ПРИМЕНЕНИЕ НАСТОЙКИ ШАЛФЕЯ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ SCOPULARIOPSIS BREVICAULIS Российский патент 2025 года по МПК A61K36/537 A61P31/10 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, и касается средства для профилактики и лечения грибковых инфекций, вызванных возбудителем Scopulariopsis brevicaulis в виде настойки из листьев шалфея лекарственного.

Уровень техники

В официальной медицине препараты из листьев шалфея лекарственного используется в качестве антимикробного, противовоспалительного и отхаркивающего средств при лечении заболевание верхних дыхательных путей (1, 2, 5). Данные фармакологические эффекты обусловлены содержанием в листьях комплекса биологически активных соединений, таких как эфирное масло, дубильные вещества, флавоноиды и дитерпены (2, 3, 5).

На данный момент препараты на основе листьев шалфея лекарственного на фармацевтическом рынке Российской Федерации представлены лекарственным растительным сырьём для приготовления настоя, пастилками, таблетками для рассасывания и спиртовым раствором Сальвин-ВИФ. За рубежом листья шалфея лекарственного тоже применяются в медицине. На европейском рынке представлены средства: настойка (1:10) и жидкий экстракт (1:1) на 70% этиловом спирте, сухой экстракт (4-7:1), полученный экстракцией водой, жидкий экстракт (1:3,5-5) на 31,5% этиловом спирте, жидкий экстракт (1:4-5) на 50% этиловом спирте, жидкий экстракт (1;4-6), растворитель для экстракции ликерное вино: 96% этиловый спирт (38,25: 61,75 м/м), сухой экстракт из свежих листьев (1:17-18) на 68% этиловом спирте (8). В Британской фармакопее из листьев шалфея лекарственного готовят настойку (1:10) на 70% этиловом спирте (7).

В России в ликероводочной промышленности из листьев шалфея лекарственного готовят настойку горькую (6).

В настоящий момент существует проблема осложнений грибковых инфекций, вызываемым грибковым штаммом: Scopulariopsis brevicaulis (9,11) в ЛОР-практике.

Кроме того, согласно результатам анализа ассортимента зарегистрированных препаратов, на фармацевтических рынке РФ на данный момент среди лекарственных средств и БАДов отсутствует настойка с противогрибковым эффектом к грибковым инфекциям в ЛОР-органах.

Известен спиртовой раствор «Сальвин-ВИФ», применяемый как противовоспалительное и противомикробное средство в стоматологической практике (1).

Недостатками данного аналога является отсутствие в показаниях к применению противогрибковой активности в отношении грибковых возбудителей из-за того, что не изучался данный аспект для препарата. В настоящее время «Сальвин-ВИФ» не выпускается и не осуществляется продажа.

Известна горькая настойка, применяемая в ликероводочной промышленности в целях органолептических свойств (6).

Недостатками данного примера являются отсутствие исследований, доказывающих фармакологического действия, также метод приготовления настойки не является фармакопейным Государственной Фармакопеи Российской Федерации.

В качестве прототипа был выбран настой (1:10) из листьев шалфея лекарственного, применяемый в медицине на территории Российской Федерации для полоскания как противовоспалительное и противомикробное средство (1,2).

Недостатками прототипа являются отсутствие готовой лекарственной формы и необходимость приготовления самим потребителем (пациентом), а также срок годности настоя из листьев шалфея лекарственного, который ограничивается 2 сутками. Кроме того, для настоя из листьев шалфея лекарственного не проводились исследования на противогрибковое действие в отношении грибковых возбудителей, поэтому отсутствует доказанный на данный момент фармакологический эффект в показаниях к применению (1,2).

Раскрытие изобретения

Целью изобретения является разработка средства, обладающего противогрибковым действием в отношении Scopulariopsis brevicaulis. Для лечения и профилактики грибковых инфекций возможно проведение гигиенических мероприятий по орошению слизистой полости рта и глотки разработанным средством.

В связи с этим техническим результатом является применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% (об.), в качестве противогрибкового средства в отношении Scopulariopsis brevicaulis.

Осуществление изобретения

Настойка шалфея лекарственного изготовляется из листьев шалфея лекарственного в соотношении 1:5 на 30%-70% этиловом спирте любым технологическим методом в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации XIV издания (ГФ РФ XIV) (2).

Настойка представляет собой жидкость темно-бурого цвета с выраженным пряно-ароматичным запахом, слегка горьковатым травянистым вкусом, обладающая противобактериальным, противовоспалительным и противогрибковым действиями. Преимуществом данной настойки относительно прототипов является возможность ее применения с целью лечения и профилактики при грибковых инфекциях, вызванных возбудителем Scopulariopsis brevicaulis, в частности, в полости рта и области глотки.

Экспериментально по изучению противогрибкового действия препарата проводили в клинико-диагностической лаборатории Клиник СамГМУ методом двойных серийных разведений в бульоне в соответствии с методиками, описанными в ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro». Определяли минимальную ингибирующую концентрацию суммы дитерпеновых кислот к грибковому клиническому штамму Scopulariopsis brevicaulis.

Метод двойных серийных разведений по сравнению с диффузионными методами позволяет качественно оценить наличие антигрибкового эффекта путем визуальной оценки в сравнении со стандартом и определения минимальной ингибирующей концентрации изучаемого образца, которая обеспечивает замедление роста исследуемых штаммов микроорганизмов (10). Инкубацию проводили в атмосферном воздухе при температуре 35 °С в течение 24 часа.

Сравнивали настой из листьев шалфея лекарственного, настойки из листьев шалфея лекарственного в соответствии 1:5 на 30%, 70% этиловых спиртах, изготовленные в соответственно с ГФ РФ XIV издания методом дробной перколяцией, а также этиловые спирты концентрациями 30% и 70% Водное извлечение не показало противогрибкового действия.

На фиг. 1 представлена диаграмма, демонстрирующая противогрибковое действие извлечений шалфея лекарственного со спиртами по отношению к Scopulariopsis brevicaulis, где: А – настойка на 70% спирте, Б – настойка на 30% спирте, В – 70% спирт, Г – 30% спирт.

Ранее для листьев шалфея лекарственного доказано, что противомикробное и противовоспалительное действия обусловлены за счет карнозоловой кислоты (3), поэтому МИК рассчитывали по сумме дитерпеновых кислот. Для этого проводили пробоподготовку по методу Зилфикарова по выделению данных веществ (4).

На фиг. 2 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настоя из листьев шалфея лекарственного.

На фиг. 3 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настойки 30% из листьев шалфея лекарственного.

На фиг. 4 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настойки 70% из листьев шалфея лекарственного.

Определение велось при 285 нм с использованием литературных данных коэффициента экстинкции карнозоловой кислоты, составляющего 40,92 (4) по формуле:

– оптическая плотность испытуемого раствора;

V _п – объём аликвоты, мл;

– коэффициент экстинкции;

a – точная навеска анализируемого образца, г;

V – объём растворителя, мл;

толщина слоя кюветы, см.

Результаты приведены в таблице:

Таблица 1. Динамика изменения суммы дитерпенов в извлечениях в зависимости от кратности разведения

Объект Кратность разведения 0 1 2 3 4 5 6 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 Настой из листьев шалфея лекарственного 0,17% 0,09% 0,04% 0,02% 0,01% 0,005% 0,002% Настойка (1:5) из листьев шалфея лекарственного на 30% этиловом спирте 0,99% 0,49% 0,24% 0,12% 0,06% 0,03% 0,015% Настойка (1:5) из листьев шалфея лекарственного на 70% этиловом спирте 0,33% 0,17% 0,08% 0,04% 0,02% 0,01% 0,005%

Преимущества разработанной настойки перед конкурентами:

1. Доказан противогрибковый эффект, который обусловлен большим содержанием действующих веществ;

2. Готовая форма применения;

3. Срок годности превышает 2 суток;

4. Готовится любым методом в соответствии ГФ РФ XIV издания.

Изобретение промышленно применимо и может использоваться в оториноларингологии для предотвращения лечения и профилактики грибковых инфекций.

Список литературы

1. Государственный реестр лекарственных средств. [Электронный ресурс] – Режим доступа: http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx.

2. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV издание / МЗ РФ. – Москва, 2015. – Том 4. – С. 6228 - 6236.

3. Зилфикаров И.Н. Дитерпены и полифенолы шалфея лекарственного: перспективы медицинского применения (обзор литературы) // Вестник Санкт-Петербургского университета. Медицина. 2007. №3. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/diterpeny-i-polifenoly-shalfeya-lekarstvennogo-perspektivy-meditsinskogo-primeneniya-obzor-literatury (дата обращения: 18.01.2024)

4. Зилфикаров, И.Н. Определение дитерпеновых кислот в сырье и препаратах шалфея лекарственного / И.Н. Зилфикаров, А.В. Жилин // Фармация. – 2007. – № 2. – С. 7-9. – EDN KWLFAV.

5. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов) / Куркин В.А. - Самара: ООО «Офорт» СамГМУ. - 2019. – С. 361-366.

6. Патент № 2544964 C1, Российская Федерация, МПК C12G 3/06. Способ приготовления настойки горькой : № 2013155286/10 : заявл. 13.12.2013 : опубл. 20.03.2015 / О. В. Шайдуллова. – EDN QKGJAS.

7. British Pharmacopoeia. Volume III: Herbal Drugs and Herbal Drug Preparations. Oak Bark, 2009.

8. European Pharmacopoeia 11.0. Edition - Европейская фармакопея 11-е изд-ие. 2022. European Pharmacopoeia - 11^th edition published July 2022 URL: http://pharmeuropa.edqm.eu (дата обращения: 25.12.2023).

9. Chen SH, Chang TY, Kuo CY, et al. Successful treatment of COVID-associated fungal infection due to Scopulariopsis and Aspergillus in a girl with acute lymphoblastic leukemia. Pediatr Blood Cancer. 2023;70(5):e30218. doi:10.1002/pbc.30218

10. Golus J., Sawicki R., Widelski J., Ginalska G. The agar microdilution method – a new method for antimicrobial susceptibility testing for essential oils and plant extracts //Appl. Microbiol. – 2016. – Vol. 121, No.5. – P. 1291–1299. DOI: 10.1111/jam.13253.

11. Yang Q, Wei J, Chen Z. Fatal bronchial invasion of Scopulariopsis brevicaulis in an acute monocytic leukemia patient. Diagn Microbiol Infect Dis. 2012 Aug;73(4):369-71. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2012.04.010. Epub 2012 May 25. PMID: 22633337.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению настойки из листьев шалфея лекарственного в качестве противогрибкового средства в отношении Scopulariopsis brevicaulis. Применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% в соотношении сырье : экстрагент 1:5, в качестве противогрибкового средства в отношении Scopulariopsis brevicaulis. Вышеописанная применяемая настойка обладает эффективным противогрибковым действием в отношении Scopulariopsis brevicaulis. 4 ил., 1 табл.

Применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% в соотношении сырье : экстрагент 1:5, в качестве противогрибкового средства в отношении Scopulariopsis brevicaulis.