Настоящая заявка испрашивает приоритет по заявке на патент Китая №202010633951.8, поданной 2 июля 2020 года.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящая заявка относится к антителу к FXI/FXIa (фактор свертывания крови XI/активированный FXI), его антигенсвязывающему фрагменту, фармацевтической композиции, содержащей антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, и его фармацевтическому применению для лечения или предотвращения заболевания, связанного с тромбозом.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В последние годы, со старением населения мира и изменениями в образе жизни, тромбоэмболическое заболевание стало одним из самых смертельно опасных и инвалидизирующих заболеваний в мире. Нежелательные кровотечения, вызванные текущими антитромботическими/антикоагулянтными препаратами, остаются значительной проблемой (Katherine et al., 2015, West J Emerg Med; 16 (1): 11-17).

Имеющиеся исследования на животных и клинические данные демонстрируют, что ингибирование эндогенного пути, в частности фактора свертывания FXI, может уменьшить тромбоз, не вызывая значительных кровотечений (Felicitas Muller et al., Curr Opin Hematol. 2011 Sep; 18 (5): 349-355).

FXI является ключевым фактором свертывания в эндогенном пути. FXIa представляет собой активированное состояние FXI. В каскаде коагуляции FXI может быть активирован не только эндогенным фактором коагуляции FXIIa с образованием FXIa, но и тромбином II, тем самым усиливая каскад коагуляции с образованием большего количества тромбина и фибрина. В этом процессе может образовываться слишком много тромбина и фибрина, что приводит к тромботическим заболеваниям. Легкий фенотип кровотечения у пациентов с дефицитом FXI человека (гемофилия С) показывает, что риск кровотечения ниже, когда FXI подавляется. Дальнейшие исследования показали значительное снижение частоты возникновения церебрального артериального тромбоза и тромбоза глубоких вен у пациентов с дефицитом FXI, что позволяет предположить, что ингибирование FXI полезно для снижения риска возникновения церебрального артериального тромбоза и тромбоза глубоких вен.

Ген FXI расположен на хромосоме 4 человека и кодирует секретируемый белок, состоящий из 607 аминокислот. Молекула белка FXI содержит 4 «яблоковидных» домена и 1 каталитический домен. FXI присутствует в крови человека в виде гомодимера, а концентрация FXI, циркулирующего в плазме человека с образованием нековалентного комплекса с НК, составляет около 30 нМ (15-45 нМ). Молекула FXI человека имеет 88%, 67% и 58% (два вида, три типа гомологических данных) гомологии с молекулами FXI обезьяны и мыши, соответственно.

В настоящее время существует множество литературы и клинических испытаний, которые показали, что ингибирование активности FXI и FXIa, в который он превращается, эффективно для снижения тромбоза без создания видимого риска кровотечения. Из клинических результатов, раскрытых до сих пор, антитело к FXI/FXIa имеет аналогичные или лучшие антитромботические эффекты с более низким риском кровотечения и обеспечивает более безопасное лечение пациентов по сравнению с существующими новыми пероральными антикоагулянтами (NOAC).

В фармацевтической области сохраняется острая необходимость в создании антител к FXI/FXIa с низкой иммуногенностью, которые эффективно ингибируют тромбоз без увеличения риска кровотечения, тем самым делая антитромботическую терапию более безопасной.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к антителу к FXI/FXIa или его антигенсвязывающему фрагменту, кодирующей нуклеиновой кислоте, вектору, клетке-хозяину и фармацевтической композиции, способу лечения или замедления прогрессирования заболевания или нарушения или осложнения, связанных с тромбозом или тромбоэмболией, и их применению для обнаружения.

В одном аспекте предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее:

HCDR1 (определяющая комплементарность область 1 тяжелой цепи) тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в X₁X₂X₃MH (SEQ ID NO: 63), где X₁выбран из группы, состоящей из Е, S, G и D, Х₂ выбран из группы, состоящей из L, I, V и D, и Х₃ выбран из группы, состоящей из S, F, L и Y; и/или

HCDR2 тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в X₄X₅DPX₆X₇GX₈TX₉YAX₁₀KFQG (SEQ ID NO: 64), где X₄ выбран из группы, состоящей из G и W, X₅ выбран из группы, состоящей из F и I, Х₆ выбран из группы, состоящей из Е и Q, Х₇ выбран из группы, состоящей из D и N, Х₈ выбран из группы, состоящей из Е и D, Х₉ выбран из группы, состоящей из I, R, V и Е, и Х₁₀ выбран из группы, состоящей из Q и S; и/или

HCDR3 тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в DPHRTWWRYFDWLYPRGMDV (SEQ ID NO: 9) или GNFYYFDY (SEQ ID NO: 39); и/или

LCDR1 (определяющая комплементарность область 1 легкой цепи) легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в RASQTVGKNYLA (SEQ ID NO: 10) или SASSSINYMH (SEQ ID NO: 40); и/или

LCDR2 легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в X₁₁X₁₂SX₁₃X₁₄AX₁₅ (SEQ ID NO: 65), где Х₁₁ выбран из группы, состоящей из G, Е и D, Х₁₂выбран из группы, состоящей из А и Т, Х₁₃ выбран из группы, состоящей из N, V и K, Х₁₄выбран из группы, состоящей из R и L, и Х₁₅ выбран из группы, состоящей из Т, L и S; и/или

LCDR3 легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в X₁₇QX₁₈X₁₉X₂₀X₂₁PX₂₂T (SEQ ID NO:66), где Х₁₇ выбран из группы, состоящей из Q и Н, X₁₈ выбран из группы, состоящей из F и R, Х₁₉ выбран из группы, состоящей из R и S, Х₂₀ выбран из группы, состоящей из S и F, Х₂₁ выбран из группы, состоящей из Y и S, и Х₂₂ выбран из группы, состоящей из Y и L.

В некоторых вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

HCDR1 тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 7, 22, 24, 26, 28 и 37;

HCDR2 тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 8, 23, 25, 27 и 38;

HCDR3 тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 9 и 39;

LCDR1 легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 10 и 40;

LCDR2 легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 11, 29 и 41; и

LCDR3 легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 12 и 42.

В некоторых вариантах осуществления предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее:

(a) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7, 8 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 11 и 12, соответственно;

(b) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 22, 23 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно;

(c) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 24, 25 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно;

(d) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 26, 27 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно;

(e) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 28, 25 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно;

(f) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 37, 38 и 39, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 40, 41 и 42, соответственно;

(g) HCDR тяжелой цепи, имеющие 0-10 аминокислотных мутаций по сравнению с HCDR любой из тяжелых цепей (a)-(f), и CDR легкой цепи, имеющие 0-10 аминокислотных мутаций по сравнению с LCDR любой из легких цепей (a)-(f).

В некоторых вариантах осуществления, когда антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности CDR схемы (а), (b), (с), (d), (е) или родственной схемы (g), оно селективно связывается с FXIa, но не с FXI.

В некоторых других вариантах осуществления, когда антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности CDR схемы (f) или родственной (g) схемы, оно связывается с FXI, а также с FXIa; в некоторых конкретных вариантах осуществления оно связывается с FXIa, но не влияет на активность FXIa.

В некоторых вариантах осуществления предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, которое представляет собой мышиное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело или человеческое антитело, или его фрагмент; в некоторых конкретных вариантах осуществления, которое представляет собой гуманизированное антитело или человеческое антитело или его фрагмент. Это может быть полноразмерное антитело или его фрагмент.

В некоторых вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой гуманизированное антитело или его фрагмент, где гуманизированное антитело может иметь матрицу легкой цепи IGKV3-11*01 и матрицу тяжелой цепи IGHV1-69-2*01.

В некоторых вариантах осуществления процесс гуманизации также включает обратные мутации в VH (вариабельная область тяжелой цепи) и VL (вариабельная область легкой цепи). В некоторых конкретных вариантах осуществления, например, VH имеет любую одну или любую комбинацию из обратных мутаций Y27F, T28N, F29I, Т30K, A93L, R94Y, Е73Т, R66K, V67A, Т75А и T76N. В некоторых конкретных вариантах осуществления VL имеет любую одну или любую комбинацию из обратных мутаций R45K, L46R, L47W, I58V и F71Y.

В некоторых конкретных вариантах осуществления гуманизированное антитело или его фрагмент, описанные выше, содержат HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 37, 38 и 39, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 40, 41 и 42, соответственно.

В некоторых вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

VH, представленную в одной из SEQ ID NO: 5, 17-20, 30-33, 35, 43, 45-49 и 53-58, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и

VL, представленную в одной из SEQ ID NO: 6, 21, 34, 36, 44 и 50-52 или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей.

В некоторых конкретных вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(h) VH, представленную в SEQ ID NO: 5, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 6, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(i) VH, представленную в SEQ ID NO: 17, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(j) VH, представленную в SEQ ID NO: 18, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(k) VH, представленную в SEQ ID NO: 19, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(l) VH, представленную в SEQ ID NO: 20, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(m) VH, представленную в SEQ ID NO: 30, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 34, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(n) VH, представленную в SEQ ID NO: 31, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 34, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(о) VH, представленную в SEQ ID NO: 32, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 34, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(р) VH, представленную в SEQ ID NO: 35, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 36, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(q) VH, представленную в SEQ ID NO: 43, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 44, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(r) VH, представленную в SEQ ID NO: 45, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 51, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(s) VH, представленную в SEQ ID NO: 49, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 51, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей;

(t) VH, представленную в SEQ ID NO: 58, или VH, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и VL, представленную в SEQ ID NO: 51, или VL, по меньшей мере на 80% идентичную ей.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент имеет VH, связанную с СН1 (константная область 1 тяжелой цепи) человека или мыши, и VL, связанную с CL (константная область легкой цепи) или Сκ (константная область легкой цепи каппа) человека или мыши. СН человека представлен в SEQ ID NO: 13 или 59, а Сκ, например, представлен в SEQ ID NO: 14.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой мышиное антитело или его фрагмент. Вариабельная область легкой цепи содержит FR-область легкой цепи и/или константную область легкой цепи мышиной κ-цепи или λ-цепи или их вариант. В некоторых конкретных вариантах осуществления мышиное антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит FR-область тяжелой цепи и/или константную область тяжелой цепи мышиного IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, или их варианта.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой химерное антитело или его фрагмент. Он содержит FR-область легкой цепи и/или константную область легкой цепи κ- или λ-цепи человека или ее варианта и/или FR-область тяжелой цепи и/или константную область тяжелой цепи IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека или их варианта.

В некоторых вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область Fc, например, Fc IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или IgG4P (т.е. мутант S241P IgG4). Последовательность Fc IgG1, например, представлена в SEQ ID NO: 67, а последовательность Fc IgG4P (т.е. IgG4Fc, содержащая S241P), например, представлена в SEQ ID NO: 60.

В некоторых вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент имеет тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO: 15, или тяжелую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и легкую цепь, представленную в SEQ ID NO: 16, или легкую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей; или

тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO: 61, или тяжелую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и легкую цепь, представленную в SEQ ID NO: 62, или легкую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей.

В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела к FXI/FXIa представляет собой Fab, Fv, sFv, Fab', F(ab')₂, линейное антитело, одноцепочечное антитело, scFv, sdAb, sdFv, нанотело, пептидное антитело, доменное антитело и полиспецифическое антитело (биспецифическое антитело, диатело, триатело и тетратело, тандемный ди-scFv, тандемный три-scFv), например, в частности, scFv, Fv, Fab или Fab' фрагмент.

В некоторых вариантах осуществления предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с тем же эпитопом, что и антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, описанное выше.

В некоторых других вариантах осуществления предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, которое перекрестно блокирует связывание антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного выше, с FXI/FXIa человека.

В некоторых других вариантах осуществления предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, связывание которого с FXI/FXIa человека перекрестно блокируется антителом к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагментом, описанным выше.

В некоторых вариантах осуществления предложено антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит тяжелую и/или легкую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную тяжелой и/или легкой цепи антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного выше.

В контексте настоящего изобретения «по меньшей мере 80%» охватывает 80% или более, например, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%.

В некоторых вариантах осуществления предложен вариант антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, который содержит 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных изменений в вариабельной области тяжелой цепи и/или вариабельной области легкой цепи антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного выше. Аминокислотное изменение может представлять собой консервативную замену аминокислотного остатка в вариабельной области.

В некоторых вариантах осуществления антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, описанный выше, может обладать любым одним или более из следующих свойств:

предотвращение активации внутреннего или общего пути коагуляции;

блокирование связывания FXI и/или FXIa с членом пути коагуляции (предпочтительно, чтобы член выбирался из одного или более факторов IХ, ХIIа и тромбина);

блокирование связывания одного или более из FIX, FXI и FXIa с тромбоцитарным рецептором;

обладание KD (равновесная константа диссоциации) связывания с белком FXI и/или FXIa человека 10^-9 или менее;

предотвращение представления каталитического домена FXI/FXIa в активной конформации при связывании с FXI/FXIa и

возможность использования для подкожного введения или внутривенного введения.

Аффинность, описанную выше, измеряли, например, с помощью BIACORE™.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему любое из антител к FXI/FXIa или их антигенсвязывающих фрагментов, которое может представлять собой ДНК или РНК.

В еще одном аспекте настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, описанный выше, который выбран из группы, состоящей из эукариотического вектора экспрессии, прокариотического вектора экспрессии и вирусного вектора.

В еще одном аспекте в настоящем изобретении предложена клетка-хозяин, трансформированная вектором экспрессии, описанным выше, который может представлять собой эукариотическую клетку или прокариотическую клетку.

В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактерий, дрожжей и клетки млекопитающего. В некоторых конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из Escherichia coli, Pichia pastoris, клетку яичника китайского хомячка (СНО) и клетку эмбриональной почки человека (НЕK) 293.

В еще одном аспекте предложен способ получения антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, который включает: экспрессию антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в клетке-хозяине, описанной выше, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки-хозяина.

В еще одном аспекте предложена композиция, например, фармацевтическая композиция, которая содержит: фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель; и терапевтически или профилактически эффективное количество антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного выше. В некоторых конкретных вариантах осуществления фармацевтическая композиция может содержать от 0,01 до 99 мас. % антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента в стандартной дозе, или фармацевтическая композиция может содержать от 0,1 до 2000 мг, в некоторых конкретных вариантах осуществления от 1 до 1000 мг антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента в стандартной дозе.

В некоторых конкретных вариантах осуществления фармацевтическая композиция, описанная выше, находится в лекарственной форме для подкожного введения или внутривенного введения.

В некоторых вариантах осуществления предложена фармацевтическая композиция для подкожного введения, которая содержит терапевтически или профилактически эффективное количество антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, описанного выше. Например, антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, представленную в SEQ ID NO: 58, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, представленную в SEQ ID NO: 51; например, антитело содержит полноразмерную тяжелую цепь, содержащую последовательность, представленную в SEQ ID NO: 61, и полноразмерную легкую цепь, содержащую последовательность, представленную в SEQ ID NO: 62.

В еще одном аспекте в настоящем изобретении предложено применение любого одного или любой комбинации, выбранной из группы, состоящей из следующего, для получения лекарственного средства: антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению и фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство предназначено для применения в лечении или предотвращении заболевания или расстройства, связанного с тромбозом или тромбоэмболией, например, ишемического инсульта и/или тромбоза глубоких вен, связанного с фибрилляцией предсердий.

В настоящем изобретении предложен способ лечения или предотвращения заболевания или расстройства, связанного с тромбозом или тромбоэмболией (или его осложнения), или замедления прогрессирования заболевания или расстройства, связанного с тромбозом или тромбоэмболией (или его осложнения), который включает введение субъекту антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению, или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению в эффективном количестве для лечения или замедления прогрессирования заболевания.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут быть применены в отношении заболевания или расстройства, связанного с образованием тромбов, тромбозом или тромбоэмболией.

Заболевание или расстройство, связанное с тромбозом или тромбоэмболией, включает, но не ограничивается ими: ишемическая болезнь сердца (например, острый коронарный синдром (ACS)), инфаркт миокарда с подъемом ST (STEMI) и инфаркт миокарда без подъема ST (не STEMI), стабильную стенокардию, нестабильную стенокардию, реокклюзию и рестеноз после коронарных вмешательств (таких как ангиопластика, стентирование или аортокоронарное шунтирование), окклюзионное заболевание периферических артерий, эмболию легочной артерии, венозную тромбоэмболию, тромбоз вен (особенно глубоких вен нижних конечностей и почечных вен), транзиторная ишемическая атака, тромботический инсульт и тромбоэмболический инсульт, заболевание легких или легочная гипертензия, вызванная хронической тромбоэмболической легочной гипертензией (СТЕРН).

Стимуляция системы свертывания крови может происходить по различным причинам или при сопутствующих расстройствах. В случае хирургического вмешательства, неподвижности, постельного режима, инфекции, воспаления или рака, лечения рака или т.п., может сильно активироваться система свертывания, и могут возникнуть тромботические осложнения, в частности тромбоз вен. Таким образом, антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут быть использованы для предотвращения тромбоза в случае хирургического вмешательства, особенно для пациентов с раком или пациентов, которые проходят пластическую операцию (такую как артропластика тазобедренного или коленного сустава). Таким образом, антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению также используются для предотвращения тромбоза у пациентов с активированной системой свертывания крови, например, в случае стимуляции.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающие фрагменты и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для лечения и/или предотвращения кардиогенной тромбоэмболии (например, ишемии мозговых артерий, инсульта и системной и местной тромбоэмболии) у пациентов с острой, периодической или постоянной аритмией (например, фибрилляцией предсердий) или перенесших кардиоверсию, или страдающих от заболевания сердечного клапана, или с искусственными клапанами сердца.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для лечения и/или предотвращения диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (DIC). Заболевание может возникать, в частности, в связи с сепсисом или из-за хирургического вмешательства, неопластических заболеваний, ожогов или других травм, и может вызвать серьезное повреждение органов в результате микротромбоза.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для лечения и/или предотвращения тромбоэмболических осложнений. Например, осложнения могут возникать при микроангиопатической гемолитической анемии и, в случае экстракорпорального кровообращения, могут возникать в результате контакта крови с экзогенными поверхностями (такими как гемодиализ, ЕСМО (экстракорпоральная мембранная оксигенация), LVAD (устройство помощи левому желудочку) и аналогичными методами).

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для лечения и/или предотвращения заболеваний, связанных с образованием микротромбов или отложением фибрина в сосудах головного мозга, которые могут привести к деменции, такой как сосудистая деменция или болезнь Альцгеймера.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для предотвращения и/или лечения тромботических и/или тромбоэмболических осложнений, например, венозной тромбоэмболии, у онкологических больных, особенно у тех пациентов, которые перенесли серьезное хирургическое вмешательство или химиотерапию или лучевую терапию.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающие фрагменты и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для лечения и/или предотвращения диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови в контексте следующих заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими: синдром инфекционного заболевания и/или системного воспалительного ответа (SIRS), дисфункцию септических органов, септическую органную недостаточность и полиорганную недостаточность, острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), острое повреждение легких (ALI), септический инсульт и/или септическую органную недостаточность. В случае инфекции может наблюдаться общая активация системы свертывания крови (диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови, также известное как «DIC») с микротромбозом в нескольких органах и осложнениями вторичного кровотечения. Может быть повреждение эндотелия с повышенной проницаемостью сосудов и диффузией (например, экзосмозом) жидкостей и белков организма в полость. По мере прогрессирования инфекции может возникать органная недостаточность (например, почечная недостаточность, печеночная недостаточность, дыхательная недостаточность, нарушение функции центральной нервной системы и сердечно-сосудистая недостаточность) или полиорганная недостаточность. В случае DIC происходит массивная активация системы коагуляции на поверхности поврежденных эндотелиальных клеток, инородных тел или сшитой экстраваскулярной ткани. Таким образом, свертывание происходит в мелких кровеносных сосудах многих органов с ишемией и последующей дисфункцией органов. Вторичным эффектом является потребление факторов свертывания (например, фактора X, протромбина и фибриногена) и тромбоцитов, которые снижают свертываемость крови и могут привести к сильному кровотечению.

Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используются для лечения и/или предотвращения тромботического или тромбоэмболического заболевания и/или воспалительного заболевания и/или заболевания с повышенной сосудистой проницаемостью у пациента, у которого имеется мутация гена, приводящая к повышению активности фермента или повышению уровня профермента, как определено соответствующими экспериментами/измерениями активности фермента или концентрации профермента.

В настоящем изобретении предложено применение антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, и фармацевтической композиции по настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения и/или предотвращения заболевания, в частности, заболевания, описанного выше, например, для получения лекарственного средства для лечения и/или предотвращения тромботического или тромбоэмболического заболевания.

В настоящем изобретении предложен способ антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента и фармацевтической композиции по настоящему изобретению для лечения и/или предотвращения заболевания, описанного выше.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена композиция для обнаружения FXI/FXIa, где композиция содержит антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент. В настоящем изобретении также предложен способ, система или устройство для обнаружения FXI/FXIa in vivo или in vitro, который включает обработку антитела к FXI/FXIa.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ, система или устройство для обнаружения FXI/FXIa in vitro могут, например, включать:

(1) получение тестового образца, контактирующего с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который связывается с FXI/FXIa;

(2) обнаружение комплекса, образованного между антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который связывается с FXI/FXIa и тестируемым образцом; и/или

(3) получение эталонного образца (например, контрольного образца), контактирующего с антителом; и

(4) определение степени образования комплекса между антителом и тестируемым образцом путем сравнения с эталонным образцом.

Например, изменение (например, статистически значимое изменение) в образовании комплекса в тестовом образце, по сравнению с таковым в контрольном образце или субъекте указывает на присутствие FXI/FXIa в тестируемом образце.

В некоторых других вариантах осуществления изобретения способ, система или устройство для обнаружения FXI/FXIa in vivo могут включать:

(1) введение субъекту антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, который связывается с FXI/FXIa; и

(2) обнаружение комплекса, образованного между антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который связывается с FXI/FXIa и тестируемым веществом.

Обнаружение может включать в себя определение места или времени образования комплекса. Антитело, которое связывается с FXI/FXIa, может быть прямо или косвенно мечено детектируемым веществом для облегчения обнаружения связанных или несвязанных антител. Подходящие детектируемые вещества включают различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и радиоактивные материалы. Образование комплекса между антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который связывается с FXI/FXIa и FXI/FXIa, может быть обнаружено путем определения или визуализации антитела, которое связывается или не связывается с FXI/FXIa. Могут быть использованы обычные анализы обнаружения, такие как иммуноферментный анализ (ELISA), радиоиммуноанализ (RIA) или иммуногистохимия тканей.

В некоторых вариантах осуществления образец анализировали на наличие FXI/FXIa с помощью конкурентного иммуноанализа, в котором используется маркер, меченный детектируемым веществом, и немеченное антитело, которое связывается с FXI/FXIa.

В некоторых вариантах осуществления антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут быть мечены флуорофором и хромофором для целей обнаружения.

В некоторых вариантах осуществления также предложен набор, который содержит антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент; и необязательно может содержать инструкции по диагностическому применению. Набор также может содержать по меньшей мере один дополнительный реагент, такой как этикетка или дополнительный диагностический агент. Для применения in vivo антитело может быть составлено в фармацевтическую композицию.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1А-1В: анализ связывания антител к FXI/FXIa с белком FXI/FXIa человека с помощью SPR (поверхностный плазмонный резонанс). На фиг. 1А показаны результаты анализа связывания молекулы 3882 с FXI с помощью SPR; а на фиг. 1 В показаны результаты анализа связывания молекулы 1209 с FXIa с помощью SPR.

Фиг. 2А-2В: анализ ингибирования активности фермента FXIa антителами к FXI/FXIa in vitro. На фиг. 2А показаны результаты анализа ингибирования активности фермента FXIa антителами к FXI/FXIa in vitro; а на фиг. 2В показаны результаты анализа FXIIa-опосредованного ингибирования активности фермента, активирующего FXI, антителами к FXI/FXIa in vitro.

Фиг. 3А-3В: анализ антикоагулянтной активности аРТТ (частично активированное тромбопластиновое время) и РТ (протромбиновое время) в крови человека. На фиг. 3А и 3В показаны результаты анализа аРТТ и РТ антител к FXI/FXIa в крови человека, соответственно.

Фиг. 4А-4В: анализ антикоагулянтной активности аРТТ и РТ в крови обезьян. На фиг. 4А и 4В показаны результаты анализа аРТТ и РТ антител к FXI/FXIa в крови обезьяны, соответственно.

Фиг. 5A-5D: эксперимент на животных на антителах к FXI/FXIa у яванских макак. На фиг. 5А показаны кривые изменения аРТТ, концентрации лекарственного средства в плазме, FXI:C, %, и свободного FXI антитела 3882 у яванских макак; на фиг. 5В показан эффект ингибирования 3882 на тромбоз у яванских макак; и на фиг. 5С и 5D показаны тесты безопасности 3882 у яванских макак с определением времени кровотечения и результатами анализа РТ, соответственно.

Фиг. 6А-6В: результаты анализа фармакодинамики (PD) антител к FXI/FXIa у яванских макак. На фиг. 6А показаны результаты анализа АРТТ; и на фиг. 6В показаны результаты анализа FXI:C (%), где 3882 (1 мг/кг) вводили внутривенно и подкожно, а контроль BAY 1213790 (1 мг/кг) вводили внутривенно.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Термины

Чтобы облегчить понимание настоящего изобретения, некоторые технические и научные термины конкретно определены ниже. Если иное четко не определено в данном документе, все другие технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют значения, обычно понятные специалистам в области техники, к которой относится настоящее изобретение.

Трехбуквенные и однобуквенные коды аминокислот, используемые в данном документе, описаны в J. Biol. Chem, 243, р3558 (1968).

«Фактор XI», также упоминаемый в настоящем документе как «фактор свертывания XI», «FXI» или «fXI», представляет собой двухцепочечный гликопротеин, имеющий молекулярную массу около 160 килодальтонов (кДа). Обе цепи могут представлять собой идентичные полипептиды, имеющие молекулярную массу около 80 000 дальтон; и связаны дисульфидными связями. FXI содержит 4 «яблоковидных» домена (А1-А4 от N-конца, тяжелой цепи) и С-концевой каталитический домен (легкая цепь). Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, полагают, что четыре «яблоковидных» домена содержат сайты связывания для других белков, таких как А1 для тромбина; А2 для НК; A3 для фактора IX (FIX), GPIb (гликопротеин Ib) и гепарина; и А4 для FXIIa. FXI может быть преобразован в активную форму, т.е. фактор XIa (FXIa), фактором ХIIа (FXIIa). Сериновая протеаза FXIa преобразует фактор IХ в IХа, который, в свою очередь, активирует фактор X (Ха). Затем Ха может опосредовать активацию фактора коагуляции II/тромбина.

FXI и FXIa следует понимать в самом широком смысле в рамках объема настоящего изобретения. Термин охватывает природные формы и встречающиеся в природе варианты FXI и FXIa, включая также искусственно экспрессированные формы. FXI (или FXIa) охватывает категорию интактных белков и их эпитопов в случаях, когда вовлечены взаимодействия антиген-антитело, когда это конкретно не указано в контексте.

Термин «антитело» используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, но не ограничиваясь, моноклональные антитела, поликлональные антитела; моноспецифические антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела); и полноразмерные антитела, и фрагменты антител (или антигенсвязывающие фрагменты, или антигенсвязывающие части), при условии, что они проявляют желаемую антигенсвязывающую активность. Антитело может относиться к иммуноглобулину, который представляет собой структуру тетрапептидной цепи, образованную двумя тяжелыми цепями и двумя легкими цепями, связанными межцепочечными дисульфидными связями. Константные области тяжелой цепи иммуноглобулина отличаются по своему аминокислотному составу и расположению, и, таким образом, по своей антигенности. Соответственно, иммуноглобулины можно разделить на пять классов, или изотипов иммуноглобулинов, а именно IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, при этом их соответствующие тяжелые цепи представляют собой μ-цепь, δ-цепь, γ-цепь, α-цепь и ε-цепь, соответственно. Ig одного класса может быть разделен на различные подклассы в зависимости от различий в аминокислотном составе шарнирных областей и количества и положения дисульфидных связей тяжелых цепей; например, IgG может быть разделен на IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4. Легкие цепи классифицируются на κ- или γ-цепи по различиям в константных областях. Каждый из пяти классов Ig может иметь κ-цепь или γ-цепь. В тяжелых и легких цепях антител последовательности около 110 аминокислот вблизи N-конца значительно варьируются и, таким образом, называются вариабельными областями (V-области); остальные аминокислотные последовательности вблизи С-конца являются относительно стабильными и, таким образом, называются константными областями (С-области). Вариабельные области включают 3 гипервариабельные области (CDR) и 4 каркасные области (FR) с относительно консервативными последовательностями. Три гипервариабельные области определяют специфичность антитела и таким образом также известны как определяющие комплементарность области (CDR). Каждая из вариабельных областей легкой цепи (VL) и вариабельных областей тяжелой цепи (VH) состоит из 3 областей CDR и 4 областей FR, расположенных от аминоконца до карбоксильного конца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Три области CDR легкой цепи относятся к LCDR1, LCDR2 и LCDR3, и три области CDR тяжелой цепи относятся к HCDR1, HCDR2 и HCDR3.

Для определения или выявления «CDR» детерминированное изображение CDR и идентификация остатков, содержащих антигенсвязывающие сайты антитела, могут быть выполнены путем разделения структуры антитела и/или разделения структуры комплекса антитело-лиганд. Это может быть достигнуто с помощью любого из множества способов, известных специалистам в данной области техники, таких как рентгеновская кристаллография. Для идентификации CDR можно использовать различные методы анализа, включая, но не ограничиваясь, схему нумерации Кабата, схему нумерации Чотиа, схему нумерации АbМ, схему нумерации IMGT, определение контакта и определение конформации.

Схема нумерации Кабата является стандартом для нумерации остатков в антителах и обычно используется для идентификации областей CDR (см., например, Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-218).

Схема нумерации Чотиа аналогична схеме нумерации Кабата, за исключением того, что она учитывает расположение определенных структурных областей петли (см., например, Chothia et al., 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature, 342: 877-883).

Схема нумерации АbМ использует набор интеграции компьютерной программы для моделирования структур антител, изготовленный Oxford Molecular Group (см., например, Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86: 9268-9272; «АbМТМ, A Computer Program for Modelling Variable Regions of Antibodies», Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd.). Схема нумерации АbМ использует комбинацию информационной базы данных и метода de-novo для моделирования третичной структуры антител из основных последовательностей (см. те, которые описаны в Samudrala et al., 1999, «Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach», Proteins, Structure, Function and Genetics Suppl., 3: 194-198).

Определение контакта основано на анализе доступных сложных кристаллических структур (см., например, MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 5: 732-745). В конформационном определении положения CDR может быть идентифицировано как остатки, которые способствуют энтальпии связывания антигена (см., например, Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283: 1156 1166).

Другие определения границ CDR могут строго не следовать одному из вышеуказанных способов, но все же пересекаться с по меньшей мере частью CDR, определенных по Кабату хотя они могут быть укорочены или удлинены на основании прогнозов или экспериментальных результатов о том, что конкретный остаток или группа остатков существенно не влияют на связывание антигена. В данном контексте CDR может относиться к CDR, определенной любым способом, известным в данной области техники, включая комбинации способов.

Аминокислотные остатки CDR областей VL и VH антитела или антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению соответствуют известной схеме нумерации Кабата с точки зрения количества и положений. Когда схема нумерации Кабата не принята, специалист в данной области техники может определить соответствующие эквивалентные сайты в различных схемах нумерации по сравнению с аминокислотными сайтами в CDR согласно настоящему изобретению. В другом примере специалист в данной области техники может также определить такие эквивалентные сайты путем анализа выравнивания аминокислотных последовательностей.

«CL», «область CL» и «домен CL» используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения константной области легкой цепи.

«СН», «область СН» и «домен СН» используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения константной области тяжелой цепи и включают области или домены «СН1», «СН2» и «СН3».

«Антитело человека» или «рекомбинантное антитело человека» включает антитела человека, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные рекомбинантными способами, включающими методики и способы, хорошо известные в данной области техники, такие как:

(1) антитела, выделенные из трансгенных генов иммуноглобулина человека, трансхромосомных животных (например, мышей) или гибридом, полученных из них;

(2) антитела, выделенные из клеток-хозяев, которые были трансформированы для экспрессии антител, такие как трансфектомы;

(3) антитела, выделенные из рекомбинантных комбинаторных библиотек антител человека; и

(4) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные такими способами, как сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулина человека с другими последовательностями ДНК.

Такие рекомбинантные человеческие антитела содержат вариабельные и константные области, в которых используются специфические последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, кодируемые генами зародышевой линии, а также включают последующие перестройки и мутации, которые происходят, например, во время созревания антитела.

Термин «мышиное антитело» в настоящем описании относится к моноклональному антителу к FXI/FXIa человека или его эпитопу полученному в соответствии со знаниями и навыками в данной области техники. Во время получения испытуемому субъекту вводят антиген FXI/FXIa, а затем выделяют гибридомы, экспрессирующие антитела с желаемыми последовательностями или функциональными свойствами. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения мышиное антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент могут дополнительно содержать константную область легкой цепи мышиной κ- или γ-цепи или ее варианта или дополнительно содержать константную область тяжелой цепи мышиного IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, или их варианта.

Термин «человеческое антитело» включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Человеческие антитела по настоящему изобретению могут включать аминокислотные остатки, которые не кодируются последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии человека (например, мутации, введенные случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или соматическими мутациями in vivo). Однако термин «человеческое антитело» не включает гуманизированные антитела.

Термин «гуманизированное антитело», также известный как CDR-трансплантированное антитело, относится к антителу, полученному путем прививания последовательностей CDR нечеловеческих видов в каркас вариабельных областей человеческого антитела. Такое антитело может преодолеть сильный иммунный ответ, индуцированный химерным антителом, благодаря переносу большого количества гетерологичных белковых компонентов. Чтобы избежать снижения активности, вызванного снижением иммуногенности, вариабельные области человеческого антитела могут быть подвергнуты минимальной обратной мутации для поддержания активности.

Термин «химерное антитело» относится к антителу, полученному слиянием вариабельной области антитела первого вида с константной областью второго вида, которое может снижать иммунный ответ, индуцированный антителом первого вида. В качестве примера, химерное антитело получали, сначала устанавливая гибридому секретирующую мышиное специфическое моноклональное антитело, затем клонируя ген вариабельной области из клеток гибридомы мыши, клонируя ген константной области человеческого антитела по мере необходимости, соединяя ген вариабельной области мыши и ген константной области человека в химерный ген, вставляя химерный ген в человеческий вектор и, наконец, экспрессируя молекулы химерного антитела в эукариотической промышленной системе или прокариотической промышленной системе. Константная область антитела человека может быть выбрана из группы, состоящей из константных областей тяжелой цепи IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 человека или их вариантов, предпочтительно содержащих константные области тяжелой цепи IgG2 или IgG4 человека, или IgG1, мутированного в аминокислотах без ADCC (антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность).

Термин «антигенсвязывающий фрагмент» включает одноцепочечное антитело (т.е. тяжелую и легкую цепи); Fab, модифицированный Fab, Fab', модифицированный Fab', F(ab')₂, Fv, Fab-Fv, Fab-dsFv, однодоменное антитело (например, VH или VL или VHH), scFv, бивалентное или трехвалентное или четырехвалентное антитело, Bis-scFv, диатело, тритело, триатело, тетратело и эпитоп-связывающий фрагмент любого из вышеперечисленных (см., например, Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech. 23 (9): 1126-1136; Adair and Lawson, 2005, Drug Design Reviews-Online 2 (3), 209-217). Способы продуцирования и получения таких фрагментов антител хорошо известны в данной области техники (см., например, Verma et al., 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181). Fab-Fv был впервые раскрыт в WO2009/040562, а его дисульфид-стабилизированная форма Fab-dsFv была впервые раскрыта в WO2010/035012. Антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению также включает фрагменты Fab и Fab', описанные в WO2005/003169, WO2005/003170 и WO2005/003171. Мультивалентные антитела могут включать мультиспецифические, например, биспецифические или моноспецифические антитела (см., например, W092/22583 и WO05/113605).

«Вариант» относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере одну аминокислотную модификацию (такую как замена, делеция или вставка) по сравнению с «исходной» аминокислотной последовательностью, при условии, что вариант все еще способен связываться с FXI/FXIa, в частности, с FXI/FXIa человека, представленным в SEQ ID NO: 1. Предпочтительно, вариант проявляет аналогичные или даже улучшенные свойства по сравнению с антителами 0012, 1209, 1267, 3807, 3871 и 3882 в примерах настоящего изобретения. Варианты связывающих молекул (например, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента) согласно настоящему изобретению обычно получали путем введения соответствующих нуклеотидных изменений в нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или фрагмент антитела, или путем синтеза пептидов. Как правило, описанная выше аминокислотная модификация может быть введена в вариабельные или константные области. Например, по сравнению с антителом к FXI/FXIa в примерах настоящего изобретения, аминокислотные модификации могут быть введены для модуляции свойств антитела, влияющих на разработку лекарственного средства, таких как термодинамическая стабильность, растворимость или вязкость («оптимизация последовательности»).

Аминокислотная модификация включает, например, делеции и/или вставки и/или замены остатков в аминокислотной последовательности связывающей молекулы, предпочтительно антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Любая комбинация делеций, вставок и замен может быть введена в «исходную» аминокислотную последовательность для получения окончательного варианта. Аминокислотная модификация также включает изменения в посттрансляционных процессах связывающей молекулы, такие как изменения в количестве или положении сайтов гликозилирования. Например, в зависимости от длины самих CDR и FR, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислот могут быть вставлены или удалены из каждой CDR, и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 25 аминокислот могут быть вставлены или удалены из каждой FR. Варианты встраивания связывающих молекул (в частности, антитела или фрагмента антитела) согласно настоящему изобретению включают продукты слияния антитела или фрагмента антитела с ферментом или другим функциональным полипептидом (например, который увеличивает период полувыведения связывающей молекулы (например, антитела или фрагмента антитела)). Кроме того, аминокислотные замены могут быть введены в области CDR, VH или FR тяжелой и/или легкой цепи. Консервативные замены являются предпочтительными, например, они могут быть осуществлены на основе сходства в полярности, заряде, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или свойствах амфипатии вовлеченных остатков.

«Консервативная замена» относится к замене на другой аминокислотный остаток, имеющий свойства, аналогичные с исходным аминокислотным остатком. Например, лизин, аргинин и гистидин имеют аналогичные свойства в том, что они имеют основные боковые цепи, а аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота имеют аналогичные свойства в том, что они имеют кислотные боковые цепи. Кроме того, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин и триптофан имеют аналогичные свойства в том, что они имеют незаряженные полярные боковые цепи, а аланин, валин, лейцин, треонин, изолейцин, пролин, фенилаланин и метионин имеют аналогичные свойства в том, что они имеют неполярные боковые цепи. Кроме того, тирозин, фенилаланин, триптофан и гистидин обладают аналогичными свойствами, поскольку они имеют ароматические боковые цепи. Таким образом, специалистам в данной области техники будет очевидно, что даже когда аминокислотный остаток в группе, проявляющей аналогичные свойства, как описано выше, замещен, он не будет проявлять конкретного изменения свойств.

В дополнение к CDR и FR, модификации также могут быть введены в Fc-часть связывающих молекул (предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент). Такие модификации могут быть использованы для модулирования функциональных свойств антитела, например, взаимодействия с белками комплемента (такими как Clq и/или Fc-рецепторы) на других иммунных клетках, или для модулирования периода полувыведения в сыворотке или антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC). Мутации, которые изменяют эффекторную функцию, могут быть введены в Fc-домен обычными способами, известными в данной области техники. Иллюстративные модификации включают: Asn297 → Аlа297 и Asn297 → Gln297, или Lys322 → Аlа322, и необязательно Leu234 → А1а234 и Leu235 → Аlа234, приводящие к гликозилированию IgG1, которые, как сообщается, снижают или устраняют клеточную цитотоксичность, опосредованную антителами (ADCC), и/или комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC).

Примеры способов увеличения периода полувыведения из сыворотки включают добавление пептидных или белковых доменов, которые связываются с другими белками в организме человека, такими как сывороточный альбумин, Fc-область иммуноглобулина или неонатальный Fc-рецептор (FcRn). Другие возможные способы увеличения периода полувыведения в сыворотке включают: удлинение аминоконца полипептидными цепями различной длины (например, технология XTEN или PASylation®), конъюгацию с небелковыми полимерами, включая, но не ограничиваясь ими: различные многоатомные спирты, такие как полиэтиленгликоль (PEGylation), полипропиленгликоль, полиалкиленоксид или сополимер полиэтиленгликоля с полипропиленгликолем; или углеводы, такие как гидроксиэтиловый крахмал (например, HESylation®) или полизиаловая кислота (например, PolyXen®). Кроме того, как известно в данной области техники, аминокислотные замены могут быть осуществлены в различных положениях в связывающих молекулах для облегчения добавления полимеров.

Термин «связывание с FXI/FXIa» в настоящем документе относится к способности взаимодействовать с FXI/FXIa или его эпитопом, где FXI/FXIa или его эпитоп может быть получен от человека.

Термин «антигенсвязывающий сайт», в данном документе относится к непрерывному или прерывистому трехмерному пространственному сайту на антигене, который распознается антителом или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению.

Термин «эпитоп» относится к сайту антигена, с которым связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитопы могут быть образованы из смежных аминокислот или несмежных аминокислот, которые сближены в пространстве за счет третичной укладки белка. Эпитоп, образованный из смежных аминокислот, как правило, сохраняется после воздействия денатурирующего растворителя, в то время как эпитоп, образованный третичной укладкой, как правило, теряется после обработки денатурирующим растворителем. Эпитоп обычно существует в уникальной пространственной конформации и содержит, например, по меньшей мере 3-15 аминокислот. Способы определения того, какой эпитопа хорошо известны в данной области техники и включают анализ методом иммуноблоттинга, анализ иммунопреципитации и тому подобное. Способы определения пространственной конформации эпитопа включают методы в данной области техники и методы, описанные в данном документе, такие как рентгеновская кристаллография и двумерный ядерный магнитный резонанс.

Термин «специфическое связывание» или «селективное связывание» относится к связыванию антитела с эпитопом на заданном антигене. Как правило, антитело связывается с заданным антигеном или его эпитопом с равновесной константой диссоциации (K_D), составляющей около менее 10^-7 М или даже менее, и с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза выше, чем его аффинность отношении связывания с неспецифическим антигеном, отличным от заданного антигена, или его эпитопа, (или неспецифические антигены, отличные от близкородственных антигенов, например, BSA и т.д.), при определении с помощью методов поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в приборе с использованием рекомбинантного FXI/FXIa человека или его эпитопа в качестве анализируемого вещества и антитела в качестве лиганда.

«Аффинность» относится к общей силе нековалентного взаимодействия между одним сайтом связывания молекулы (например, антитела) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Если не указано иное, используемый в данном документе термин «аффинность связывания» относится к аффинности внутреннего связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между членами пары связывания (например, антителом и антигеном). Аффинность молекулы X к ее лиганду Y обычно может быть выражена равновесной константе диссоциации (KD). Аффинность может быть определена обычными способами, известными в данной области техники, включая описанные в данном документе. Термин «kassoc» или «ка» относится к скорости ассоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген, в то время как термин «kdis» или «kd», используемый в настоящем документе, предназначен для обозначения скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. В данном контексте термин «KD» относится к равновесной константе диссоциации, которая получена из отношения kd к kа (т.е. kd/ka) и выражена как молярная концентрация (М). Значения KD антител могут быть определены способами, известными в данной области техники, например, способы определения KD антитела включают измерение поверхностного плазмонного резонанса с использованием биосенсорной системы, такой как система, или измерение аффинности в растворе с помощью анализа титрования при равновесии в растворе (SET). Термин «перекрестная реактивность» относится к способности антитела (или его фрагмента) согласно настоящему изобретению связываться с FXI/FXIa различных видов. Например, антитело по настоящему изобретению, которое связывается с FXI/FXIa человека, также может связываться с FXI/FXIa другого вида. Перекрестную реактивность определяли путем обнаружения специфической реактивности с очищенным антигеном в анализах связывания (например, SPR или ELISA) или связывания или функциональных взаимодействий с клетками, физиологически экспрессирующими FXI/FXIa. Способы определения перекрестной реактивности включают стандартные анализы связывания, как описано в настоящем документе, например, анализ поверхностного плазмонного резонанса или проточную цитометрию.

Термины «ингибирование» и «блокирование» используются взаимозаменяемо и охватывают частичное и полное ингибирование/блокирование. Ингибирование или блокирование FXI/FXIa предпочтительно снижает или изменяет нормальный уровень или тип активности, который имеет место, когда связывание FXI/FXIa происходит без ингибирования или блокирования. Ингибирование и блокирование также предназначены для включения любого измеримого снижения аффинности связывания FXI/FXIa при контакте с антителом к FXI/FXIa по сравнению с FXI/FXIa, не контактирующим с антителом к FXI/FXIa.

Предполагается, что термин «ингибирование роста» (например, с участием клеток) включает любое измеримое снижение роста клеток.

Способы получения и очистки антител и антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны в данной области техники и могут быть найдены, например, в «Antibodies: А Laboratory Manual», Cold Spring Harbor Press (главы 5-8 и 15). Например, мыши могут быть иммунизированы FXI/FXIA человека или его фрагментом, и полученные антитела могут быть ренатурированы и очищены, а аминокислотное секвенирование может быть выполнено с помощью обычных способов. Аналогично, антигенсвязывающие фрагменты также могут быть получены с помощью общепринятых способов. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, описанные в данном изобретении, генетически сконструированы таким образом, чтобы содержать одну или более дополнительных FR человека в CDR нечеловеческого происхождения. Последовательности FR зародышевой линии человека можно получить из ImMunoGeneTics (IMGT) или из Immunoglobulin Journal, 2001ISBN012441351.

Сконструированное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению можно получить и очистить обычными методами. Например, последовательности кДНК, кодирующие тяжелую и легкую цепи, можно клонировать и рекомбинировать в вектор экспрессии. Рекомбинантный вектор экспрессии может стабильно трансфицировать клетки СНО. Системы экспрессии млекопитающих могут привести к гликозилированию антител, в частности, на высококонсервативном N-конце области Fc. Стабильные клоны получают путем экспрессии антител, специфически связывающихся с антигеном человеческого происхождения. Положительные клоны размножали в бессывороточной среде биореактора для получения антител. Культуральная среда с секретируемым антителом может быть очищена и собрана обычными способами. Антитело можно фильтровать и концентрировать обычными методами. Растворимые смеси и полимеры также можно удалить обычными методами, такими как молекулярные сита и ионный обмен. Полученный продукт должен быть немедленно заморожен, например, при минус 70°С, или лиофилизирован.

Антитело, описанное в настоящем документе, относится к моноклональному антителу (mAb), то есть антителу, полученному из одного клонального клеточного штамма, который не ограничивается эукариотическими, прокариотическими или фаговыми клональными клеточными штаммами. Моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут быть получены, например, с помощью гибридомной технологии, рекомбинантной технологии, технологии фагового дисплея, технологии синтеза (например, CDR-прививания) или других технологий, известных в данной области техники.

Антитела могут быть подвергнуты конкурентному скринингу на связывание с одним и тем же эпитопом с использованием обычных способов, известных специалистам в данной области техники. Например, исследования конкуренции и перекрестной конкуренции могут быть осуществлены для получения антител, которые конкурируют или перекрестно конкурируют друг с другом за связывание с антигеном. Высокопроизводительный способ получения антител, которые связываются с одним и тем же эпитопом на основе их перекрестной конкуренции, описан в международной патентной публикации №WO 03/48731. Следовательно, антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, которые конкурируют с молекулой антитела по настоящему изобретению за связывание с одним и тем же эпитопом на FXI/FXIa, могут быть получены путем обычных способов, известных специалистам в данной области техники.

Термины «лечение», «введение» и «обработка», когда они применяются к животным, людям, экспериментальным субъектам, клеткам, тканям, органам или биологическим жидкостям, относятся к приведению в контакт экзогенного лекарственного средства, терапевтического агента, диагностического агента или композиции с животными, людьми, субъектами, клетками, тканями, органами или биологическими жидкостями. Термины «лечение», «введение» и «обработка» могут относиться, например, к терапевтическим, фармакокинетическим, диагностическим, исследовательским и экспериментальным способам. Обработка клеток включает приведение реагента в контакт с клетками и приведение реагента в контакт с жидкостью, где жидкость находится в контакте с клетками. Термины «лечение», «введение» и «обработка» также относятся к обработке, например, клетки, реагентом, диагностике, связывающей композицией или другой клеткой in vitro и ex vivo. «Лечение» применительно к людям, ветеринарным или исследовательским субъектам, относится к терапевтическому лечению, предупредительной или профилактической мерам, и исследовательским и диагностическим применениям.

«Лечение» относится к введению терапевтического агента, такого как композиция, содержащего любое из антител или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, либо вовнутрь, либо снаружи субъекту, который имел, подозревается в наличии или предрасположен к одному или более заболеваниям или его симптомам, на которые, как известно, что терапевтический агент оказывает терапевтическое действие. Как правило, терапевтический агент вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или более симптомов заболевания у субъекта или популяции, получавших лечение, для индуцирования регрессии таких симптомов или для ингибирования развития таких симптомов в любой клинически измеримой степени. Количество терапевтического агента, эффективное для облегчения любого конкретного симптома заболевания (также называемое «терапевтически эффективным количеством»), может варьироваться в зависимости от таких факторов, как стадия заболевания, возраст и вес субъекта, а также от способности лекарственного средства производить желаемый терапевтический эффект у субъекта. Облегчение симптома заболевания может быть оценено с помощью любых методов клинического тестирования, обычно используемых врачами или другими специалистами в области здравоохранения для оценки тяжести или прогрессирования симптома. Хотя варианты осуществления настоящего изобретения (например, способы лечения или изделия) могут быть неэффективными для облегчения симптомов представляющего интерес заболевания у конкретного субъекта, они должны облегчать симптомы представляющего интерес заболевания у статистически значимого количества субъектов, как определено любым статистическим методом тестирования, известным в данной области техники, таким как t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат, U-критерий Манна и Уитни, критерий Крускала-Уоллиса (Н-критерий), критерий Джонкера-Терпстра и критерий Уилкоксона.

«Эффективное количество» включает количество, достаточное для облегчения или предотвращения появления симптома или состояния медицинского заболевания. Эффективное количество также относится к количеству, достаточному для обеспечения или облегчения диагностики. Эффективное количество для конкретного субъекта или ветеринарного субъекта может варьироваться в зависимости от таких факторов, как расстройство, подлежащее лечению, общее состояние здоровья субъекта, способ, и путь, и дозировка введения, а также тяжесть побочных эффектов. Эффективное количество может представлять собой максимальную дозу или режим введения, чтобы избежать значительных побочных эффектов или токсических эффектов.

«Гомология» или «идентичность» относится к сходству последовательностей между двумя полинуклеотидными последовательностями или между двумя полипептидами. Когда положения в двух сравниваемых последовательностях заняты идентичными основаниями или субъединицами аминокислотного мономера, например, если положение каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то молекулы гомологичны в этом положении. Процент гомологии между двумя последовательностями является функцией количества совпадающих или гомологичных положений, общих для двух последовательностей, деленного на количество сравниваемых положений х 100%. Например, если 6 из 10 положений совпадают или гомологичны, когда две последовательности оптимально выровнены, две последовательности гомологичны на 60%. Как правило, при выравнивании двух последовательностей проводят сравнение для получения максимального процента гомологии.

Термины «клетка», «клеточная линия» и «клеточная культура» используются взаимозаменяемо, и все такие обозначения включают их потомство. Также следует понимать, что все потомки могут не быть точно идентичными по содержанию ДНК из-за преднамеренных или непреднамеренных мутаций. Это определение включает мутантное потомство с той же функцией или биологической активностью, что и в исходных трансформированных клетках.

Термин «необязательный» или «необязательно» означает, что событие или обстоятельство, описанное далее, может, но не безусловно, иметь место, и что такое описание включает случаи, когда событие или обстоятельство происходит или не происходит. Например, «необязательно содержащий 1-3 вариабельные области тяжелой цепи антитела» означает, что вариабельная область тяжелой цепи антитела конкретной последовательности может, но не обязательно, присутствовать.

Термин «фармацевтическая композиция» относится к смеси, содержащей одно или более антител и их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящем документе, или их физиологически/фармацевтически приемлемую соль, или пролекарство и другие химические компоненты, например, физиологически/фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты. Фармацевтическая композиция предназначена для облегчения введения в организм, что облегчает абсорбцию активного ингредиента, тем самым осуществляя биологическую активность.

Примеры

Настоящее изобретение дополнительно описано ниже со ссылкой на примеры, которые, однако, не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Экспериментальные процедуры без конкретных условий, указанных в примерах или тестовых примерах, обычно проводят в соответствии с обычными условиями или в соответствии с условиями, рекомендованными производителями исходных материалов или коммерческих продуктов, см. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., Greene Publishing Association, Wiley Interscience, NY. Реагенты без указания конкретного происхождения являются коммерчески доступными общепринятыми реагентами.

Пример 1. Получение антигена FXI/FXIa человека и детектирующего белка

1. Белок FXI/FXIa человека

Белок FXI/FXIa человека (Uniprot Асе №Р03951) был приобретен в исследовательских лабораториях ферментов (FXI: кат. №HFXI 1111; FXIa: HFXIa 1111а) в качестве антигена и белка для обнаружения, участвующих в настоящем описании. Если не указано иное, следующим антигеном FXI/FXIa был человеческий антиген FXI/FXIa.

>Аминокислотная последовательность FXI/FXIa человека:

Следующие KLH-конъюгированные (KLH - гемоцианин лимфы улитки) FXIa-специфические полипептиды были синтезированы для иммунизации мышей.

2. Очистка FXFFXIa-связанного рекомбинантного белка и очистка гибридомного антитела и рекомбинантного антитела

(1) Разделение и очистка/аффинная хроматография с белком G (ProteinG) супернатанта гибридомы мыши:

Для очистки супернатанта гибридомы мыши, упаковочный материал белка G (KANEKA: кат. №KanCapTMG) был предпочтительным для аффинной хроматографии. Культивированную гибридому центрифугировали с получением супернатанта, которую затем очищали с помощью гравитационной колонки, заполненной супернатанта белка G. Во-первых, колонку регенерировали 3-5 объемами колонки 6 М гидрохлоридом гуанидина (Sigma: кат. №G3272-1KG) и промывали 3-5 объемами колонки чистой водой; колонку уравновешивали 3-5 объемами колонки 1×PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) (рН 7,4) (Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.: кат. №E607016-0500) буферную систему в качестве уравновешивающего буфера; супернатант загружали в колонку при низкой скорости потока для связывания, при этом скорость потока контролировали, чтобы обеспечить время удерживания около 1 минуты или дольше; колонку промывали 3-5 объемами колонки 1×PBS (рН 7,4) до тех пор, пока УФ-поглощение (УФ -ультрафиолетовое) не упало до исходного уровня; образец элюировали буфером 0,1 М глицином (рН 3,0) (Sigma: кат. №410225-250G), пики элюирования собирали с помощью УФ-обнаружения, и элюированный продукт быстро доводили до рН 7-8 с помощью 1 М Трис-HCl (рН 8,0) (Vetec, кат. №V900483) и временно хранили. Для элюированного продукта вытеснение раствора может быть выполнено способами, хорошо известными специалистам в данной области техники, такими как концентрация ультрафильтрацией с использованием ультрафильтрационной трубки для замены раствора в желаемой буферной системе или замена на желаемую буферную систему путем разделения по размеру (например, опреснение G-25).

(2) Экстракция Fc-меченого слитого белка или антитела человека с помощью аффинной хроматографии на белке A (Protein А):

Во-первых, клеточную культуру, экспрессирующую слитый белок Fc или антитело, центрифугировали с высокой скоростью с получением супернатанта. Аффинную колонку с белком A (GE, кат.: 17-5474-99) регенерировали 5 объемами колонки 0,1 М NaOH (Sigma: кат.: 71687-500g) и промывали и уравновешивали 5 объемами колонки 1×PBS (рН 7,4) (Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.: кат. №E607016-0500). Супернатант загружали при низкой скорости потока для связывания, при этом скорость потока контролировали, чтобы обеспечить время удерживания около 1 минуты или дольше. После завершения связывания колонку промывали 5 объемами колонки 1×PBS (рН 7,4) до тех пор, пока УФ-поглощение не упало до исходного уровня. Образец элюировали 0,1 М глицином (рН 3,0) (Sigma: кат. №410225-250G), пики элюирования собирали с помощью УФ-обнаружения, и элюированный продукт быстро доводили до рН 7-8 с помощью 1 М Трис-HCl (рН 8,0) (Vetec, кат. №V900483) и временно хранили. Для элюированного продукта вытеснение раствора может быть выполнено способами, хорошо известными специалистам в данной области техники, такими как концентрация ультрафильтрацией с использованием ультрафильтрационной трубки для замены раствора в желаемой буферной системе или замена на желаемую буферную систему путем разделения по размеру (например, опреснение G-25).

(3) Очистка с помощью анионной хроматографии:

Во-первых, образец разбавляли уравновешивающим буфером (20 мМ Трис рН 8,0 (Vetec, кат. №V900483)), чтобы обеспечить проводимость менее 3 мс/см, и колонку для анионной хроматографии Q HP (GE, кат.: 17-1014-01) регенерировали с 5 объемами колонки 0,5 М NaOH (Sigma кат.: 71687-500g) и промывали и уравновешивали 15 объемами колонки 20 мМ Трис рН 8,0 (Vetec, кат. №V900483). Супернатант загружали при низкой скорости потока для связывания, при этом скорость потока контролировали, чтобы обеспечить время удерживания около 2 минут или дольше. После завершения связывания колонку промывали 10 объемами колонки 20 мМ Трис рН 8,0 (Vetec, кат. №V900483) до тех пор, пока УФ-поглощение не снизится до исходного уровня. 0-100% градиентное элюирование проводили с помощью элюирующего буфера (20 мМ Трис рН 8,0 (Vetec, кат. №V900483)) и 0,5 М NaCl (Vetec, кат. №V900058); пики элюирования детектировали и собирали в соответствии с чистотой SEC-UPLC (UPLC - сверхэффективная жидкостная хроматография) (колонка: Waters ACQUITY UPLC® Protein ВЕН SEC колонка 200А, 1,7 мкм, кат. №186005225). Для элюированного продукта вытеснение раствора может быть выполнено способами, хорошо известными специалистам в данной области техники, такими как концентрация ультрафильтрацией с использованием ультрафильтрационной трубки для замены раствора в желаемой буферной системе или замена на желаемую буферную систему путем разделения по размеру (например, опреснение G-25).

Пример 2. Скрининг антител, которые специфически связываются с FXI/FXIa Антитела, обладающие высокой аффинностью к FXIa, получали путем скрининга полностью человеческой одноцепочечной фаговой библиотеки антител. 100 мкг Dynabeads MyOne Streptavidin Т1 связывали с 2 мкг случайно биотинилированного белка FXIa при комнатной температуре в течение 1 часа. Систему промывали PBST (PBS с Tween-20) (0,05% Tween-20) 3 раза, и обезжиренное молоко растворяли в 1×PBS для получения конечной концентрации 2% и использовали в качестве блокирующего раствора, который затем добавляли в систему для блокирования при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли библиотеку фагового дисплея полностью человеческого одноцепочечного антитела, заблокированную 2% молоком при комнатной температуре в течение 1 часа, и реагировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Систему промывали PBST (0,05% Tween-20), рН 7,4, раствор 11 раз, каждый раз по 20 переворачиваний вверх/вниз, для удаления несвязанных фагов. Остальные фаги, специфически связывающиеся с FXIa, элюировали 0,5 мл 1 мг/мл трипсином и отдельно использовали для инфицирования Е. coli TG1 в логарифмической фазе роста, а фаги генерировали и очищали для следующего цикла скрининга. Тот же процесс скрининга повторяли в течение 2-3 циклов с постепенным снижением количества FXIa до 0,5 мкг (для второго цикла) и до 0,1 мкг (для третьего цикла). После третьего цикла скрининга положительные клоны обогащали.

Из отобранных и обогащенных клонов отбирали моноклональные колонии и упаковывали в одноцепочечные фаги антител для фагового ELISA. Планшеты для ELISA покрывали 1 мкг/мл белком FXIa, оставляли при 4°С в течение ночи, промывали PBST (0,05% Tween-20) 3 раза, блокировали 2% обезжиренным молоком в течение 1 часа при комнатной температуре и промывали PBST (0,05% Tween-20) 3 раза. После этого добавляли фаговый супернатант, разбавленный блокирующим раствором, и подвергали реакции при комнатной температуре в течение 1 часа, и планшет промывали PBST (0,05% Tween-20) 6 раз. Добавляли анти-М13 HRP (Sino Biological Inc., 11973-ММ05Т-Н) и подвергали реакции при комнатной температуре в течение 1 часа, и планшет промывали PBST (0,05% Tween-20) 3 раза. Добавляли 100 мкл хромогенного субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) и добавляли 100 мкл 1 М серной кислоты, чтобы остановить реакцию. Значения поглащения при 450 нм считывали с помощью считывателя микропланшетов SpectraMax М5 для анализа. Клоны со значениями OD₄₅₀ (OD -оптическая плотность), более чем в 3 раза превышающими фоновое значение в тесте связывания ELISA, секвенировали с получением высоко аффинных одноцепочечных антител.

Пример 3. Конструирование интактных моноклональных антител к FXI/FXIa

Высокоаффинные специфические последовательности, полученные путем скрининга в Примере 2, использовали для конструирования интактных рекомбинантных антител. Затем проводили анализ связывания ELISA, анализ взаимодействия белка ForteBio и анализ ингибирования активности фермента FXIa, чтобы определить, что два антитела обладают сильной связывающей способностью и способны эффективно ингибировать активность фермента FXIa. Последовательности интактных вариабельных областей следующие:

SEQ ID NO: 6

(Примечание: для антитела применялась схема нумерации Кабата).

В последовательностях вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела области были расположены в следующем порядке: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, причем подчеркнутые части представляли собой последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно. Последовательности CDR каждой из тяжелой и легкой цепей обобщены в Таблице 1.

Пример 4. Созревание аффинности моноклональных антител к FXI/FXIa Молекулу антитела 0012 подвергали трехмерному структурному моделированию, которое имитирует связывание с известной антигенной структурой (PDB ID: 6AOD, Цепь: С). Часть аминокислотных остатков отбирали, обращаясь к горячим точкам мутаций генов зародышевой линии человека, трехмерной структуре и результатам моделирования связывания для создания нескольких фаговых библиотек статистических мутаций. Функциональные антитела с улучшенной аффинностью отбирали с использованием технологии библиотеки фагового дисплея. Новые аминокислотные остатки, полученные из различных библиотек, объединяли и верифицировали для получения функциональных антител с улучшенной аффинностью и функцией. Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи полученных молекул антитела являются следующими:

Для вышеуказанных последовательностей применялась схема нумерации Кабата, области были расположены в следующем порядке: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, причем подчеркнутые части в последовательности представляли собой CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно.

Вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи 0012-F3 представляли собой F-VH и 3-VL, соответственно; вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи 0012-Н3 представляли собой H-VH и 3-VL, соответственно; вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи 0012-J3 представляли собой J-VH и 3-VL, соответственно; и вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи 0012-K3 (т.е. 1209) представляли собой K-VH и 3-VL, соответственно.

Пример 5. Конструирование для снижения иммуногенности полностью человеческих моноклональных антител к FXI/FXIa

С помощью трехмерного структурного гомологичного моделирования выбранных полностью человеческих специфических молекул антител в сочетании с результатами сравнения с базой данных V-base последовательностей зародышевой линии человека и базой данных IMGT генов вариабельной области тяжелой цепи антитела зародышевой линии человека в качестве матриц были выбраны гены зародышевой линии тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи с высокой гомологией со скринированными антителами, а FR-область и CDR-область исходного моноклонального антитела были сконструированы так, чтобы сделать последовательности ближе к генам зародышевой линии человека, сохраняя их функции. На привитых антителах проводили трехмерное структурное моделирование и анализ, а на специфических участках в областях FR, которые влияли на структуру и морфологию областей CDR, осуществляли обратные мутации. Аминокислотные остатки идентифицировали с использованием схемы нумерации Кабата и аннотировали. Сконструированные антитела обладают более высокой стабильностью и более низкой иммуногенностью.

Выбор архитектур генов зародышевой линии антител, созревших с аффинностью

После анализа для антитела 0012 в качестве матрицы тяжелой цепи использовали ген зародышевой линии человека VH1-24 в базе данных Vbase, а в качестве матрицы легкой цепи использовали ген зародышевой линии человека VKIIIA27 в базе данных Vbase.

После генной инженерии получали антитела Fg3g (т.е. 1268), Hg3g, Jg3g и Kg3g (т.е. 1267). Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи этих антител являются следующими:

Для вышеуказанных антител схема нумерации CDR являлась схема нумерации Кабата. Области были расположены в следующем порядке: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, с подчеркнутыми участками CDR1, CDR2 и CDR3 в последовательности, соответственно.

Каждая из вариабельных областей тяжелой цепи была слита с CHI (SEQ ID NO: 13) соответствующего антитела человека, затем слита с Fc IgG1 (SEQ ID NO: 67), a вариабельная область легкой цепи была слита с к человека (SEQ ID NO: 14) с образованием рекомбинантного антитела для последующего анализа.

>СН1 антитела человека:

>IgGlFc антитела человека:

>Сκ легкой цепи антитела человека:

Последовательности полноразмерных тяжелых и легких цепей антитела, проиллюстрированные в 1209:

Пример 6. Скрининг и получение моноклональных антител к FXI/FXIa-гибридомы

1. Иммунизация мышей

Shanghai ChemPartner было поручено провести эксперименты по иммунизации и слиянию спленоцитов. 5 белых мышей SJL и 5 белых мышей Balb/c иммунизировали смесью 25 мкг антигена FXIa и 3 KLH-конъюгированных полипептидов и адъюванта. Иммунизацию проводили в день 0, день 14 и день 35. В день 0, 25 мкг эмульгированного антигена вводили внутрибрюшинно (IP) каждой мыши. На 14-й и 35-й день вводили 12,5 мкг эмульгированного антигена. Кровь собирали на 21-й и 42-й день, а титр антител в сыворотке крови мышей определяли с помощью ELISA. После 4-5 иммунизации мышей, у которых титр антител в сыворотке крови был высоким и достигал плато, отбирали для слияния спленоцитов. Бустер-иммунизацию проводили за 3 дня до слияния спленоцитов, и внутрибрюшинно (IP) вводили 50 мкг раствора антигена в физиологическом растворе.

2. Слияние спленоцитов

Лимфоциты селезенки и клетки миеломы Sp2/0-Ag14 подвергали процедуре слияния, следуя оптимизированной PEG-опосредованной (PEG - полиэтиленгликоль) процедуре слияния для получения клеток гибридомы. Слитые гибридомные клетки высевали в 96-луночный планшет при 1×10⁴-1×10⁵ клеток на лунку, и планшет инкубировали при 37°С с 5% СО₂, дополняли полной средой НАT (гипоксантин-аминоптерин-тимидин) при 100 мкл/лунку и анализировали с помощью ELISA через 10-14 дней.

3. Скрининг гибридомных клеток

Супернатанты культуры гибридомы анализировали методом связывания ELISA в соответствии с плотностью роста клеток гибридомы. Надосадочную жидкость положительных клеток лунок, проанализированных с помощью ELISA связывания, подвергали очистке, эксперименту связывания клеток и эксперименту блокирования клеток. Клетки лунок с положительными результатами как для экспериментов по связыванию и блокированию были быстро размножены, заморожены и секвенированы.

4. Дальнейший скрининг клеток гибридомы

Супернатанты культуры гибридомы анализировали методом связывания ELISA в соответствии с плотностью роста клеток гибридомы. Эксперимент по ингибированию активности ферментов проводили на супернатанте клеток положительных лунок, проанализированных с помощью ELISA связывания. Клетки лунок с положительными результатами как для экспериментов по связыванию, так и для функциональных экспериментов подвергали одному-двум разведениям для субклонирования до получения клонов одной клетки.

Анализы ингибирования активности ферментов FXI/FXIa связывающего ELISA и FXIa также проводили на клетках при каждом субклонировании. Клоны гибридомы получали указанным выше способом скрининга и дополнительно размножали для получения антител, которые очищали в соответствии с примером очистки для применения в примере анализа.

5. Секвенирование гибридом-положительных клонов.

Собирали клетки гибридомы в фазе логарифмического роста, экстрагировали РНК с использованием набора RNeasy Micro kit (Qiagen, кат. №74004) в соответствии с процедурами, указанными в инструкции к набору, и выполняли обратную транскрипцию с использованием набора обратных транскриптаз PrimeScript™ (Takara, кат. №2680А). кДНК (комплементарная ДНК), полученную обратной транскрипцией, амплифицировали с помощью PCR (полимеразная цепная реакция) с использованием набора mouse Ig-Primer Set (Novagen, TB326 Rev. B 0503), а затем отправляли на секвенирование. Получен положительный клон 3807. Соответствующие аминокислотные последовательности вариабельных областей антитела являются следующими:

Пример 7. Гуманизация гибридомных антител к FXI/FXIa

С помощью трехмерного структурного гомологичного моделирования молекулы антитела 3807 в сочетании с результатами сравнения с базой данных V-base последовательностей зародышевой линии человека и базой данных IMGT генов вариабельной области тяжелой цепи антитела зародышевой линии человека в качестве матриц выбраны гены зародышевой линии вариабельной области тяжелой цепи с высокой гомологией со скринированными антителами, a CDR мышиных моноклональных антител были привиты в соответствующие модули человеческого происхождения. На привитых антителах проводили трехмерное структурное моделирование и анализ, а на специфических сайтах в областях FR, которые влияли на структуру и морфологию областей CDR, осуществляли обратные мутации. Аминокислотные остатки идентифицировали с использованием схемы нумерации Кабата и аннотировали.

1. Выбор гуманизированных архитектур клона гибридомы 3807

Для мышиного антитела 3807 матрица гуманизированной легкой цепи представляла собой IGKV3-11*01, а матрица тяжелой цепи представляла собой IGHVl-69-2*01. Гуманизированные последовательности вариабельных областей являются следующими (с подчеркнутыми участками, представляющими собой CDR):

>3807 VH-CDR прививание

>3807 VL-CDR прививание

2. Обратная мутация клона гибридомы 3807

Сайты и паттерны мутаций были разработаны, как показано в Таблице 4.

Конкретные последовательности следующие.

SEQ ID NO: 44

Для антитела 3871 VH представлял собой 3807-VH1, a VL представлял собой 3807-VL3; а для антитела 3875 VH представлял собой 3807-VH5, a VL представлял собой 3807-VL3.

Пример 8. Конструирование для снижения иммуногенности гуманизированных моноклональных антител к FXI/FXIa

3871 и 3875 были генетически модифицированы в соответствии со способом, описанным в Примере 5, для получения антител с более высокой стабильностью и более низкой иммуногенностью. Были сконструированы только FR-области тяжелой цепи, вариабельная область легкой цепи оставалась неизменной.

1. Последовательности генетически сконструированных вариабельных областей тяжелой цепи гуманизированного антитела 3875 следующие (легкая цепь без изменений):

2. Последовательности генетически сконструированных вариабельных областей тяжелой цепи гуманизированного антитела 3871 следующие (легкая цепь без изменений):

Для антитела 3882 VH представлял собой 3807-VH1 (GTFS), a VL представлял собой 3807-VL3.

Каждая из вариабельных областей тяжелой цепи была слита с тяжелой цепью СН1 (SEQ ID NO: 59) соответствующего антитела человека и Fc (содержащей мутацию S241P) (SEQ ID NO: 60) антитела человека IgG4, а вариабельная область легкой цепи была слита с константной областью CL1 (SEQ ID NO: 14) к человека с образованием рекомбинантного химерного антитела для последующего анализа.

>СН1 тяжелой цепи антитела человека:

>IgG4P Fc (т.е. содержащий мутацию S241P) антитела человека:

Полноразмерные последовательности антитела, проиллюстрированные в 3882:

Пример 9. Получение антител к FXI/FXIa и анализ способности связывания с FXI/FXIa человека

Для мышиного или гуманизированного антитела к FXI/FXIa согласно настоящему изобретению вариабельную область тяжелой цепи клонировали в вектор экспрессии клеток млекопитающих, содержащий тяжелую цепь человеческого антитела IgG1, а вариабельную область легкой цепи клонировали в вектор экспрессии клеток млекопитающих, содержащий константную область Сκ1 легкой цепи к человеческого антитела; и клетки ExpiCHO (клетки яичника китайского хомячка) трансфицировали экспрессионными векторами. Трансфекцию проводили с использованием экспрессионной системы ExpiCHO (кат. №А29133) в соотношении 1 мкг ДНК/мл трансфицированных клеток согласно инструкции к набору. Клетки культивировали путем встряхивания в шейкере при 37°С (8% СО₂) стандартными методами. На 8 день культуру клеток собирали и центрифугировали при 4000 об/мин, а супернатант собирали и фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Проводили обнаружение и получали целевое антитело.

Анализ Biacore

Определенное количество антител, подлежащих тестированию, аффинно захватывали с использованием биосенсорного чипа с белком А (кат. №29127556, GE), затем FXI/FXIa при серии градиентов концентрации протекали через поверхность чипа. Сигналы реакции обнаруживали в режиме реального времени с использованием прибора Biacore (Biacore Т200, GE) для получения кривых ассоциации и диссоциации. После завершения диссоциации для каждого цикла биочип промывали и регенерировали с помощью раствора для регенерации, полученного в наборе для захвата антител человека, или раствора для регенерации глицин-гидрохлоридной кислоты (рН 1,5, кат. №BR-1003-54, GE). Буфер, используемый в эксперименте, представлял собой HBS-EP+10х буфер (кат. №BR-1006-69, GE), разбавленный до 1х (рН 7,4) дважды дистиллированной водой.

Данные, полученные в результате эксперимента, были подогнаны с использованием программного обеспечения BIAevaluation версии 4.1, GE с использованием модели Лэнгмюра (1:1) для получения значений аффинности. Результаты испытаний части антител показаны на фиг. 1А, фиг. 1B и в таблице 6 ниже.

Пример 10. Анализ ингибирования активности фермента FXIa антителами к FXI/FXIa in vitro

Для проверки функции антител к FXI/FXIa анализировали способность антител к FXI/FXIa связываться с трипсином FXIa и ингибировать расщепление FXIa конкретного субстрата, а также способность антител к FXI/FXIa связываться с трипсиногеном FXI и блокировать расщепление FXIIa FXI.

Микропланшетный ридер SpectraMax М5 был предварительно настроен на 37°С, 384-луночный планшет (thermo, кат. №94410153) предварительно охлаждали на льду с последующим добавлением 20 мкл тестируемого антитела (10 мкг/мл) и 10 мкл трипсина FXIa (5 мкг/мл), каждый из которых разбавляли 1×PBS. Планшет инкубировали при 37°С в течение 5 мин, затем на льду в течение 5 мин. После добавления 10 мкл S-2366 (2 мМ) (Chromogenix, S821090) кинетическую кривую при 405 нм немедленно считывали при 37°С с помощью микропланшетного ридера SpectraMax М5 (один раз в минуту, 60 мин).

Результаты испытаний части антител показаны на фиг. 2А, где изотип IgG человека использовали в качестве отрицательного контроля (NC).

Способность антител к FXI/FXIa блокировать расщепление FXIIa FXI тестировали следующим образом: 384-луночный планшет предварительно охлаждали на льду с последующим добавлением 10 мкл FXI (12 мкг/мл), 10 мкл FXIIa (7,8 мкг/мл), 10 мкл тестируемого антитела FXI/FXIa (300 мкг/мл) и 10 мкл декстрана (100 мкг/мл), разведенных буфером (20 мМ HEPES, рН 7,4), 150 мМ NaCl и 0,1% BSA); планшет инкубировали при 37°С в течение 60 мин, затем на льду в течение 5 мин; после добавления 10 мкл S-2366 (8 мМ) (Chromogenix, S821090) планшет считывали с помощью микропланшетного ридера.

Результаты испытаний части антител показаны на фиг. 2В, где изотип IgG человека использовали в качестве отрицательного контроля (NC).

Пример 11. Анализ антикоагулянтной активности аРТТ и РТ в крови человека/ обезьяны

Свежую кровь человека/обезьяны собирали методом с использованием пробирок с цитратом натрия и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин, и собирали плазму верхнего слоя.

Частично активированное тромбопластиновое время (аРТТ) определяли с помощью набора Sysmex в присутствии различных концентраций антитела-кандидата (разбавленного PBS), а тестируемое антитело-кандидат инкубировали с плазмой при 37°С в течение 3 мин. Затем инициировали свертывание путем добавления 25 мМ реагента хлорида кальция и определяли время, когда происходило свертывание. Определяли концентрацию антитела-кандидата, которое продлевало аРТТ на 50% относительно PBS (т.е. аРТТ 1,5). Остальные результаты для части антител показаны на фиг. 3А, фиг. 4А и в таблице 7.

Протромбиновое время (РТ) определяли с помощью набора Sysmex в присутствии различных концентраций антитела-кандидата (разбавленного PBS), а тестируемое антитело-кандидат инкубировали с плазмой при 37°С в течение 3 мин. Затем было инициировано свертывание путем добавления тромбопластина и определено время, когда свертывание произошло. Результаты испытаний части антител показаны на фиг. 3В и фиг. 4В.

Результаты показали, что 3807, 3871, 3875 и 3882 достигли 1,5-кратного продлевало аРТТ при более низких концентрациях, чем Вау1213790, оказывали более сильное ингибирующее действие на FXI и ингибировали коагуляцию более эффективно, и ни одно из вышеуказанных антител не оказывало влияния на продление РТ.

Пример 12. Анализ фармакокинетики (РК)/фармакодинамики (PD) у яванских макак

Нормальные взрослые самцы яванских макак (масса тела в диапазоне 4,0-4,7 кг) были сгруппированы в соответствии с массой тела (обезьяны с массой тела 1, 4 и 5 были отнесены к одной группе, а обезьяны с массой тела 2, 3 и 6 были отнесены к другой группе), 3 животных в каждой группе и наблюдались в течение 14 дней.

Образцы крови отбирали за один день до введения с использованием пробирок для сбора крови с цитратом натрия и в качестве образцов до введения определяли аРТТ, РТ, концентрацию лекарственного препарата в плазме, соотношение активного XI фактора в плазме (фактор XI, FXI) (FXI:C %, т.е. соотношение FXI со свертывающей активностью) и концентрацию свободного FXI в плазме; время кровотечения также определяли для каждого животного. Из двух групп животных одна была холостой и препарат не вводили; а другой вводили с 3882 5 мг/кг массы тела (мг/кг, mpk). Соединение растворяли в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS) в концентрации 5 мг/мл и вводили путем внутривенной инъекции.

Холостую контрольную группу наблюдали в течение времени кровотечения через 15 минут (мин) и 3 часа (ч) после введения; и плазму собирали и наблюдали в течение аРТТ и РТ через 15 минут, 3 часа, 6 часов и 1 день (д) после введения в соответствии с вышеуказанным способом, описанным выше. Группу введения наблюдали времени кровотечения через 15 минут, 3 часа, 2 дня, 4 дня, 1 неделю (w), 2 недели и 3 недели после введения; и плазму собирали и наблюдали аРТТ, РТ, концентрацию лекарственного средства в плазме, FXI:C % в плазме и концентрацию свободного FXI в плазме через 15 минут, 3 часа, 6 часов, 1 день, 2 дня, 4 дня, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель и 6 недель после введения в соответствии со способом, описанным выше. Конструкцию AV-шунта тромба проводили на обеих группах животных через 1 день после введения, где время конструирования тромба составляло 10 минут, а массу нетто тромба взвешивали после конструирования тромба.

аРТТ, РТ и FXI:C % в плазме определяли с помощью коагулометра и соответствующих наборов, а концентрацию свободного FXI в плазме и концентрацию лекарственного препарата в плазме определяли методом ELISA. Масса тромба в группе введения сравнивалась с массой тромба в контрольной группе и статистически анализировалась с помощью t-критерия.

Результаты испытаний антител показаны на фиг. 5A-5D, в которых отрицательный контроль (NC) не вводили. Результат показал, что 5 мг/кг хорошо ингибировали тромбогенез и продлевали время эндогенной коагуляции, но не оказывали существенного влияния на время кровотечения и время экзогенной коагуляции животных, а результат РК показал, что период полувыведения составлял около 20 дней. «**» на фиг. 5 В представляет собой значение Р<0,01, что указывает на значительную разницу.

Пример 13. Анализ фармакодинамики (PD) у яванских макак

6 нормальных взрослых самцов яванских макак (масса тела в диапазоне 7-9 кг) были случайным образом разделены на 3 группы, которые представляли собой: группу внутривенного введения 1 мг/кг массы тела (мг/кг) BAY1213790;

группу внутривенного введения 1 мг/кг массы тела (мг/кг) 3882; группу подкожного введения 1 мг/кг массы тела (мг/кг) 3882.

Образцы крови животных в группе внутривенного введения собирали перед введением и через 5 минут, 1 час, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 1 неделю, 2 недели, 3 недели и 4 недели после введения, образцы крови животных в группе подкожного введения собирали перед введением и через 1 час, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 1 неделю, 2 недели, 3 недели и 4 недели после введения с помощью пробирок для сбора крови с цитратом натрия в обоих группах, и аРТТ и плазмы FXI:C % определяли с помощью коагулометра и соответствующих наборов.

Результаты испытания показаны на фиг. 6А и фиг. 6В. Результаты показали, что 3882 способно значительно продлить время эндогенного свертывания крови и ингибировать активность FXI как при подкожном, так и при внутривенном введении. 3882 имеет более длительное время поддержания для увеличения времени эндогенной коагуляции и более сильное ингибирующее действие на FXI по сравнению с BAY1213790 при введении в равной дозе.

>Тяжелая цепь BAY 1213790:

>Легкая цепь BAY 1213790:

Хотя конкретные варианты осуществления настоящего изобретения были описаны выше, специалистам в данной области техники будет понятно, что эти варианты осуществления являются просто иллюстративными и что многие изменения или модификации могут быть внесены в эти варианты осуществления без отступления от принципов и сущности настоящего изобретения. Таким образом, объем защиты настоящего изобретения определяется прилагаемой формулой изобретения.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> БЭЙЦЗИН ТО ЦЗЕ БИОФАРМАСЬЮТИКАЛ КО. ЛТД.

<120> АНТИТЕЛО ПРОТИВ FXI/FXIA, ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ

И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ

<130> 721067CPCT

<140> PCT/CN2021/104253

<141> 2021-07-02

<150> CN202010633951.8

<151> 2020-07-02

<160> 69

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 607

<212> ПРТ

<213> Человек (Человек разумный)

<400> 1

Glu Cys Val Thr Gln Leu Leu Lys Asp Thr Cys Phe Glu Gly Gly Asp

1 5 10 15

Ile Thr Thr Val Phe Thr Pro Ser Ala Lys Tyr Cys Gln Val Val Cys

20 25 30

Thr Tyr His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Thr Phe Thr Ala Glu Ser Pro

35 40 45

Ser Glu Asp Pro Thr Arg Trp Phe Thr Cys Val Leu Lys Asp Ser Val

50 55 60

Thr Glu Thr Leu Pro Arg Val Asn Arg Thr Ala Ala Ile Ser Gly Tyr

65 70 75 80

Ser Phe Lys Gln Cys Ser His Gln Ile Ser Ala Cys Asn Lys Asp Ile

85 90 95

Tyr Val Asp Leu Asp Met Lys Gly Ile Asn Tyr Asn Ser Ser Val Ala

100 105 110

Lys Ser Ala Gln Glu Cys Gln Glu Arg Cys Thr Asp Asp Val His Cys

115 120 125

His Phe Phe Thr Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Pro Ser Leu Glu His Arg

130 135 140

Asn Ile Cys Leu Leu Lys His Thr Gln Thr Gly Thr Pro Thr Arg Ile

145 150 155 160

Thr Lys Leu Asp Lys Val Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys Ser Cys Ala

165 170 175

Leu Ser Asn Leu Ala Cys Ile Arg Asp Ile Phe Pro Asn Thr Val Phe

180 185 190

Ala Asp Ser Asn Ile Asp Ser Val Met Ala Pro Asp Ala Phe Val Cys

195 200 205

Gly Arg Ile Cys Thr His His Pro Gly Cys Leu Phe Phe Thr Phe Phe

210 215 220

Ser Gln Glu Trp Pro Lys Glu Ser Gln Arg Asn Leu Cys Leu Leu Lys

225 230 235 240

Thr Ser Glu Ser Gly Leu Pro Ser Thr Arg Ile Lys Lys Ser Lys Ala

245 250 255

Leu Ser Gly Phe Ser Leu Gln Ser Cys Arg His Ser Ile Pro Val Phe

260 265 270

Cys His Ser Ser Phe Tyr His Asp Thr Asp Phe Leu Gly Glu Glu Leu

275 280 285

Asp Ile Val Ala Ala Lys Ser His Glu Ala Cys Gln Lys Leu Cys Thr

290 295 300

Asn Ala Val Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Thr Pro Ala Gln Ala Ser

305 310 315 320

Cys Asn Glu Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Leu Lys Leu Ser Ser Asn Gly

325 330 335

Ser Pro Thr Lys Ile Leu His Gly Arg Gly Gly Ile Ser Gly Tyr Thr

340 345 350

Leu Arg Leu Cys Lys Met Asp Asn Glu Cys Thr Thr Lys Ile Lys Pro

355 360 365

Arg Ile Val Gly Gly Thr Ala Ser Val Arg Gly Glu Trp Pro Trp Gln

370 375 380

Val Thr Leu His Thr Thr Ser Pro Thr Gln Arg His Leu Cys Gly Gly

385 390 395 400

Ser Ile Ile Gly Asn Gln Trp Ile Leu Thr Ala Ala His Cys Phe Tyr

405 410 415

Gly Val Glu Ser Pro Lys Ile Leu Arg Val Tyr Ser Gly Ile Leu Asn

420 425 430

Gln Ser Glu Ile Lys Glu Asp Thr Ser Phe Phe Gly Val Gln Glu Ile

435 440 445

Ile Ile His Asp Gln Tyr Lys Met Ala Glu Ser Gly Tyr Asp Ile Ala

450 455 460

Leu Leu Lys Leu Glu Thr Thr Val Asn Tyr Thr Asp Ser Gln Arg Pro

465 470 475 480

Ile Cys Leu Pro Ser Lys Gly Asp Arg Asn Val Ile Tyr Thr Asp Cys

485 490 495

Trp Val Thr Gly Trp Gly Tyr Arg Lys Leu Arg Asp Lys Ile Gln Asn

500 505 510

Thr Leu Gln Lys Ala Lys Ile Pro Leu Val Thr Asn Glu Glu Cys Gln

515 520 525

Lys Arg Tyr Arg Gly His Lys Ile Thr His Lys Met Ile Cys Ala Gly

530 535 540

Tyr Arg Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro

545 550 555 560

Leu Ser Cys Lys His Asn Glu Val Trp His Leu Val Gly Ile Thr Ser

565 570 575

Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Arg Glu Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asn

580 585 590

Val Val Glu Tyr Val Asp Trp Ile Leu Glu Lys Thr Gln Ala Val

595 600 605

<210> 2

<211> 21

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> KLH-конъюгированный FXIa-специфический полипептид

<400> 2

Lys Leu His Cys Phe Tyr Gly Val Glu Ser Pro Lys Ile Leu Arg Val

1 5 10 15

Tyr Ser Gly Ile Leu

20

<210> 3

<211> 24

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> KLH-конъюгированный FXIa-специфический полипептид

<400> 3

Lys Leu His Cys Gly Tyr Arg Lys Leu Arg Asp Lys Ile Gln Asn Thr

1 5 10 15

Leu Gln Lys Ala Lys Ile Pro Leu

20

<210> 4

<211> 24

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> KLH-конъюгированный FXIa-специфический полипептид

<400> 4

Lys Leu His Cys Gly Val Gln Glu Ile Ile Ile His Asp Gln Tyr Lys

1 5 10 15

Met Ala Glu Ser Gly Tyr Asp Ile

20

<210> 5

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-VH

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 6

<211> 108

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-VL

<400> 6

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Lys Asn

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Ser Tyr Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 7

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-HCDR1

<400> 7

Glu Leu Ser Met His

1 5

<210> 8

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-HCDR2

<400> 8

Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 20

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-HCDR3

<400> 9

Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr Pro Arg

1 5 10 15

Gly Met Asp Val

20

<210> 10

<211> 12

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-LCDR1

<400> 10

Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Lys Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 11

<211> 7

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-LCDR2

<400> 11

Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 0012-LCDR3

<400> 12

Gln Gln Phe Arg Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 13

<211> 98

<212> ПРТ

<213> Человек (Человек разумный)

<400> 13

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val

<210> 14

<211> 107

<212> ПРТ

<213> Человек (Человек разумный)

<400> 14

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 15

<211> 459

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 1209-HC

<400> 15

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Ile

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

130 135 140

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

145 150 155 160

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

165 170 175

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

195 200 205

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

210 215 220

Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

225 230 235 240

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

245 250 255

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

260 265 270

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

275 280 285

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

290 295 300

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

305 310 315 320

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

325 330 335

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

340 345 350

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

355 360 365

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

370 375 380

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

385 390 395 400

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

405 410 415

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

420 425 430

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

435 440 445

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 16

<211> 215

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 1209-LC

<400> 16

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Lys Asn

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Glu Ala Ser Val Arg Ala Leu Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Ser Tyr Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 17

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> F-VH

<400> 17

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Ile

20 25 30

Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 18

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> H-VH

<400> 18

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Gly Leu

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 19

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> J-VH

<400> 19

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Gly Val

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 20

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K-VH

<400> 20

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Ile

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 21

<211> 108

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3-VL

<400> 21

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Lys Asn

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Glu Ala Ser Val Arg Ala Leu Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Ser Tyr Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 22

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> F-VH HCDR1

<400> 22

Ser Ile Phe Met His

1 5

<210> 23

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> F-VH HCDR2

<400> 23

Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 24

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> H-VH HCDR1

<400> 24

Gly Leu Leu Met His

1 5

<210> 25

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> H-VH HCDR2

<400> 25

Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 26

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> J-VH HCDR1

<400> 26

Gly Val Leu Met His

1 5

<210> 27

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> J-VH HCDR2

<400> 27

Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 28

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K-VH HCDR1

<400> 28

Ser Ile Leu Met His

1 5

<210> 29

<211> 7

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3-VH LCDR2

<400> 29

Glu Ala Ser Val Arg Ala Leu

1 5

<210> 30

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH Fg3g

<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Ile

20 25 30

Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 31

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH Hg3g

<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Gly Leu

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 32

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH Jg3g

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Gly Val

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 33

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH Kg3g

<400> 33

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Ile

20 25 30

Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asp Pro His Arg Thr Trp Trp Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Tyr

100 105 110

Pro Arg Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 34

<211> 108

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL Fg3g, или Hg3g, или Jg3g, или Kg3g

<400> 34

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Lys Asn

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Glu Ala Ser Val Arg Ala Leu Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Ser Tyr Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 35

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH

<400> 35

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Ile Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 36

<211> 106

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VL

<400> 36

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 37

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-HCDR1

<400> 37

Asp Asp Tyr Met His

1 5

<210> 38

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-HCDR2

<400> 38

Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 39

<211> 8

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-HCDR3

<400> 39

Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 40

<211> 10

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-LCDR1

<400> 40

Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His

1 5 10

<210> 41

<211> 7

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-LCDR2

<400> 41

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 42

<211> 9

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-LCDR3

<400> 42

His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 43

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Прививание VH-CDR 3807

<400> 43

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 44

<211> 106

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Прививание VL-CDR 3807

<400> 44

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 45

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH1

<400> 45

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 46

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH2

<400> 46

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 47

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH3

<400> 47

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 48

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH4

<400> 48

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 49

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH5

<400> 49

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 50

<211> 106

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VL2

<400> 50

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 106

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VL3

<400> 51

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 52

<211> 106

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VL4

<400> 52

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 53

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH5(ESAN)

<400> 53

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Ala Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 54

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH5(TSTN)

<400> 54

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 55

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH5(ESTN)

<400> 55

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 56

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH1(AR)

<400> 56

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 57

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH1(YTFT)

<400> 57

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 58

<211> 117

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3807-VH1(GTFS)

<400> 58

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 59

<211> 98

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь CH1 человеческого антитела

<400> 59

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val

<210> 60

<211> 229

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IgG4PFc (содержащий мутацию S241P) человеческого антитела

<400> 60

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 61

<211> 444

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3882-HC

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Asp

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Leu Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 62

<211> 213

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 3882-LC

<400> 62

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Phe Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 63

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Общая формула HCDR1

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(1)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из E, S, G и D

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (2)..(2)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из L, I, V и D

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (3)..(3)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из S, F, L и Y

<400> 63

Xaa Xaa Xaa Met His

1 5

<210> 64

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Общая формула HCDR2

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(1)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из G и W

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (2)..(2)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из F и I

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (5)..(5)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из E и Q

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (6)..(6)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из D и N

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (8)..(8)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из E и D

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (10)..(10)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из I, R, V и E

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (13)..(13)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из Q и S

<400> 64

Xaa Xaa Asp Pro Xaa Xaa Gly Xaa Thr Xaa Tyr Ala Xaa Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 65

<211> 7

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Общая формула LCDR2

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(1)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из G, E и D

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (2)..(2)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из A и T

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (4)..(4)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из N, V и K

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (5)..(5)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из R и L

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (7)..(7)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из T, L и S

<400> 65

Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Ala Xaa

1 5

<210> 66

<211> 9

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Общая формула LCDR3

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(1)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из Q и H

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (3)..(3)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из F и R

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (4)..(4)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из R и S

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (5)..(5)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из S и F

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (6)..(6)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из Y и S

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (8)..(8)

<223> Xaa выбран из группы, состоящей из Y и L

<400> 66

Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr

1 5

<210> 67

<211> 232

<212> ПРТ

<213> Человек (Человек разумный)

<400> 67

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 68

<211> 449

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь BAY1213790

<400> 68

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 69

<211> 214

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь BAY1213790

<400> 69

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к антителу к FXI/FXIa или его антигенсвязывающему фрагменту. Кроме того, настоящее изобретение также относится к полинуклеотиду, кодирующему указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вектору экспрессии, содержащему указанный полинуклеотид, клетке-хозяину, способу получения такого антитела, а также к фармацевтической композиции для лечения заболевания или расстройства, связанного с тромбозом или тромбоэмболией, применению указанных антитела, полинуклеотида и вектора для получения лекарственного средства или фармацевтической композиции и способу лечения. Настоящее изобретение обеспечивает антитела к FXI/FXIa с низкой иммуногенностью, которые эффективно ингибируют тромбоз без увеличения риска кровотечения. 8 н. и 15 з.п. ф-лы, 14 ил., 7 табл., 13 пр.

1. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее:

(a) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 37, 38 и 39, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 40, 41 и 42, соответственно;

(b) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7, 8 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 11 и 12, соответственно;

(c) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 22, 23 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно;

(d) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 24, 25 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно;

(e) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 26, 27 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно; или

(f) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 28, 25 и 9, соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи, содержащие последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 29 и 12, соответственно.

2. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, представляющее собой мышиное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело или человеческое антитело, или его фрагмент, где:

предпочтительно, антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой гуманизированное антитело или его фрагмент, и

более предпочтительно, гуманизированное антитело или его фрагмент имеет матрицу легкой цепи IGKV3-11*01 и матрицу тяжелой цепи IGHV1-69-2*01.

3. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 2, содержащее VH (вариабельная область тяжелой цепи), имеющую любую одну или любую комбинацию из обратных мутаций Y27F, T28N, F29I, T30K, A93L, R94Y, E73T, R66K, V67A, T75A и T76N, и/или VL (вариабельная область легкой цепи), имеющую любую одну или любую комбинацию из обратных мутаций R45K, L46R, L47W, I58V и F71Y.

4. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3, содержащее:

VH, представленную в одной из SEQ ID NO: 5, 17-20, 30-33, 35, 43, 45-49 и 53-58, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в одной из SEQ ID NO: 6, 21, 34, 36, 44 и 50-52, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей.

5. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 4, содержащее:

VH, представленную в SEQ ID NO: 58, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 51, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 5, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 6, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 17, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 18, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 19, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 20, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 21, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 30, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 34, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 31, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 34, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 32, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 34, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 35, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 36, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 43, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 44, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 45, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 51, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей;

VH, представленную в SEQ ID NO: 49, или VH, по меньшей мере на 90% идентичную ей, и

VL, представленную в SEQ ID NO: 51, или VL, по меньшей мере на 90% идентичную ей.

6. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-5, имеющее VH, связанную с CH1 (константная область 1 тяжелой цепи) человека или мыши, и VL, связанную с CL (константная область легкой цепи) или Cκ (константная область легкой цепи каппа) человека или мыши, где

предпочтительно, CH1 человека представлена в SEQ ID NO: 13 или 59, а Cκ имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14.

7. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-6, содержащее константный домен Fc, где:

предпочтительно, Fc представляет собой Fc IgG1, Fc IgG4 или Fc IgG4P и

более предпочтительно, Fc IgG1 имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 67, а Fc IgG4P имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 60.

8. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-7, содержащее:

тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO: 61, или тяжелую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и

легкую цепь, представленную в SEQ ID NO: 62, или легкую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей; или

тяжелую цепь, представленную в SEQ ID NO: 15, или тяжелую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей, и

легкую цепь, представленную в SEQ ID NO: 16, или легкую цепь, по меньшей мере на 80% идентичную ей.

9. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-8, где антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из фрагмента scFv, фрагмента Fv, фрагмента Fab и фрагмента Fab'.

10. Антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-9, обладающее любым одним или более из следующих свойств:

предотвращение или остановка активации пути коагуляции;

блокирование связывания FXI/FXIa с одним или более из FIX, FXIIa и тромбина;

блокирование связывания одного или более из FIX, FXI и FXIa с тромбоцитарным рецептором;

связывание с белком FXI и/или FXIa человека с аффинностью 10^-9 K_D (равновесная константа диссоциации) или менее;

предотвращение представления каталитического домена FXI/FXIa в активной конформации при связывании с FXI/FXIa и

возможность использования для подкожного введения или внутривенного введения.

11. Полинуклеотид, кодирующий антитело к FXI/FXIa или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-10.

12. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п. 11.

13. Клетка-хозяин для экспрессии антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащая вектор по п. 12.

14. Способ получения антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий:

экспрессию антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента в клетке-хозяине по п. 13 и

выделение антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки-хозяина.

15. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания или расстройства, связанного с тромбозом или тромбоэмболией, содержащая:

- фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель и

- любое одно или любую комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп. 1-10, полинуклеотида по п. 11 и вектора по п. 12.

16. Фармацевтическая композиция по п. 15, где фармацевтическая композиция предназначена для подкожной инъекции или внутривенной инъекции.

17. Применение для получения лекарственного средства или фармацевтической композиции любого одного или любой комбинации, выбранной из группы, состоящей из следующего:

антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп. 1-10, полинуклеотида по п. 11 и вектора по п. 12;

где лекарственное средство или фармацевтическую композицию используют для лечения любого, выбранного из группы, состоящей из: тромботического или тромбоэмболического расстройства, тромботического или тромбоэмболического осложнения, сердечной аритмии, кардиогенной тромбоэмболии и диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.

18. Применение по п. 17, где тромботическое или тромбоэмболическое расстройство или его осложнение выбирают из группы, состоящей из: ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда с подъемом ST (STEMI), инфаркта миокарда без подъема ST (не-STEMI), стабильной стенокардии, нестабильной стенокардии, реокклюзии и рестеноза после коронарных вмешательств, окклюзионной болезни периферических артерий, легочной эмболии, венозной тромбоэмболии, тромбоза вен, транзиторной ишемической атаки, тромботического инсульта и тромбоэмболического инсульта, легочной болезни, вызванной хронической тромбоэмболической легочной гипертензией (CTEPH), легочной гипертензии, вызванной CTEPH, и их комбинации.

19. Применение по п. 18, где ишемическая болезнь сердца представляет собой острый коронарный синдром.

20. Способ лечения заболевания, где заболевание выбрано из любого из следующего:

тромботического или тромбоэмболического расстройства, тромботического или тромбоэмболического осложнения, сердечной аритмии, кардиогенной тромбоэмболии и диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови;

при этом способ включает стадию:

введения субъекту антитела к FXI/FXIa или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп. 1-10, полинуклеотида по п. 11, вектора по п. 12 или любой их комбинации в эффективном количестве для лечения или предотвращения заболевания.

21. Способ по п. 20, где тромботическое или тромбоэмболическое расстройство или его осложнение выбирают из группы, состоящей из: ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда с подъемом ST (STEMI), инфаркта миокарда без подъема ST (не-STEMI), стабильной стенокардии, нестабильной стенокардии, реокклюзии и рестеноза после коронарных вмешательств, окклюзионной болезни периферических артерий, легочной эмболии, венозной тромбоэмболии, тромбоза вен, транзиторной ишемической атаки, тромботического инсульта и тромбоэмболического инсульта, легочной болезни, вызванной хронической тромбоэмболической легочной гипертензией (CTEPH), легочной гипертензии, вызванной CTEPH, и их комбинации.

22. Способ по п. 21, где ишемическая болезнь сердца представляет собой острый коронарный синдром.

23. Способ по любому из пп. 20-22, где субъект имеет ишемический инсульт и/или тромбоз глубоких вен, связанный с фибрилляцией предсердий.

название	год	авторы	номер документа
АНТИТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ XI	2017	Чэнь Чжу Эллсворт Кеннет П. Миллиган Джеймс А. Олдхэм Элизабет Сейфферт Дитмар Ганти Вайшнави Табризифард Мохаммад Принц Бьянка	RU2757314C2
АНТИТЕЛА К ФАКТОРУ XI	2017	Ван, Вэньи Юй, Цюань Лю, Сяоу	RU2800719C2
НОВЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА XI И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2017	Вильмен, Андреас Бухмюллер, Анья Таккер, Эрик	RU2758160C2
АНТИТЕЛО К CD3 И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ	2019	Ин Хуа Чжан Лин Ян Сяоин Гэ Ху Тао Вэйкан	RU2802272C2
АНТИТЕЛА ПРОТИВ TNFRSF9 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ	2019	Ян, И Се, Цзиншу Дун, Чуньянь Ян, Фан Лу, Чэнюань Шэнь, Юэлэй Ни, Цзянь Го, Янань Чэнь, Юньюнь	RU2812200C2
КОНЬЮГАТ АНТИТЕЛА К КЛАУДИНУ И ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ	2020	Ян Ян Сюй Цзяньянь Тао Вэйкан	RU2826119C1
БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙ АНТИГЕН ST2	2021	Чжан Чжэнпин Ин Шусон Сюй Хунцзян Ян Лин Чжан Сицюань Го Цзюнь Ши Вэй Сон Вэй Чжоу Юньянь	RU2841164C2
АНТИТЕЛА ПРОТИВ CD40 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2018	Ян, И Дун, Чуньянь Ян, Фан Лу, Чэнюань Шэнь, Юэлэй Ни, Цзянь Го, Янань Чэнь, Юньюнь Се, Цзиншу	RU2796413C2
ТРИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ СПОСОБЫ И ВАРИАНТЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2020	Биркенфельд, Йерг Нейбел, Гари Дж. Цю, Хуавэй Регула, Йерг Сьюнг, Эдвард Вэй, Ронни У, Лань Син, Чжэнь Сюй, Лин Прад, Катрин Дабдуби, Тарик Камерон, Беатрис Лемуан, Сендрин Ян, Цжи-Юн	RU2822200C2
АНТИТЕЛО ПРОТИВ КЛАУДИНА 18.2 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ	2020	Ян, Ян Гэ, Ху Тао, Вэйкан	RU2822550C2

WO 2017015619 A1, 26.01.2017
CN 110423278 A, 08.11.2019
ELY LK et al., Structural Basis for Activity and Specificity of an Anticoagulant Anti-FXIa Monoclonal Antibody and a Reversal Agent, Structure, 2018, 26(2), pp
Индукционная катушка	1920	Федоров В.С.	SU187A1
СУЛИМОВ А.В
и др., Современные методы разработки новых лекарственных средств, влияющих на систему гемостаза, Вопросы

Антитело против FXI/FXIA, его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическое применение Российский патент 2025 года по МПК C07K16/36 A61K39/395 A61P7/02 C12N15/13

Описание патента на изобретение RU2838408C1

Похожие патенты RU2838408C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 838 408 C1

Реферат патента 2025 года Антитело против FXI/FXIA, его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтическое применение

Формула изобретения RU 2 838 408 C1

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2025 года RU2838408C1

RU 2 838 408 C1