ПРИМЕНЕНИЕ НАСТОЙКИ ШАЛФЕЯ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ШТАММОВ РОДА ASPERGILLUS Российский патент 2025 года по МПК A61K36/537 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, и касается средства для профилактики и лечения грибковых инфекций, вызванных возбудителями: Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger в виде настойки из листьев шалфея лекарственного.

Уровень техники

В официальной медицине препараты из листьев шалфея лекарственного используется в качестве антимикробного, противовоспалительного и отхаркивающего средств при лечении заболевание верхних дыхательных путей (1, 2, 5). Данные фармакологические эффекты обусловлены содержанием в листьях комплекса биологически активных соединений, таких как эфирное масло, дубильные вещества, флаваноиды и дитерпены (2, 3, 5).

На данный момент препараты на основе листьев шалфея лекарственного на фармацевтическом рынке Российской Федерации представлены лекарственным растительным сырьём для приготовления настоя, пастилками, таблетками для рассасывания и спиртовым раствором Сальвин-ВИФ. За рубежом листья шалфея лекарственного тоже применяются в медицине. На европейском рынке представлены средства: настойка (1:10) и жидкий экстракт (1:1) на 70% этиловым спирте, сухой экстракт (4-7:1), полученный экстракцией водой, жидкий экстракт (1:3,5-5) на 31,5% этиловым спирте, жидкий экстракт (1:4-5) на 50% этиловым спирте, жидкий экстракт (1;4-6), растворитель для экстракции ликерное вино: 96% этиловый спирт (38,25: 61,75 м/м), сухой экстракт из свежих листьев (1:17-18) на 68% этиловым спирте (9). В Британской фармакопее из листьев шалфея лекарственного готовят настойку (1:10) на 70% этиловым спирте (8).

В России в ликероводочной промышленности из листьев шалфея лекарственного готовят настойку горькую (6).

В настоящий момент существует проблема осложнений грибковых инфекций, вызываемых грибковыми штаммами: Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger (7). Ранее для спиртового экстракта на 80% этаноле из шалфея лекарственного был доказан противогрибковый эффект в отношении, Aspergillus flavus и Aspergillus fumigatus, а также его отсутствие к Aspergillus niger (11). Однако на остальные извлечения из листьев шалфея лекарственного клинические штаммы не проводились исследование.

Кроме того, согласно результатом анализа ассортимента зарегистрированных препаратов, на фармацевтических рынке РФ на данный момент среди лекарственных средств и БАДов отсутствует настойка с противогрибковым эффектом к грибковым инфекциям в ЛОР-органах.

Известен спиртовой раствор «Сальвин-ВИФ», применяемый как противовоспалительное и противомикробное средство в стоматологической практике (1).

Недостатками данного аналога является отсутствие в показаниях к применению противогрибковой активности в отношении грибковых возбудителей из-за того, что не изучался данный аспект для препарата. В настоящее время «Сальвин-ВИФ» не выпускается и не осуществляется продажа.

Известна горькая настойка, применяемая в ликероводочной промышленности в целях органолептических свойств (6).

Недостатками данного примера являются отсутствие исследований, доказывающих фармакологического действия, также метод приготовления настойки не является фармакопейным Государственной Фармакопеи Российской Федерации.

В качестве прототипа был выбран настой (1:10) из листьев шалфея лекарственного, применяемый в медицине на территории Российской Федерации для полоскания как противовоспалительное и противомикробное средство (1,2).

Недостатками прототипа являются отсутствие готовой лекарственной формы и необходимость приготовления самим потребителем (пациентом), а также срок годности настоя из листьев шалфея лекарственного, который ограничивается 2 сутками. Кроме того, для настоя из листьев шалфея лекарственного не проводились исследования на противогрибковое действие в отношении грибковых возбудителей, поэтому отсутствует показание на данный фармакологический эффект в показаниях к применению (1,2).

Раскрытие изобретения

Целью изобретения является разработка средства, обладающего противогрибковым действием в отношении Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger. Для лечения и профилактики грибковых инфекций возможно проведение гигиенических мероприятий по орошению слизистой полости рта и глотки разработанным средством.

В связи с этим техническим результатом является применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30%-70% (об.), в качестве противогрибкового средства в отношении Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger.

Осуществление изобретения

Настойка шалфея лекарственного изготовляется из листьев шалфея лекарственного в соотношении 1:5 на 30%-70% этиловым спирте любым технологическим методом в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации XIV издания (ГФ РФ XIV) (2).

Настойка представляет собой жидкость темно-бурого цвета с выраженным пряно-ароматичным запахом, слегка горьковатым травянистым вкусом, обладающая противобактериальным, противовоспалительным и противогрибковым действиями. Преимуществом данной настойки относительно прототипов является возможность ее применения с целью лечения и профилактики при грибковых инфекциях, вызванных возбудителями Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, в частности, в полости рта и области глотки.

Экспериментально по изучению противогрибкового действия препарата проводили в клинико-диагностической лаборатории Клиник СамГМУ методом двойных серийных разведений в бульоне в соответствии с методиками, описанными в ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы In vitro. Определяли минимальную ингибирующую концентрацию суммы дитерпеновых кислот к грибковым клиническим штаммам: Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger.

Метод двойных серийных разведений по сравнению с диффузионными методами позволяет качественно оценить наличие антигрибкового эффекта путем визуальной оценки в сравнении со стандартом и определения минимальной ингибирующей концентрации изучаемого образца, которая обеспечивает замедление роста исследуемых штаммов микроорганизмов (10). Инкубацию проводили в атмосферном воздухе при температуре 35 °С в течение 24 часа.

Сравнивали настой из листьев шалфея лекарственного, настойки из листьев шалфея лекарственного в соответствии 1:5 на 30%, 70% этиловых спиртах, изготовленные в соответственно с ГФ РФ XIV издания методом дробной перколяцией, а также этиловые спирты концентрациями 30% и 70% Водное извлечение не показало противогрибкового действия.

На фиг. 1 представлена диаграмма, демонстрирующая противогрибковое действие извлечений шалфея лекарственного со спиртами по отношению к Aspergillus, где: I – A. flavus, II – A. fumigatus, III - A. niger; А – настойка на 70% спирте, Б – настойка на 30% спирте, В –70% спирт, Г – 30% спирт.

Ранее для листьев шалфея лекарственного доказано, что противомикробное и противовоспалительное действия обусловлены за счет карнозоловой кислоты (3), поэтому МИК рассчитывали по сумме дитерпеновых кислот. Для этого проводили пробподготовку по методу Зилфикаровым по выделению данных веществ (4).

На фиг. 2 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настоя из листьев шалфея лекарственного.

На фиг. 3 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настойки 30% из листьев шалфея лекарственного.

На фиг. 4 представлена спектральная кривая поглощения суммы дитерпенов настойки 70% из листьев шалфея лекарственного.

Определение велось при 285 нм с использование литературных данных коэффициента экстинкции карнозоловой кислоты составляющего 40,92 (4) по формуле:

– оптическая плотность испытуемого раствора;

V _п – объём аликвоты, мл;

– коэффициента экстинкции;

a – точная навеска анализируемого образца, г;

V – объём растворителя, мл;

l – толщина слоя кюветы, см.

Результаты приведены в таблице:

Таблица 1. Динамика изменения суммы дитерпенов в извлечениях в зависимости от кратности разведения

Объект Кратность разведения 0 1 2 3 4 5 6 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 Настой из листьев шалфея лекарственного 0,17% 0,09% 0,04% 0,02% 0,01% 0,005% 0,002% Настойка (1:5) из листьев шалфея лекарственного на 30% этиловым спирте 0,99% 0,49% 0,24% 0,12% 0,06% 0,03% 0,015% Настойка (1:5) из листьев шалфея лекарственного на 70% этиловым спирте 0,33% 0,17% 0,08% 0,04% 0,02% 0,01% 0,005%

Преимущества разработанной настойки перед конкурентами

1. Доказан противогрибковый эффект, который обусловлен с большим содержанием действующих веществ;

2. Готовая форма применение;

3. Срок годности превышает 2 суток;

4. Готовится любым методом в соответствии ГФ РФ XIV издания.

Список литературы:

1. Государственный реестр лекарственных средств. [Электронный ресурс] – Режим доступа: http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx.

2. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV издание / МЗ РФ. – Москва, 2015. – Том 4. – С. 6228 - 6236.

3. Зилфикаров И. Н. Дитерпены и полифенолы шалфея лекарственного: перспективы медицинского применения (обзор литературы) // Вестник Санкт-Петербургского университета. Медицина. 2007. №3. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/diterpeny-i-polifenoly-shalfeya-lekarstvennogo-perspektivy-meditsinskogo-primeneniya-obzor-literatury (дата обращения: 18.01.2024)

4. Зилфикаров, И. Н. Определение дитерпеновых кислот в сырье и препаратах шалфея лекарственного / И. Н. Зилфикаров, А. В. Жилин // Фармация. – 2007. – № 2. – С. 7-9. – EDN KWLFAV.

5. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов) / Куркин В.А. - Самара: ООО «Офорт» СамГМУ. - 2019. – С. 361-366

6. Патент № 2544964 C1 Российская Федерация, МПК C12G 3/06. способ приготовления настойки горькой : № 2013155286/10 : заявл. 13.12.2013 : опубл. 20.03.2015 / О. В. Шайдуллова. – EDN QKGJAS.

7. Честнова Т.В., Подшибякина А.С. Ассоциация SARS-COV-2 с бактериальными, вирусными и грибковыми патогенами как возможная причина тяжелых форм COVID-19 (Обзор литературы) // ВНМТ. 2021. №3. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/assotsiatsiya-sars-cov-2-s-bakterialnymi-virusnymi-i-gribkovymi-patogenami-kak-vozmozhnaya-prichina-tyazhelyh-form-covid-19-obzor (дата обращения: 18.01.2024).

8. British Pharmacopoeia. Volume III: Herbal Drugs and Herbal Drug Preparations. Oak Bark, 2009.

9. European Pharmacopoeia 11.0. Edition - Европейская фармакопея 11-ое изд-ие. 2022. European Pharmacopoeia - 11th edition published July 2022 URL: http://pharmeuropa.edqm.eu (дата обращения: 25.12.2023).

10. Golus J., Sawicki R., Widelski J., Ginalska G. The agar microdilution method – a new method for antimicrobial susceptibility testing for essential oils and plant extracts //Appl. Microbiol. – 2016. – Vol. 121, No.5. – P. 1291–1299. DOI: 10.1111/jam.13253.

11. Rashidi, Ahmad & Mousavi, Bita & Rahmani, Mohammad & Rezaee, Mohammadali & Hosaini, Werya & Motaharinia, Yousef & Davari, Behroz & Zamini, Ghasem. (2011). Evaluation of antifungal effect of Lavandula officinalis, Salvia officinalis L., Sumac, Glycyrrhiza glabra and Althoae officinalis extracts on Aspergillus Niger, Aspergillus Fumigatus and Aspergillus Flavus species. Journal of medicinal plant research. 6. 309-313. 10.5897/JMPR11.1458.

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии. Описано применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30-70%, но за исключением концентраций 31,5% и 50%, и в соотношении сырье:экстрагент 1:5, в качестве противогрибкового средства в отношении Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger для лечения и профилактики грибковых инфекций на слизистой полости рта и глотки. Изобретение позволяет использовать настойку шалфея для лечения и профилактики грибковых инфекций, вызванных Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, на слизистой полости рта и глотки. 4 ил., 1 табл.

Применение настойки из листьев шалфея лекарственного, полученной на этиловом спирте концентрации 30-70%, но за исключением концентраций 31,5% и 50%, и в соотношении сырье:экстрагент 1:5, в качестве противогрибкового средства в отношении Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger для лечения и профилактики грибковых инфекций на слизистой полости рта и глотки.