Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а именно к применению биологически активных веществ класса замещенных пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидинов, а именно к замещённым (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионам 1 а-г общей формулы:
1: R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = COOEt (a);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = CN (б);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CONH2 (в);
R = 4-MeOC6H5, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CN (г),
в медицине в качестве лекарственного средства с цитотоксической активностью и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.
Эталоном сравнения биологической активности был выбран Вемурафениб формулы:
который был одобрен FDA для лечения метастатической меланомы и является аналогом по действию [Geoffrey K. FDA approval summary: vemurafenib for treatment of unresectable or metastatic melanoma with the BRAFV600E mutation / K. Geoffrey // Clin Cancer Res. - 2014. - Vol. 20(19). - P. 4994-5000. - [Electronical resource]. - URL: DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-14-0776], [HIGHLIGHTS OF PRESCRIBING INFORMATION // ZELBORAF® (vemurafenib) tablet for oral use Initial U.S. Approval: 2011. - [Electronical resource]. - URL: https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2017/202429s012lbl.pdf].
Из уровня техники известны структурные формулы соединений 1 а-г [One-Pot Synthesis of Thieno[3,2-e]pyrrolo[1,2-a]pyrimidine Derivative Scaffold: A Valuable Source of PARP-1 Inhibitors / S.A. Shipilovskikh, A.E. Rubtsov. // J. Org. Chem. - 2019. - Vol. 84, 24. - P. 15788-15796. - DOI: 10.1021/acs.joc.9b00711], где осуществлён способ получения соединений 1 а-г взаимодействием замещенных производных 3-тиофенилимино-3Н-фуран-2-онов с производными цианоуксусной кислоты в присутствии Et3N в среде безводного толуола при 100°С с последующим выделением целевых продуктов известными методами по схеме:
1: R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = COOEt (a);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = CN (б);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CONH2 (в);
R = 4-MeOC6H5, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CN (г).
Однако из патентной и научно-технической литературы не выявлено применение соединений 1 а-г в качестве средств с цитотоксическими свойствами в терапии меланомы легких.
Задачей изобретения является расширение арсенала цитотоксических средств в терапии онкологических заболеваний, в частности разработка средств, обладающих выраженной противораковой активностью по отношению к меланоме легких и низкой токсичностью.
Технический результат достигается применением замещённых (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионов, которые обладают противораковой активностью и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.
Технический результат: возможность применения замещенных пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидинов, а именно, замещённых (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионов, в качестве средств, обладающих выраженной противораковой активностью, а также низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.
Изобретение иллюстрируется примерами исследования фармакологических свойств.
Пример 1. Получение соединения 1а. К раствору 4.09 г (0.01 моль) этилового эфира (E)-2-[(2-оксо-5-фенилфуран-3(2Н)-илиден)амино]-4,5,6,7,8,9-гексагидроциклоокта[b]тиофен-3-карбоновой кислоты в 15 мл безводного толуола прибавляли 1.13 г (0.01 моль) этилового эфира цианоуксусной кислоты, затем к полученной смеси добавляли 2.12 г (1.4 моль/л) Et3N, полученный раствор нагревали до 100°С и выдерживали в течение 60 мин при интенсивном перемешивании. Смесь охлаждали до 20°С, выпавший осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали.
Выход 80 %, т. пл. 215-216°С (ацетонитрил). Спектр ЯМР 1Н (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 8.02 (м, 2H), 7.70 (м, 1H), 7.55 (м, 2H), 7.06 (м, 1H), 3.31 (м, 2H), 2.90 (м, 2H), 1.95 (м, 2H), 1.75 (м, 4H). Спектр ЯМР 13C (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 191.8, 154.7, 142.0, 139.2, 136.7, 135.4, 135.0, 135.0, 133.8, 129.1, 129.1, 118.8, 117.6, 97.4, 88.5, 31.9, 29.1, 27.4, 27.2, 26.6. Найдено, %: C 63.73; H 4.44; N 9.70; S 7.38; C23H19N3O4S. Вычислено, %: C 63.73; H 4.42; N 9.69; S 7.40.
Полученное соединение 1а представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане. Соединение 1а получено по описанной ранее методике [One-Pot Synthesis of Thieno[3,2-e]pyrrolo[1,2-a]pyrimidine Derivative Scaffold: A Valuable Source of PARP-1 Inhibitors / S.A. Shipilovskikh, A.E. Rubtsov. // J. Org. Chem. - 2019. - Vol. 84, 24. - P. 15788-15796. - DOI: 10.1021/acs.joc.9b00711]
Пример 2. Получение соединения 1б. К раствору 4.09 г (0.01 моль) этилового эфира (E)-2-[(2-оксо-5-фенилфуран-3(2Н)-илиден)амино]-4,5,6,7,8,9-гексагидроциклоокта[b]тиофен-3-карбоновой кислоты в 15 мл безводного толуола прибавляли 0.66 г (0.01 моль) малонодинитрила, затем к полученной смеси добавляли 2.12 г (1.4 моль/л) Et3N, полученный раствор нагревали до 100°С и выдерживали в течение 60 мин при интенсивном перемешивании. Смесь охлаждали до 20°С, выпавший осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали.
Выход 91 %, т. пл. 234-235°С (ацетонитрил). Спектр ЯМР 1Н (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 7.91 (м, 2H), 7.04 (м, 3H), 3.86 (с, 3H), 3.24 (м, 2H), 2.86 (м, 2H), 1.88 (м, 2H), 1.65 (м, 4H). Спектр ЯМР 13C (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 189.5, 176.4, 163.6, 159.0, 156.3, 142.5, 137.3, 133.0, 131.9, 130.9, 129.0, 118.4, 116.6, 113.9, 112.3, 99.4, 69.2, 55.6, 31.5, 28.1, 27.2, 26.4. Найдено, %: C 64.70; H 4.33; N 9.42; S 7.21; C24H19N3O4S. Вычислено, %: C 64.71; H 4.30; N 9.43; S 7.20.
Полученное соединение 1б представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане. Соединение 1б получено по описанной ранее методике [One-Pot Synthesis of Thieno[3,2-e]pyrrolo[1,2-a]pyrimidine Derivative Scaffold: A Valuable Source of PARP-1 Inhibitors / S.A. Shipilovskikh, A.E. Rubtsov. // J. Org. Chem. - 2019. - Vol. 84, 24. - P. 15788-15796. - DOI: 10.1021/acs.joc.9b00711].
Пример 3. Получение соединения 1а. К раствору 3.95 г (0.01 моль) этилового эфира (E)-2-[(2-оксо-5-фенилфуран-3(2Н)-илиден)амино]-5,6,7,8-тетрагидро-4H-циклогепта[b]тиофен-3-карбоновой кислоты в 15 мл безводного толуола прибавляли 0.84 г (0.01 моль) амида цианоуксусной кислоты, затем к полученной смеси добавляли 2.12 г (1.4 моль/л) Et3N, полученный раствор нагревали до 100°С и выдерживали в течение 60 мин при интенсивном перемешивании. Смесь охлаждали до 20°С, выпавший осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали. Выход 82 %, т. пл. 215-216°С (ацетонитрил). Спектр ЯМР 1Н (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 10.82 (c, 1H), 8.01 (м, 2H), 7.60 (с, 1H), 7.48 (м, 2H), 6.85 (с, 1H), 4.31 (кв, J = 7.1 Гц, 2H), 3.14 (м, 2H), 2.91 (м, 2H), 1.76 (м, 4H), 1.53 (м, 2H), 1.41 (м, 2H), 1.32 (т, J = 7.1 Гц, 3H). Спектр ЯМР 13C (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 190.7, 173.3, 163.8, 160.3, 153.3, 142.5, 135.7, 135.6, 134.1, 133.3, 131.2, 128.3, 128.2, 117.2, 116.1, 87.0, 60.1, 31.4, 29.0, 25.9, 25.3, 25.1, 24.1, 13.8. Найдено, %: C 65.52; H 5.10; N 5.89; S 6.72; C26H24N2O5S. Вычислено, %: C 65.53; H 5.08; N 5.88; S 6.73.
Полученное соединение 1в представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане.
Пример 4. Получение соединения 1г. К раствору 4.25 г (0.01 моль) этилового эфира (E)-2-[(2-оксо-5-(4-метоксифенил)-3(2Н)-илиден)амино]-5,6,7,8-тетрагидро-4H-циклогепта[b]тиофен-3-карбоновой кислоты в 15 мл безводного толуола прибавляли 0.66 г (0.01 моль) малонодинитрила, затем к полученной смеси добавляли 2.12 г (1.4 моль/л) Et3N, полученный раствор нагревали до 100°С и выдерживали в течение 60 мин при интенсивном перемешивании. Смесь охлаждали до 20°С, выпавший осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали.
Выход 89 %, т. пл. 240-241 °С (ацетонитрил). Спектр ЯМР 1Н (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 7.97 (м, 2H), 7.66 (м, 1H), 7.53 (м, 2H), 7.10 (с, 1H), 3.08 (м, 2H), 2.91 (м, 2H), 1.68 (м, 4H), 1.48 (м, 2H), 1.36 (м, 2H). Спектр ЯМР 13C (CDCl3 + СF3COOH), δ, м. д.: 191.2, 176.4, 159.4, 155.9, 143.6, 136.1, 134.7, 133.5, 130.9, 128.5, 118.0, 116.3, 112.2, 95.5, 69.4, 31.4, 29.2, 25.5, 25.3, 25.2, 24.0. Найдено, %: C 67.10; H 4.44; N 9.80; S 7.47; C24H19N3O3S. Вычислено, %: C 67.12; H 4.46; N 9.78; S 7.46.
Полученное соединение 1г представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, толуоле, ацетоне, не растворимое в воде и гексане. Соединение 1а получено по описанной ранее методике [One-Pot Synthesis of Thieno[3,2-e]pyrrolo[1,2-a]pyrimidine Derivative Scaffold: A Valuable Source of PARP-1 Inhibitors / S.A. Shipilovskikh, A.E. Rubtsov. // J. Org. Chem. - 2019. - Vol. 84, 24. - P. 15788-15796. - DOI: 10.1021/acs.joc.9b00711]
Пример 5. Для оценки противоопухолевой активности соединений использовался стандартный тест с использованием резазурина [US5501959, опубл. 1996-03-26]. Клеточная линия B16-F10 культивировалась с использованием среды αМЕМ (Биолот) + 10% ФБС (фетальной бычьей сыворотки) (Биолот), линия MEF NF2 - ДМЕМ (Биолот) +10% ФБС при температуре 37°С в увлажненной атмосфере 5% CO2 (СО2 инкубатор с воздушной рубашкой Panasonic (Sanyo) MCO-18AC (MCO-18AC-PE)). Пассажировали дважды в неделю (при 80% конкуренции) при плотности 4 x 104 клеток на см2.
В 96 луночный планшет (TC-treated Culture Microplate, Corning) заносили клетки в размере 10 тыс. кл. на лунку + 100 мкл среды. Перед добавлением к клеточным культурам все тестируемые соединения растворяли в ДМСО (500 мкл - 10 мМ); затем разводили в клеточной среде (40 мкл в среде 960 мкл) и получали раствор 400 мкМ. После этого в лунки с клетками (B16-F10 и MEF NF2) добавляли несколько концентраций тестируемых соединений (5, 10, 15, 20 мкM). Спустя 24 часа среду заменяли раствором среды + 10% резазурин (Resazurin sodium salt, Sigma-Aldrich) и инкубировали 4 часа. В качестве положительного контроля использовали лунки с клетками без внесения вещества. В качестве отрицательного контроля - лунки без клеток с добавлением среды с резазурином. После инкубации среду с резазурином из всех лунок переносили на чистый планшет и оценивали на спектрофотометре на длинах волн 570 нм и 600 нм. Жизнеспособность оценивали по стандартным формулам.
Пример 6. Острую токсичность (ЛД50, мг/мл) соединений 1 а-в определяли по методу Г. Н. Першина [Методы экспериментальной химиотерапии : (Практ. руководство) / Под ред. проф. Г. Н. Першина. - М. : Медгиз, 1959. - С. 109-117]. Соединения 1 а-в вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемых соединений 1 а-в ЛД50 составляет > 1500 мг/кг.
Согласно классификации токсичности препаратов соединения 1 а-в относятся к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. - М., 1977. - С. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице 1:
B16-F10
MEF NF2
Как видно из таблицы, заявляемые соединения 1 а-г проявляют выраженную противораковую активность, причем структуры 1б,г, превышают таковую препарата сравнения, используемого в медицинской практике по отношению к терапии меланомы легких. Таким образом, замещённые (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионы 1 а-г проявляют противораковую активность, причем соединения 1б,г более активны по сравнению с используемым в медицине препаратом сравнения, что делает возможным их использование для создания новых лекарственных средств целенаправленного действия с низкой токсичностью.
Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а именно к применению замещённых (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионам общей формулы 1 а-г в медицине в качестве противораковых средств в терапии меланомы легких. Технический результат: возможность применения замещенных (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионов в качестве эффективных противораковых средств в терапии меланомы легких, обладающих низкой токсичностью в отношении здоровых тканей. 1 табл., 6 пр.
1: R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = COOEt (a);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = CN (б);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CONH2 (в);
R = 4-MeOC6H5, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CN (г).
Применение замещённых (E)-8-(2-оксо-2-R-этилиден)-2-R1-3-R2-6-R3-пирроло[1,2-a]тиено[3,2-e]пиримидин-4,7(5H,8H)-дионов общей формулы 1 а-г
1: R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = COOEt (a);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)6-, R3 = CN (б);
R = Ph, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CONH2 (в);
R = 4-MeOC6H5, R1+R2 = -(CH2)5-, R3 = CN (г),
в качестве противораковых средств в терапии меланомы легких.
| S.A | |||
| SHIPILOVSKIKH, A.E | |||
| RUBTSOV, J | |||
| Org | |||
| Chem., vol | |||
| Способ приготовления сернистого красителя защитного цвета | 1921 |
|
SU84A1 |
| Ножницы в машине для изготовления картонных неробок | 1928 |
|
SU15788A1 |
| НОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ, ПРОЯВЛЯЮЩЕЕ ИНГИБИТОРНУЮ АКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ PARP | 2012 |
|
RU2606635C2 |
| Плечевой упор для стрельбы из ручного оружия | 1926 |
|
SU5889A1 |
| Паровозная машина с изменяемым ходом поршня | 1928 |
|
SU23044A1 |
