АНТИТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ XI Российский патент 2021 года по МПК C07K16/36 A61K39/395 A61P7/02 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ

По этой заявке испрашивают приоритет предварительной патентной заявки США № 62/281,842, поданной 22 января 2016 года, которая включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

ССЫЛКА НА СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ, ПОДАННЫЙ В ЭЛЕКТРОННОЙ ФОРМЕ

Список последовательностей настоящей заявки подан в электронной форме через EFS-Web в виде ASCII форматированного списка последовательностей с названием файла «Списки последовательностей», дата создания 21 июня 2018 года, размер 168 КБ. Этот список последовательностей, поданный через EFS-Web, является частью описания и включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

(1) Область изобретения

Настоящее изобретение относится к антителам, которые связывают домен apple 2 фактора свертывания XI человека (FXI) и ингибируют активацию FXI с помощью фактора свертывания XIIa.

(2) Описание связанной области

Тромбоэмболические нарушения, в том числе как венозный, так и артериальный тромбоз, остаются ведущей причиной заболеваемости и смертности в западном мире, несмотря на доступность антикоагулянтов многих классов, таких как антагонисты витамина K (VKA), гепарины и непосредственные ингибиторы тромбина (Weitz et al., Chest 2008, 133: 234S-256S; Hawkins, Pharmacotherapy 2004, 24:62S-65S). Эти лекарственные средства эффективны для снижения рисков тромбоза, но они связаны со многими ограничениями. Например, VKA (например, варфарин) являлся залогом оральной антикоагуляции, однако ведение VKA терапии осложнено из-за ее значительного риска кровотечений, медленного начала и завершения действия и множества диетологических и лекарственных взаимодействий (Hawkins, op. cit.; Ansell J et al., Chest 2008, 133:160S-198S). Новые оральные антикоагулянты (NOAC, в том числе ривароксабан, апиксабан, эдоксабан и дабигатран) демонстрировали по меньшей мере не низкий эффект по сравнению с варфарином, при меньших пищевых и лекарственных взаимодействиях и отсутствии необходимости мониторинга. Однако NOAC все еще увеличивают риск кровотечения, как продемонстрировано близкой к 18% годовой заболеваемостью массивными или не массивными клинически релевантными кровотечениями в их регистрационных исследованиях по предотвращению инсульта при фибрилляции предсердий (Connolly et al., N Engl J Med 2009, 361:1139-1151; Patel et al., N Engl J Med 2011, 365:883-891; Granger et al., N Engl J Med 2011, 365:981-992; Giugliano et al., N Engl J Med 2013, 369:2093-2104). Главным образом это приписывают тому факту, что NOAC направленно воздействуют на белки (фактор свертывания Xa (FXa) и тромбин), которые необходимы для нормальной коагуляции (гемостаза). Новая терапия с более хорошими профилями безопасности при предотвращении и лечении тромботических заболеваний или нарушений, таким образом, является неудовлетворенной потребностью.

В классической каскадной модели для каскада свертывания крови (фиг. 1A) запуск коагуляции происходит или по внешнему (активируемому тканевым фактором (TF)) пути или по внутреннему (контактно-активируемому) пути, оба питают общий путь, который заканчивается образованием тромбина и формированием фибрина (Furie & Furie, Cell 1988, 53:505-518; Gailani & Renne, J Thromb Haemost 2007, 5:1106-1112). Инициация внешнего каскада происходит, когда TF, который присутствует в субэндотелиальных и атеросклеротических повреждениях, становится экспонирован для протекающей крови и формирует комплекс с фактором свертывания VIIa (FVIIa). Затем комплекс TF-FVIIa (внешний теназный комплекс) запускает общий путь, т. е. активацию FX для того, чтобы формировать FXa, который в свою очередь превращает протромбин в тромбин. Комплекс TF-FVIIa также может активировать фактор свертывания IX (FIX) для того, чтобы формировать FIXa. FIXa в комплексе с фактором свертывания VIII (FVIIIa) (внутренний теназный комплекс) также может расщеплять субстрат FX. Инициация внутреннего каскада происходит, когда FXIIa формируется через контактную активацию отрицательно заряженными поверхностями (например, коллаген и гликозаминогликаны) и распространяет образование тромбина посредством последовательной активации FXI, FIX, FX и протромбина. Тромбин, в качестве конечной протеазы в каскаде свертывания, может вносить дополнительный вклад в образование FXIa посредством прямой активации FXI по механизму обратной связи. Тромбоциты, другой важный гемостатический компонент в цельной крови, можно активировать с помощью тромбина, и впоследствии они могут также поддерживать формирование FXIa. FXI-зависимое усиление образования тромбина может опосредованно регулировать фибринолиз через активацию активируемого тромбином ингибитора фибринолиза (TAFI). FXI, таким образом, взаимодействует с несколькими компонентами в системе гемостаза и играет ключевую роль в свертывании крови и тромбозе (Gailani & Renne op. cit.; Emsley et al., Blood 2010, 115:2569-2577).

Фактор свертывания XI (FXI) представляет собой димер, состоящий из идентичных 80 кДа субъединиц, и каждая субъединица, начиная с N-конца, состоит из четырех доменов apple (A1, A2, A3 и A4) и каталитического домена (см. фиг. 1B). FXI представляет собой зимоген, который циркулирует в комплексе высокомолекулярным кининогеном (HK). HK связывается с доменом A2 в FXI и представляет собой физиологический кофактор для FXIIa активации FXI до FXIa. Остальные домены apple в FXI также опосредуют важные физиологические функции. Например, FIX-связывающий экзосайт локализован в A3, тогда как сайт связывания FXIIa находится в A4. Остатки, которые являются критическими для димеризации FXI, также локализованы в A4 (Emsley et al., op. cit.).

В последние годы в усилиях по многим направлениям продемонстрировано, что FXI играет ключевую роль в патологическом процессе формирования тромба при относительно малом вкладе в гемостаз и, таким образом, является перспективной мишенью при тромбозе. Ключевые данные, подтверждающие это мнение, вкратце изложены далее: (1) в II фазе испытаний антисмыслового олигонуклеотида (ASO) FXI в Ionis Pharmaceuticals Inc. (Buller et al., N Engl J Med 2015, 372:232-240) FXI ASO вызывал значительное снижение венозной тромбоэмболии (VTE), с тенденцией в направлении меньшего кровотечения, по сравнению с эноксапарином, у пациентов, проходящих полную артропластику коленного сустава; (2) генетика человека и эпидемиологические исследования (Duga et al., Semin Thromb Hemost 2013; Chen et al., Drug Discov Today 2014; Key, Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2014, 2014:66-70) указывают на то, что тяжелый дефицит FXI (гемофилия C) обеспечивает сниженный риск ишемического инсульта и тромбоза глубоких вен; наоборот, повышенные уровни FXI связаны с более высоким риском VTE и ишемического инсульта; и (3) по многим направлениям доклинических исследований продемонстрировано, что ингибирование или утрата функции FXI(a) опосредует глубокую тромбопротекцию, не компрометируя гемостаз (Chen et al. op. cit.). Следует отметить, что моноклональные антитела 14E11 и 1A6 вызывали значительное снижение тромбов в модели тромбоза с балонным AV шунтом (патент США № 8388959; Tucker et al., Blood 2009, 113:936-944; Cheng et al., Blood 2010, 116:3981-3989). Кроме того, 14E11 (поскольку он обладает перекрестной реактивностью с FXI мыши) обеспечивал защиту в экспериментальной модели острого ишемического инсульта у мышей (Leung et al., Transl Stroke Res 2012, 3:381-389). Также сообщалось о дополнительных FXI-направленных mAb в доклинических моделях, которые валидируют FXI в качестве антитромботической мишени при минимальном риске кровотечения (van Montfoort et al., Thromb Haemost 2013, 110; Takahashi et al., Thromb Res 2010, 125:464-470; van Montfoort, Ph.D. Thesis, University of Amsterdam, Amsterdam, Netherlands, 14 ноября 2014 года). Ингибирование FXI, таким образом, является перспективной стратегией для новой антитромботической терапии с усовершенствованным профилем пользы-риска по сравнению с существующими антикоагулянтами стандарта лечения.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение предусматривает антитела человека и антигенсвязывающие фрагменты, способные к избирательному связыванию с фактором свертывания XI (антитела против FXI) и ингибированию свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз, предпочтительно, вызывая снижение свертывания крови и ассоциированного тромбоза, при этом вызывая небольшое или не поддающееся обнаружению кровотечение. Композиции содержат антитела против фактора свертывания XI и антигенсвязывающие фрагменты, способные к связыванию с определенным эпитопом домена apple 2 фактора свертывания XI. Эти антитела и антигенсвязывающие фрагменты проявляют нейтрализующую активность посредством ингибирования превращения зимогенной формы фактора свертывания XI в его активированную форму, фактор свертывания XIa, через фактор свертывания FXIIa.

Антитела и антигенсвязывающие фрагменты можно применять для лечения и/или предотвращения тромботических нарушений и заболеваний, включая в качестве неограничивающих примеров инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочную тромбоэмболию, венозную тромбоэмболию (VTE), фибрилляцию предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическую злокачественную опухоль и инфекционное заболевание. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, в частности, можно применять для предотвращения инсульта при фибрилляции предсердий (SPAF).

Настоящее изобретение предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие по меньшей мере 6 определяющих комплементарность областей (CDR) антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или по меньшей мере 6 определяющих комплементарность областей (CDR) антитела αFXI-13654p, AD-13716p или αFXI-13716, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, где антитело αFXI-13654p содержит тяжелую цепь (HC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 26, 31 или 32, и легкую цепь (LC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19; где антитело αFXI-13716p содержит HC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, 27, 33 или 34, и LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; где антитело αFXI-13716 содержит HC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, 28, 35 или 36, и LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и где антитело или антигенсвязывающий фрагмент по (i), (ii) или (iii) связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

Настоящее изобретение предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие по меньшей мере 6 определяющих комплементарность областей (CDR) антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или по меньшей мере 6 определяющих комплементарность областей (CDR) антитела αFXI-13654p, AD-13716p или αFXI-13716, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания относительно CDR из αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, где антитело αFXI-13654p содержит тяжелую цепь (HC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18 или 31 и легкую цепь (LC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19; где антитело αFXI-13716p содержит HC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22 или 33 и LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; где антитело αFXI-13716 содержит HC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25 или 35 и LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и где антитело или антигенсвязывающий фрагмент по (i), (ii) или (iii) связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, шесть CDR содержат CDR1, CDR2 и CDR3 из HC из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 и CDR1, CDR2 и CDR3 из LC из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716. В дополнительных вариантах осуществления шесть CDR содержат CDR1, CDR2 и CDR3 из HC из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, где одна или несколько из трех CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и CDR1, CDR2 и CDR3 из LC из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, где одна или несколько из трех CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания относительно CDR из αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит (i) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6 для LC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; (ii) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, и SEQ ID NO: 9 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 для LC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; или (iii) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 13 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 для LC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит (i) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; (ii) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, и SEQ ID NO: 9, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; или (iii) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 13 и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 для LC CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR1, CDR2 и CDR3 из HC из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 в вариабельном домене HC, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16 для антитела αFXI-13654p, SEQ ID NO: 20 антитела αFXI-13716p или SEQ ID NO: 24 антитела αFXI-13716, и CDR1, CDR2 и CDR3 из LC из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 в вариабельном домене LC, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17 для антитела αFXI-13654p или SEQ ID NO: 21 для антитела αFXI-13716p или антитела αFXI-13716.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен HC, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или ее вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен LC, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или ее вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие по меньшей мере 6 определяющих комплементарность областей (CDR) антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716; где антитело αFXI-13654p содержит тяжелую цепь (HC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 26, 31 или 32, и легкую цепь (LC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19; где антитело αFXI-13716p содержит HC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, 27, 33 или 34, и LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; где антитело αFXI-13716 содержит HC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, 28, 35 или 36, и LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и где антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения HC CDR антитела αFXI-13654p имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3 и LC CDR антитела αFXI-13654p имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; HC CDR антитела αFXI-13716p имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, и SEQ ID NO: 9, и LC CDR антитела αFXI-13716p имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и HC CDR антитела αFXI-13716 имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 13, и LC CDR антитела αFXI-13716 имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, где необязательно одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, антитело αFXI-13654p содержит вариабельный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, и вариабельный домен LC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17, где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем 3 замены, добавления, делеции аминокислот; антитело αFXI-13716p содержит вариабельный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, и вариабельный домен LC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21, где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот; и антитело αFXI-13716 содержит вариабельный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, и вариабельный домен LC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21, где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот. В дополнительном варианте осуществления указанные выше вариабельные домены HC или LC могут содержать 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания в каркасных областях указанных вариабельных доменов.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения каждое из антитела αFXI-13654p, антитела αFXI-13716p и антитела αFXI-13716p содержит константный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или ее вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, каждое из антитела αFXI-13654p, антитела αFXI-13716p и антитела αFXI-13716p содержит константный домен LC, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или ее вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (a) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17, где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; (b) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21, где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; или (c) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21, и где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания. В дополнительном варианте осуществления указанные выше вариабельные домены HC или LC могут содержать 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания в каркасных областях указанных вариабельных доменов.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, антитело дополнительно содержит константный домен HC, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, и может необязательно содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, антитело дополнительно содержит константный домен LC, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, и может необязательно содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В конкретных вариантах осуществления константные домены HC и LC могут содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В дополнительных аспектах, константный домен HC может содержать C-концевой лизин или может не содержать C-концевой лизин.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (a) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; (b) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; или (c) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот, и где антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека. В дополнительных аспектах, константный домен может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В конкретных аспектах, константный домен может содержать C-концевой лизин или может не содержать C-концевой лизин.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1 или IgG4 человека. В дополнительном аспекте, константный домен тяжелой цепи имеет изотип IgG4 и дополнительно содержит замену остатка серина в положении 228 (нумерация EU) на пролин, что соответствует положению 108 в SEQ ID NO: 41 (серин в положении 108) или SEQ ID NO: 14 (пролин в положении 108), и может необязательно содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, и может необязательно содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (a) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, где необязательно одна или несколько LC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; или (b) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, где необязательно одна или несколько LC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI. В дополнительном варианте осуществления указанные выше вариабельные домены HC или LC могут содержать 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания в каркасных областях указанных вариабельных доменов.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит легкую цепь κ человека или легкую цепь лямбда человека. В конкретных аспектах, константный домен легкой цепи может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (a) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и (b) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, где необязательно одна или несколько LC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания. В дополнительном варианте осуществления указанные выше вариабельные домены HC или LC могут содержать 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания в каркасных областях указанных вариабельных доменов.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В конкретных аспектах, константный домен может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В дополнительных аспектах, константный домен может содержать C-концевой лизин или может не содержать C-концевой лизин.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1 или IgG4 человека. В дополнительном аспекте, константный домен тяжелой цепи имеет изотип IgG4 и дополнительно содержит замену остатка серина в положении 228 (нумерация EU) на пролин, что соответствует положению 108 в SEQ ID NO: 41 (серин в положении 108) или SEQ ID NO: 14 (пролин в положении 108), и может необязательно содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, который в конкретных вариантах осуществления может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит константный домен легкой цепи κ человека или константный домен легкой цепи лямбда человека, который в конкретных вариантах осуществления может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, который в конкретных вариантах осуществления может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (a) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий тяжелую цепь, содержащую определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 или 13, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и (b) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, где необязательно одна или несколько HLC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и где необязательно один или оба вариабельных домена имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что CDR в вариабельных доменах не имеет больше чем три замены, добавления, делеции аминокислот. В дополнительном варианте осуществления указанные выше вариабельные домены HC или LC могут содержать 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания в каркасных областях указанных вариабельных доменов.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, который в конкретных вариантах осуществления может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В конкретных аспектах, константный домен может содержать C-концевой лизин или может не содержать C-концевой лизин.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1 или IgG4 человека или его вариант, содержащий константный домен, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен*, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В дополнительном аспекте, константный домен тяжелой цепи имеет изотип IgG4 и дополнительно содержит замену остатка серина в положении 228 (нумерация EU) на пролин, что соответствует положению 108 в SEQ ID NO: 41 (серин в положении 108) или SEQ ID NO: 14 (пролин в положении 108) и может необязательно содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или ее вариант, содержащую константный домен, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит константный домен легкой цепи κ человека или константный домен легкой цепи лямбда человека, который в конкретных аспектах может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или ее вариант, содержащую константный домен, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 26, 31 или 32; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19, или ее вариант, содержащую константный домен, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, 25, 27, 28, 33, 34, 35 или 36; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23, или ее вариант, содержащую константный домен, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь (HC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27; и легкую цепь (LC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 28; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 33; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 34; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 35; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 36; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 26, 31 или 32; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 26; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 31; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 32; и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. В дополнительном варианте осуществления указанная выше HC и/или LC может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, при условии, что определяющие комплементарность области (CDR) указанного выше антитела могут содержать не больше чем 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую вариабельный домен легкой цепи или вариабельный тяжелой цепи любого одного из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с эпитопом на факторе свертывания XI (FXI), содержащем аминокислотную последовательность YATRQFPSLEHRNICL (SEQ ID NO: 38) и аминокислотную последовательность HTQTGTPTRITKL (SEQ ID NO: 39), при условии, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент не содержит аминокислотные последовательности мыши или крысы.

В дополнительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент не содержит не относящиеся к человеку аминокислотные последовательности. В дополнительном варианте осуществления антитело содержит константный домен IgG1 или константный домен IgG4 человека или его модифицированный вариант. В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере замену серина в положении 228 (нумерация EU) или положении 108, как показано в SEQ ID NO: 14, на остаток пролина.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который по меньшей мере не содержит лизин на C-конце.

В дополнительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности вариабельного домена, содержащие каркас, характерный для антител человека.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с эпитопом на факторе свертывания XI (FXI), содержащем аминокислотную последовательность YATRQFPSLEHRNICL (SEQ ID NO: 38) и аминокислотную последовательность HTQTGTPTRITKL (SEQ ID NO: 39), при условии, что антитело содержит константный домен IgG1 или константный домен IgG4 человека или его модифицированное производное.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания. В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере замену серина в положении 228 (нумерация EU) или положении 108, как показано в SEQ ID NO: 14, на остаток пролина.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который по меньшей мере не содержит лизин на C-конце.

В дополнительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности вариабельного домена, содержащие каркас, характерный для антител человека.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который перекрестно блокирует или конкурирует с эталонным антителом за связывание с фактором свертывания XI, где эталонное антитело содержит (i) тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 26, 31 или 32, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19; или (ii) тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, 25, 27, 28, 33, 34, 35 или 36, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; при условии, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент не содержит аминокислотные последовательности мыши или крысы.

В дополнительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент не содержит не относящиеся к человеку аминокислотные последовательности. В дополнительном варианте осуществления антитело содержит константный домен IgG1 или константный домен IgG4 человека или его модифицированный вариант. В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний. В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере замену серина в положении 228 (нумерация EU) или положении 108, как показано в SEQ ID NO: 14, на остаток пролина.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который по меньшей мере не содержит лизин на C-конце. В дополнительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности вариабельного домена, содержащие каркас, характерный для антител человека.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который перекрестно блокирует или конкурирует с эталонным антителом за связывание с фактором свертывания XI, где эталонное антитело содержит (i) тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 26, 31 или 32, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19; или (ii) тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, 25, 27, 28, 33, комплементарность 34, 35 или 36, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; при условии, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит константный домен IgG1 или константный домен IgG4 человека или его модифицированное производное.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере 1, 2, 3 или замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG4 представляет собой вариант, который содержит по меньшей мере замену серина в положении 228 (нумерация EU) или положении 108, как показано в SEQ ID NO: 14, на остаток пролина.

В дополнительном варианте осуществления константный домен IgG1 или IgG4 представляет собой вариант, который по меньшей мере не содержит лизин на C-конце.

В дополнительном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности вариабельного домена, содержащие каркас, характерный для антител человека.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способ получения (a) антитела или антигенсвязывающего фрагмента, содержащих (i) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 или 13, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и (ii) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, или (b) антитела или антигенсвязывающего фрагмента, содержащих (i) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий тяжелую цепь, содержащую определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и (ii) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, способ включает предоставление клетки-хозяина, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь; и культивирование клетки-хозяина в условиях и в течение времени, достаточных для получения антитела или антигенсвязывающего фрагмента.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG4 или его вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или ее вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит константный домен легкой цепи κ человека или константный домен легкой цепи лямбда человека или его вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или ее вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, клетка-хозяин представляет собой клетку яичника китайского хомячка или клетку эмбриональной почки человека 293.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, клетка-хозяин представляет собой клетку дрожжей или нитчатого гриба.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает композицию, содержащую (a) антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (i) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий тяжелую цепь, содержащую определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 или 13, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и (ii) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, или (b) антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие (i) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий тяжелую цепь, содержащую определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания; и (ii) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, где необязательно одна или несколько HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и где антитело или антигенсвязывающий фрагмент получают из клетки-хозяина, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG4 или его вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или ее вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, легкая цепь содержит константный домен легкой цепи κ человека или константный домен легкой цепи лямбда человека или его вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или ее вариант, где константный домен содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, клетка-хозяин представляет собой клетку яичника китайского хомячка или клетку эмбриональной почки человека 293.

В дополнительных аспектах или вариантах осуществления изобретения, клетка-хозяин представляет собой клетку дрожжей или нитчатого гриба.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает композицию, содержащую антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому одному из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способ лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому одному из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагмент или композиций, содержащих любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов.

В дополнительных вариантах осуществления субъект страдает от или имеет риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

В дополнительных вариантах осуществления субъект имеет патологическую активацию FXI.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент или композицию, раскрытые в настоящем описании, вводят субъекту посредством парентерального введения.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно от 0,3 приблизительно до 3,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта (мг/кг).

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно от 1,0 до 2,0 мг/кг.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно 1,0 мг/кг.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 или 2,0 мг/кг.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способ лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или антигенсвязывающих фрагментов по любому одному из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композиций, содержащих любое одно из указанных выше антител или фрагментов антител.

В дополнительных вариантах осуществления субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект, страдающий от или имеющий риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

В дополнительных вариантах осуществления субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект с патологической активацией FXI.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент или композицию вводят субъекту посредством парентерального введения.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно от 0,3 приблизительно до 3,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта (мг/кг).

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно от 1,0 до 2,0 мг/кг.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно 1,0 мг/кг.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 или 2,0 мг/кг.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает применение антитела по любому одному из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композиции, содержащей любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов, для изготовления лекарственного средства для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания.

В конкретных вариантах осуществления тромбоэмболическое нарушение или заболевание представляет собой инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочную тромбоэмболию, венозную тромбоэмболию (VTE), фибрилляцию предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическую злокачественную опухоль или инфекционное заболевание.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитело пол любому одному из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композицию, содержащую любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания.

В конкретных вариантах осуществления тромбоэмболическое нарушение или заболевание представляет собой инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочную тромбоэмболию, венозную тромбоэмболию (VTE), фибрилляцию предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическую злокачественную опухоль или инфекционное заболевание.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способ ингибирования активации FXI с помощью фактора XIIa (FXIIa) у субъекта, который включает: (a) выбор субъекта, нуждающегося в лечении, где субъект, нуждающийся в лечении, имеет тромбоз или имеет риск его развития; и (b) введение субъекту ингибирующего количества любого одного из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композиции, содержащей любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов, тем самым ингибируя активацию FXI с помощью FXIIa.

В дополнительных вариантах осуществления субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект, страдающий от или имеющий риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

В дополнительных вариантах осуществления субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект с патологической активацией FXI.

В дополнительных вариантах осуществления ингибирующее количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента или композиции представляет собой количество, достаточное для того, чтобы ингибировать активацию FXI по меньшей мере на 50%.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент или композицию вводят субъекту посредством парентерального введения.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в ингибирующем количестве приблизительно от 0,3 приблизительно до 3,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта (мг/кг).

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в ингибирующем количестве приблизительно от 1,0 до 2,0 мг/кг.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в ингибирующем количестве приблизительно 1,0 мг/кг.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в ингибирующем количестве приблизительно 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 или 2,0 мг/кг.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способ ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз, у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества любого одного из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композиции, содержащей любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов, тем самым ингибируя свертывание крови и ассоциированный тромбоз, не компрометируя гемостаз у субъекта.

В дополнительных вариантах осуществления субъект страдает от или имеет риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

В дополнительных вариантах осуществления субъект имеет патологическую активацию FXI.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент или композицию вводят в количестве, достаточном для того, чтобы ингибировать активацию FXI по меньшей мере на 50%.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент или композицию вводят субъекту посредством парентерального введения.

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно от 0,1 приблизительно до 10 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта (мг/кг).

В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно от 1,0 до 2,0 мг/кг. В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно 1,0 мг/кг. В дополнительных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят в терапевтически эффективном количестве приблизительно 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 или 2,0 мг/кг.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает применение любого одного из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композиции, содержащей любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов, для изготовления лекарственного средства для ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов или композицию, содержащую любое одно из указанных выше антител или антигенсвязывающих фрагментов, для ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоз, не компрометируя гемостаз.

Определения

Как используют в настоящем описании, «антитело» относится как к целому иммуноглобулину, в том числе рекомбинантно полученным формам, так и включает любую форму антитела, которая проявляет желаемую биологическую активность. Таким образом, его используют в самом широком смысле и, в частности, он охватывает, но не ограничиваясь этим, моноклональные антитела (в том числе полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), гуманизированные, полностью антитела человека, бипаратопные антитела и химерные антитела. «Исходные антитела» представляют собой антитела, получаемые посредством воздействия на иммунную систему антигеном перед модификацией антител для предполагаемого применения, такой как гуманизация антитела для применения в качестве терапевтического антитела человека.

Как используют в настоящем описании, «антигенсвязывающий фрагмент» относится к антительным фрагментам, т. е. фрагментам антител, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном, связываемым полноразмерным антителом, например, фрагментам, в которых сохраняют одну или несколько областей CDR. Примеры антительных связывающих фрагментов включают, но не ограничиваясь этим, фрагменты Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv; диатела; молекулы одноцепочечных антител, например, sc-Fv; нанотела и полиспецифические антитела, формируемые из фрагментов антител.

Как используют в настоящем описании, «фрагмент Fab» состоит из одной легкой цепи и C_H1 и вариабельных областей одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может формировать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи. «Фрагмент Fab» может представлять собой продукт расщепления антитела папаином.

Как используют в настоящем описании, «фрагмент Fab'» содержит одну легкую цепь и часть или фрагмент одной тяжелой цепи, которая содержит домен V_H и домен C_H1, а также область между доменами C_H1 и C_H2, так что межцепную дисульфидную связь можно формировать между двумя тяжелыми цепями двух фрагментов Fab' для того, чтобы формировать молекулу F(ab')₂.

Как используют в настоящем описании, «фрагмент F(ab')₂» содержит две легкие цепи и две тяжелые цепи, содержащие домен V_H и часть константной области между доменами C_H1 и C_H2, так что межцепную дисульфидную связь формируют между двумя тяжелыми цепями. Фрагмент F(ab')₂, таким образом, состоит из двух фрагментов Fab', удерживаемых вместе дисульфидной связью между двумя тяжелыми цепями. «Фрагмент F(ab')₂» может представлять собой продукт расщепления антитела пепсином.

Как используют в настоящем описании, «Fv-область» содержит вариабельные области как от тяжелой, так и легкой цепей, но не содержит константные области.

Как используют в настоящем описании, область «Fc» содержит два фрагмента тяжелых цепей, которые содержат домены C_H1 и C_H2 антитела. Два фрагмента тяжелых цепей удерживают вместе двумя или больше дисульфидными связями и гидрофобными взаимодействиями доменов C_H3.

Как используют в настоящем описании, «диатело» относится к небольшому фрагменту антитела с двумя антигенсвязывающими участками, эти фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (V_L) в той же полипептидной цепи (V_H-V_L или V_L-V_H). Используя линкер, который слишком короток для того, чтобы сделать возможным образование пары между двумя доменами одной и той же цепи, домены принуждают образовывать пары с комплементарными доменами другой цепи и создавать два антигенсвязывающих участка. Диатела описаны more полно, например, в EP 404,097; WO 93/11161; и Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448. Обзор сконструированных вариантов антител в целом см. в Holliger and Hudson (2005) Nat. Biotechnol. 23:1126-1136.

Как используют в настоящем описании, «доменное антитело» представляет собой иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина, содержащий только вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи. В некоторых случаях, две или больше областей V_H ковалентно соединяют с использованием пептидного линкера для того, чтобы создавать двухвалентное доменное антитело. Две области V_H двухвалентного доменного антитела могут быть направлены на один и тот же или различные антигены. В одном из вариантов осуществления изобретения доменное антитело представляет собой однодоменное антитело или нанотело. В одном из вариантов осуществления изобретения доменное антитело представляет собой нанотело, содержащее по меньшей мере CDR тяжелой цепи раскрытых антител αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, указанные CDR тяжелой цепи, где необязательно одна или несколько CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Как используют в настоящем описании, «двухвалентное антитело» содержит два антигенсвязывающих участка. В некоторых случаях, два сайта связывания обладают одними и теми же антигенными специфичностями. Однако двухвалентные антитела могут быть биспецифическими (например, с аффинностью к FXI и другому антигену).

Как используют в настоящем описании, «биспецифическое антитело» представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две различных пары тяжелых/легких цепей и, таким образом, два различных сайта связывания. Например, биспецифическое антитело может содержать первую пару тяжелой/легкой цепей, содержащую одну тяжелую и одну легкую цепь первого антитела, которая содержит по меньшей мере шесть CDR из антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или вариантов осуществления, в которых одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, наряду со второй парой тяжелой/легкой цепей, содержащей одну тяжелую и одну легкую цепь второго антитела, обладающего специфичностью к антигену, представляющему интерес, который отличен от FXI. Биспецифические антитела можно получать различными способами, включая слияние гибридом или сшивку фрагментов Fab'. См., например, Songsivilai, et al., (1990) Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321, Kostelny, et al., (1992) J Immunol. 148:1547- 1553. Кроме того, биспецифические антитела можно формировать в виде «диател» (Holliger, et al., (1993) PNAS USA 90:6444-6448) или в виде «Janusin» (Traunecker, et al., (1991) EMBO J. 10:3655-3659 и Traunecker, et al., (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7:51-52).

Как используют в настоящем описании, «бипаратопное антитело представляет собой антитело, обладающее специфичностью связывания к различным эпитопам на одном и том же антигене.

Как используют в настоящем описании, «выделенные» антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по меньшей мере частично свободны от других биологических молекул из клеток или клеточных культур, в которых их получают. Такие биологические молекулы включают нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другие материалы, такие как клеточный дебрис и среда для выращивания. Выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, кроме того, могут быть по меньшей мере частично свободны от компонентов экспрессирующей системы, таких как биологические молекулы из клетки-хозяина или среды для ее выращивания. В целом, термин «выделенный» не предназначен для обозначения полного отсутствия таких биологических молекул или отсутствия воды, буферов или солей или компонентов фармацевтического состава, который содержит антитела или фрагменты.

Как используют в настоящем описании, «моноклональное антитело» относится к популяции по существу гомогенных антител, т. е. молекулы антител, входящие в популяцию, идентичны по аминокислотной последовательности, за исключением возможных встречаемых в природе мутаций, которые могут быть представлены в незначительных количествах. В отличие от этого, стандартные препараты (поликлональных) антител обычно содержат множество различных антител, которые имеют различные аминокислотные последовательности в их вариабельных доменах, которые часто специфичны к различным эпитопам. Модификатор «моноклональный» указывает на характер антитела в качестве полученного из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует толковать в качестве требования к получению антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, подлежащие применению в соответствии с настоящим изобретением, можно создавать гибридомным способом, впервые описанным в Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, или можно создавать с помощью способов рекомбинантной ДНК (см., например, патент США № 4816567). «Моноклональные антитела» также можно выделять из фаговых библиотек антител с использованием способов, описанных в Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 и Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597, например. Также см. Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731.

Как используют в настоящем описании, «химерное антитело» представляет собой антитело, которое имеет вариабельный домен из первого антитела и константный домен из второго антитела, где (i) первое и второе антитела происходят от различных биологических видов (патент США № 4816567; и Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855) или (ii) первое и второе антитела относятся к различным изотипам, например, вариабельный домен из антитела IgG1 и константные домены из антитела IgG4, например, αFXI-13465p-IgG4 (S228P). В одном из аспектов, вариабельные домены получают из антитела человека («исходного антитела») и последовательности константных доменов получают из антитела, не относящегося к человеку (например, мыши, крысы, собаки, обезьяны, гориллы, лошади). В другом аспекте вариабельные домены получают из антитела, не относящегося к человеку («исходного антитела») (например, мыши, крысы, собаки, обезьяны, гориллы, лошади), и последовательности константных доменов получают из антитела человека. В дополнительном аспекте, вариабельные домены получают из антитела IgG1 человека («исходного антитела»), а последовательности константных доменов получают из антитела IgG4 человека.

Как используют в настоящем описании, «гуманизированное антитело» относится к формам антител, которые содержат последовательности из антител как человека, так и не относящихся к человеку (например, мыши, крысы). В целом, гуманизированное антитело содержит все из по меньшей мере одного и обычно двух вариабельных доменов, где гипервариабельные петли соответствуют таковым в иммуноглобулине, не относящемся к человеку, и все или по существу все каркасные области (FR) представляют собой таковые из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно может содержать по меньшей мере часть константной области (Fc) иммуноглобулина человека.

Как используют в настоящем описании, «полностью антитело человека» относится к антителу, которое содержит аминокислотные последовательности иммуноглобулинов человека или последовательности их вариантов, содержащих мутации, введенные рекомбинантно для обеспечения полностью антитела человека модифицированной функцией или эффектом по сравнению с антителом, не содержащим указанные мутации. Полностью антитело человека не содержит не относящиеся к человеку аминокислотные последовательности иммуноглобулинов, например, константные домены и вариабельные домены, в том числе CDR, содержат последовательности человека, не считая тех, что созданы мутациями, которые рассмотрены выше. Полностью антитело человека может содержать аминокислотные последовательности антител или иммуноглобулинов, полученные из библиотеки полностью антител человека, где разнообразие в библиотеке генерируют in silico (см., например, патент США № 8877688 или 8691730). Полностью антитело человека включает такие антитела, которые получают в организме, не относящемся к человеку, например, полностью антитело человека может содержать углеводные цепи мыши, если получено в мыши, в клетках мыши или в гибридоме, полученной из клетки мыши. Аналогичным образом, «мышиное антитело или антитело мыши» относится к антителу, которое содержит только последовательности иммуноглобулинов мыши или мышиных иммуноглобулинов. Альтернативно, полностью антитело человека может содержать углеводные цепи крысы, если получено в крысе, в клетке крысы или в гибридоме, полученной из клетки крысы. Аналогичным образом, «антитело крысы» относится к антителу, которое содержит только последовательности иммуноглобулинов крысы.

Как используют в настоящем описании, «не относящиеся к человеку аминокислотные последовательности» в отношении антител или иммуноглобулинов относится к аминокислотной последовательности, которая характерна для аминокислотной последовательности млекопитающего, не относящегося к человеку. Термин не включает аминокислотные последовательности антител или иммуноглобулинов, получаемые из библиотеки полностью антител человека, где разнообразие в библиотеке генерируют in silico (см., например, патент США № 8877688 или 8691730).

В целом, базовое структурное звено антитела содержит тетрамер. Каждый тетрамер содержит две идентичные пары полипептидных цепей, каждая пара имеет одну «легкую» (приблизительно 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (приблизительно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи содержит вариабельную область приблизительно от 100 до 110 или больше аминокислот, в первую очередь отвечающую за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть тяжелой цепи может определять константную область, в первую очередь отвечающую за эффекторную функцию. Обычно легкие цепи человека классифицируют как легкие цепи κ и лямбда. Кроме того, тяжелые цепи человека обычно классифицируют как μ, δ, γ, α или ε, и они определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области соединены областью «J» приблизительно из 12 или больше аминокислот, причем тяжелая цепь также содержит область «D» приблизительно из еще 10 аминокислот. См. в целом Fundamental Immunology, гл. 7 (ред. Paul, W., 2-е изд., Raven Press, N.Y. (1989).

Как используют в настоящем описании, «эффекторные функции» относятся к тем биологическим активностям, которые свойственны Fc-области антитела, которая варьирует вместе с изотипом антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC); связывание Fc-рецептора; антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, рецепторов B-клеток); и активацию B-клеток.

Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепей образуют сайт связывания антитела. Таким образом, в целом, интактное антитело имеет два сайта связывания. За исключением бифункциональных или биспецифических антител, два сайта связывания, в целом, одинаковы.

Обычно вариабельные домены как тяжелых, так и легких цепей содержат три гипервариабельные области, также называемые определяющими комплементарность областями (CDR), которые расположены в относительно консервативных каркасных областях (FR). CDR обычно выравниваются с помощью каркасных областей, что делает возможным связывание с конкретным эпитопом. В целом, от N-конца к C-концу, вариабельные домены как легких, так и тяжелых цепей содержат FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Распределение аминокислот в каждом домене, в целом, соответствует определениям в Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5-е изд.; NIH Publ. № 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901-917 или Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883.

Как используют в настоящем описании, «гипервариабельная область» относится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена. Гипервариабельная область содержит аминокислотные остатки из «определяющей комплементарность области» или «CDR» (т. е. CDRL1, CDRL2 и CDRL3 в вариабельном домене легкой цепи и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 в вариабельном домене тяжелой цепи). См. Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (определение областей CDR антитела по последовательности); см. также Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 (определение областей CDR антитела по структуре).

Как используют в настоящем описании, остатки «каркаса» или «FR» относятся к тем остаткам вариабельного домена, которые отличаются от остатков гипервариабельных областей, которые определены в настоящем описании как остатки CDR.

Как используют в настоящем описании, «консервативно модифицированные варианты» или «консервативная замена» относится к заменам аминокислот на другие аминокислоты, имеющие схожие характеристики (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформация и жесткость остова и т. д.), так что изменения часто можно выполнять, не изменяя биологическую активность белка. Специалисты в данной области поймут, что, в целом, замены отдельных аминокислот в несущественных областях полипептида по существу не изменяют биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., стр. 224 (4-е изд.)). Кроме того, замены структурно или функционально схожих аминокислот с меньшей вероятностью нарушают биологическую активность. Образцовые консервативные замены приведены далее в таблице.

Исходный остаток Консервативная замена Исходный остаток Консервативная замена Ala (A) Gly; Ser Leu (L) Ile; Val Arg (R) Lys; His Lys (K) Arg; His Asn (N) Gln; His Met (M) Leu; Ile; Tyr Asp (D) Glu; Asn Phe (F) Tyr; Met; Leu Cys (C) Ser; Ala Pro (P) Ala Gln (Q) Asn Ser (S) Thr Glu (E) Asp; Gln Thr (T) Ser Gly (G) Ala Trp (W) Tyr; Phe His (H) Asn; Gln Tyr (Y) Trp; Phe Ile (I) Leu; Val Val (V) Ile; Leu

Как используют в настоящем описании, термин «эпитоп», как используют в настоящем описании, определяют в контексте молекулярного взаимодействия между «антигенсвязывающей молекулой», такой как антитело (Ab), и соответствующим ей «антигеном» (Ag). В целом, «эпитоп» относится к участку или области на Ag, с которой Ab специфически связывается, т. е. участку или области в физическом контакте с Ab. Физический контакт можно определять критерии расстояния (например, порог расстояния 4 ангстрема) для атомов в молекулах Ab и Ag.

Эпитоп для данной пары антитело (Ab)/антиген (Ag) можно определять и охарактеризовать на различных уровнях детализации, используя различные экспериментальные и вычислительные способы картирования эпитопов. Экспериментальные способы включают мутагенез, рентгеновскую кристаллографию, спектроскопию ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и масс-спектрометрию водородно-дейтериевого обмена (HX-MS), способы, которые известны в данной области. Поскольку каждый способ основан на уникальном принципе, описание эпитопа тесно связано со способом, с помощью которого он определен. Таким образом, в зависимости от используемого способа картирования эпитопов, эпитоп для данной пары Ab/Ag описывают по-разному.

Эпитоп для данной пары антитело (Ab)/антиген (Ag) можно описывать стандартными способами. Например, общее местоположение эпитопа можно определять посредством оценки способности антитела связываться с различными фрагментами или вариантами антигена. Конкретные аминокислоты в антигене, которые образуют контакт с антителом, (эпитоп) также можно определять с использованием стандартных способов. Например, можно комбинировать молекулы Ab и Ag и кристаллизовать комплекс Ab/Ag. Кристаллическую структуру комплекса можно определять и использовать для того, чтобы идентифицировать конкретные участки взаимодействия между Ab и Ag.

Как используют в настоящем описании, «специфически связывает» относится, в отношении антигена, такого как FXI, к предпочтительному ассоциированию антитела или другого лиганда, целиком или частично, с клеткой или тканью, несущей этот антиген, и не с клетками или тканями, не содержащими этого антигена. Установлено, что определенная степень неспецифического взаимодействия может происходить между молекулой и клеткой или тканью не мишени. Тем не менее, специфическое связывание можно различать как опосредованное через специфическое распознавание антигена. Несмотря на то, что избирательно реактивные антитела связывают антиген, они могут выполнять это с низкой аффинностью. С другой стороны, специфическое связывание ведет к значительно более сильному ассоциированию между антителом (или другим лигандом) и клетками, несущими антиген, чем между связанным антителом (или другим лигандом) и клетками, не содержащими антиген. Специфическое связывание обычно ведет к более чем 2-кратному, например, более чем 5-кратному, более чем 10-кратному или более чем 100-кратному увеличению количества связанного антитела или другого лиганда (в единицу времени) с клеткой или тканью, содержащей FXI, по сравнению с клеткой или тканью, не содержащей FXI. Для специфического связывания с белком при таких условиях необходимо антитело, которое выбирают по его специфичности к конкретному белку. Иммунологические анализы различных форматов подходят для отбора антител или других лигандов, в частности, иммунологически реактивных в отношении конкретного белка. Например, твердофазные иммунологические анализы ELISA используют обычным образом для того, чтобы выбирать моноклональные антитела со специфической иммунологической реактивностью к определенному белку. Описание форматов иммунологических анализов и условий, которые можно использовать для того, чтобы определять специфическую иммунореактивность, см. в Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York (1988).

Как используют в настоящем описании, «выделенная молекула нуклеиновой кислоты» обозначает ДНК или РНК, происходящую из генома, мРНК, кДНК или синтетического происхождения, или некоторое их сочетание, которая не связана со всем или частью полинуклеотида, в котором выделенный полинуклеотид находят в природе, или связана с полинуклеотидом, с которым она не связана в природе. Для целей этого раскрытия следует понимать, что «молекула нуклеиновой кислоты, содержащая» конкретную нуклеотидную последовательность, не охватывает интактные хромосомы. Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, «содержащие» конкретные последовательности нуклеиновой кислоты, могут включать, в дополнение к конкретным последовательностям, кодирующие последовательности для вплоть до десяти или даже вплоть до двадцати или больше других белков или их частей или фрагментов, или могут включать функционально связанные регуляторные последовательности, которые управляют экспрессией кодирующей области указанных последовательностей нуклеиновой кислоты, и/или могут включать последовательности векторов.

Как используют в настоящем описании, «лечить» или «лечение» обозначает введение терапевтического средства, такого как композиция, содержащая любое из антител или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, внутренне или внешне по отношению к субъекту или пациенту, имеющему один или несколько симптомов заболевания или подозреваемому в наличии заболевания, для которого средство обладает терапевтической активностью или профилактической активностью. Обычно средство вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или нескольких симптомов заболевания у получающего лечение субъекта или популяции, будь то посредством индукции регресса или ингибирования прогрессирования такого симптома(ов) в любой клинически поддающейся измерению степени. Количество терапевтического средства, которое эффективно для облегчения любого конкретного симптома заболевания, может варьировать в соответствии с факторами, такими как состояние заболевания, возраст и масса пациента, а также способность лекарственного средства вызывать желаемый ответ у субъекта. Произошло ли облегчение симптома заболевания, можно оценивать посредством любого клинического измерения, обычно используемого врачами или другими квалифицированными поставщиками медицинских услуг, чтобы оценивать тяжесть или состояние прогрессирования этого симптома. Термин дополнительно включает отсрочку развития симптомов, связанных с нарушением, и/или снижение тяжести симптомов такого нарушения. Термины дополнительно включают улучшение существующих неконтролируемых или нежелательных симптомов, предотвращение дополнительных симптомов и улучшение или предотвращение причин, лежащих в основе таких симптомов. Таким образом, термины указывают, что полезным результатом наделен субъект человек или животное с нарушением, заболеванием или симптомом или с потенциалом к развитию такого нарушения, заболевания или симптома.

Как используют в настоящем описании, «лечение», как его применяют к человеческому или ветеринарному субъекту, относится к терапевтическому лечению, а также диагностическим применениям. «Лечение», как его применяют к человеческому или ветеринарному субъекту, охватывает контакт антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению с субъектом человеком или животным.

Как используют в настоящем описании, «терапевтически эффективное количество» относится к количеству конкретного вещества, достаточному для достижения желаемого эффекта у субъекта, подлежащего лечению. Например, оно может представлять собой количество, необходимое для того, чтобы ингибировать активацию FXI, или количество, необходимое для того, чтобы ингибировать коагуляцию в течение по меньшей мере от 192 до 288 часов, как определяют в анализе aPTT. При введении субъекту, в целом следует использовать дозу, которая позволяет достигать концентраций в ткани-мишени, для которых показано, что они достигают желаемого эффекта in vitro.

Как используют в настоящем описании, «тромбоз» относится к формированию или присутствию сгустка (также называемого «тромбом») внутри кровеносного сосуда, который препятствует току крови через кровеносную систему. Тромбоз обычно обусловлен аномалиями в составе крови, качеством стенки сосуда и/или свойствами тока крови. Формирование сгустка часто обусловлено повреждением стенки сосуда (например, при травме или инфекции) и замедлением или застоем тока крови за точкой повреждения. В некоторых случаях, аномалии в коагуляции вызывают тромбоз.

Как используют в настоящем описании, «не компрометируя гемостаз» обозначает, что небольшое или не поддающееся обнаружению кровотечение наблюдают у субъекта или пациента после введения антитела или фрагмента антитела, раскрытого в настоящем описании, субъекту или пациенту. В случае направленного воздействия на фактор XI, ингибирование превращения фактора XI в фактор XIa или активации фактора IX с помощью фактора Xia ингибирует коагуляцию и ассоциированный тромбоз без кровотечения. В отличие от этого, ингибирование превращения или активности фактора XI ингибирует коагуляцию, но также вызывает кровотечение или увеличивает риск кровотечения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фиг. 1A и фиг. 1B представлен коагуляционный каскад, структура FXI и местоположение, где четыре новых оральных антикоагулянта (NOAC) оказывают свой ингибирующий эффект. На фиг. 1A представлена схема, изображающая FXI в коагуляционном каскаде (который состоит из внутреннего и внешнего путей). FXI-связывающее антитело, такое как то, которое раскрыто в настоящем описании, может вызывать функциональную нейтрализацию через блокирование активации FXI с помощью FXIIa и, таким образом, сниженную последующую активацию FIX в FIXa. Представлены четыре NOAC (ривароксабан, апиксабан, эдоксабан, дабигатран), направленные на FXa или тромбин. На фиг. 1B показана доменная структура FXI. FXI представляет собой димер, состоящий из идентичных субъединиц по 80 кДа, и каждая субъединица, начиная с N-конца, состоит из четырех доменов apple (1, 2, 3 и 4) и каталитического домена (CAT). Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, связывают домен apple 2.

На фиг. 2 представлена структура FXI, где части домена, защищенные от дейтерирования с помощью αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ или 13654p-IgG4 (S228P)(K-)/κ, окрашены черным. Пептиды в домене apple 2 без различий в дейтерировании представлены светло-серым. Пептиды, для которых данные не доступны, окрашены темно-серым.

На фиг. 3A показаны анализы активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT) для αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ (), α13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ (•), αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ (○) в плазме человека, выраженные в виде % увеличения относительно базового уровня. (ось y представляет собой aPTT (% увеличения) и ось x представляет собой Log [M] антитела)

На фиг. 3B показано время свертывания для αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ (), α13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ (•), αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ (○) в плазме человека, как определяют в анализе aPTT. (ось y представляет собой aPTT (с) и ось x представляет Log [M] антитела; aPTT (с) также можно выражать в виде времени сгустка (с))

На фиг. 4A представлены анализы aPTT для αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ (), α13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ (•), αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ (○) в плазме яванского макака, выраженные в виде % увеличения относительно базового уровня. (ось y представляет собой aPTT (% увеличения) и ось x представляет Log [M] антитела)

На фиг. 4B показано время свертывания для αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ (), α13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ (•), αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ (○) в плазме яванского макака, как определяют в анализе aPTT. (ось y представляет собой aPTT (с) и ось x представляет Log [M] антитела; aPTT (с) также можно выражать в виде времени сгустка (с))

На фиг. 5A представлены анализы активированного aPTT для αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ (), α13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ (•), αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ (○) в плазме макака-резуса, выраженные в виде % увеличения относительно базового уровня.

На фиг. 5B представлено время свертывания для αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ (), α13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ (•), αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ (○) в плазме макака-резуса, как определяют в анализе aPTT. (ось y представляет собой aPTT (с) и ось x представляет Log [M] антитела; aPTT (с) также можно выражать в виде времени сгустка (с))

На фиг. 6 представлена тепловая карта различий мечения дейтерием для остатков FXI с 131 до 165, связываемых с помощью αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ или αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ.

На фиг. 7 представлена аминокислотная последовательность для вариабельного домена тяжелой цепи (HC) αFXI-13654p, имеющего аминокислоту, приведенную в SEQ ID NO: 16, и вариабельного домена легкой цепи (LC), имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17. Показаны CDR для вариабельных областей и соответствующая им нумерация по KABAT.

На фиг. 8 представлена аминокислотная последовательность для αFXI-13654p-IgG4(S228P)/κ, содержащего тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 59, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. Вариабельные домены показаны курсивным начертанием и остаток пролина в S228P в константном домене тяжелой цепи показан полужирным начертанием с подчеркиванием.

На фиг. 9 представлена аминокислотная последовательность для вариабельного домена тяжелой цепи (HC) αFXI-13716p, имеющая аминокислоту, представленную в SEQ ID NO: 20, и вариабельного домена легкой цепи (LC), имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21. Показаны CDR для вариабельных областей и соответствующая им нумерация по KABAT.

На фиг. 10 представлена аминокислотная последовательность αFXI-13716p-IgG4(S228P)/κ, содержащего тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 60, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. Вариабельные домены показаны курсивным начертанием и остаток пролина в S228P в константном домене тяжелой цепи показан полужирным начертанием с подчеркиванием.

На фиг. 11 представлена аминокислотная последовательность для вариабельного домена тяжелой цепи (HC) αFXI-13716, имеющая аминокислоту, представленную в SEQ ID NO: 24, и вариабельного домена легкой цепи (LC), имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21. Показаны CDR для вариабельных областей и соответствующая им нумерация по KABAT.

На фиг. 12 представлена аминокислотная последовательность αFXI-13716p-IgG4(S228P)Q1EM103L/κ, содержащего тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 61, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. Вариабельные домены показаны курсивным начертанием и остаток пролина в S228P в константном домене тяжелой цепи показан полужирным начертанием с подчеркиванием.

На фиг. 13 представлена аминокислотная последовательность αFXI-13654p-IgG1/κ, содержащего тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 62, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19. Вариабельные домены показаны курсивным начертанием.

На фиг. 14 представлена аминокислотная последовательность αFXI-13716p-IgG1/κ, содержащего тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 63, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. Вариабельные домены показаны курсивным начертанием.

На фиг. 15 представлена аминокислотная последовательность αFXI-13716-IgG1 Q1EM103L/κ, содержащего тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 64, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23. Вариабельные домены показаны курсивным начертанием.

На фиг. 16 представлены сенсограммы BIAcore, которые показывают кинетику связывания αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ с FXI человека, яванского макака и макака-резуса и другими белками коагуляционного каскада человека и NHP.

На фиг. 17 представлены сенсограммы BIAcore, которые показывают кинетику связывания αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ с FXI человека, яванского макака и макака-резуса и другими белками коагуляционного каскада человека и NHP.

На фиг. 18 представлена схема парадигмы теста AV шунта у яванского макака. Анестезированным обезьянам, предварительно снабженным бедренными артериальными и венозными катетерами, вводили носитель или αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ (0,01-1,0 мг/кг) посредством внутривенного болюса (введение тестового изделия). AV шунт вставляли, как описано в тексте (вставить AV шунт). Кровь текла через AV шунт в течение 40 минут. Контакт между кровью и шелковой нитью, подвешенной внутри трубки, вызывал формирование сгустка. Сгустки взвешивали, как описано в тексте. Образцы крови получали для того, чтобы измерять циркулирующие уровни αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ, aPTT и PT (звезды).

На фиг. 19A-D представлены эффекты αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ, оказываемые на формирование сгустка AV шунта, aPTT и протромбиновое время (PT) в модели AV шунта у яванского макака. На фиг. 19A представлена масса сгустка (мг), измеряемая после 2 последовательных AV шунтов у одного и того же животного. Животным вводили носитель во время первого шунта (шунт № 1), после чего следовало введение αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K)/κ (в дозах 0,01 , 0,03 , 0,05 , 0,6 , 0,8 , 0,1 и 1,0 мг/кг IV), как показано во время второго шунта (шунт № 2). На фиг. 19B показан процент ингибирования массы сгустка. На фиг. 19C показан процент изменения aPTT с увеличением концентрации αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ в плазме. На фиг. 19D показан процент изменения PT с увеличивающимися концентрациями αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ.

На фиг. 20 представлена схема парадигмы времени типового кровотечения у яванских макаков.

На фиг. 21A-F представлены эффекты αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ, оказываемые на время типового кровотечения (BT) в секундах, измеряемое у яванских макаков. Время типового кровотечения измеряли в слизистой щеки (фиг. 21A, фиг. 21D), подушке пальца (фиг. 21B, фиг. 21E) и дистальном хвосте (фиг. 21C, фиг. 21F). Эффекты лечения (αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в сравнении с носителем), оказываемые на время кровотечения, оценивали посредством сравнения абсолютного времени кровотечения (фиг. 21A-C) и процентных изменений времени кровотечения (фиг. 21D-F), с использованием носителя-носителя в качестве лечения № 1 и 2 в сессии исследования № 1, и носитель-αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в качестве лечения № 1 и № 2 в сессии исследования № 2, используя односторонний парный критерий Стьюдента. На фиг. αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ обозначен как αFXI-13716.

На фиг. 22 представлены профили концентрации-времени после IV введения αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ макакам-резусам. Представлены профили концентрации-времени в плазме для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ у макак-резусов. Представлены точки данных от индивидуальных животных для каждой дозы: Gp6-0,1 мг/кг ; Gp5-0,3 мг/кг ; Gp4-1,0 мг/кг ; Gp3-3,0 мг/кг ; Gp2-6,0 мг/кг ; линии , , , и отражают групповое среднее для каждой дозы, соответственно. В каждой группе дозы было по 4 животных. ч=час; ось y лекарственное средство αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ мкг/мл.

На фиг. 23 представлены профили aPTT-времени у макака-резуса. Профили aPTT-времени для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ представлены отдельно для каждой группы дозы. В каждой группе дозы было по четыре животных. (ось y представляет собой aPTT (с) и ось x представляет собой время (часы). Линии представляют групповое средне: 6 мг/кг; 3 мг/кг; () 1 мг/кг; () 0,3 мг/кг; () 0,1 кг/мг; и () 0,0 мг/кг. Профили aPTT-времени индивидуальных животных для каждого момента времени представлены как (6 мг/кг); (3 мг/кг); (1 мг/кг); (0,3 мг/кг; (0,1 мг/кг); и (0,0 мг/кг).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение предусматривает антитела и антигенсвязывающие фрагменты против фактора свертывания XI, которые связывают домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI). Эти антитела и антигенсвязывающие фрагменты против FXI являются ингибиторами активации FXI с помощью фактора XIIa, и их можно применять для ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз (т. е., при антитромботических показаниях). Например, антитела и антигенсвязывающие фрагменты против FXI можно применять для лечения и/или предотвращения тромбоэмболических нарушений или заболеваний, включая в качестве неограничивающих примеров инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочную тромбоэмболию, венозную тромбоэмболию (VTE), фибрилляцию предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическую злокачественную опухоль и инфекционное заболевание. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, в частности, можно применять для предотвращения инсульта при фибрилляции предсердий (SPAF). Антитела и антигенсвязывающие фрагменты также можно применять для лечения или предотвращения тромбоза, связанного с заболеванием или повреждением вен в ногах; обездвиженностью по любой причине; переломом; определенными медикаментами; ожирением; наследственными нарушениями или наследственной предрасположенностью; аутоиммунными нарушениями, которые предрасполагают к свертыванию; медикаментами, такими как определенные контрацептивы, которые увеличивают риск свертывания; и курением. Следовательно, антитела и антигенсвязывающие фрагменты против FXI, раскрытые в настоящем описании, можно применять в терапии для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания у пациента или субъекта, нуждающегося в такой терапии.

FXI представляет собой гомодимерную сериновую протеазу, обладающую доменной структурой, представленной на фиг. 1B, и является неотъемлемым компонентом внутреннего пути коагуляционного каскада. Зимоген FXI можно расщеплять с помощью фактора XIIa до его активированной формы FXIa. Затем FXIa активирует фактор IX и в конечном итоге запускает образование тромбина и формирование сгустка. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты против FXI, раскрытые в настоящем описании, ингибируют превращение FXI в FXIa (см. фиг. 1A).

Молекулы антител против FXI получали из библиотеки синтетических IgG1 полностью человека/κ, представленной на поверхности сконструированных штаммов дрожжей. Скрининг библиотеки осуществляли с использованием FXI или FXIa для того, чтобы идентифицировать антитела, способные к связыванию с FXI человек с субнаномолярной аффинностью к FXI человека и не являющегося человеком примата (NHP) и не обладающие связыванием с калликреином (белком, обладающим 56% аминокислотной идентичностью с FXI) плазмы человека и NHP или с другими белками коагуляционного каскада человека (FII/IIa, FVII/VIIa, FIX/IXa, FX/Xa, и FXII/XIIa). Идентифицировали два антитела, которые обладали этими свойствами: αFXI-13654p и αFXI-13716p. Эти антитела представляют собой полностью антитела человека, содержащие легкую цепь κ человека (κ) и тяжелую цепь изотипа IgG1 (γ1) человека. Антитела избирательно связываются с эпитопом зимогена FXI, который содержит SEQ ID NO: 37 и 38, расположенным в домене apple 2 в FXI. Эти антитела также связывают FXIa с аффинностью, сравнимой с зимогеном FXI.

Антитело αFXI-13654p содержит определяющие комплементарность области (CDR) 1, 2 и 3 тяжелой цепи (HC), имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно, и CDR 1, 2 и 3 легкой цепи (LC), имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно. αFXI-13654p содержит вариабельный домен тяжелой цепи (HC), содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, и вариабельный домен легкой цепи (LC), содержащий аминокислотную последовательность в SEQ ID NO: 17. αFXI-13654p содержит LC, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19, и HC, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 31.

Антитело αFXI-13716p содержит CDR 1, 2 и 3 HC, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, и SEQ ID NO: 9, соответственно, и CDR 1, 2 и 3 LC, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, соответственно. αFXI-13716p содержит вариабельный домен тяжелой цепи (HC), содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, и вариабельный домен легкой цепи (LC), содержащий аминокислотную последовательность в SEQ ID NO: 21. αFXI-13716p содержит LC, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23, и HC, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 33.

В конкретных вариантах осуществления CDR 3 HC (SEQ ID NO: 9) из αFXI-13716p модифицировали для того, чтобы заменять первый остаток метионина (Met) в CDR3 на остаток лейцина для того, чтобы предоставлять антитело αFXI-13716 (Met в положении 103 в SEQ ID NO: 20 или положении 5 в SEQ ID NO: 13). Антитело αFXI-13716 содержит CDR 1, 2 и 3 HC, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 13, соответственно, и CDR 1, 2 и 3 LC, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, соответственно. αFXI-13716 содержит вариабельный домен тяжелой цепи (HC), содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, и вариабельный домен легкой цепи (LC), содержащий аминокислотную последовательность в SEQ ID NO: 21. αFXI-13716 содержит LC, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23, и HC, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 35. Замена Met в положении 5 в SEQ ID NO: 9 на Val, Ile, Asn, Asp или Glu снижала эффект антитела в анализе aPTT.

Настоящее изобретение предусматривает антитела и антигенсвязывающие фрагменты против FXI, имеющие вариабельную область, содержащую по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, или варианты осуществления, в которых одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI), и способы применения антитела для лечения антитромботических показаний, например, тромбоэмболических нарушений или заболеваний, таких как инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочная тромбоэмболия, венозная тромбоэмболия (VTE), фибрилляция предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическая злокачественная опухоль или инфекционное заболевание, или, например, предотвращение инсульта при фибрилляции предсердий (SPAF).

Настоящее изобретение предусматривает антитела и антигенсвязывающие фрагменты против FXI, имеющие вариабельную область, содержащую по меньшей мере три HC-CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, или варианты осуществления, в которых одна или несколько из трех HC-CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI), и способы применения антитела для лечения антитромботических показаний, например, тромбоэмболических нарушений или заболеваний, таких как инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочная тромбоэмболия, венозная тромбоэмболия (VTE), фибрилляция предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическая злокачественная опухоль или инфекционное заболевание, или, например, предотвращение инсульта при фибрилляции предсердий (SPAF).

В конкретных аспектах, антитела или антигенсвязывающий фрагмент против FXI содержат по меньшей мере вариабельный домен HC антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или вариант вариабельного домена HC, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний относительно аминокислотной последовательности HC в αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716.

В конкретных аспектах, антитела или антигенсвязывающий фрагмент против FXI содержат по меньшей мере вариабельный домен LC антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или вариант вариабельного домена LC, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний относительно аминокислотной последовательности LC в αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716.

В конкретных аспектах, антитела или антигенсвязывающий фрагмент против FXI содержат по меньшей мере вариабельный домен HC антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или вариант вариабельного домена HC, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний относительно аминокислотной последовательности HC в αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, и вариабельный домен LC антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или вариант вариабельного домена LC, содержащий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний относительно аминокислотной последовательности LC в αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716.

В конкретных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающий фрагмент содержат в настоящем описании по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и дополнительно содержат тяжелую цепь (HC), которая имеет изотип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека, и легкая цепь (LC) может относиться к типу κ или типу лямбда. В других вариантах осуществления антитела содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и дополнительно могут относиться к классу IgM, IgD, IgA или IgE. В конкретных вариантах осуществления изотип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека может содержать 1 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний.

В конкретных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающий фрагмент содержат могут содержать по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и дополнительно содержат константный домен HC, который имеет изотип IgG4. Каркас IgG4 обеспечивает антитело небольшой или нулевой эффекторной функцией. В дополнительном аспекте изобретения, антитела могут содержать по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и дополнительно содержат константный домен HC, который имеет изотип IgG4, слитый с вариабельным доменом HC, который имеет изотип IgG1. В дополнительном аспекте изобретения, антитела могут содержать по меньшей мере вариабельный домен HC и вариабельный домен LC антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или их варианты, где вариабельные домены HC и/или LC независимо содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, и дополнительно содержат константный домен HC, который имеет изотип IgG4. В дополнительном аспекте изобретения, антитела могут содержать по меньшей мере вариабельный домен HC, а также LC антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716, или их варианты, где HC и/или LC независимо содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетаний, и дополнительно содержат константный домен HC, который имеет изотип IgG4.

Антитела по настоящему изобретению дополнительно включают, но не ограничиваясь этим, моноклональные антитела (в том числе полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), бипаратопные антитела, полностью антитела человека и химерные антитела.

В целом, аминокислотная последовательность тяжелой цепи антитела, такого как IgG1 или IgG4, имеет лизин на C-конце константного домена тяжелой цепи. В некоторых случаях, чтобы усовершенствовать однородность антительного продукта, можно получать антитело, не содержащее C-концевой лизин. Антитела против FXI по настоящему изобретению включают варианты осуществления, в которых C-концевой лизин присутствует, и варианты осуществления, в которых C-концевой лизин отсутствует. Например, константный домен HC IgG1 может иметь аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 40, и константный домен HC IgG4 может иметь аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, где в каждом случае где X представляет собой лизин или отсутствует.

В конкретных вариантах осуществления N-концевая аминокислота в HC может представлять собой остаток глутамина. В конкретных вариантах осуществления N-концевая аминокислота в HC может представлять собой остаток глутаминовой кислоты. В конкретных аспектах N-концевую аминокислоту модифицируют, чтобы она представляла собой остаток глутаминовой кислоты.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антигенсвязывающие фрагменты против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает фрагменты Fab против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитела против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и их антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат Fc-область, и способы их применения.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает фрагменты Fab' против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает F(ab')₂ против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает фрагменты Fv против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает фрагменты scFv против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела против FXI αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает доменные антитела против FXI, которые содержат по меньшей мере 3 CDR HC или 3 CDR LC антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из CDR из HC или LC имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает двухвалентные антитела против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает биспецифические антитела и антигенсвязывающие фрагменты, обладающие специфичностью связывания с FXI и другим антигеном, представляющим интерес, а также способы их применения.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает бипаратопные антитела, имеющие первую пару тяжелой/легкой цепей из первого антитела, которая содержит по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и вторую пару тяжелой/легкой цепей из второго антитела, обладающего специфичностью к эпитопу FXI, которые отличается от эпитоп, распознаваемого первой парой тяжелой/легкой цепей.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает антитела против FXI и их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие первую пару тяжелой/легкой цепей антитела, которая содержит по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и вторую пару тяжелой/легкой цепей антитела, которая содержит по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает диатела против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания.

Антитело, которое содержит по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, можно модифицировать некоторым образом так, что оно сохраняет по меньшей мере 10% его FXI-связывающей активности (по сравнению с исходным антителом), когда эту активность выражают на молярной основе. Предпочтительно, антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению сохраняет по меньшей мере 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100% или больше от аффинности связывания FXI исходного антитела. Также предусмотрено, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может содержать консервативные или неконсервативные аминокислотные замены (обозначаемые как «консервативные варианты» или «варианты с сохраненной функцией» антитела), которые по существу не изменяют его биологическую активность.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает выделенные антитела против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и их антигенсвязывающие фрагменты, а также способы их применения, а также их выделенные полипептидные цепи иммуноглобулинов и выделенные полинуклеотиды, кодирующие такие антитела, антигенсвязывающие фрагменты и выделенные полипептидные цепи иммуноглобулинов, и выделенные векторы, содержащие такие полинуклеотиды.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает моноклональные антитела против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и их антигенсвязывающие фрагменты, а также моноклональные композиции, содержащие множество выделенных моноклональных антител.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает химерные антитела против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, и способы их применения.

Настоящее изобретение включает полностью антитела человека против FXI, которые содержат по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, а также их антигенсвязывающие фрагменты и способы их применения.

В одном из вариантов осуществления изобретения полностью антитело человека против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой продукт выделения из трансгенного животного, например, мыши (например, мыши HUMAB, см., например, патенты США № 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5661016; 5770429; 5789650; 5814318; 5874299 и 5877397; и Harding, et al., (1995) Ann. NY Acad. Sci. 764:536 546; или XENOMOUSE, см., например, Green et al., 1999, J. Immunol. Methods 231:11-23), которое генетически модифицировано, чтобы иметь гены полностью иммуноглобулина человека; или продукт выделения из фага или вируса, который экспрессирует цепи иммуноглобулина полностью антитела человека против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент.

В некоторых вариантах осуществления различные константные домены можно присоединять к областям V_L и V_H, получаемым из CDR, предоставленных в настоящем описании. Например, если конкретное предполагаемое применения антитела (или фрагмента) по настоящему изобретению состоит в том, чтобы вызывать измененные эффекторные функции, можно использовать константный домен тяжелой цепи, отличный от IgG1 человека, или можно использовать гибрид IgG1/IgG4, который обладает измененной эффекторной функцией.

Несмотря на то, что антитела IgG1 человека обеспечивают длительное время полужизни и эффекторные функции, такие как активация комплемента и антителозависимая клеточная цитотоксичность, такие активности могут не быть желательными для всех применений антитела. В таких случаях можно использовать, например, константный домен IgG4 человека. Настоящее изобретение включает антитела против FXI, которые содержат константный домен IgG4 и его варианты, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций, инсерций аминокислот и их сочетаний.

В одном из вариантов осуществления константный домен IgG4 может отличаться от нативного константного домена IgG4 человек (№ доступа Swiss-Prot P01861.1) в положении, соответствующем положению 228 в системе EU и положению 241 в системе KABAT, где нативный серин в положении 108 (Ser108) константного домена HC, как показано в SEQ ID NO: 14, например, заменяют на пролин (Pro) для того, чтобы препятствовать потенциальной межцепной дисульфидной связи между цистеином в положении 106 (Cys106) и цистеином в положении 109 (Cys109), соответствующими положениям Cys226 и Cys229 в системе EU и положениям Cys239 и Cys242 в системе KABAT), которая может мешать надлежащему формированию внутрицепных дисульфидных связей. См. Angal et al. Mol. Imunol. 30:105 (1993); см. также (Schuurman et. al., Mol. Immunol. 38: 1-8, (2001); SEQ ID NO: 14 и 41).

В других случаях можно использовать модифицированный константный домен IgG1, который модифицирован для того, чтобы снижать эффекторную функцию, например, изотип IgG1 может содержать замены остатками IgG2 в положениях 233-236 и остатками IgG4 в положениях 327, 330 и 331, чтобы значительно снижать ADCC и CDC (как раскрыто in Armour et al., Eur J Immunol. 29(8):2613-24 (1999); Shields et al., J Biol Chem. 276(9):6591-604(2001)). В конкретных вариантах осуществления константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций, инсерций аминокислот и их сочетаний

В другом варианте осуществления HC IgG модифицируют генетически, чтобы она не содержала N-гликозилирование остатка аспарагина (Asn) около положения 297. Консенсусная последовательность для N-гликозилирования представляет собой Asn-Xaa-Ser/Thr (где Xaa представляет собой любую аминокислоту, за исключением Pro); в IgG1 консенсусная последовательность для N-гликозилирования представляет собой Asn-Ser-Thr. Модификацию можно создавать посредством замены кодона для Asn в положении 297 в молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей HC, на кодон для другой аминокислоты, например, Gln. Альтернативно, кодон для Ser можно заменить на кодон для Pro или кодон для Thr можно заменить на любой кодон, за исключением кодона для Ser. Такие модифицированные молекулы IgG1 имеют небольшую или не поддающуюся обнаружению эффекторную функцию. Альтернативно, модифицируют все три кодона.

В одном из вариантов осуществления изобретения антитела против FXI, содержащие по меньшей мере 6 CDR антитела αFXI-13654p, αFXI-13716p или αFXI-13716 или альтернативно 6 CDR, где одна или несколько из шести CDR имеют 1, 2 или 3 замены, добавления, делеции аминокислот или их сочетания, содержат полную тетрамерную структуру, имеющую две легкие цепи и две тяжелые цепи, в том числе константные области. Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепей образует сайт связывания антитела. Таким образом, в целом, интактное антитело имеет два сайта связывания. За исключением биспецифических антител, два сайта связывания, в целом, одинаковы.

В конкретных вариантах осуществления, настоящее изобретение предусматривает следующие антитела против FXI:

αFXI-13654p(K-)/κ, содержащее HC IgG1, не содержащую C-концевой K (без K) и имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 31, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19.

αFXI-13654p(K+)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 32, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19.

αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18 и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19.

αFXI-13654p-IgG4(S228P) (K+)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P и C-концевой K (C-концевой K), и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 26, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19.

αFXI-13716p(K-)/κ, содержащее HC IgG1, не содержащую C-концевой K (без K) и имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 33, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716p(K+)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 34, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P и имеет C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716M103L(K-)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет мутацию M103L и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 35, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716M103L(K+)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет мутацию M103L и C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 36, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716Q1EM103L(K-)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет мутацию M103L и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 54, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716Q1EM103L(K+)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет мутацию M103L и имеет C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 55, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716Q1E(K-)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет мутацию Q1E и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 65, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716Q1E(K+)/κ, содержащее HC IgG1, которая имеет мутацию Q1E и C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 66, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P Q1E M103L и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P Q1E M103L и C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 28, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1E(K-)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P Q1E M103L и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 67, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1E(K+)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P Q1E M103L и C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 68, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716-IgG4(S228P)M103L(K-)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P Q1E M103L и не содержит C-концевой K (без K) и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 69, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

αFXI-13716-IgG4(S228P)M103L(K+)/κ, содержащее HC IgG4, которая имеет мутацию S228P Q1E M103L и C-концевой K и имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 70, и κ LC, которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23.

FIX представляет собой эндогенный белковый субстрат для FXIa, активной протеазы зимогена FXI. FXIa активирует FIX до FIXa, тем самым поддерживая коагуляционный каскад. Проведенные анализы, схожие с протоколом, описанным в примере 5, показывали, что антитела αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ связываются с FXI и ингибируют FXIIa-опосредованную активацию FXI в присутствии HMW кининогена, тогда как в отсутствие HMW кининогена антитела против не ингибируют FXIIa-опосредованную активацию FXI до FXIa. Ферментативные анализы FXIa с применением субстратов полноразмерных FIX или пептидов FIX с конкретными последовательностями, которые выполняли в анализах, схожих с теми, что описаны в примере 6, показывали, что антитела αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ обладали не поддающимся обнаружению ингибирующим эффектом, оказываемым на активацию FIX с помощью FXIa. Результаты показывают, что антитела против FXI функционально нейтрализуют нисходящие эффекты FXI посредством предотвращения активации FXI с помощью FXIIa и не оказывают влияния каталитическую активность FXIa.

Картирование эпитопов с помощью масс-спектрометрии водородно-дейтериевого обмена (HDX-MS), как описано в примере 4, с применением антитела αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ показывало, что антитела против FXI, содержащие указанные выше CDR HC и LC, связываются с конкретным эпитопом на домене apple 2, содержащим SEQ ID NO: 38 и SEQ ID NO: 39.

Таким образом, антитела и антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, связываются с доменом apple 2 в FXI и ингибируют активацию FXI с помощью FXIIa, но не каталитическую активность FXIa; эти антитела могут оставлять гемостатическую активацию FXI с помощью тромбина интактной, таким образом давая минимальный риск кровотечения. Эти антитела также отличаются от блокаторов активности FXIa, для которых белок-мишень (FXIa) не существует до тех пор, пока коагуляционный каскад включен.

Фармацевтические композиции и введение

Для того чтобы получать фармацевтические или стерильные композиции антител против FXI или их антигенсвязывающего фрагмента, антитело или его антигенсвязывающие фрагменты смешивают с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences и U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984).

Составы терапевтических и диагностических средств можно получать посредством смешивания с приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами, например, в форме лиофилизированных порошков, взвесей, водных растворов или суспензий (см., например, Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeuticals, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams and Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (ред.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (ред.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (ред.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY). В одном из вариантов осуществления антитела против FXI или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению разводят до подходящей концентрации в растворе ацетата натрия pH 5-6 и добавляют NaCl или сахарозу для тоничности. Дополнительные средства, такие как полисорбат 20 или полисорбат 80, можно добавлять для увеличения стабильности.

Токсичность и терапевтический эффект композиций антител или антигенсвязывающих фрагментов, вводимых отдельно или в комбинации с другим средством, можно определять с помощью стандартных фармацевтических процедур в клеточных культурах или у экспериментальных животных, например, для определения LD₅₀ (дозы, летально для 50% популяции) и ED₅₀ (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз между токсическими и терапевтическими эффектами представляет собой терапевтический индекс (LD₅₀/ED₅₀). В конкретных аспектах желательны антитела, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, получаемые из анализов этих клеточных культур и исследований на животных, можно использовать при формулировании диапазона доз для применения у человека. Доза таких соединений лежит предпочтительно в диапазоне циркулирующих концентраций, который включает ED₅₀ при небольшой или нулевой токсичности. Доза может варьировать в этом диапазоне в зависимости от используемой дозированной формы и пути введения.

В дополнительном варианте осуществления композицию, содержащую антитело или антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, вводят субъекту в соответствии с Physicians' Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57-е изд. (1 ноября 2002 года)).

Способ введения может варьировать. Подходящими путями введения предпочтительно является парентеральный или подкожный, Другие пути введения могут включать оральный, чресслизистый, внутрикожный, прямой внутрижелудочковый, внутривенный, интраназальный, ингаляционный, инсуфляционный или внутриартериальный.

В конкретных вариантах осуществления антитело против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент можно вводить через инвазивный путь, например, посредством инъекции (см. выше). В дополнительных вариантах осуществления изобретения, антитело против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент или его фармацевтическую композицию можно вводить внутривенно, подкожно, внутриартериально, или посредством ингаляционной, аэрозольной доставки. Введение через неинвазивные пути (например, перорально; например, в пилюле, капсуле или таблетке) также входит в объем настоящего изобретения.

Композиции можно вводить с использованием медицинских устройств, известных в данной области. Например, фармацевтическую композицию по изобретению можно вводить посредством инъекции с использованием гиподермальной иглы, в том числе, например, предварительно заполненного шприца или автоинъектора.

Фармацевтические композиции, раскрытые в настоящем описании, также можно вводить с использованием безыгольного гиподермального инъекционного устройства; такие как устройства раскрыты в патентах США № 6620135; 6096002; 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556.

Фармацевтические композиции, раскрытые в настоящем описании, также можно вводить посредством инфузии. Примеры общеизвестных имплантатов и модулей для введения фармацевтических композиций включают: патент США № 4487603, в котором раскрыт имплантируемый микроинфузионный насос для дозирования медикамента с контролируемой скоростью; патент США № 4447233, в котором раскрыт медикаментозный инфузионный насос для доставки медикамента с точной скоростью инфузии; патент США № 4447224, в котором раскрыт имплантируемый инфузионный аппарат с переменным потоком для непрерывной доставки лекарственного средства; патент США № 4439196, в котором раскрыта осмотическая система доставки лекарственных средств, которая имеет многокамерные компартменты. Многие другие такие импланты, системы доставки и модули хорошо известны специалистам в данной области.

Схема введения зависит от нескольких факторов, в том числе скорости оборота терапевтического антитела в сыворотке или ткани, уровня симптомов, иммуногенности терапевтического антитела и доступности клеток-мишеней в биологической матрице. Предпочтительно, по схеме введения доставляют достаточное терапевтическое антитело для того, чтобы вызывать улучшение состояния целевого заболевания, при этом одновременно минимизируя нежелательные побочные эффекты. Соответственно, количество доставляемого биологического средства частично зависит от конкретного терапевтического антитела и тяжести состояния, подлежащего лечению. Доступно руководство по выбору подходящих доз терапевтических антител (см., например, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ред.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ред.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert, et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602).

Определение подходящей дозы выполняет клиницист, например, используя параметры или факторы, о которых в данной области известно, что они влияют на лечение. В целом, дозу начинают с количества, которое несколько меньше, чем оптимальная доза, и после этого ее увеличивают на небольшие приращения до тех пор, пока не достигают желаемого или оптимального эффекта относительно любых негативных побочных эффектов. Важные диагностические меры включают таковые для симптомов, например, воспаления или уровня продуцируемых воспалительных цитокинов. В целом, желательно антитело или антигенсвязывающий фрагмент, подлежащие использованию, извлекают у того же биологического вида, что и животное, которое будут лечить, тем самым минимизируя любой иммунный ответ на реактив. В случае субъектов людей, например, могут быть желательны химерные, гуманизированные человека и полностью антитела человека.

Антитела против FXI или их антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, можно предоставлять с помощью доз, вводимых еженедельно. Дозы можно предоставлять подкожно. Общая недельная доза в целом составляет приблизительно от 0,3 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта до 3,0 мг/кг, более предпочтительно приблизительно от 1,0 до 2,0 мг/кг или между 1,0 мг/кг и 3,0 мг/кг (см., например, Yang, et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold, et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu, et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji, et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:133-144).

Наборы

Кроме того, предусмотрены наборы, содержащие один или несколько компонентов, которые включают, но не ограничиваясь этим, антитело или антигенсвязывающий фрагмент против FXI, как рассмотрено в настоящем описании, в связи с одним или несколькими дополнительными компонентами, включая в качестве неограничивающих примеров дополнительное терапевтическое средство, как рассмотрено в настоящем описании. Антитело или фрагмент и/или терапевтическое средство можно формулировать в виде чистой композиции или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем в фармацевтической композиции.

В одном из вариантов осуществления набор содержит антитело против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент или его фармацевтическую композицию в одном контейнере (например, в стерильном стеклянном или пластмассовом флаконе) и дополнительное терапевтическое средство в другом контейнере (например, в стерильном стеклянном или пластмассовом флаконе).

В другом варианте осуществления набор содержит комбинацию по изобретению, в том числе антитело против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент или его фармацевтическую композицию в комбинации с одним или несколькими терапевтическими средствами, сформулированными вместе, необязательно, в фармацевтической композиции, в одном общем контейнере.

Если набор содержит фармацевтическую композицию для парентерального введения субъекту, набор может содержать устройство для осуществления такого введения. Например, набор может содержать одну или несколько гиподермальных игл или других инъекционных устройств, как рассмотрено выше. Таким образом, настоящее изобретение включает набор, содержащий инъекционное устройство и антитело против FXI или его антигенсвязывающий фрагмент, например, где инъекционное устройство содержит антитело или фрагмент или где антитело или фрагмент находятся в отдельном сосуде.

Набор может содержать вкладыш в упаковку, содержащий информацию, касающуюся фармацевтических композиций и дозированных форм в наборе. В целом, такая информация помогает пациентам и врачам использовать включенные фармацевтические композиции и дозированные формы эффективно и безопасно. Например, следующую информацию, касающуюся комбинации по изобретению, можно сообщать во вкладыше: фармакокинетика, фармакодинамика, клинические исследования, параметры эффективности, показания и использование, противопоказания, предупреждения, меры предосторожности, нежелательные реакции, передозировка, надлежащая доза и введение, форма выпуска, надлежащие условия хранения, ссылки, информация о производителе/распространителе и патентная информация.

Способы получения антител и их антигенсвязывающих фрагментов

Антитела против FXI и их антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, также можно получать рекомбинантно. В этом варианте осуществления нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулы антител и антигенсвязывающих фрагментов, можно встраивать в вектор и экспрессировать в рекомбинантное клетке-хозяине. Существует несколько способов, с помощью которых получают рекомбинантные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые известны в данной области.

Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии антител или антигенсвязывающих фрагментов, раскрытых в настоящем описании, хорошо известны в данной области и включают многие иммортализованные клеточные линии, доступные в American Type Culture Collection (ATCC). Они включают, inter alia, клетки яичника китайского хомяка (CHO), NSO, клетки SP2, клетки HeLa, клетки почки новорожденного хомяка (BHK), клетки почки обезьяны (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2), клетки A549, клетки 3T3, клетки эмбриональной почки человека 293 (HEK-293) и множество других клеточных линий. Конкретные предпочтительные клеточные линии выбирают через определение того, какие клеточные линии имеют высокие уровни экспрессии. Другие клеточные линии, которые можно использовать, представляют собой клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9, клетки амфибий, бактериальные клетки, клетки растений, клетки нитчатых грибов (например, Trichoderma reesei) и клетки дрожжей (например, Saccharomyces cerevisiae или Pichia pastoris).

Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть или фрагмент, легкую цепь и/или ее антигенсвязывающий фрагмент, вводят в клетки-хозяева, антитела получают посредством культивирования клеток-хозяев в условиях и в течение определенного периода времени, достаточных для того, чтобы сделать возможной экспрессию антитела или антигенсвязывающих фрагментов в клетках-хозяевах или, более предпочтительно, секрецию антител в среду для культивирования, в которой выращивают клетки-хозяева. Антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно извлекать из среды для культивирования и дополнительно очищать или обрабатывать для получения антител по изобретению.

В конкретных аспектах клетки-хозяева трансфицируют экспрессирующим вектором, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, где HC и LC экспрессируют в виде слитого белка, где N-конец HC и LC слиты с лидерной последовательностью для того, чтобы содействовать транспортировке антитела через секреторный путь. Примеры лидерных последовательностей, которые можно использовать, включают MSVPTQVLGLLLLWLTDARC (SEQ ID NO: 56), MEWSWVFLFFLSVTTGVHS (SEQ ID NO: 57) или MELGLCWVFLVAILEGVQC (SEQ ID NO: 58).

HC образцовых антител αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ можно кодировать с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 42, 47 или 52, соответственно.

LC образцовых антител αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ можно кодировать с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 44 или 49, соответственно.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 42, 47 или 52. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие первую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 42, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 44. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие первую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 47 или 52, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 49.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)v/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, и плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает клетку-хозяина, содержащую одну или несколько плазмид или вирусных векторов, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ. В конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина CHO или HEK-293.

HC из образцовых антител αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ можно кодировать с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 43, 48 или 53, соответственно.

LC из образцовых антител αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ можно кодировать с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 44 или 49, соответственно.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 43, 48 или 53. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие первую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 43, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 44. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие первую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 48 или 53, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 49.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)v/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K+)/κ.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ, и плазмиду или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает клетку-хозяина, содержащую одну или несколько плазмид или вирусных векторов, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC из αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K+)/κ, 13716p-IgG4(S228P)(K+)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ. В конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина CHO или HEK+293.

В конкретных вариантах осуществления антитела могут содержать тяжелую цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 45, 46, 50, 51, 54 или 55. В конкретных вариантах осуществления предусмотрена плазмида или вирусный вектор, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, 46, 50, 51, 54 или 55. В дополнительном варианте осуществления предусмотрены плазмида или вирусный вектор, содержащие первую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45 или 46, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 44. В дополнительном варианте осуществления предусмотрены плазмида или вирусный вектор, содержащие первую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, 51, 54 или 55, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49.

Антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно извлекать из среды для культивирования с использованием стандартных способов очистки белков. Кроме того, экспрессию антител по изобретению (или других их фрагментов) продуцирующими клеточными линиями можно усиливать с использованием множества известных способов. Например, система экспрессии гена глутаминсинтетазы (система GS) представляет собой обыкновенный подход для усиления экспрессии при определенных условиях.

В целом, гликопротеины, продуцируемые в конкретной клеточной линии или трансгенном животном, будут иметь паттерн гликозилирования, который характерен для гликопротеинов, продуцируемых в клеточной линии или трансгенном животном (см., например, Croset et al., J. Biotechnol. 161: 336-348 (2012)). Следовательно, конкретный паттерн гликозилирования антитела или антигенсвязывающих фрагментов зависит от конкретных клеточной линии или трансгенного животного, используемых для получения антитела или антигенсвязывающих фрагментов. Однако все антитела и антигенсвязывающие фрагменты, кодируемые молекулами нуклеиновой кислоты, предоставленными в настоящем описании, или содержащие аминокислотные последовательности, предоставленные в настоящем описании, входят в настоящее изобретение, независимо от паттерна гликозилирования, который могут иметь антитела или антигенсвязывающие фрагменты.

Следующие примеры предназначены для того, чтобы содействовать дополнительному пониманию настоящего изобретения.

ОБЩИЕ СПОСОБЫ

Стандартные способы в молекулярной биологии описаны в Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989, 2-е изд., 2001 3-е изд.) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3-е изд., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, том 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные способы также встречаются в Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, тома 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, где описано клонирование в бактериальных клетках и мутагенез ДНК (том 1), клонирование в клетках млекопитающих и дрожжей (том 2), гликоконъюгаты и экспрессия белка (том 3) и биоинформатика (том 4).

Описаны способы очистки белка, включая иммунопреципитацию, хроматографию, электрофорез, центрифугирование и кристаллизацию (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, том 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Описан химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, получение слитых белков, гликозилирование белков (см., например, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, том 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, том 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, стр. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; стр. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., стр. 384-391). Описаны получение, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител (Coligan, et al. (2001) Current Protоcols in Immunology, том 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, выше). Доступны стандартные способы определения характеристик взаимодействий лиганд/рецептор (см., например, Coligan, et al. (2001) Current Protоcols in Immunology, том 4, John Wiley, Inc., New York).

Можно получать моноклональные, поликлональные и гуманизированные антитела (см., например, Sheperd and Dean (ред.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (ред.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, стр. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; патент США № 6329511).

Альтернативой гуманизации является применение библиотек антител человека, представленных на фагах, или библиотек антител человека в трансгенных мышах (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:397-399.

Антитела можно конъюгировать, например, с небольшими молекулами лекарственных средств, ферментами, липосомами, полиэтиленгликолем (PEG). Антитела можно использовать для терапевтических, диагностических, наборов или других целей, и они включают антитела, соединенные, например, с красителями, радиоизотопами, ферментами или металлами, например, коллоидным золотом (см., например, Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883-889).

Доступны способы проточной цитометрии, в том числе сортировка флуоресцентно-активированных клеток (FACS) (см., например, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2-е изд.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Доступны флуоресцентные реактивы, подходящие для модификации нуклеиновых кислот, в том числе праймеры и зонды нуклеиновых кислот, полипептиды и антитела, например, для использования в качестве диагностических реактивов (Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

Описаны стандартные способы гистологии иммунной системы (см., например, Muller-Harmelink (ред.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).

Доступны пакеты программного обеспечения и базы данных для определения, например, антигенных фрагментов, лидерных последовательностей, укладки белка, функциональных доменов, участков гликозилирования и выравнивания последовательностей (см., например, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

ПРИМЕР 1

Кинетика связывания, биологическая активность и способ блокады антител против FXI на FXI и FXIa человека и не являющихся человеком приматов (NHP). Кинетику связывания и аффинность белок-белкового взаимодействия между αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ и зимогеном FXI человека определяли с использованием ProteOn XPR36 (Bio-Rad), оптического биодатчика на основе SPR (поверхностный плазмонный резонанс).

В кратком изложении, GLC чип датчика низкой плотности промывают по всем вертикальным и горизонтальным каналам потоков 0,5% додецилсульфатом натрия, 50 мМ гидроксидом натрия и 100 мМ соляной кислотой в течение 60 с при скорости потока 30 мкл/с. Затем альгинатную поверхность чипа для всех шести вертикальных каналов потоков (L1-L6) активируют с использованием 1× EDC/sNHS при скорости потока 30 мкл/с в течение 150 с. Затем мышиное поликлональное антитело против IgG человека, направленное на Fc (захватывающее антитело), разведенное до 1,25 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, pH 5,0, инъецируют во всех шесть вертикальных каналов потоков в течение 300 с при скорости потока 25 мкл/с для связывания приблизительно 300 единиц ответа (RU) захватывающего антитела с активированной поверхностью чипа на канал потока посредством аминного сочетания с эндогенным лизином. Затем 1 M этаноламин HCl инъецируют во все шесть вертикальных каналов потоков, чтобы нейтрализовать остающиеся реакционноспособные амины поверхности. Затем антитела против FXI инъецируют по 25 мкл/минута в течение 60 с, каждое в отдельный вертикальный канал потока, покрытый захватывающим антителом (L2, L3, L4, L5 или L6), в концентрации 5 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, pH 5,0, чтобы достигать насыщающих уровней захвата приблизительно 80 RU; в вертикальный канал потока L1 инъецируют 10 мМ ацетат натрия, pH 5,0 (только буфер), в качестве эталонного контроля. После захвата антител против FXI, подвижный буфер (1× HBS-N, 5 мМ CaCl₂, 0,005% P20, pH 7,4) инъецируют во все горизонтальные каналы потоков (A1-A6) в течение 5 минут и оставляют диссоциировать в течение 20 минут при 25 мкл/минута для того, чтобы удалять любые не специфически связанные антитела против FXI с поверхности чипа. Для того чтобы измерять скорость ассоциации (k_a) FXI человека с захваченными антителами против FXI, 6-точечное титрование зимогена FXI человека (0, 0,25, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 нМ, разводили подвижным буфером) впоследствии инъецируют горизонтально по всем шести вертикальным каналам потоков в течение 8 минут; затем связанный зимоген оставляют диссоциировать в течение 60 минут в подвижном буфере при 25 мкл/мин для того, чтобы измерять скорость диссоциации (k_d). Кинетику связывания и аффинность (K_D) можно определять с использованием специального программного обеспечения прибора (Bio-Rad).

Кинетику связывания и аффинность белок-белкового взаимодействия между антителами человека против FXI αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ и зимогеном FXI не являющегося человеком примата (NHP) (яванский макак и макак-резус) можно определять с использованием ProteOn XPR36 (Bio-Rad), оптического биодатчика на основе SPR (поверхностный плазмонный резонанс). GLC чип датчика низкой плотности промывают по всем вертикальным и горизонтальным каналам потоков 0,5% додецилсульфатом натрия, 50 мМ гидроксидом натрия и 100 мМ соляной кислотой в течение 60 с при скорости потока 30 мкл/с. Затем альгинатную поверхность чипа для всех шести вертикальных каналов потоков (L1-L6) активируют с использованием 1× EDC/sNHS при скорости потока 30 мкл/с в течение 150 с. Затем мышиное поликлональное антитело против IgG человека, направленное на Fc (захватывающее антитело), разведенное до 30 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, pH 5,0, инъецируют по всем шести вертикальным каналам потоков в течение 150 с при скорости потока 25 мкл/с, чтобы достигать насыщения связывания приблизительно в 4500 единиц ответа (RU) захватывающего антитела с активированной поверхностью чипа на канал потока посредством аминного сочетания с эндогенным лизином. Затем 1 M этаноламин HCl инъецируют по всем шести вертикальным каналам потоков, чтобы нейтрализовать любые остающиеся реакционноспособные амины поверхности. Затем антитела против FXI инъецируют по 25 мкл/минута в течение 60 с, каждое в отдельный вертикальный канал потока, покрытый захватывающим антителом (L2, L3, L4, L5 или L6), в концентрации 0,415 мкг/мл в подвижном буфере (1× HBS-N, 5 мМ CaCl₂, 0,005% P20, pH 7,4), чтобы достигать уровней захвата приблизительно 40 RU; в вертикальный канал потока L1 инъецируют только подвижный буфер в качестве эталонного контроля. После захвата антител против FXI, подвижный буфер инъецируют во все горизонтальные каналы потоков (A1-A6) в течение 5 минут и оставляют диссоциировать в течение 20 минут при 25 мкл/минута для того, чтобы удалять не специфически связанные антитела против FXI с поверхности чипа. Для того чтобы измерять скорость ассоциации (k_a) FXI NHP с захваченными антителами против FXI, 6-точечное титрование зимогена FXI NHP (0, 0,25, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 нМ, разводили в подвижном буфере) впоследствии инъецируют горизонтально по всем шести вертикальным каналам потоков в течение 8 минут; затем связанный зимоген оставляют диссоциировать в течение 60 минут в подвижном буфере при 25 мкл/минута для того, чтобы измерять скорость диссоциации (k_d). Кинетику связывания и аффинность (KD) определяли с использованием специального программного обеспечения прибора (Bio-Rad).

Кинетика связывания αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ с FXI и FXIa человека, яванского макака и макака-резуса, измеряемая по существу как описано выше, приведена в (таблице 1). Данные аппроксимировали с использованием модели Ленгмюра для 1 сайта (для k_on и k_off и равновесного связывания для определения константы диссоциации (K_D)). Оба антитела связывали FXI/XIa человека с K_D в диапазоне единиц пМ. Константы диссоциации связывания для обоих антител в пределах 2 крат среди белков FXI/FXIa от NHP видов.

Таблица 1

Связывание антител против FXI с FXI и FXIa Мишень N Аффинность FXI, средняя K_D ± SD, пМ Аффинность FXIa, средняя K_D ± SD, пМ αFXI-13716 αFXI-13654pǂ αFXI-13716** αFXI-13716 αFXI-13654pǂ αFXI-13716** Человек 3 2,5 ± 0,7 26,5 ± 8,6 3,5 ± 1,1 1,1 ± 0,5 9,0 ± 8,2 1,3 ± 0,5 Яванский макак 3 6,9 ± 2,8 12,9 ± 14,7 7,5 ± 1,4 3,3 ± 1,8 2,0 ± 1,2 3,7 ± 1,8 Макак-резус 3 2,0 ± 1,9 26,6 ± 19,6 3,1 ± 0,9 ND# ND# ND# * αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ
ǂαFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ
** αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ
#не выполняли

ПРИМЕР 2

Эффект антител против FXI, оказываемый на аутоактивацию FXI до FXIa на сульфате декстрана.

Аутоактивацию FXI до FXIa на сульфате декстрана можно измерять следующим образом. 10-точечные титрования доз антител αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, начиная с концентрации 1 мкМ в серии 3-кратных разведений, предварительно инкубировали с FXI человека (Haematologic Technologies, Inc., № по каталогу HCXI-0150, конечная концентрация 30 нМ) в 50 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,1% PEG-8000, pH 7,4 в течение 2 часов при 25°C в микропланшете с несвязывающей поверхностью Corning 3575. Затем инициировали реакцию аутоактивации посредством добавления сульфата декстрана (ACROS, № по каталогу 433240250, приблизительная молекулярная масса 800 кДа, конечная концентрация 1 нМ). Реакцию оставляли протекать при 25°C в течение 1 часа, когда можно обнаруживать ферментативную активность вновь активированного FXIa по скорости расщепления субстрата Z-GPR-AFC (Sigma, № по каталогу C0980-10MG, конечная концентрация 150 мкМ) посредством непрерывного мониторинга флуоресценции на 400/505 нм в течение 10 мин с использованием считывателя планшетов Tecan Infinite M200. % ингибирования для каждой точки данных можно пересчитывать из данных в RFU/минута и анализировать с использованием log(ингибитор) против четырехпараметрического уравнения ответа с использованием программного обеспечения GraphPad Prism. Приведенные значения EC₅₀ могут быть даны в виде среднего±SD, n=2. Результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2

Эффект антител против FXI, оказываемый на аутоактивацию FXI до FXIa Антитело N Ингибирование активации FXIa (EC₅₀, нМ) αFXI-13716* 2 11 ± 1 αFXI-13654pǂ 2 10 ± 8 αFXI-13716p** 2 4 ± 2 * αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ
ǂαFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ
** αFXI-13716p-IgG4(S228)(K-)/κ

ПРИМЕР 3

Анализ антител против FXI по активированному частичному тромбопластиновому времени (aPTT).

Способность антител αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ и αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L (K-)/κ блокировать коагуляцию in vitro оценивали с использованием анализа активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT). В анализе aPTT измеряют активность внутреннего и общего путей коагуляции.

Тест осуществляют плазме с цитратом натрия. В кратком изложении, плазму человека и NHP (яванского макака или макака-резуса) получают посредством взятия крови у здоровых доноров обоих полов в пробирки с цитратом Na (Sarstedt coagulation 9NC/10 мл). Кровь центрифугируют на 1500× g и собирают плазму. aPTT проверяют у каждого индивидуального донора, и объединяют тех, кто находится в нормальном диапазоне (28-40 с), части делят на аликвоты и хранят при -80°C. Плазму от других видов получают коммерческим путем (Innovative Research). Тестовые образцы получают посредством добавления ингибиторов или носителя в плазму. Эти образцы с добавками инкубируют (60 минут, комнатная температура (RT)), затем используют на анализаторе коагуляции (STA-R Evolution, Stago Diagnostica). В целом, анализатор выполняет следующие стадии: фактор XII активируют посредством добавления эллаговой кислоты (Pacific Hemostasis) и затем измеряют время до сгустка после рекальцификации образца. Ингибирование FXI будет вызывать пролонгирование aPTT времени сгустка. Данные выражают в виде процента увеличения относительно времени сгустка контроля с носителем и приводят концентрации, которая вызывает 50% (1,5×) увеличение времени сгустка.

Следуя протоколу, приведенному выше, концентрация антител, необходимая для пролонгирования времени свертывания на 50% (1,5× концентрация), была сравнима для 97% плазмы человека, яванского макака и макака-резуса (фиг. 3A-3B, фиг. 4A-4B и фиг. 5A-5B). На фиг. 3A, 4A и 5A приведены данные в виде % увеличения относительно базового уровня, тогда как на фиг. 3B, 4B, и 5B представлены исходные данные (время свертывания в с). 1,5× концентрации антител сравнимы (16,8-25 нМ) среди всех плазм человека и NHP и, вероятно, представляли концентрацию антитела, необходимую для того, чтобы титровать одну половину зимогена FXI, присутствующего в плазме (30-40 нМ зимогена). Максимальное пролонгирование времени свертывания для антител сравнимо между плазмой яванского макака и макака-резуса. Результаты дополнительно приведены в таблице 3.

Таблица 3

Концентрация антитела против FXI, которая пролонгирует время свертывания на 50% Антитело Человек Яванский макак Макак-резус 1,5× (нМ) 1,5× (нМ) 1,5× (нМ) αFXI-13654pǂ 16,8 21,6 25 αFXI-13716ł 21,6 22,5 19,4 αFXI-13716* 20,9 21,1 17,4 *αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ
ǂαFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ
ł αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ

ПРИМЕР 4

Картирование эпитопов антител против FXI с помощью масс-спектрометрии водородно-дейтериевого обмена.

Области контакта антител αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ с FXI человека определяли с использованием анализа масс-спектрометрии водородно-дейтериевого обмена (HDX-MS). В HDX-MS измеряют встраивание дейтерия в амидный остов белка, и на изменения в этом встраивании влияет экспозиция водорода для растворителя. Сравнение уровней дейтериевого обмена в образцах только антигена и образцах, связанных с антителами, выполняли для того, чтобы идентифицировать области антигена, которые могут находиться в контакте с антителом. Фактор XI человека имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 37.

Области фактора XI человека, защищенные от дейтерирования антителами, представляют собой эпитоп-A YATRQFPSLEHRNICL (остатки 133-148 фактора XI; SEQ ID NO: 38) и эпитоп-B HTQTGTPTRITKL (остатки 151-163 фактора XI; SEQ ID NO: 39). Эти пептиды расположены на домене apple 2 фактора XI (фиг. 2). В apple 1, 3, 4 или каталитических доменах не наблюдали значительных изменений дейтерирования, что указывает на то, что они не вовлечены в связывание αFXI-13716. На фиг. 6 представлена тепловая карта различий мечения дейтерием остатков с 131 до 165 фактора XI, связанных антителами. Оба антитела αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ защищали одни и те же области.

ПРИМЕР 5

Эффект антител против FXI, оказываемый на активацию FXI до FXIa с помощью FXIIa, в присутствии HMW кининогена и эллаговой кислоты.

Для того чтобы измерять эффекты антител против FXI, оказываемые на активацию зимогена FXI, можно использовать сопряженные ферментативные анализы, в которых измеряют FXIa-опосредованный протеолиз трипептидного флуорофора (GPR-AFC), чтобы определять, ингибируют ли антитела активацию FXI per se. Для этих экспериментов антитела против FXI предварительно инкубировали с зимогеном FXI в течение 1 часа. Активацию FXI до FXIa индуцировали посредством добавления FXIIa в присутствии HMW кининогена и эллаговой кислоты. Затем каталитическую активность FXIa на субстрате трипептидного флуорофора измеряют в виде считывания активации зимогена. Сопряженный анализ также проводили в отсутствие HMW кининогена в качестве контроля.

Анализ можно осуществлять следующим образом. 10-точечные титрования доз антител против FXI, начиная с концентрации 1 мкМ с серией 3-кратных разведений, предварительно инкубировали с FXI человека (Haematologic Technologies, Inc., № по каталогу HCXI-0150, конечная концентрация 30 нМ) и HMW кининогеном (Enzyme Research Laboratories, № по каталогу HK, конечная концентрация 280 нМ) в 50 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,1% PEG-8000, pH 7,4 в течение 2 часов при 25°C в микропланшете с несвязывающей поверхностью Corning 3575.

Затем инициировали реакцию активации посредством добавления реактива Pacific Hemostasis APTT-XL, содержащего эллаговую кислоту (Thermo Scientific, № по каталогу 100403, стоковая концентрация 100 мкМ, конечная концентрация 2 мкМ) и свежего разведенного фактора свертывания XIIa (Enzyme Research Laboratories, № по каталогу HFXIIa, конечная концентрация 50 пМ).

Реакцию оставляли протекать при 25°C в течение 1 часа, после чего ее можно было гасить посредством добавления ингибитора FXIIa. Ингибиторы FXIIa включают, например, ингибитор трипсина кукурузы (Santa Cruz Biotechnology, № по каталогу sc-204358), который можно использовать в концентрации приблизительно 200 нМ для того, чтобы ингибировать FXIIa, и ингибиторы, раскрытые в опубликованной заявке WO2013113774, например, H-D-Pro-Phe-Arg-хлорметилкетон (PCK), который необратимо ингибирует амидолитическую активность активированного FXII (FXIIa).

Затем ферментативную активность вновь активированного FXIa обнаруживали посредством измерения скорости расщепления субстрата Z-GPR-AFC (Sigma, № по каталогу C0980-10MG, конечная концентрация 150 мкМ) посредством непрерывного мониторинга флуоресценции на 400/505 нм в течение 15 минут с использованием считывателя планшетов Tecan Infinite M200. % ингибирования для каждой точки данных можно пересчитывать из данных RFU/мин и анализировать с использованием log(ингибитор) против четырехпараметрического уравнения ответа с использованием программного обеспечения GraphPad Prism.

Антитела αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ оценивали в анализах, которые выполняли, как описано выше. Результаты этих анализов показывали, что антитела против FXI ингибировали активацию FXI до FXIa с помощью FXIIa в присутствии HMW кининогена, но обладали не поддающимся обнаружению ингибирующим эффектом, оказываемым на FXIIa-активацию FXI в отсутствие HMW кининогена. Эти результаты подсказывают, что антитела против FXI ингибируют FXIIa-активацию FXI до FXIa в присутствии HMW кининогена.

ПРИМЕР 6

Эффект антител против FXI, оказываемый на каталитическую активность FXIa.

Анализ для определения того, ингибирует ли антитело против FXI активность FXIa, можно осуществлять следующим образом. 10-точечные титрования доз антител против FXI, начиная с концентрации 1 мкМ с серией 3-кратных разведений, предварительно инкубировали с FXI человека (Haematologic Technologies, Inc., № по каталогу HCXI-0150, конечная концентрация 30 нМ) в 50 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,1% PEG-8000, pH 7,4 в течение 2 часов при 25°C в микропланшете с несвязывающей поверхностью Corning 3575.

Затем реакцию активации инициировали посредством добавления свежего разведенного фактора свертывания XIIa (Enzyme Research Laboratories, № по каталогу HFXIIa, конечная концентрация 15 нМ). Реакцию оставляли протекать при 25°C в течение 1 часа, после чего ее гасили посредством добавления ингибитора FXIIa, например, ингибитора трипсина кукурузы (Santa Cruz Biotechnology, № по каталогу sc-204358), который можно использовать в концентрации приблизительно 200 нМ для того, чтобы ингибировать FXIIa, или ингибитора FXIIa, такого как H-D-Pro-Phe-Arg-хлорметилкетон (PCK), раскрытый в WO2013113774.

Затем можно обнаруживать ферментативную активность вновь активированного FXIa посредством измерения скорости расщепления субстрата Z-GPR-AFC (Sigma, № по каталогу C0980-10MG, конечная концентрация 150 мкМ) посредством непрерывного мониторинга флуоресценции на 400/505 нм в течение 15 минут с использованием считывателя планшетов Tecan Infinite M200 или скорости расщепления или нативного, интактного FIX. % ингибирования для каждой точки данных можно пересчитывать из данных RFU/минута и анализировать с использованием log(ингибитор) против четырехпараметрического уравнения ответа с использованием программного обеспечения GraphPad Prism.

Антитела αFXI-13716p-IgG4(S228P)(K-)/κ, αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, и αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ оценивали в анализах, которые выполняли, как описано выше. Результаты показывали, что антитела против FXI не ингибируют каталитическую активность FXIa.

Результаты в этом примере, при рассмотрении с результатами, полученными в примере 5, подсказывают, что механизмом действия для антител против FXI является ингибирование FXIIa-превращения FXI в FXIa в присутствии HMW кининогена, но не ингибирование FXIa-активации FIX до FIXa.

ПРИМЕР 7

Анализ поверхностного плазмонного резонанса для оценки побочного связывания моноклональных антител против FXI с белками коагуляционного каскада человека и NHP. Анализ на основе поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (Biacore T200) использовали для того, чтобы определять потенциал неспецифического взаимодействия mAb против фактора FXI αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ и αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ с другими белками коагуляционного каскада человека и NHP (таблица 4). mAb против FXI захватывали на чипе датчика CM5 с иммобилизованным набором для захвата против IgG человека (Fc) (GE Healthcare) приблизительно при 500 RU для того, чтобы минимизировать потенциальный фон от совместно очищенных Ig в белках, полученных из плазмы. Антитело отрицательного контроля, моноклональное антитело (mAb) против респираторного синцитиального вируса (RSV) (партия 23AFE), использовали в качестве эталона и чтобы помогать снижать фоновое связывание белков плазмы. Кинетику связывания измеряли с использованием концентрации анализируемого вещества FXI 5 нМ; все другие белки коагуляционного каскада использовали при концентрации анализируемого вещества 500 нМ. Инъекции отдельных концентраций (n=2) прогоняли при 30 мкл/мин, 25°C, HBS-EP+, pH 7,4.

Таблица 4

Рекомбинантные и полученные из плазмы белки коагуляционного каскада человека и NHP № партии/№ по каталогу Продавец Общее название Описание 00AJF Merck Калликреин макака-резуса Рекомбинантный белок с C-концевой His-меткой. Эталонная последовательность NCBI: EHH26351 65AJE Merck Калликреин яванского макака Рекомбинантный белок с C-концевой His-меткой. Эталонная последовательность NCBI: XP_005556538.1 97AJY/ HPK1302 Enzyme Research Laboratories Прекалликреин человека Выделен из плазмы человека 98AJY/HPKa 1303 Enzyme Research Laboratories Калликреин человека Выделен из плазмы человека 41AHG HCP-0010 Haematologic Technologies Inc. Фактор II человека (протромбин) Выделен из плазмы человека 00AJZ/ HT1002a Enzyme Research Laboratories Фактор II человека (α-тромбин) Выделен из плазмы человека 01AJZ/ HFVII 1007 Enzyme Research Laboratories Фактор VII человека Выделен из плазмы человека 03AJZ HFVIIa 4422 Enzyme Research Laboratories Протеаза фактора VIIa человека Выделен из плазмы человека 13AJZ/ HFIX1009 Enzyme Research Laboratories Фактор IX человека Выделен из плазмы человека 14AJZ/ HFIXa 1080 Enzyme Research Laboratories Протеаза фактора IX человека Выделен из плазмы человека 15AJZ/ HFX1010 Enzyme Research Laboratories Фактор X человека Выделен из плазмы человека 18AJZ/ HFXa 1011 Enzyme Research Laboratories Протеаза фактора X человека Выделен из плазмы человека 19AJZ/ HFXII 1212 Enzyme Research Laboratories Фактор XII человека Выделен из плазмы человека 20AJZ/HFXII 1212a Enzyme Research Laboratories Протеаза фактора XII человека Выделен из плазмы человека 23AIR/ HCXI-0150-C Haematologic Technologies Inc. FXI человека Выделен из плазмы человека 82AJK/ 2460-SE R&D His-меченный FXI человека Рекомбинантный белок с C-концевой His-меткой. Линия миеломных клеток мыши, получена из NSO. Ссылка NCBI PO3951. 62AJE Merck FXI-His макака-резуса (CP, рекомб.) Рекомбинантный белок с C-концевой His-меткой. Эталонная последовательность NCBI: EHH26352 73AIH Merck FXI-His яванского макака (CP, рекомб.) Рекомбинантный белок с C-концевой His-меткой. Эталонная последовательность NCBI:XP_005556540 23AFE Merck mAb IgG4 против RSV SEQ ID NO: 71 (LC) и SEQ ID NO: 72 (HC)

Кинетику связывания mAb против фактора FXI, αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ и αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, с FXI человека, яванского макака и макака-резуса и другими белками коагуляционного каскада человека и NHP измеряли, как описано выше и показано на фиг. 16 и фиг. 17. Программное обеспечение для оценки Biacore T200 использовали для аппроксимации данных к модели связывания 1:1, чтобы определять константу скорости ассоциации, k_a (M^-1с^-1, где «M» - моли и «с» - секунды), и константу скорости диссоциации, k_d (с^-1). Эти константы скорости использовали для того, чтобы вычислять равновесную константу диссоциации, K_D (M).

αFXI-13654p-IgG4(S228P)(K-)/κ и αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, захваченные на чипе, не демонстрировали перекрестной реактивности с не FXI белками коагуляционного каскада (фиг. 16 и фиг. 17). Эти моноклональные антитела демонстрировали ожидаемые уровни сильного связывания с белками FXI человека и яванского макака (и макака-резуса).

ПРИМЕР 8

Модель тромбоза бедренного артериовенозного (AV) шунта у яванского макака.

Характеристики антитромботического эффекта αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ определяли in vivo в модели бедренного артериовенозного (AV) шунта у яванского макака, разработанной в Merck Research Laboratories.

Дизайн исследования: в этих следованиях использовали повторный дизайн, когда каждое животное получало 2 шунта в течение 2 последовательных тестовых периодов (см. фиг. 18). Обезьянам вводили носитель, не содержащий соединение (20 мМ ацетат натрия, 9% сахароза, pH 5,5), или αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ (диапазон доз от 0,01 до 1,0 мг/кг), во время первого и второго тестовых периодов, соответственно. Различие в массе сгустка, измеренной во время первой (носитель) и второй (αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ) тестовых сессий, определяло антитромботический эффект. То есть, большее снижение массы сгустка во время экспозиции αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в сравнении с носителем указывает на более высокий антитромботический эффект. Использование повторного парного дизайна, описанного выше, делает возможной оценку антитромботического эффекта до лечения животного и после лечения.

Подробности процедуры размещения AV шунта: для того чтобы создавать эту модель, анестезированных яванских макаков снабжали бедренными артериальными и венозными катетерами. Эти катетеры позволяли вставлять и удалять AV шунт. AV шунты состояли из трубки Tygon с куском шелковой нити, продетым через трубку и подвешенным поперек ее отверстия. Чтобы помещать AV шунт, артериальный и венозный катетеры закрывали для того, чтобы останавливать ток крови. Затем AV шунт помещали между двумя катетерами. Хронология размещения и удаления катетера приведена на фиг. 18. Когда шунт был на месте, катетеры открывали и кровь текла через шунтирующую схему, содержащую шелковую нить. Действие нити, контактирующей с кровью, ускоряло формирование сгустка. AV шунт оставался на месте в течение 40 минут. Для того чтобы удалять AV шунт, артериальный и венозный катетеры закрывали для того, чтобы останавливать ток крови через AV шунт. Затем шунт удаляли и разрезали для того, чтобы осуществлять доступ к шелковой нити и сгустку крови. Сгусток крови взвешивали. Данные приведены в виде чистой массы сгустка, которую определяли как общую массу сгустка минус масса шелковой нити.

Биологические маркеры коагуляции активированное частичное тромбопластиновое время (aPTT) и протромбиновое время (PT), а также циркулирующие уровни в плазме для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103Lv/κ измеряли в образцах крови, собранных на всем протяжении эксперимента, как изображено на фиг. 18. aPTT и PT измеряли в оттаявшей замороженной (-80°C) цитратной плазме, собранной у яванских макаков, используя анализатор коагуляции Sta Compact Max (Stago Diagnostic, Inc). Анализатор Stago измеряет время формирования сгустка с использованием электромагнитной механической системы обнаружения сгустка. Для анализа aPTT 50 мкл плазмы смешивали с 50 мкл смеси эллаговой кислоты (APTT-XL, Pacific Hemostasis; Fisher Diagnostics № по каталогу 10-0402) при 37°C в течение 3 минут. В смесь добавляли 50 мкл 0,025 M хлорида кальция (Sta-CaCl₂ 0,025 M, Stago Diagnostic, Inc., № по каталогу 00367) и измеряли время формирования сгустка. Для анализа PT 50 мкл плазмы инкубировали при 37°C в течение 4 минут. Момент формирования сгустка инициировали посредством добавления 100 мкл реактива тромбопластина (Neoplastine Cl Plus 10, Stago Diagnostic, Inc., № по каталогу 00667). Плазму [αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L/κ] измеряли следующим образом. Общий электрохемилюминесцентный иммунологический анализ hIgG4 использовали для того, чтобы количественно определять αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в плазме яванского макака. Анализ проводили с использованием биотинилированного антитела козы против IgG(H+L) человека из Bethyl (№ по каталогу A80-319B) в качестве захватывающего реактива и sulfoTAG-меченного антитела мыши против IgG человека (Fc-специфического) из Southern Biotech (№ по каталогу 9190-01) для обнаруживающего реактива. Этот анализ квалифицировали и определяли нижний предел количественного определения анализа 40 нг/мл при минимальном требуемом разведении 100.

Результаты: на фиг. 19A-D сведены эффекты введения αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, оказываемые на формирование тромба (фиг. 19A, фиг. 19B), aPTT (фиг. 19C) и PT (фиг. 19D). αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ демонстрировало зависящее от дозы и концентрации в плазме снижение массы сгустка, причем полный эффект (90-100% уменьшение сгустка) наблюдали при [αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ] > 1,5 мкг/мл в плазме (приблизительно 10 нМ). αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ демонстрировало зависящее от дозы и концентрации в плазме увеличение aPTT. При концентрациях в плазме 26 мкг/мл (~180 нМ) αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ давало приблизительно 100% увеличение aPTT, тогда как 1,5 мкг/мл (~10 нМ) αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ вело к приблизительно 60% увеличению aPTT. В отличие от aPTT, PT менялось < 10% в пределах оцениваемых концентраций αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, в соответствии с избирательным эффектом ингибирования FXI, оказываемым на внутренний путь коагуляции.

ПРИМЕР 9

Модель времени типового кровотечения у яванского макака. Предрасположенность к кровотечению у mAb против FXI αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ охарактеризовывали in vivo в модели времени типового кровотечения у яванского макака, разработанной в Merck Research Laboratories. Эту модель использовали ранее для того, чтобы демонстрировать значительное увеличение времени типового кровотечения во многих анатомических областях при тройной антитромбоцитарной терапии (Cai et al., Eur J Pharmacol 758: 107-114 (2015)).

Для того чтобы создавать эту модель, время типового кровотечения определяли с использованием подпружиненненных ланцетов на слизистой щеки (внутренняя часть губы), подушке пальца и дистальном хвосте в различные моменты времени, чтобы вызывать кровотечение.

Тест на время кровотечения: тест на время кровотечения осуществляли у анестезированных яванских макаков следующим образом. Каждую тестовую область (слизистую щеки, подушку пальца или дистальный хвост) осторожно исследовали для того, чтобы идентифицировать подходящее место надреза, чтобы вызывать кровотечение. Чтобы вызывать кровотечение, подпружиненный ланцет прочно размещали напротив выбранного тестового места и активировали, чтобы создавать равномерный линейный надрез. Описание ланцета определяло размеры надреза. Крови из места надреза позволяли свободно течь, и мониторинг осуществляли до тех пор, пока кровотечение не останавливалось на 30 непрерывных секунд. Так определяют время кровотечения (BT). BT регистрировали для каждого места BT. Во время определения BT, место надреза на дистальном хвосте орошали теплым стерильным лактатным раствором Рингера, а место на подушке пальца погружали в теплый стерильный лактатный Рингера. Нанесение лактатного Рингера улучшало возможность видеть течение крови в этих местах.

Дизайн исследования: каждое исследование состояло из трех 30-минутных тестов времени типового кровотечения (BT) в трех тестовых областях (см. фиг. 20). Первое BT определяло базовое кровотечение. Второе BT происходило через 70 минут после 3 минут IV инфузии (2,83 мл/кг) носителя, не содержащего соединение (20 мМ ацетат натрия, 9% сахароза, pH 5,5) (лечение № 1). Третье BT происходило через 70 минут после 3 минут IV инфузии (2,83 мл/кг) носителя, не содержащего соединение или содержащего αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ (17 мг/кг) (лечение № 2). Осуществляли мониторинг кровотечения и регистрировали время кровотечения, как описано выше. Время, когда кровотечение останавливалось, регистрировали для каждого места. Периодические образцы крови собирали для того, чтобы определять циркулирующие уровни αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в плазме, aPTT и PT.

Каждое тестовое животное имело две сессии исследования. В сессии исследования № 1 за носителем следовал носитель, составлявший лечение № 1 и лечение № 2, соответственно. В сессии исследования № 2 за носителем следовало αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ 17 мг/кг IV, что составляло лечение № 1 и лечение № 2, соответственно.

70-минутный период времени между концом инфузии тестового изделия и инициацией оценки времени кровотечения отражает хронологию в модели AV шунта для определения массы тромба (размещение шунта через 30 мин после лечения+40 мин ток крови через шунт). По оценкам, IV тестовая доза αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ 17 мг/кг достигала 10× предполагаемой Cmax человека для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ на основании исследований моделирования PK/PD у приматов, описанных ранее.

Биологические маркеры коагуляции активированное частичное тромбопластиновое время (aPTT) и протромбиновое время (PT), а также циркулирующие уровни в плазме для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ измеряли в образцах крови, собранных на всем протяжении эксперимента, как изображено на фиг. 20. aPTT и PT измеряли в оттаявшей замороженной (-80°C) цитратной плазме, собранной у животных, используя анализатор коагуляции Sta-R Evolution (Stago Diagnostic, Inc). Анализатор коагуляции измеряет время формирования сгустка с использованием электромагнитной механической системы обнаружения сгустка. Для анализа aPTT, анализатор смешивает 50 мкл плазмы с 50 мкл эллаговой кислоты (APTT-XL, Pacific Hemostasis; Fisher Diagnostics № по каталогу 10-0402) в кювете, которую затем инкубируют при 37°C в течение 3 минут. Затем в смесь добавляют 50 мкл 0,025 M хлорид кальция (Sta-CaCl₂ 0,025M, Stago Diagnostic, Inc., № по каталогу 00367) для того, чтобы инициировать свертывание, и измеряют время формирования сгустка. Для анализа PT 50 мкл плазмы инкубировали в кювете при 37°C в течение 4 минут; свертывание инициировали посредством добавления 100 мкл растворенного реактива тромбопластина (Triniclot PT Excel, TCoag, Inc., № по каталогу T1106). Плазму [αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ] измеряли следующим образом. Общий электрохемилюминесцентный иммунологический анализ hIgG4 использовали для того, чтобы количественно определять αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в плазме яванского макака. Анализ проводили с использованием биотинилированного антитела козы против IgG(H+L) человека из Bethyl (№ по каталогу A80-319B) в качестве захватывающего реактива и sulfoTAG-меченного антитела мыши против IgG человека (Fc-специфического) из Southern Biotech (№ по каталогу 9190-01) для обнаруживающего реактива. Этот анализ квалифицировали и определяли нижний предел количественного определения анализа 40 нг/мл при минимальном требуемом разведении 100.

Результаты: на фиг. 21 сведены эффекты введения носителя и αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ 17 мг/кг IV четырем яванским макакам, оказываемые на время типового кровотечения в слизистой щеки (фиг. 21A, фиг. 21D), подушке пальца (фиг. 21B, фиг. 21E) и дистальном хвосте (фиг. 21C, фиг. 21F). Эффекты, оказываемые на время кровотечения, оценивали посредством сравнения абсолютного времени кровотечения (фиг. 21A-C) и процентных изменений времени кровотечения (фиг. 21D-F) с использованием носителя-носителя в качестве лечений № 1 и 2 в сессии исследования № 1, и носителя-αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в качестве лечений № 1 и № 2 в сессии исследования № 2. Сравнение абсолютного времени кровотечения для носителя в сравнении с αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, а также процентных изменений времени кровотечения для носителя-носителя в сравнении с носителем-αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ не выявляло статистически значимых изменений времени кровотечения в любом из тестовых мест при введении αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в этой тестовой дозе, хотя с незначительными тенденциями в кровотечении в слизистой щеки и дистальном хвост, движимых каждым одним животным в каждом тестовом месте.

Концентрация в плазме для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ, которой достигали с использованием IV тестовой дозы 17 мг/кг в исследовании времени кровотечения у яванского макака, 419±42,4 (среднее±SEM) мкг/мл (~2807 нМ). Значения aPTT плазмы составляли 32,7±1,1 с при базовом уровне против 68,6±3,2 с после 17 мг/кг IV αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ (увеличение 2,1 раза). Значения PT плазмы составляли 12,4±0,22 с при базовом уровне против 12,8±0,24 с после 17 мг/кг IV αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ (не наблюдали заметного увеличения).

ПРИМЕР 10

Фармакокинетическая (PK) и фармакодинамическая (PD) оценка αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L/κ после множественных внутривенных введений макакам-резусам.

PKPD свойства αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ охарактеризованы in vivo у макаков-резусов. Цель состояла в том, чтобы оценивать PK свойства и устанавливать PK/PD зависимость после всего двух недельных доз.

Дизайн исследования: макакам-резусам (четыре животных на группу дозы) вводили (IV) носитель без соединения (10 мМ ацетат натрия, 9% сахароза, pH 5,5) или αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ при двух уровнях доз 3 и 6 мг/кг. Длительность исследования составляла 22 суток и 1,5 мл крови собирали для определения уровней лекарственных средств и активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT). Биологический маркер коагуляции (aPTT) и циркулирующие уровни в плазме для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K+)/κ измеряли в образцах крови, собранных на всем протяжении эксперимента, как показано в таблице 5.

Таблица 5

Схема сбора образцов Тип сбора Время PK сутки -3; сутки 0: перед дозой (- 1 ч) и 30 мин, 3 ч, 6 ч, 24 (сутки 1), 48 (сутки 2), 96 (сутки 4) сутки 7: перед дозой и 1 ч, 6 ч, 24 ч (сутки 8), 48 ч (сутки 9), 96 ч (сутки 11), 168 ч (сутки 14), 264 ч (сутки 18) и 528 ч(сутки 22) после второй дозы PD (оценка aPTT) сутки -3: сутки 0: перед дозой (- 1 ч) и 30 мин, 3 ч, 6 ч, 24 (сутки 1), 48 (сутки 2), 96 (сутки 4) сутки 7: перед дозой и 1 ч, 6 ч, 24 ч (сутки 8), 48 ч (сутки 9), 96 ч (сутки 11), 168 ч (сутки 14), 264 ч (сутки 18) и 528 ч (сутки 22) после второй дозы

aPTT измеряли в оттаявшей замороженной (-80°C) цитратной плазме, собранной у животных, используя анализатор коагуляции Sta-R Evolution (Stago Diagnostic, Inc). Анализатор коагуляции измеряет время до формирования сгустка с использованием электромагнитной механической системы обнаружения сгустка. Для анализа aPTT, анализатор смешивает 50 мкл плазмы и 50 мкл эллаговой кислоты (APTT-XL, Pacific Hemostasis; Fisher Diagnostics № по каталогу 10-0402) в кювете, которую затем инкубируют при 37°C в течение 3 минут. Затем в смесь добавляют 50 мкл 0,025 M хлорида кальция (Sta-CaCl₂ 0,025 M, Stago Diagnostic, Inc., № по каталогу 00367) для того, чтобы инициировать свертывание, и измеряют время до формирования сгустка.

Общий электрохемилюминесцентный иммунологический анализ IgG4 человека (huIgG4) использовали для того, чтобы количественно определять αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ в плазме яванского макака. Анализ проводили с использованием биотинилированного антитела козы против IgG(H+L) человека из Bethyl (№ по каталогу A80-319B) в качестве захватывающего реактива и sulfoTAG-меченного антитела мыши против IgG человека (Fc-специфического) из Southern Biotech (№ по каталогу 9190-01) для обнаруживающего реактива. Этот анализ квалифицировали и определяли нижний предел количественного определения анализа 40 нг/мл при минимальном требуемом разведении 100.

Данные индивидуальных животных о концентрации в плазме и времени для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ анализировали с использованием некомпартментных (NCA) способов (Gabrielsson and Weiner, 2000). Все PK параметры оценивали или вычисляли с использованием Phoenix 32 WinNonlin 6.3 (версия 6.3.0.395, Certara L.P. St. Louis, MO, 2012). В некомпартментных анализах использовали Model 201 (IV). Все данные о концентрации и PK параметры округляли до 3 значащих разрядов. Образцы со значениями концентраций ниже нижнего предела количественного определения (<LLOQ) исключали из PK анализа и вычислений средних данных. Для графических целей значения <LLOQ принимали равными 1/2 от минимальной сообщаемой концентрации для графиков концентрации-времени индивидуальных животных.

Модель сигмовидного E_max ответа (PK/PD) использовали для определения характеристик зависимости между экспозицией и aPTT с использованием GraphPad Prism версии 7.00 (GraphPad Software Inc). В модели значение E_max соответствует максимальному увеличению aPTT, достигаемому относительно базового уровня, и значение EC₅₀ соответствует полумаксимальной эффективной концентрации. Вариабельность приводили в виде 95% доверительной области (CI) для значения EC₅₀, как предоставляло программное обеспечение.

Результаты: индивидуальные профили концентрации-времени для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ изображены на фиг. 22. Нелинейность наблюдали для всех PK параметров. Средние значения клиренса снижались приблизительно от 40 мл/кг×сутки для наименьшей тестируемой дозы (0,1 мг/кг) приблизительно до 3 мл/кг×сутки для наибольшей тестируемой дозы (6 мг/кг). aPTT профили концентрации-времени изображены на фиг. 23. Наблюдали дозозависимое увеличение aPTT. Зависимость между концентрациями в плазме для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ и aPTT лучше всего описывала сигмовидная E_max модель, которая в достаточной мере описывала эту зависимость. Оценочное значение EC₅₀ для αFXI-13716-IgG4(S228P)Q1EM103L(K-)/κ составляло приблизительно 1,7 мкг/мл. На основании результатов терапевтически эффективное количество может составлять приблизительно от 1,0 до 2,0 мг/кг.

Хотя настоящее изобретение описано в настоящем описании со ссылкой на проиллюстрированные варианты осуществления, следует понимать, что изобретение не ограничено ими. Средний специалист в данной области, имея доступ к положениям настоящего описания, распознает дополнительные модификации и варианты осуществления в его объеме. Следовательно, настоящее изобретение ограничено только формулой изобретения, приложенной к настоящему описанию.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Merck Sharp & Dohme Corp.

Chen, Zhu

Ellsworth, Kenneth P

Milligan, James A

Oldham, Elizabeth

Seiffert, Dietmar

Tabrizifard, Mohammad

Ganti, Vaishnavi

<120> АНТИТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ XI

<130> 23617

<150> 62/281,842

<151> 2016-01-22

<160> 72

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p HC-CDR1

<400> 1

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p HC-CDR2

<400> 2

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p HC-CDR3

<400> 3

Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p LC-CDR1

<400> 4

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p LC-CDR2

<400> 5

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p LC-CDR3

<400> 6

Gln Gln Val Asn Ser Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p и альфа-FXI-13716 HC-CDR1

<400> 7

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ser Met His

1 5

<210> 8

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p и альфа-FXI-13716 HC-CDR2

<400> 8

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p HC-CDR3

<400> 9

Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 10

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p и альфа-FXI-13716 LC-CDR1

<400> 10

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 11

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-136716p и альфа-FXI-13716 LC-CDR2

<400> 11

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p и альфа-FXI-13716 LC-CDR3

<400> 12

Gln Gln Phe Asn Asp Trp Pro Leu Thr

1 5

<210> 13

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 HC-CDR3

<400> 13

Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 14

<211> 327

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Константный домен HC IgG4 человека: (S228P) S в положении 108 заменен на P

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (327)..(327)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 14

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa

325

<210> 15

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Константный домен каппа LC человека

<400> 15

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 16

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область HC альфа-FXI-13654p

<400> 16

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 17

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область каппа LC альфа-FXI-13654p

<400> 17

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Ser Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 18

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p-IgG4 HC S228P на C-конце без K

<400> 18

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 19

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> каппа LC альфа-FXI-13654p

<400> 19

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Ser Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 20

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область HC альфа-FXI-13716p

<400> 20

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 21

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область Каппа LC альфа-FXI-13716p и альфа-FXI-13716

<400> 21

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asp Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 22

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p-IgG4 HC S228P на C-конце без K

<400> 22

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly

450

<210> 23

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Каппа LC альфа-FXI-13716p и альфа-FXI-13716

<400> 23

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asp Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 24

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область HC альфа-FXI-13716 (Q1E M103L)

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 IgG4 HC Q1E M103L S228P на C-конце без K

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly

450

<210> 26

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p-IgG4 HC S228P на C-конце K

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Lys

<210> 27

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p-IgG4 HC S228P на C-конце K

<400> 27

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly Lys

450

<210> 28

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 IgG4 HC Q1E M103L S228P на C-конце K

<400> 28

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly Lys

450

<210> 29

<211> 329

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> константный домен HC IgG1 на C-конце без K

<400> 29

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

325

<210> 30

<211> 330

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> константный домен HC IgG1 на C-конце K

<400> 30

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 31

<211> 448

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p IgG1 HC на C-конце без K

<400> 31

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 32

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p IgG1 HC на C-конце K

<400> 32

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Lys

<210> 33

<211> 453

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p IgG1 HC на C-конце без K

<400> 33

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 34

<211> 454

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p IgG1 HC на C-конце K

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 35

<211> 453

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 IgG1 HC M103L на C-конце без K

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 36

<211> 454

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 IgG1 HC M103L на C-конце K

<400> 36

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 37

<211> 607

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 37

Glu Cys Val Thr Gln Leu Leu Lys Asp Thr Cys Phe Glu Gly Gly Asp

1 5 10 15

Ile Thr Thr Val Phe Thr Pro Ser Ala Lys Tyr Cys Gln Val Val Cys

20 25 30

Thr Tyr His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Thr Phe Thr Ala Glu Ser Pro

35 40 45

Ser Glu Asp Pro Thr Arg Trp Phe Thr Cys Val Leu Lys Asp Ser Val

50 55 60

Thr Glu Thr Leu Pro Arg Val Asn Arg Thr Ala Ala Ile Ser Gly Tyr

65 70 75 80

Ser Phe Lys Gln Cys Ser His Gln Ile Ser Ala Cys Asn Lys Asp Ile

85 90 95

Tyr Val Asp Leu Asp Met Lys Gly Ile Asn Tyr Asn Ser Ser Val Ala

100 105 110

Lys Ser Ala Gln Glu Cys Gln Glu Arg Cys Thr Asp Asp Val His Cys

115 120 125

His Phe Phe Thr Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Pro Ser Leu Glu His Arg

130 135 140

Asn Ile Cys Leu Leu Lys His Thr Gln Thr Gly Thr Pro Thr Arg Ile

145 150 155 160

Thr Lys Leu Asp Lys Val Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys Ser Cys Ala

165 170 175

Leu Ser Asn Leu Ala Cys Ile Arg Asp Ile Phe Pro Asn Thr Val Phe

180 185 190

Ala Asp Ser Asn Ile Asp Ser Val Met Ala Pro Asp Ala Phe Val Cys

195 200 205

Gly Arg Ile Cys Thr His His Pro Gly Cys Leu Phe Phe Thr Phe Phe

210 215 220

Ser Gln Glu Trp Pro Lys Glu Ser Gln Arg Asn Leu Cys Leu Leu Lys

225 230 235 240

Thr Ser Glu Ser Gly Leu Pro Ser Thr Arg Ile Lys Lys Ser Lys Ala

245 250 255

Leu Ser Gly Phe Ser Leu Gln Ser Cys Arg His Ser Ile Pro Val Phe

260 265 270

Cys His Ser Ser Phe Tyr His Asp Thr Asp Phe Leu Gly Glu Glu Leu

275 280 285

Asp Ile Val Ala Ala Lys Ser His Glu Ala Cys Gln Lys Leu Cys Thr

290 295 300

Asn Ala Val Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Thr Pro Ala Gln Ala Ser

305 310 315 320

Cys Asn Glu Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Leu Lys Leu Ser Ser Asn Gly

325 330 335

Ser Pro Thr Lys Ile Leu His Gly Arg Gly Gly Ile Ser Gly Tyr Thr

340 345 350

Leu Arg Leu Cys Lys Met Asp Asn Glu Cys Thr Thr Lys Ile Lys Pro

355 360 365

Arg Ile Val Gly Gly Thr Ala Ser Val Arg Gly Glu Trp Pro Trp Gln

370 375 380

Val Thr Leu His Thr Thr Ser Pro Thr Gln Arg His Leu Cys Gly Gly

385 390 395 400

Ser Ile Ile Gly Asn Gln Trp Ile Leu Thr Ala Ala His Cys Phe Tyr

405 410 415

Gly Val Glu Ser Pro Lys Ile Leu Arg Val Tyr Ser Gly Ile Leu Asn

420 425 430

Gln Ser Glu Ile Lys Glu Asp Thr Ser Phe Phe Gly Val Gln Glu Ile

435 440 445

Ile Ile His Asp Gln Tyr Lys Met Ala Glu Ser Gly Tyr Asp Ile Ala

450 455 460

Leu Leu Lys Leu Glu Thr Thr Val Asn Tyr Thr Asp Ser Gln Arg Pro

465 470 475 480

Ile Cys Leu Pro Ser Lys Gly Asp Arg Asn Val Ile Tyr Thr Asp Cys

485 490 495

Trp Val Thr Gly Trp Gly Tyr Arg Lys Leu Arg Asp Lys Ile Gln Asn

500 505 510

Thr Leu Gln Lys Ala Lys Ile Pro Leu Val Thr Asn Glu Glu Cys Gln

515 520 525

Lys Arg Tyr Arg Gly His Lys Ile Thr His Lys Met Ile Cys Ala Gly

530 535 540

Tyr Arg Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro

545 550 555 560

Leu Ser Cys Lys His Asn Glu Val Trp His Leu Val Gly Ile Thr Ser

565 570 575

Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Arg Glu Arg Pro Gly Val Tyr Thr Asn

580 585 590

Val Val Glu Tyr Val Asp Trp Ile Leu Glu Lys Thr Gln Ala Val

595 600 605

<210> 38

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп-A

<400> 38

Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Pro Ser Leu Glu His Arg Asn Ile Cys Leu

1 5 10 15

<210> 39

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп-B

<400> 39

His Thr Gln Thr Gly Thr Pro Thr Arg Ile Thr Lys Leu

1 5 10

<210> 40

<211> 330

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Константный домен HC IgG1

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (330)..(330)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 40

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa

325 330

<210> 41

<211> 327

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Константный домен HC IgG4 человека: S228P

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (327)..(327)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 41

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa

325

<210> 42

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13654p IgG4 HC на C-конце без K

<400> 42

gaagtgcagc tggtcgaaag cggcggcgga ctggtgaaac ccggaggaag cctgaggctg 60

agctgtgccg ccagcggctt taccttcagc tcctactcca tgaactgggt gaggcaggct 120

cctggaaaag gcctggagtg ggtgagctcc atctccagca gctcctccta tatctactac 180

gccgactccg tgaaaggcag gttcaccatc agcagggata atgccaagaa cagcctgtac 240

ctgcagatga actccctcag ggccgaagac acagccgtgt actactgcgc caggagctat 300

tacgactacg accagggcta tggcatggac gtgtggggcc agggcaccac agtcaccgtg 360

agctccgcct ccaccaaagg accctccgtg tttcccctgg ccccctgtag cagatccacc 420

agcgagagca ccgccgctct gggctgtctc gtgaaggatt acttccccga gcccgtgacc 480

gtgagctgga actctggcgc cctgacatcc ggcgtgcaca cattccccgc cgtcctgcaa 540

agcagcggcc tctatagcct gagctccgtg gtgaccgtgc cctccagcag cctgggaaca 600

aagacctaca cctgcaacgt ggaccacaaa ccctccaaca ccaaggtcga caagagagtg 660

gaaagcaagt acggccctcc ttgtccccct tgccctgctc ctgagttcct gggcggaccc 720

agcgtgttcc tgtttccccc caaacccaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 780

gtcacctgcg tcgtggtgga cgtgagccag gaggaccccg aagtgcagtt caactggtac 840

gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaagagca attcaactcc 900

acctacaggg tggtgtccgt cctgacagtc ctccaccagg actggctgaa cggaaaggag 960

tacaaatgta aggtgtccaa caagggcctg cccagctcca tcgagaagac aatctccaag 1020

gctaagggcc agcccagaga gccccaggtg tataccctcc ctccctccca ggaggaaatg 1080

accaagaacc aggtctccct gacctgcctg gtgaagggct tctatcccag cgacatcgcc 1140

gtggaatggg aatccaacgg ccagcccgag aacaactaca agacaacacc ccccgtgctc 1200

gattccgacg gttctttctt cctgtactcc aggctgacag tggacaaaag caggtggcag 1260

gagggcaatg tcttcagctg cagcgtgatg catgaggccc tgcacaacca ctatacccag 1320

aagagcctgt ccctgagcct gggc 1344

<210> 43

<211> 1347

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13654p IgG4 HC на C-конце K

<400> 43

gaagtgcagc tggtcgaaag cggcggcgga ctggtgaaac ccggaggaag cctgaggctg 60

agctgtgccg ccagcggctt taccttcagc tcctactcca tgaactgggt gaggcaggct 120

cctggaaaag gcctggagtg ggtgagctcc atctccagca gctcctccta tatctactac 180

gccgactccg tgaaaggcag gttcaccatc agcagggata atgccaagaa cagcctgtac 240

ctgcagatga actccctcag ggccgaagac acagccgtgt actactgcgc caggagctat 300

tacgactacg accagggcta tggcatggac gtgtggggcc agggcaccac agtcaccgtg 360

agctccgcct ccaccaaagg accctccgtg tttcccctgg ccccctgtag cagatccacc 420

agcgagagca ccgccgctct gggctgtctc gtgaaggatt acttccccga gcccgtgacc 480

gtgagctgga actctggcgc cctgacatcc ggcgtgcaca cattccccgc cgtcctgcaa 540

agcagcggcc tctatagcct gagctccgtg gtgaccgtgc cctccagcag cctgggaaca 600

aagacctaca cctgcaacgt ggaccacaaa ccctccaaca ccaaggtcga caagagagtg 660

gaaagcaagt acggccctcc ttgtccccct tgccctgctc ctgagttcct gggcggaccc 720

agcgtgttcc tgtttccccc caaacccaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 780

gtcacctgcg tcgtggtgga cgtgagccag gaggaccccg aagtgcagtt caactggtac 840

gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaagagca attcaactcc 900

acctacaggg tggtgtccgt cctgacagtc ctccaccagg actggctgaa cggaaaggag 960

tacaaatgta aggtgtccaa caagggcctg cccagctcca tcgagaagac aatctccaag 1020

gctaagggcc agcccagaga gccccaggtg tataccctcc ctccctccca ggaggaaatg 1080

accaagaacc aggtctccct gacctgcctg gtgaagggct tctatcccag cgacatcgcc 1140

gtggaatggg aatccaacgg ccagcccgag aacaactaca agacaacacc ccccgtgctc 1200

gattccgacg gttctttctt cctgtactcc aggctgacag tggacaaaag caggtggcag 1260

gagggcaatg tcttcagctg cagcgtgatg catgaggccc tgcacaacca ctatacccag 1320

aagagcctgt ccctgagcct gggcaag 1347

<210> 44

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13654p LC

<400> 44

gacatccaga tgacccagag cccttcctcc gtgagcgcca gcgtcggcga cagagtgacc 60

atcacctgca gagccagcca gggcatcagc agctggctgg cttggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgcc gccagcagcc tgcagagcgg cgtgccctcc 180

agatttagcg gcagcggcag cggcaccgac tttaccctca caatcagcag cctgcagccc 240

gaggacttcg ctacctacta ctgccagcag gtgaacagct accctatcac attcggcggc 300

ggcaccaagg tggagatcaa gagaaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360

tccgatgagc agctgaaaag cggcaccgcc agcgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagggagg ccaaagtgca gtggaaggtc gacaacgccc tgcagtccgg caacagccaa 480

gaaagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgtccag caccctgacc 540

ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac acaccagggc 600

ctgagctccc ccgtgaccaa gagcttcaat aggggcgagt gc 642

<210> 45

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13654p IgG1 HC на C-конце без K

<400> 45

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180

gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagatcttac 300

tacgactacg atcaaggata cggaatggac gtatggggcc agggaacaac tgtcaccgtc 360

tcctcagcta gcacaaaagg accaagcgtg tttccactgg cacctagcag caaatccacc 420

agcggcggaa cagcagccct cgggtgcctg gtgaaggatt acttccctga gccagtcaca 480

gtgtcctgga actccggagc cctgacatcc ggcgtgcaca ccttccccgc tgtgctgcaa 540

tccagcggac tgtatagcct cagctccgtc gtgacagtcc cttccagcag cctgggcaca 600

cagacttaca tttgcaacgt gaaccacaaa ccttccaaca ctaaggtgga caaaaaggtg 660

gaacccaaat cctgtgataa gacccataca tgcccacctt gtcccgctcc tgagctgctg 720

gggggacctt ccgtctttct gtttcctcca aaaccaaaag acacactcat gatcagccgg 780

acccccgaag tcacctgtgt ggtggtggac gtcagccacg aagatccaga ggtcaagttc 840

aattggtacg tggatggagt ggaagtccac aacgcaaaaa ccaaacctag agaagaacag 900

tacaatagca catacagggt ggtgtccgtc ctgacagtgc tccaccagga ctggctcaat 960

ggcaaagagt ataagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ctgcaccaat tgagaaaaca 1020

attagcaagg caaaggggca gccacgggaa ccccaggtgt ataccctgcc cccaagccgg 1080

gatgaactga ccaaaaacca ggtcagcctg acatgcctgg tgaaagggtt ttacccaagc 1140

gatattgccg tcgagtggga gagcaacgga cagccagaaa acaattacaa aaccacccca 1200

cctgtgctgg actccgatgg gagctttttc ctgtacagca agctcacagt ggacaagtcc 1260

agatggcaac agggcaacgt gttttcctgc tccgtgatgc acgaggccct ccacaaccac 1320

tatacacaaa agtccctctc cctcagccca gga 1353

<210> 46

<211> 1356

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13654p IgG1 HC на C-конце K

<400> 46

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180

gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagatcttac 300

tacgactacg atcaaggata cggaatggac gtatggggcc agggaacaac tgtcaccgtc 360

tcctcagcta gcacaaaagg accaagcgtg tttccactgg cacctagcag caaatccacc 420

agcggcggaa cagcagccct cgggtgcctg gtgaaggatt acttccctga gccagtcaca 480

gtgtcctgga actccggagc cctgacatcc ggcgtgcaca ccttccccgc tgtgctgcaa 540

tccagcggac tgtatagcct cagctccgtc gtgacagtcc cttccagcag cctgggcaca 600

cagacttaca tttgcaacgt gaaccacaaa ccttccaaca ctaaggtgga caaaaaggtg 660

gaacccaaat cctgtgataa gacccataca tgcccacctt gtcccgctcc tgagctgctg 720

gggggacctt ccgtctttct gtttcctcca aaaccaaaag acacactcat gatcagccgg 780

acccccgaag tcacctgtgt ggtggtggac gtcagccacg aagatccaga ggtcaagttc 840

aattggtacg tggatggagt ggaagtccac aacgcaaaaa ccaaacctag agaagaacag 900

tacaatagca catacagggt ggtgtccgtc ctgacagtgc tccaccagga ctggctcaat 960

ggcaaagagt ataagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ctgcaccaat tgagaaaaca 1020

attagcaagg caaaggggca gccacgggaa ccccaggtgt ataccctgcc cccaagccgg 1080

gatgaactga ccaaaaacca ggtcagcctg acatgcctgg tgaaagggtt ttacccaagc 1140

gatattgccg tcgagtggga gagcaacgga cagccagaaa acaattacaa aaccacccca 1200

cctgtgctgg actccgatgg gagctttttc ctgtacagca agctcacagt ggacaagtcc 1260

agatggcaac agggcaacgt gttttcctgc tccgtgatgc acgaggccct ccacaaccac 1320

tatacacaaa agtccctctc cctcagccca ggaaag 1356

<210> 47

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p IgG4 HC на C-конце без K

<400> 47

caggtccagc tcgtgcagag cggagccgag gtgaagaagc ccggagcctc cgtcaaagtg 60

agctgtaaag ccagcggcta caccttcaca tcctacagca tgcactgggt gaggcaggct 120

cctggccaag gcctggagtg gatgggcatt atcaacccca gcggcggctc cacctcctac 180

gctcagaagt tccagggcag ggtgaccatg accagagaca ccagcaccag caccgtgtat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggac acagccgtgt actactgcgc taggggcgcc 300

tacctgatgg agctgtacta ctactacgga atggatgtgt ggggccaggg caccaccgtg 360

acagtctcca gcgccagcac caaaggccct tccgtgtttc ccctggcccc ctgcagcagg 420

agcaccagcg aaagcacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactactt ccccgaaccc 480

gtgaccgtga gctggaacag cggagctctg acctccggcg tgcacacatt tcccgccgtg 540

ctgcagtcca gcggactgta cagcctgtcc agcgtggtga ccgtccccag ctccagcctg 600

ggcaccaaga cctacacctg taacgtggat cataagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660

agagtggaga gcaaatacgg ccctccctgt cccccttgtc ccgctcccga atttctgggc 720

ggcccttccg tgttcctgtt cccccctaag cccaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 780

cccgaagtca catgcgtggt ggtcgacgtg agccaggagg accccgaggt ccagtttaac 840

tggtacgtgg acggagtgga agtgcacaac gccaagacaa agcccaggga ggagcagttc 900

aacagcacct acagagtggt gtccgtgctc accgtgctgc accaggattg gctgaacgga 960

aaggagtaca agtgtaaggt gagcaacaaa ggcctcccca gcagcatcga aaagaccatc 1020

tccaaagcta agggacagcc cagagagccc caggtgtaca cactgccccc cagccaggag 1080

gagatgacca agaatcaggt gtccctgacc tgcctggtga aaggctttta cccctccgac 1140

attgccgtcg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actataagac aaccccccct 1200

gtgctggaca gcgacggctc cttctttctg tactccaggc tgaccgtcga caaatccagg 1260

tggcaggagg gaaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320

acccagaaga gcctgtccct gagcctcggc 1350

<210> 48

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p IgG4 HC на C-конце K

<400> 48

caggtccagc tcgtgcagag cggagccgag gtgaagaagc ccggagcctc cgtcaaagtg 60

agctgtaaag ccagcggcta caccttcaca tcctacagca tgcactgggt gaggcaggct 120

cctggccaag gcctggagtg gatgggcatt atcaacccca gcggcggctc cacctcctac 180

gctcagaagt tccagggcag ggtgaccatg accagagaca ccagcaccag caccgtgtat 240

atggagctga gctccctgag gagcgaggac acagccgtgt actactgcgc taggggcgcc 300

tacctgatgg agctgtacta ctactacgga atggatgtgt ggggccaggg caccaccgtg 360

acagtctcca gcgccagcac caaaggccct tccgtgtttc ccctggcccc ctgcagcagg 420

agcaccagcg aaagcacagc cgccctgggc tgtctggtga aggactactt ccccgaaccc 480

gtgaccgtga gctggaacag cggagctctg acctccggcg tgcacacatt tcccgccgtg 540

ctgcagtcca gcggactgta cagcctgtcc agcgtggtga ccgtccccag ctccagcctg 600

ggcaccaaga cctacacctg taacgtggat cataagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660

agagtggaga gcaaatacgg ccctccctgt cccccttgtc ccgctcccga atttctgggc 720

ggcccttccg tgttcctgtt cccccctaag cccaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 780

cccgaagtca catgcgtggt ggtcgacgtg agccaggagg accccgaggt ccagtttaac 840

tggtacgtgg acggagtgga agtgcacaac gccaagacaa agcccaggga ggagcagttc 900

aacagcacct acagagtggt gtccgtgctc accgtgctgc accaggattg gctgaacgga 960

aaggagtaca agtgtaaggt gagcaacaaa ggcctcccca gcagcatcga aaagaccatc 1020

tccaaagcta agggacagcc cagagagccc caggtgtaca cactgccccc cagccaggag 1080

gagatgacca agaatcaggt gtccctgacc tgcctggtga aaggctttta cccctccgac 1140

attgccgtcg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actataagac aaccccccct 1200

gtgctggaca gcgacggctc cttctttctg tactccaggc tgaccgtcga caaatccagg 1260

tggcaggagg gaaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320

acccagaaga gcctgtccct gagcctcggc aag 1353

<210> 49

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p LC

<400> 49

gagatcgtca tgacccagag ccctgctacc ctgagcgtga gccctggcga aagggccacc 60

ctgtcctgta gggccagcca gagcgtgtcc agcaacctgg cctggtatca gcagaagcct 120

ggccaggccc ctaggctgct gatctacggc gccagcacca gagctaccgg catccctgct 180

aggttctccg gaagcggctc cggcaccgag ttcaccctga ccattagctc cctgcagagc 240

gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag ttcaacgact ggcccctgac cttcggcgga 300

ggcaccaagg tggagatcaa gaggaccgtg gccgctcctt ccgtgttcat cttccccccc 360

agcgacgagc agctgaagtc cggcacagcc tccgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420

cccagggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcaaagcgg caacagccag 480

gagtccgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctact ccctgagctc caccctgacc 540

ctgagcaagg ccgattacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccaggga 600

ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgaat gc 642

<210> 50

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p IgG1 HC на C-конце без K

<400> 50

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctacagca tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgct 300

tatctaatgg agttatacta ctattacggt atggatgtct ggggccaggg aacaactgtc 360

accgtctcct cagctagcac aaaaggacca agcgtgtttc cactggcacc tagcagcaaa 420

tccaccagcg gcggaacagc agccctcggg tgcctggtga aggattactt ccctgagcca 480

gtcacagtgt cctggaactc cggagccctg acatccggcg tgcacacctt ccccgctgtg 540

ctgcaatcca gcggactgta tagcctcagc tccgtcgtga cagtcccttc cagcagcctg 600

ggcacacaga cttacatttg caacgtgaac cacaaacctt ccaacactaa ggtggacaaa 660

aaggtggaac ccaaatcctg tgataagacc catacatgcc caccttgtcc cgctcctgag 720

ctgctggggg gaccttccgt ctttctgttt cctccaaaac caaaagacac actcatgatc 780

agccggaccc ccgaagtcac ctgtgtggtg gtggacgtca gccacgaaga tccagaggtc 840

aagttcaatt ggtacgtgga tggagtggaa gtccacaacg caaaaaccaa acctagagaa 900

gaacagtaca atagcacata cagggtggtg tccgtcctga cagtgctcca ccaggactgg 960

ctcaatggca aagagtataa gtgcaaggtg agcaacaagg ccctgcctgc accaattgag 1020

aaaacaatta gcaaggcaaa ggggcagcca cgggaacccc aggtgtatac cctgccccca 1080

agccgggatg aactgaccaa aaaccaggtc agcctgacat gcctggtgaa agggttttac 1140

ccaagcgata ttgccgtcga gtgggagagc aacggacagc cagaaaacaa ttacaaaacc 1200

accccacctg tgctggactc cgatgggagc tttttcctgt acagcaagct cacagtggac 1260

aagtccagat ggcaacaggg caacgtgttt tcctgctccg tgatgcacga ggccctccac 1320

aaccactata cacaaaagtc cctctccctc agcccagga 1359

<210> 51

<211> 1362

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p IgG1 HC на C-конце K

<400> 51

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctacagca tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgct 300

tatctaatgg agttatacta ctattacggt atggatgtct ggggccaggg aacaactgtc 360

accgtctcct cagctagcac aaaaggacca agcgtgtttc cactggcacc tagcagcaaa 420

tccaccagcg gcggaacagc agccctcggg tgcctggtga aggattactt ccctgagcca 480

gtcacagtgt cctggaactc cggagccctg acatccggcg tgcacacctt ccccgctgtg 540

ctgcaatcca gcggactgta tagcctcagc tccgtcgtga cagtcccttc cagcagcctg 600

ggcacacaga cttacatttg caacgtgaac cacaaacctt ccaacactaa ggtggacaaa 660

aaggtggaac ccaaatcctg tgataagacc catacatgcc caccttgtcc cgctcctgag 720

ctgctggggg gaccttccgt ctttctgttt cctccaaaac caaaagacac actcatgatc 780

agccggaccc ccgaagtcac ctgtgtggtg gtggacgtca gccacgaaga tccagaggtc 840

aagttcaatt ggtacgtgga tggagtggaa gtccacaacg caaaaaccaa acctagagaa 900

gaacagtaca atagcacata cagggtggtg tccgtcctga cagtgctcca ccaggactgg 960

ctcaatggca aagagtataa gtgcaaggtg agcaacaagg ccctgcctgc accaattgag 1020

aaaacaatta gcaaggcaaa ggggcagcca cgggaacccc aggtgtatac cctgccccca 1080

agccgggatg aactgaccaa aaaccaggtc agcctgacat gcctggtgaa agggttttac 1140

ccaagcgata ttgccgtcga gtgggagagc aacggacagc cagaaaacaa ttacaaaacc 1200

accccacctg tgctggactc cgatgggagc tttttcctgt acagcaagct cacagtggac 1260

aagtccagat ggcaacaggg caacgtgttt tcctgctccg tgatgcacga ggccctccac 1320

aaccactata cacaaaagtc cctctccctc agcccaggaa ag 1362

<210> 52

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p IgG4 HC S228P Q1E M103L на C-конце без K

<400> 52

gaggtgcagc tggtccagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtcaaggtg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca tcctatagca tgcactgggt gaggcaggct 120

cctggccagg gcctggaatg gatgggcatc atcaacccca gcggcggctc cacatcctac 180

gcccagaaat ttcagggaag ggtcaccatg accagggata catccaccag caccgtgtac 240

atggagctgt ccagcctgag gtccgaggac accgctgtgt actactgcgc cagaggcgcc 300

tatctgctgg agctgtacta ctactacgga atggacgtgt ggggccaggg cacaaccgtg 360

accgtgagca gcgccagcac caagggacct tccgtgttcc ccctggcccc ttgtagcaga 420

tccacctccg aatccaccgc cgctctgggc tgtctcgtca aggattattt ccccgagcct 480

gtgaccgtgt cctggaactc cggagccctc acctccggcg tgcatacctt ccctgccgtg 540

ctccagtcca gcggcctgta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcctg 600

ggcaccaaaa cctatacctg caatgtggac cacaagccca gcaataccaa ggtggacaag 660

agggtggagt ccaaatacgg acctccctgt cccccctgcc ccgctcccga atttctggga 720

ggcccctccg tgttcctgtt ccctcccaag cccaaggaca cactgatgat ttccaggacc 780

cctgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtc agccaggaag atcctgaggt gcagttcaac 840

tggtacgtgg atggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccaggga ggaacagttc 900

aacagcacct acagagtggt cagcgtgctg acagtcctgc accaggactg gctgaacggc 960

aaggaataca agtgcaaggt gtccaacaag ggactcccct cctccatcga gaaaacaatc 1020

agcaaggcca aaggccagcc cagagaacct caagtctata ccctcccccc tagccaggag 1080

gagatgacca agaaccaagt gagcctgacc tgcctggtga agggctttta ccccagcgac 1140

atcgccgtgg aatgggagtc caacggacag cccgagaaca actataagac aacccctccc 1200

gtgctcgact ccgatggaag ctttttcctc tacagcaggc tgaccgtgga caagagcaga 1260

tggcaggagg gaaatgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aagccctgca caaccactac 1320

acccaaaaaa gcctgagcct gagcctggga 1350

<210> 53

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716p IgG4 HC S228P Q1E M103L на C-конце K

<400> 53

gaggtgcagc tggtccagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtcaaggtg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca tcctatagca tgcactgggt gaggcaggct 120

cctggccagg gcctggaatg gatgggcatc atcaacccca gcggcggctc cacatcctac 180

gcccagaaat ttcagggaag ggtcaccatg accagggata catccaccag caccgtgtac 240

atggagctgt ccagcctgag gtccgaggac accgctgtgt actactgcgc cagaggcgcc 300

tatctgctgg agctgtacta ctactacgga atggacgtgt ggggccaggg cacaaccgtg 360

accgtgagca gcgccagcac caagggacct tccgtgttcc ccctggcccc ttgtagcaga 420

tccacctccg aatccaccgc cgctctgggc tgtctcgtca aggattattt ccccgagcct 480

gtgaccgtgt cctggaactc cggagccctc acctccggcg tgcatacctt ccctgccgtg 540

ctccagtcca gcggcctgta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcctg 600

ggcaccaaaa cctatacctg caatgtggac cacaagccca gcaataccaa ggtggacaag 660

agggtggagt ccaaatacgg acctccctgt cccccctgcc ccgctcccga atttctggga 720

ggcccctccg tgttcctgtt ccctcccaag cccaaggaca cactgatgat ttccaggacc 780

cctgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtc agccaggaag atcctgaggt gcagttcaac 840

tggtacgtgg atggcgtgga agtgcataac gccaagacca agcccaggga ggaacagttc 900

aacagcacct acagagtggt cagcgtgctg acagtcctgc accaggactg gctgaacggc 960

aaggaataca agtgcaaggt gtccaacaag ggactcccct cctccatcga gaaaacaatc 1020

agcaaggcca aaggccagcc cagagaacct caagtctata ccctcccccc tagccaggag 1080

gagatgacca agaaccaagt gagcctgacc tgcctggtga agggctttta ccccagcgac 1140

atcgccgtgg aatgggagtc caacggacag cccgagaaca actataagac aacccctccc 1200

gtgctcgact ccgatggaag ctttttcctc tacagcaggc tgaccgtgga caagagcaga 1260

tggcaggagg gaaatgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aagccctgca caaccactac 1320

acccaaaaaa gcctgagcct gagcctggga aag 1353

<210> 54

<211> 1362

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716 IgG1 HC Q1E M103L на C-конце без K

<400> 54

gaggtgcagc tggtccagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtcaaggtg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca tcctatagca tgcactgggt gaggcaggct 120

cctggccagg gcctggaatg gatgggcatc atcaacccca gcggcggctc cacatcctac 180

gcccagaaat ttcagggaag ggtcaccatg accagggata catccaccag caccgtgtac 240

atggagctgt ccagcctgag gtccgaggac accgctgtgt actactgcgc cagaggcgcc 300

tatctgctgg agctgtacta ctactacgga atggacgtgt ggggccaggg cacaaccgtg 360

accgtgagca gcgccgctag cacaaaagga ccaagcgtgt ttccactggc acctagcagc 420

aaatccacca gcggcggaac agcagccctc gggtgcctgg tgaaggatta cttccctgag 480

ccagtcacag tgtcctggaa ctccggagcc ctgacatccg gcgtgcacac cttccccgct 540

gtgctgcaat ccagcggact gtatagcctc agctccgtcg tgacagtccc ttccagcagc 600

ctgggcacac agacttacat ttgcaacgtg aaccacaaac cttccaacac taaggtggac 660

aaaaaggtgg aacccaaatc ctgtgataag acccatacat gcccaccttg tcccgctcct 720

gagctgctgg ggggaccttc cgtctttctg tttcctccaa aaccaaaaga cacactcatg 780

atcagccgga cccccgaagt cacctgtgtg gtggtggacg tcagccacga agatccagag 840

gtcaagttca attggtacgt ggatggagtg gaagtccaca acgcaaaaac caaacctaga 900

gaagaacagt acaatagcac atacagggtg gtgtccgtcc tgacagtgct ccaccaggac 960

tggctcaatg gcaaagagta taagtgcaag gtgagcaaca aggccctgcc tgcaccaatt 1020

gagaaaacaa ttagcaaggc aaaggggcag ccacgggaac cccaggtgta taccctgccc 1080

ccaagccggg atgaactgac caaaaaccag gtcagcctga catgcctggt gaaagggttt 1140

tacccaagcg atattgccgt cgagtgggag agcaacggac agccagaaaa caattacaaa 1200

accaccccac ctgtgctgga ctccgatggg agctttttcc tgtacagcaa gctcacagtg 1260

gacaagtcca gatggcaaca gggcaacgtg ttttcctgct ccgtgatgca cgaggccctc 1320

cacaaccact atacacaaaa gtccctctcc ctcagcccag ga 1362

<210> 55

<211> 1365

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК, кодирующая альфа-FXI-13716 IgG1 HC Q1E M103L на C-конце K

<400> 55

gaggtgcagc tggtccagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtcaaggtg 60

agctgcaagg cctccggcta caccttcaca tcctatagca tgcactgggt gaggcaggct 120

cctggccagg gcctggaatg gatgggcatc atcaacccca gcggcggctc cacatcctac 180

gcccagaaat ttcagggaag ggtcaccatg accagggata catccaccag caccgtgtac 240

atggagctgt ccagcctgag gtccgaggac accgctgtgt actactgcgc cagaggcgcc 300

tatctgctgg agctgtacta ctactacgga atggacgtgt ggggccaggg cacaaccgtg 360

accgtgagca gcgccgctag cacaaaagga ccaagcgtgt ttccactggc acctagcagc 420

aaatccacca gcggcggaac agcagccctc gggtgcctgg tgaaggatta cttccctgag 480

ccagtcacag tgtcctggaa ctccggagcc ctgacatccg gcgtgcacac cttccccgct 540

gtgctgcaat ccagcggact gtatagcctc agctccgtcg tgacagtccc ttccagcagc 600

ctgggcacac agacttacat ttgcaacgtg aaccacaaac cttccaacac taaggtggac 660

aaaaaggtgg aacccaaatc ctgtgataag acccatacat gcccaccttg tcccgctcct 720

gagctgctgg ggggaccttc cgtctttctg tttcctccaa aaccaaaaga cacactcatg 780

atcagccgga cccccgaagt cacctgtgtg gtggtggacg tcagccacga agatccagag 840

gtcaagttca attggtacgt ggatggagtg gaagtccaca acgcaaaaac caaacctaga 900

gaagaacagt acaatagcac atacagggtg gtgtccgtcc tgacagtgct ccaccaggac 960

tggctcaatg gcaaagagta taagtgcaag gtgagcaaca aggccctgcc tgcaccaatt 1020

gagaaaacaa ttagcaaggc aaaggggcag ccacgggaac cccaggtgta taccctgccc 1080

ccaagccggg atgaactgac caaaaaccag gtcagcctga catgcctggt gaaagggttt 1140

tacccaagcg atattgccgt cgagtgggag agcaacggac agccagaaaa caattacaaa 1200

accaccccac ctgtgctgga ctccgatggg agctttttcc tgtacagcaa gctcacagtg 1260

gacaagtcca gatggcaaca gggcaacgtg ttttcctgct ccgtgatgca cgaggccctc 1320

cacaaccact atacacaaaa gtccctctcc ctcagcccag gaaag 1365

<210> 56

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидерная последовательность A

<400> 56

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Asp Ala Arg Cys

20

<210> 57

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидерная последовательность B

<400> 57

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser

<210> 58

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидерная последовательность C

<400> 58

Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys

<210> 59

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p-IgG4 HC S228P

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (449)..(449)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 59

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Xaa

<210> 60

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p-IgG4 HC S228P

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (451)..(451)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 60

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly Xaa

450

<210> 61

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716-IgG4 HC S228P 1Q1E M103L

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (451)..(451)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 61

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly Xaa

450

<210> 62

<211> 452

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13654p-IgG1 HC

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (452)..(452)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gln Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Xaa

450

<210> 63

<211> 454

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716p-IgG1 HC

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (454)..(454)

<223> Xaa представляет собой Lys или отсутствует

<400> 63

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Xaa

450

<210> 64

<211> 454

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716-IgG1 HC 1Q1E M103L

<220>

<221> смешанные признаки

<222> (454)..(454)

<223> Xaa представляет собой 454 или отсутствует

<400> 64

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Xaa

450

<210> 65

<211> 453

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 IgG1 HC Q1E на C-конце без K

<400> 65

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 66

<211> 454

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716 IgG1 HC Q1E на C-конце K

<400> 66

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 67

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716-IgG4 HC S228P Q1E на C-конце без K

<400> 67

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly

450

<210> 68

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716-IgG4 HC S228P Q1E на C-конце K

<400> 68

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Met Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly Lys

450

<210> 69

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716-IgG4 HC S228P M103L на C-конце без K

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly

450

<210> 70

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> альфа-FXI-13716-IgG4 HC S228P M103L на C-конце K

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Leu Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser

210 215 220

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Gly Lys

450

<210> 71

<211> 232

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Каппа легкая цепь против RSV

<400> 71

Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala

20 25 30

Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Cys Gln Leu Ser Val

35 40 45

Gly Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

50 55 60

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

65 70 75 80

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

85 90 95

Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr

100 105 110

Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val

115 120 125

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

130 135 140

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

145 150 155 160

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

165 170 175

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

195 200 205

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

210 215 220

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 72

<211> 466

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC IgG4 против RSV S228P

<400> 72

Met Ala Val Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala

1 5 10 15

Met Arg Cys Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys

20 25 30

Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu

35 40 45

Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys

50 55 60

Ala Leu Glu Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr

65 70 75 80

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys

85 90 95

Asn Gln Val Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala

100 105 110

Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Met Ile Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val

115 120 125

Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys

225 230 235 240

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Gly Lys

465

<---

Группа изобретений относится к иммунологии. Предложены варианты антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают домен apple 2 фактора свертывания XI человека и ингибируют активацию FXI. Предложены также композиции для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания, содержащие антитело или антигенсвязывающий фрагмент. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут использоваться для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания у субъекта, для ингибирования активации FXI с помощью фактора XIIa (FXIIa) у субъекта, а также для ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз. 11 н. и 35 з.п. ф-лы, 10 пр., 5 табл., 23 ил.

1. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие:

(i) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 для LC CDR1, CDR2 и CDR3; или

(ii) HC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 13 для HC CDR1, CDR2 и CDR3, и LC CDR, которые имеют аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12 для LC CDR1, CDR2 и CDR3, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

2. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(i) вариабельный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, и вариабельный домен LC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21; или

(ii) вариабельный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, и вариабельный домен LC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21.

3. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 1 или 2, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен HC, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

4. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по пп. 1, 2 или 3, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен LC, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

5. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие:

(a) тяжелую цепь (HC), которая имеет вариабельный домен, содержащий HC-CDR 1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9; или

(b) тяжелую цепь (HC), которая имеет вариабельный домен, содержащий HC-CDR 1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13, и

(c) легкую цепь, имеющую вариабельный домен, которая содержит LC, содержащую LC-CDR 1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12,

где антитело или антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

6. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 5, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

7. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 5, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG4 человека или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

8. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 6, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

9. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, содержащие:

(a) тяжелую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 или 13; и

(b) легкую цепь, которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12,

где антитело или антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

10. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 9, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

11. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 9, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG4 или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

12. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 10, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

13. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по пп. 9-11 или 12, которые представляют собой антитело, в котором легкая цепь содержит константный домен легкой цепи κ человека или константный домен легкой цепи лямбда человека или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

14. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п. 13, которые представляют собой антитело, где антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

15. Антитело, которое содержит:

тяжелую цепь (HC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, 25, 27, 28, 33, 34, 35 или 36; и

легкую цепь (LC), которая имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23;

где антитело специфически связывает домен apple 2 фактора свертывания XI (FXI) и ингибирует активацию FXI.

16. Композиция для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания, содержащая терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому одному из пп. 1-15 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

17. Композиция для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания, содержащая терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента, содержащих:

(i) тяжелую цепь (HC), которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, HC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, и HC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 или 13; и

(ii) легкую цепь (LC), которая имеет вариабельный домен, содержащий определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC-CDR), имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, LC-CDR 2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, и LC-CDR 3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12;

где антитело или антигенсвязывающий фрагмент получают из клетки-хозяина, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую HC (i), и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую LC (ii), и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

18. Композиция по п. 17, в которой антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

19. Композиция по п. 17, в которой антитело содержит константный домен тяжелой цепи изотипа IgG4 или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

20. Композиция по п. 17, в которой антитело содержит константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или 40, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

21. Композиция по пп. 17-19 или 20, в которой легкая цепь содержит константный домен легкой цепи κ человека или константный домен легкой цепи лямбда человека или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

22. Композиция по п. 21, в которой антитело содержит константный домен легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или его вариант, где константный домен содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен, добавлений, делеций аминокислот или их сочетания.

23. Способ лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания у субъекта, который включает:

введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому одному из пп. 1-15.

24. Способ по п. 23, в котором субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект, страдающий от или имеющий риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

25. Способ по п. 23, в котором субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект с патологической активацией FXI.

26. Способ по пп. 23, 24 или 25, в котором антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят субъекту посредством парентерального введения.

27. Способ по пп. 23-25 или 26, в котором терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит приблизительно от 0,3 приблизительно до 3,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта.

28. Способ по п. 27, в котором терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит приблизительно от 1,0 до 2,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта.

29. Способ ингибирования активации FXI с помощью фактора XIIa (FXIIa) у субъекта, который включает:

(a) выбор субъекта, нуждающегося в лечении, где субъект, нуждающийся в лечении, имеет тромбоз или имеет риск его развития; и

(b) введение субъекту ингибирующего количества любого одного из антител или антигенсвязывающих фрагментов по любому одному из пп. 1-15 или композиции любого одного по пп. 16-22, тем самым ингибируя активацию FXI с помощью FXIIa.

30. Способ по п. 29, в котором субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект, страдающий от или имеющий риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

31. Способ по п. 29, в котором субъектом, нуждающимся в лечении, является субъект с патологической активацией FXI.

32. Способ по пп. 29, 30 или 31, в котором ингибирующее количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента или композиции представляет собой количество, достаточное для того, чтобы ингибировать активацию FXI по меньшей мере на 50%.

33. Способ по пп. 29-31 или 32, в котором антитело или антигенсвязывающий фрагмент или композицию вводят субъекту посредством парентерального введения.

34. Способ по пп. 29-32 или 33, в котором ингибирующее количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит приблизительно от 0,3 приблизительно до 3,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта.

35. Способ по п. 34, в котором ингибирующее количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит приблизительно от 1,0 мг до 2,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта.

36. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому одному из пп. 1-15 или композиции по любому из пп. 16-22 для изготовления лекарственного средства для лечения тромбоэмболического нарушения или заболевания.

37. Применение по п. 36, в котором тромбоэмболическое нарушение или заболевание представляет собой инфаркт миокарда, ишемический инсульт, легочную тромбоэмболию, венозную тромбоэмболию (VTE), фибрилляцию предсердий, диссеминированное внутрисосудистое свертывание, связанные с медицинским устройством тромбоэмболические нарушения, синдром тяжелой системной воспалительной реакции, метастатическую злокачественную опухоль или инфекционное заболевание.

38. Применение по п. 36, в котором тромбоэмболическое нарушение или заболевание представляет собой патологическую активацию FXI.

39. Способ ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз, у нуждающегося в этом субъекта, который включает

введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому одному из пп. 1-15, тем самым ингибируя свертывание крови и ассоциированный тромбоз, не компрометируя гемостаз, у субъекта.

40. Способ по п. 39, в котором субъект страдает от или имеет риск страдать от инфаркта миокарда, ишемического инсульта, легочной тромбоэмболии, венозной тромбоэмболии (VTE), фибрилляции предсердий, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, связанных с медицинским устройством тромбоэмболических нарушений, синдрома тяжелой системной воспалительной реакции, метастатической злокачественной опухоли или инфекционного заболевания.

41. Способ по п. 39, в котором субъект имеет патологическую активацию FXI.

42. Способ по пп. 39, 40 или 41, в котором ингибирующее количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента или композиции представляет собой количество, достаточное для того, чтобы ингибировать активацию FXI по меньшей мере на 50%.

43. Способ по пп. 39-41 или 42, в котором антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят субъекту посредством парентерального введения.

44. Способ по пп. 39-42 или 43, в котором терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит приблизительно от 0,3 приблизительно до 3,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта.

45. Способ по п. 39, в котором терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит приблизительно от 1,0 до 2,0 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента/кг субъекта.

46. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому одному из пп. 1-15 или композиции по любому одному из пп. 16-22 для изготовления лекарственного средства для ингибирования свертывания крови и ассоциированного тромбоза, не компрометируя гемостаз.