Способ лечения распространенного рака молочной железы в терминальной стадии прогрессии Российский патент 2025 года по МПК A61K31/675 A61K31/711 A61P35/00 A61K48/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для лечения больных с распространенным раком молочной железы (РМЖ) в терминальной стадии прогрессии.

Известен способ RU 195295 С1, который может быть использован при лечении молочной железы III-IV стадии, в котором предложено из подвздошных костей производить забор 150-200 мл костно-мозговой взвеси во флакон, содержащий 50-70 мл глюгицира, к полученной взвеси добавляют химиопрепараты: доксорубицин 50-70 мг, циклофосфан 800-1000 мг, 5-фторурацил 750-1000 мг, инкубируют при t=36,6-37°C в течение 40 мин и вводят внутривенно капельно, при этом повторное введение проводят на 8-й день.

Однако недостаточная эффективность и ограниченность области применения этого способа связана с тем, что способ позволяет уменьшить размер опухоли, но не приводит к элиминации столовых опухолевых клеток РМЖ.

Известен также способ лечения РМЖ RU 2695136, который осуществляется посредством адресной доставки солей таллия с помощью поверхностно-модифицированных вирионов фага MS2, содержащих циклический лиганд iRGD, имеющий высокую аффинность к интегрину avb3 и ковалентно связанный с оболочкой, и сердцевину с геномной РНК с солями таллия.

Основным недостатком данного способа является возможность доставки ядовитых солей талия в другие не опухолевые клетки организма, несущие интегрин avb3.

Кроме того, известен способ лечения местнораспространенного рака молочной железы RU 2177349 С1, заключающийся в проведении системной и регионарной химиотерапии с эмболизацией артерии, питающей опухоль, и последующем выполнении лучевой терапии непосредственно после химиоэмболизации, причем такое химиолучевое лечение проводят на фоне введения больному преднизолона, а после проведения такого курса лечения далее для поддержания полученного эффекта осуществляют традиционную химиотерапии.

Недостатком этого способа лечения является относительно низкая эффективность, поскольку воздействие осуществляется на местнораспространенные очаги РМЖ, не охватывая отдаленные метастатические образования, кроме того, эмболизация только одной питающей опухоль артерии не является ограничением в снабжении опухоли энергией.

Помимо указанных выше, известен способ лечения местнораспространенного рака молочной железы, отягощенного распадом опухоли RU 2176922 С1, который заключается в проведении дезинтоксикационной, кровоостанавливающей, антибактериальной и общеукрепляющей терапии, после чего на фоне преднизолона осуществляют совместное химиолучевое лечение.

Недостатком этого способа лечения является относительно низкая эффективность, поскольку воздействие также осуществляется на местнораспространенные очаги РМЖ, не охватывая отдаленные метастатические образования, и не используется при терминальных стадиях прогрессии заболевания.

Наиболее близким по технической сущности к предложенному является способ лечения местно-распространенного и диссеминированного рака молочной железы (стадии III-IV) цитостатическими средствами RU 2178294 С2, включающий аутогемохимиотерапию с внутривенным капельным введением противоопухолевых химиопрепаратов, причем что первым этапом лечения производят 4-7 введений паратуморально и в мягкие ткани на пути лимфооттока из молочной железы препаратов: 10 мл 0,5% раствора рихлокаина, 5-10 мг метотрексата, 3 мл раствора диклофенака на одно введение, раздельно, через день, затем без перерыва в лечении осуществляют введение противоопухолевых химиопрепаратов в стандартных курсовых дозах на аутокрови в сочетании с 50 мг рихлокаина на аутокрови 3 раза в неделю раздельно, последовательно в течение двух недель, далее курсы аутогемохимиотерапии в сочетании с введением рихлокаина повторяют после двухнедельного перерыва без предварительного введения препаратов паратуморально и в мягкие ткани на пути лимфооттока из молочной железы, где у неоперабельных больных.

Недостатком такого способа является относительно низкая эффективность, поскольку предложенная техника не позволяет таргетно элиминировать стволовые опухолевые клетки.

Задачей изобретения является разработка способа лечения рака, распространенного рака молочной железы, в терминальной стадии прогрессии, отличающегося повышенной эффективностью.

Требуемый технический результат заключается в повышении эффективности лечения распространенного рака молочной железы в терминальной стадии прогрессии.

Поставленная задача решается, а требуемый технический результат достигается тем, что способ лечения распространенного рака молочной железы в терминальной стадии прогрессии, основанный на введении пациенту цитостатика циклофосфамида и сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК, согласно изобретению, состоит из подготовительного этапа, на котором определяют биологические индикаторы параметров комметированных и стволовых клеток персонифицированной опухоли молочной железы, а именно первоначально осуществляют забор операционного материала опухоли в количестве не менее 3 см³, перевод клеток опухоли в первичную культуру, определяют время репарации межцепочечных сшивок, индуцированных цитостатиком митомицином С, на основании которого определяют день финального эрадицирующего стволовые опухолевые клетки введения цитостатика и сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК (ДНКмикс) и формируют расписание терапии, которое включает четыре инъекции циклофосфамида и четыре инъекции ДНКмикс, привязанные к найденным временным индикаторным параметрам конкретной опухоли, и основного терапевтического этапа, на котором проводят терапевтическую интервенцию с использованием кросслинкирующего цитостатика циклофосфамида в дозе 300 мг на 1 м² и препарата ДНКмикс в количестве более 12 мг, которые вводятся согласно сформированному расписанию терапии, причем циклофосфамид вводят системно три раза в соответствии со временем репаративного цикла, определенным на подготовительном этапе, с опережением двух повторных инъекций на 2 часа от точки полного восстановления двуцепочечных разрывов, а препарат ДНКмикс вводят в точку максимального накопления двуцепочечных разрывов, при этом четвертая терапевтическая процедура, также состоящая из введения циклофосфамида и препарата ДНКмикс, осуществляется в день синхронизации клеток опухоли, включая стволовые опухолевые клетки, в G2/M фазе клеточного цикла с последующим синхронным переходом в G1 фазу клеточного цикла в соответствии с полученным ранее расписанием репарации межцепочечных сшивок, что является днем финального эрадицирующего воздействия на клетки опухоли, причем, половину от полной терапевтической дозы препарата ДНКмикс вводят равными объемами лимфотропно в два паховых, в два подмышечных лимфатических депо и паравентрикулярно, а вторую половину от полной терапевтической дозы вводят в опухолевый очаг, в область накопления асцитной плевральной жидкости после эвакуации выпота или внутрибрюшинно в случае перитонеальной диссеминации опухолевых клеток или печеночных метастаз.

В современной литературе отсутствуют указания на предлагаемый способ лечения распространенного РМЖ в терминальной стадии прогрессии, что подтверждает его новизну.

Ниже приводятся теоретические и экспериментальные данные, подтверждающие, что изобретение отвечает критерию практической (промышленной) применимости.

На чертеже представлены следующие иллюстрирующие материалы.

На фиг. 1: Пациент 1. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд.

На фиг. 2: Пациент 1-2 рецидив. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд.

На фиг. 3: Пациент 2. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд.

На фиг. 4: Пациент 3. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 5: Пациент 4. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 6: Пациент 5. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 7: Пациент 6. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черными стрелками отмечено определенное время четвертого и пятого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд. Е) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 8: Пациент 7. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и отношение количества делящихся клеток в G2/M фазе к количеству клеток в G1 фазе. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд. Е) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 9: Пациент 8. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и медиана количества клеток, светящихся по пропидию йодиду. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд. Е) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 10: Пациент 9. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 11: Пациент 10. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. С) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 12: Пациент 11. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. С) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд. D) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 13: Пациент 12. А) Репаративный цикл клеток опухоли. Приведены медианы и 95% доверительный интервал для tail moment в commet assay через различные временные промежутки после обработки клеток митомицином С в дозе 1 мкг/мл. Определенное для будущего режима время введения препарата ДНКmix обозначено светлой серой стрелкой, время введения кросслинкирующего цитостатика - черной стрелкой. В) Клеточный цикл опухолевых клеток после трехкратной обработки митомицином С с интервалом, полученным при анализе репаративного цикла, определенный по свечению пропидия йодида методом проточной цитометрии. Указаны дни после начала обработки и процентное содержание делящихся клеток. Черной стрелкой отмечено определенное время четвертого введения кросслинкирующего цитостатика. С) Полученная схема обработки опухоли. Указано время введения циклофосфамида и препарата ДНКmix. D) Определение количества TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Приведено процентное содержание клеток, стрелками указаны примеры опухолевых клеток, интернализующих TAMRA-меченный зонд. Е) Фотографии основных опухолевых очагов пациента в ходе терапии.

На фиг. 14. Сравнительный анализ времени дожития пациентов в контрольной группе и экспериментальной, проходивших терапию по технологии «Каранахан». * - отличия достоверны, р<0,05, критерий Манна-Уитни.

На фиг. 15. Оценка изменений в популяциях Т-регуляторных лимфоцитов и CD8. Приведены доли пациентов (в %), у которых в ходе терапии наблюдалось увеличение, сохранялся такой же уровень или наблюдалось снижение количества CD4/25/FoxP3 клеток и значений дегрануляционного теста.

Предложенный способ лечения распространенного РМЖ в терминальной стадии прогрессии реализуется следующим образом.

Предварительно отметим теоретические предпосылки предложенного способа.

Способ основан на двух открытых относительно недавно общебиологических феноменах: 1) способность низко дифференцированных клеток различного генеза интернализовать фрагменты экстраклеточной двуцепочечной ДНК естественным механизмом интернализации и 2) способность фрагментов двуцепочечной ДНК, доставленных во внутренние компартменты стволовых инициирующих раковых клеток, интерферировать процесс репарации межцепочечных сшивок, индуцированных действием кросслинкирующего цитостатика. В результате такой интерференции стволовые инициирующие раковые клетки или погибают, или необратимо утрачивают свои туморогенные свойства. Таким образом, обнаружен универсальный для одной из двух наиболее крупных системных групп (низко/высокодифференцированные) туморогенных раковых клеток молекулярный маркер, и экспериментально обнаружен однотипный способ эрадикации туморогенных клеток.

В основе предложенного способа лежит два технических момента.

Во-первых, это определенная последовательность обработки клеток РМЖ кросслинкирующим цитостатиком, которая позволяет индуцировать гибель дифференцированных раковых клеток через механизм апоптоза, а также синхронизировать стволовые инициирующие раковые клетки в фазе клеточного цикла, наиболее чувствительной для последующего (финального) терапевтического воздействия.

Во-вторых, введение сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК (ДНКмикс) в точку демаркации двух фаз процесса репарации межцепочечных сшивок, а именно NER и гомологичной рекомбинации.

Основным лейтмотивом способа являлся первоначальный анализ следующих параметров:

1) идентификация в полученной из биопсийного материала культуре опухолевых клеток субпопуляции TAMRA+ стволовых инициирующих раковых клеток;

2) исследование цикла репарации межцепочечных сшивок по времени возникновения/исчезновения двуцепочечных разрывов;

3) ежедневный анализ клеточного цикла после проведенной обработки цитостатиком с целью определения момента синхронизации клеток в G1/S фазе клеточного цикла, наиболее чувствительной к терапевтическому воздействию;

4) ежедневная после проведенной обработки цитостатиком оценка количества TAMRA позитивных клеток с целью определения дня после первой инъекции цитостатика, на который произошло накопление, а значит синхронизация в определенной фазе клеточного цикла выживших после обработки опухолевых клеток, включая TAMRA+ стволовые инициирующие раковые клетки.

Оценка этих параметров позволяет определить конкретный хронометрический режим терапевтических воздействий цитостатика и двуцепочечной ДНК на клетки персонифицированного РМЖ.

Реализация предложенного способа в клинической практике условно может быть разбита на этапы.

На первом этапе определяют профиль репаративного цикла клеток РМЖ конкретной опухоли, полученной из биопсийного материала после выведения клеток РМЖ в первичную культуру и однократной обработки этих клеток цитостатиком митомицином С и определения времени репаративного цикла по присутствую двуцепочечных разрывов как маркеров двуцепочечных разрывов, характеризующих фазы NER и гомологичной рекомбинации репаративного цикла методом комет. Характер профиля зависит от персонифицированного РМЖ и определяется каждый раз перед лечением.

На втором этапе определяют день синхронизации в чувствительной G1/S фазе клеточного цикла и максимального накопленного количества стволовых инициирующих раковых клеток конкретного РМЖ как признак их синхронного ареста, используя в качестве основы найденный временной профиль цикла репарации межцепочечных сшивок, индуцированных кросслинкирующим цитостатиком митомицином С после трехкратной обработки цитостатиком, необходимой для индукции масштабного апоптоза комметированных раковых клеток и «запирания» в определенной G2/M фазе клеточного цикла основной массы стволовых инициирующих раковых клеток. Количество стволовых инициирующих раковых клеток и распределение по клеточному циклу определяется ежедневно FACS анализом и (или) цитологически по интернализации специфического TAMRA меченного ДНК зонда в эти клетки, при этом день максимально накопления TAMRA позитивных клеток будет соответствовать их синхронизации в чувствительной для терапии фазе клеточного цикла, и является днем терминальной эрадицирующей стволовые инициирующие раковые клетки терапевтической обработки.

На третьем этапе разрабатывают терапевтическое расписание лечения путем введения цитостатика в дозе 300 мг/м² и сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК, которые проводятся четырехкратно и характеризуются: для цитостатика - тремя обработками в указанных дозах и в определенное на втором этапе время, необходимое для запирания стволовых инициирующих раковых клеток и индукции апоптоза комметированных раковых клеток, и четвертой инъекции в день, определенный как финальный день эрадицирующей стволовые инициирующие раковые клетки терапии, и для препарата ДНК - четырехкратно после каждой инъекции цитостатика во временную точку демаркации двух фаз процесса репарации межцепочечных сшивок, индуцированных цитостатиком, а именно в точку между максимумом двуцепочечных разрывов и началом их залечивания, определенных на втором этапе, причем сложнокомпозиционный препарат на основе двуцепочечной ДНК вводится каждый раз в дозе более 12 мг, разбитой на две порции, одна половина вводится равными объемами лимфотропно в два паховых, в два подмышечных лимфатических депо и паравентрикулярно, а вторая половина вводится в опухолевый очаг, в области накопления ацитной, превральной жидкости после эвакуации выпота или внутрибрюшинно в случае перитонеальной диссеминации опухолевых клеток или печеночных метастаз.

Актуальность данного изобретения подтверждается тем, что, несмотря на достигнутые успехи в терапии РМЖ, существует проблема, не позволяющая сформировать четкое законченное представление о правильности выбранной стратегии лечения и средств воздействия на распространенный РМЖ в терминальной стадии прогрессии, поскольку проблемой является отсутствие понимания всей совокупности биологических свойств опухолевых клеток и в первую очередь стволовых инициирующих раковых клеток этого типа рака.

В этой связи оценка эффективности новой терапевтической стратегий лечения РМЖ в клинических условиях основанного на знании принципиально новых биологических свойств персонифицированного РМЖ является актуальной задачей.

Ниже приводятся клинические доказательства эффективности лечения распространенного РМЖ в терминальной стадии прогрессии.

Используемые методики

Получение первичной культуры клеток и определение индивидуальных параметров опухоли

Работа с образцами опухоли проводилась, как описано в статье (Proskurina et al., 2022). Были получены первичные культуры, подсчитаны TAMRA+ клетки, определены продолжительность процесса репарации ДНК и время синхронизации клеток после 3-х воздействий митомицина С. В результате для каждого пациента была рассчитана временная схема введения циклофосфамида согласно полученным временным точкам.

Необходимое замечание по расчету расписания

Расчет времени репаративного цикла начинается с точки минимального количества двуцепочечных разрывов. Если в нулевой точке это значение минимальное, то расчет начинается с нулевой точки. Это связано с тем, что в опухолевых клетках идет активная транскрипция, за счет чего образуются транзитные двуцепочечные разрывы, которые регистрируются в комметном анализе в нулевой точке. Минимальное значение количества двуцепочечных разрывов после остановки транскрипции и будет означать, что транскрипционная активность клетки замерла, и началась репарация двуцепочечных разрывов, то есть репаративный цикл. И, таким образом, первый временной отрезок репаративного цикла включает в себя все время до второго минимального значения количества двуцепочечных разрывов. Временной отрезок истинного репаративного цикла начинается с первого минимума и заканчивается вторым минимумом значений количества двуцепочечных разрывов. И именно этот отрезок включается в расписание после первой обработки, удлиненной на время завершения транскрипционной активности.

Почему происходит синхронизация в одной фазе клеточного цикла стволовых опухолевых клеток после трехкратной обработки циклофосфамидом. Время репарации разных районов хромосом связано с наличием в них повторяющихся ДНК. Динамика репарации выглядит как следующее. Сначала репарируются двуцепочечные разрывы эухроматина, далее интераклярного гетерохроматина и, возможно, теломер, и в последнюю очередь, репаративная машина закрывает двуцепочечные бреши в балке центромерного гетерохроматина. Множественность сайтов, которые должны быть зарепарированы, в сочетании с пространственными ограничениями для молекулярной репаративной машины в центромерном гетерохроматине, являются возможной причиной синхронизации репаративных машин разных клеток. На начальном этапе репарации все легко доступные сайты связываются с репаративным комплексом и репарируются. Центромерный гетерохроматин остается труднодоступным районом для репарации и, как предполагается, кинетика связывания репаративной машины с сайтами в этом районе низкая. То есть «все силы первоначально брошены на репарацию легкодоступных сайтов». После завершения репарации в легкодоступных сайтах все репаративные комплексы «набрасываются» одновременно на сайты, расположенные в центромерном гетерохроматине. И, по-видимому, количество этих комплексов равно или превышает количество сайтов, которые должны быть зарепарированы. Происходит синхронное закрытие всех брешей. Очевидно, что такая ситуация привязана к дозам цитостатика и количеству индуцируемых им межцепочечных сшивок.

Пациенты

Список пациентов с указанием проведенных курсов по технологии «Каранахан» приведен в Таблице 1.

Оценка Т-регуляторных лимфоцитов и CD8 популяций в периферической крови пациентов

Количество регуляторных Т-клеток оценивалось методом проточной цитофлуориметрии на цитометре FACS Calibur (BectonDickinson, США) с использованием CD4, CD25, FOXP3 моноклональных антител (BD PharMingen, США).

Оценку экстернализации CD107a на поверхности CD8 Т-клеток проводили в тесте дегрануляции. Мононуклеарные клетки инкубировали в присутствии анти-СО107а антител, моненсина и антител CD3 в качестве стимулятора Т-клеток. В контроль антитела CD3 не вносились. Через 18 ч клетки инкубировали с CD8 антителами согласно стандартной методике для определения поверхностных антигенов на клетке. Уровень экспрессии CD 107а оценивали на проточном цитометре в гейте CD8 клеток.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica 8 (StatSoft, США). Достоверность различий оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни. Выявленные различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Рассмотрим более подробно базовые экспериментальные подтверждения предлагаемого подхода на основании результатов пилотных ограниченных клинический исследований технологии («Каранахан»).

Был разработан протокол клинических исследований. Общая схема технологии «Каранахан» выглядит следующим образом (Proskurina et al., 2022). На подготовительном этапе с операционного стола забирается образец опухоли. Полученный образец опухолевой ткани переводится в первичную культуру. Проводится оценка общего количества клеток и стволовых опухолевых клеток по признаку интернализации TAMRA+ДНК зонда. Далее оценивается длина репаративного цикла и находится день синхронизации клеток опухоли в G2/M фазе клеточного цикла. Рассчитывается временная схема введения циклофосфамида и сложнокомпозиционного препарата ДНКмикс согласно полученным временным точкам. Расписание передается лечащему врачу и проводится терапия. Согласно полученному режиму вводится циклофосфамид внутривенно и препарат ДНКмикс интратуморально.

Рассмотрим режимы лечения, распространенного РМЖ в терминальной стадии прогрессии.

В предлагаемом способе лечения распространенного РМЖ в терминальной стадии прогрессии не ставилось своей целью полное вылечивание больных раком молочной железы IV стадии, как это было в случаях экспериментальных мышиных моделей. Главной задачей исследования была проверка возможности применения технологии «Каранахан» на людях в реальных клинических условиях. Необходимо было понять, работает ли технология в клинике, какие выявляются недостатки и какие существуют «подводные камни» при таком терапевтическом подходе. В этой связи основным критерием оценки действенности технологии «Каранахан» был ответ первичного очага на проведенную терапию и время дожития паллиативных пациентов.

На момент представления результатов в исследовании приняли участие 12 пациенток с диагнозом рак молочной железы IV стадии, находящихся в паллиативном статусе (Таблица 1). Пациенткам проводили 2-6 курсов по технологии «Каранахан». Несколько пациенток выбыли из исследования в связи с активными катаболическими процессами (активный некроз с массивным отторжением, выраженной гиперемией) в обработанной опухоли, вызванными проведенной терапией (регламент детоксикации был разработан и применен, начиная с 4 терапевтического курса по технологии «Каранахан» у пациентки №12).

Результаты приводятся индивидуально по случаям, взятым в исследование. Приводятся данные лабораторного исследования индикаторов технологии «Каранахан» и дается наглядная картина происходящих изменений в первичном очаге опухоли (фотографии) по ходу проводимого лечения (фиг. 1-13). Поскольку во всех случаях были зарегистрированы метастазы различной локализации и эффект действия терапии мог охватывать все области, затронутые болезнью, оценка эффективности терапии проводилась с учетом ответа, наблюдаемого во всех очагах присутствия болезни. Были выбраны три категории ответа: положительная динамика, без динамики, отрицательная динамика. В таблице 2 приводится описание происходящих изменений согласно категориям ответа с учетом всех очагов распространения по результатам указанных инструментальных анализов в указанные даты после проведения терапии.

Результаты по пациенту N 1 присутствуют в анализе дважды - как N 1 и N 1-2. Это связано с тем, что после проведенных 2 курсов по технологии «Каранахан» у пациента N 1 полностью элиминировались опухолевые очаги и в течение 2,5 лет не наблюдалось признаков опухолевого роста. Однако через 3 года этот пациент вновь поступил на лечение, и был обозначен как N 1-2. Была вновь проведена оценка параметров опухолевых клеток, и проведена терапия по новому режиму. Мы считаем, что эти два случая целесообразно рассматривать по-отдельности.

По ходу исследования были сделаны следующие изменения и дополнительные анализы.

Пациентка N 9. После 3 курса был проведен анализ биопсийного материала из зоны опухоли на присутствие опухолевых клеток, после чего предполагалось провести коррекцию расписания. В образце опухолевой стромы не было обнаружено опухолевых и каких-либо иных клеток в понятном количестве. И, естественно, не было обнаружено следов TAMRA+ стволовых опухолевых клеток. Этот факт, как и в случае с экспериментальными мышиными моделями, свидетельствует, что обработки по технологии «Каранахан» сопровождаются принципиальными позитивными изменениями в опухольассоциированной строме первичного очага. Исчезают опухолевые клетки, включая стволовые опухолевые клетки, и остается только фиброзная ткань.

Пациентка №12. После 3 курса терапии была проведена оценка биологического состояния клеточных популяций в плевральной жидкости. Оказалось, что опухолевые клетки канцероматозного очага приобрели четко оформленный репаративный временной режим с единственным доминирующим пиком. Расписание было откорректировано относительно новых данных. Кроме того, была увеличена доза вводимого препарата ДНКмикс с 1 до 12 мг на одну обработку. И наконец, для увеличения вероятности доставки ДНК к таргетным очагам метастаз в печени, брюшине, грудных лимфоузлах, препарат ДНК стали вводить в зоны лимфатического депо в паховые лимфатические скопления, подмышечные лимфатические конгломераты, в брюшное лимфатическое депо справа на 5 см от пупка (параумбеликально) и в выраженные очаги опухоли. После коррекции регламента плевральный выпот кратно сократился как по объему, так и по частоте изъятия (вместо 2-4 дней между эвакуациями, 30 дней).

Общее заключение по результатам терапии по технологии «Каранахан» по всем пациентам приведено в Таблице 2.

Оценим показателя времени дожития умерших пациентов экспериментальной группы в сравнении с историческим контролем.

При оценке эффективности лечения пациентов в состояниях, выбранных для проведения настоящего исследования, одним из социально значимых критериев является время дожития после присвоения паллиативного статуса. Проведенный сравнительный анализ времени дожития экспериментальной группы в сравнении с историческим контролем свидетельствует, что применение технологии «Каранахан» существенно отдаляет время гибели пациентов (Фиг. 14).

Оценим качество жизни.

В ходе исследования проводился опрос пациентов относительно качества жизни и переносимости терапии. Полученные сведения суммированы в Таблице 3.

У трех пациентов (N9, 10, 11) наблюдалось существенное увеличение оценки качества жизни, что соотносилось с объективными показателями после проведения терапии по технологии «Каранахан». Существенное ухудшение самочувствия наблюдалось только у одного пациента (N 6), что соответствовало наблюдаемому у него местному прогрессированию опухоли и появлению новых метастатических очагов.

Оценим ответ опухоли по системе RECIST.

Был проведен анализ клинически проявленного ответа опухоли, наблюдаемого в результате проводимой терапии по технологии «Каранахан». Результаты анализа приведены в соответствие с критериями системы RECIST 1.1 и суммированы в Таблице 4.

Полный, частичный ответ опухоли на терапию по технологии «Каранахан» или стабилизация заболевания наблюдались у 8 пациентов, у 2 пациентов (N6, 7) наблюдалась прогрессия заболевания. Еще у 2 пациентов (N2, 4) наблюдался положительный местный ответ, но при этом произошло прогрессирование заболевания в виде появления новых метастатических очагов.

Частичный ответ (PR) - уменьшение суммы наибольших диаметров каждого очага более чем на 30%.

Стабилизация заболевания (SD) - уменьшение суммы наибольших диаметров каждого очага от 20 до 30%. Отсутствие как частичной резорбции, так и прогрессирования.

Прогрессирование заболевания (PD) - увеличение суммы наибольших диаметров каждого очага более чем на 20% или появление новых опухолевых очагов.

Оценим количество Т-регуляторных и CD8 популяций лимфоцитов в периферической крови пациентов.

Необходимым анализом является определение ответа иммунной системы на проводимое лечение. Мы выбрали два показателя, которые дают общее представление о противоопухолевом напряжении иммунитета (Фиг. 15). Анализ изменения количества регуляторных Т лимфоцитов позволяет судить о защитном потенциале опухоли. Анализ изменения количества и цитотоксической активности Т цитотоксических лимфоцитов позволяет судить о противоопухолевых иммунных реакциях.

Дегрануляция цитотоксических лимфоцитов является основным показателем зрелого состояния и цитолитической активности Т лимфоцитов, которая связана в том числе с их воздействием на опухолевые клетки через специфические антигены. Т-клетки имеют лизосомальные гранулы, содержащие цитолитические белки. В дифференцированных CD8+ Т клетках стимуляция через TLR вызывает дегрануляцию, т.е. выброс содержимого литических гранул. При этом, молекула CD107a, являющаяся компонентом литических гранул, оказывается на поверхности Т-клетки, что используется в качестве функционального маркера цитотоксических лимфоцитов. Оценку экстернализации CD107a на поверхности CD8 Т-клеток проводили в тесте дегрануляции.

Проведенные анализ свидетельствует, что супрессивное воздействие опухоли на организм в результате проводимого лечения по технологии «Каранахан» принципиально не изменяется. При этом существенно возрастает активность адаптивного противоопухолевого иммунного ответа.

Представим обобщенную характеристику полученных результатов.

В наших исследованиях, проведенных на протяжении последних 5 лет, был открыт и охарактеризован на клеточном уровне новый неизвестный до настоящего времени общебиологический феномен - способность низкодифференцированных клеток, в том числе стволовых раковых клеток, интернализовать фрагменты экстраклеточной двуцепочечной ДНК естественным механизмом интернализации без использования процедуры трансфекции. Используя ДНК зонд, меченный флуорохромом, был получен уникальный универсальный маркер стволовых клеток различного генеза, в том числе и стволовых раковых клеток

Одновременно было установлено, что фрагменты двуцепочечной ДНК, интернализованные в клеточном пространстве стволовых раковых клеток в момент репарации межцепочечных сшивок, индуцированных кросслинкирующим цитостатиком циклофосфамидом, интерферируют процесс репарации таким образом, что полностью разрушают злокачественный потенциал перевиваемого графта. Установлено, что основным в потере графтом туморогенных свойств является эрадикация стволовых раковых клеток из массы раковых клеток, перевиваемых в качестве трансплантата (Alyamkina et al., 2015; Dolgova et al., 2012, 2013, 2014).

И, таким образом, экспериментально найдены две компоненты, которые составили основу абсолютно новой стратегии лечения злокачественного новообразования. Более того, общебиологический характер открытия позволяет рассматривать принципиально новые способы воздействия на стволовые клетки и разработать абсолютно новые технологии манипуляции с их генетикой и свойствами.

В настоящем пилотном проекте мы поставили перед собой задачу оценить возможные положительные эффекты влияния новой технологии в реальной клинической практике на модели рака молочной железы, причем в случаях, когда болезнь достигла терминальной стадии. Рак молочной железы был выбран в качестве модельной болезни в связи с его распространенностью и социальной значимостью успешного лечения заболевания. Мы полностью отдавали себе отчет в юридических и процедурных сложностях новой терапии, поэтому мы остановились на пациентах с паллиативным статусом с распространенной формой болезни в состоянии терминальной прогрессии рака. Возможность в таких запущенных случаях увидеть положительные клинические эффекты могло быть основанием поиска клинических режимов, позволяющих элиминировать опухолевый очаг и ввести в ремиссию заболевание даже на такой стадии.

Анализ влияния технологии «Каранахан» на развитие болезни в ее терминальной стадии свидетельствует о следующем. 1) Существенно увеличилось время дожития пациентов, находящихся в исследовании, что несомненно является социально значимым результатом. 2) Наблюдалась локальная, в местах инъекций препарата ДНКмикс, положительная динамика в области наиболее выраженных очагов опухоли.

У пациентки №2 опухолевые очаги присутствовали в обеих молочных железах. В правой опухоль хорошо пальпировалась, в левой занимала весь объем железы и представляла из себя очень плотный конгломерат. После двух курсов в правой груди опухоль более не пальпировалась. Больная ткань отторгалась некротическими свищами. В левой груди опухоль значительно уменьшилась в размерах и стала мягкой. То есть первичный очаг претерпел положительную трансформацию.

В случае пациентки №9 после трех последовательных терапий по новой технологии некротизирующаяся опухоль сжалась и уменьшилась в размерах, распад ткани практически прекратился, края раневой поверхности эпителизировались, ихорозный запах ослаб. Из образца ткани после трех курсов не удалось выделить опухолевых клеток, и по-видимому, очаг трансформировался в фиброзную строму.

Как было сказано выше, несмотря на существенное увеличение времени дожития, мы не смогли в конкретной ситуации достичь выраженного системного ответа с редукцией всех опухолевых очагов в печени, костях, коже. Причины не ярко выраженного системного ответа кроятся на наш взгляд в двух проблемах. Первое, в некорректной оценке биологических часов репаративного и клеточного цикла опухолевых клеток, что связано с состоянием исходного клеточного материала и с трудом будет поддаваться корректировке. Второе, в проблеме доставки требуемого количества препаратов в нужное время в очаги опухолевого роста и связанной с этим утраты эффективной дозы. Так метаболит циклофосфамида фосфорамид мустард, образующийся в печени, не достигает таргетных зон или по причине слабого кровоснабжения (для метастаз кожи, костей) или утилизируется при прохождении большого круга кровообращения (для метастаз печени) и до печени доставляется многократно уменьшенная доза кросслинкирующего агента.

Препарат ДНК при интратуморальных инъекциях в первоначально выбранной дозе (1 мг на одну терапевтическую точку) охватывает незначительный очаг пораженной ткани. В этом случае только часть стволовых опухолевых клеток подвергается эрадицирующему воздействию препаратов.

При неполном терапевтическом действии препаратов возможна активация пролиферации спящих метастаз, когда цитостатик индуцировал кросслинки, но препарат ДНКмикс не достиг этого очага в нужный момент времени. Межцепочечные сшивки в стволовых опухолевых клетках будут зарепарированы, клетки не уйдет в апоптоз, и произойдет, так называемая, селекция клона (Greaves & Maley, 2012; Salavaty et al., 2023). Такая ситуация приведет к дополнительной прогрессии опухоли.

В связи с вышесказанным было сделано заключение о целесообразности увеличения дозы препарата (до близкой к используемой в экспериментах на мышах) и оптимизации схемы доставки препарата ДНКмикс. Доза препарата ДНК была увеличена до 12 мг в 12 мл физиологического раствора. Кроме того, было принято решение вместо попыток системного введения препарата ДНКмикс делать инъекции в лимфатические депо в зонах паховых скоплений, подмышечных скоплений и на расстоянии 5-7 см справа от пупка (параумбеликально), сохраняя при этом приоритет обкола локальных, наиболее проявленных очагов опухоли. Предполагается, что при введении препарата ДНК в зоны лимфатического депо, терапевтические фрагменты ДНК будут распространяться по лимфотоку в восходящем направлении, охватывая требуемые зоны метастатических опухолевых очагов. При введении ДНК в кровяное русло она немедленно деградирует, с потерей терапевтического действия (Dolgova et al., 2009).

Откорректированный режим был применен, начиная с сентября 2023, для пациента №12 с канцероматозным плевритом, и немедленно был получен положительный клинический ответ. В течение первых 3 курсов для этой пациентки применялся стандартный режим, вводился 1 мг сложнокомпозиционного препарата ДНКмикс локально, интратуморально с инъекциями в наиболее проявленные участки опухоли. Начиная с 4 курса стал применяться новый терапевтический режим с использование высокой дозы препарата ДНКмикс и его введением в зоны лимфатического депо и плевральную полость. До смены терапии пациентку больше всего беспокоила одышка, вызванная скоплением жидкости в плевральных полостях, и необходимость эвакуации жидкости путем пункции. После начала введения препарата по новой схеме одышка уменьшилась, и пропала необходимость частого проведения инвазивной процедуры, что положительно повлияло на качество жизни.

Было показано, что технология «Каранахан» дополнительно активирует адаптивное звено противоракового иммунитета, что является несомненным положительным эффектом проводимого лечения.

На основании полученных результатов можно считать, что применение технологии в полном объеме, когда препарат ДНК достигает всех опухолевых очагов, приводит к изменению статуса опухоли и перевода ее в разряд операбельных. Кроме того, при наблюдаемой положительной динамике возникает возможность вернуться к препаратам, которые были отменены в результате неэффективности в связи с генерализацией и терминальной прогрессией новообразования.

Продолжение пилотных клинических исследований с возможностью варьировать параметры по ходу терапии могут позволить выявить регламент достижения полной ремиссии терминальной стадии рака молочной железы, как это показано на многочисленных мышиных моделях (Kisaretova et al., 2020; Potter et al., 2016, 2018; Ruzanova et al., 2022).

Таким образом, благодаря введенным усовершенствованиям известного способа и введению дополнительных операций достигается требуемый технический результат, заключающийся в расширении арсенала средств лечения распространенного РМЖ в терминальной стадии прогрессии за счет расширения области применения способа лечения и в повышении эффективности лечения.

Литература

Alyamkina, Е.A., Nikolin, V.P., Popova, N.A., Minkevich, A.M., Kozel, A.V, Dolgova, E.V, Efremov, Y.R., Bayborodin, S.I., Andrushkevich, О.M., Taranov, O.S., Omigov, V.V, Rogachev, V.A., Proskurina, A.S., Vereschagin, E.I., Kiseleva, E.V, Zhukova, M.V, Ostanin, A.A., Chernykh, E.R., Bogachev, S.S., & Shurdov, M.A. (2015). Combination of cyclophosphamide and double-stranded DNA demonstrates synergistic toxicity against established xenografts. Cancer Cell International, 15, 32. https://doi.org/10.1186/s12935-015-0180-6

Dolgova, E.V., Rogachev, V.A., Nikolin, V.P., Popova, N.A., Likhacheva, A.S., Alyamkina, E.A., Sebeleva, Т.E., Chernykh, E.R., Gel’fgat, E.L., Bogachev, S.S., & Shurdov, M.A. (2009). A leukocyte-stimulating effect of exogenous DNA fragments protected with protamine in the cyclophosphamide-induced myelosuppression in mice. Problems in Oncology, 55(6), 761-764.

Dolgova, E.V., Alyamkina, E.A., Efremov, Y.R., Nikolin, V.P., Popova, N.A., Tyrinova, Т.V., Kozel, A.V., Minkevich, A.M., Andrushkevich, О.M., Zavyalov, E.L., Romaschenko, A.V., Bayborodin, S.I., Taranov, O.S., Omigov, V.V., Shevela, E.Y., Stupak, V.V., Mishinov, S.V., Rogachev, V.A., Proskurina, A.S., … Bogachev, S.S. (2014). Identification of cancer stem cells and a strategy for their elimination. Cancer Biology and Therapy, 15(10), 1378-1394. https://doi.org/10.4161/cbt.29854

Dolgova, E.V., Efremov, Y.R., Orishchenko, K.E., Andrushkevich, О.M., Alyamkina, E.A., Proskurina, A.S., Bayborodin, S.I., Nikolin, V.P., Popova, N.A., Chernykh, E.R., Ostanin, A.A., Taranov, O.S., Omigov, V.V., Minkevich, A.M., Rogachev, V.A., Bogachev, S.S., & Shurdov, M.A. (2013). Delivery and processing of exogenous double-stranded DNA in mouse CD34+ hematopoietic progenitor cells and their cell cycle changes upon combined treatment with cyclophosphamide and double-stranded DNA. Gene, 528(2), 74-83. https://doi.org/10.1016/j.gene.2013.06.058

Dolgova, E.V., Proskurina, A.S., Nikolin, V.P., Popova, N.A., Alyamkina, E.A., Orishchenko, K.E., Rogachev, V.A., Efremov, Y.R., Dubatolova, T.D., Prokopenko, A.V., Chernykh, E.R., Ostanin, A.A., Taranov, O.S., Omigov, V.V., Zagrebelniy, S.N., Bogachev, S.S., & Shurdov, M.A. (2012). “Delayed death” phenomenon: A synergistic action of cyclophosphamide and exogenous DNA. Gene, 495(2), 134-145. https://doi.org/10.1016/j.gene.2011.12.032

Greaves, M., & Maley, С.C. (2012). Clonal evolution in cancer. Nature, 481(7381), 306-313. https://doi.org/10.1038/NATURE10762

Kisaretova, P.E., Kirikovich, S.S., Ritter, G.S., Efremov, Y.R., Taranov, O.S., Dubatolova, T.D., Proskurina, A.S., Potter, E.A., Dolgova, E.V, Sidorov, S.V, Ostanin, A.A., Chernych, E.R., & Bogachev, S.S. (2020). Approbation of the cancer treatment approach based on the eradication of TAMRA+ cancer stem cells in a model of murine cyclophosphamide resistant lymphosarcoma. Anticancer Research, 40(2), 795-805. https://doi.org/10.21873/anticanres.14011

Potter, E.A., Dolgova, E.V., Proskurina, A.S., Minkevich, A..M., Efremov, Y.R., Taranov, O.S., Omigov, V.V., Nikolin, V.P., Popova, N.A., Bayborodin, S.I., Ostanin, A.A., Chernykh, E.R., Kolchanov, N.A., Shurdov, M.A., & Bogachev, S.S. (2016). A strategy to eradicate well-developed Krebs-2 ascites in mice. Oncotarget, 7(10), 11580-11594. https://doi.org/10.18632/oncotarget.7311

Potter, E.A., Proskurina, A.S., Ritter, G.S., Dolgova, E.V, Nikolin, V.P., Popova, N.A., Taranov, O.S., Efremov, Y.R., Bayborodin, S.I., Ostanin, A.A., Chernykh, E.R., Kolchanov, N.A., & Bogachev, S.S. (2018). Efficacy of a new cancer treatment strategy based on eradication of tumor-initiating stem cells in a mouse model of Krebs-2 solid adenocarcinoma. Oncotarget, 9(47), 28486-28499. https://doi.org/10.18632/oncotarget.25503

Proskurina, A.S., Kupina, V.V., Efremov, Y.R., Dolgova, E.V., Ruzanova, V.S., Ritter, G.S., Potter, E.A., Kirikovich, S.S., Levites, E.V., Ostanin, A.A., Chernykh, E.R., Sharipova, M.N., Sidorov, S.V., & Bogachev, S.S. (2022). Karanahan: a new treatment option for human breast cancer and its validation in clinical settings. Breast Cancer: Basic and Clinical Research, 6, Under rewier.

Ruzanova, V., Proskurina, A., Efremov, Y., Kirikovich, S., Ritter, G., Levites, E., Dolgova, E., Potter, E., Babaeva, O., Sidorov, S., Taranov, O., Ostanin, A., Chernykh, E., & Bogachev, S. (2022). Chronometric Administration of Cyclophosphamide and a Double-Stranded DNA-Mix at Interstrand Crosslinks Repair Timing, Called “Karanahan” Therapy, Is Highly Efficient in a Weakly Immunogenic Lewis Carcinoma Model. Pathology and Oncology Research, 28. https://doi.org/10.3389/PORE.2022.1610180

Salavaty, A., Azadian, E., Naik, S.H., & Currie, P.D. (2023). Clonal selection parallels between normal and cancer tissues. Trends in Genetics: TIG, 39(5), 358-380. https://doi.org/10.1016/J.TIG.2023.01.007

Корытова, Л.И., Гранов, А.М., Хазова, Т.В., Таразов, П.Г., Суворова, Ю.В., & Арзуманов, А.С. (2001). RU 2177349 C1 - Способ лечения инфильтративно-отечного рака молочной железы. https://patents.google.com/patent/RU2177349C1/ru

Корытова, Л.И., Коровина, М.А., Олтаржевская, Н.Д., Хазова, Т.В., Иванов, А.Е., & Сдвижков, А.М. (2001). RU 2176922 C1 - Способ лечения местнораспространенного рака молочной железы с опухолевыми изъязвлениями кожи. https://patents.google.com/patent/RU2176922C1/ru

Сидоренко, Ю.С, Бордюшков, Ю.Н., Абрамова, Н.А., Верховцева, А.И., Миндлин, С.С., Златник, Е.Ю., & Владимирова, Л.Ю. (2000). RU 2178294 C2 - Способ лечения рака молочной железы. https://patents.google.com/patent/RU2178294C2/ru

Сидоренко, Ю.С, & Николаева, Н.В. (2001). RU 2195295 C1 - Способ лечения рака молочной железы. https://patents.google.com/patent/RU2195295C1/ru

Изобретение относится к биотехнологии. Представлен способ лечения распространенного рака молочной железы в терминальной стадии прогрессии, основанный на введении пациенту цитостатика циклофосфамида и сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК, и который состоит из подготовительного этапа, на котором определяют биологические индикаторы параметров комметированных и стволовых клеток персонифицированной опухоли молочной железы, а именно первоначально осуществляют забор операционного материала опухоли в количестве не менее 3 см³, перевод клеток опухоли в первичную культуру, определяют время репарации межцепочечных сшивок, индуцированных цитостатиком митомицином С, на основании которого определяют день финального эрадицирующего стволовые опухолевые клетки введения цитостатика и сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК (ДНКмикс), и формируют расписание терапии, которое включает четыре инъекции циклофосфамида и четыре инъекции ДНКмикс, привязанные к найденным временным индикаторным параметрам конкретной опухоли, и основного терапевтического этапа, на котором проводят терапевтическую интервенцию с использованием кросслинкирующего цитостатика циклофосфамида в дозе 300 мг на 1 м² и препарата ДНКмикс в количестве 1-12 мг, которые вводятся согласно сформированному расписанию терапии. Изобретение может быть использовано для лечения больных с распространенным раком молочной железы в терминальной стадии прогрессии. 15 ил., 4 табл.

Способ лечения распространенного рака молочной железы в терминальной стадии прогрессии, основанный на введении пациенту цитостатика циклофосфамида и сложнокомпозиционного препарата на основе двуцепочечной ДНК (ДНКмикс), отличающийся тем, что состоит из подготовительного этапа, на котором определяют биологические индикаторы параметров комметированных и стволовых клеток персонифицированной опухоли молочной железы, а именно первоначально осуществляют забор операционного материала опухоли в количестве не менее 3 см³, перевод клеток опухоли в первичную культуру, определяют время репарации межцепочечных сшивок, индуцированных цитостатиком митомицином С, на основании которого определяют день финального эрадицирующего стволовые опухолевые клетки введения цитостатика и препарата ДНКмикс, и формируют расписание терапии, которое включает четыре инъекции циклофосфамида и четыре инъекции препарата ДНКмикс, привязанные к найденным временным индикаторным параметрам конкретной опухоли, и основного терапевтического этапа, на котором проводят терапевтическую интервенцию с использованием кросслинкирующего цитостатика циклофосфамида в дозе 300 мг на 1 м² и препарата ДНКмикс в количестве 1-12 мг, которые вводятся согласно сформированному расписанию терапии, причем циклофосфамид вводят системно три раза в соответствии со временем репаративного цикла, определенным на подготовительном этапе, с опережением двух повторных инъекций на 2 часа от точки полного восстановления двуцепочечных разрывов, а препарат ДНКмикс вводят в точку максимального накопления двуцепочечных разрывов, при этом четвертая терапевтическая процедура, также состоящая из введения циклофосфамида и препарата ДНКмикс, осуществляется в день синхронизации клеток опухоли, включая стволовые опухолевые клетки, в G2/M фазе клеточного цикла с последующим синхронным переходом в G1 фазу клеточного цикла в соответствии с полученным ранее расписанием репарации межцепочечных сшивок, что является днем финального эрадицирующего воздействия на клетки опухоли, причем половину от полной терапевтической дозы препарата ДНКмикс вводят равными объемами лимфотропно в два паховых, в два подмышечных лимфатических депо и паравентрикулярно, а вторую половину от полной терапевтической дозы вводят в опухолевый очаг, в область накопления асцитной плевральной жидкости после эвакуации выпота или внутрибрюшинно в случае перитонеальной диссеминации опухолевых клеток или печеночных метастаз.