьшение числа ретикулоцитов после введения.

[0130] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики гемолитической анемии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции. В некоторых вариантах осуществления гемолитическая анемия представляет собой наследственную гемолитическую анемию или приобретенную гемолитическую анемию. В другом варианте осуществления наследственная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из серповидноклеточной болезни, серповидноклеточной анемии, β-талассемии и наследственного сфероцитоза. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска наследственной гемолитической анемии или приобретенной гемолитической анемии перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления приобретенная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из вторичной и развившейся на фоне инфекции, медикаментозной терапии, гематологического злокачественного новообразования, аутоиммунного заболевания, гиперспленизма, механического искусственного клапана сердца и переливания крови. В различных вариантах осуществления серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом и/или секвестрацией селезенки. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение исходного количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и/или числа ретикулоцитов у субъекта перед введением 15-HEPE. В одном варианте осуществления у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов.

[0131] Композиции и составы, описанные в настоящем документе, могут дополнительно использоваться при лечении и/или профилактике тромбофилии. Тромбофилические расстройства относятся к классу состояний, характеризующихся аномальной коагуляцией крови, что увеличивает риск тромбоза. Не имеющие ограничительного характера примеры факторов риска тромбофилических расстройств включают снижение протромбинового времени, снижение активированного частичного тромбопластинового времени и повышение концентрации фибриногена.

[0132] В некоторых вариантах осуществления у субъекта снижено протромбиновое время по меньшей мере на 10% ниже нормы, по меньшей мере на 15% ниже нормы, по меньшей мере на 20% ниже нормы, по меньшей мере на 25% ниже нормы или по меньшей мере на 30% ниже нормы.

[0133] В некоторых вариантах осуществления у субъекта снижено активированное частичное тромбопластиновое время по меньшей мере на 10% ниже нормы, по меньшей мере на 15% ниже нормы, по меньшей мере на 20% ниже нормы, по меньшей мере на 25% ниже нормы или по меньшей мере на 30% ниже нормы.

[0134] В некоторых вариантах осуществления у субъекта повышена концентрация фибриногена по меньшей мере на 10% ниже нормы, по меньшей мере на 15% ниже нормы, по меньшей мере на 20% ниже нормы, по меньшей мере на 25% ниже нормы или по меньшей мере на 30% ниже нормы.

[0135] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики тромофилии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0136] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики тромбофилического расстройства у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска тромбофилического расстройства перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одним фактором риска является снижение протромбинового времени, снижение активированного частичного тромбопластинового времени и/или повышение концентрации фибриногена. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается одно или более из следующего: увеличение протромбинового времени, увеличение активированного частичного тромбопластинового времени и снижение концентрации фибриногена после введения 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0137] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики венозного тромбоэмболизма у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0138] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики венозного тромбоэмболизма у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска венозного тромбоэмболизма перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одним фактором риска является снижение протромбинового времени, снижение активированного частичного тромбопластинового времени и/или повышение концентрации фибриногена. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается одно или более из следующего: увеличение протромбинового времени, увеличение активированного частичного тромбопластинового времени и/или снижение концентрации фибриногена.

[0139] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики артериального тромбоза у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0140] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы лечения и/или профилактики артериального тромбоза у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска артериального тромбоза перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одним фактором риска является снижение протромбинового времени, снижение активированного частичного тромбопластинового времени и/или повышение концентрации фибриногена. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается одно или более из следующего: увеличение протромбинового времени, увеличение активированного частичного тромбопластинового времени и/или снижение концентрации фибриногена.

[0141] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы профилактики эмболии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0142] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены способы профилактики эмболии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта по меньшей мере одного фактора риска развития эмболии перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одним фактором риска является снижение протромбинового времени, снижение активированного частичного тромбопластинового времени и/или повышение концентрации фибриногена. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается одно или более из следующего: увеличение протромбинового времени, увеличение активированного частичного тромбопластинового времени и/или снижение концентрации фибриногена.

[0143] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики эндотелиальной дисфункции у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0144] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики эндотелиальной дисфункции у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту до около 8 г 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0145] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, предотвращения или снижения апоптоза клеток, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается снижение маркеров, связанных с апоптозом, таких как белки семейства Bcl-2, активированные фрагменты каспаз и/или расщепленный PARP-1.

[0146] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения, профилактики и/или уменьшения воспаления, включающий введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается снижение активации Т-клеток, активация В-клеток и/или хемотаксис.

[0147] Композиции и составы, описанные в настоящем документе, могут быть использованы для лечения или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний или нарушений. В одном варианте осуществления сердечно-сосудистое заболевание или расстройство выбрано из: дислипидемии, гиперлипидемии, гиперхолестеринемии, гипертриглицеридемии, первичной гиперхолестеринемии, первичной гиперлипидемии, общей первичной гиперлипидемии, распространенной гиперхолестеринемии, семейной гиперлипидемии, семейной первичной гиперлипидемии, семейной гиперхолестеринемии, семейной гипертриглицеридемии, комбинированной семейной гиперлипидемии, семейного дефекта аполипопротеина b-100, вторичной гиперлипидемии, смешанной гиперлипидемии, сердечно-сосудистого заболевания, остаточного сердечно-сосудистого риска, предотвращения образования/прогрессирования атеросклеротических бляшек, микрососудистого заболевания, макрососудистого заболевания, атеросклероза, коронарного атеросклероза, диастолической дисфункции, снижения сердечно-сосудистого риска, предотвращения серьезных коронарных явлений, предотвращения серьезных неблагоприятных сердечно-сосудистых явлений, предотвращения ишемических явлений, вторичной/первичной профилактики сердечно-сосудистых явлений, предотвращения смерти от сердечно-сосудистых заболеваний, инфаркта миокарда, инсульта, стенокардии, восстановления нормальной функции эндотелия, предотвращения диабета, сахарного диабета, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, гипергликемии, дисгликемии, индукции гликемического контроля, предотвращения нарушения переносимости глюкозы и нарушения гликемии натощак. Не имеющие ограничительного характера примеры микрососудистых заболеваний включают ретинопатию, нефропатию и невропатию. Не имеющие ограничительного характера примеры макрососудистых заболеваний включают инсульт, заболевание периферических сосудов, ишемию конечностей и заболевание сердца. В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается неалкогольное заболевание печени, холестатическое заболевание печени, заболевание почек или метаболический синдром. Любой из вышеупомянутых примеров сердечно-сосудистого заболевания может также относиться к неограничивающим примерам кардиометаболического заболевания.

[0148] В одном варианте осуществления в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики сердечно-сосудистого заболевания у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE.

[0149] В одном варианте осуществления в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики сердечно-сосудистого заболевания у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0150] В другом варианте осуществления в настоящем описании предложен способ профилактики гематологических нарушений у субъекта, страдающего диабетом (например, типа I или типа II), который включает введение субъекту 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта диабета перед введением 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту около 10 мг на массу субъекта (мг/кг), около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0151] В другом варианте осуществления в настоящем описании предложен способ профилактики гематологических нарушений у субъекта, страдающего диабетом (например, типа I или типа II), включающий введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта диабета перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту около 10 мг на массу субъекта (мг/кг), около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0152] В другом варианте осуществления в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, страдающего от сердечно-сосудистого заболевания, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта сердечно-сосудистых заболеваний перед введением 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту около 10 мг на массу субъекта (мг/кг), около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0153] В другом варианте осуществления в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, страдающего от сердечно-сосудистого заболевания, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта сердечно-сосудистых заболеваний перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту около 10 мг на массу субъекта (мг/кг), около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0154] В другом варианте осуществления в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, страдающего от повышенного артериального давления, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта повышенного артериального давления перед введением 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления субъект страдает от повышенного артериального давления по меньшей мере около 130 мм рт.ст., по меньшей мере около 135 мм рт.ст., по меньшей мере около 140 мм рт.ст., по меньшей мере около 145 мм рт.ст., по меньшей мере около 150 мм рт.ст., по меньшей мере около 155 мм рт.ст., по меньшей мере около 160 мм рт.ст., по меньшей мере около 165 мм рт.ст. или по меньшей мере около 170 мм рт.ст. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту около 10 мг/кг, около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0155] В другом варианте осуществления в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, страдающего от повышенного артериального давления, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение наличия у субъекта повышенного артериального давления перед введением 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В некоторых вариантах осуществления субъект страдает от повышенного артериального давления по меньшей мере около 130 мм рт.ст., по меньшей мере около 135 мм рт.ст., по меньшей мере около 140 мм рт.ст., по меньшей мере около 145 мм рт.ст., по меньшей мере около 150 мм рт.ст., по меньшей мере около 155 мм рт.ст., по меньшей мере около 160 мм рт.ст., по меньшей мере около 165 мм рт.ст. или по меньшей мере около 170 мм рт.ст. В другом варианте осуществления способ включает введение субъекту около 10 мг/кг, около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE. В еще одном варианте осуществления 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0156] Композиции и составы, описанные в настоящем документе, также могут быть использованы для снижения уровня цитокинов и/или хемокинов у субъекта, страдающего сердечно-сосудистым заболеванием и/или гематологическим заболеванием. Неограничивающие примеры цитокинов и/или хемокинов включают альфа-гладкомышечный актин (α-SMA), ингибитор металлопептидазы-1 (TIMP-1), трансформирующий фактор роста бета-β (TGF-β) и коллаген типа 1.

[0157] В другом варианте осуществления после лечения композицией по настоящему изобретению у субъекта или группы субъектов наблюдается один или более из следующих результатов:

[0158] (а) отсутствие повышения или снижения уровней сывороточной аланинаминотрансферазы (АЛТ) и/или аспартатаминотрансферазы (АСТ) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0159] (b) отсутствие повышения или снижения уровней билирубина (АМК) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0160] (c) отсутствие увеличения или уменьшения площади фиброза по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0161] (d) отсутствие повышения или снижения содержания глюкозы в крови натощак по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0162] (e) отсутствие повышения или снижения уровней инсулина по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0163] (f) отсутствие повышения или снижения уровней щелочной фосфатазы (ЩФ) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0164] (g) отсутствие повышения или снижения уровней гемоглобина A1C (HbA1C) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0165] (h) отсутствие повышения или снижения уровня инсулинорезистентности в гомеостатической модели (HOMA-IR) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0166] (i) отсутствие повышения или снижения уровней инсулинорезистентности жировой ткани (адипо-IR) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0167] (j) отсутствие повышения или снижения уровней общего холестерина по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0168] (k) отсутствие повышения или снижения уровней триглицеридов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0169] (l) отсутствие повышения или снижения уровней диглицеридов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0170] (m) отсутствие повышения или снижения уровней холестерина липопротеинов очень низкой плотности (Х-ЛПОНП) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0171] (n) отсутствие повышения или снижения уровней холестерина ремнантных частиц (RLP-C) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0172] (o) отсутствие повышения или снижения уровней холестерина липопротеинов невысокой плотности (холестерин-не-ЛПВП) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0173] (p) отсутствие снижения или повышения уровней холестерина липопротеинов высокой плотности (Х-ЛПВП) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0174] (q) отсутствие повышения или снижения уровней холестерина липопротеидов низкой плотности (Х-ЛПНП) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0175] (r) отсутствие повышения или снижения уровней гидроксипролина в почках по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0176] (s) отсутствие повышения или снижения уровней интерлейкина-33 (IL-33) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0177] (t) отсутствие повышения или снижения уровней интерлейкина-17 (IL-17) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0178] (u) отсутствие повышения или снижения уровней арил-гидрокарбоновых рецепторов (AhR) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0179] (v) отсутствие повышения или снижения уровней TNF-подобного лиганда 1A (TL1A) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0180] (w) отсутствие повышения или снижения уровней фактора некроза опухоли (TNF-α) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0181] (x) отсутствие повышения или снижения уровней интерлейкина-13 (IL-13) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0182] (y) отсутствие повышения или снижения уровней интерлейкина-6 (IL-6) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0183] (z) отсутствие повышения или снижения уровней интерлейкина 1 бета-β (IL-1β) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0184] (аа) отсутствие повышения или снижения уровней коллагена типа 1 по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0185] (bb) отсутствие повышения или снижения уровней трансформирующего фактора роста-β (TGF-β) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0186] (cc) отсутствие повышения или снижения уровней активности альфа-гладкомышечного актина (α-SMA) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0187] (dd) отсутствие повышения или снижения уровней члена суперсемейства лиганда фактора некроза опухоли 11A (TNRSF11A) по сравнению с исходным уровнем, контрольным плацебо и/или пациентом до лечения;

[0188] (ee) отсутствие повышения или снижения уровней сериновой протеазы 2 (PRSS2) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0189] (ff) отсутствие повышения или снижения уровня аминоксидазы, содержания меди 3 (AOC3) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0190] (gg) отсутствие повышения или снижения уровней лейкоцитарного иммуноглобулина, подобного рецептору B1 (LILBR1), по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0191] (hh) отсутствие увеличения или снижения уровней белка 1 рецептора трансферрина (TR) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0192] (ii) отсутствие повышения или снижения уровней элафина (PI3) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0193] (jj) отсутствие повышения или снижения уровней амилоида A4 (SAA4) в сыворотке по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0194] (kk) отсутствие повышения или снижения уровней моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (МСР-1) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0195] (ll) отсутствие повышения или снижения уровней хемокинового (мотив C-C) лиганда 16 (CCL16) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0196] (mm) отсутствие увеличения или снижения уровней трем-подобного транскрипта 2 (TLT2) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0197] (nn) отсутствие повышения или снижения уровней дипептидилпептидазы 4 (DPP4) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения; и

[0198] (оо) отсутствие повышения или снижения уровней ингибитора металлопротеиназы-1 (TIMP-1) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0199] (pp) отсутствие повышения или снижения уровней ингибитора активатора плазминогена-1 (PAI-1) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0200] (qq) отсутствие увеличения или снижения показателя НАЖБП (NFS) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения; и

[0201] (rr) отсутствие повышения или снижения уровней фиброза-4 (FIB-4) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0202] (ss) отсутствие повышения или снижения уровней эластичности печени по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0203] (tt) отсутствие повышения или снижения содержания жира в печени по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0204] (uu) отсутствие снижения или повышения уровней глицерофосфолипидов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0205] (vv) отсутствие повышения или снижения кровяного давления по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0206] (ww) отсутствие увеличения или уменьшения показателя генерализованного фиброза печени (ELF) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0207] (xx) отсутствие увеличения или снижения выработки коллагена в фибробластах легких и/или дермы по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0208] (yy) отсутствие снижения или увеличения поглощения глюкозы по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0209] (zz) повышение жизнеспособности легочных и/или кожных фибробластов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0210] (ab) отсутствие изменений или снижение уровней интерлейкина-8 (IL-8) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0211] (ac) отсутствие изменений или снижение уровней интерлейкина-23 (IL-23) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0212] (ad) отсутствие изменений или снижение уровней интерлекина-11 (IL-11) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения; и/или

[0213] (ae) отсутствие изменений или снижение уровней интерферона γ (IFNγ) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0214] (af) отсутствие изменений или снижение активации Т- и/или В-клеток по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0215] (ag) отсутствие изменений или снижение хемотаксиса по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0216] (ah) отсутствие изменений или снижение числа членов семейства фосфорилированных B-клеточных лимфом 2 (Bcl-2) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0217] (ai) отсутствие изменений или снижение уровней активированных фрагментов каспаз по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0218] (aj) отсутствие изменений или снижение уровней расщепленной поли(АДФ-рибозы) полимеразы-1 (PARP-1) по сравнению с исходным уровнем, контрольным плацебо и/или пациентом до лечения;

[0219] (ak) отсутствие изменений или уменьшение окружности талии по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом, не получавшим лечения;

[0220] (al) отсутствие изменений или снижение отношения АСТ к индексу соотношения тромбоцитов (ARPI) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0221] (am) отсутствие изменений или уменьшение показателя воспаления и фиброза печени (LIF) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0222] (an) отсутствие изменений или снижение показателя Lok по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0223] (ао) отсутствие изменений или снижение показателя фиброза по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0224] (ap) отсутствие изменений или снижение балла по шкале Кинга по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0225] (aq) отсутствие изменений или снижение балла по шкале Боначини по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0226] (ar) отсутствие изменений или снижение показателя транзиторной эластографии (TE) по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения.

[0227] (as) отсутствие увеличения или уменьшения молекул сосудистой адгезии по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0228] (at) отсутствие увеличения или снижения белков сердечно-сосудистого риска по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0229] (au) отсутствие увеличения или снижения уровня хемокинов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0230] (av) отсутствие увеличения или уменьшения числа членов суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0231] (aw) отсутствие изменений или увеличение количества эритроцитов по сравнению с исходным уровнем, контролем плацебо и/или пациентом до лечения;

[0232] (ах) отсутствие изменений или увеличение количества лейкоцитов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0233] (ay) отсутствие изменений или увеличение числа тромбоцитов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0234] (az) отсутствие изменений или увеличение протромбинового времени по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0235] (ba) отсутствие изменений или увеличение активированного частичного тромбопластинового времени по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0236] (bc) отсутствие изменений или увеличение выработки гемоглобина по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0237] (bd) отсутствие изменений или увеличение синтеза цепей бета-глобина тетрамера гемоглобина по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0238] (be) отсутствие изменений или уменьшение гемолиза эритроцитов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0239] (bf) отсутствие изменений или уменьшение одышки по сравнению с исходным уровнем, контролем плацебо и/или пациентом до лечения;

[0240] (bg) отсутствие изменений или снижение частоты сердечных сокращений по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0241] (bh) отсутствие изменений или уменьшение размера селезенки по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0242] (bi) отсутствие изменений или уменьшение размера печени по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0243] (bj) отсутствие изменений или уменьшение дактилита по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0244] (bk) отсутствие изменений или уменьшение болевых кризов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0245] (bl) отсутствие изменений или уменьшение аномального образования кровяных сгустков по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0246] (bm) отсутствие изменений или уменьшение ширины распределения эритроцитов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения;

[0247] (bn) отсутствие изменений или снижение числа ретикулоцитов по сравнению с исходным уровнем, плацебо-контролем и/или пациентом до лечения; и/или

[0248] (bo) отсутствие изменений или снижение концентрации фибриногена по сравнению с исходным уровнем, контролем плацебо и/или пациентом до лечения.

[0249] В одном варианте осуществления способы по настоящему изобретению включают измерение исходных уровней одного или более маркеров или параметров, указанных в пунктах (а)-(bo) выше, перед введением дозы субъекту или группе субъектов. В другом варианте осуществления способы включают введение субъекту композиции, описанной в настоящем документе, после определения исходных уровней одного или более маркеров или параметров, указанных в пунктах (a)-(bo), и последующего дополнительного измерения указанного одного или более маркеров.

[0250] В другом варианте осуществления при лечении композицией по настоящему изобретению, например, в течение периода от около 1 до около 12 недель, от около 1 до около 8 недель или от около 1 до около 4 недель, у субъекта или группы субъектов проявляются любые 5 или более, любые 10 или более, любые 15 или более, любые 20 или более, любые 25 или более, любые 30 или более, любые 35 или более, любые 40 или более, любые 45 или более, любые 50 или более, любые 55 или более, любые 60 или более, любые 65 или более, любые 70 или более, любые 75 или более, любые 80 или более, любые 85 или более, любые 90 или более из или все 91 из исходов (a)-(bo), описанных непосредственно выше.

[0251] В другом варианте осуществления после лечения композицией по настоящему изобретению у субъекта или группы субъектов наблюдается один или более из следующих результатов:

[0252] (a) отсутствие повышения или снижения уровней АЛТ и/или АСТ в сыворотке крови по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0253] (b) отсутствие повышения или снижения уровня мочевины в сыворотке крови по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0254] (c) отсутствие увеличения или уменьшения площади фиброза по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0255] (d) отсутствие увеличения или уменьшения содержания глюкозы в крови натощак по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0256] (e) отсутствие повышения или снижения уровня инсулина по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0257] (f) отсутствие повышения или снижения уровней ALP по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0258] (g) отсутствие повышения или снижения уровней HB1Ac по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0259] (h) отсутствие повышения или снижения уровней HOMA-IR по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0260] (i) отсутствие увеличения или снижения уровней адипо-IR по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0261] (j) отсутствие увеличения или снижения уровня общего холестерина по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0262] (k) отсутствие повышения или снижения уровней триглицеридов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0263] (l) отсутствие повышения или снижения уровней диглицеридов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0264] (m) отсутствие повышения или снижения уровней Х-ЛПНП по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0265] (n) отсутствие повышения или снижения уровней RLP-C по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0266] (o) отсутствие повышения или снижения уровней холестерина-не-ЛПВП по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0267] (p) отсутствие снижения уровней Х-ЛПВП по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0268] (q) отсутствие увеличения или уменьшения уровней Х-ЛПНП по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0269] (r) отсутствие повышения или снижения уровней гидроксипролина в почках по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0270] (s) отсутствие повышения или снижения уровней IL-33 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0271] (t) отсутствие повышения или снижения уровней IL-17 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0272] (u) отсутствие увеличения или снижения уровней AhR по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0273] (v) отсутствие увеличения или уменьшения уровней TL1A по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения; относительно исходного уровня, контроля плацебо и/или пациента до лечения;

[0274] (w) отсутствие увеличения или уменьшения уровней TNF-α по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0275] (x) отсутствие увеличения или уменьшения уровней IL-13 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0276] (y) отсутствие увеличения или уменьшения уровней IL-6 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0277] (z) отсутствие повышения или снижения уровней Il-1β по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0278] (aa) отсутствие увеличения или уменьшения уровней коллагена типа 1 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0279] (bb) отсутствие увеличения или уменьшения уровней TGF-β по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0280] (cc) отсутствие повышения или снижения уровня α-SMA по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0281] (dd) отсутствие повышения или снижения уровня TNRSF11A по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0282] (ee) отсутствие увеличения или уменьшения уровней PRSS2 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0283] (ff) отсутствие увеличения или уменьшения уровней AOC3 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0284] (gg) отсутствие увеличения или уменьшения уровней LILBR1 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0285] (hh) отсутствие увеличения или уменьшения уровней TR по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0286] (ii) отсутствие повышения или снижения уровня PI3 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0287] (jj) отсутствие увеличения или уменьшения уровней SAA4 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0288] (kk) отсутствие увеличения или уменьшения уровней MCP-1 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0289] (ll) отсутствие увеличения или уменьшения уровней CCL16 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0290] (mm) отсутствие увеличения или уменьшения уровней TLT2 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0291] (nn) отсутствие увеличения или уменьшения уровней DPP4 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0292] (oo) отсутствие увеличения или уменьшения уровней TIMP-1 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0293] (pp) отсутствие увеличения или уменьшения уровней PAI-1 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0294] (qq) отсутствие повышения или снижения уровня NFS по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0295] (rr) отсутствие повышения или снижения уровня FIB-4 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0296] (ss) отсутствие увеличения или уменьшения уровней эластичности печени по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0297] (tt) отсутствие повышения или снижения уровня содержания жира в печени по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0298] (uu) отсутствие снижения или повышения уровней глицерофосфолипидов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0299] (vv) отсутствие повышения или снижение кровяного давления по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0300] (ww) отсутствие увеличения или снижения показателя ELF по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0301] (zz) отсутствие увеличения или снижения выработки коллагена в легких и/или кожных фибробластах по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0302] (yy) отсутствие снижения или увеличение поглощения глюкозы по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0303] (zz) повышение жизнеспособности легочных и/или кожных фибробластов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0304] (ab) отсутствие изменений или снижение показателей уровня IL-8 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0305] (ac) отсутствие изменений или снижение уровней IL-23 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения; и/или

[0306] (ad) отсутствие изменений или снижение показателей уровня IL-11 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0307] (ae) отсутствие изменения или уменьшения уровней IFNγ по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0308] (af) отсутствие изменений или снижение активации Т- и/или В-клеток по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0309] (ag) отсутствие изменений или снижение хемотаксиса по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0310] (ah) отсутствие изменений или снижение числа членов семейства Bcl-2 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0311] (ai) отсутствие изменения или снижение уровней активированных фрагментов каспаз по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0312] (aj) отсутствие изменений или снижение уровней расщепленного PARP-1 по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0313] (ak) отсутствие изменений или уменьшение окружности талии по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0314] (al) отсутствие изменений или снижение ARPI по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0315] (am) отсутствие изменений или снижение показателя LIF по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0316] (an) отсутствие изменений или снижение показателя Lok по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0317] (ао) отсутствие изменений или снижение показателя фиброза по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0318] (ap) отсутствие изменений или снижение показателя Кинга по крайней мере меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0319] (aq) отсутствие изменений или снижение балла Боначини по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения; и/или

[0320] (ar) отсутствие изменений или снижение показателя TE по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0321] (as) увеличение молекул сосудистой адгезии по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0322] (at) увеличение белков сердечно-сосудистого риска по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0323] (au) увеличение количества хемокинов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения; и

[0324] (av) увеличение количества членов суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0325] (aw) отсутствие изменений или увеличение количества эритроцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0326] (ax) отсутствие изменений или увеличение количества лейкоцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0327] (ау) отсутствие изменений или увеличение количества тромбоцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0328] (az) отсутствие изменения или увеличение протромбинового времени по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0329] (ba) отсутствие изменения или увеличение активированного частичного тромбопластинового времени по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0330] (bc) отсутствие изменений или увеличение выработки гемоглобина по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0331] (bd) отсутствие изменения или увеличение синтеза цепей бета-глобина тетрамера гемоглобина по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0332] (be) отсутствие изменений или снижение гемолиза эритроцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0333] (bf) отсутствие изменений или уменьшение одышки по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0334] (bg) отсутствие изменений или снижение частоты сердечных сокращений по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0335] (bh) отсутствие изменений или уменьшение размера селезенки по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0336] (bi) отсутствие изменений или уменьшение размера печени по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0337] (bj) отсутствие изменений или снижение дактилита по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0338] (bk) отсутствие изменений или уменьшение болевых кризов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0339] (bl) отсутствие изменений или снижение аномального образования тромбов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0340] (bm) отсутствие изменений или снижение распределения эритроцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0341] (bn) отсутствие изменений или снижение числа ретикулоцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения; и/или

[0342] (bo) отсутствие изменения или снижение концентрации фибриногена по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95% относительно исходного уровня, контрольного плацебо и/или пациента до лечения;

[0343] Без дальнейшего описания считается, что специалист в данной области может, используя предыдущее описание и следующие иллюстративные примеры, изготавливать и использовать агенты по настоящему изобретению и применять на практике заявленные способы. Следующие рабочие примеры предоставлены для облегчения практического применения настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие каким-либо образом оставшуюся часть изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Односторонний интерстициальный фиброз почек, вызванный обструкцией мочеточника

[0344] Целью данного исследования было изучение влияния DS109 (15-HETrE) и DS102 (15-HEPE) на интерстициальный фиброз почек, вызванный односторонней обструкцией мочеточника (ООМ).

[0345] На ФИГ. 1 показан дизайн исследования от операции и лечения до дня 14 исследования.

1.1 Материалы и способы

[0346] Испытуемые вещества: в рамках настоящего исследования испытывались следующие вещества: DS109 (15-HETRE) и DS102 (15-HEPE). Для приготовления дозирующих растворов каждого вещества DS109 сначала взвешивали, а затем растворяли в носителе, содержащем 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ), а DS102 разводили в носителе, содержащем 0,5% ГПМЦ.

[0347] Хирургическое вмешательство при ООМ: в день 0 исследования на мышах была проведена операция под наркозом пентобарбиталом натрия. Сначала сбривали шерстный покров, а затем делали разрез брюшной полости, чтобы вывести наружу левый мочеточник. Мочеточник лигировали нейлоновым шовным материалом 4-0 в двух точках. Затем на брюшину и кожу накладывали швы и мышь переводили в чистую клетку до выхода из наркоза. У ложнооперированных мышей левый мочеточник выделяли, но не лигировали.

[0348] Введение лекарств: DS109 и DS102 вводили мышам перорально в объеме 10 миллилитров (мл)/килограмм (кг).

[0349] Лекарственные дозы: DS109 вводили в трех дозах: 5, 50 и 250 миллиграммов (мг)/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13 исследования. DS102 вводили в двух дозах: 50 и 500 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13 исследования.

[0350] Животные: семинедельные самки мышей C57BL/6 (т. е. животные) предоставлены Japan SLC, Inc. (Япония), содержались и получали обычный рацион (CE-2; CLEA Japan, Япония) в контролируемых условиях. Животных содержали в помещении, свободном от специфических патогенов (SPF), при контролируемых условиях температуры (например, 23±2 °C), влажности (например, 45±10%) и освещения (например, 12-часовой искусственный световой и темновой циклы, свет с 8:00 до 20:00) и воздухообмена. В экспериментальном помещении поддерживалось высокое давление для предотвращения загрязнения. Животных помещали в клетки TPX (CLEA Japan) максимум по 4 мыши на клетку. В качестве подстилки использовали стерилизованный материал Paper-Clean (Japan SLC) с еженедельной заменой. Стерилизованный твердый обычный рацион давали неограниченно, помещая в металлическую крышку на верхнюю часть клетки. Чистую воду также давали неограниченно из бутылки с водой, снабженной резиновой пробкой и трубкой-поилкой. Бутылки с водой заменяли раз в неделю, очищали, стерилизовали в автоклаве и использовали повторно. Мышей идентифицировали с помощью прокалывания ушей, и каждая клетка была помечена определенным идентификационным кодом.

[0351] Измерение биохимических показателей почек: для количественного определения содержания гидроксипролина в почках замороженные образцы левой почки обрабатывали методом щелочно-кислотного гидролиза следующим образом: образцы почек растворяли в 2-нормальном (Н) гидроксиде натрия (NaOH) при 65 °C и автоклавировали при 121 °C в течение 20 минут. Лизированные образцы (400 мкл) подвергали кислотному гидролизу с помощью 400 мкл 6 Н. хлористоводородной кислоты (HCl) при 121 °C в течение 20 минут и нейтрализовали 400 мкл 4 Н. NaOH, содержащим 10 мг/мл активированного угля. К образцам добавляли буфер AC (например, 2,2 М уксусной кислоты/0,48 М лимонной кислоты, 400 мкл) с последующим центрифугированием для сбора надосадочной жидкости. Стандартную кривую гидроксипролина строили с помощью серийных разведений транс-4-гидрокси-L-пролина (Sigma-Aldrich, США), начиная с 16 мкг/мл. Подготовленные образцы и стандарты (например, по 400 мкл) смешивали с 400 мкл раствора хлорамина Т (Wako Pure Chemical Industries, Япония) и инкубировали в течение 25 минут при комнатной температуре. Затем образцы смешивали с раствором Эрлиха (например, 400 мкл) и нагревали при 65 °C в течение 20 минут для проявления цвета. После охлаждения образцов на льду и центрифугирования для удаления осадка измеряли оптическую плотность каждого супернатанта при 560 нанометрах (нм). Концентрации гидроксипролина рассчитывали по стандартной кривой гидроксипролина. Концентрацию белка в образцах почек определяли с помощью набора для анализа белка на бицинхонин (BCA) (Thermo Fisher Scientific, США) и использовали для нормализации расчетных значений гидроксипролина. Содержание гидроксипролина в почках выражали в микрограммах (мкг) на мг белка.

[0352] Гистопатологический анализ: для визуализации отложений коллагена срезы почек окрашивали пикросириусом красным (Waldeck, Германия). Для количественной оценки площади интерстициального фиброза получали изображения кортикомедуллярной области в светлом поле с помощью цифровой камеры (например, DFC295; Leica Microsystems, Германия) при 200-кратном увеличении, а положительные области в 5 полях/срезах измеряли с помощью программного обеспечения ImageJ (Национальный институт здоровья, США).

[0353] Количественная ОТ-ПЦР: суммарную рибонуклеиновую кислоту (РНК) экстрагировали из образцов почек с помощью РНКизо (Takara Bio, Япония) в соответствии с инструкциями производителя. Один мкг РНК подвергали обратной транскрипции с использованием реакционной смеси, содержащей 4,4 микромоля (мМ) хлорида магния (MgCl2) (F.Hoffmann-La Roche, Швейцария), 40 ед ингибитора РНКазы (Toyobo, Япония), 0,5 мМ dNTP (Promega, США), 6,28 мкМ случайного гексамера (Promega), 5 x буфера для первой цепи (Promega), 10 мМ дитиотреитола (Invitrogen, США) и 200 ед MMLV-RT (Invitrogen) в конечном объеме 20 мкл. Реакцию проводили в течение 1 часа при 37 °С, затем 5 минут при 99 °С. ПЦР в реальном времени проводили с использованием DICE для ПЦР в реальном времени и TB Green™ Premix Ex Taq™ II (Takara Bio). Для расчета относительного уровня экспрессии микроРНК (мРНК) экспрессию каждого гена (например, α-SMA, TIMP-1, TGF-β и коллагена типа 1) нормализовали до уровня эталонного гена 36B4 (символ гена: Rplp0). Информация о наборах праймеров для ПЦР и схеме планшета представлена в таблицах 1 и 2.

[0354] Таблица 1. Праймеры ПЦР для количественного измерения ОТ-ПЦР

SEQ ID NO. Ген Установленный ИД Последовательность 1
2 36B4 MA057856 прямой/
обратный 5'-TTCCAGGCTTTGGGCATCA-3'
5'-ATGTTCAGCATGTTCAGCAGTGTG-3' 3
4 Альфа-SMA MA057911 прямой/
обратный 5'-AAGAGCATCCGACACTGCTGAC-3'
5'-AGCACAGCCTGAATAGCCACATAC-3' 5
6 TIMP-1 MA098519 прямой/
обратный 5'-TGAGCCCTGCTCAGCAAAGA-3'
5'-GAGGACCTGATCCGTCCACAA-3' 7
8 TGF-β MA030397 прямой/
обратный 5'-GTGTGGAGCAACATGTGGAACTCTA-3'
5'-TTGGTTCAGCCACTGCCGTA-3' 9
10 Коллаген типа 1 MA075477 прямой/
обратный 5'-CCAACAAGCATGTCTGGTTAGGAG-3'
5'-GCAATGCTGTTCTTGCAGTGGTA-3' 36B4: Рибосомный белок, большой, P0 (Rplp0)
Альфа-SMA: Актин, альфа-2, гладкие мышцы, аорта (Acta2)
TIMP-1: Тканевой ингибитор металлопротеиназы 1 (Timp1)
TGF-β: Трансформирующий фактор роста, бета 1 (Tgfb1)
Коллаген, тип 1: коллаген, тип I, альфа 2 (Col1a2)

[0355] Таблица 2. Особенности планшетов для ПЦР для количественного анализа методом ОТ-ПЦР

Планшет
Идентификатор мыши 1
101-308 2
401-608 3
701-708 Альфа-SMA Планшет 1-2 Планшет 2-2 Планшет 3-2 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1 TIMP-1 Планшет 1-3 Планшет 2-3 Планшет 3-2 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1 TGF-β Планшет 1-4 Планшет 2-4 Планшет 3-3 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1 Коллаген типа 1 Планшет 1-5 Планшет 2-5 Планшет 3-3 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1

[0356] Сбор образцов: для образцов сыворотки кровь не натощак собирали в отдельные пробирки для сыворотки без антикоагулянта путем прямой пункции сердца и центрифугировали при 3500 x g в течение 4 минут при 4 °C. Супернатант собирали и хранили при -80 °C для транспортировки. Для образцов почек брали левую почку и разрезали на 2 части по горизонтали. Верхнюю часть левой почки фиксировали в растворе Буэна, а затем заливали в парафин. Парафиновые блоки хранили при комнатной температуре для гистологического анализа. Нижняя часть левой почки разрезана на 2 части во фронтальной плоскости. Переднюю часть левой почки быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80 °C для анализа экспрессии генов. Задняя часть левой почек была мгновенно заморожена в жидком азоте и хранилась при -80 °C для определения биохимических параметров почек.

[0357] Статистические исследования: статистический анализ проводили с использованием теста множественных сравнений Бонферрони на GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., США). Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Направление или тенденция предполагалась, когда односторонний t-критерий возвращал значения P <0,1. Результаты выражали как среднее значение ± стандартное отклонение.

1.2 Дизайн эксперимента и лечения

[0358] Дизайн исследования включал следующие исследовательские группы:

Группа 1 (ложнооперированный контроль): восемь ложнооперированных мышей содержали без какого-либо лечения до умерщвления.

Группа 2 (носитель): восьми мышам с ООМ перорально вводили носитель [0,5% HPMC] в объеме 10 мл/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 3 (DS109, низкая): восьми мышам с ООМ перорально вводили носитель с добавлением DS109 в дозе 5 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 4 (DS109, средняя): восьми мышам с ООМ перорально вводили носитель с добавлением DS109 в дозе 50 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 5 (DS109, высокая): восьми мышам с ООМ перорально вводили носитель с добавлением DS109 в дозе 250 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 6 (DS102, низкая): восьми мышам с ООМ перорально вводили носитель с добавлением DS102 в дозе 50 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 7 (DS102, высокая): восьми мышам с ООМ перорально вводили носитель с добавлением DS102 в дозе 500 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

[0359] В таблице 3 обобщен график лечения для каждой из групп 1-7 во время исследования.

[0360] Таблица 3. Краткое описание графика лечения

Группа К-во мышей Модель Испытуемое вещество Доза (мг/кг) Объем (мл/кг) Схема Окрашивание (день) 1 8 Ложная операция - - - день 0 - день 13 14 2 8 ООМ Носитель - 10 п/о, 1 р/сут,
день 0 - день 13 14 3 8 ООМ DS109 5 10 п/о, 1 р/сут,
день 0 - день 13 14 4 8 ООМ DS109 50 10 п/о, 1 р/сут,
день 0 - день 13 14 5 8 ООМ DS109 250 10 п/о, 1 р/сут,
день 0 - день 13 14 6 8 ООМ DS102 50 10 п/о, 1 р/сут,
день 0 - день 13 14 7 8 ООМ DS102 500 10 п/о, 1 р/сут,
день 0 - день 13 14

[0361] Мониторинг и умерщвление животных: жизнеспособность, клинические признаки и поведение мышей контролировали на ежедневной основе. Индивидуальную массу тела измеряли ежедневно до лечения и в течение всего периода испытания. Мышей наблюдали на наличие значительных клинических признаков токсичности, состояния агонии и смертности примерно в течение 60 минут после каждого введения. Животных умерщвляли обескровливанием путем прямой пункции сердца под изофлюрановым наркозом (Pfizer Inc.) на день 14.

1.3 Результаты

[0362] Изменения массы тела и общие выводы: на ФИГ. 2 показаны изменения массы тела всех животных. У всех животных масса тела снижалась после операции и постепенно восстанавливалась в течение периода лечения. Средняя масса тела группы, получавшей носитель, была значительно ниже, чем в контрольной ложнооперированной группе, со дня 2 по день 5 и с дня 10 по день 11. Не было никаких существенных изменений в средней массе тела в любой день в течение периода лечения между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение. За период лечения животные ни в одной из групп не умерли. В настоящем исследовании ни у одного из животных не было отмечено ухудшения общего состояния.

[0363] Масса тела и почек в день умерщвления: на ФИГ. 3 и в таблице 4 показана масса тела животных в день умерщвления. Не было существенной разницы в средней массе тела в день умерщвления между ложнооперированной контрольной группой и группой, получавшей носитель. Не было никаких существенных различий в средней массе тела в день умерщвления между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение.

[0364] Таблица 4. Масса тела в день умерщвления

Группа Масса тела (г) Масса правой почки (мг) Соотношение массы правой почки и тела (%) Масса левой почки (мг) Соотношение массы левой почки к массе тела (%) Ложнооперированный контроль, (n=8) 19,2±0,7 122±8 0,64±0,05 115±14 0,60±0,08 Носитель (n=8) 18,9±0,5 139±15 0,73±0,09 488±150 2,56±0,77 DS109, низкая (n=8) 19,1±0,9 137±7 0,71±0,04 533±138 2,79±0,65 SD109, средняя (n=8) 18,6±0,6 135±6 0,73±0,05 523±91 2,83±0,50 DS109, высокая (n=8) 18,6±0,7 130±13 0,70±0,05 425±105 2,26±0,53 DS102, низкая (n=8) 18,8±0,6 133±10 0,70±0,05 469±60 2,49±0,30 DS102, высокая (n=8) 18,7±0,5 136±6 0,71±0,04 487±108 2,61±0,57

[0365] На ФИГ. 4A-4D и в таблице 4 показана масса почек и соотношение почек и массы тела животных в день умерщвления. В группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное увеличение средней массы правой почки по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Однако не наблюдалось никаких существенных различий в средней массе правой почки между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение. В группе, получавшей носитель, также наблюдалось значительное увеличение среднего соотношения веса правой почки к массе тела по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в среднем соотношении массы правой почки к массе тела между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение. У группы, получавшей носитель, также наблюдается значительное увеличение средней массы левой почки по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдается никаких существенных различий в средней массе левой почки между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение. Наконец, в группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное увеличение среднего отношения массы левой почки к массе тела по сравнению с ложнооперированной контрольной группой, но без существенных различий в среднем соотношении массы левой почки к массе тела между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение.

[0366] Химический состав почек: на ФИГ. 5 и в таблице 5 показано содержание гидроксипролина в почках животных. В группе, получавшей носитель, наблюдается значительное увеличение содержания гидроксипролина в почках по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Группы DS109 низкая, DS109 высокая, DS102 низкая и DS102 высокая показали значительное снижение содержания гидроксипролина в почках по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдается существенной разницы в содержании гидроксипролина в почках между группой, получавшей носитель, и средней группой, получавшей DS109.

[0367] Таблица 5. Содержание гидроксипролина

Группа Гидроксипролин в почках (мкг/мг общего белка) Ложнооперированный контроль, (n=8) 3,02±1,89 Носитель (n=8) 16,67±7,83 DS109, низкая (n=8) 9,94±2,02 SD109, средняя (n=8) 13,94±6,44 DS109, высокая (n=8) 8,30±1,04 DS102, низкая (n=8) 8,47±2,08 DS102, высокая (n=8) 8,59±1,99

[0368] Гистологический анализ: на ФИГ. 6A-6G и в таблице 6 показано окрашивание сириусом красным, а на ФИГ. 7 - область фиброза у животных. На ФИГ. 6А представлены репрезентативные микрофотографии срезов почек, окрашенных сириусом красным. В группе, получавшей носитель, показано значительное увеличение процентной доли площади фиброза (положительная область, окрашенная сириусом красным) по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Множественное сравнение Бонферрони показало, что площадь фиброза в средней группе DS109 имела тенденцию к уменьшению по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в площади фиброза между группой, получавшей носитель, и другими группами лечения. Из-за наличия заметных выбросов использовали U-критерий Манна-Уитни, который показал тенденцию к уменьшению площади фиброза (p<0,1) в группах DS109 низкая, DS109 средняя, DS109 высокая, DS102 низкая и DS102 высокая по сравнению с группой, получавшей носитель.

[0369] Таблица 6. Площадь фиброза у животных

Группа Сириус красный, положительная область (%) Сириус красный, положительная область (%), медиана Ложнооперированный контроль, (n=8) 0,63±0,22 0,51±0,15 Носитель (n=8) 5,00±1,37 4,55±0,94 DS109, низкая (n=8) 4,23±1,90 3,22±1,47 SD109, средняя (n=8) 3,58±1,04 3,28±1,41 DS109, высокая (n=8) 4,71±0,96 3,76±0,81 DS102, низкая (n=8) 5,01±3,11 4,19±3,33 DS102, высокая (n=8) 4,01±1,92 3,08±1,16

[0370] Анализы экспрессии генов. Анализ экспрессии генов для альфа-SMA, TIMP-1, TGF-β, коллагена типа 1 показан на ФИГ. 8A-8D и в таблице 7.

[0371] Таблица 7. Анализ экспрессии генов

Группа Альфа-SMA TIMP-1 TGF-β Коллаген типа 1 Ложнооперированный контроль, (n=8) 1,00±0,18 1,00±0,14 1,00±0,09 1,00±0,13 Носитель (n=8) 3,82±0,58 133,20±26,86 3,88±0,30 11,52±2,15 DS109, низкая (n=8) 3,87±0,82 153,60±37,12 4,29±0,93 10,76±1,45 SD109, средняя (n=8) 4,61±3,15 167,70±122,60 6,01±4,77 15,23±11,52 DS109, высокая (n=8) 4,85±1,22 180,90±23,12 5,48±0,36 13,88±1,91 DS102, низкая (n=8) 3,74±0,81 138,30±30,39 4,31±0,69 11,80±1,78 DS102, высокая (n=8) 5,54±1,54 124,80±28,60 5,37±0,76 14,09±2,88

[0372] Альфа-SMA: в группе, получавшей носитель, наблюдается значительное увеличение уровня экспрессии мРНК α-SMA по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК α-SMA между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение.

[0373] TIMP-1: в группе, получавшей носитель, наблюдается значительное увеличение уровня экспрессии мРНК TIMP-1 по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК TIMP-1 между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение.

[0374] TGF-β: в группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное увеличение уровня экспрессии мРНК TGF-β по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК TGF-β между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение.

[0375] Коллаген, тип 1: в группе, получавшей носитель, наблюдается увеличение уровня экспрессии мРНК коллагена типа 1 по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК коллагена типа 1 между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими лечение.

1.4 Краткое описание

[0376] Как показали окрашивание сириусом красным и содержание гидроксипролина в почках, в группе, получавшей носитель, в настоящем исследовании был установлен почечный фиброз.

[0377] DS109: лечение DS109 в низкой дозе показало значительное снижение (p<0,05) содержания гидроксипролина в почках и тенденцию к уменьшению (p<0,1) площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель. Лечение DS109 в средней дозе показало тенденцию к уменьшению (p<0,1) площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель. Наконец, лечение DS109 в высокой дозе показало значительное снижение (p<0,05) содержания гидроксипролина в почках и тенденцию к уменьшению (p<0,1) площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель.

[0378] DS102: лечение DS102 в низкой дозе показало значительное снижение содержания гидроксипролина в почках (p<0,05) и тенденцию к уменьшению (p<0,1) площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель. Лечение DS102 в высокой дозе показало значительное снижение содержания гидроксипролина в почках (p<0,05) и тенденцию к уменьшению (p<0,1) площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель.

[0379] В заключение, результаты этого исследования свидетельствуют о том, что DS109 и DS102 обладают подавляющим действием на почечный фиброгенез и потенциально могут использоваться в качестве терапевтических средств при хронических почечных заболеваниях, которые прогрессируют до фиброза.

Пример 2. Исследование лигирования желчных протоков (Bile Duct Ligation, BDL) при холестатическом заболевании печени и/или фиброзе печени

[0380] Целью этого исследования было изучить влияние DS012 на холестаз, вызванный BDL.

[0381] На ФИГ. 9 показан дизайн исследования от операции и лечения до дня 14 исследования.

1.1 Материалы и способы

[0382] Испытуемое вещество: испытуемое вещество этого исследования - DS102. Для приготовления дозирующих растворов каждого вещества DS102 разводили в носителе 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ).

[0383] Хирургическое вмешательство при BDL: в день 0 исследования проводилась операция под наркозом пентобарбиталом (Kyoritsu Seiyaku, Япония). Шерстный покров мыши сначала сбривали, делали разрез брюшной полости и накладывали на общий желчный проток две лигатуры хирургическим шелком 7-0. На брюшину и кожу накладывали швы и мышей переводили в чистую клетку (например, клетку для отдыха) до выхода из наркоза. У ложнооперированных мышей общий желчный проток обнажали, но не лигировали.

[0384] Введение лекарств: DS102 вводили перорально в объеме 10 миллилитров (мл) / килограмм (кг).

[0385] Лекарственные дозы: DS102 вводили в трех дозах: 50, 250 и 500 миллиграммов (мг)/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13 исследования.

[0386] Животные: свободных от патогенов самцов мышей C57BL/6J в возрасте 6 недель предоставляла компания Japan SLC, Inc. (Япония). Животных содержали в помещении, свободном от специфических патогенов (SPF), при контролируемых условиях температуры (например, 23±2 °C), влажности (например, 45±10%) и освещения (например, 12-часовой искусственный световой и темновой циклы, свет с 8:00 до 20:00) и воздухообмена. В экспериментальном помещении поддерживалось высокое давление для предотвращения загрязнения. Животных помещали в клетки TPX (CLEA Japan) максимум по 4 мыши на клетку. В качестве подстилки использовали стерилизованный материал Paper-Clean (Japan SLC) с еженедельной заменой. Стерилизованный твердый обычный рацион давали неограниченно, помещая в металлическую крышку на верхнюю часть клетки. Чистую воду также давали неограниченно из бутылки с водой, снабженной резиновой пробкой и трубкой-поилкой. Бутылки с водой заменяли раз в неделю, очищали, стерилизовали в автоклаве и использовали повторно. Мышей идентифицировали с помощью прокалывания ушей, и каждая клетка была помечена определенным идентификационным кодом.

[0387] Измерение биохимических показателей сыворотки: для визуализации отложения коллагена фиксированные срезы печени по Буэну окрашивали пикросириусом красным (Waldeck, Германия). Для количественного анализа площади фиброза с помощью цифровой камеры (DFC295; Leica, Германия) получали светлопольные изображения срезов, окрашенных сириусом красным, при 100-кратном увеличении, а положительные области в 5 полях/срезах измеряли с помощью программного обеспечения ImageJ (Национальный институт здоровья, США).

[0388] Гистологический анализ: для визуализации отложений коллагена срезы почек окрашивали пикросириусом красным (Waldeck, Германия). Для количественной оценки площади интерстициального фиброза получали изображения кортикомедуллярной области в светлом поле с помощью цифровой камеры (например, DFC295; Leica Microsystems, Германия) при 200-кратном увеличении, а положительные области в 5 полях/срезах измеряли с помощью программного обеспечения ImageJ (Национальный институт здоровья, США).

[0389] Количественная ОТ-ПЦР: суммарную рибонуклеиновую кислоту (РНК) экстрагировали из образцов печени с помощью РНКизо (Takara Bio, Япония) в соответствии с инструкциями производителя. Один мкг РНК подвергали обратной транскрипции с использованием реакционной смеси, содержащей 4,4 мМ хлорида магния (MgCl₂) (F.Hoffmann-La Roche, Швейцария), 40 ед ингибитора РНКазы (Toyobo, Япония), 0,5 мМ dNTP (Promega , США), 6,28 мкМ случайного гексамера (Promega), 5 x буфера для первой цепи (Promega), 10 мМ дитиотреитола (Invitrogen, США) и 200 ед MMLV-RT (Invitrogen) в конечном объеме 20 мкл. Реакцию проводили в течение 1 часа при 37 °С, затем 5 минут при 99 °С. ПЦР в реальном времени проводили с использованием DICE для ПЦР в реальном времени и TB Green™ Premix Ex Taq™ II (Takara Bio). Для расчета относительного уровня экспрессии мРНК экспрессию каждого гена (например α-SMA, TIMP-1, TGF-β и коллагена типа 1) нормализовали до уровня эталонного гена 36B4 (символ гена: Rplp0). Информация о наборах праймеров для ПЦР и схеме планшета представлена в таблицах 8 и 9.

[0390] Таблица 8. Праймеры ПЦР для количественного измерения ОТ-ПЦР

SEQ ID NO. Ген Установленный ИД Последовательность 1
2 36B4 MA057856 прямой/
обратный 5'-TTCCAGGCTTTGGGCATCA-3'
5'-ATGTTCAGCATGTTCAGCAGTGTG-3' 3
4 Альфа-SMA MA057911 прямой/
обратный 5'-AAGAGCATCCGACACTGCTGAC-3'
5'-AGCACAGCCTGAATAGCCACATAC-3' 5
6 TIMP-1 MA098519 рямой/
обратный 5'-TGAGCCCTGCTCAGCAAAGA-3'
5'-GAGGACCTGATCCGTCCACAA-3' 7
8 TGF-β MA030397 прямой/
обратный 5'-GTGTGGAGCAACATGTGGAACTCTA-3'
5'-TTGGTTCAGCCACTGCCGTA-3' 9
10 Коллаген типа 1 MA075477 прямой/
обратный 5'-CCAACAAGCATGTCTGGTTAGGAG-3'
5'-GCAATGCTGTTCTTGCAGTGGTA-3' 36B4: Рибосомный белок, большой, P0 (Rplp0)
Альфа-SMA: Актин, альфа-2, гладкие мышцы, аорта (Acta2)
TIMP-1: Тканевой ингибитор металлопротеиназы 1 (Timp1)
TGF-β: Трансформирующий фактор роста, бета 1 (Tgfb1)
Коллаген, тип 1: коллаген, тип I, альфа 2 (Col1a2)

[0391] Таблица 9. Особенности планшетов для ПЦР для количественного анализа методом ОТ-ПЦР

Планшет
Идентификатор мыши 1
101-308 2
401-608 3
701-708 Альфа-SMA Планшет 1-2 Планшет 2-2 Планшет 3-2 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1 TIMP-1 Планшет 1-3 Планшет 2-3 Планшет 3-2 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1 TGF-β Планшет 1-4 Планшет 2-4 Планшет 3-3 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1 Коллаген типа 1 Планшет 1-5 Планшет 2-5 Планшет 3-3 36B4 Планшет 1-1 Планшет 2-1 Планшет 3-1

[0392] Сбор образцов: для образцов сыворотки кровь не натощак собирали в отдельные пробирки для сыворотки без антикоагулянта путем прямой пункции сердца и центрифугировали при 3500 x g в течение 4 минут при 4 °C. Супернатант собирали и хранили при -80 °C для биохимического анализа (30 мкл) и транспортировки (оставшееся). Для образцов печени брали левую боковую долю и разрезали на 6 частей. Два фрагмента левой боковой доли фиксировали в растворе Буэна, а затем заливали в парафин. Образцы хранили при комнатной температуре для гистологического анализа. Два других фрагмента левой боковой доли были залиты реактивом ОСТ и быстро заморожены в жидком азоте. Образцы хранили при -80 °С. Оставшиеся фрагменты левой боковой доли быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80 °C для анализа экспрессии генов. Правую среднюю долю, левую среднюю долю, правую долю и хвостатую долю быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80 °C для транспортировки.

[0393] Статистические испытания: статистический анализ проводили с использованием теста множественных сравнений Бонферрони на GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., США). Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Направление или тенденция предполагалась, когда односторонний t-критерий возвращал значения P <0,1. Результаты выражали как среднее значение ± стандартное отклонение.

1.2 Дизайн эксперимента и лечения

[0394] Дизайн исследования включал следующие исследовательские группы:

Группа 1 (ложнооперированный контроль): восемь ложнооперированных мышей содержали без какого-либо лечения до умерщвления.

Группа 2 (носитель): пятнадцати мышам с операцией BDL перорально вводили носитель [0,5% HPMC] в объеме 10 мл/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 3 (DS102, низкая): пятнадцати мышам с операцией BDL перорально вводили носитель с добавлением DS102 в дозе 50 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 4 (DS102, средняя): пятнадцати мышам с операцией BDL перорально вводили носитель с добавлением DS102 в дозе 250 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

Группа 5 (DS102, высокая): пятнадцати мышам с операцией BDL перорально вводили носитель с добавлением DS102 в дозе 500 мг/кг один раз в сутки с дня 0 по день 13.

[0395] В таблице 10 обобщен график лечения для каждой из групп 1-5 во время исследования.

[0396] Таблица 10. Краткое описание графика лечения

Группа К-во мышей Мыши Испытуемое вещество Доза (мг/
кг) Объем (мл/
кг) Схема Умерщвление 1 8 Ложная операция - - - - День 14 2 15 BDL Носитель - 10 п/о, 1 р/сут, дни 0-13 День 14 3 15 BDL DS102 50 10 п/о, 1 р/сут, дни 0-13 День 14 4 15 BDL DS102 250 10 п/о, 1 р/сут, дни 0-13 День 14 5 15 BDL DS102 500 10 п/о, 1 р/сут, дни 0-13 День 14

[0397] Мониторинг и умерщвление животных: жизнеспособность, клинические признаки и поведение мышей контролировали на ежедневной основе. Индивидуальную массу тела измеряли ежедневно до лечения и в течение всего периода испытания. Мышей наблюдали на наличие значительных клинических признаков токсичности, состояния агонии и смертности примерно в течение 60 минут после каждого введения. Животных умерщвляли в день 14 после операции путем обескровливания посредством прямой пункции сердца под анестезией изофлураном (Pfizer Inc.)

1.3 Результаты

[0398] Изменения массы тела и общие выводы: на ФИГ. 10 показаны изменения массы тела для всех животных. Средняя масса тела во всех группах, за исключением ложнооперированной контрольной группы, постепенно снижалась в течение периода исследования. Средняя масса тела группы, получавшей носитель, была значительно ниже, чем у ложнооперированной контрольной группы, с дня 2 по день 14. Не наблюдалось никаких существенных изменений в средней массе тела в любой день в течение периода исследования между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

[0399] В течение периода лечения отмечены следующие случаи смерти мышей до достижения дня 14: три из 15 мышей в группе, получавшей носитель; семь из 15 мышей в группах DS102 с низкой дозой, DS102 со средней дозой и DS102 с высокой. В этой модели процент смертей ожидаем просто за счет индукции заболевания, а наблюдаемый уровень смертности согласуется с историческими данными.

[0400] Масса тела и печени в день умерщвления: на ФИГ. 11 и в таблице 11 показана масса тела животных в день умерщвления. В группе, получавшей носитель, наблюдается значительное снижение средней массы тела в день умерщвления по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в средней массе тела в день умерщвления между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

[0401] Таблица 11. Масса тела в день умерщвления

Группа Масса тела (г) Масса печени (мг) Соотношение массы печени к массе тела (%) Ложнооперированный контроль, (n=8) 23,1±0,7 1132±90 4,9±0,4 Носитель, (n=12) 16,8±1,8 1438±180 8,7±1,4 DS102, низкая (n=8) 17,4±2,9 1392±328 8,3±2,3 DS102, средняя (n=8) 17,0±2,4 1513±182 9,0±1,2 DS102, высокая (n=8) 16,4±1,6 1231±255 7,6±1,5

[0402] На ФИГ. 12А и 12В и в таблице 11 показана масса печени и соотношение массы печени к массе тела животных в день умерщвления. В группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное увеличение средней массы печени по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Средняя масса печени в группе, получавшей высокую дозу DS102, имела тенденцию к снижению по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в средней массе печени между группой, получавшей носитель, и другими группами лечения. В группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное увеличение среднего отношения массы печени к массе тела по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Среднее отношение массы печени к массе тела в группе, получавшей высокую дозу DS102, имело тенденцию к снижению по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в среднем отношении массы печени к массе тела между группой, получавшей носитель, и другими группами лечения.

[0403] Биохимия: на ФИГ. 13 и в таблице 12 показаны сывороточные аминотрансферазы (ALT) животных. В группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное повышение уровня АЛТ в сыворотке по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне АЛТ в сыворотке между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102. Однако из исторических данных для этой модели известно, что уровни АЛТ снижаются на день 14 без лечения. Таким образом, это может повлиять на способность обнаруживать различия между группами.

[0404] Таблица 12. Биохимия

Группа АЛТ в сыворотке (Ед/л) Общий билирубин в сыворотке (мг/дл) Ложнооперированный контроль, (n=8) 22±2 0,4±0,1 Носитель, (n=12) 335±185 24,9±9,6 DS102, низкая (n=8) 402±112 26,8±6,9 DS102, средняя (n=8) 351±155 23,5±9,8 DS102, высокая (n=8) 383±147 26,2±6,1

[0405] На ФИГ. 14 и в таблице 12 показан общий билирубин в сыворотке животных. В группе, получавшей носитель, наблюдалось значительное повышение уровня общего билирубина в сыворотке по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне общего билирубина в сыворотке между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

[0406] Гистологический анализ: на ФИГ. 15A-14E и в таблице 13 показано окрашивание сириусом красным, а на ФИГ. 16 - область фиброза у животных. На ФИГ. 14А представлены репрезентативные микрофотографии срезов печени, окрашенных сириусом красным. В срезах печени из группы, получавшей носитель, обнаружено повышенное отложение коллагена в портальной области дольки печени и мостовидный фиброз PV-CV или PV-PV по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. В группе, получавшей носитель, показано значительное увеличение площади фиброза (положительная область, окрашенная сириусом красным) по сравнению с плацебо-контрольной группой. В средней группе DS102 наблюдалось значительное уменьшение площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель. Область фиброза в группе высокой дозы DS102, как правило, уменьшалась по сравнению с группой, получавшей носитель. Существенной разницы в области фиброза между группой, получавшей носитель, и группой низкой дозы DS102 не наблюдалось.

[0407] Таблица 13. Гистологический анализ

Группа Сириус красный, положительная область (%) Ложнооперированный контроль, (n=8) 0,46±0,25 Носитель, (n=12) 1,93±0,67 DS102, низкая (n=8) 1,70±0,63 DS102, средняя (n=8) 1,06±0,48 DS102, высокая (n=8) 1,42±0,60

[0408] Анализы экспрессии генов Анализы экспрессии генов для α-SMA, TIMP-1, TGF-β и коллагена типа 1 показаны на ФИГ. 17A-17D и в таблице 14.

[0409] Таблица 14. Анализ экспрессии генов

Группа Альфа-SMA TIMP-1 TGF-β Коллаген типа 1 Ложнооперированный контроль, (n=8) 1,00±0,24 1,00±0,82 1,00±0,08 1,00±0,24 Носитель, (n=12) 2,98±2,16 33,09±13,75 1,65±0,44 4,77±2,53 DS102, низкая (n=8) 3,21±1,67 43,82±26,19 1,48±0,48 4,94±2,76 DS102, средняя (n=8) 2,66±1,33 30,65±16,80 1,50±0,44 4,21±1,90 DS102, высокая (n=8) 1,42±0,75 16,09±10,16 1,00±0,23 2,51±1,39

[0410] α-SMA: в группе, получавшей носитель, наблюдается значительное увеличение уровня экспрессии мРНК α-SMA по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Уровень экспрессии мРНК α-SMA в группе высокой дозы DS102 имел тенденцию к снижению по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК α-SMA между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

[0411] TIMP-1: в группе, получавшей носитель, наблюдается значительное увеличение уровня экспрессии мРНК TIMP-1 по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Уровень экспрессии мРНК TIMP-1 в группе высокой дозы DS102 имел тенденцию к снижению по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК TIMP-1 между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

[0412] TGF-β: в группе, получавшей носитель, наблюдается значительное увеличение уровня экспрессии мРНК TGF-β по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Группа, получавшая высокую дозу DS102, показала значительное снижение уровня экспрессии мРНК TGF-β по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК TGF-β между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

[0413] Коллаген, тип 1: в группе, получавшей носитель, наблюдается увеличение уровня экспрессии мРНК коллагена типа 1 по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Уровень экспрессии мРНК коллагена типа 1 в группе, получавшей высокую дозу DS102, как правило, уменьшался по сравнению с группой, получавшей носитель. Не наблюдалось никаких существенных различий в уровне экспрессии мРНК коллагена типа 1 между группой, получавшей носитель, и группами, получавшими DS102.

1.4 Краткое описание

[0414] В этом исследовании биохимические параметры (например, АЛТ и общий билирубин), гистологическое отложение коллагена (например, площадь фиброза) и уровни экспрессии генов (например, α-SMA, TIMP-1, TGF-β, коллаген типа 1) в группе носителя значительно увеличилась по сравнению с ложнооперированной контрольной группой. Эти результаты свидетельствуют о том, что в группе, получавшей носитель, были выявлены холестаз и фиброз печени.

[0415] Лечение DS102 в средней дозе показало значительное уменьшение (p<0,05) площади фиброза по сравнению с группой, получавшей носитель. Лечение DS102 в высокой дозе показало значительное снижение (p<0,05) уровня экспрессии мРНК TGF-β и тенденцию, близкую к значимости (p<0,01) для уменьшения площади фиброза, массы печени, отношения массы печени к массе тела, α-SMA, TIMP-1 и уровней экспрессии мРНК коллагена типа 1 по сравнению с группой, получавшей носитель. Эти результаты показывают, что DS102 ингибирует выработку множества профибротических цитокинов в печени, оказывает супрессивное действие на фиброз печени и потенциально может использоваться в качестве терапевтического средства при холестатических заболеваниях печени.

Пример 3: влияние DS102 на рецепторы TGF-β, сигнальные и индуцированные фиброзные белки

[0416] Цель этого исследования состояла в том, чтобы изучить влияние 15-HEPE и 15-HEPE EE на экспрессию рецепторов TGF-β, индуцированную TGF-β внутриклеточную передачу сигналов и профибротические эпителиальные мезенхимальные переходные белки.

1.1 Материалы и способы

[0417] Исследование на цитотоксичность: цитотоксичность 15-HEPE в виде свободной кислоты и этилового эфира была испытана на различных клеточных линиях печени (гепатомы), чтобы понять диапазон концентраций в тест-системе.

[0418] Транскрипционная активность: был проведен анализ промотора (люциферазы) для измерения TGFβ-индуцированной активации транскрипции после введения 15-HEPE.

[0419] Ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы и конфокальную микроскопию использовали для идентификации 15-HEPE-индуцированной транслокации микродоменов рецепторов TGF-β под действием сахарозы. Анализ градиента плотности сахарозы рецепторов TGF-β проводили в плазматических мембранах клеток Mv1Lu (эпителиальная клетка легкого норки), обработанных 100 мкМ 15-HEPE и равным объемом ДМСО (диметилсульфоксид) при 37 °С в течение 0, 1, 4 и 24 часа, при этом клеточные лизаты из этих обработанных клеток подвергали ультрацентрифугированию в градиенте плотности сахарозы. Затем фракции градиента сахарозы анализировали вестерн-блоттингом с использованием анти-TβR-I (рецептор TGF-β типа I), анти-TβR-II (рецептор TGF-β типа II), анти-TβR-III (рецептор TGF-β типа III), β-рецептор, бетагликан), антитела к EGFR (рецептор эпидермального фактора роста) и антитела к кавеолину-1. Оценивали локализацию TβR-I, TβR-II, TβR-III, EGFR и кавеолина-1 в липидном рафте/кавеолах и микродомене нелипидного рафта в плазматической мембране необработанных клеток или клеток, обработанных 15-HEPE для определения влияния 15-HEPE на локализацию мембранных микродоменов рецепторов TGF-β.

1.2 Результаты

[0420] Определяли влияние 15-HEPE на индуцированную TGF-β передачу сигналов и клеточные ответы. Чтобы проверить влияние 15-HEPE на TGF-β-индуцированную передачу сигналов, исследовали активность 15-HEPE по регуляции TGF-β-стимулированного фосфорилирования Smad2 и ядерной транслокации, оба из которых являются ключевыми сигнальными событиями, ведущими к TGF-β-индуцированным клеточным ответам. Одной из важных биологических активностей TGF-β является активация транскрипции генов, ответственных за эпителиально-мезенхимальный переход (EMT), который является решающим событием в заживлении ран, фиброзе тканей и прогрессировании рака. Оценивали влияние 15-HEPE на TGFβ-индуцированную экспрессию белков, связанных с эпителиальным мезенхимальным переходом (таких как фибронектин, PAI-1, N-кадгерин и т. д.) в клетках HepG2 и LXR. Клетки HepG2 (клеточная линия гепатомы человека) обрабатывали возрастающими дозами 15-HEPE стадии II в среде DMEM, содержащей 0,1% FBS, в течение 1 часа и непрерывно стимулировали с использованием или без использования 200 пикомолей (пМ) TGF-β в течение 48 часов.

[0421] 15-HEPE напрямую ингибировал передачу сигналов TGF-β, как показано на ФИГ. 18А и 18В. В частности, на ФИГ. 18А показано, что 15-HEPE индуцирует деградацию рецептора TGF-β типа II и блокирует индуцированную TGF-β продукцию эпителиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) (т. е. профибротического) белка. Клетки HepG2 (клеточная линия гепатомы человека) обрабатывали возрастающими дозами 15-HEPE стадии II в среде DMEM, содержащей 0,1% FBS, в течение 1 часа и непрерывно стимулировали с использованием или без использования 200 пикомолей (пМ) TGF-β в течение 48 часов. Две панели, показанные на ФИГ. 18А, представляют собой два отдельных эксперимента, проведенных в одних и тех же экспериментальных условиях. Результаты этих отдельных экспериментов показывают, что 15-HEPE блокирует продукцию белка EMT, индуцированную TGF-β, и индуцирует деградацию рецептора TGF-β II типа. На ФИГ. 18А также показано влияние 15-HEPE на ингибитор активатора плазминогена-1 (PA-1), белок, индуцируемый TGF-β и связанный с повышенным сердечно-сосудистым риском. На ФИГ. 18B показано, что 15-HEPE ингибирует стимулированную TGF-β внутриклеточную передачу сигналов (например, фосфорилирование SMAD2/3) в звездчатых клетках печени. Эксперимент, показанный на ФИГ. 18В, включал предварительную обработку клеток LX2 (звездчатые клетки печени человека) возрастающими концентрациями от 0 мкМ до 100 мкМ DS102 в течение 24 часов с последующей 30-минутной стимуляцией TGF-β. Результаты испытания показали, что 15-HEPE ингибирует стимуляцию TGF-β.

[0422] Анализ градиента плотности сахарозы 15-HEPE рецепторов TGF-β проводили в плазматических мембранах клеток эпителия легких норок (Mv1Lu), обработанных 100 мкМ 15-HEPE и равным объемом диметилсульфоксида (ДМСО) при 37 °C в течение 0, 1, 4 и 24 часов, при этом клеточные лизаты из этих обработанных клеток подвергали ультрацентрифугированию в градиенте плотности сахарозы. Фракции градиента сахарозы затем анализировали вестерн-блоттингом с использованием анти-TβR-I (рецептор TGF-β типа I - фигура 18C), анти-TβR-II (рецептор TGF-β типа II - фигура 18D), анти-TβR- III (рецептор TGF-β типа III, бетагликан - фигура 18E), антитела к EGFR (рецептор эпидермального фактора роста - фигура 18F) и антитела к кавеолину-1 (фигура 18G). Фракции с 4 по 5 содержали липидные рафты/кавеолы, тогда как фракции 7-10 представляли собой нелипидные рафты. Обработка 15-HEPE не влияла на количество белков TβR-I, но индуцировала транслокацию TβR-I на липидный слой через 24 часа обработки (ФИГ. 18C). Звездочки (*) указывают на повышенное под действием 15-HEPE содержание TβR-I (24 часа) во фракции по сравнению с контролем и более короткой продолжительностью лечения (ФИГ. 18C). 15-HEPE индуцировал транслокацию TβR-II от 1 до 4 часов и дополнительно индуцировал деградацию при 24-часовой обработке (ФИГ. 18D). Треугольники (▼) указывают на транслокацию и снижение количества TβR-II во фракции по сравнению с контрольными клетками (ФИГ. 18D). На фигурах 18E, 18F и 18G 15-HEPE не изменяет локализацию и содержание TβR-III, EGFR и кавеолина-1.

1.3 Краткое описание

[0423] Соответственно, все эти результаты в целом демонстрируют, что 15-HEPE как в форме свободной кислоты, так и в форме этилового эфира индуцирует транслокацию и деградацию рецепторов TGF-β типа II, блокирует продукцию профибротического белка, индуцированную TGF-β, и ингибирует внутриклеточную передачу сигналов, индуцированную TGF-β (SMAD2/3), в звездчатых клетках печени. Таким образом, 15-HEPE и 15-HEPE EE могут напрямую ингибировать передачу сигналов TGF-β, результаты, которые подтверждают терапевтический потенциал 15-HEPE и 15-HEPE EE при лечении множественных фиброзных заболеваний, включая неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), другие фиброзные заболевания, кардиометаболические заболевания, а также множественные показания к онкологическим заболеваниям.

Пример 4: эффективность перорального приема DS102 у пациентов с НАЖБП

[0424] Цель исследования заключалась в оценке безопасности и клинической эффективности пероральных капсул DS102 по сравнению с плацебо при лечении взрослых пациентов с неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП).

1.1 Конечные точки исследования

[0425] Основные конечные точки: первичные конечные точки для этого исследования включали клиническую эффективность, а также безопасность введения DS102. Клиническую эффективность оценивали на основании изменения уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке от исходного уровня до недели 16 и изменения жесткости печени, измеренной с помощью эластографии сдвиговой волны от исходного уровня до недели 16. Безопасность оценивали по количеству нежелательных явлений, возникших во время лечения (TEAE) в каждой группе лечения, которые привели к прекращению лечения.

[0426] Вторичные конечные точки: вторичные конечные точки для этого исследования включали изменение любого из следующего: АЛТ в сыворотке от исходного уровня до недель 2, 4, 8 и 12; аспартатаминотрансферазы (АСТ) от исходного уровня до недель 2, 4, 8, 12 и 16; соотношения АСТ:АЛТ от исходного уровня до недель 2, 4, 8, 12 и 16; индекса фиброза-4 (FIB-4) от исходного уровня до недели 16; показателя фиброза НАЖБП (NFS) от исходного уровня до недели 16; изменения печеночного жира, измеренные посредством контролируемого параметра затухания (CAP) от исходного уровня до недели 16; показатель генерализованного фиброза печени (ELF) от исходного уровня до недели 16; и гомеостатическую модель оценки резистентности к инсулину (HOMA-IR) и резистентности к инсулину жировой ткани (adipo-IR) от исходного уровня до недель 2, 4, 8, 12 и 16.

[0427] Исследовательский анализ: исследовательский анализ включал анализ липидов и метаболических параметров, включая общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеинов очень низкой плотности (ХС ЛПОНП), холестерин липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП), холестерин липопротеинов высокой плотности (ХС ЛПВП), холестерин липопротеинов невысокой плотности (холестерин-не-ЛПВП), холестерин ремнантных частиц (RLP-C), глюкозу в крови натощак, инсулин, свободные жирные кислоты и гемоглобин A1C (HbA1C). Дополнительный исследовательский анализ включал высокопроизводительную липидомику и протеомику.

1.2 Дизайн исследования

[0428] Это было рандомизированное, плацебо-контролируемое, двойное слепое, многоцентровое поисковое исследование фазы IIa с параллельными группами для изучения безопасности и клинической эффективности перорально принимаемых капсул DS102 и зависимости доза-реакция между двумя дозами DS102 и плацебо при НАЖБП у пациентов в возрасте от 18 до 75 лет. В этом исследовании было три параллельные группы пациентов с подтвержденной НАЖБП для сравнения двух разных доз DS102 с плацебо в течение 16-недельного периода лечения. В исследование планировалось включить 96 пациентов, поддающихся оценке, по 32 пациента, рандомизированных на группу лечения.

[0429] Исследование состояло из 28-дневного скринингового периода, 16-недельного периода лечения и 4-недельного периода наблюдения. Во время скринингового визита пациенты оценивались посредством скрининговых обследований. В исследование были включены пациенты, соответствующие критериям включения и не соответствующие критериям исключения.

[0430] Схематическая диаграмма общих временных рамок исследования представлена на фигуре 19. После включения пациентов в исследование им было запрещено использовать любое другое лечение НАЖБП. Прием лекарственных препаратов (например, рецептурных, а также безрецептурных) или терапевтическое вмешательство, которые считались необходимыми для пациента и которые, по мнению исследователя, не мешали оценке безопасности и клинической эффективности, продолжались, если они не были включены в нижеприведенный список «Сопутствующие лекарственные препараты».

[0431] До начала сравнительного периода лечения пациенты посещали центр для исходной оценки заболевания, при этом соответствующие критериям пациенты были случайным образом распределены в одну из трех параллельных групповых схем лечения в рандомизации 1:1:1.

Группа лечения A: 2 капсулы плацебо по 500 мг перорально два раза в день (4 капсулы в день) в течение 16 недель.

Группа лечения B: 1 капсула DS102 500 мг и 1 капсула плацебо 500 мг перорально два раза в день (4 капсулы в день) в течение 16 недель.

Группа лечения C: 2 капсулы DS102 по 500 мг перорально два раза в день (4 капсулы в день) в течение 16 недель.

[0432] Для соблюдения условий двойного слепого исследования капсула DS102 и капсула плацебо были идентичны по внешнему виду.

1.3 Пациенты и скрининг

[0433] Для участия в этом исследовании пациенты должны были соответствовать всем следующим критериям включения и не должны соответствовать ни одному из следующих критериев исключения. Соответствие критериям включения и исключения было проверено во время скринингового визита (визит 1) и в начале лечения/визита исходного уровня (визит 2).

[0434] Критерии включения в данное исследование были следующими:

Пациенты с диагнозом НАЖБП по наличию стеатоза печени при визуализации или гистологии при отсутствии каких-либо вторичных причин.

Пациенты с АЛТ ≥1,5 ВГН и <5 ВГН по результатам двух измерений с интервалом 7 или более дней во время скрининга.

Пациенты с биопсией печени в анамнезе, показывающей НАСГ и/или фиброз ≥ F1, или NFS ≥ -1,455, или Fib-4 ≥1,3, или Fibroscan ≥8 кПа в течение 3 месяцев скрининга.

Пациенты с индексом массы тела (ИМТ) от 25,0 до 40,0 кг/м². В исследование допускались пациенты с контролируемым ожирением или контролируемым диабетом в анамнезе.

Пациенты, у которых результаты лабораторных анализов до исследования не препятствовали их участию в исследовании, по мнению исследователя.

Пациенты в возрасте от 18 до 75 лет.

Пациенты женского пола и пациенты мужского пола с партнершами, способными к деторождению, должны были использовать надлежащую контрацепцию или иметь стерилизованного партнера на время исследования. Надлежащей контрацепцией являются: системные гормональные контрацептивы; внутриматочная спираль или барьерный метод контрацепции в сочетании со спермицидом; или сексуальное воздержание, определяемое как воздержание пациента от гетеросексуальных контактов в течение всего периода риска, связанного с исследуемым лечением, если это соответствует его предпочтительному и обычному образу жизни. Гормональные контрацептивы должны были приниматься в стабильной дозе в течение как минимум одного месяца до исходного уровня.

Пациенты, с которыми у исследователя возникло взаимопонимание, которые поняли и обязались соблюдать требования исследования, а также ознакомились и подписали письменное информированное согласие.

[0435] Критерии исключения для данного исследования были следующими:

Пациенты с нестабильным метаболическим состоянием, таким как изменение веса >5% за 3 месяца до включения.

Пациенты с медицинским/хирургическим анамнезом операции обходного желудочного анастомоза, ортотопической трансплантации печени (ОТП) или внесены в список для ОТП.

Пациенты с неконтролируемым сахарным диабетом 2 типа, т. е. HbA1c ≥9% (75 ммоль/моль) на момент скрининга.

Пациенты с декомпенсированным или тяжелым заболеванием печени, о чем свидетельствуют один или более из следующих признаков: подтвержденный цирроз или подозрение на цирроз, варикозное расширение вен пищевода, асцит, подозрение на портальную гипертензию, госпитализация по поводу заболевания печени в течение 60 дней после скрининга, билирубин ≥2 x ВПН, или АЛТ или АСТ ≥5 x ВПН. Пациенты с синдромом Жильбера могли принять участие в исследовании, если конъюгированный билирубин был ≤1,5 x ВПН.

Пациенты с воспалительным заболеванием кишечника, которое либо было активным, либо нуждалось в медикаментозной терапии.

Пациенты с диагностированными аутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка (СКВ) и/или ревматоидный артрит (РА), или подозрением на них.

Пациенты с наличием в анамнезе или активными злокачественными новообразованиями, не относящимися к печени, за исключением радикально леченного рака кожи (базально-клеточная или плоскоклеточная карцинома).

Пациенты со значительным системным или серьезным заболеванием, кроме заболевания печени, включая ишемическую болезнь сердца, цереброваскулярное заболевание, заболевание легких, почечную недостаточность, серьезное психическое заболевание, респираторное или гипертоническое заболевание, а также диабет и артрит, которое, по мнению исследователя, помешает пациенту принять участие и завершить исследование.

Пациенты, нуждающиеся в антидиабетическом лечении (включая средства, повышающие чувствительность к инсулину) и/или гиполипидемическом лечении, и которые не получали стабильную дозу в течение по крайней мере 3 месяцев до скрининга, были исключены. У инсулинозависимых пациентов лечение должно было быть начато по крайней мере за 3 месяца до скрининга, при этом разрешались изменения дозы.

Пациенты с известной гиперчувствительностью к любым ингредиентам исследуемого препарата.

Пациенты с положительным тестом на антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), поверхностный антиген гепатита В или антитела к гепатиту С при скрининге.

Пациенты с заболеваниями печени другой этиологии, такими как лекарственный аутоиммунный гепатит, первичный билиарный холангит (ПБХ), первичный склерозирующий холангит (ПСХ), гемохроматоз, дефицит альфа-1-антитрипсина (А1АТ) или болезнь Вильсона.

Пациенты со значимым злоупотреблением наркотиками/токсикоманией в анамнезе, по усмотрению исследователя.

Пациенты со злоупотреблением алкоголем в анамнезе, по усмотрению исследователя, или выпивающие более 21 единицы в неделю (мужчины) или 14 единиц в неделю (женщины), при этом единица состоит из 10 мл или 8 мг чистого алкоголя.

Пациенты, принимавшие пищевые добавки, обогащенные омега-3 или омега-6 жирными кислотами, за 4 недели до исходного уровня.

Пациенты, участвовавшие в любом другом клиническом исследовании исследуемого препарата в течение 3 месяцев до первого дня применения исследуемого препарата.

Беременные, планирующие беременность, кормящие грудью и/или не желающие использовать надлежащие методы контрацепции во время исследования.

Пациенты, которые по мнению исследователя не подходят для участия в исследовании.

1.4 Проведение исследования

[0436] В ходе исследования было запланировано десять визитов в клинику после скринингового визита: один в начале периода сравнительного лечения/исходного уровня (день 0/визит 2) и восемь в период сравнительного лечения (неделя 2/визит 3, неделя 4/ визит 4, неделя 6/визит 5, неделя 8/визит 6, неделя 10/визит 7, неделя 12/визит 8, неделя 14/визит 9, неделя 16/визит 10). Заключительный визит последующего наблюдения для оценки безопасности (визит 11) проводили через четыре недели после визита 10 или через две недели после последнего визита, если пациент не завершил исследование. В таблице 15 описаны визиты в рамках исследования.

[0437] Таблица 15. Блок-схема визитов в рамках исследования

[0438] Скрининговый визит (визит 1): во время скрининга предусмотрено следующее

[0439] Скрининговый визит (визит 1): после получения информированного согласия пациентам присваивался номер скрининга. В идеале пациент проходил скрининг натощак. Были выполнены следующие скрининговые оценки/взяты образцы: проверка критериев включения/исключения; собраны демографические данные; собран анамнез; проведен медосмотр; электрокардиограмма (ЭКГ) в 12-ти отведениях; Жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных анализов с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); вирусологические исследования; тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ (АЛТ измеряли дважды во время скрининга); и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. Незапланированные визиты имели место, когда пациенту необходимо было посетить исследователя в промежутке между запланированными датами визита из-за нежелательного явления (НЯ), сложностей с соблюдением требований протокола исследования или значительного изменения в состоянии его здоровья. Были соблюдены все процедуры, которые были необходимы по медицинским показаниям. Если необходимо, по завершении визита, пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0440] Период лечения: после завершения успешного скринингового визита пациенты начинали сравнительный период лечения (16 недель). В начале сравнительного периода лечения, после подтверждения участия, пациентам была случайным образом назначена одна из трех схем лечения. Пациенты принимали исследуемый лекарственный препарат (ИЛП) в виде капсул DS102 или капсул плацебо два раза в день в течение сравнительного периода лечения. Каждый самостоятельный прием ИЛП записывали в дневник пациента. Пациенты были проинструктированы принимать DS102 утром и вечером во время или после еды (за исключением утренних визитов в клинику 3, 4, 6, 8 и 10, когда пациентам было рекомендовано воздерживаться от приема DS102 до визита и принимать DS102 как можно скорее после визита в клинику). В начале исходного уровня (визит 2), на неделе 2 (визит 3), на неделе 4 (визит 4), на неделе 8 (визит 6), на неделе 12 (визит 8), на неделе 16 (визит 10) и на неделе 20 (визит 11) у пациента спрашивали, голодал ли он в течение как минимум 8 часов до визита. Если это не так, продолжительность периода голодания записывалась, и пациент повторно инструктировался о продолжительности периода голодания. Затем пациенту предлагали легкий завтрак (например, чай или апельсиновый сок и тосты). На исходном уровне (визит 2) неделя 8 (визит 8) и неделя 16 (визит 10) перед тем, как пациент получил легкий завтрак, делали анализ образцов крови. Незапланированные визиты имели место, когда пациенту необходимо было посетить исследователя в промежутке между запланированными датами визита из-за нежелательного явления (НЯ), сложностей с соблюдением требований протокола исследования или значительного изменения в состоянии его здоровья. Были соблюдены все процедуры, которые были необходимы по медицинским показаниям. Пациентам, прекратившим исследование досрочно, процедуры исследования, запланированные на визит 10, выполнялись как можно скорее после выхода пациента из исследования, чтобы можно было записать всю информацию, связанную с исследованием. По усмотрению исследователя, тесты мочи на наркотики и на алкоголь в выдыхаемом воздухе проводили в любое время в ходе проведения исследования.

[0441] Исходный уровень (визит 2): во время визита 2 пациенты посещали исследовательский центр. Первой проведенной оценкой был забор крови. После взятия образцов крови проводили следующие оценки: проверка критериев включения/исключения; сбор анамнеза; медосмотр; ЭКГ в 12-ти отведениях; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных исследований с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); липидный профиль; анализ мочи; тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; ELF; жесткость печени и CAP FIB-4; NFS (включая ИМТ); образец крови на биомаркеры; исследовательский образец крови; рандомизация пациентов; введение исследуемого препарата/плацебо; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. Если все критерии включения в исследование были удовлетворены, исследователь рандомизировал пациента и давал ему назначенный ИЛП или плацебо из одной из упаковок для пациента. Первая доза ИЛП или плацебо вводилась на месте после завершения всех исходных оценок. Пациенты принимали вторую дозу ИЛП или плацебо вечером дня 0. Затем капсулы вводили два раза в день. Пациенты принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 3). По завершении визита пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0442] Неделя 2 (визит 3): во время визита 3 пациенты посещали исследовательский центр. Пациенты не принимали ИМП или плацебо утром во время визита 3. Были проведены следующие оценки: медосмотр; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (напр., артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. Пациент возвращал ИЛП или плацебо и ему выдавали дополнительное количество ИЛП или плацебо. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 4. Пациенты не принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 4). По завершении визита пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0443] Неделя 4 (визит 4): во время визита 4 пациенты посещали исследовательский центр. Пациенты не принимали ИМП или плацебо утром во время визита 4. Были проведены следующие оценки: медосмотр; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных исследований с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. Пациент возвращал ИЛП или плацебо и ему выдавали дополнительное количество ИЛП или плацебо. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 5. Пациенты не принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 5).

[0444] Неделя 6 (визит 5): во время визита 5 пациенты посещали исследовательский центр. Были проведены следующие оценки: оценка НЯ и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. ИЛП или плацебо возвращали пациенту и давали дополнительное количество ИЛП. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 6. Пациенты не принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 6). По завершении визита пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0445] Неделя 8 (визит 6): во время визита 6 пациенты посещали исследовательский центр. Пациенты не принимали ИМП или плацебо утром во время визита 6. Первой проведенной оценкой был забор крови. После взятия образцов крови проводили следующие оценки: медосмотр; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных исследований с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); липидный профиль; тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; образцы крови на биомаркеры; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. Пациент возвращал ИЛП или плацебо, и ему выдавали дополнительное количество ИЛП или плацебо. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 7. Пациенты принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 7).

[0446] Неделя 10 (визит 7): во время визита 7 пациенты посещали исследовательский центр. Были проведены следующие оценки: оценка НЯ и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. ИЛП или плацебо возвращали пациенту и давали дополнительное количество ИЛП или плацебо. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 8. Пациенты не принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 8). По завершении визита пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0447] Неделя 12 (визит 8): во время визита 8 пациенты посещали исследовательский центр. Пациенты не принимали ИМП или плацебо утром во время визита 8. Были проведены следующие оценки: медосмотр; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных исследований с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. ИЛП или плацебо возвращали пациенту и давали дополнительное количество ИЛП или плацебо. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 9. Пациенты не принимали ИЛП или плацебо утром перед повторным визитом (визит 9).

[0448] Неделя 14 (визит 9): во время визита 9 пациенты посещали исследовательский центр. Были проведены следующие оценки: оценка НЯ и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. ИЛП или плацебо возвращали пациенту и давали дополнительное количество ИЛП или плацебо. Пациент принимал следующую дозу ИЛП или плацебо, как только все оценки во время визита были выполнены. Капсулы продолжали принимать два раза в день. По завершении этого визита пациентов инструктировали о необходимости посетить исследовательский центр через две недели во время визита 10. Пациенты не должны были принимать ИЛП или плацебо утром перед повторным посещением исследовательского центра (визит 10). По завершении визита пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0449] Неделя 16 (визит 10) или досрочное прекращение участия в исследовании: во время визита 10 пациенты посещали исследовательский центр. Пациенты не принимали ИМП или плацебо утром во время визита 10. Первой проведенной оценкой был забор крови. После взятия образцов крови проводили следующие оценки: медосмотр; ЭКГ в 12-ти отведениях; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных исследований с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); анализ мочи; липидный профиль; тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; ELF; жесткость печени и CAP FIB-4; NFS [включая ИМТ]; образцы крови на биомаркеры; исследовательский образец крови; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов. Пациенты возвращали ИЛП или плацебо. Больше никаких блистерных упаковок ИЛП или плацебо или дневников пациентов не предоставлялось. После завершения предусмотренной исследованием оценки во время этого визита ограничения в рамках исследования сохранились. По завершении этого визита пациентов инструктировали, что они должны посетить исследовательский центр через четыре недели во время визита 11 для оценки любых НЯ, возникших после этого визита, а также оценки безопасности и клинической эффективности. По завершении визита пациента инструктировали не завтракать в день следующего визита, чтобы минимальный период голодания составлял 8 часов.

[0450] Визит последующего наблюдения (неделя 20/визит 11): через четыре недели после визита 10 (или через две недели после визита досрочного прекращения участия в исследовании) пациенты посещали исследовательский центр. Были проведены следующие оценки: медосмотр; фармакокинетические пробы; жизненные показатели (артериальное давление, частота сердечных сокращений и температура тела); образцы для лабораторных исследований с целью оценки безопасности (гематология, биохимия сыворотки и коагулограмма); тест на беременность (для пациенток детородного возраста); определение АЛТ, АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; биомаркеры; оценка НЯ; и оценка сопутствующих лекарственных препаратов.

1.5 Оценки

[0451] Оценка клинической эффективности включала в себя: АЛТ, АСТ, соотношение АЛТ:АСТ; HOMA-IR/Adipo-IR; ELF; жесткость печени и CAP Индекс FIB-4; и NFS. Подробное описание приведено ниже.

[0452] АЛТ, АСТ, соотношение АЛТ:АСТ: повышение уровня ферментов печени (АЛТ и АСТ) является маркером повреждения печени и оценивалось на визите 1/скрининге (дважды во время скрининга с интервалом в 7 или более дней), визите 2/исходном уровне, визите 3/неделе 2, визите 4/неделе 4, визите 6/неделе 8, визите 8/неделе 12, визите 10/неделе 16 и визите последующего наблюдения 11/неделе 20.

[0453] HOMA-IR/Adipo-IR: уровни HOMA-IR/Adipo-IR представляют собой метод измерения резистентности к инсулину. HOMA-IR рассчитывается путем умножения уровня инсулина плазмы натощак (FPI) на уровень глюкозы плазмы натощак (FPG), а затем деления на константу 405. Adipo-IR рассчитывается путем умножения уровня неэтерифицированных жирных кислот натощак (NEFA) на уровень инсулина натощак. Образцы крови для оценки HOMA-IR и Adipo-IR брали во время визита 2/исходного уровня, визита 3/недели 2, визита 4/недели 4, визита 6/недели 8, визита 8/недели 12, визита 10/недели 16 и визита последующего наблюдения 11/недели 20. Все испытуемые должны были голодать в течение как минимум 8 часов до забора крови. Если испытуемые не голодали в течение как минимум 8 часов, записывали продолжительность голодания и испытуемых дополнительно инструктировали о необходимости явиться на следующий визит натощак.

[0454] ELF: оценка ELF представляет собой набор маркеров внеклеточного матрикса, состоящий из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), амино-концевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA). Образцы крови были взяты для проведения этой оценки на исходном уровне (визит 2) и на неделе 16 (визит 10).

[0455] Эластичность печени и CAP: эластичность печени и контролируемый параметр затухания (CAP) оценивали с помощью переходной эластографии (например, модель FibroScan® 502 Touch или аналогичная). Пациенты проходили обследование натощак в одно и то же время суток, если это возможно, для исходного уровня (неделя 0) и визита 10 (неделя 16). Для этой оценки были соблюдены следующие условия: пациенты лежали на спине, максимально отведя правую руку за голову, находясь в положении, аналогичном как при биопсии печени (LB); кончик датчика помещали на кожу между ребрами над правой долей печени (врач производил измерения при размещении датчика в межреберье); во время исследования с помощью технологии FibroScan® выбор зонда M+ или XL+ определялся с помощью инструмента автоматического выбора зонда (APS) (если APS советует использовать «зонд XL+» или постоянно «переключаться» между «зондами M+ и XL+», использовался только зонд «XL+»); и оператор, получающий ультразвуковое динамическое изображение, визуализировал часть печени, которая не содержит больших сосудистых структур (глубина измерения составляла 35-75 мм для зонда XL и 25-65 мм для зонда M, а исследуемый объем составлял 3 см³). Для каждого пациента оператор выполнял обследование, включающее не менее 10 достоверных измерений или не более 20 попыток с использованием зонда XL+ или M+ в одном и том же месте. Все обследование длилось не более 10-15 минут. Конечную жесткость и значения CAP регистрировали как медианные значения допустимых измерений.

[0456] Индекс FIB-4: индекс FIB-4 основан на возрасте, количестве тромбоцитов, уровне АЛТ и уровне АСТ и оценивался на исходном уровне (визит 2) и на неделе 16 (визит 10). Оценка FIB-4 определяется, как показано в приведенном ниже уравнении.

FIB-4 = Возраст (лет) x АСТ (Ед/л)

Количество тромбоцитов (109/л) x √АЛТ (Ед/л)

[0457] NFS: NFS основывается на возрасте, гипергликемии, ИМТ, количестве тромбоцитов, уровне альбумина и соотношении АСТ/АЛТ. Оценка фиброза НАЖБП = -1,675+0,037 × возраст (лет) + 0,094 × ИМТ (кг/м2) + 1,13 × IFG/диабет (да = 1, нет = 0) + 0,99 × соотношение АСТ/АЛТ - 0,013 × тромбоциты (× 109/л) - 0,66 × альбумин (г/дл). NFS оценивали на исходном уровне (визит 2) и на неделе 16 (визит 10).

[0458] Оценки безопасности включали следующее: анамнез; медосмотр; ЭКГ; показатели жизненно важных функций; лабораторные анализы для оценки безопасности (например, гематология, биохимия сыворотки, коагулограмма, липидный профиль и анализ мочи); вирусологические исследования; тест на беременность; забор крови; фармакокинетические пробы; взятие крови для исследовательских целей; взятие крови на биомаркеры; тест мочи на наркотики и тест на пары алкоголя в выдыхаемом воздухе; оценка нежелательных явлений; сопутствующие лекарственные препараты; биоанализ; проба, хранение, обработка; и доставка; и ограничительные меры. Подробное описание приведено ниже.

[0459] Анамнез: полный обзор истории болезни пациента был проведен исследователем или уполномоченным лицом во время скринингового визита (визит 1) и визита на исходном уровне (визит 2), чтобы проверить соблюдение критериев включения. Сообщалось о любом сопутствующем заболевании, независимо от того, считалось ли оно релевантным для исследования или нет. По возможности были отмечены даты постановки диагноза или продолжительность заболевания.

[0460] Медосмотр: обследование (включая рост и вес) проводилось исследователем в соответствии с блок-схемой исследования, приведенной в таблице 15, во время визита 1/скрининг, визита 2/исходный уровень, визита 3/неделя 2, визита 4/неделя 4, визита 6/неделя 8, визита 8/неделя 12, визита 10/неделя 16 и визита последующего наблюдения 11/неделя 20 в соответствии с местными правилами. Это обследование было завершено полностью на исходном уровне. После этого обследование проводилось только в зависимости от симптомов (т. е. набор стандартных показателей систем организма не оценивали, если у пациента не было иных показаний). Например, если пациент сообщает исследователю о наличии сыпи, тогда выполняется обследование кожи. Обследование дополнительных систем организма не требовалось, если это не было клинически оправдано. Регистрировались все отклоняющиеся от нормы результаты. Изменения результатов медицинского осмотра по сравнению с исходным обследованием регистрировали как НЯ.

[0461] ЭКГ: ЭКГ проводили в 12-ти отведениях 10 мм/1 мВ, 25 мм/с с 10-секундной полосой ритма II отведения в каждый момент времени. ЭКГ регистрировали с использованием Mac 1200 или эквивалентной модели. Перед снятием ЭКГ пациенты спокойно отдыхали в положении лежа на спине в течение 5 минут. Записи проводились в дни, указанные в блок-схеме исследования в таблице 15, во время визита 1/скрининг, визита 2/исходный уровень и визита 10/неделя 16.

[0462] Показатели жизненно важных функций: измерения показателей жизненно важных функций проводились в соответствии с блок-схемой исследования в таблице 15, во время визита 1/скрининг, визита 2/исходный уровень, визита 3/неделя 2, визита 4/неделя 4, визита 6/неделя 8, визита 8/неделя 12, визита 10/неделя 16 и визита последующего наблюдения 11/неделя 20. Измерения основных жизненно важных функций проводились до взятия каких-либо образцов крови. Все новые показатели или изменения в предыдущих показателях, считавшиеся клинически значимыми, регистрировались как НЯ, если были обнаружены после подписания информированного согласия. Измерения основных показателей жизненно важных функций включали: артериальное давление в положении лежа (например, после не менее 5 минут отдыха), систолическое и диастолическое артериальное давление (в мм рт. ст.); частоту сердечных сокращений в состоянии покоя в ударах в минуту (уд/мин); и температуру тела в соответствии с клинической практикой.

[0463] Лабораторные анализы для оценки безопасности: были проведены гематологический анализ, биохимический анализ сыворотки, коагулограмма, определение профиля липидов и анализ мочи для оценки безопасности: образцы крови и мочи были взяты в соответствии с блок-схемой исследования в таблице 15 для стандартных гематологических, биохимических испытаний, коагуляции и анализа мочи, а также липидного профиля. Все образцы были проанализированы в центральной лаборатории. Все субъекты голодали в течение как минимум 8 часов до забора крови. Если испытуемые не голодали в течение как минимум 8 часов, записывали продолжительность голодания и испытуемых дополнительно инструктировали о необходимости явиться на следующий визит натощак.

Гематология: общий анализ крови, включающий количество эритроцитов, гемоглобина, гематокрит, количество лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, количество тромбоцитов и число ретикулоцитов.

Биохимия сыворотки: мочевина (азот мочевины крови; АМК), креатинин, мочевая кислота, общий билирубин, непрямой и прямой билирубин, натрий, бикарбонат калия, фосфор, хлорид кальция, щелочная фосфатаза (ЩФ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), аланинаминотрансфераза (АЛТ), соотношение АЛТ/АСТ, лактатдегидрогеназа (ЛДГ), креатинфосфокиназа (КФК), альбумин, общий белок, холестерин, триглицериды, глюкоза, С-реактивный белок (СРБ).

Коагуляция: протромбиновое время (ПВ), международное нормализованное отношение (МНО) и активированное частичное протромбиновое время (АЧПВ).

Липидный профиль: ХС ЛПНП, ХС ЛПВП, и ХС ЛПОНП.

Анализ мочи: рН, белок, глюкоза, кровь, кетоны, лейкоциты, лейкоцитарная эстераза, билирубин, удельный вес, уробилиноген и нитраты. Проводится Reflex Micro, если присутствуют кровь, белок, лейкоцитарная эстераза или нитрат/нитрит.

[0464] Вирусология: образец крови был взят для проведения вирусологических тестов, включая ВИЧ, гепатит C и гепатит B, как подробно описано в блок-схеме исследования в таблице 15.

[0465] Тест на беременность: для пациенток детородного возраста тест на беременность проводился в соответствии с блок-схемой исследования в таблице 15 во время визита 1/скрининг, визита 2/исходный уровень, визита 4/неделя 4, визита 6/неделя 8, визита 8/неделя 12, визита 10/неделя 16 и визита 11/неделя 20.

[0466] Забор крови: после получения образцов крови каждый исследователь анализировал результаты анализа в лаборатории на предмет клинически значимых значений. Для повторных анализов с целью оценки безопасности могут потребоваться дополнительные образцы крови.

[0467] Отбор проб для фармакокинетического (ФК) анализа: образцы крови для фармакокинетического анализа собирали путем прямой венепункции в соответствии с блок-схемой исследования в таблице 15 на визите 2/исходный уровень, визите 3/неделе 2, визите 4/неделе 4, визите 6/неделе 8, визите 8/неделе 12, визите 10/неделе 16 и визите последующего наблюдения 11/неделе 20. В каждый момент времени брали образец крови объемом 1 мл. После центрифугирования образцы плазмы делили на две части, а резервный образец хранили в центральной лаборатории до завершения биоаналитических исследований.

[0468] Взятие крови для исследовательских целей: кровь собирали в соответствии с блок-схемой исследования в таблице 15 на исходном уровне (неделя 0) и визите 10/неделе 16 и сохраняли для потенциального анализа массива генов или дополнительного исследовательского тестирования в более поздние сроки.

[0469] Взятие крови на биомаркеры: кровь брали в соответствии с блок-схемой исследования в таблице 15 на исходном уровне (неделя 0), визите 6/неделя 8, визите 10/неделя 16 и визите последующего наблюдения 11/неделя 20 и сохраняли для анализа потенциальных биомаркеров.

[0470] Тест мочи на наркотики и тест на пары алкоголя в выдыхаемом воздухе: в зависимости от клинической ситуации, по усмотрению исследователя, был проведен тест на содержание алкоголя в выдыхаемом воздухе и тест на наличие в образце мочи: амфетамина, барбитурата, бензодиазепина, кокаина, каннабиноида и опиатов в любое время в ходе проведения исследования.

[0471] Сопутствующие лекарственные препараты: пациенты получали стабильную дозу любых сопутствующих препаратов в течение как минимум 3 месяцев до скрининга, и эта доза должна была оставаться стабильной в течение всего периода исследования. У инсулинозависимых пациентов лечение должно было быть начато по крайней мере за 3 месяца до скрининга, при этом разрешались изменения дозы.

[0472] Ограничения: исследование включает ограничения относительно питания, алкоголя, кофеина и физической нагрузки. Что касается питания, пациенты избегали как во время исследования, так и в течение 4 недель до исходного уровня приема пищевых добавок, богатых жирными кислотами омега-3 или омега-6 (например, капсулы с рыбьим жиром). Что касается алкоголя, пациенты избегали употребления алкоголя в количестве, превышающем 21 единицу в неделю (мужчины) или 14 единиц в неделю (женщины), при этом единица состоит из 10 мл или 8 мг чистого алкоголя. Ни до, ни во время исследования не было ограничений по употреблению кофеина. Что касается физической активности, пациенты должны были избегать физических упражнений и интенсивной физической активности по крайней мере за 3-4 часа до лабораторного исследования безопасности (например, биохимического).

1.6 Исследуемый препарат

[0473] Капсулы DS102 представляли собой белые непрозрачные капсулы с твердой оболочкой (размер 0), содержащие 500 мг этилового эфира 15-HEPE (ЭЭ) с 5% масс./масс. коллоидного диоксида кремния в качестве модификатора вязкости.

[0474] Плацебо DS102 (парафиновое масло) представляло собой белые непрозрачные капсулы с твердой оболочкой (размер 0), содержащие эквивалентную массу наполнения жидкого парафина с 1% масс./масс. коллоидного диоксида кремния в качестве модификатора вязкости.

[0475] Капсулы DS102 и плацебо хранили при температуре 2-8 °C в безопасном месте (например, в запираемом шкафу или помещении для хранения лекарств), защищенном от непреднамеренного использования. Этикетки содержали номер рандомизации без информации о дозе.

[0476] Доза и введение. Данное исследование включало сравнение DS102 с плацебо, вводимым перорально два раза в день в течение 16 недель. Последнее введение исследуемого препарата осуществлялось за день, предшествующий визиту на неделе 16/визиту досрочного прекращения участия в исследовании. Пациенты должны были принимать капсулы во время или после еды. Лекарственные средства от других состояний, которые были разрешены в исследовании, принимались как обычно. Блистеры в форме кошелька были рассчитаны на 7 дней по 4 капсулы/день. Пациенты принимали назначенное лекарство в течение 16 недель подряд.

1.7 Нежелательные явления и серьезные нежелательные явления

[0477] Нежелательные явления (НЯ) и серьезные нежелательные явления (СНЯ) в этом исследовании определялись следующим образом.

[0478] Нежелательные явления (НЯ): любое нежелательное явление, возникающее у пациента, принявшего первую дозу исследуемого препарата, независимо от того, считается ли оно связанным с ИЛП. НЯ заносились в индивидуальную регистрационную карту с указанием связи с ИМП и тяжести.

[0479] Серьезные нежелательные явления (СНЯ): если у пациента возникало СНЯ после первой дозы исследуемого препарата, событие регистрировалось как СНЯ. СНЯ характеризуется как неблагоприятное медицинское явление независимо от дозы, включая любое из следующего: смерть, состояние, угрожающее жизни, госпитализация в стационар или продление текущей госпитализации, или стойкая или значительная утрата трудоспособности или инвалидность. Термин «состояние, угрожающее жизни» относится к событию, при котором пациенту угрожала смерть во время наступления явления. Критерий не относится к событию, которое гипотетически могло бы привести к смерти, если бы оно было более серьезным. Примеры важных, но не угрожающих жизни событий включали интенсивную терапию в отделении неотложной помощи, аллергический бронхоспазм, дискразию крови или судороги, которые не привели к госпитализации, или к развитию лекарственной зависимости или злоупотреблению лекарством.

[0480] Неожиданное нежелательное явление (ННЯ): явление, о котором ранее не сообщалось в брошюре исследователя или аналогичном информационном листе продукта, таком как инструкция по применению лекарственного средства (ИПЛП).

[0481] Интенсивность НЯ представляет собой оценку относительной серьезности события, сделанную исследователем на основе клинического опыта. Для оценки тяжести НЯ использовались следующие определения:

Легкое: нежелательное явление было преходящим и легко переносимым.

Умеренное: нежелательное явление вызвало дискомфорт у пациента и нарушило его обычную деятельность.

Тяжелое: нежелательное явление в значительной степени повлияло на обычную деятельность пациента и могло привести к потере трудоспособности или угрожать жизни.

[0482] Причинно-следственная связь НЯ и экспериментального метода лечения также была установлена с учетом анамнеза пациента, последних данных медицинского осмотра и сопутствующих лекарств. Для определения причинно-следственной связи с НЯ использовались следующие определения:

Не связанные: временная связь начала НЯ по отношению к экспериментальному лечению не была обоснованной или причина возникновение НЯ могла быть другой.

Связанные: временная зависимость начала НЯ по отношению к экспериментальному лечению была обоснованной, соответствовала известному характеру ответа на лечение, при этом альтернативная причина была маловероятной.

[0483] Все НЯ регистрировались в течение всего периода исследования вплоть до периода наблюдения включительно.

1.8 Лекарственное поражение печени

[0484] Тяжелое лекарственное поражение печени (ЛПП): независимо от предполагаемой причинно-следственной связи, в случае тяжелого ЛПП прием исследуемого препарата прекращали до тех пор, пока эпизод не считался разрешенным. В случае, если исследуемый препарат считался причиной поражения печени, пациенту не назначали препарат повторно. Тяжелое ЛПП предполагает наличие признаков печеночной недостаточности, о чем свидетельствует уровень общего билирубина >2 × ВГН или МНО >1,5.

[0485] Пациенты с патологическими исходными биохимическими показателями печени: при определении патологических исходных биохимических показателей печени кратное увеличение рассчитывалось по отношению к исходными уровнями вместо использования ВГН. Таким образом, при 3-кратном увеличении исходного уровня АЛТ или АСТ (или >200 МЕ/л) проводилось повторное тестирование в течение 72 часов для подтверждения/определения улучшения или ухудшения биохимических изменений. Информация о НЯ собиралась во время тщательного медосмотра. Был проведен скрининг и/или другие соответствующие тесты на печеночную этиологию. В случае дисфункции печени пациент получал лечение от тяжелого ЛПП. Приостановка лечения препаратом рассматривалась при возникновении любого из критериев тяжелого ЛПП.

1.9 Серьезные побочные реакции и неожиданные побочные реакции

[0486] Побочные реакции. Все вредные и непредусмотренные реакции на лекарственное средство, связанные с любой дозой, считались побочными лекарственными реакциями. Фраза «реакция на лекарственное средство» означает, что причинно-следственная связь между лекарственным средством и НЯ была, по меньшей мере, обоснованной возможностью (т. е. связь нельзя исключать). Для поступающих в продажу лекарственных средств побочная реакция представляет собой вредную и непредусмотренную реакцию на лекарство, которая возникает при дозах, как правило, используемых для профилактики, диагностики или лечения заболеваний или для модификации физиологических функций у человека.

[0487] Неожиданная побочная реакция: побочная реакция, характер или тяжесть которой не соответствовали применимой информации о продукте.

[0488] Предполагаемая непредвиденная серьезная нежелательная реакция (SUSAR): любая серьезная побочная реакция, которая могла быть связана с ИЛП и была неожиданной в соответствии с приведенным выше определением.

1.10 Статистическая методология и управление данными

[0489] В этом клиническом исследовании применялся рандомизированный двойной слепой плацебо-контролируемый дизайн с параллельными группами. Рандомизация использовалась, чтобы свести к минимуму систематическую ошибку при назначении и повысить вероятность того, что известные и неизвестные атрибуты пациентов (например, демографические характеристики) будут равномерно сбалансированы в группах лечения. Слепой метод использовался для уменьшения потенциальной систематической ошибки при сборе данных и оценке безопасности и клинической эффективности. Использование плацебо в качестве препарата сравнения было целесообразно для оценки безопасности и клинической эффективности у пациентов на основании малой продолжительности исследования и отсутствия каких-либо возможных долгосрочных необратимых нарушений, которые могли быть результатом лечения плацебо.

[0490] Оценка размера выборки: предполагая, что дельта в процентном ответе между группами активного препарата и плацебо составит 20%, стандартное отклонение - 25% и процент отсева - 20%, потребовалось 32 пациента на группу для статистического испытания с уровнем значимости 5% и статистической мощностью исследования 80%. Во время промежуточного анализа размер выборки был оценен повторно на основе рекомендаций по расслеплению. Размер выборки можно было бы увеличить до максимум 150 пациентов, чтобы достичь условной статистической мощности исследования 80% для первичной конечной точки.

[0491] Инструкции по слепому методу и раскрытию кодов: весь персонал исследовательского центра, а также персонал, участвующий в мониторинге или проведении исследования, не знал о назначениях лечения отдельных пациентов. Детали рандомизации были строго конфиденциальными, доступными только в экстренных случаях для уполномоченных лиц, до момента официального раскрытия информации. Коды слепого метода для испытания были раскрыты только после того, как все данные пациента были зарегистрированы и проверены, а база данных закрыта.

[0492] Промежуточный анализ и мониторинг данных: промежуточный анализ безопасности был проведен для оценки условной статистической мощности исследования, когда не менее 50% пациентов завершили визит на неделе 16. Промежуточный анализ был основан на данных, собранных для первичных и сопутствующих конечных точек клинической эффективности, а также вторичных конечных точек, и использовался для оценки условной статистической мощности исследования для достижения его основной цели, потенциальной переоценки размера выборки и возможного отказа от менее клинически эффективной группы лечения.

[0493] Клинически значимый ответ: более высокое среднее или медианное снижение по меньшей мере на 20% АЛТ или степени жесткости печени по сравнению с плацебо и более высокое среднее или медианное снижение как минимум на 10% как АЛТ, так и жесткости печени по сравнению с плацебо

[0494] Анализируемая выборка включала выборку пациентов, зачисленных в исследование, полную выборку пациентов для анализа (FAS), выборку пациентов, выполнивших требования протокола (PPS), выборку для анализа безопасности (SAS) и выборку для фармакокинетического (ФК) анализа. Подробное описание каждой выборки для анализа приведено ниже.

[0495] Выборка пациентов, зачисленных в исследование: пациенты, подписавшие форму информированного согласия. Пациенты, не прошедшие скрининг - это пациенты из выборки отобранных пациентов, которые не соответствовали требованиям приемлемости и были исключены из исследования до рандомизации.

[0496] FAS: это рандомизированные пациенты, получившие хотя бы одну дозу исследуемого препарата и прошедшие, по меньшей мере, одно обследование после исходного уровня. Пациентов анализировали в соответствии с лечением, которое им было назначено при рандомизации, независимо от того, какое лечение они фактически получали.

[0497] PPS: подгруппа FAS, состоящая из пациентов без серьезных нарушений протокола. Все отклонения от протокола оценивались и документировались в каждом конкретном случае до закрытия базы данных, а серьезные отклонения, рассматриваемые как имеющие серьезное влияние на результаты клинической эффективности, приводили к исключению соответствующего пациента из выборки PPS.

[0498] SAS: пациенты, получившие хотя бы одну дозу исследуемого препарата. Пациенты были проанализированы в соответствии с фактически полученным лечением.

[0499] Выборка для анализа ФК: пациенты из выборки SAS, которые получили по меньшей мере одну дозу DS102 в ФК концентрации. Пациенты были проанализированы в соответствии с фактически полученным лечением.

[0500] Анализ безопасности: демографические данные, анамнез и данные медосмотра были приведены для каждого пациента и резюмированы описательно. Все НЯ, зарегистрированные в ходе исследования, были закодированы по классам систем органов и предпочтительным терминам с использованием текущей версии Медицинского словаря для регуляторной деятельности (MedDRA). НЯ были сведены в таблицу и обобщены по лечению, связи с лечением, степени серьезности и тяжести. Клинические лабораторные показатели (например, гематологические, биохимические и анализы мочи) были приведены для каждого пациента в зависимости от лечения и дня. Значения, выходящие за пределы лабораторных норм, были перечислены отдельно с соответствующими комментариями относительно их клинической значимости, при этом потенциально клинически значимые отклонения были выделены и обобщены в зависимости от лечения. Клинические лабораторные показатели, полученные до введения, были определены как исходные значения. Для каждого пациента были указаны результаты теста мочи на наркотики и теста на пары алкоголя в выдыхаемом воздухе. Индивидуальные значения показателей жизнедеятельности были перечислены и резюмированы описательно по лечению и дням. Для каждого пациента были перечислены оценки ЭКГ в 12-ти отведениях со всеми соответствующими комментариями и обобщены по лечению и дням. Сопутствующие лекарственные препараты (если таковые имеются), классифицированные по группам и подгруппам лекарств в соответствии с последней версией словаря лекарств Всемирной организации здравоохранения, были перечислены и обобщены по лечению. В целом применялась соответствующая описательная статистика в соответствии с характером переменной. Категориальные переменные были представлены как количества и проценты, в то время как непрерывные переменные были представлены с использованием среднего значения, стандартного отклонения, медианы, минимума, максимума, коэффициента вариации и количества пациентов.

[0501] Фармакокинетический анализ: концентрации 15(S)-HEPE в плазме были занесены в таблицу и резюмированы описательно. Индивидуальные и средние профили зависимости концентрации 15(S)-HEPE в плазме от времени были представлены графически.

[0502] Первичные переменные: первичной переменной эффективности было изменение уровня АЛТ в сыворотке по сравнению с исходным уровнем на неделе 16 (визит 10). Группы лечения активным препаратом сравнивали с плацебо с помощью ковариационного анализа (ANCOVA), включая соответствующее исходное значение в качестве ковариаты. Сравнения с плацебо проводились в соответствии с процедурой множественного тестирования Даннета. Для отсутствующих значений недели 16 последнее доступное значение переносили вперед (LOCF). Аналогичные способы применяли для оценки жесткости печени. Для АЛТ дополнительно рассматривалось продольное моделирование.

[0503] Вторичные переменные: вторичные переменные эффективности и их изменения по сравнению с исходным уровнем до недели 16 (визит 10) суммировали с помощью описательной статистики по группам лечения и визитам. Это относилось к АСТ, соотношению АСТ:АЛТ, печеночному жиру, измеренному с помощью CAP, измерениям эластичности печени с помощью переходной эластографии, FIB-4, NFS, ELF и HOMA-IR/Adipo-IR. Изменение по сравнению с исходным уровнем для групп лечения активным препаратом сравнивали с плацебо с помощью модели ANOVA, включая термин для центральных явлений. Для всех сравнений использовался 5% уровень значимости.

[0504] Исследовательский анализ: исследовательский анализ включал анализ липидов и метаболических параметров, в том числе общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеинов очень низкой плотности (Х-ЛПОНП), холестерин липопротеинов низкой плотности (Х-ЛПНП), холестерин липопротеинов высокой плотности (Х-ЛПВП), холестерин липопротеинов невысокой плотности (холестерин-не-ЛПВП), холестерин ремнантных частиц (RLP-C), глюкозу в крови натощак, инсулин, свободные жирные кислоты и гемоглобин A1C (HbA1C). Дополнительный исследовательский анализ включал высокопроизводительную липидомику и протеомику.

1.11 Результаты

[0505] Это исследование показало, что у пациентов с диагнозом НАЖБП, которым вводили DS102 в дозе 1 г или 2 г в день, наблюдалось статистически значимое снижение маркеров метаболической перегрузки и улучшение чувствительности к инсулину и гликемического контроля.

[0506] На ФИГ. 20 показано, что три группы лечения были хорошо сбалансированы на исходном уровне и имели сходные липидомные и метаболомные профили. Исходные характеристики пациентов показаны в таблице 16, где 10-13% пациентов в начале исследования получали статиновую терапию.

[0507] Таблица 16. Характеристики пациентов на исходном уровне

2 г DS102
(n=31) 1 г DS102
(n=32) Плацебо
(n=30) Возраст, медиана, лет 47,0 53,5 50,0 Пол, % Женский 32,3 37,5 30,0 Мужской 67,7 62,5 70,0 Раса, % Европеоидная 100,00 93,75 90,00 Прочее 0,00 6,25 10,00 ИМТ, медиана, кг/м² 30,9 33,5 33,9 Применение статина, % 9,7 12,5 13,3 Уровень глюкозы натощак, медиана, мг/дл 119,1 110,9 120,3 Гемоглобин A1C (%), медиана 6,3 6,2 6,2 АЛТ, медиана, МЕ/л 74,0 70,5 96,5 Жесткость печени, медианное значение, кПа 7,9 8,2 8,4 HOMA-IR, медиана 4,4 5,1 5,0 Триглицериды, медиана, мг/дл 242,0 146,0 150,0

[0508] На ФИГ. 21A-21C показаны изменения уровней инсулина, глюкозы и свободных жирных кислот от исходного уровня до недели 16 у пациентов, которым вводили DS102 либо 1 г, либо 2 г в день, по сравнению с плацебо. Снижение уровней инсулина, глюкозы и свободных жирных кислот при введении DS102 является клинически значимым, поскольку метаболические субстраты, включая глюкозу, углеводы и свободные жирные кислоты, определяют патогенез НАСГ.

[0509] На ФИГ. 22A и 22B показаны изменения уровней HOMA-IR и adipo-IR от исходного уровня до недели 16 у пациентов, которым вводили DS102 либо 1 г, либо 2 г в день, по сравнению с плацебо. У пациентов наблюдалось улучшение обоих индексов резистентности к инсулину (например, снижение уровней HOMA-IR и adipo-IR) на неделе 16 со значительными улучшениями в выборке пациентов, выполнивших требования протокола (PPS), наблюдаемыми у пациентов, которым вводили 2 г DS102.

[0510] На ФИГ. 23A и 23B показаны изменения уровней гликозилированного гемоглобина (например, HbA1c) от исходного уровня до недели 16 у пациентов, которым вводили DS012 в дозе 1 или 2 г в день, по сравнению с плацебо. В частности, на ФИГ. 23A показано изменение уровней HbA1c, а на ФИГ. 23B показано изменение уровней HbA1c в доле пациентов с высокими значениями HbA1c на исходном уровне, но достигших нормальных значений на неделе 16. Поскольку Hb1Ac является мерой количества глюкозы в эритроцитах организма и суррогатным показателем долгосрочного гликемического контроля, эти результаты показывают, что введение DS102 обеспечивает клинически значимые улучшения и нормализует гликемический контроль дозозависимым образом.

[0511] На ФИГ. 24A и 24B показано среднее изменение и медиана (%) изменения липидного профиля пациента на неделе 16 в выборке для анализа безопасности (SAS). Эти результаты дополнительно представлены на ФИГ. 25A-25C и показывают, что введение DS102 значительно улучшило липидный профиль пациентов за счет либо поддержания, либо снижения общего холестерина, Х-ЛПОНП, холестерина-не-ЛПВП, холестерина ремнантных частиц (RLP) и уровня триглицеридов. Примечательно, что снижение не стабилизировалось на неделе 16, что свидетельствует о том, что введение DS102 может вызвать еще большие изменения в более продолжительных исследованиях.

[0512] Как показано на ФИГ. 26, введение DS102 также устраняет гепатотоксические липидные признаки НАСГ и улучшает несколько классов липидов, измененных у пациентов с НАСГ. В частности, введение 2 г DS102 значительно снижало уровни множественных гепатотоксичных диглицеридов и значительно повышало уровни множественных групп глицерофосфолипидов. Это открытие важно, так как у пациентов с НАСГ низкий уровень глицерофосфолипидов в печени и плазме.

[0513] На ФИГ. 27 показано, что введение DS102 также приводило к разрешению НАСГ на основании проверенных диагностических тестов, таких как неинвазивный диагностический тест OWL для НАСГ. OWL Liver Care - это тест, который был разработан на основе липидомики плазмы у пациентов с НАСГ, подтвержденным биопсией, и обладает высокой прогностической ценностью. Тест OWL Liver Care имеет площадь под кривой (AUC) 0,88 для различия пациентов с НАЖБП и нормальной печенью и AUC 0,79 для различия пациентов с НАЖБП без стеатогепатита и НАСГ. Введение DS102 значительно улучшило и нормализовало показатели OWL Liver Care у пациентов с НАСГ дозозависимым образом по сравнению с плацебо на неделе 16. В таблице 17 показаны диагнозы по тесту на исходном уровне для каждой группы лечения и показано, что большинство пациентов были классифицированы как НАСГ или НАЖБП на исходном уровне с более низким процентом пациентов в группе, получавшей 2 г DS102.

[0514] Таблица 17. Диагнозы по тесту OWL на исходном уровне

Группа Диагноз Исходный уровень Изменение в диагнозе
(неделя 16 по сравнению с исходным уровнем) Улучшение Без изменений Ухудшение Плацебо НАСГ 16 1 15 - Стеатоз 7 1 4 2 НАЖБП отсутствует 3 - 1** 2 1 г DS102 НАСГ 19 5 14 - Стеатоз 5 - 2 3 НАЖБП отсутствует 4 - 3 1 2 г DS102 НАСГ 12 5 7 - Стеатоз 14 1 9 4 НАЖБП отсутствует 3* - 2*, ** 1

[0515] Введение DS102 также снижало содержание жира в печени по оценке CAP у пациентов с диагностированным НАЖБП, как показано на ФИГ. 28. Кроме того, предполагается, что DS102 вызовет более значительные изменения печени в более продолжительных исследованиях и при оценке более чувствительными методами.

[0516] Введение DS102 также снижало уровни триглицеридов у пациентов, как показано в таблице 18, и, таким образом, предполагается, что DS102 также будет эффективен для снижения сердечно-сосудистого риска.

[0517] Таблица 18. Изменения уровней триглицеридов у пациентов, которым вводили DS102, на неделе 16

DS102 (2 г) Триглицериды (медиана % изменения с поправкой на плацебо от исходного уровня) Полная выборка пациентов для анализа -40,2 Подгруппа: приглицериды > верхний предел нормы (>150 мг/дл) -39,0 Подгруппа: высокий уровень триглицеридов (>200 мг/дл) -20,4

[0518] На ФИГ. 29A-29C показано, что введение DS102 снижает количество воспалительных и профибротических белков. Для этой оценки образцы крови до и после лечения DS102 были проанализированы посредством панели из более чем 350 различных белковых биомаркеров. Лечение 2 г DS102 значительно снижало экспрессию более 150 маркеров, связанных с воспалением, фиброзом, метаболизмом липидов, апоптозом и хемотаксисом. После лечения DS102 наблюдалось разрешение метаболической перегрузки и липотоксичности, что предотвращает последующий клеточный стресс, воспаление и фиброз. Уменьшение воспалительных и профибротических белков предполагает способность DS102 обеспечивать разрешение НАСГ и профилактику фиброза.

[0519] Введение DS102 также снижало экспрессию нескольких целей развития НАСГ, как показано на ФИГ. 30. В частности, введение 2 г DS102 снижало целевые показатели разработки препарата для лечения НАСГ, включая передачу сигналов CCR2/5 (Cenicriviroc - Allergan), Galectin3 (GR-MD-02 - Galectin) и AOC3 (Boehringer Ingelheim).

[0520] Вулканная диаграмма на ФИГ. 31 (данные тестирования Бонферрони и Бенджамини-Хохберга) показывает, что введение 2 г DS102 снижало количество воспалительных и профибротических белков на основе изменений в экспрессии белков. В таблице 19 показано наиболее значительное снижение воспалительного и профибротического белка на основе теста Бонферрони.

[0521] Таблица 19. Значимые белки на основе теста Бонферрони

Белок Описание PAI-1 Белок, индуцированный TGF-β, повышается при метаболическом синдроме, атеросклерозе, фиброзе TIMP-1 Профибротический DPP4 Активация Т-клеток, ингибирование DPP4 повышает уровень GLP-1 TLT2 Усиливает активацию Т-клеток, клиренс апоптотических клеток CCL16 хемокин, который связывается с CCR 1,2,5,8. Ценикривирок (Allergan) является антагонистом CCR2/5. MCP-1 (CCL2) хемокин, который связывается с CCR 2, 4. Ценикривирок (Allergan) является антагонистом CCR2/5. Увеличивается при НАСГ, атеросклерозе и др. SAA4 Аполипопротеин PI3/Элафин Увеличение болезни трансплантат против хозяина TR Железный гомеостаз LILRB1 Рецептор для антигенов MHC класса I TNRSF11A Взаимодействие Т-клеток/дендритных клеток

[0522] Введение 1 г DS102 также показало значительное снижение TR. В таблице 20 показано наиболее значительное снижение воспалительного и профибротического белка на основе анализа с использованием линейной модели.

[0523] Таблица 20. Значимые белки на основе линейной модели

Белок Описание TLT2 Усиливает активацию Т-клеток, клиренс апоптотических клеток AOC3 Нарушает гомеостаз глюкозы. Увеличивается при НАСГ, атеросклерозе. PRSS2 Экспрессируется в поджелудочной железе, участвует в клеточной адгезии

[0524] Этот анализ также показал, что 1 белок в группе, получавшей 1 г DS107, и 0 белков в группе плацебо преодолели 1-й порог на основе теста Бенджамини-Хохберга.

[0525] Введение DS102 также снижало экспрессию множественных молекул сосудистой адгезии, как показано на ФИГ. 32. Молекулы сосудистой адгезии связаны с атеросклерозом, а их циркулирующие уровни связаны с сердечно-сосудистым риском.

[0526] Введение DS102 также снижало экспрессию нескольких белков, связанных с повышенным сердечно-сосудистым риском, как показано на ФИГ. 33.

[0527] Введение DS102 также снижало экспрессию множества циркулирующих хемокинов, как показано на ФИГ. 34. Хемокины являются важными факторами хронического воспаления при атеросклерозе.

[0528] Введение DS102 также снижало экспрессию членов супердсемейства множественных рецепторов фактора некроза опухоли, как показано на ФИГ. 35. Члены супердсемейства рецепторов фактора некроза опухоли связаны с воспалением и атеросклерозом.

[0529] Также доказано, что DS102 является безопасным и хорошо переносимым препаратом, без каких-либо наблюдаемых различий в безопасности и переносимости по сравнению с плацебо. Серьезных нежелательных явлений (СНЯ), связанных с приемом препарата, не было, а частота нежелательных явлений (НЯ) была одинаково низкой во всех группах лечения. Большинство НЯ были легкими или умеренными, а также преходящими, и ни у одного пациента не было НЯ, которые привели бы к досрочному завершению лечения. Профиль безопасности для каждой исследуемой группы показан в таблице 21.

[0530] Таблица 21. Профиль безопасности для исследуемых групп

Пациенты, n (%) DS102, 2 г (n=30) DS102, 1 г (n=32) Плацебо (n=31) ≥1 НЯ 15 (50,0) 19 (59,4) 17 (54,8) ≥1 НЯ, связанное с исследуемым препаратом 3 (10,0) 2 (6,3) 4 (12,9) ≥1 СНЯ 1 (3,3) 0 1 (3,2) НЯ, приводящие к прекращению лечения 0 0 1 (3,2) СНЯ, относящиеся к исследуемому препарату 0 0 0 Летальный исход 0 0 0

[0531] DS102 также оценивали на потенциальную эффективность в улучшении связанных показаний, первичного билиарного цирроза (ПБЦ) и первичного склерозирующего холангита (ПСХ), как показано на ФИГ. 36А и 36В. Важно отметить, что введение 2 г DS102 снижает уровень щелочной фосфатазы (ЩФ), а также множественных маркеров фиброза печени, что позволяет предположить, что DS102 также будет эффективен при лечении ПБХ и ПСХ.

[0532] На ФИГ. 37 представлена диаграмма зависимости этилового эфира 15-HEPE (EE) от относительных концентраций в плазме, которая указывает на более высокое систематическое воздействие в группе лечения DS102 на неделе 8 и 16, как и предполагалось.

1.12 Краткое описание

[0533] В целом эти результаты показывают, что DS102 воздействует на несколько стадий патологии НАСГ, значительно снижая метаболическую нагрузку и повышая чувствительность к инсулину. Введение DS102 также улучшило липидный профиль пациентов, обратив вспять уровни накопления липидов, связанные с НАСГ. В частности, у тех пациентов, которым вводили DS102, наблюдалось снижение накопления гепатотоксических липидов, включая общий холестерин, холестерин-не-ЛПВП, холестерин RLP, триглицериды, диглицериды и Х-ЛПОНП, а также повышение уровней глицерофосфолипидов. Эти явления являются значительными, так как пациенты с диагнозом НАСГ характеризуются высоким уровнем общего холестерина, триглицеридов, диглицеридов и Х-ЛПОНП и низким уровнем глицерофосфолипидов и омега-3 ПНЖК. Кроме того, ожидается, что изменения во многих липидах приведут к снижению сердечно-сосудистого риска и улучшению многих аспектов метаболического синдрома.

[0534] Результаты также показали, что существует дозозависимый эффект в пользу введения 2 г или более DS102 с большими и статистически значимыми улучшениями по сравнению с плацебо.

[0535] В заключение, DS102 хорошо подходит как в качестве монотерапии, так и в составе комбинированной терапии для лечения НАСГ, и предполагается, что он снижает сердечно-сосудистый риск, в том числе у пациентов с диагнозом НАСГ или кардиометаболическими заболеваниями, включая метаболический синдром.

Пример 5: 26-недельное исследование токсичности 15(S)-HEPE EE при пероральном введении крысам с 4-недельным периодом восстановления

[0536] Цели этого исследования состояли в том, чтобы определить (1) потенциальную токсичность 15(S)-HEPE EE, жирной кислоты омега-3, используемой для лечения заболеваний печени и легких, при пероральном введении в течение 26 недель крысам и оценить потенциальную обратимость любых изменений; и (2) токсикокинетические характеристики 15(S)-HEPE EE.

1.1 Дизайн исследования

[0537] Рабочее и контрольное вещество вводили соответствующим животным один раз в день через желудочный зонд 7 дней в неделю в течение как минимум 26 недель. Объем для каждого животного основывался на самых последних измерениях массы тела. Дозы вводили с помощью шприца с присоединенной канюлей через желудочный зонд. Первый день дозирования был обозначен как день 1. Препарат вынимали из холодильника и перемешивали не менее 30 минут перед введением. Препарат также непрерывно перемешивали во время введения.

[0538] Из-за появления клинических признаков, включая сгорбленная поза, торчащий мех, аномальную походку и потерю массы тела, животным 3206M, 3515F и 3703F был назначен перерыв в дозировании с дня 45, а остальным животным группы 3 был назначен перерыв в дозировании с дня 48. Животным вводили более низкие дозы (3000 мг/кг/день) с дня 64. Следующие таблицы иллюстрируют методы лечения (таблица 22) и группы животных (таблица 23), которые использовались в исследовании.

[0539] Таблица 22. Таблица лечения

№ группы Лечение Уровень дозы (мг/кг/ день) Объем дозы (мл/кг) Концентрация дозы (мг/мл) Скорректированная концентрация дозы (мг/мл) К-во животных Основное исследование Восстановление Токсикокинетика Самцы Самки Самцы Самки Самцы Самки 1 Реберный 0 10 0 0 15 15 5 5 3 3 2 15(S)-HEPE EE 2000 10 200 206^b/204^c 15 15 5 5 9 9 3- 15(S)-HEPE EE 6000^a 10 600 618^b 15 15 5 5 9 9 3 15(S)-HEPE EE 3000^a 10 300 309b/306c 1,5 15 5 5 9 9 ^a Из-за появления клинических признаков, в том числе сгорбленной позы, торчащей шерсти, аномальной походки и потери массы тела, животным давали перерыв в дозировании с дня 48. Животным вводили более низкие дозы (3000 мг/кг/день) с дня 64.
^b Скорректирована концентрация для партий 2540M-1801 и 2540M-1802.
^c Скорректированная концентрация для партий 2540M/1901 и 2540M/1902.

[0540] Таблица 23. Группы животных

№ группы Номера животных Основное исследование Восстановление Токсикокинетика Самцы Самки Самцы Самки Самцы Самки 1 1001-1015 1501-1515 1101-1105 1601-1605 1201-1203 1701-1703 2 2001-2015 2504-2515 2101-2105 2601-2605 2201-2209 2701-2709 3 3001-3015 3501-3515 3101-3105 3001-3605 3201-3209 3701-3709 Животные-дублеры будут иметь номера 4002M и 4501F, 4502F.

[0541] Период восстановления: по завершении периода лечения назначенных выздоравливающих животных оставляли минимум на 4-недельный период восстановления.

[0542] Обоснование пути введения и уровней дозирования: для этого исследования был выбран пероральный путь введения, поскольку этот путь является предполагаемым путем введения человеку. Предыдущая 26-недельная пероральная токсичность у крыс, получавших дозу один раз в день, не выявила побочных эффектов при самой высокой испытанной дозе (1 мг/кг/день). См. Warren, H (2017). 26-недельное исследование 15(S)-HEPE EE при пероральном введении крысам с 4-недельным периодом восстановления. Charles River Study No. 529123. Учитывая, что в этом исследовании не наблюдалось ограничивающей дозу токсичности, в дополнительном 28-дневном исследовании диапазона доз была определена максимально переносимая доза (MTD) для перорального введения 6 г/кг/день. См. Murie, E (не заврешено). Предварительное 28-дневное исследование DS102 при пероральном введении крысам. Charles River Study No. 506611. Это текущее исследование было проведено для оценки потенциала хронической токсичности 15(S)-HEPE EE (DS102) при данной MTD в соответствии с ICH M3 (R2). См. ICH Harmonised Tripartite Guideline M3 (R2). Nonclinical Safety Studies for the Conduct of Human Clinical Trials and Marketing Authorisation for Pharmaceuticals.

1.2 Прижизненные процедуры, наблюдения и измерения:

[0543] Прижизненные процедуры, наблюдения и измерения проводились для всех основных исследуемых и восстанавливающихся животных. Животных из группы оценки токсикокинетики взвешивали и регистрировали клинические наблюдения в те же временные точки, что и животных из основных групп исследования.

[0544] Ежедневно проводились проверки на смертность/состояние агонии. Животных наблюдали на общее состояние здоровья/смертность и состояние агонии. Животных не вынимали из клетки во время наблюдения, за исключением случаев, когда это необходимо для идентификации или подтверждения возможных результатов.

[0545] Клинические наблюдения:

[0546] Наблюдения за клетками производились ежедневно. Животных не вынимали из клетки во время наблюдения, за исключением случаев идентификации или подтверждения возможных результатов.

[0547] Еженедельно проводились подробные клинические наблюдения. Животных вынимали из клетки для исследования.

[0548] Наблюдения после введения дозы проводились регулярно в течение дня. Всех животных исследовали на реакцию на лечение. Регистрировали начало, интенсивность и продолжительность этих признаков; особое внимание уделялось животным во время и в течение первого часа после введения дозы.

[0549] Измерения массы тела проводились дважды в течение периода до лечения; один раз в день в течение периода дозирования; и два раза в неделю в период восстановления. Животных взвешивали индивидуально. Массу регистрировали в первый день запланированного вскрытия (только для основных животных и животных из группы восстановления).

[0550] Потребление пищи количественно измеряли еженедельно, начиная с недели 1 в течение периодов введения и восстановления.

[0551] Проверка потребления воды производилась регулярно на протяжении всего исследования путем визуального осмотра бутылок с водой.

[0552] Офтальмологические исследования проводились с помощью непрямого офтальмоскопа после применения мидриатика (1% тропикамид, мидриаци). Во время предварительного этапа проведено обследование всех животных из основных групп исследования и группы восстановления. В течение недель 13 и 26 обследовали животных из основных групп исследования (контрольную группу и группу, получавшую высокую дозу). В течение недели 30 обследовали всех животных из группы восстановления.

1.3 Лабораторные оценки

[0553] Клиническая патология

[0554] Сбор образцов: кровь брали из хвостовой вены, если только это не происходило непосредственно перед вскрытием. В этом случае кровь брали из глазничного синуса под изофлюрановым наркозом без выхода из наркоза. Кровь у животных собирали в порядке возрастания, за исключением случаев, когда образцы были собраны до вскрытия. В этом случае соблюдался порядок умерщвления. Дополнительные образцы крови брали (например, из-за свертывания несывороточных образцов) без превышения допустимой частоты взятия образцов и объема крови. После сбора пробы передавались в соответствующую лабораторию для обработки. Образцы отбирали в соответствии со следующей таблицей.

[0555] Таблица 24. Образцы для клинико-патологической оценки

№ группы Точка времени Гематология Коагуляция Клиническая биохимия Анализ мочи Животные из основных групп исследования и группы восстановления Неделя 26 - - - X Восстановление День 183 X X X - Основное исследование Непосредственно перед вскрытием X X X - Животные из группы восстановления Неделя 30 - - - X Непосредственно перед вскрытием X X X - Незапланированное умерщвление (по возможности) Перед умерщвлением X X X - «X» - образец, который необходимо собрать; «-» - неприменимо.

[0556] Гематология: образец крови объемом 0,5 мл брали с использованием антикоагулянта K2EDTA. Мазки крови маркировали, окрашивали и хранили. Мазки крови анализировали по следующим параметрам.

[0557] Таблица 25. Гематологические параметры

Количество эритроцитов
Концентрация гемоглобина
Гематокрит
Средний объем эритроцита
Ширина распределения эритроцитов
Средняя концентрация корпускулярного гемоглобина
Средний корпускулярный гемоглобин
Количество ретикулоцитов (абс.)
Количество тромбоцитов Количество лейкоцитов
Количество нейтрофилов (абс.)
Количество лимфоцитов (абс.)
Количество моноцитов (абс.)
Количество эозинофилов (абс.)
Количество базофилов (абс.)
Крупные неокрашенные клетки (абс.)

[0558] Коагуляция: образец крови объемом 0,5 мл был собран с использованием антикоагулянта 3,8% (масса/объем) тринатрия цитрата для обработки в плазму. Для оценки коагуляции измеряли следующие параметры коагуляции.

[0559] Таблица 26. Параметры коагуляции

Активированное частичное тромбопластиновое время
Фибриноген Протромбиновое время
Качество образца

[0560] Клиническая биохимия: образец крови объемом 0,7 мл брали с использованием антикоагулянта лития гепарина для получения плазмы. Для оценки биохимических показателей определяли следующие параметры:

[0561] Таблица 27. Параметры клинической биохимии

Алананаминотрансфераза
Аспартатаминотрансфераза
Щелочная фосфатаза
Гамма-глутамилтрансфераза
Креатинкиназа
Общий билирубин^а
Мочевина
Креатинин
Кальций
Фосфат Общий белок
Альбумин
Глобулин
Соотношение альбумина/глобулина
Глюкоза
Холестерин
Триглицериды
Натрий
Калий
Хлорид
Качество образца ^a при общем билирубине >8,55 мкмоль/л также будет измеряться непрямой и прямой билирубин.

[0562] Анализ мочи: мочу собирали у животных в течение 6-ти часового периода (+/-30 мин) в условиях отсутствия пищи и наличия воды. После сбора пробы передавались в соответствующую лабораторию для обработки. Для оценки результатов анализа мочи измеряли следующие параметры:

[0563] Таблица 28. Параметры анализа мочи

Цвет
Внешний вид/прозрачность
Удельный вес
Объем
рН Белок
Глюкоза
Билирубин
Кетоны
Кровь

[0564] Анализ мазка костного мозга: костный мозг собирали у всех животных и консервировали в 10% нейтральном забуференном формалине.

[0565] Биоанализ и токсикокинетическая оценка

[0566] Сбор биоаналитических образцов: образец крови объемом 0,5 мл брали с использованием антикоагулянта K₂EDTA из яремной вены (или хвостовой вены, если яремная была недоступна) с использованием стерильных игл и одноразовых шприцев. По завершении сбора крови животных из групп оценки токсикокинетики подвергали умерщвлению, а трупы утилизировались без исследования. Образцы отбирали в соответствии со следующей таблицей.

[0567] Таблица 29. График отбора образцов для токсикокинетической оценки

№ группы Номера животных К-во животных Точки времени сбора проб (время после введения дозы) в день 1 и неделю 26 0 ч ^a 1 ч 2 ч 4 ч 8 ч 24 ч 1 1201-1203
1701-1703 3M/3F - - - X - - 2 2201-2203
2701-2703 X - - X - - 2204-2206
2704-2706 - X - - X - 2207-2209
2707-270927W - - X - - X 3 3201-3203
3701-3706 ^b X - - X - - 3204-3206
3704-3706 ^b - X - - X - 3207-3209
3707-3709 ^b - - X - - X «X» - образец, который необходимо собрать. «-» - не применимо.
^a Образец будет собран перед введением
^b Образцы животного 3702F были собраны в день 1, однако на день 44 это животное было умерщвлено по гуманным соображениям. Дополнительные образцы будут собраны на неделе 26 от животных 3707F (сбор 0 ч^а) и 3704F (сбор 4 ч), чтобы покрыть недостающие моменты времени для животного 3702F.

[0568] Биоаналитическая обработка образцов: образцы осторожно перемешивали и хранили на измельченном влажном льду до центрифугирования в течение 60 минут после забора крови. Образцы центрифугировали при 1500 g в течение 10 минут при 4 °C. Полученную плазму отделяли, переносили в прозрачные полипропиленовые пробирки с уникальной маркировкой и как можно скорее замораживали над сухим льдом или в морозильной камере, настроенной на температуру -20 °C.

[0569] Биологический анализ проб: образцы плазмы анализировали на концентрацию неэтерифицированного и общего HEPE с использованием утвержденных аналитических процедур. Было определено следующее:

а) Неэтерифицированный (HEPE присутствует в плазме в виде свободной жирной кислоты или связан с альбумином плазмы).

b) Общая (количественное определение неэтерифицированного HEPE и этерифицированного HEPE (например, в виде триглицеридов, сложных эфиров холестерина)) концентрация в каждый момент времени отбора проб.

[0570] Повторный анализ исследуемых образцов (Incurred sample reanalysis, ISR) для неэтерифицированного HEPE был выполнен для этого исследования в соответствии с соответствующей стандартной операционной процедурой(-ами) биоаналитической лаборатории. ISR был успешно выполнен для определения общего HEPE в образцах плазмы крыс с использованием аналитической процедуры, упомянутой выше, во время лабораторного исследования № 527943, и его не требуется повторять в этом исследовании.

[0571] Любые остаточные/сохраненные биоаналитические образцы хранились в течение как минимум 6 месяцев после публикации проекта отчета, после чего образцы были утилизированы. В качестве альтернативы, остаточные/сохраненные образцы утилизировались до истечения 6-месячного периода, если итоговый отчет был выпущен до окончания 6-месячного периода хранения. Ответственный исполнитель также может запросить и санкционировать утилизацию этих остаточных/сохраненных образцов раньше указанных сроков.

[0572] Токсикокинетическая оценка: токсикокинетические параметры оценивали с использованием фармакокинетического программного обеспечения Phoenix. Для оценки параметров использовали нераздельный подход, соответствующий пероральному способу введения. Все параметры были получены из общей концентрации свободной кислоты и несвязанной свободной кислоты композиции 15(S)-HEPE EE в плазме с дня 1 и недели 26, когда это целесообразно. Оценивались следующие параметры.

[0573] Таблица 30. Оцениваемые параметры

Параметр Описание параметра Tmax Время после введения дозы, при котором наблюдалась максимальная концентрация. Cmax Максимальная наблюдаемая концентрация, измеренная после введения дозы. Cmax/D Cmax, деленная на введенную дозу. AUC (0-t) Площадь под кривой зависимости концентрации от времени от начала введения дозы до последней наблюдаемой концентрации, поддающейся количественному определению с использованием линейного метода или метода линейных логарифмических трапеций. AUC (0-t)/D AUC(0-t), деленная на введенную дозу.

[0574] Частичные AUC (между любым заданным временем выборки) могут быть получены и сообщены для облегчения интерпретации. Описательная статистика (стандартная ошибка для Cmax и AUC(0-t)) для соответствующих переменных группировки и сортировки была сгенерирована с использованием Phoenix. Также были созданы таблица и графики ТЗ.

1.4 Процедуры умерщвления

[0575] В следующей таблице приведены процедуры умерщвления, использованные в исследовании.

[0576] Таблица 31. Процедуры умерщвления животных из основных групп исследования

Номер группы Запланированная день усыпления Процедуры вскрытия Гистология ^a Гистопатология^а Самцы Самки Вскрытие Сбор ткани Вес органов^а 1 15 15 183/184 X X X Полная ткань Полная ткань 2 15 15 Макроскопические изменения ткани-мишени^b Макроскопические изменения ткани-мишени^b 3 15 15 Полная ткань Полная ткань 1 5- 5 211 Макроскопические изменения ткани-мишени^b Макроскопические изменения ткани-мишени^b 2 5 5 Макроскопические изменения ткани-мишени^b Макроскопические изменения ткани-мишени^b 3 5 3 Макроскопические изменения ткани-мишени^b％ Макроскопические изменения ткани-мишени^b Незапланированные смерти X X - Полная ткань Полная ткань «X» - выполняемая процедура: «-» = неприменимо
^a Список тканей см. в таблице «Сбор и сохранение тканей».
^b Ткань-мишень - это печень (самцов и самок), щитовидная железа (самцов и самок), почки (только самок), костный мозг грудины (только самцы).

[0577] Незапланированные смерти: если животное из основных групп исследования или группы восстановления умерло во время исследования, проводили вскрытие и сохраняли определенные ткани. При необходимости температуру тела животных снижали для минимизации автолиза. Животные из основных групп исследования или группы восстановления усыплялись по гуманным соображениям в соответствии с СОП испытательного центра. Регистрировали массу тела и по возможности получали образцы для оценки клинико-патологических параметров. Такие животные подлежали вскрытию с сохранением определенных тканей. При необходимости температуру тела животных снижали для минимизации автолиза. Животных из группы оценки токсикокинетики, умерших или умерщвленных в ходе исследования из гуманных соображений, подвергали ограниченному патологоанатомическому исследованию. Обследование включало оценку органов и тканей в грудной, брюшной и тазовой полостях без сохранения тканей. Во время ограниченной патологоанатомической экспертизы особое внимание уделялось признакам возможной травмы от желудочного зонда. Регистрировали массу тела и собирали образцы для оценки токсикокинетического анализа.

[0578] Запланированное умерщвление: животных из основных групп исследования и группы восстановления, которые выжили до запланированного умерщвления, усыпляли с помощью углекислого газа; регистрировали конечную массу тела, после чего животное обескровливали. По возможности, животных умерщвляли в чередующемся порядке по дозовым группам таким образом, чтобы одинаковое количество животных из каждой группы, включая контрольные, подвергалось вскрытию в течение дня. Перед запланированным вскрытием животных кормили. Животных из группы оценки токсикокинетики, доживших до планового умерщвления, усыпляли соответствующими методами. Вскрытие не проводилось, ткани не собирались.

[0579] Вскрытие: животных из основных групп исследования и группы восстановления подвергали полному вскрытию, которое включало оценку тела и костно-мышечной системы; все внешние поверхности и отверстия; полость черепа и наружные поверхности головного мозга; и грудная, брюшная и тазовая полости, а также связанные с ними органы и ткани. Процедуры вскрытия проводились квалифицированным персоналом с соответствующей подготовкой и опытом в области анатомии животных и общей патологии.

[0580] Вес органов: органы, определенные для взвешивания в таблице «Сбора и сохранение тканей», взвешивали при вскрытии (если не указано иное) всех запланированных к усыплению животных. Масса органов не регистрировалась для животных, найденных мертвыми или умерщвленными в плохом физическом состоянии или в состоянии агонии. Парные органы взвешивали вместе. В случае значительных аномалий, в дополнение к общему весу, записывали вес каждого органа пары и как комментарий к соответствующему образцу ткани. Для анализа веса органов использовали конечное значение массы тела и мозга.

[0581] Сбор и сохранение тканей: образцы ткани, собранные в соответствии с приведенной ниже таблицей, сохраняли в 10% нейтральном забуференном формалине.

[0582] Таблица 32. Таблица «Сбор и сохранение тканей»

Орган Масса Макроскопическая оценка и сбор Гистологическая обработка Микроскопическая оценка Идентификатор животного - X - - Артерия, аорта - X X X Полость тела, носовая - X - - Костный мозг, грудь - X X X Мазок костного мозга - X ^a - - Кость, бедренная - X (1) X (1) X (1) Кость, грудная - X X X Мозг X X X X Шейка матки - X X X Эпидидимис X (2) X (2)^b X (2) X (2) Пищевод - X X X Глаз - X (2) ^b X (2) X (2) Железа, надпочечная X (2) X (2) X (2) X (2) Железа, клиторальная - X (2) - - Железа, слезная - X (2, внеорбитальная) - -

Орган Масса Макроскопическая оценка и сбор Гистологическая обработка Микроскопическая оценка Железа, гардерова - X(2) X(1) X(1) Железа, молочная - X X X Железа, паращитовидная - X(2) X(2) X(2) Железа, питуитарная X X X Железа, препуциальная - X(2) - - Железа, предстательная X X X Железа, поднижнечелюстная, слюнная - X(2) X(1) X(1) Железа, слюнная, подъязычная - X(2) - - Железа, слюнная, околоушная - X(2) - - Железа, семенная - X(2) X(2) X(2) Железа, щитовидная/железа, паращитовидная X(2)^d - - - Железа, щитовидная - X(2) X(2) X(2) Железа Зимбала - X(2) - - Кишечная лимфоидная ткань ^c - X X X Сердце X X X X Сустав, бедренно-большеберцовый - X(1) X(1) X(1) Почка X(2) X(2) X(2) X(2) Толстый кишечник, слепая кишка - X X X Толстый кишечник, ободочная (толстая) кишка - X X X Толстый кишечник, прямая кишка - X X X Гортань - X - - Печень X X X X Легкое - X X X Лимфатический узел, подчелюстной - X(2) X(1) X(1) Лимфатический узел, мезентериальный - X X X Мышцы, скелетные - X X X Носоглотка - X - - Второй черепной нерв - X(2)^c X(2) X(2) Седалищный нерв - X(2) X(1) X(1) Яичник X(2) X(2) X(2) X(2) Маточная труба - X(2) - - Поджелудочная железа - X X X Кожа - X X X Тонкий кишечник, двенадцатиперстная кишка - X X X Тонкий кишечник, подвздошная кишка - X X X Тонкий кишечник, тонкая кишка - X X X Спинной мозг - X X X Селезенка X X X X Желудок - X X X Яичко X(2) X(2) X(2) X(2) Тимус X X X X Язык X X X Трахея X X X Мочеточник X(2)^c - - Мочевой пузырь X X X Матка/шейка матки X - - Матка - X X X Влагалище - X X X «X» - проводимая процедура «-» - неприменимо. (1) - одна сторона. (2) - обе стороны.
Образцы макроскопических аномалий в перечисленных органах и в других органах будут отобраны при вскрытии, обработаны для гистологии и исследованы под микроскопом.
^a Два мазка костного мозга будут взяты из бедренной кости при плановой и внеплановой аутопсии (для возможного исследования). Мазки не будут собираться у животных, которые были найдены мертвыми, или у животных, которые были подвергнуты умерщвлению при агонии, а затем хранились в холодильнике до вскрытия. Мазки костного мозга сушат на воздухе и не фиксируют в формалине.
^b Глаза и зрительные нервы сохраняются в фиксаторе Дэвидсона. Семенники и придатки семенников сохраняются в модифицированном фиксаторе Дэвидсона.
^c Из тонкой кишки: пейеровы бляшки или солитарные лимфоидные фолликулы.
^d Взвешивание после фиксации

1.5 Лекарственная форма и ее анализ

[0583] Контрольное вещество: контрольным веществом данного исследования была 0,5% ГПМЦ в воде Milli-Q. Контрольное вещество готовили в соответствии с требованиями и хранили в холодильнике при температуре 4 °C, когда оно не использовалось. Подготовленное контрольное вещество вынимали из холодильника и перемешивали не менее 30 минут перед введением дозы. Контрольное вещество также непрерывно перемешивали во время введения дозы.

[0584] Рабочее вещество: рабочим веществом данного исследования был DS102 или 15(S)-HEPE EE. Лекарственная форма рабочего вещества была приготовлена на основе метода, установленного в испытательном центре, при соответствующих концентрациях для удовлетворения требований к уровню дозировки. Лекарственные формы готовили еженедельно и хранили в холодильнике при температуре 4 °C. Препарат вынимали из холодильника и перемешивали не менее 30 минут перед введением. Лекарственную форму также постоянно перемешивали во время введения дозы.

[0585] Сбор и анализ проб

[0586] Анализируемые образцы были представлены в течение установленного периода стабильности. Все проанализированные образцы были переданы при температуре окружающей среды в аналитическую лабораторию испытательного центра. Любые остаточные/сохраненные аналитические образцы хранились в течение как минимум 6 месяцев после подготовки проекта отчета, после чего образцы утилизируются. В качестве альтернативы, остаточные/сохраненные образцы утилизировались до истечения 6-месячного периода в случае, если итоговый отчет был выпущен до окончания 6-месячного периода хранения. Более ранняя утилизация остаточных/сохраненных образцов также может быть разрешена ответственным исполнителем после консультации со спонсором. Образцы лекарственной формы были собраны для анализа, как указано в следующей таблице. Дополнительные образцы могут быть собраны и проанализированы по усмотрению ответственного исполнителя.

[0587] Таблица 33: График отбора образцов лекарственной формы

Интервал Концентрация Однородность Стабильность День 1 Все группы Группы 2-3^a Н/П Неделя 2 Все группы Группы 2-3^a Н/П Неделя 10 Группа 3 Группа 3 Н/П Неделя 13 Все группы Н/П Н/П Неделя 14 Все группы Все группы ^a Н/П Неделя 26 Все группы Н/П Н/П Н/П - не применимо.
^a Результаты оценки гомогенности, полученные в верхней, средней и нижней частях препарата групп 2 и 3, будут усреднены и использованы в качестве результатов оценки концентрации.

[0588] Аналитический метод

[0589] Описанный ниже анализ был выполнен с помощью СВЭЖХ с УФ-детектированием с использованием утвержденной аналитической процедуры.

[0590] Анализ концентрации:

Образец для анализа: по два верхних, средних и нижних образца (дублирующийся средний образец только для контроля) отправляли на анализ. Там, где оценивается только концентрация, двойными были только средние образцы.

Запасные образцы: три верхних, средних (только для контроля) и нижних образца хранятся в испытательной лаборатории. Запасные образцы могут быть проанализированы по усмотрению ответственного исполнителя. Там, где оценивается только концентрация, будут отобраны три образца из средней части.

Пробоотборный сосуд: мерные колбы подходящего размера.

Объем образца:

Группа 1: 0,5 мл в мерной колбе вместимостью 50 мл.

Группа 2: 0,25 мл в мерной колбе вместимостью 50 мл.

Группа 3: 0,25 мл в мерной колбе вместимостью 50 мл.

Массу всех образцов регистрировали.

Условия хранения: хранить в холодильнике при температуре 4°C.

Критерии приемлемости: критерии приемлемости представляли собой среднее значение концентрации образца в пределах ±10% от теоретической концентрации. Для однородности критерий приемлемости концентраций составлял ≤10% относительного стандартного отклонения (RSD) для каждой группы.

[0591] Анализ стабильности: анализы стабильности, проведенные ранее в рамках лабораторного исследования № 439414, продемонстрировали, что рабочее вещество стабильно в носителе при приготовлении и хранении в тех же условиях при концентрациях, выходящих за предельные значения, которые использовались в настоящем исследовании. См. Rogers, E (2018). Валидация метода ультрапроизводительной жидкостной хроматографии по определению 15(S) HEPE EE в дозируемых препаратах для перорального введения (через зонд). Charles River Study No. 439414. Данные о стабильности были сохранены в протоколах лабораторного исследования № 439414. Id.

1.6 - Система испытания

[0592] Животные: в исследовании использовали самцов и самок крыс Sprague Dawley, приобретенных у Charles River UK Limited (Маргейт, Кент, Великобритания). Целевой возраст при начальной дозировке составлял 7-8 недель. Целевой вес при начальном введении дозы составлял 175-300 г (самцы) и 120-250 г (самки). Каждое животное идентифицировали с помощью подкожно имплантированного электронного цилиндрического «стеклянного» микрочипа TROVAN.

1.7 Условия содержания животных

[0593] Помещение: животным давали возможность акклиматизироваться в помещении для токсикологических исследований на грызунах в течение периода до 3 недель до начала введения дозы. Животные были случайным образом распределены по группам. Самцов и самок рандомизировали отдельно. Животные со слабым здоровьем не распределялись по группам. Животных разделяли по полу и содержали по 2 или 3 в подвесных клетках из поликарбоната/полипропилена подходящего размера с решетчатым верхом из нержавеющей стали и твердым дном. В качестве подстилающего материала использовалась стерилизованная белая древесная стружка.

[0594] Условия окружающей среды: целевые условия для помещения для животных были следующими: температура 19-23 °C; влажность 40-70%; проветривание не менее 10 воздухообменов в час; световой цикл 12 часов света и 12 часов темноты. Световые циклы, температура и влажность контролировались автоматически на постоянной основе с регистрацией.

[0595] Рацион: предоставлялось специальное питание для крыс и мышей (модифицированное) №1 без ограничений, а также осуществлялся расширенный контроль качества специального рациона. Вода из водопровода предоставлялась без ограничений через поилку. Вода, используемая испытательным центром, регулярно анализировалась на содержание растворенных веществ, тяжелых металлов, остатков пестицидов, рН, нитратов и нитритов. Также был проведен микробиологический скрининг.

[0596] Обеспечение животных: животные размещались в условиях социализации для обеспечения психологических и средовых потребностей. Клетки снабжались укрытием и предметами для жевания. Животные находились там постоянно с перерывами на процедуры в рамках исследования.

[0597] Ветеринарная помощь: ветеринарная помощь была доступна на протяжении всего исследования, и ветеринар осматривал животных в зависимости от клинических признаков и других изменений. Все ветеринарные осмотры и рекомендуемые терапевтические процедуры, если таковые проводились, документировались в журнале исследования.

1.8 Гистология и гистопатология

[0598] Гистология: ткани, указанные в таблице «Сбор и сохранение тканей», заливали в парафин, делали срезы, помещали на предметные стекла и окрашивали гематоксилином и эозином.

[0599] Гистопатология: гистопатологические анализы проводились сертифицированным ветеринарным патологоанатомом или ветеринарным патологоанатомом с подготовкой и опытом в области патологии лабораторных животных. Микроскопическое исследование тканей было проведено у животных из основной контрольной группы исследования и животных из группы, получавшей высокую дозу препарата, а также в случае незапланированной смерти и значительных поражений (в том числе у животных из основных групп исследования, у животных из группы, получавшей низкую дозу препарата, и животных из группы восстановления). Если эффекты лечения присутствовали в основной группе исследования, получавшей высокую дозу, микроскопическое исследование тканей-мишеней животных из основной группы исследования, получавшей низкую дозу, и животных из группы восстановления проводили после согласования со спонсором и ответственным исполнителем путем изменения протокола.

1.9 Компьютеризированные системы

[0600] Компьютеризированные системы: для использования в исследовании была доступна следующая таблица компьютеризированных систем:

[0601] Таблица 34. Критические компьютеризированные системы

Название системы Описание собранных и/или проанализированных данных Dispense Получение предмета исследования, отчетность и/или действия, связанные с составом и лекарственной формой. Provantis Применимо для прижизненных процедур, лабораторных исследований и вскрытия Empower 3 Сбор и обработка хроматографических данных (анализ состава) Analyst Сбор хроматографических данных (биоанализ) Watson Хроматографическая обработка (биоанализ) Phoenix Некомпартментный анализ и описательная статистика (токсикокинетическая оценка) Внутреннее программное обеспечение для отчетности Nevis 2012 (с использованием SAS) Применимо для прижизненных процедур, лабораторных исследований и вскрытия Deviation Information Library Отклонения Trend 963 Secure Непрерывная регистрация температуры и влажности. Сигнализация для помещений с животными, холодильниками, морозильниками и инкубаторами. Share Document Management System Составление отчетов Docusign Сбор подписей в соответствии с частью 11

1.10 Статистический анализ

[0602] Данные, собранные в период до введения дозы, были сведены в таблицы, обобщены и подвергнуты статистическому анализу. Весь статистический анализ был выполнен в рамках соответствующей фазы исследования, если не указано иное. Числовые данные, собранные в запланированных случаях (за исключением данных по животным из группы оценки токсикокинетики), были обобщены и подвергнуты статистическому анализу, как указано ниже, в зависимости от пола и случая.

[0603] Сконструированные переменные: изменения веса тела рассчитывали между каждым запланированным интервалом. Массу органов по отношению к массе тела рассчитывали по конечной массе тела для запланированных интервалов. Массу органа по отношению к массе мозга рассчитывали по отношению к массе мозга для запланированных интервалов.

[0604] Описательный статистический анализ: средние значения, стандартные отклонения (или процентный коэффициент вариации или стандартная ошибка, когда это считается целесообразным), проценты, числа и/или случаи будут сообщаться соответствующим образом по набору данных.

[0605] Логический статистический анализ: весь статистический анализ проводился на уровне значимости 5%. Все парные сравнения проводились с использованием двусторонних тестов и сообщались на уровне 1% и 5%, если не указано иное. Интересующие парные сравнения перечислены ниже:

• Группа 2 vs группа 1

• Группа 3 vs группа 1

[0606] Анализ проводился в соответствии с приведенной ниже матрицей, когда это было возможно, но исключались все группы с менее чем 3 наблюдениями.

[0607] Таблица 35. Статистическая матрица

Переменные для логического анализа Статистический метод параметрический/ непараметрический Масса тела X Увеличение массы тела X Гематологические переменные X Коагуляционные переменные X Биохимические переменные X Переменные анализа мочи X Вес органов X Вес органа по отношению к весу тела X Вес органа по отношению к весу мозга X

[0608] Параметрический/непараметрический: для оценки однородности групповой дисперсии был использован тест Левена. Группы сравнивали с использованием общего однофакторного F-критерия ANOVA, если критерий Левена или Крускала-Уоллиса не был значимым. Если общий F-критерий или критерий Крускала-Уоллиса оказывался значимым, то попарные сравнения проводились с использованием критерия Даннета или критерия Данна соответственно.

1.11 Результаты

[0609] Изменение количества эритроцитов, ширины распределения эритроцитов и числа ретикулоцитов: на ФИГ. 38A-38C показано изменение количества эритроцитов (RBC), ширины распределения эритроцитов (RDW) и числа ретикулоцитов (RETIC) у крыс, которым вводили 15(s)-HEPE EE или плацебо. 15(S)-HEPE EE и плацебо вводили один раз в день через желудочный зонд 7 дней в неделю в течение как минимум 26 недель. Объем для каждого животного основывался на самых последних измерениях массы тела. Как отмечено в таблице 36, самая высокая доза 6 г/кг/день плохо переносилась и была заменена на более низкую дозу 3 г/кг/день.

[0610] Таблица 36. Изменение RBC, RDW и RETIC у крыс, получавших 15(S)-HEPE EE

ИССЛЕДОВАНИЕ 26-недельное исследование у крыс (CRL509554) Доза 15 (S)-HEPE EE (мг/кг/сутки) 0 (носитель) 2000 6000/3000 Количество эритроцитов (RBC) (10^A12/л)
Среднее (СО) 8,38
0,42 8,67
0,41 8,81**
0,42 Ширина распределения эритроцитов (RDW) (%)
Среднее
(СО) 14,98
1,23 13,91**
0,96 13,60**
0,57 Число ретикулоцитов (RETIC) (10^9/л)
Среднее (СО) 219,51
40,41 154,60*
32,31 141,46**
30,57 Anova и Dunnett: * - p≤0,05; ** - p≤0,01
Все представленные значения наблюдались у самцов.
Самая высокая доза 6 г/кг/день плохо переносилась и была заменена более низкой дозой 3 г/кг/день.

[0611] Изменения в RBC: на ФИГ. 38A и Таблице 36 показано, что введение дозы 3 г/кг/день приводило к значительному увеличению числа эритроцитов по сравнению с контролем.

[0612] Изменения в RDW: на ФИГ. 38B и Таблице 36 показано, что введение доз 2 г/кг/день и 3 г/кг/день приводило к значительному снижению RDW по сравнению с контролем.

[0613] Изменения в RETIC: на ФИГ. 38C и Таблице 36 показано, что введение доз 2 г/кг/день и 3 г/кг/день приводило к значительному снижению реакционной способности по сравнению с контролем.

[0614] Эти результаты свидетельствуют о том, что 15-HEPE обладает терапевтическим потенциалом при ряде состояний, влияющих на гемоглобин и эритроциты.

[0615] Изменение протромбинового времени, активированного частичного тромбопластинового времени и концентрации фибриногена: на ФИГ. 39A-39C показано изменение протромбинового времени (PT), активированного частичного тромбопластинового времени (APTT) и концентрации фибриногена (FIB) у крыс, которым вводили 15(s)-HEPE EE или плацебо. 15(S)-HEPE EE и плацебо вводили один раз в день через желудочный зонд 7 дней в неделю в течение как минимум 26 недель. Объем для каждого животного основывался на самых последних измерениях массы тела. Как указано в таблице 37, самая высокая доза 6 г/кг/день плохо переносилась и была заменена более низкой дозой 3 г/кг/день.

[0616] Таблица 37. Изменение концентрации PT, APTT и FIB у крыс, которым вводили 15(S)-HEPE EE

ИССЛЕДОВАНИЕ 26-недельное исследование у крыс (CRL509554) Доза 15 (S) HEPE EE
(мг/кг/сутки) 0 (носитель) 2000 6000/3000 Протромбиновое время (PT) (сек)
Среднее (СО) 10,25
0,34 10,69**
0,41 10,81**
0,47 Активированное частичное тромбопластиновое время (APTT) (сек) Среднее
(СО) 12,92
2,12 15,03*
2,64 15,73**
2,00 Фибриноген (FIB) (г/л)
Среднее (СО) 2,61
0,26 2,35**
0,29 2,26**
0,24 Anova и Dunnett: * - p≤0,05; ** - p≤0,01
Все представленные значения наблюдались у самцов.
Самая высокая доза 6 г/кг/день плохо переносилась и была заменена более низкой дозой 3 г/кг/день.

[0617] Изменения в PT: на ФИГ. 39A и таблице 37 показано, что введение дозы 2 г/кг/день и 3 г/кг/день приводило к значительному увеличению PT по сравнению с контролем.

[0618] Изменения в APTT: на ФИГ. 39B и таблице 37 показано, что введение доз 2 г/кг/день и 3 г/кг/день приводило к значительному увеличению APTT по сравнению с контролем.

[0619] Изменение концентрации FIB: на ФИГ. 39C и таблице 37 показано, что введение доз 2 г/кг/день и 3 г/кг/день приводило к значительному снижению концентрации FIB по сравнению с контролем.

[0620] Эти результаты позволяют предположить, что 15-HEPE обладает антикоагулянтным и антитромботическим действием.

[0621] Различные варианты осуществления настоящего раскрытия изложены ниже:

[0622] Пункт A. Способ лечения и/или профилактики метаболического синдрома у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE, 15-HETrE или композиции, содержащей 15-HEPE и/или HEtrE.

[0623] Пункт B. Способ лечения и/или профилактики кардиометаболического заболевания у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE, 15-HETrE или композиции, содержащей 15-HEPE и/или HEtrE.

[0624] Пункт С. Способ лечения и/или профилактики метаболического синдрома и/или кардиометаболического заболевания у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту до примерно 8 г композиции, содержащей 15-HEPE и/или 15-HETrE, где 15-HEPE и/или 15-HEtrE составляют по меньшей мере примерно 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0625] Пункт D. Способ лечения и/или профилактики метаболического синдрома и/или кардиометаболического заболевания у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту до примерно 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере примерно 90% по весу всех жирных кислот в композиции, при этом у субъекта наблюдается одно или более из: снижения уровня диглицеридов, глицерофосфолипидов, печеночного жира, артериального давления, окружности талии и/или уровней свободных жирных кислот; и/или увеличение уровней глицерофосфолипида.

[0626] Пункт E. Способ предотвращения прогрессирования первой стадии неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) во вторую стадию НАСГ у субъекта, включающий введение субъекту примерно до 8 г композиции, содержащей 15-HEPE.

[0627] Пункт F. Способ по пункту E, в котором первая стадия представляет собой метаболическую перегрузку, повышенное содержание жира в печени и липотоксичность, апоптоз клеточного стресса, воспаление и/или фиброгенное ремоделирование.

[0628] Пункт G. Способ, описанный в пункте E или пункте F, в котором вторая стадия представляет собой повышенное содержание жира в печени и липотоксичность, апоптоз клеточного стресса, воспаление и/или фиброгенное ремоделирование.

[0629] Пункт H. Способ лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний у субъекта, страдающего неалкогольной жировой дисфункцией печени (НАЖБП), метаболическим синдромом и/или кардиометаболическим заболеванием, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту 15-HEPE, 15-HETRE или композиции, содержащей 15-HEPE и/или HEtrE.

[0630] Пункт I. Способ лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний у субъекта, нуждающегося в этом и страдающего неалкогольной жировой дисфункцией печени (НАЖБП), метаболическим синдромом или кардиометаболическим заболеванием, включающий введение субъекту до примерно 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, при этом 15-HEPE составляет по меньшей мере примерно 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0631] Пункт J. Способ по любому из пунктов А-I, в котором у субъекта наблюдается снижение одного или более из: активности альфа-гладкомышечного актина (α-SMA), ингибитора металлопептидазы-1 (TIMP-1), трансформирующего фактора роста бета-β (TGF-β) и/или уровней коллагена 1 типа.

[0632] Пункт K. Способ по любому из пунктов A-C или E-J, в котором у субъекта наблюдается снижение уровня диглицеридов, печеночного жира, артериального давления, окружности талии и/или уровней свободных жирных кислот и/или повышение уровня глицерофосфолипидов.

[0633] Пункт L. Способ по любому из пунктов. A-K, в котором у субъекта наблюдается снижение уровня щелочной фосфатазы (ЩФ).

[0634] Пункт M. Способ по любому из пунктов А-L, в котором у субъекта наблюдается снижение уровней аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ) и/или билирубина (АМК) в сыворотке.

[0635] Пункт N. Способ по любому из пунктов А-М, в котором у субъекта наблюдается уменьшение площади фиброза.

[0636] Пункт O. Способ по любому из пунктов А-N, в котором у субъекта наблюдается снижение уровня гемоглобина A1C (HbA1C), оценки гомеостатической модели резистентности к инсулину (HOMA-IR) и/или уровней резистентности к инсулину в жировой ткани (adipo-IR).

[0637] Пункт P. Способ по любому из пунктов H-O, в котором НАЖБП представляет собой неалкогольный стеатогепатит (НАСГ).

[0638] Пункт Q. Способ по любому из пунктов В-D или F-P, в котором кардиометаболическое заболевание или сердечно-сосудистое заболевание представляет собой одно или более из: дислипидемии, гиперлипидемии, гиперхолестеринемии, гипертриглицеридемии, первичной гиперхолестеринемии, первичной гиперлипидемии, общей первичной гиперлипидемии, распространенной гиперхолестеринемии, семейной гиперлипидемии, семейной первичной гиперлипидемии, семейной гиперхолестеринемии, семейной гипертриглицеридемии, комбинированной семейной гиперлипидемии, семейного дефекта аполипопротеина b-100, вторичной гиперлипидемии, смешанной гиперлипидемии, сердечно-сосудистого заболевания, остаточного сердечно-сосудистого риска, предотвращения образования/прогрессирования атеросклеротических бляшек, микрососудистого заболевания, макрососудистого заболевания, атеросклероза, коронарного атеросклероза, диастолической дисфункции, снижения сердечно-сосудистого риска, предотвращения серьезных коронарных событий, предотвращения серьезных неблагоприятных сердечно-сосудистых событий, предотвращения ишемических событий, вторичной/первичной профилактики сердечно-сосудистых событий, предотвращения смерти от сердечно-сосудистых заболеваний, инфаркта миокарда, инсульта, стенокардии, восстановления нормальной функции эндотелия, диабета, сахарного диабета, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, гипергликемии, дисгликемии, индукции гликемического контроля, нарушения переносимости глюкозы и нарушенной гликемии натощак.

[0639] Пункт R. Способ по пункту Q, в котором микрососудистое заболевание представляет собой ретинопатию, нефропатию, невропатию или их комбинацию.

[0640] Пункт S. Способ по пункту Q, в котором макрососудистое заболевание представляет собой инсульт, заболевание периферических сосудов, ишемию конечностей, заболевание сердца или их комбинацию.

[0641] Пункт T. Способ по любому из пунктов А-S, в котором у субъекта наблюдается снижение уровня холестерина липопротеинов очень низкой плотности (Х-ЛПОНП), холестерина липопротеинов невысокой плотности (холестерин-не-ЛПВП) и/или холестерина ремнантных частиц (RLP-C), и/или уровня холестерина липопротеинов высокой плотности (Х-ЛПВП).

[0642] Пункт U. Способ по любому из пунктов A-T, в котором у субъекта наблюдается снижение эластичности печени, фиброз-4 (FIB-4), оценки генерализованного фиброза печени (ELF) и/или оценки НАЖБП (NFS).

[0643] Пункт V. Способ по любому из пунктов A-U, в котором у субъекта наблюдается снижение воспалительных и профибротических белков, выбранных из группы, состоящей из ингибитора активатора плазминогена-1 (PAI-1), ингибитора металлопептидазы-1 (TIMP-1), дипептидилпептидазы 4 (DPP4), трем-подобного транскрипта 2 (TLT2), хемокинового (мотив C-C) лиганда 16 (CCL16), моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (MCP-1), сывороточного амилоида A4 (SAA4), фосфоинозитида 3 (PI3), тиоредоксинредуктазы (TR), лейкоцитарного иммуноглобулина, подобного рецептору B1 (LILBR1), аминоксидазы, медьсодержащих агентов 3 (AOC3), сериновых протеаз 2 (PRSS2) и члена суперсемейства лигандов фактора некроза опухоли 11A (TNRSF11A).

[0644] Пункт W. Способ лечения или профилактики холестатического заболевания печени у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE, 15-HETrE или композиции, содержащей 15-HEPE и/или 15-HEtrE.

[0645] Пункт X. Способ по пункту W, в котором холестатическое заболевание печени представляет собой первичный билиарный холангит (ПБХ), первичный склерозирующий холангит (ПСХ), прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз или их комбинацию.

[0646] Пункт Y. Способ по пункту W или пункту X, в котором холестатическое заболевание печени вызвано лекарственным поражением печени, полным парентеральным питанием (ППП), вирусным и алкогольным гепатитом, холестазом, вторичным по отношению к системным заболеваниям, дисфункцией трансплантата, холестазом после трансплантации печени, панкреатитом, холедохолитиазом, синдромом Мириззи, генетическими заболеваниями, злокачественным новообразованием или их комбинацией.

[0647] Пункт Z. Способ по пункту Y, в котором злокачественное новообразование представляет собой гепатоцеллюлярную карциному, опухоль желчных протоков, карциному поджелудочной железы или их комбинацию.

[0648] Пункт AA. Способ по любому из пунктов W-Z, в котором у субъекта наблюдается снижение цитокинов и/или хемокинов, выбранных из группы, состоящей из активности альфа-гладкомышечного актина (α-SMA), ингибитора металлопептидазы-1 (TIMP-1), трансформирующего фактора роста бета-β (TGF-β) и коллагена типа 1.

[0649] Пункт BB. Способ лечения или профилактики заболевания почек у субъекта, включающий введение субъекту 15-HEPE и/или 15-HETrE или композиции, содержащей 15-HEPE и/или 15-HETE, причем субъект имеет по меньшей мере один фактор риска заболевания почек.

[0650] Пункт CC. Способ по пункту BB, в котором заболевание почек выбрано из группы, состоящей из фиброза почек, тубулоинтерстициального фиброза, хронического заболевания почек, тяжелого интерстициального фиброза, интерстициального фиброза почек и терминальной стадии почечной недостаточности.

[0651] Пункт DD. Способ по пункту CC, где заболевание почек вызывает фиброз.

[0652] Пункт EE. Способ по любому из пунктов BB-DD, в котором по меньшей мере один фактор риска заболевания почек выбран из группы, состоящей из диабета, высокого кровяного давления, сердечно-сосудистого заболевания, гломерулонефрита и поликистозной болезни почек.

[0653] Пункт FF. Способ по любому из пунктов BB-EE, в котором у субъекта наблюдается снижение уровней гидроксипролина в почках.

[0654] Пункт GG. Способ по любому из пунктов BB-FF, в котором у субъекта не наблюдается повышения уровней α-SMA, TIMP-1, TGF-β и/или коллагена типа 1.

[0655] Пункт HH. Способ по любому из пунктов BB-GG, в котором у субъекта наблюдается снижение уровней α-SMA, TIMP-1, TGF-β и/или коллагена типа 1.

[0656] Пункт II. Способ по любому из пунктов АК-HH, в котором у субъекта наблюдается снижение профиброзных цитокинов в печени.

[0657] Пункт JJ. Способ по пункту II, в котором профибротические цитокины представляют собой один или более из α-SMA, TIMP-1, TGF-β, коллагена типа 1, интерлейкина 1β (IL-1β), интерлейкина-6 (IL-6), интерлейкина-6 (IL-8), интерлейкина-13 (IL-13), фактора некроза опухоли (TNF-α), TNF-подобного лиганда 1A (TL1A), арилуглеводородного рецептора (AhR), интерлейкина-17 (IL-17), интерлейкина-23 (IL-23), интерлейкина-11 (IL-11) и/или интерлейкина-33 (IL-33).

[0658] Пункт KK. Способ по любому из пунктов А-JJ, в котором у субъекта наблюдается снижение молекул сосудистой адгезии и/или хемокинов, и/или членов суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли.

[0659] Пункт LL. Способ по любому из пунктов A-KK, в котором 15-HEPE, 15-HEtrE или композицию, содержащую 15-HEPE и/или 15-HEtrE, вводят перорально.

[0660] Пункт ММ. Способ по любому из пунктов А-LL, в котором 15-HEPE и/или 15-HEtrE находятся в форме свободной кислоты, в этерифицированной форме или в форме соли.

[0661] Пункт NN. Способ по пункту MM, в котором этерифицированная форма представляет собой форму алкилового эфира или форму триглицерида.

[0662] Пункт ОО. Способ по любому из пунктов A-NN, в котором 15-HEPE включает 15(S)-HEPE, 15(R)-HEPE или их комбинации и/или 15-HETRE включает 15(S)-HETRE, 15(R)-HETRE или их комбинации.

[0663] Пункт PP. Способ по любому из пунктов A-OO, в котором композиция содержит от около 1 г до около 2 г 15-HEPE и/или 15-HETrE.

[0664] Пункт QQ. Способ по любому из пунктов А-PP, в котором композиция содержит около 2 г или более 15-HEPE и/или 15-HETrE.

[0665] Пункт RR. Способ по любому из пунктов А-QQ, в котором композиция содержит около 1 г или около 2 г 15-HEPE и/или 15-HETrE.

[0666] Пункт SS. Способ по любому из пунктов A-RR, в котором композиция содержит от около 10 мг до около 10 000 мг 15-HEPE и/или 15-HETrE.

[0667] Пункт ТТ. Способ по любому из пунктов А-SS, в котором композиция содержит около 5 мг/кг, около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг 15-HEPE и/или 15-HETrE.

[0668] Пункт UU. Способ по любому из пунктов A-TT, в котором 15-HEPE и/или 15-HETrE составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот, присутствующих в композиции.

[0669] Пункт VV. Способ по любому из пунктов А-UU, в котором композицию вводят в 1-8 капсулах в день.

[0670] Пункт WW. Способ по любому из пунктов A-C или H-VV, в котором способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-HEPE.

[0671] Пункт XX. Способ по любому из пунктов A-C или H-VV, в котором способ включает введение субъекту 15-HETrE или композиции, содержащей 15-HETrE.

[0672] Пункт YY. Способ лечения и/или профилактики гематологического нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-гидроксиэйкозапентаеновой кислоты (15-HEPE) или композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE).

[0673] Пункт ZZ. Способ по пункту YY, в котором гематологическое расстройство выбрано из группы, состоящей из анемии, рака крови и нарушений свертывания.

[0674] Пункт AB. Способ по пункту ZZ, в котором анемия выбрана из группы, состоящей из алиментарной анемии и неалиментарной анемии.

[0675] Пункт AC. Способ по пункту ZZ, в котором злокачественное заболевание крови выбрано из группы, состоящей из лимфомы, лейкоза и миеломы.

[0676] Пункт AD. Способ по пункту ZZ, где нарушение свертывания выбрано из группы, состоящей из тромбофилии, гемофилии, болезни фон Виллебранда и тромбоцитопении.

[0677] Пункт AE. Способ лечения и/или профилактики нарушения гемоглобина у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE).

[0678] Пункт AF. Способ лечения и/или профилактики нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE).

[0679] Пункт AG. Способ лечения и/или профилактики нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15-НЕРЕ, где 15-НЕРЕ составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0680] Пункт AH. Способ лечения и/или профилактики нарушения гемоглобина и/или нарушения эритроцитов у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по весу всех жирных кислот в композиции, и при этом у субъекта проявляется одно или более из следующего:

(a) увеличение числа эритроцитов;

(b) уменьшение ширины распределения эритроцитов; и/или

(c) снижение числа ретикулоцитов.

[0681] Пункт AI. Способ по пункту AH, в котором у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25% или по меньшей мере на 30% по сравнению с пациентом в контрольной группе, не получающим композицию.

[0682] Пункт AJ. Способ по пункту AI, в котором у пациента в контрольной группе количество эритроцитов составляет примерно 4×10¹² эритроцитов/л.

[0683] Пункт AK. Способ по пункту AH, в котором у субъекта наблюдается уменьшение ширины распределения эритроцитов около 15-20%, около 20-25%, около 25-30%, около 30-35% или около 35-40% по сравнению с пациентом в контрольной группе, не получавшем композицию.

[0684] Пункт AL. Способ по пункту AK, в котором у пациента в контрольной группе ширина распределения эритроцитов превышает 15%.

[0685] Пункт AM. Способ по пункту AH, в котором у субъекта наблюдается снижение числа ретикулоцитов по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15% или по меньшей мере около 20% по сравнению с пациентом в контрольной группе, не получающим композицию.

[0686] Пункт AN. Способ по пункту AM, в котором у пациента в контрольной группе число ретикулоцитов превышает 5% от общего количества эритроцитов.

[0687] Пункт AO. Способ лечения и/или профилактики гемолитической анемии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0688] Пункт AP. Способ по пункту AO, в котором гемолитическая анемия представляет собой наследственную гемолитическую анемию или приобретенную гемолитическую анемию.

[0689] Пункт AQ. Способ по пункту AP, в котором наследственная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из серповидноклеточной болезни, серповидноклеточной анемии, β-талассемии и наследственного сфероцитоза.

[0690] Пункт AR. Способ по пункту AP, в котором приобретенная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из вторичной и развившейся на фоне инфекции, медикаментозной терапии, гематологического злокачественного новообразованию, аутоиммунного заболевания, гиперспленизма, искусственного механического клапана сердца и переливания крови.

[0691] Пункт AS. Способ по пункту AQ, в котором серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом и/или секвестрацией селезенки.

[0692] Пункт AT. Способ по любому из предшествующих пунктов YY-AS, в котором 15-HEPE находится в форме этилового эфира (15-HEPE EE) или 15-HEPE находится в форме оптически активного сложного эфира (15(S)-HEPE EE).

[0693] Пункт AU. Способ по любому из пунктов AE-AN, в котором гематологическое нарушение, нарушение гемоглобина и/или нарушение эритроцитов выбирают из группы, состоящей из наследственной гемолитической анемии, приобретенной гемолитической анемии, анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и миелодиспластического синдрома.

[0694] Пункт AV. Способ по любому из пунктов YY-AG или AO-AT, в котором у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, снижение числа ретикулоцитов и уменьшение ширины распределения эритроцитов.

[0695] Пункт AW. Способ лечения и/или профилактики гематологического заболевания и/или заболевания крови у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15- НЕРЕ, где 15-НЕРЕ составляет по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0696] Пункт AX. Способ по пункту AW, в котором 15-HEPE находится в форме этилового эфира (15-HEPE EE) или 15-HEPE находится в форме оптически активного сложного эфира (15(S)-HEPE EE).

[0697] Пункт AY. Способ по пункту AW, в котором гематологическое заболевание и/или заболевание крови выбирают из группы, состоящей из наследственной гемолитической анемии, приобретенной гемолитической анемии, анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и миелодиспластического синдрома.

[0698] Пункт AZ. Способ по пункту AY, в котором гемолитическая анемия представляет собой наследственную гемолитическую анемию или приобретенную гемолитическую анемию.

[0699] Пункт BA. Способ по пункту AZ, в котором наследственная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из серповидноклеточной болезни, серповидноклеточной анемии, β-талассемии и наследственного сфероцитоза.

[0700] Пункт BC. Способ по пункту AZ, в котором приобретенная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из вторичной по отношению к инфекции, медикаментозной терапии, гематологическому злокачественному новообразованию, аутоиммунному заболеванию, гиперспленизму, механическому клапану сердца и переливанию крови.

[0701] Пункт BD. Способ по пункту BA, в котором серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом и/или секвестрацией селезенки.

[0702] Пункт BE. Способ по любому из пунктов AW-BD, в котором у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, снижение числа ретикулоцитов и уменьшение ширины распределения эритроцитов.

[0703] Пункт BF. Способ лечения и/или профилактики тромбофилического расстройства у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту 15-HEPE или композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE).

[0704] Пункт BG. Способ лечения и/или профилактики тромбофилии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0705] Пункт BH. Способ лечения и/или профилактики тромбофилии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту около до 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE составляет по меньшей мере около 90% по весу всех жирных кислот в композиции, и при этом субъект проявляет один или более из:

(a) увеличение протромбинового времени;

(b) увеличение активированного частичного тромбопластинового времени; и/или

(c) снижение концентрации фибриногена.

[0706] Пункт BI. Способ лечения и/или профилактики венозной тромбоэмболии у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0707] Пункт BJ. Способ лечения и/или профилактики артериального тромбоза у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение субъекту до около 8 г композиции, содержащей 15-HEPE, где 15-HEPE представляет собой по меньшей мере около 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

[0708] Пункт BK. Способ профилактики эмболии у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту до примерно 8 г композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE), где 15-HEPE составляет по меньшей мере примерно 90% по массе всех жирных кислот в составе.

[0709] Пункт BL. Способ по пунктам BI-BK, в котором на первом этапе происходит формирование тромба.

[0710] Пункт BM. Способ по любому из пунктов BF-BG или BI-BL, в котором у субъекта наблюдается увеличение протромбинового времени, увеличение активированного частичного тромбопластинового времени и снижение концентрации фибриногена.

[0711] Пункт BN. Способ по любому из пунктов YY-BM, в котором 15-HEPE вводят перорально.

[0712] Пункт BO. Способ по любому из пунктов YY-BN, в котором композицию вводят в 1-8 капсулах в день.

[0713] Пункт BP. Способ по любому одному из пунктов YY-BO, в котором 15-HEPE находится в форме свободной кислоты, в этерифицированной форме или в форме соли.

[0714] Пункт BQ. Способ по любому из пунктов YY-BP, в котором композиция содержит от около 1 г до около 2 г 15-HEPE.

[0715] Пункт BR. Способ по любому из пунктов YY-BQ, в котором композиция содержит около 2 г до более 15-HEPE.

[0716] Пункт BS. Способ по любому из пунктов YY-BR, в котором композиция содержит около 5 мг/кг, около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг или 15-HEPE.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для увеличения количества эритроцитов у субъекта. Предложен способ увеличения количества эритроцитов у субъекта, включающий введение субъекту 2 г или более композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE), при этом у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов по сравнению с субъектом в контрольной группе, не получающим 15-HEPE или композицию. Способ обеспечивает увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов у субъекта. 17 з.п. ф-лы, 39 ил., 37 табл., 4 пр.

1. Способ увеличения количества эритроцитов у субъекта, причем способ включает введение субъекту 2 г или более композиции, содержащей 15-гидроксиэйкозапентаеновую кислоту (15-HEPE), при этом у субъекта наблюдается увеличение количества эритроцитов, уменьшение ширины распределения эритроцитов и/или уменьшение числа ретикулоцитов по сравнению с субъектом в контрольной группе, не получающим 15-HEPE или композицию.

2. Способ по п. 1, где у субъекта присутствует нарушение эритроцитов.

3. Способ по п. 2, где нарушение эритроцитов выбрано из группы, состоящей из анемии, рака крови и дефекта коагуляции.

4. Способ по п. 3, где анемия представляет собой гемолитическую анемию.

5. Способ по п. 4, где гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из наследственной гемолитической анемии и приобретенной гемолитической анемии.

6. Способ по п. 3, где анемия представляет собой нутритивную анемию, анемию, не связанную с дефицитом железа, или их комбинацию.

7. Способ по п. 3, где рак крови выбран из группы, состоящей из лимфомы, лейкоза и миеломы.

8. Способ по п. 3, в котором дефект коагуляции выбран из группы, состоящей из тромбофилии, гемофилии, болезни фон Виллебранда и тромбоцитопении.

9. Способ по п. 2, где нарушение эритроцитов выбрано из группы, состоящей из анемии Фанкони, железодефицитной анемии, дефицита фолиевой кислоты, дефицита B12 и миелодиспластического синдрома.

10. Способ по п. 5, где наследственная гемолитическая анемия выбрана из группы, состоящей из серповидноклеточной болезни, серповидноклеточной анемии, β-талассемии и наследственного сфероцитоза.

11. Способ по п. 5, где приобретенная гемолитическая анемия развивается в результате расстройства или состояния, выбранного из группы, состоящей из состояния, вторичного по отношению к первичной инфекции, приему лекарственного препарата, гематологическому злокачественному новообразованию, аутоиммунному заболеванию, гиперспленизму, механическому искусственному сердечному клапану и переливанию крови.

12. Способ по п. 10, где серповидноклеточная болезнь и серповидноклеточная анемия связаны с серповидноклеточным кризисом, вазоокклюзионным кризисом и/или секвестрацией селезенки.

13. Способ по любому из предшествующих пунктов, где 15-HEPE составляет по меньшей мере примерно 90% по массе всех жирных кислот в композиции.

14. Способ по любому из предшествующих пунктов, где композицию вводят в количестве от 1 до 8 капсул в день.

15. Способ по любому из предшествующих пунктов, где композиция составлена так, чтобы обеспечить субъекту около 5 мг 15-HEPE на кг массы тела (мг/кг), около 50 мг/кг, около 250 мг/кг или около 500 мг/кг.

16. Способ по любому из предшествующих пунктов, где композицию, содержащую 15-HEPE, вводят перорально.

17. Способ по любому из предшествующих пунктов, где 15-HEPE находится в форме свободной кислоты, этерифицированной форме, форме конъюгата или форме соли.

18. Способ по любому из предшествующих пунктов, где этерифицированная форма 15-HEPE представляет собой метиловый эфир, этиловый эфир или их комбинацию.