Способ прогнозирования риска опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы Российский патент 2025 года по МПК G01N33/49 G01N33/574 

Изобретение относится к медицине, онкологии, молекулярной и клеточной биологии, а также клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы

Рак молочной железы является самым распространенным злокачественным заболеванием среди женщин. Известные на сегодняшний день способы прогнозирования течения рака молочной железы, его метастатического потенциала не многочисленны и связаны с поиском молекулярных маркеров опухолевой прогрессии. Недостатком существующих способов является то, что все они основаны на исследовании операционного материала опухолевой ткани и не дают возможности оценить риск гематогенного метастазирования до начала лечения.

Одним из основных причин возникновения рецидивов и метастазов являются циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК). Известно, что популяция ЦОК гетерогенна [1, 2, 3]. Наличие ЦОК не всегда сопровождается формированием метастазов, по всей видимости, потому, что не все опухолевые клетки, попавшие в циркуляцию, обладают достаточными для формирования метастаза свойствами [1, 4, 5]. Показано, что даже локализованные опухоли без клинически видимых метастазов являются источниками ЦОК [6].

Недавние исследования показали, что малая операционная травма (биопсия) сопровождается значимым увеличением уровня стволовых циркулирующих опухолевых клеток в крови больных инвазивной карциномой молочной железы [2]. Наши исследования показали влияние неоадьювантной химиотерапии (НАХТ) на количество и субпопуляционный состав ЦОК у больных РМЖ. Так, после 3 курса НАХТ наблюдалось увеличение количества ЦОК с признаками стволовости и ЕМТ (epithelial-mesenchymal transition) и без мембранной экспрессии ЕрСам [7]. Кроме того, показано, что количество ЦОК с признаками ЕМТ до начала НАХТ связано с плохим ответом опухоли на неоадьювантную химиотерапию у пациенток с инвазивной карциномой молочной железы [8]. Также показано, что наличие в крови ЦОК с признаками ЕМТ и стволовых ЦОК с признаком ЕМТ значимо снижают пятилетнюю безметастатическую выживаемость больных РМЖ [5]. Недавние исследования выявили наличие в асцитической жидкости больных раком яичников атипичных/гибридных форм EpCam+CD45+ опухолевых клеток, концентрация которых прямо коррелирует со степенью канцероматоза [9]. Описано обнаружение EpCam+CD45+ клеток задолго до появления метастазов, что потенциально делает их предвестником скорого распространения опухоли [10, 11, 12].

Практически все работы сконцентрированы на изучении свойств опухолевых клеток, в то время как клеткам метастатических и опухолевых ниш (мезенхимальные стволовые клетки-предшественники, эндотелиальные клетки-предшественники, гемопоэтичские прогениторные клетки, клетки-предшественники макрофагов), а также атипичным/гибридным клеткам уделено малое внимание.

Известен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при двусторонней метахромной инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы (Патент РФ на изобретение №0002580639 от 07.06.2017). Суть этого способа основывается на проведении гистологического исследование на светооптическом уровне препаратов ткани всех регионарных лимфатических узлов, полученных после оперативного вмешательства, и определение количества лимфоузлов с наличием метастазов [13]. Недостатком этого способа является то, что он предназначен для больных с двухсторонней метахронной инвазивной карциномой неспецифического типа молочных желез.

Другой способ прогнозирования гематогенного метастазирования при триплнегативной инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы (Патент РФ на изобретение №0002558863 от 28.11.2016) основан на определении молекулярно-генетического типа рака молочной железы с помощью иммуногистохимического исследования препаратов ткани первичной опухоли, оценки наличия лимфогенных метастазов и подсчета количества разных типов структур в инфильтративном компоненте опухоли с оценкой выраженности гиалиноза стромы опухоли [14].

Недостатком существующих способов является то, что все они основаны на исследовании операционного материала опухолевой ткани и не дают возможности оценить риск гематогенного метастазирования до начала лечения.

Наиболее близким к предлагаемому способу прогнозирования риска опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы является способ прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы на основе определения различных популяций циркулирующих опухолевых клеток в крови до лечения (Патент RU 2678202 C1 от 24.01.2019) [15]. Для этого проводят определение различных популяций циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) до лечения пациента. Методом многоцветной проточной цитометрии определяют уровень популяций ЦОК с помощью молекулярной панели маркеров, включающей ЕрСаш, CD45, CD44, CD24 и Ncadherin, и меченных разными флюорохромами моноклональных антител против данных маркеров. Оценивают в баллах следующие показатели: наличие порогового уровня ЦОК с признаком стволовости и ЕМТ до биопсии; наличие порогового уровня ЕрСаш-отрицательных ЦОК с признаками стволовости в состоянии ЕМТ до биопсии; наличие порогового уровня ЦОК без признаков стволовости в состоянии ЕМТ до биопсии, а также определяют размер первичной опухоли. Полученные данные обрабатывают методом математического анализа с использованием разработанного уравнения регрессии. И при значении вероятности развития метастазов Р>50% определяют высокий риск развития гематогенных метастазов у указанной категории пациентов, а при Р <50% - низкий риск [15]. Недостатком данного способа является то, что в нем не учитывается наличие атипичных/гибидных Epcam+CD45+ форм ЦОК, а также количество клеток-предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), мезенхимальных стволовых клеток (MSC) и гемопоэтических клеток-предшественников (HSC), участвующих в формировании преметастатических ниш.

Новый технически результат - повышение точности прогнозирования течения заболевания на более ранней его стадии до проведения лечения при снижении инвазивности способа для оптимизации назначения неоадьювантной и адъювантной терапии.

Для достижения нового технического результата в способе прогнозирования риска опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы включающем исследование биологического материала пациента до начала лечения, в крови методом многоцветной проточной цитометрии определяют количество клеток-предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), мезенхимальных стволовых клеток (MSC) и гемопоэтических стволовых imeTOK(HSC), а также популяций циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК), ассоциированных с развитием гематогенных метастазов и рецидивов: ЦОК без признаков стволовости, но в состоянии ЕМТ EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+, ЦОК с признаком стволовости и ЕМТ EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, стволовых ЦОК с потерей мембранной экспрессии ЕрСаш, но с признаком ЕМТ EpCam-CD45-CD44+CD24- Ncadherin+, атипичных/ гибридных EpCam+CD45+ клеток оценивают в баллах: 0 баллов - - при отсутствии данных клеток в крови, 1 балл - при количестве клеток в крови ниже значения cut-off и 2 балла - при количестве клеток выше значения cut-off: cut-off для ЕРС более 0,205 клеток/mm³; для MSC более 0,075 клеток/mm³; cut-off для HSC более 0,50 клеток/mm³, cut-off для EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+ более или равном 0,17 клеток/mm³; EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+6o4ee или равном 0,63 клеток/mm³; стволовых ЦОК с потерей мембранной экспрессии ЕрСат, но с признаком ЕМТ ЕрСат- CD45-CD44+CD24-Ncadherin+ более или равном 0,26 клеток/mm³; cut-off для атипичных/ гибридных EpCam+CD45+ клеток более 2,6 клеток/mm³, и при сумме баллов более или равном 7 определяют высокий, а при сумме баллов менее 7 - низкий риск опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы.

Способ осуществляют следующим образом.

Материалом для исследования служит венозная стабилизированная кровь, взятая до начала лечения. Венозную кровь берут утром натощак в вакуумную пробирку с ЭДТА в объеме 5 мл. Образцы используют в течение 2-3 часов. Методом многоцветной проточной цитометрии определяют количество различных популяций ЦОК и костномозговых клеток предшественников.

Окрашивание венозной крови осуществляют в несколько этапов. На первом этапе к образцам крови добавляют 5 мкл раствора, блокирующего Fc-рецепторы и Cell Staining Buffer (Biolegend, США). Проводят инкубацию при комнатной температуре в течение 10-15 мин. Затем добавляют моноклональные антитела, меченные различными флуоресцентыми метками к человеческому CD45, Epcam, CD44, CD24, CD 133, Ncadherin, Her2, CD202, CD34, CD lib-, CD90 и ядерный краситель живых клеток NucBlu Live cell stain ready probes reagent или краситель 7-AAD. Инкубацию проводят в темноте при комнатной температуре в течение 15-20 мин. Затем к образцам добавляют раствор, лизирующий эритроциты. Проводят инкубацию в темноте в течение 25 мин, дважды отмывают CellWash буфером (BD Biosciences, США) с последующим центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об/мин. Для окрашивания внутриклеточных маркеров СК и ki67 перед добавлением соответствующих моноклональных антител проводят инкубацию клеток с реагентом Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences, США), отмывку CellWash буфером и дополнительную инкубацию с Fc Receptor Blocking Solution (Biolegend, США). После отмывки клеток к клеточному осадку добавляют раствор BD Flow (BD Biosciences, США). Все образцы хранят в темноте при 4°С и анализируют на проточном цитометре в течение 1 ч.

Многоцветную проточную цитометрию проводят на проточном цитометре BDFACSCanto или NovoCyte 3000 в комплектации с лазерами (синий 488 нм (С488), красный 640 нм (К640), фиолетовый 405 нм (Ф405)) и светофильтрами (С488 530/30 нм для Fitc, С488 675/30 нм для PerCP-Cy5.5, С488 572/28 для РЕ, С488 615/20, С488 780/60 для РЕ-Су7, К640 675/30 нм для АРС, К640 780/60 нм для АРС-Су7, Ф405 445/45 нм, Ф405 615/30 нм для BV605, Ф405 572/28 нм для BV570). Протоколы анализируют с помощью программного обеспечения NovoExpress 1.3.0 (ACEA Biosciences, США). Границы позитивных областей по каждому маркеру устанавливают в соответствии с неокрашенным контролем.

Используя общепринятый маркер циркулирующих опухолевых клеток Ерсат, маркеры стволовости и ЕМТ, определяют различные популяции ЦОК, а также атипичные/гибридные формы клеток Epcam+CD45+. По полученным ранее данным, ЦОК со свойствами «семян» соответствует фенотипу Epcam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+[5, 8, 15]. Также, с риском гематогенных метастазов связаны стволовые ЦОК с признаком ЕМТ как с мембранной экспрессией Ерсат, так и без мембранной его экспрессии (Epcam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, Epcam (m)-CD45-CD44+CD24-Ncadherin+) [5]. Кроме это, недавние исследования выявили наличие в асцитической жидкости больных раком яичников атипичных/гибридных форм EpCam+CD45+опухолевых клеток, концентрация которых прямо коррелирует со степенью канцероматоза [9]. Описано обнаружение EpCam+CD45+клеток задолго до появления метастазов, что потенциально делает их предвестником скорого распространения опухоли [10, 11, 12].

На фиг. 1 показана стратегия гейтирования ЦОК ассоциированных с риском развития отдаленных гематогенных метастазов.

Различные популяции костномозговых клеток-предшественниц в крови больных раком молочной железы определяют с использованием моноклональных антител к CD45, CD34, CD133, CD202, CD11b-, CD90. Границы позитивных областей по каждому маркеру устанавливают в соответствии с неокрашенным контролем. Для оценки риска гематогенных метастазов определяют количество клеток-предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), гемопоэтические стволовые клетки-предшественники (HSC) и мезенхимальные стволовые клетки (MSC). MSC характеризуют как клетки с фенотипом CD90+CD34-CD45-CD133-CD11b-.

В крови больных инвазивной карциномой молочной железы методом многоцветной проточной цитометрии с помощью меченных флюорохромами моноклональных антител определяют наиболее значимые популяции ЦОК с фенотипом «семян»- Epcam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+, стволовые ЦОК с признаком ЕМТ EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, стволовые ЦОК с потерей мембранной экспрессии ЕрСаш и признаком ЕМТ (EpCam-CD45-CD44+CD24-Ncadherin+) и атипичные/гибридные формы с признаком стволовости, а также клетки, составляющие основу метастатических ниш (клетки предшественники эндотелия, мезенхимные стволовые клетки и гемопоэтические стволовые клетки).

При проведении ROC анализа показатели AUC для количества клеток- предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), мезенхимальных стволовых клеток (MSC) и гемопоэтических стволовых клеток(Н8С ) составили AUC=0,763, р=0,021; AUC=0,720, р=0,0055; AUC= 0,7548 р<0,0001, соответсвенно. При этом значения cut-off для ЕРС > 0,205 клеток/mm³; cut-off для MSC > 0,075 клеток/mm³; cut-off для HSC >0,50 клеток/mm³ (фиг. 2). ROC анализ предикторной значимости атипичных/гибридных EpCam+CD45+ клеток в крови больных РМЖ для оценки риска опухолевой прогрессии выявил высокое значение показателя AUC, который составил 0,9347, р<0,0001. При этом значение cut-off для атипичных/гибридных EpCam+CD45+ клеток составило > 2,6 клеток/mm³ (100% чувствительность, 88,95%-специфичность) (фиг. 3). Значения cut-off для различных популяций циркулирующих опухолевых клеток, ассоциированных с риском развития гематогенных метастазов и рецидивов рака молочной железы представлены в патенте на изобретение RU 2678202 С1, 24.01.2019 [15].

Суть данной технологии состоит в том, что количество клеток-предшественников (ЕРС, MSC и HSC), а также ЦОК, ассоциированных с развитием гематогенных метастазов, в том числе атипичных/гибридных Epcam+CD45+ клеток оценивают в баллах. 0 баллов - при отсутствии данных клеток в крови, 1 балл -при наличии клеток в крови и 2 балла - при количестве клеток выше значения cut-off. При сумме баллов >7 определяют высокий риск развития гематогенных метастазов и рецидивов, а при сумме баллов < 7-низкий риск. Данная модель имеет высокую степень достоверности (Х2 у = 18,11, ру=0,0000).

Чувствительность - 100%, специфичность - 100%.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется фиг. 1-7 и клиническими примерами

На Фиг. 1 представлена Стратегия гейтирования ЦОК ассоциированных с риском развития отдаленных гематогенных метастазов. 1а - используя инструмент для анализа Dot Plot проводят выделение синглетов клеток крови, окрашенных ядерным красителем NucBlu Live cell stain ready probes reagent (NBLC) и разделение популяций клеток на CD45+ и CD45-; 1б - используя Dot Plot разделяют NBLC -позитивные популяции клеток по экспрессии маркеров EpCam и CD45; 1в - используя гистограммы, оценивают EpCam+CD45- клетки по маркерам стволовости CD44+CD24- и Ncadherin; 1г - используя гистограммы, оценивают Epcam-CD45- клетки по маркерам стволовости CD44+CD24- и Ncadherin, а также популяцию атипичных/гибридных клеток CD45+Epcam+.

На фиг. 2 - ROC кривые предикторной значимости количества клеток-предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), мезенхимальных стволовых клеток (MSC) и гемопоэтических стволовых клеток (HSC) в крови больных РМЖ для оценки риска опухолевой прогрессии.

На фиг. 3 - ROC кривая предикторной значимости количества атипичных/гибридных EpCam+CD45+клеток в крови больных РМЖ для оценки риска опухолевой прогрессии.

На фиг. 4 - результат проточной цитометрии при исследовании костномозговых клеток предшественников в крови у больной П., 31 год.

На фиг. 5 - результат проточной цитометрии оценки значимых популяций ЦОК у больной П., 31 лет, до биопсии.

На фиг. 6 представлены скатерограмма проточной цитометрии венозной крови больной К, 44 года до биопсии.

На фиг. 7 преставлены сумма баллов по наличию клеток-предшественников и ЦОК у больных с выявленными гематогенными метастазами и рецидивами после лечения Примечание: 1- группа больных без гематогенных метастазов и рецидивой после лечения; 2 - группа больных РМЖ с выявленными гематогенными метастазами и рецидивами после лечения.

Пример 1

Больная П, 31 год. На фоне кормления грудью обнаружила в июне 2019 уплотнение. Обратилась к онкологу 29.10.2019. При осмотре подозрение на ЗНО. Перед процедурой пункционной биопсии 05.11.2019 была взята венозная кровь на предмет исследования фенотипического спектра ЦОК и костномозговых клеток предшественников. Было проведено исследование согласно предлагаемому способу. На фиг. 4 представлены результаты проточной цитометрии при оценке костномозговых клеток предшественников в крови больной П, 31 год.

В результате исследования были выявлены ЕРС в количестве 0,038 клеток/mm³ крови, что соответствует 1 баллу (меньше cut off), HSC - 1,28 клеток/mm³ - 2 балла (больше cut off) и MSC=0,004 клеток/mm³ - 1 балл (меньше cut off).

Результаты проточной цитометрии фенотипической оценки ЦОК у больной П.,31 год до биопсии (фиг 5) показали наличие клеток «семян» (Epcam+CD45-CD44-CD24- Ncadherin+) в количестве 0,343 клеток/mm³ крови (2 балла, т.к. выше cut off), ЦОК с фенотипом EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+ 0,34 клеток/mm³ (1 балл), ЦОК с фенотипом EpCam-CD45-CD44+CD24-Ncadherin+ 0,403 клеток/ mm³ (2 балла, т.к. выше cut off). Также выявлены атипичные/гибридные формы клеток с признаком стволовости в количестве 12,8 клеток/mm³ (2 балла). Итого сумма баллов по данным значимых популяций ЦОК и клеткам предшественникам составила 11 баллов (1+2+1+2+1+2+2), что соответствовало высокому риску гематогенных метастазов.

У данной пациентки после морфологического исследования биопсийного материала Рег.№ 30569-82/19 и ИГХ № 1454/19 была выявлена инвазивная карцинома. Опухоль эстроген слабо позитивная. Иммуногистохимическое исследование № 1454/19 (по №30579/19) от 14.11.2019

Уровень пролиферативной активности - Ki 67 около 40% опухолевых клеток (30-

50%)

Исследование остеосцинтиграфии от 11.11.2019 не выявило признаков очагового поражения скелета.

На консультации онколога врач выставил диагноз рак молочной железы (С50.8) T2N1M0, ПВ стадия.

После начала лечения по данным магнитно-резонансной томографии органов брюшной полости у данной пациенты была выявлена МР-картина очаговых образований печени, вероятнее МТС-поражение. С декабря 2019 больная получала Золадекс и 11 курсов полихимиотерапии по схеме Доксорубицин+Доцетаксел. Эффект - регрессия процесса. 15.04.2021 была проведена лапароскопия, двусторонняя аднексэктомия. С апреля 2021 начат прием ингибитора Ароматазы. В ноябре 2022г - прогрессирование. По результатам КТ-выраженная отрицательная динамика. Гистологическое исследование биопсии очагов печени №33955-56/23 от 29.11.2023 показало mts карциномы молочной железы в печень. По данным СКТ от 27.02.2024- прогрессирование в виде появления новых метастатических очагов в забрюшинных и внутрибрюшинных лимфоузлах.

Пример 2

Больная К, 44 года в мае 2016 года самостоятельно обратилась в НИИ Онкологи Томского НИМЦ по поводу новообразования правой молочной железы. При осмотре были выявлены увеличенные и плотные лимфоузлы аксиллярной области справа и опухоль 3 см. У больной было взято информированное согласие для участия в проспективном клиническом исследовании NCT04817501 «Фенотипический спектр циркулирующих опухолевых клеток при опухолях женской репродуктивной системы» (Протокол этического комитета № 2 от 14.02.2014). Было проведено исследование согласно предлагаемому способу. Перед процедурой тонкоигольной биопсии у пациентки была взята кровь на предмет исследования различных популяций ЦОК и клеток- предшественников. Результаты проточной цитометрии показали наличие в крови ЦОК с фенотипом CD45-Epcam+CD44+CD24-Ncadherin+ 0,02 клеток/ mm³ (1 балл), а также атипичных/гибридных форм CD45+Epcam+ 9,1 клеток/mm³ (2 балла), ЦОК без признаков стволовости, но в состоянии EMT EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+, стволовых ЦОК с потерей мембранной экспрессии ЕрСат, но с признаком EMT EpCam-CD45- CD44+CD24-Ncadherin+ не определялись (0 баллов) (Фиг.6).

Также у данной больной были определены клетки-предшественники: ЕРС в количестве 0,12 клеток/mm крови (1 баллов); HSC- 0,23 клеток/ mm крови (1 балл (меньше cut off)), MSC - 0 клеток/mm³ крови (0 баллов). Итого сумма баллов по данным значимых популяций ЦОК и клеткам предшественникам составила 5 баллов, что соответствовало низкому риску опухолевой прогрессии.

Морфологическое исследование биопсийного мателиала № 10015/16 (ИГХ № 411/16) показало инвазивную карциному молочной железы с густой диффузной лимфоидной инфильтрацией. Трижды-негативный тип опухоли.

Данной пациентке был выставлен диагноз С50. Злокачественное новообразование молочной железы T2N1M0 , стадия ПВ.

В плане комбинированного лечения проведено 6 курсов НАХТ по схеме САХ. По данным УЗИ полная морфологическая регрессия опухоли.06.03.2017г выполнена секторальная резекция молочной железы с интраоперационной лучевой терапией ЮГр, аксиллярная лимфаденэктомия. ДЛТ на оставшуюся часть правой молочной железы.

Больная регулярно проходит контрольные обследования. При последнем обследовании от 14.02.2024 года данных за прогрессирование и рецидивов не выявлено.

Способ основан на исследовании крови методом многоцветной проточной цитометрии и анализе данных восьмидесяти восьми больных РМЖ T1-4N0-3M0 стадии в возрасте от 18 до 80 лет, поступающие на лечение в НИИ Онкологии и/или Томский областной онкологический диспансер, вошедших в проспектовое клиническое исследование NCT04817501 «Фенотипический спектр циркулирующих опухолевых клеток при опухолях женской репродуктивной системы», проводимом на базе НИИ онкологии Томского НИМЦ. Результаты исследований представлены на фиг.7, на которой представлены сумма баллов по наличию клеток-предшественников и ЦОК у больных с выявленными гематогенными метастазами и рецидивами после лечения.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с большей точностью и информативностью прогнозировать риск опухолевой прогрессии при раке молочной железы на более ранней его стадии до проведения лечения при снижении инвазивности способа и позволяет оптимизировать режим проведения неоадьювантной и адъювантной терапии.

Источники информации

1) Kaigorodova E.V. CIRCULATING TUMOR CELLS: CLINICAL SIGNIFICANCE IN BREAST CANCER (REVIEW) // Annals of the Russian academy of medical sciences. - 2017. -Vol.72. - N. 6. - P. 450-457. doi: 10.15690/vramn833.

2) Kaigorodova E.V., Tarabanovskaya N.A., Staheeva M. N., Savelieva О.E., Tashireva L. A., Denisov E.V., Perelmuter V.M. Effect of small and radical surgical injury on the level of different populations of circulating tumor cells in the blood of breast cancer patients // Neoplasma. - 2017. - V. 64, 3/ - 437-443. - doi:10.4149/neo_2017_315.

3) Kaigorodova E.V., Kozik A.V., Zavaruev I.S., Grishchenko M.Y. Hybrid/Atypical Forms of Circulating Tumor Cells: Current State of the Art. Biochemistry (Mosc). 2022 Apr;87(4):380-390. doi: 10.1134/S0006297922040071.

4) Circulating tumor cells and bone marrow progenitor cells in the blood of breast cancer patients in the dynamics of neoadjuvant chemotherapy E. Kaigorodova, N. Tarabanovskaya, E. Simolina, V. Perelmuter, M. Stakheeva, N. Cherdyntseva, O. Saveleva, L. Tashireva // European journal of cancer supplements 11/2015; 13(1). DOI:10.1016/j.ejcsup.2015.08.039 5) Кайгородова Е.В., Тарабановская Н.А., Суркова П.В., Зельчан Р.В., Гарбуков Е.Ю. НАЛИЧИЕ В КРОВИ РАЗЛИЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ДО ЛЕЧЕНИЯ: СВЯЗЬ С ПЯТИЛЕТНЕЙ БЕЗМЕТАСТАТИЧЕСКОЙ ВЫЖИВАЕМОСТЬЮ. Сибирский онкологический журнал. 2020;19(6):57-65. https://doi.org/10.21294/1814-4861-2020-19-6-57-65.

6) Yang М.Н., Imrali A., Heeschen C. Circulating cancer stem cells: the importance to select. Chin J Cancer Res. 2015 Oct;27(5):437-49. doi: 10.3978/j.issn.l000-9604.2015.04.08.

7) Heterogeneity of Circulating Tumor Cells in Neoadjuvant Chemotherapy of Breast Cancer. Kaigorodova E.V., Savelieva O.E., Tashireva L.A., Tarabanovskaya N.A., Simolina E.I., Denisov E.V., Slonimskaya E.M., Choynzonov E.L., Perelmuter V.M. //Molecules.2018.Mar 22;23(4). doi: 10.3390/molecules2304072.

8) патент №2682967 Российская Федерация МКП G01N 33/53 (2006.01) Способ прогнозирования риска плохого ответа опухоли на неоадъювантную химиотерапию у пациенток с инвазивной карциномой молочной железы / Кайгородова Е.В., Перельмутер B. М., Тарабановская Н.А., Симолина Е.И., Савельева О.Е., Таширева Л.А., Денисов Е.В.; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") (RU) №2018111330, опубл. 25.03.2019; Заявка №2018111330 от 29.03.2018.

9) Кайгородова Е.В., Очиров М.О., Молчанов СВ., Рогачев P.P., Дьяков Д.Д., Чернышова А.Л., Шпилева О.В., Ковалев О.В., Вторушин СВ. Различные популяции ЕрСат-положительных клеток в асцитической жидкости у больных раком яичников: связь со степенью канцероматоза. Бюллетень сибирской медицины. 2021;20(2):44-53. https://doi.orfi/10.20538/1682-0363-2021-2-44-53.

10) Кайгородова Е.В., Заваруев И. С, Грищенко М.Ю., Чернышова А. Л. Особенности встречаемости атипичных (гибридных) форм клеток EpCam+CD45+ у больных раком эндометрия // Материалы VI Всероссийской конференции по молекулярной онкологии. -Текст: электронный // Успехи молекулярной онкологии. - 2021. - Том 8, №4 Прил. - C. 50. - https://doi.org/10.17650/2313-805X-2021-8-4-5-163.

11) Manjunath, Y.; Porciani, D.; Mitchem, J.B.; Suvilesh, K.N.; Avella, D.M.; Kimchi, E.T.; Staveley-O'Carroll, K.F.; Burke, D.H.; Li, G.; Kaifi, J.T. Tumor-Cell-Macrophage Fusion Cells as Liquid Biomarkers and Tumor Enhancers in Cancer. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1872. https://doi.org/10.3390/ijms21051872.

12) Кайгородова E.B., Заваруев И.С., Чернышова А.Л., Грищенко М.Ю. Прогностическая значимость атипичных/гибридных форм клеток EpCAM+CD45+ в крови у больных раком эндометрия. Опухоли женской репродуктивной системы. 2023; 19(2): 104-108. https://doi.Org/10.17650/1994-4098-2023-19-2-104-108.

13) Патент РФ на изобретение №2580639 от 07.06.2017. Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при двухсторонней метахромной инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.

14) Патент РФ на изобретение №2558863 от 28.11.2016. Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при трипл негативной инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.

15) Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы на основе определения различных популяций циркулирующих опухолевых клеток в крови до лечения. Кайгородова Е.В., Перельмутер В.М., Тарабановская Н.А., Слонимская Е.М., Чердынцева Н.В. Патент на изобретение RU 2678202 С1, 24.01.2019. Заявка №2018111333 от 29.03.2018.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы. В крови больного методом многоцветной проточной цитометрии определяют количество клеток-предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), мезенхимальных стволовых клеток (MSC), гемопоэтических стволовых клеток (HSC) и популяций EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+, EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, EpCam-CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, атипичных/гибридных EpCam+CD45+ клеток. Количество указанных клеток оценивают в баллах. При сумме баллов более или равной 7 определяют высокий риск опухолевой прогрессии. При сумме баллов менее 7 определяют низкий риск опухолевой прогрессии. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования течения заболевания до проведения лечения за счет определения ЕРС, MSC, HSC и популяций циркулирующих опухолевых клеток в крови больного раком молочной железы. 7 ил., 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования риска опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы, включающий исследование биологического материала пациента до начала лечения, характеризующийся тем, что в крови больного методом многоцветной проточной цитометрии определяют количество клеток-предшественников эндотелиоцитов (ЕРС), мезенхимальных стволовых клеток (MSC) и гемопоэтических стволовых клеток (HSC), а также популяций циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК), ассоциированных с развитием гематогенных метастазов и рецидивов: ЦОК без признаков стволовости, но в состоянии ЕМТ EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+, ЦОК с признаком стволовости и ЕМТ EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, стволовых ЦОК с потерей мембранной экспрессии EpCam, но с признаком ЕМТ EpCam-CD45-CD44+CD24-Ncadherin+, атипичных/гибридных EpCam+CD45+ клеток оценивают в баллах: 0 баллов - при отсутствии данных клеток в крови, 1 балл - при наличии клеток в крови ниже значения cut-off и 2 балла - при количестве клеток выше значения cut-off: cut-off для ЕРС более 0,205 клеток/mm³; для MSC более 0,075 клеток/mm³; cut-off для HSC более 0,50 клеток/mm³, cut-off для EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+ более или равном 0,17 клеток/mm³; EpCam+CD45-CD44+CD24-Ncadherin+ более или равном 0,63 клеток/mm³; стволовых ЦОК с потерей мембранной экспрессии EpCam, но с признаком ЕМТ EpCam-CD45-CD44+CD24-Ncadherin+ более или равном 0,26 клеток/mm³; cut-off для атипичных/гибридных EpCam+CD45+ клеток более 2,6 клеток/mm³, и при сумме баллов более или равной 7 определяют высокий, а при сумме баллов менее 7 - низкий риск опухолевой прогрессии у больных раком молочной железы.