Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса замещенных 2-амино-4-арил-4-оксобутановых кислот, а именно к 1-амино-6-(4-метоксифенил)-1,6-диоксо-2-циано-4-((3-(этоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)амино)гекса-2,4-диен-3-олату натрия формулы:
который обладает противораковой активностью в терапии рака молочной железы, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственных средств с цитотоксическими свойствами и низкой токсичностью.
Эталоном сравнения биологической активности был выбран Карбоплатин формулы:
который был одобрен FDA для лечения рака молочной железы и является аналогом по действию [Łakomska I. Cytotoxic malonate platinum(II) complexes with 1,2,4-triazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives: structural characterization and mechanism of the suppression of tumor cell growth / J Inorg Biochem. – 2014 Dec; 141:188-197. – [Electronical resource]. – URL: DOI: 10.1016/j.jinorgbio.2014.08.005.],[ Carboplatin (NSC 241240) . – [Electronical resource]. – URL: https://www.selleckchem.com/products/Carboplatin.html], [Clark CC. Enhancement of synthetic lethality via combinations of ABT-888, a PARP inhibitor, and carboplatin in vitro and in vivo using BRCA1 and BRCA2 isogenic models / Mol Cancer Ther. – 2012 Sep;11(9):1948-58. – [Electronical resource]. – URL: DOI: 10.1158/1535-7163.MCT-11-0597].
Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных производных 2-амино-4-диоксобутановых кислот веществ с выраженной противораковой активностью в терапии рака молочной железы и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей для расширения арсенала цитотоксических средств.
Технический результат достигается химическим синтезом 1-амино-6-(4-метоксифенил)-1,6-диоксо-2-циано-4-((3-(этоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)амино)гекса-2,4-диен-3-олата натрия, обладающего противораковой активностью в терапии рака молочной железы и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.
Заявляемое соединение 1 синтезируют взаимодействием этилового эфира 2-((5-(4-метоксифенил)-2-оксофуран-3(2H)-илиден)амино)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-3-карбоновой кислоты с амидом циануксусной кислоты в присутствии 1 эквивалента карбоната натрия. Реакция протекает в диоксане при перемешивании и температуре 50°С в течение 3 часов с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме:
Однако из патентной и научно-технической литературы не выявлено применение соединения 1 в качестве средств с цитотоксическими свойствами в терапии рака молочной железы.
Изобретение иллюстрируется примерами получения соединения и исследования фармакологических свойств.
Пример 1. Получение соединения 1: к раствору 3,80 г (0,01 моль) этилового эфира 2-((5-(4-метоксифенил)-2-оксофуран-3(2H)-илиден)амино)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-3-карбоновой кислоты в 50 мл безводного диоксана прибавляли 0,89 г (0,01 моль) амида циануксусной кислоты и 1,06 г (0,01 моль) карбоната натрия. Полученную смесь выдерживали 3 часа при температуре 50°С при интенсивном перемешивании. Затем смесь охлаждали до 0°С, выпавший осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали.
Выход 4,76 г (98%), желтые кристаллы, т. пл. 184-185°С (диоксан).
Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-d6), δ, м.д.: 1.35 (т, 3H, J = 7.1 Гц, СН3), 1.72 (м, 4H, 2CH2), 2.54 (м, 2H, CH2), 2.69 (м, 2H, CH2), 3.83 (с, 3H, ОCH3), 4.34 (кв, 2H, J = 7.1 Гц, OCH2), 5.90 (с, 1H, C=CH), 7.00 (м, 2H, Hаром), 7.27 (уш. с, 1H, NH2), 7.66 (уш. с, 1H, NH2), 7.86 (м, 2H, Hаром), 13.31 (с, 1Н, NH).
Найдено, %: C, 58.10; H, 4.72; N, 8.09; S, 6.15. C25H24N3NaO6S.
Вычислено, %: C, 58.02; H, 4.67; N, 8.12; S, 6.19.
Полученное соединение 1 представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, воде, при нагревании в ацетоне, спиртах, ацетонитриле, не растворимое в гексане.
Пример 2. Острую токсичность (ЛД50, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г. Н. Першина [Першин Г. Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 109-117 (1971)]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД50 составляет > 1500 мг/кг.
Согласно классификации токсичности препаратов соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977. – с. 196].
Пример 3. Для оценки противоопухолевой активности соединения 1 использовался стандартный тест с использованием резазурина [Lancaster MV, Fields RD (1996) Antibiotic and cytotoxic drug susceptibility assays using resazurin and poisoning agents. U.S. Patent No. 5,501,959]. Клеточная линия 4T1 культивировалась с использованием среды RPMI (Биолот) + 10% ФБС (фетальной бычьей сыворотки) (Биолот), линия MEF NF2 – ДМЕМ (Биолот) +10% ФБС при температуре 37°С в увлажненной атмосфере 5% CO2 (СО2 инкубатор с воздушной рубашкой Panasonic (Sanyo) MCO-18AC (MCO-18AC-PE)). Пассажировали дважды в неделю (при 80% конкуренции) при плотности 4 × 104 клеток на см2.
В 96 луночный планшет (TC-treated Culture Microplate, Corning) вносили клетки в количестве 10 тыс. кл. на лунку + 100 мкл среды. Перед добавлением к клеточным культурам все тестируемые соединения растворяли в ДМСО (500 мкл - 10 мМ); затем разводили в клеточной среде (40 мкл в среде 960 мкл), содержащей 10 мкМ D-глюкозы (C6H12O6, 400 мг/мл или 2,22 мМ) и получали раствор 400 мкМ. После этого в лунки с клетками (4T1 и MEF NF2) добавляли несколько концентраций тестируемых соединений (0.8, 1.6, 3.2, 6.3, 12.5, 25, 50 мкM). Спустя 48 часов среду заменяли раствором среды + 10% резазурина (Resazurin sodium salt, Sigma-Aldrich) и инкубировали 4 часа. В качестве положительного контроля использовали лунки с клетками без внесения вещества. В качестве отрицательного контроля – лунки без клеток с добавлением среды с резазурином. После инкубации среду с резазурином из всех лунок переносили на чистый планшет и оценивали на спектрофотометре на длинах волн 570 нм и 600 нм. Жизнеспособность оценивали по стандартным формулам.
Противораковая активность соединения 1.
4T1
MEF NF2
Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 проявляет выраженную противораковую активность и превышает таковую у препарата сравнения, используемого в медицинской практике по отношению к терапии рака молочной железы более чем в 50 раз. В то же самое время предложенное соединение 1 является более чем в 12 раз менее токсичным, чем препарат сравнения. Таким образом, 1-амино-6-(4-метоксифенил)-1,6-диоксо-2-циано-4-((3-(этоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)амино)гекса-2,4-диен-3-олат натрия проявляет более высокую активность по сравнению с используемым в медицине препаратом сравнения, что делает возможным его использование для создания новых лекарственных средств целенаправленного действия с низкой токсичностью в отношении здоровых тканей.
Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а именно раскрывается 1-амино-6-(4-метоксифенил)-1,6-диоксо-2-циано-4-((3-(этоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)амино)гекса-2,4-диен-3-олат натрия формулы 1, обладающий противораковой активностью в терапии рака молочной железы, что позволяет использовать его в медицине в качестве лекарственного средства с цитотоксическими свойствами и низкой токсичностью в отношении здоровых тканей. 1 табл., 3 пр. 
1-амино-6-(4-метоксифенил)-1,6-диоксо-2-циано-4-((3-(этоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиофен-2-ил)амино)гекса-2,4-диен-3-олат натрия формулы:
,
обладающий противораковым действием при терапии рака молочной железы.
