Амид 2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(4-хлорфенил)этилиден)-1-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты, обладающий противораковой активностью в отношении меланомы Российский патент 2025 года по МПК C07D409/04 A61K31/4025 A61P35/00 

Изобретение относится к области органической и медицинской химии, к новым биологически активным веществам класса замещенных 5-амино-3-пирролинонов, а именно к амиду 2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(4-хлорфенил)этилиден)-1-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы:

который обладает противораковой активностью в отношении меланомы, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного средства с цитотоксическими свойствами и низкой токсичностью.

Ближайшим аналогом по структуре для заявляемого соединения является этиловый эфир (E)-2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(п-толил)этилиден)-1-(3-(этоксикарбонил)-5,6,7,8-тетрагидро-4H-циклогепта[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты 2, обладающий противораковой активностью [European Journal of Medicinal Chemistry, 2023, Vol. 254, pp. 115325] формулы:

Приведены данные по противораковой активности.

Соединение ЛД₅₀ мг/кг Противораковая активность (μM) IC₅₀ (μM)
B16-F10 IC₅₀ (μM)
MEF NF2 2 >1500 25.23 >100

Эталоном сравнения биологической активности был выбран Вемурафениб формулы:

который был одобрен FDA для лечения метастатической меланомы и является аналогом по действию [Geoffrey K. FDA approval summary: vemurafenib for treatment of unresectable or metastatic melanoma with the BRAFV600E mutation / K. Geoffrey // Clin Cancer Res. - 2014. - Vol. 20(19). - P. 4994-5000. - [Electronical resource]. - URL: DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-14-0776], [HIGHLIGHTS OF PRESCRIBING INFORMATION // ZELBORAF® (vemurafenib) tablet for oral use Initial U.S. Approval: 2011. - [Electronical resource]. - URL: https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2017/202429s012lbl.pdf].

Задачей изобретения является поиск в ряду производных 5-амино-3-пирролинонов веществ с выраженной противораковой активностью в отношении меланомы и низкой токсичностью.

Технический результат достигается химическим синтезом амида 2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(4-хлорфенил)этилиден)-1-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты, который обладает противораковой активностью в отношении меланомы и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.

Заявляемое соединение 1 синтезируют взаимодействием 2-((2-оксо-5-(4-хлорфенил)фуран-3(2H)-илиден)амино)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-3-карбонитрила с амидом цианоуксусной кислоты в присутствии диизопропилэтиламина (DIPEA). Реакция протекает в дихлорметане при комнатной температуре и перемешивании в течение 40 минут, с последующим выделением целевых продуктов известными методами по схеме:

Однако из патентной и научно-технической литературы не выявлено применение соединения 1 в качестве средств с цитотоксическими свойствами в отношении меланомы.

Изобретение иллюстрируется примерами исследования фармакологических свойств.

Пример 1. Получение соединения 1.

К раствору 368 мг (0.001 моль) 2-((2-оксо-5-(4-хлорфенил)фуран-3(2H)-илиден)амино)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-3-карбонитрила в 5 мл безводного дихлорметана прибавляли 84 мг (0.001 моль) амида цианоуксусной кислоты, затем к полученной смеси добавляли 129 мг (0.001 моль) диизопропилэтиламина, полученный раствор перемешивали 40 минут при комнатной температуре. Смесь охлаждали до 0°С, выпавший осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали.

Выход 389 мг (86%), желтые кристаллы, т. пл. >400 °С (толуол). Спектр ЯМР ¹H (ДМСО-d₆) δ, м.д.: 1.84 (м, 4H, CH₂), 2.78 (м, 2H, CH₂), 2.89 (м, 2H, CH₂), 6.47 (с, 1H, NH₂), 6.82 (с, 1H, =CH), 7.57 (м, 2H, Ar), 7.63 (уш. с, 2H, CONH₂), 7.95 (м, 2H, Ar), 9.17 (с, 1H, NH₂). Найдено, %: C, 58.35; H, 3.79; N, 12.36; S, 7.05. C₂₂H₁₇ClN₄O₃S. Вычислено, %: C, 58.34; H, 3.78; N, 12.37; S, 7.08.

Полученное соединение 1 представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, при нагревании в толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане.

Пример 2. Для оценки противоопухолевой активности соединения 1 использовался стандартный тест с использованием резазурина [Lancaster MV, Fields RD (1996) Antibiotic and cytotoxic drug susceptibility assays using resazurin and poisoning agents. U.S. Patent No. 5,501,959]. Клеточная линия B16-F10 культивировалась с использованием среды αМЕМ (Биолот) + 10% ФБС (фетальной бычьей сыворотки) (Биолот), линия MEF NF2 - ДМЕМ (Биолот) + 10% ФБС при температуре 37°С в увлажненной атмосфере 5% CO₂ (СО₂ инкубатор с воздушной рубашкой Panasonic (Sanyo) MCO-18AC (MCO-18AC-PE)). Пассажировали дважды в неделю (при 80% конкуренции) при плотности 4×10⁴ клеток на см².

В 96 луночный планшет (TC-treated Culture Microplate, Corning) заносили клетки в размере 10 тыс. кл. на лунку + 100 мкл среды. Перед добавлением к клеточным культурам все тестируемые соединения растворяли в ДМСО (500 мкл - 10 мМ); затем разводили в клеточной среде (40 мкл в среде 960 мкл) и получали раствор 400 мкМ. После этого в лунки с клетками (B16-F10 и MEF NF2) добавляли несколько концентраций тестируемых соединений (5, 10, 15, 20 мкМ). Спустя 24 часа среду заменяли раствором среды + 10% резазурина (Resazurin sodium salt, Sigma-Aldrich) и инкубировали 4 часа. В качестве положительного контроля использовали лунки с клетками без внесения вещества. В качестве отрицательного контроля - лунки без клеток с добавлением среды с резазурином. После инкубации среду с резазурином из всех лунок переносили на чистый планшет и оценивали на спектрофотометре на длинах волн 570 нм и 600 нм. Жизнеспособность оценивали по стандартным формулам.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г. Н. Першина [Першин Г. Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 109-117 (1971)]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет > 1500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977. - с. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Противораковая активность соединения 1, соединения 2 и препарата сравнения.

Соединение ЛД₅₀ мг/кг Противораковая активность (μM) IC₅₀ (μM)
B16-F10 IC₅₀ (μM)
MEF NF2 1 >1500 16.57 >100 2 >1500 25.23 >100 Вемурафениб >2500 14.32 -

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 проявляет выраженную противораковую активность на уровне препарата сравнения (Вемурафениб), используемого в медицинской практике по отношению к терапии меланомы. Таким образом, амид 2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(4-хлорфенил)этилиден)-1-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты проявляет выраженную биологическую активность в сравнении с используемым в медицине препаратом сравнения, что делает возможным его использование для создания новых лекарственных средств целенаправленного действия с низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.

Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а именно к амиду 2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(4-хлорфенил)этилиден)-1-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы 1. Технический результат - амид формулы 1, обладающий противораковой активностью в отношении меланомы и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей. 2 табл., 3 пр.

Амид 2-амино-4-оксо-5-(2-оксо-2-(4-хлорфенил)этилиден)-1-(3-циано-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты формулы:

.