ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ СИСТЕМНОГО СКЛЕРОЗА Российский патент 2025 года по МПК A61K31/454 A61P11/00 A61P17/00 

Область техники

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения системного склероза. Предшествующий уровень техники

Системный склероз (SSc) представляет собой дегенеративное заболевание, которое вызывает гиперплазию (утолщение) или огрубение (повышение жесткости) кожи, кровеносных сосудов и внутренних органов, и относится к аутоиммунному ревматическому заболеванию. Заболевание носит хронический характер и может прогрессировать в течение длительного периода времени. Хотя причина системного склероза до сих пор не выявлена, есть сообщения, что некоторые химические вещества (толуол, бензол, винилхлорид, диоксид кремния и т.д.) также связаны с появлением этого заболевания, и его комплексно диагностируют по анамнезу, с помощью физического осмотра, гистологического исследования тканей и анализа крови. Степень повреждения внутри органа можно подтвердить с помощью обследования верхних и нижних отделов желудочно-кишечного тракта, рентгенологического исследования, обследования функции легких, электрокардиограммы, электрокардиографического исследования и т.п.

Прогноз при системном склерозе, как правило, не очень плох, но может быть опасным для жизни, если склероз распространяется на легкие, почки или сердце. Системный склероз развивается в интерстициальное заболевание легких и легочную артериальную гипертензию, которая может вызвать респираторный дистресс и почечный криз, сопровождающийся тяжелой гипертензией.

Системный склероз представляет собой тип аутоиммунного заболевания, вызванного нарушением внутренней иммунной системы. Системный склероз лечат в отделении ревматологии для осуществления медицинского лечения по улучшению различных симптомов, вызванных аутоиммунным ингибированием. Системный склероз грубо классифицируют на ограниченный или диффузный кожный системный склероз в зависимости от степени инвазии кожи, но некоторые пациенты с системным склерозом демонстриуют интерстициальное заболевание легких, ассоциированное с системным склерозом (SSc-ILD), наряду с иммуномодулирующими расстройствами. Интерстициальное заболевание легких, ассоциированное с системным склерозом, чаще наблюдается преимущественно при диффузном системном склерозе. Кроме того, у 25-30% этих пациентов развивается прогрессирующее SSc-ILD, которое известно, как основная причина смерти пациентов с системным склерозом (Lancet, 2017; 390:1685-1699).

Интерстициальное заболевание легких, ассоциированное с системным склерозом, представляет собой респираторное заболевание, возникающее у пациентов с системным склерозом и требующее медицинского лечения в отделении ревматологии для осуществления лечения по улучшению состояния. Интерстициальное заболевание легких, ассоциированное с системным склерозом, тесно связано с ранней смертностью у пациентов с системным склерозом. Результат исследования в США показал, что уровень смертности вследствие фиброза легких у пациентов с системным склерозом увеличивается более чем в пять раз с 6% до 33% примерно за 20 лет, и интерстициальное заболевание легких стало наиболее частой причиной смерти, связанной с системным склерозом. Научные исследования EULAR также показали, что оно влияет на уровень смертности у более чем 35% пациентов с системным склерозом. (Steen VD, Medsger ТА. Changes in causes of death in systemic sclerosis, 1972-2002. Ann Rheum Dis. 2007; 66:940-4)

Что касается факторов риска возникновения или развития интерстициального заболевания легких у пациентов с системным склерозом, это заболевание возникает при наличии различных условий для возникновения интерстициального заболевания легких, которые до сих пор не разъяснены, таких как наличие dcSSc (диффузный кожный системный склероз), принадлежность к афроамериканцам, возраст начала заболевания (пожилой возраст), меньшая продолжительность заболевания и отсутствие антител к Scl-70/антитопоизомеразе I и антицентромерных антител. Однако ни один из этих факторов риска не является абсолютным и индукция системного склероза не обязательно приводит к интерстициальному заболеванию легких, ассоциированному с системным склерозом. Кроме того, поскольку не у всех пациентов при диагностике обнаруживаются респираторные симптомы, врачи и исследователи с энтузиазмом относятся к ранней диагностике и разработке терапевтических средств с помощью различных методов (Respiratory Research volume 20, Article number: 13 (2019)).

В частности, глядя на недавние исследования с использованием клинических образцов, интерстициальное заболевание легких, ассоциированное с системным склерозом, возникает у пациентов с системным склерозом, но оно демонстрирует значительные различия в различных цитокинах в крови и в различных биомаркерах, таких как IGFBP-1 (белок-1, связывающий инсулиноподобный фактор роста), ММР-9 (матриксная металлопротеиназа 9) и Н3.1, что, таким образом, считается показывающим, что характеристики заболевания пациентов различны. Эти исследования продолжаются в настоящее время, чтобы их можно было использовать в качестве биомаркера для диагностики интерстициального заболевания легких, ассоциированного с системным склерозом, в когорте пациентов с системным склерозом. Эти данные могут стать основанием для того, чтобы рассматривать эти два заболевания как тесно связанные, но независимые классы. Кроме того, тот факт, что ММР-7 и ММР-9 увеличены только в крови пациентов с интерстициальным заболеванием легких, ассоциированным с системным склерозом, но не пациентов с системным склерозом, не только может быть доказательством, подтверждающим причину возникновения легочного фиброза и быстрой и высокой смертности пациентов с интерстициальным заболеванием легких, ассоциированным с системным склерозом, достигающей одной трети, но также интерпретируется, как основание, позволяющее отличать интерстициальное заболевание легких, ассоциированное со склерозом, как клинически, так и патологически, ((i) Clin Epigenetics. 2020 Aug 17;12(1): 124, (ii) Sarcoidosis Vase Diffuse Lung Dis. 2015 Sep 14; 32(3):228-36, (iii) European Respiratory Journal 2021 58: 2101560).

На сегодняшний день не существует терапии системного склероза, способной остановить прогрессирование заболевания, но некоторые лекарственные средства способны облегчить определенные симптомы и уменьшить поражение органов. Нестероидные противовоспалительные препараты (NSAID) помогают облегчить боль в суставах, а блокаторы кальциевых каналов могут облегчить симптомы синдрома Рейно, но они также могут вызывать желудочно-кишечные проблемы. Кортикостероиды могут облегчить симптомы миозита, иммунодепрессанты могут облегчить воспаление легких, а лекарственные средства от высокого кровяного давления могут облегчить острое повреждение почек и повышение артериального давления, но существует ограничение в том, что это всего лишь эффект облегчения некоторых симптомов, и не сущестует лекарственных средств, облегчающих симптомы в целом.

Для интерстициального заболевания легких, ассоциированного с системным склерозом, в качестве терапевтического агента были одобрены OFEV® (Нинтеданиб) и Actemra® (Тоцилизумаб). Нинтеданиб представляет собой терапевтический агент для идиопатического легочного фиброза и, как известно, улучшает функцию легких у пациентов с легочным фиброзом. Однако нинтеданиб эффективен только в улучшении легочного фиброза, но не оказывает терапевтического эффекта на симптомы склероза кожи, и поэтому его назначают только в качестве вспомогательного лечения для улучшения функции легких у пациентов с терминальной стадией интерстициального заболевания легких, ассоциированного с системным склерозом, сопровождающейся прогрессирующим интерстициальным заболеванием легких. Тоцилизумаб представляет собой иммунодепрессант для лечения ревматоидного артрита, который, как известно, облегчает симптомы ревматоидного заболевания. Однако тоцилизумаб не обеспечивает облегчения/улучшения фиброза и, таким образом, его используют в качестве адъювантного профилактического лечения пациентов на ранней стадии интерстициального заболевания легких, ассоциированного с системным склерозом, у которых еще не наблюдается сильно выраженное ингибированием. Другими словами, ни одно из одобренных лекарственных средств не оказывает фундаментального терапевтического эффекта у пациентов с системным склерозом, а также с заболеванием легких, сопровождающим системный склероз и, таким образом, не назначают в качестве первоочередного лечения, и пациентам по-прежнему приходится полагаться на иммунодепрессанты, имеющие тяжелые побочные эффекты, такие как циклофосфамид и микофенолат.

При этом, PRS (пролил-тРНК-синтетаза) относится к семейству аминоацил-тРНК-синтетаз (ARS) и служит для активации аминокислот для синтеза белка. То есть ARS выполняет трансляционную функцию с образованием аминоациладенилата (АА-АМФ) и затем переносит активированную аминокислоту на 3'-конец соответствующей тРНК. Поскольку ARS играет ключевую роль в синтезе белка, ингибирование ARS подавляет рост и рост всех клеток. Таким образом, ARS считается многообещающей мишенью для антибиотиков или терапевтических средств в лечении заболеваний, которые должны подавлять сверхэкспрессию клеток (Nature, 2013, 494: 121-125).

PRS присутствует или функционирует в виде мультисинтетазного комплекса (MSC) в форме Глутамил-Пролил-тРНК-синтетазы (EPRS). В частности, среди различных MSC, EPRS функционирует как транскрипционный сайленсер, который подавляет выработку фактора А роста эндотелия сосудов (VEGF А), который является ключевым фактором ангиогенеза. Кроме того, сообщалось, что EPRS тесно связана с различными солидными видами рака (Nat. Rev. Cancer, 2011, 11, 708-718).

Таким образом, авторы настоящего изобретения интенсивно изучали способы предупреждения или лечения системного склероза и подтвердили, что специфический ингибитор PRS, который будет описан позже, можно с пользой применять для предупреждения или лечения системного склероза, тем самым осуществив настоящее изобретение.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая проблема

Целью настоящего изобретения является предложение фармацевтической композиции, которую можно с пользой применять для предупреждения или лечения системного склероза.

Техническое решение

Для достижения вышеуказанной цепи предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения системного фиброза, как следует ниже.

Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения системного фиброза, содержащая соединение, представленное следующей химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль.

[Химическая Формула 1]

Соединение, представленное химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль, представляет собой соединение, описанное в корейском патенте под номером 10-2084772, и, конкретно, вещество, описанное в Примере 40 описания.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть с пользой применена для предупреждения или лечения, в первую очередь, интерстициального заболевания легких, ассоциированного с системным склерозом (SSc-ILD) наряду с другими типами системного склероза. В частности, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению имеет двойной эффект, ослабляя огрубение кожи при интерстициальном заболевании легких, ассоциированном с системным склерозом, и улучшая функцию легких. Используемый здесь термин "улучшение функции легких" означает улучшение способности снабжать организм кровью, что является важной основной функцией легких. Это не тот эффект, который естественным образом следует из улучшения легочного фиброза, и может быть подтвержден по насыщению организма кислородом, независимо от индекса легочного фиброза

Используемый здесь термин "предупреждение" относится к любому действию, направленному на задержку или ингибирование возникновения, распространения или рецидива вышеуказанных заболеваний путем введения композиции по настоящему изобретению, и "лечение" относится к любому действию, направленному на улучшение или изменение симптомов вышеуказанных заболеваний в лучшую сторону путем введения композиции по настоящему изобретению.

При этом, соединение, представленное химической формулой 1 можно использовать в форме фармацевтически приемлемой соли. В качестве соли полезна соль присоединения кислоты, образованная фармацевтически приемлемой свободной кислотой. В качестве свободной кислоты можно использовать неорганическую кислоту и органическую кислоту. Примеры неорганической кислоты могут включать соляную кислоту, бромноватую кислоту, серную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Примеры органической кислоты могут включать лимонную кислоту, уксусную кислоту, молочную кислоту, малеиновую кислоту, глюконовую кислоту, метансульфоновую кислоту, янтарную кислоту, 4-толуолсульфоновую кислоту, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту или тому подобное. Предпочтительно, фармацевтически приемлемой солью соединения, представленного химической формулой 1, является гидрохлорид.

Кроме того, соединение, представленное химической формулой 1, можно получить в кристаллической форме или некристаллической форме. Когда соединение, представленное химической формулой 1, получают в кристаллической форме, оно может быть гидратированным или сольватированным. Настоящее изобретение может включать не только стехиометрические гидраты соединения, представленного химической формулой 1, но также соединения, содержащие различное количество воды. Сольваты соединения, представленного химической формулой 1, включают как стехиометрические сольваты, так и нестехиометрические сольваты.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в виде препаратов для перорального или парентерального введения в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Эти композиции могут содержать добавки, такие как фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель, в дополнение к активному ингредиенту.

Подходящие носители включают, например, физиологический раствор, полиэтиленгликоль, этанол, растительное масло и изопропилмиристат и т.п. Разбавители включают, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу и/или глицин и т.п., но не ограничиваются ими. Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут быть растворены в маслах, пропиленгликоле или других растворителях, обычно используемых в приготовлении растворов для инъекций. Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены в виде мазей или кремов для местного применения.

Фармацевтические лекарственные формы соединений по настоящему изобретению также можно использовать в форме их фармацевтически приемлемых солей или сольватов и их можно использовать отдельно или в сочетании с другими фармацевтически активными соединениями, а также в подходящей комбинации. В одном примере фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать другие активные ингредиенты, используемые для предупреждения или лечения системного фиброза. Примеры таких активных ингредиентов могут включать OFEV® (Нинтеданиб) или Actemra® (Тоцилизумаб). Наряду с этим, когда фармацевтическая композиция по настоящему изобретению дополнительно содержит другой активный ингредиент, соотношение массы соединения, представленного химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли и другого активного ингредиента предпочтительно составляет от 1:0,1 до 1:10.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для инъекций путем растворения, суспендирования или эмульгирования соединений в водных растворителях, таких как обычный физиологический раствор или 5% декстрин, или в неводных растворителях, таких как синтетические глицериды жирных кислот, сложные эфиры высших жирных кислот или пропиленгликоль. Композиции по настоящему изобретению могут включать обычные добавки, такие как солюбилизаторы, изотонические агенты, суспендирующие агенты, эмульгаторы, стабилизаторы и консерванты.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить пероральным или парентеральным путем. В зависимости от способа введения композиция по настоящему изобретению может содержать от 0,001 до 99% по массе, предпочтительно от 0,01 до 60% по массе соединения, представленного химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить млекопитающим, таким как крыса, мышь, домашнее животное, человек, различными путями. Введение можно осуществлять всеми возможными способами, например посредством перорального, ректального, внутривенного, внутримышечного, подкожного, внутриэндометриального, интрацеребровентрикулярного введения.

Полезные эффекты

Как описано выше, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть с пользой применена для предупреждения или лечения системного фиброза.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 показаны результаты, подтверждающие толщину 3D кожного органоида посредством иммунохимического окрашивания Н&Е в экспериментальном примере 1 настоящего изобретения.

На Фиг. 2 показаны результаты, подтверждающие толщину кожи в мышиной модели системной склеродермии с трансплантатом органоида кожи посредством иммунохимического окрашивания в экспериментальном примере 2 настоящего изобретения.

На Фиг. 3 показаны результаты, подтверждающие факторы фиброза коллаген I, коллаген III и aSMA кожной ткани в мышиной модели системной склеродермии с трансплантатом органоидов кожи посредством иммунохимического окрашивания в экспериментальном примере 2 настоящего изобретения.

На Фиг. 4 показан график экспериментов на мышах в экспериментальном примере 3 настоящего изобретения.

На Фиг. 5 показаны результаты изменения массы мышей в экспериментальном примере 3-1 настоящего изобретения.

На Фиг. 6 показаны результаты изменения массы легких мышей в экспериментальном примере 3-2 настоящего изобретения.

На Фиг. 7 показаны результаты оценки функции легких мышей в экспериментальном примере 3-3 настоящего изобретения.

На Фиг. 8 показаны результаты оценки толщины кожи в экспериментальном примере 3-4 настоящего изобретения.

На Фиг. 9 показаны результаты измерения содержания коллагена в организме мыши в экспериментальных примерах 3-5 настоящего изобретения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВОПЛОЩЕНИЙ

Ниже настоящее изобретение будет описано более подробно с помощью примеров. Однако эти примеры представлены только в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения.

ПРИМЕР

Следующее соединение было получено так же, как в Примере 40 корейского патента под номером 10-2084772, и далее упоминается, как 'активный ингредиент' или Пример'.

¹H NMR (500 MHz, MeOD): δ 9.67 (s, 1H). 8.02 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 4.62 (m, 2H), 3.60 (m, 1H), 3.28 (m, 1H), 2.99 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 2.08 (m, 2H), 1.99 (m, 1H), 1.78 (m, 2H), 1.54 (m, 1H)

Экспериментальный Пример 1: Подтверждение эффекта ослабления огрубения кожи в 3D-модели органоида кожи

3D-органоид кожи получали с использованием происходящих из iPSC (индуцированные плюрипотентные стволовые клетки) фибробластов от пациентов с системным дерматозом в соответствии со способом, описанным в литературе (Lancet. 2009 Nov 21, 374(9703): 1745-53). Когда 1 мкМ активного ингредиента обрабатывали раствором DMSO, с помощью иммунохимического окрашивания Н&Е было подтверждено, что толщина 3D органоида кожи была уменьшенной (Фиг. 1). Контрольную группу обрабатывали только DMSO.

Экспериментальный Пример 2: Подтверждение эффекта ослабления огрубения кожи в 3D-модели органоида кожи при т ансплантации на мышах

Ранее сконструированную 3D-модель органоида кожи, происходящую из iPSC пациента с системной склеродермией, трансплантировали мышам SCID для создания мышиной модели системной склеродермии. Мышиную кожную ткань разрезали на кусочки 1x2 см, и затем 3D-модель органоида ткани кожи пришивали к мышиной коже. Для способа трансплантации кожи ее трансплантировали мышам или т.п.с использованием метода перевязывания, используемого в клинических условиях. После наложения марли на место шва, его фиксировали нитью и перевязывали бинтом.

Активный ингредиент вводили подкожно в дозе 3 мг/кг и 10 мг/кг ежедневно в течение 2 недель в мышиную модель системной склеродермии с трансплантированным органоидом кожи. В группе отрицательного контроля (NC) физиологический раствор вводили в нормальную ткань кожи, а в группе положительного контроля (SSc) физиологический раствор вводили в трансплантированный органоид кожи с системной склеродермией. Толщину кожи, которая является основным показателем оценки системной склеродермии, измеряли посредством иммунохимического окрашивания, и результаты представлены на Фиг. 2. Как показано на Фиг. 2, было подтверждено, что активный ингредиент значительно уменьшил толщину кожной ткани (***р<0,001).

Чтобы подтвердить, снижается ли фактор фиброза в кожной ткани, пораженной системной склеродермией, под действием активного ингредиента, проводили иммунохимическое окрашивание, и результаты показаны на Фиг. 3. Как показано на Фиг. 3, было подтверждено, что активный ингредиент значительно снижает фиброзные факторы, то есть коллаген I, коллаген III и aSMA (*р<0,05, ***р<0,001).

Экспериментальный Пример 3: Подтверждение терапевтического эффекта в случае интерстициального заболевания легких, связанного со склерозом (SSc-ILD)

Мышей C57BL/6 в возрасте семи недель получали и акклиматизировали в помещении в течение 5 суток или более. Для модели интерстициального заболевания легких, связанного со склерозом, была разработана модель с введением посредством осмотического насоса. При этом, если моделирование не осуществляется с помощью осмотического насоса, то используется модель, в которой BLM следует вводить подкожно в спину подопытного животного ежедневно в течение 4 недель, потому что такие тесты могут вызывать очень сильную боль в месте введения.

Как показано на Фиг. 4, скорость введения лекарственного средства с использованием осмотического насоса составляла 0,5 мкл/час (7 суток), и размер осмотического насоса составлял 1,5 см. Место разреза зашивали, вводили осмотический насос, вводили блеомицин в течение 1 недели, затем на 10-е сутки осмотический насос удаляли. Было подтверждено, что интерстициальное заболевание легких, ассоциированное с системным склерозом, было индуцировано в мышиной модели с введением BLM в течение 1 недели, и конкретные экспериментальные группы показаны в Таблице ниже.

Экспериментальный Пример 3-1: Масса тела (%)

На основании результатов, полученных за 28 суток введения активного ингредиента (Таблица 2 и Фиг. 5), было подтверждено, что существенные изменения массы тела наблюдались, начиная с 3 мг/кг активного ингредиента, и при 30 мг/кг масса тела значительно увеличивается до р<0,01 по сравнению с носителем. Таблица 2

Экспериментальный Пример 3-2: Масса легких

Было подтверждено, что изменение массы легких имело значимую тенденцию только при 30 мг/кг, но при поправке на массу тела оно было значимым, начиная с 10 мг/кг, и при 30 мг/кг значимость увеличивалась до р<0,01 (Таблица 3 и Фиг. 6). Таблица 3

Экспериментальный Пример 3-3: Оценка функции легких (SpO₂ (%))

Такая оценка функции легких представляет собой эксперимент, который показывает терапевтический эффект этого активного вещества у пациентов с интерстициальными заболеваниями легких, ассоциированными с системным склерозом, и является наиболее прямым и важным показателем оценки, оказывающим наибольшее влияние на симптомы и качество жизни пациентов с интерстициальным заболеванием легких, ассоциированным с системным склерозом, в отличие от общего эффекта облегчения фиброза легких. Это эксперимент, который может сразу показать эффект улучшения легочной функции в животной модели интерстициального заболевания легких, связанного с системным склерозом, посредством измерения концентрации кислорода в организме.

На 21-е сутки его измеряли с помощью устройства для измерения SpO₂ (Berry, ветеринарный пульсоксиметр) на брюшной стороне тела мыши, и результаты показаны в Таблице 5 и на Фиг. 3.

Как показано на Фиг. 7, значимые результаты были получены, начиная с 10 мг/кг активного ингредиента, а 30 мг/кг активного ингредиента продемонстрировали более высокое насыщение кислородом (р<0.001) по сравнению с носителем. Кроме того, было показано, что группа введения активного ингредиента (30 мг/кг) продемонстрировала скорость восстановления насыщения кислородом, сопоставимую с группой введения нинтеданиба (60 мг/кг), которая является контрольной группой.

Экспериментальный Пример 3-4: Оценка толщины кожи

На 28-е сутки кожную ткань извлекали из мышей и подвергали воздействию Н&Е и трихрома Массона (МТ окрашивание). Толщину кожи на 10 участках измеряли случайным образом по изображению на фотографии, на которое распространялось окрашивание (распространялось с минимальным интервалом 200 300 мкм). Всю площадь фотографии измеряли максимально равномерно, а участки, где окрашивание ткани было повреждено, исключали из измерения. Результаты показаны на Фиг. 8 и в Таблице 4.

Как показано на Фиг. 8, очевидно, что в группе BLM коллаж хорошо заполнялся и индуцировался даже в той области, где помимо дермы кожи должен располагаться жировой слой. Было подтверждено, что значимые результаты были получены, начиная с 10 мг/кг активного ингредиента, а при 30 мг/кг активного ингредиента наблюдались очень значимые результаты (Р<0,0001 или менее). Кроме того, при введении активного компонента целиком, плотность коллагена в коже снижалась, судя по низкой степени окрашивания МТ. В частности, было подтверждено, что толщина кожи существенно не уменьшалась при ведении 3 мг/кг активного ингредиента, но плотность коллагена в коже демонстрировала тенденцию к снижению. В частности, было подтверждено, что введение 10 мг/кг активного ингредиента продемонстрировало превосходный эффект улучшения толщины кожи, превосходящий эффект, полученный с использованием 60 мг/кг нинтеданиба.

Экспериментальный Пример 3-6: Измерение содержания коллагена в организме

Была предпринята попытка измерить количество гидроксипролина у мыши и таким образом опосредованно измерить содержание коллагена. Анализ выполняли с использованием INSOLUBLE Collagen Assay (Biocolor, S2000), подробности приведены ниже.

Сначала 10 мг замороженной кожной ткани измельчали с помощью 100 мкл реагента для фрагментации. Добавляли 100 мкл 37% НСl и инкубировали при 65°С в течение 3 часов. Содержимое пробирки встряхивали с 30-минутными интервалами, чтобы способствовать распаду тканей. Центрифугирование проводили при 12000 об/мин в течение 10 минут. После центрифугирования его переносили в пробирку объемом 1,5 мл. Из образца объемом от 10 до 100 мкл отбирали 50 мкл, добавляли дистиллированную воду и образец готовили так, чтобы он соответствовал 100 мкл.

К 100 мкл приготовленного образца добавляли 1 мл красителя и перемешивали в течение 30 минут. Смесь центрифугировали при 12000 об/мин в течение 10 минут, и затем переносили в новую пробирку. Краситель удаляли с помощью 750 мкл ледяного кислотно-солевого промывочного реагента. После центрифугирования при 12000 об/мин в течение 10 минут его переносили в новую пробирку. Содержимое пробирки смешивали с красителем, связывающим коллаген, с помощью вихревого смесителя, и краситель, связывающий коллаген, растворяли в течение 10 минут для завершения подготовки к измерению (измерение следовало закончить в течение 2-3 часов). Крышку пробирки закрывали до тех пор, когда она была готова к измерению поглощения.

200 мкл каждого образца переносили в отдельную лунку 96-микролуночного планшета и измеряли поглощение при 560 нм. Количество гидроксипролина было представлено значением соотношения относительно количества в нормальной группе, и результаты показаны в Таблице 5 и на Фиг. 9.

В результате анализа в группе BLM, было подтверждено, что количество гидроксипролина в коже увеличилось в два или более раз по сравнению с группой физиологического раствора, и таким образом моделирование было выполнено хорошо. Кроме того, существенные результаты были показаны, начиная с 10 мг/кг активного ингредиента, а использование 30 мг/кг активного ингредиента показало очень значимый результат (Р<0,001 или менее).

Как можно заключить из приведенных выше экспериментальных результатов, активный ингредиент по настоящему изобретению демонстрировал два совершенно разных эффекта, то есть терапевтический эффект на системный склероз и улучшение ингибирования функции легких при интерстициальном заболевании легких, ассоциированном с системным склерозом. Такие двойные эффекты являются непредсказуемой частью для любого из терапевтических эффектов и считаются характеристикой активного вещества по настоящему изобретению.

Изобретение относится к области фармацевтики и медицины и касается лечения интерстициального заболевания легких, связанного с системным склерозом. Предлагается применение соединения, представленного следующей химической формулой 1

Химическая формула 1

,

или его фармацевтически приемлемой соли для предупреждения или лечения интерстициального заболевания легких, связанного с системным склерозом (SSc-ILD). Указанное применение обеспечивает двойной эффект, ослабляя огрубение кожи при интерстициальном заболевании легких, связанном с системным склерозом, и улучшая легочную функцию. 2 з.п. ф-лы, 9 ил, 5 табл., 3 пр.

1. Применение соединения, представленного следующей химической формулой 1

Химическая формула 1

,

или его фармацевтически приемлемой соли для предупреждения или лечения интерстициального заболевания легких, связанного с системным склерозом (SSc-ILD).

2. Применение по п. 1, где соединение обеспечивает двойной эффект, ослабляя огрубение кожи при интерстициальном заболевании легких, связанном с системным склерозом, и улучшая легочную функцию.

3. Применение по п. 1, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой гидрохлорид.