ПРИМЕНЕНИЕ НАСТОЙКИ ШАЛФЕЯ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ MUCOR MUCEDO Российский патент 2025 года по МПК A61K36/537 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, и касается средства для профилактики и лечения грибковых инфекций, вызванных возбудителем Mucor mucedo в виде настойки из листьев шалфея лекарственного.

Уровень техники

В официальной медицине препараты из листьев шалфея лекарственного используется в качестве антимикробного, противовоспалительного и отхаркивающего средств при лечении заболевание верхних дыхательных путей (1, 2, 5). Данные фармакологические эффекты обусловлены содержанием в листьях комплекса биологически активных соединений, таких как эфирное масло, дубильные вещества, флаваноиды и дитерпены (3, 4, 6).

На данный момент препараты на основе листьев шалфея лекарственного на фармацевтическом рынке Российской Федерации представлены лекарственным растительным сырьём для приготовления настоя, пастилками, таблетками для рассасывания и спиртовым раствором Сальвин-ВИФ. За рубежом листья шалфея лекарственного тоже применяются в медицине. На европейском рынке представлены средства: настойка (1:10) и жидкий экстракт (1:1) на 70% этиловым спирте, сухой экстракт (4-7:1), полученный экстракцией водой, жидкий экстракт (1:3,5-5) на 31,5% этиловым спирте, жидкий экстракт (1:4-5) на 50% этиловым спирте, жидкий экстракт (1;4-6), растворитель для экстракции ликерное вино: 96% этиловый спирт (38,25: 61,75 м/м), сухой экстракт из свежих листьев (1:17-18) на 68% этиловым спирте (10). В Британской фармакопее из листьев шалфея лекарственного готовят настойку (1:10) на 70% этиловым спирте (9).

В России в ликероводочной промышленности из листьев шалфея лекарственного готовят настойку горькую (8).

В настоящий момент существует проблема осложнений грибковых инфекций, вызываемым грибковым штаммом: Mucor mucedo (1,7).

Кроме того, согласно результатом анализа ассортимента зарегистрированных препаратов, на фармацевтических рынке РФ на данный момент среди лекарственных средств и БАДов отсутствует настойка с противогрибковым эффектом к грибковым инфекциям в ЛОР-органах.

Известен спиртовой раствор «Сальвин-ВИФ», применяемый как противовоспалительное и противомикробное средство в стоматологической практике (2).

Недостатками данного аналога является отсутствие в показаниях к применению противогрибковой активности в отношении грибковых возбудителей из-за того, что не изучался данный аспект для препарата. В настоящее время «Сальвин-ВИФ» не выпускается и не осуществляется продажа.

Известна горькая настойка, применяемая в ликероводочной промышленности в целях органолептических свойств (8).

Недостатками данного примера являются отсутствие исследований, доказывающих фармакологического действия, также метод приготовления настойки не является фармакопейным Государственной Фармакопеи Российской Федерации.

В качестве прототипа был выбран настой (1:10) из листьев шалфея лекарственного, применяемый в медицине на территории Российской Федерации для полоскания как противовоспалительное и противомикробное средство (2,3).

Недостатками прототипа являются отсутствие готовой лекарственной формы и необходимость приготовления самим потребителем (пациентом), а также срок годности настоя из листьев шалфея лекарственного, который ограничивается 2 сутками. Кроме того, для настоя из листьев шалфея лекарственного не проводились исследования на противогрибковое действие в отношении грибковых возбудителей, поэтому отсутствует доказанный на данный фармакологический эффект в показаниях к применению (2,3).

Раскрытие изобретения

Целью изобретения является разработка средства, обладающего противогрибковым действием в отношении Mucor mucedo. Для лечения и профилактики грибковых инфекций возможно проведение гигиенических мероприятий по орошению слизистой полости рта и глотки разработанным средством.

В связи с этим техническим результатом является применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% (об.), в качестве противогрибкового средства в отношении Mucor mucedo.

Осуществление изобретения

Настойка шалфея лекарственного изготовляется из листьев шалфея лекарственного в соотношении 1:5 на 30%-70% этиловым спирте любым технологическим методом в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации XIV издания (ГФ РФ XIV) (3).

Настойка представляет собой жидкость темно-бурого цвета с выраженным пряно-ароматичным запахом, слегка горьковатым травянистым вкусом, обладающая противобактериальным, противовоспалительным и противогрибковым действиями. Преимуществом данной настойки относительно прототипов является возможность ее применения с целью лечения и профилактики при грибковых инфекциях, вызванных возбудителем Mucor mucedo, в частности, в полости рта и области глотки.

Экспериментально по изучению противогрибкового действия препарата проводили в клинико-диагностической лаборатории Клиник СамГМУ методом двойных серийных разведений в бульоне в соответствии с методиками, описанными в ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы In vitro. Определяли минимальную ингибирующую концентрацию суммы дитерпеновых кислот к грибковому клиническому штамму Mucor mucedo.

Метод двойных серийных разведений по сравнению с диффузионными методами позволяет качественно оценить наличие антигрибкового эффекта путем визуальной оценки в сравнении со стандартом и определения минимальной ингибирующей концентрации изучаемого образца, которая обеспечивает замедление роста исследуемых штаммов микроорганизмов (11). Инкубацию проводили в атмосферном воздухе при температуре 35°С в течение 24 часа.

Сравнивали настой из листьев шалфея лекарственного, настойки из листьев шалфея лекарственного в соответствии 1:5 на 30%, 70% этиловых спиртах, изготовленные в соответственно с ГФ РФ XIV издания методом дробной перколяцией, а также этиловые спирты концентрациями 30% и 70% Водное извлечение не показало противогрибкового действия.

На фиг. 1 представлена диаграмма, демонстрирующая противогрибковое действие извлечений шалфея лекарственного со спиртами по отношению к Mucor mucedo, где: А – настойка на 70% спирте, Б – настойка на 30% спирте, В – 70% спирт, Г – 30% спирт.

Ранее для листьев шалфея лекарственного доказано, что противомикробное и противовоспалительное действия обусловлены за счет карнозоловой кислоты (4), поэтому МИК рассчитывали по сумме дитерпеновых кислот. Для этого проводили пробоподготовку по методу Зилфикаровым по выделению данных веществ (5).

На фиг. 2 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настоя из листьев шалфея лекарственного.

На фиг. 3 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настойки 30% из листьев шалфея лекарственного.

На фиг. 4 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настойки 70% из листьев шалфея лекарственного.

Определение велось при 285 нм с использование литературных данных коэффициента экстинкции карнозоловой кислоты составляющего 40,92 (5) по формуле:

– оптическая плотность испытуемого раствора;

V _п – объём аликвоты, мл;

– коэффициента экстинкции;

α – точная навеска анализируемого образца, г;

V – объём растворителя, мл;

l – толщина слоя кюветы, см.

Результаты приведены в табл.:

Таблица 1. Динамика изменения суммы дитерпенов в извлечениях в зависимости от кратности разведения

Объект Кратность разведения 0 1 2 3 4 5 6 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 Настой из листьев шалфея лекарственного 0,17% 0,09% 0,04% 0,02% 0,01% 0,005% 0,002% Настойка (1:5) из листьев шалфея лекарственного на 30% этиловым спирте 0,99% 0,49% 0,24% 0,12% 0,06% 0,03% 0,015% Настойка (1:5) из листьев шалфея лекарственного на 70% этиловым спирте 0,33% 0,17% 0,08% 0,04% 0,02% 0,01% 0,005%

Преимущества разработанной настойки перед конкурентами

1. Доказан противогрибковый эффект, который обусловлен с большим содержанием действующих веществ;

2. Готовая форма применение;

3. Срок годности превышает 2 суток;

4. Готовится любым методом в соответствии ГФ РФ XIV издания.

Изобретение промышленно применимо и может использоваться в оториноларингологии для предотвращения лечения и профилактики грибковых инфекций.

Список литературы

1. Бикбаева, Л.И. Микотическая инфекция у больных с туберкулёзом органов дыхания / Л.И. Бикбаева // VII Всероссийская (81-й Итоговая) студенческая научная конференция "Студенческая наука и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты", посвященная 90-летию СНО СамГМУ: сборник материалов, Самара, 10 апреля 2013 года / Под редакцией Г.П. Котельникова и В.А. Куркина. – Самара: ООО «Офорт», 2013. – С. 43-44. – EDN WEUWDD.

2. Государственный реестр лекарственных средств. [Электронный ресурс] – Режим доступа: http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx.

3. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV издание / МЗ РФ. – Москва, 2015. – Том 4. – С. 6228-6236.

4. Зилфикаров И.Н. Дитерпены и полифенолы шалфея лекарственного: перспективы медицинского применения (обзор литературы) // Вестник Санкт-Петербургского университета. Медицина. 2007. №3. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/diterpeny-i-polifenoly-shalfeya-lekarstvennogo-perspektivy-meditsinskogo-primeneniya-obzor-literatury (дата обращения: 18.01.2024).

5. Зилфикаров, И.Н. Определение дитерпеновых кислот в сырье и препаратах шалфея лекарственного / И.Н. Зилфикаров, А.В. Жилин // Фармация. – 2007. – № 2. – С. 7-9. – EDN KWLFAV.

6. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов) / Куркин В.А. - Самара: ООО «Офорт» СамГМУ. - 2019. – С. 361-366.

7. Мукормикоз – опасная и реальная грибковая суперинфекция в период пандемии TOVID-19 / С.А. Бурова, А.В. Таганов, А.А. Каштанова, Ю.В. Горбачева // Успехи медицинской микологии. – 2022. – Т. 23. – С. 51-54. – EDN MBHFNZ.

8. Патент № 2544964 C1 Российская Федерация, МПК C12G 3/06. способ приготовления настойки горькой: № 2013155286/10: заявл. 13.12.2013: опубл. 20.03.2015 / О. В. Шайдуллова. – EDN QKGJAS.

9. British Pharmacopoeia. Volume III: Herbal Drugs and Herbal Drug Preparations. Oak Bark, 2009.

10. European Pharmacopoeia 11.0. Edition - Европейская фармакопея 11-ое изд-ие. 2022. European Pharmacopoeia - 11th edition published July 2022 URL: http://pharmeuropa.edqm.eu (дата обращения: 25.12.2023).

11. Golus J., Sawicki R., Widelski J., Ginalska G. The agar microdilution method – a new method for antimicrobial susceptibility testing for essential oils and plant extracts //Appl. Microbiol. – 2016. – Vol. 121, No.5. – P. 1291–1299. DOI: 10.1111/jam.13253.

Изобретение относится к противогрибковым средствам. Предложено применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% в соотношении сырье:экстрагент 1:5, в качестве противогрибкового средства в отношении Mucor mucedo в полости рта и области глотки. Изобретение расширяет арсенал противогрибковых средств в отношении Mucor mucedo. 4 ил., 1 табл.

Применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% в соотношении сырье:экстрагент 1:5, в качестве противогрибкового средства в отношении Mucor mucedo в полости рта и области глотки.