СПОСОБ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ СОРТОВ И ЛИНИЙ СОИ Российский патент 2025 года по МПК C12Q1/68 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области биотехнологии и биохимии, в частности к способу молекулярно-генетической идентификации сортов, биотипов и гибридов сои на основе микросателлитных (SSR) маркеров.

Предшествующий уровень техники

Соя (Glicine max (L) Merr.) является одной из ключевых белково-масличных культур в мире. Ежегодно площади посевов сои увеличиваются, создаются новые сорта. Постоянный рост значимости сои в мировой экономике обусловлен комплексом ценных свойств культуры и ее использованием в различных отраслях промышленности. Сохранение генетического разнообразия и использование сортов с определенными характеристиками в качестве родителей для скрещивания имеет важное значение для создания новых сортов, адаптированных к изменяющимся климатическим условиям и устойчивых к болезням и вредителям. Изучение генетического разнообразия и паспортизация ценных сортов и форм важных сельскохозяйственных культур являются обязательными условиями успешного сохранения и использования различных сортов сельскохозяйственных видов растений и проводятся во многих научных центрах мира. Идентификация сортов помогает обеспечить подлинность семенного материала и его соответствие заявленным характеристикам сорта, и является широко распространенной задачей, которой занимаются во всем мире (Amiteye, 2021).

Наиболее удобными для идентификации генотипов в настоящее время являются молекулярно-генетические маркеры. В связи с этим большое значение имеет идентификация и паспортизация генотипов сои с использованием молекулярных маркеров.

Ранее, в целях генотипирования генетических ресурсов растений, широко использовались неспецифичные типы ДНК-маркеров, такие как RAPD (Xu and Gai, 2003). Однако, информативность этих сравнительно недорогих типов ДНК-маркеров является достаточно низкой, а использование их для идентификации сортов является неэффективным в связи с их неспецифичностью и непостоянной воспроизводимостью результатов в различных лабораториях. Кроме того, для подобного типа маркеров в большинстве случаев отсутствует информация по хромосомной локализации, они не являются кодоминантными типами маркеров, что затрудняет их использование в генетических исследованиях. Одним из наиболее используемых и эффективных типов маркеров являются микросателлитные ДНК-маркеры, или SSR (Simple Sequence Repeats - простые повторяющиеся последовательности). Микросателлитные локусы представляют собой участки дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), содержащие простые короткие повторяющиеся моно-, ди-, три-, тетра- или пентануклеотидные мотивы (тандемы), локализованные в геномах большинства видов эукариот.SSR-маркеры - кодоминантные маркеры, обладающие рядом таких преимуществ, как высокий уровень полиморфизма, воспроизводимости, случайное распределение по геному, относительно невысокая стоимость. Благодаря своим уникальным качествам микросателлитные маркеры стали востребованными в молекулярно-генетическом картировании и наилучшим образом подходят для паспортизации и дискриминации индивидуальных генотипов, так как микросателлитные локусы содержат большое число аллелей, кроме того возможность использования наборов локусов позволяет получать уникальные генетические паспорта с крайне низкой вероятностью случайного повторения (Brown et al., 1996; Varshney et al., 2005).

Известен способ молекулярного маркирования, основанный на микросателлитных локусах, предназначенный для генетической паспортизации селекционных достижений растений рода Rubus (RU 2732922 С2 от 24.09.2020), позволяющий осуществлять надежную и достоверную паспортизацию различных сортов малины с помощью 13 SSR-праймеров.

У сои также удалось выявить высокий уровень полиморфизма по микросателлитным локусам (Abe et al., 2003; Diwan and Cregan, 1997; Guo Juan et al., 2012; Tantasawat et al., 2011). В работе С.А. Рамазановой с соавторов (2020) было установлено, что система маркеров, идентифицирующая 13 SSR-локусов (Sat002, Satt005, Satt009, Soyprl, Sat36, Sat43, Soyhspl76, Soysc514, Satt141, Satt681, Satt181, Satt161 и Sat_263), обладает высоким дискриминирующим потенциалом для того, чтобы использовать ее для идентификации и паспортизации сортов сои (Рамазанова and Коломыцева, 2020).

В другом исследовании было проведено изучение генетического разнообразия 15 сортов и 22 перспективных линий сои казахстанской селекции с использованием 50 полиморфных SSR-маркеров, локализованных во всех 20 хромосомах генома сои, что позволило идентифицировать 167 аллелей, что в среднем составило 3,4 аллеля на маркер. Также было показано, что для паспортизации сортового генофонда, рекомендуются использовать SSR-маркеры с индексом полиморфного информационного содержания изучаемых маркеров -PIC (polymorphic information content) выше 0,5, так из 50 проанализированных маркеров наиболее информативными и надежными оказались 20 SSR-маркеров, на основе которых был разработан генетический паспорт для каждого сорта сои Казахстана (Абугалиева et al., 2013).

Другой способ описывает идентификацию сортов сои на основе SSR маркеров (RU 2388828 C1 от 10.05.2010), по следующему набору микросателлитных локусов - SATT 1, SATT 2, SATT 5, SATT 9, SOYPR 1, SOYGY 2, SAT 1, SAT 36, SOYHSP 176. Данный способ основан на проведении ПЦР-амплификации с последующей визуализацией с помощью электрофореза в агарозном геле. Заявляемый способ позволяет идентифицировать сорта сои, однако, зачастую приведенного набора маркеров бывает недостаточно для эффективной дискриминации большого числа близкородственных сортов и индивидуальных генотипов, кроме того, способ трудоемкий и требует большого количества времени, так как предполагает поочередное выполнение ПЦР с каждой парой праймеров при определенных температурах отжига с последующим разделением методом гель-электрофореза.

Методики, используемые в приведенных выше исследованиях, основывались на проведении ПЦР-амплификации с маркерами для каждого локуса отдельно, с последующей визуализацией с помощью гель-электрофореза, что весьма долго и трудоемко при анализе больших коллекций образцов.

Примеры использования мультиплексной ПЦР и фрагментного анализа можно встретить в основном в исследованиях, связанных с человеком (Ruitberg et al., 2001; Xiong et al., 2022) или животными (Dang et al., 2020; Shang et al., 2021, 2024). Ближайший пример использования мультиплексной ПЦР с последующей визуализацией на фрагментном анализе представлен для идентификации сортов растения вида Cannabis sativa (Xia et al., 2022), где с помощью мультиплекса из 19 маркеров было протестировано 85 образцов. В настоящее время для сои (Glycine max) подобных мультиплексных систем маркеров не создано.

Задача, решаемая заявляемым изобретением, состоит в повышении уровня идентификации сортов сои за счет увеличения числа используемых микросателлитных локусов, а также увеличение производительности анализа путем применения мультиплексных реакций (амплификация нескольких локусов с меченными флуоресцентными метками праймерами в одной пробирке) и автоматизации скрининга, в том числе за счет использования фрагментного анализа для разделения и определения размеров полученных фрагментов. Предложенный способ позволит ускорить и повысить эффективность идентификации сортов сои с помощью мультиплексной ПЦР, а также за счет использования фрагментного анализа увеличить точность получаемых результатов и упростить анализ для пользователей.

Целью предлагаемого изобретения является обеспечение достоверной паспортизации сортов и биотипов сои на основе применения высокополиморфных микросателлитных локусов, а также использование мультиплексной ПЦР и фрагментного анализа для ускорения и автоматизации процесса получения данных.

Сопоставительный анализ заявляемого технического решения со способом, зарегистрированным ранее, позволяет сделать вывод, что заявляемый способ идентификации сортов сои на основе микросателлитных (SSR) маркеров отличается от известного условиями осуществления идентификации аллельных вариантов SSR-локусов, а именно:

- используемыми веществами - праймерами,

- разработкой мультиплексной системы маркеров (амплификация нескольких локусов с меченными флуоресцентными метками праймерами в одной пробирке),

- визуализацией продуктов амплификации методом капиллярного электрофореза с помощью генетического анализатора.

Все вышеперечисленные пункты подтверждают новизну разработанного способа. Поставленная цель по созданию способа идентификации сортов сои достигается за счет использования набора эффективных и стабильных молекулярных маркеров, позволяющих выявить высокий уровень полиморфизма ДНК и получить воспроизводимые результаты.

Сущность изобретения

Задачей изобретения является разработка способа идентификации сортов сои, пригодного для паспортизации, за счет увеличения числа используемых микросателлитных локусов, а также увеличение производительности анализа и снижение его трудоемкости.

Для выполнения поставленной задачи нами были реализованы следующие этапы разработки:

- дизайн набора меченных флуоресцентными метками олигонуклеотидных праймеров (олигонуклеотидов) на SSR-локусы, наиболее часто используемые для идентификации и паспортизации сортов сои и дополнительные высокополиморфные SSR-локусы,

- оптимизация условий амплификации и реагентов для использования в мультиплексной ПЦР,

- последующая единовременная детекциея результатов 1ТЦР с помощью капиллярного электрофореза.

Нуклеотидные последовательности разработанных праймеров представлены в Таблице 1 и в Перечне последовательностей.

Способ идентификации сортов осуществляют следующим образом и включает следующие этапы:

выделение геномной ДНК, постановка двух мультиплексных ПЦР - амплификации с двумя смесями праймеров отдельно, где смесь праймеров №1 (далее СП1) включает в себя следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 для идентификации локусов Sct001, Sat090, Satt141, Satt681, Sat084, Satt264, Satt440, Sat_177, и смесь праймеров №2 (далее СП2) включает в себя следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 для идентификации локусов Satt245, Sattl81, Soysc514, Satt009, Soyhsp176, Soyprl, Satt431,

совместная визуализация (в одной лунке) методом капиллярного электрофореза продуктов амплификации, полученных при проведении двух раздельных мультиплексных ПЦР, с помощью генетического анализатора Нанофор 05 в присутствии маркера молекулярного веса СД-600,

программный расчет размера фрагмента относительно маркера молекулярного веса (размерного стандарта),

калибровка относительно положительного контрольного образца, представляющего собой ДНК сорта Бинго, использование которого необходимо при каждом анализе, для проверки прохождения ПЦР-амплификации и в качестве аналога аллельной лестницы в фрагментном анализе (Фиг. 1).

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Электрофореграмма продуктов ПЦР по 15 SSR-локусам на примере сорта сои Бинго со стандартом длины СД-600.

Фиг. 2. Электрофореграмма продуктов ПЦР на примере сортов сои Бинго, Чера, Эгида и Сенатор в канале детекции FAM.

Фиг. 3. Электрофореграмма продуктов ПЦР на примере сортов сои Бинго, Чера, Эгида и Сенатор в канале детекции R6G.

Фиг. 4. Электрофореграмма продуктов ПЦР на примере сортов сои Бинго, Чера, Эгида и Сенатор в канале детекции TAMRA.

Фиг. 5. Электрофореграмма продуктов ПЦР на примере сортов сои Бинго, Чера, Эгида и Сенатор в канале детекции ROX.

Фиг. 6. Электрофореграмма продуктов ПЦР на примере сортов сои Бинго, Чера, Эгида и Сенатор в канале детекции Sy630.

Осуществление изобретения (Пример)

Для идентификации сортов сои были использованы растения 40 сортов сои. Пробу отбирали стандартным способом, каждую пробу, состоящую из 30 семян, измельчали в муку с использованием электрического гомогенизатора (Qiagen TissueLyser II, США). Выделение ДНК проводили из навески муки из 30-ти зерен - 100 мг с помощью станции для автоматического выделения нуклеиновых кислот Auto-Pure 96 (Allsheng, Китай) набором «МагноПрайм ГМО» (Интерлабсервис, Россия) согласно протоколу производителя.

Следующий этап заключался в постановке двух мультиплексных ПЦР-амплификаций с разработанными праймерами в составе СП1 и СП2, где смесь праймеров СП1 включает в себя следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 для идентификации локусов Sct001, Sat090, Satt141, Satt681, Sat084, Satt264, Satt440, Sat_177 и смесь праймеров СП2 включает в себя следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 для идентификации локусов Satt245, Satt181, Soysc514, Satt009, Soyhsp176, Soyprl, Satt431.

Мультиплексную ПЦР проводили на приборе "ДНК-амплификатор Т100 Thermal Cycler" (Bio-Rad, США) в 25 мкл стандартной ПЦР-смеси (Mg2+2,5 мМ, dNTP 0,25 мМ) с добавлением дополнительных компонентов, таких как 2 мкл BSA (бычий сывороточный альбумин) 40 мг/мкл и 2,5 мМ Сорбитола, в присутствии 1 мкл ДНК с концентрацией 5-10 нг/мкл.

Циклограмма: первичная денатурация при 95°С в течение 5 мин; затем 32 цикла: денатурация при 95°С - 20 сек, отжиг при 61°С - в течение 30 сек, элонгация при 68°С в течение 40 сек; финальная элонгация 68°С - 10 мин.

Продукты амплификации визуализировали методом капиллярного электрофореза с помощью генетического анализатора Нанофор 05 (Синтол, Россия) в присутствии маркера молекулярного веса СД-600. Капиллярный электрофорез на генетическом анализаторе проводился в соответствии с руководством пользователя, предоставляемым его производителем (Синтол, Россия). Параметры электрофореза зависели от длины капилляров и типа полимера, рекомендуемые параметры инжекции 3000 В, 5 секунд. Перед постановкой капиллярного электрофореза была проведена спектральная калибровка прибора, в соответствии с используемыми в системе красителями, калибратором СК-6 (Синтол, Россия).

Далее проводилась калибровка относительно положительного контрольного образца, представляющего собой ДНК сорта Бинго, использование которого необходимо при каждом анализе, для проверки прохождения ПЦР-амплификации и в качестве аналога аллельной лестницы в фрагментном анализе (Фиг. 1). Данный этап необходим, так как расчет длинны фрагмента от прибора к прибору может незначительно меняться, в связи с используемым полимером или линейкой капилляров.

По каждому локусу определялся размер фрагмента, соответствующий тому или иному аллелю. Локусы были распределены по диапазонам размера и каналам флюоресценции следующим образом:

детекция локусов Sct001, Sat090, Satt141, Satt681 проходила по каналу FAM в диапазонах 143 - 173, 251 - 287, 298 - 328, 382 - 406, соответственно (Фиг. 2),

детекция локусов Sat084, Satt264, Satt440 проходила по каналу R6G в диапазонах 217 - 249, 303 - 343, 414 - 466 соответственно (Фиг. 3),

детекция локусов Soysc514, Satt245, Satt181 проходила по каналу TAMRA в диапазонах 138 - 146, 234 - 261, 308 - 350 соответственно (Фиг. 4),

детекция локусов Sat177, Satt009 проходила по каналу ROX в диапазонах 122 - 156, 344 - 418 соответственно (Фиг. 5),

детекция локусов Soyhsp176, Soyprl, Satt431 проходила по каналу Sy630 в диапазонах 146 - 158, 186 - 198, 440 - 453, соответственно (Фиг. 6).

Анализ и сравнение профилей анализируемых сортов осуществляли с помощью программного обеспечения GeneMarker V3.0.1 (SoftGenetics, США). Данная программа проводит расчет длин фрагментов - аллелей относительно размерного стандарта, поэтому для корректной работы, в программе был создан файл, содержащий информацию о используемом размерном стандарте и длинах входящих в него фрагментов. Также для автоматического определения программой локусов и аллелей была создана панель, включающая детектируемые локусы и прописаны бины - диапазоны, соответствующие аллелям. Для этого была проведена постановка положительного контрольного образца, на размеры которого ориентировались как на стандарт (Фиг. 1). Анализ проводился при стандартных настройках программы с использованием размерного стандарта СД-600 и созданной нами панели.

Список литературы

1. Abe, J. et al. Soybean germplasm pools in Asia revealed by nuclear SSRs / J. Abe, D. Xu, Y. Suzuki, A. Kanazawa, Y. Shimamoto // 2003 - P. 445-453.

2. Amiteye, S. Basic concepts and methodologies of DNA marker systems in plant molecular breeding / S. Amiteye // 2021 - №10.

3. Brown, S.M. et al. Methods of genome analysis in plants / S.M. Brown, A. Szewc-McFadden, S. Kresovich // 1996 - P. 147-158.

4. Dang, W. et al. A novel 13-plex STR typing system for individual identification and parentage testing of donkeys (Equus asinus) / W. Dang, S. Shang, X. Zhang, Y Yu, D. Irwin, Z. Wang, S. Zhang // 2020 - №2 - P. 290-297.

5. Diwan, N. et al. Automated sizing of fluorescent-labeled simple sequence repeat (SSR) markers to assay genetic variation in soybean / N. Diwan, P. Cregan // 1997 -P. 723-733.

6. Guo Juan, G.J. et al. Population structure of the wild soybean (Glycine soja) in China: implications from microsatellite analyses / G.J. Guo Juan, L.Y Liu YiFei, W.Y Wang YunSheng, C.J. Chen JianJun, L.Y. Li YingHui, H.H. Huang Hong Wen, Q.L. Qiu LiJuan, WY Wang Ying // 2012.

7. Ruitberg, С.M. et al. STRBase: a short tandem repeat DNA database for the human identity testing community / CM. Ruitberg, D.J. Reeder, J.M. Butler // 2001 - №1 - P. 320-322.

8. Shang, S. et al. Development of a 19-plex short tandem repeat typing system for individual identification and parentage testing of horses (Equus caballus) / S. Shang, R. Jiang, R. Luo, S. Jia, D. Irwin, Z. Wang, S. Zhang // 2021 - №5 - P. 754-758.

9. Shang, S. et al. Development of a 17-plex STR typing system for the identification of individuals and parentage testing in cattle / S. Shang, Y. Wang, X. Yu, D. Zhang, R. Luo, R. Jiang, G. Zhao, X. Du, J. Zhang, D.M. Irwin, others // 2024 - №1 - P. 1-10.

10. Tantasawat, P. et al. SSR analysis of soybean ('glycine max'(L.) merr.) genetic relationship and variety identification in thailand / P. Tantasawat, J. Trongchuen, T. Prajongjai, S. Jenweerawat, W. Chaowiset // 2011 - №3 - P. 283-290.

11. Varshney, R.K. et al. Genie microsatellite markers in plants: features and applications / R.K. Varshney, A. Graner, M.E. Sorrells // 2005 - №1 - P. 48-55.

12. Xia, R. et al. Development and validation of a novel and fast detection method for cannabis sativa: a 19-plex short tandem repeat typing system / R. Xia, R. Tao, Y. Qu, X. Zhang, H. Yu, C. Yuan, S. Zhang, C. Li // 2022 - P. 837945.

13. Xiong, С. et al. Development and validation of a multiplex typing system with 32 Y-STRs for forensic application / C. Xiong, C. Yang, W. Wu, Y. Zeng, T. Lin, L. Chen, H. Liu, C. Liu, W. Du, M. Wang, others // 2022 - P. 111409.

14. Xu, D. et al. Genetic diversity of wild and cultivated soybeans growing in China revealed by RAPD analysis / D. Xu, J. Gai // 2003 - №6 - P. 503-506.

15. Абугалиева, С. et al. ДНК-фингерпринтинг сортов сои Казахстана с использованием SSR маркеров / С.Абугалиева, Л. Волкова, А. Нурланова, А. Жанпеисова, Е. Туруспеков // 2013 - №3 - Р. 26-34.

16. Рамазанова, С.et al. Оптимизация технологии генотипирования сои на основе анализа полиморфизма SSR-локусов ДНК / С.Рамазанова, А. Коломыцева // 2020 - №1 (181) - Р. 42-48.

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="Приложение МАТ

A29L-7 и ИФА тест-система для выявления ВОО.xml" softwareName="WIPO

Sequence" softwareVersion="2.3.0" productionDate="2024-10-08">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>1234567</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2024-10-08</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>123</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>12345</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2024-10-01</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное бюджетное учреждение

науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии

«Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав

потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»

Роспотребнадзора)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Federalnoe byudzhetnoe uchrezhdenie nauki

&quot;Gosudarstvennyj nauchnyj tsentr virusologii i biotekhnologii

&quot;Vektor&quot; Federalnoj sluzhby po nadzoru v sfere zashchity

prav potrebitelej i blagopoluchiya cheloveka (FBUN GNTS VB

&quot;Vektor&quot; Rospotrebnadzora) (RU)</ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Плазмидная генетическая

конструкция pET28b-MozAg, обеспечивающая экспрессию и секрецию

мозаичного белка MozAg в прокариотической системе, мозаичный белок

MozAg, используемый для иммунизации мыши с целью получения на основе

мышиных спленоцитов гибридомы, продуцирующей моноклональное антитело

A29L-7, моноклональное антитело A29L-7 и тест-система для выявления

антигена вируса оспы обезьян с его использованием</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>6</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>6734</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..6734</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgctatcatgccataccgcgaaaggttttgcgccattcgatggtgtccg

ggatctcgacgctctcccttatgcgactcctgcattaggaagcagcccagtagtaggttgaggccgttga

gcaccgccgccgcaaggaatggtgcatgcaaggagatggcgcccaacagtcccccggccacggggcctgc

caccatacccacgccgaaacaagcgctcatgagcccgaagtggcgagcccgatcttccccatcggtgatg

tcggcgatataggcgccagcaaccgcacctgtggcgccggtgatgccggccacgatgcgtccggcgtaga

ggatcgagatctcgatcccgcgaaattaatacgactcactataggggaattgtgagcggataacaattcc

cctctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatggcgcatcatcaccaccatcatca

tcacggtagcggtgaaaacctctattttcagagcggatccggtagcgcatatattctgcatagcgattac

aaaagcttcgaagatgcaaaagcaaattgtgcagcagaaagcggtccgggtctgagcggtagcacaccgg

aaaccattagcgaaaaaccggaagatattgataatagcaattgtagcagtggtccgggtgcagccaaaaa

tccggaaacaaaacgtgaagcaattgtgaaagcatatggcgacgataatggtcctggtctgccgagcagc

accgcaccggttctgaaaccgcgtcagcagaccaatggtccaggtgaaaccaaaaaggcaattagcgata

cccgtctgaaaaccctggatattcattacaatgaatcaggaccgggtgtgaaagataatgaagtgatgca

agaaaaacgcgacgtggtgattgttaatgatgacccggatcattataaaggtcctggcgcactgtgggat

agcaaatttttcattgaactggaaaacaaaaacgtggaatatgttggccctggtgttcgtcagtatatta

ccgcacaggatcagcctcgttttgatattacctataacattaccgatgcagcacgtcatggtccgggaat

tatgtatgaacagtatttcgtgaacgattatgatcgcgtgccgatttattataatggtaaccgcgtgatc

tataacgatgaaattggtccaggcgaactgctgattagctatgataaagcatgtgcctgcattaagctga

acctgtataaagttgcaattctgccaggtccgggttatatcctgcattcagactataaaagtttcgagga

cgccaaagccaactgcgcagcagaatcaggtccaggcctgccgagttcaaccgctcctgtgctgaaacct

cgccagcaaacaaacggacctggtgcgctgtgggactcaaaattctttattgagcttgagaataaaaacg

tcgagtatgtaggtccaggtctgatcagttatgacaaagcctgcgcatgtattaaactgaatttatacaa

agtggccatcctgcctggtcctggcagcggtagtacccctgaaacaatttcagaaaaacctgaggatatc

gacaattcaaatggaccgggtaagaaagccatttcagatacacgcttaaaaacgctggacatccactata

atggccctggccagtatatcacagcccaggaccaaccgagatttgatatcacgtataatatcacagatgc

cggaccaggggctgcgaaaaatcctgagactaaacgcgaggccatcgttaaagcctatggtgatgataac

ggaccaggtgataacgaggttatgcaagagaagcgtgatgttgttattgtgaacgatgatcctgatcatg

gcccaggtatcatgtatgagcaatactttgtcaatgattatgatagagtcccgatctactacaatggcaa

tcgtgtgatttacaacgatgagatataatgactcgagactgctaacaaagcccgaaaggaagctgagttg

gctgctgccaccgctgagcaataactagcataaccccttggggcctctaaacgggtcttgaggggttttt

tgctgaaaggaggaactatatccggattggcgaatgggacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcg

ggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttct

tcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggtt

ccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgattagggtgatggttcacgtagtgggcca

tcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttcc

aaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggc

ctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttaca

atttcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaa

atatgtatccgctcatgaattaattcttagaaaaactcatcgagcatcaaatgaaactgcaatttattca

tatcaggattatcaataccatatttttgaaaaagccgtttctgtaatgaaggagaaaactcaccgaggca

gttccataggatggcaagatcctggtatcggtctgcgattccgactcgtccaacatcaatacaacctatt

aatttcccctcgtcaaaaataaggttatcaagtgagaaatcaccatgagtgacgactgaatccggtgaga

atggcaaaagtttatgcatttctttccagacttgttcaacaggccagccattacgctcgtcatcaaaatc

actcgcatcaaccaaaccgttattcattcgtgattgcgcctgagcgagacgaaatacgcgatcgctgtta

aaaggacaattacaaacaggaatcgaatgcaaccggcgcaggaacactgccagcgcatcaacaatatttt

cacctgaatcaggatattcttctaatacctggaatgctgttttcccggggatcgcagtggtgagtaacca

tgcatcatcaggagtacggataaaatgcttgatggtcggaagaggcataaattccgtcagccagtttagt

ctgaccatctcatctgtaacatcattggcaacgctacctttgccatgtttcagaaacaactctggcgcat

cgggcttcccatacaatcgatagattgtcgcacctgattgcccgacattatcgcgagcccatttataccc

atataaatcagcatccatgttggaatttaatcgcggcctagagcaagacgtttcccgttgaatatggctc

ataacaccccttgtattactgtttatgtaagcagacagttttattgttcatgaccaaaatcccttaacgt

gagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttc

tgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaaga

gctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtg

tagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgt

taccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccgga

taaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacacc

gaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggt

atccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatct

ttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcgg

agcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcaca

tgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgcctttgagtgagctgataccgc

tcgccgcagccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcctgatgcggtat

tttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatatatggtgcactctcagtacaatctgctctga

tgccgcatagttaagccagtatacactccgctatcgctacgtgactgggtcatggctgcgccccgacacc

cgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgac

cgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgaggcagctgcggtaa

agctcatcagcgtggtcgtgaagcgattcacagatgtctgcctgttcatccgcgtccagctcgttgagtt

tctccagaagcgttaatgtctggcttctgataaagcgggccatgttaagggcggttttttcctgtttggt

cactgatgcctccgtgtaagggggatttctgttcatgggggtaatgataccgatgaaacgagagaggatg

ctcacgatacgggttactgatgatgaacatgcccggttactggaacgttgtgagggtaaacaactggcgg

tatggatgcggcgggaccagagaaaaatcactcagggtcaatgccagcgcttcgttaatacagatgtagg

tgttccacagggtagccagcagcatcctgcgatgcagatccggaacataatggtgcagggcgctgacttc

cgcgtttccagactttacgaaacacggaaaccgaagaccattcatgttgttgctcaggtcgcagacgttt

tgcagcagcagtcgcttcacgttcgctcgcgtatcggtgattcattctgctaaccagtaaggcaaccccg

ccagcctagccgggtcctcaacgacaggagcacgatcatgcgcacccgtggggccgccatgccggcgata

atggcctgcttctcgccgaaacgtttggtggcgggaccagtgacgaaggcttgagcgagggcgtgcaaga

ttccgaataccgcaagcgacaggccgatcatcgtcgcgctccagcgaaagcggtcctcgccgaaaatgac

ccagagcgctgccggcacctgtcctacgagttgcatgataaagaagacagtcataagtgcggcgacgata

gtcatgccccgcgcccaccggaaggagctgactgggttgaaggctctcaagggcatcggtcgagatcccg

gtgcctaatgagtgagctaacttacattaattgcgttgcgctcactgcccgctttccagtcgggaaacct

gtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcggggagaggcggtttgcgtattgggcgccagggt

ggtttttcttttcaccagtgagacgggcaacagctgattgcccttcaccgcctggccctgagagagttgc

agcaagcggtccacgctggtttgccccagcaggcgaaaatcctgtttgatggtggttaacggcgggatat

aacatgagctgtcttcggtatcgtcgtatcccactaccgagatatccgcaccaacgcgcagcccggactc

ggtaatggcgcgcattgcgcccagcgccatctgatcgttggcaaccagcatcgcagtgggaacgatgccc

tcattcagcatttgcatggtttgttgaaaaccggacatggcactccagtcgccttcccgttccgctatcg

gctgaatttgattgcgagtgagatatttatgccagccagccagacgcagacgcgccgagacagaacttaa

tgggcccgctaacagcgcgatttgctggtgacccaatgcgaccagatgctccacgcccagtcgcgtaccg

tcttcatgggagaaaataatactgttgatgggtgtctggtcagagacatcaagaaataacgccggaacat

tagtgcaggcagcttccacagcaatggcatcctggtcatccagcggatagttaatgatcagcccactgac

gcgttgcgcgagaagattgtgcaccgccgctttacaggcttcgacgccgcttcgttctaccatcgacacc

accacgctggcacccagttgatcggcgcgagatttaatcgccgcgacaatttgcgacggcgcgtgcaggg

ccagactggaggtggcaacgccaatcagcaacgactgtttgcccgccagttgttgtgccacgcggttggg

aatgtaattcagctccgccatcgccgcttccactttttcccgcgttttcgcagaaacgtggctggcctgg

ttcaccacgcgggaaacggtctgataagagacaccggcatactctgcgacatcgtataacgttactggtt

tcacattcaccaccctgaattgactctcttccggg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="2">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>514</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..514</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q4">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MAGSGENLYFQSGSGSAYILHSDYKSFEDAKANCAAESGPGLSGSTPET

ISEKPEDIDNSNCSSGPGAAKNPETKREAIVKAYGDDNGPGLPSSTAPVLKPRQQTNGPGETKKAISDTR

LKTLDIHYNESGPGVKDNEVMQEKRDVVIVNDDPDHYKGPGALWDSKFFIELENKNVEYVGPGVRQYITA

QDQPRFDITYNITDAARHGPGIMYEQYFVNDYDRVPIYYNGNRVIYNDEIGPGELLISYDKACACIKLNL

YKVAILPGPGYILHSDYKSFEDAKANCAAESGPGLPSSTAPVLKPRQQTNGPGALWDSKFFIELENKNVE

YVGPGLISYDKACACIKLNLYKVAILPGPGSGSTPETISEKPEDIDNSNGPGKKAISDTRLKTLDIHYNG

PGQYITAQDQPRFDITYNITDAGPGAAKNPETKREAIVKAYGDDNGPGDNEVMQEKRDVVIVNDDPDHGP

GIMYEQYFVNDYDRVPIYYNGNRVIYNDEIENLYFQSHHHHHHHH</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="3">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>6127</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..6127</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q6">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>agcttttccaacctaaatagaacttcatcgttgcgtttacaacactttt

ctatttgttcaaactttgttgttatattagtaatctttttttccaaattagttagccgttgtttgagagt

ttcctcattatcgtctccataggctttaacaattgcttcgcgtttagtctctggatttttagcagccttt

gtagagaaaaattcagttgctggaattgcaagatcgtcatctccggggaaaagagttccgtcggatccga

tatcagccatggccttgtcgtcgtcgtcggtacccagatctgggctgtccatgtgctggcgttcgaattt

agcagcagcggtttctttcataccagaaccgcgtggcaccagaccagaagaatgatgatgatgatggtgc

atatggccagaaccagaaccggccaggttagcgtcgaggaactctttcaactgacctttagacagtgcac

ccactttggttgccgccacttcaccgtttttgaacagcagcagagtcgggataccacggatgccatattt

cggcgcagtgccagggttttgatcgatgttcagttttgcaacggtcagtttgccctgatattcgtcagcg

atttcatccagaatcggggcgatcattttgcacggaccgcaccactctgcccagaaatcgacgaggatcg

ccccgtccgctttgagtacatccgtgtcaaaactgtcgtcagtcaggtgaataattttatcgctcatatg

tatatctccttcttaaagttaaacaaaattatttctagaggggaattgttatccgctcacaattccccta

tagtgagtcgtattaatttcgcgggatcgagatcgatctcgatcctctacgccggacgcatcgtggccgg

catcaccggcgccacaggtgcggttgctggcgcctatatcgccgacatcaccgatggggaagatcgggct

cgccacttcgggctcatgagcgcttgtttcggcgtgggtatggtggcaggccccgtggccgggggactgt

tgggcgccatctccttgcatgcaccattccttgcggcggcggtgctcaacggcctcaacctactactggg

ctgcttcctaatgcaggagtcgcataagggagagcgtcgagatcccggacaccatcgaatggcgcaaaac

ctttcgcggtatggcatgatagcgcccggaagagagtcaattcagggtggtgaatgtgaaaccagtaacg

ttatacgatgtcgcagagtatgccggtgtctcttatcagaccgtttcccgcgtggtgaaccaggccagcc

acgtttctgcgaaaacgcgggaaaaagtggaagcggcgatggcggagctgaattacattcccaaccgcgt

ggcacaacaactggcgggcaaacagtcgttgctgattggcgttgccacctccagtctggccctgcacgcg

ccgtcgcaaattgtcgcggcgattaaatctcgcgccgatcaactgggtgccagcgtggtggtgtcgatgg

tagaacgaagcggcgtcgaagcctgtaaagcggcggtgcacaatcttctcgcgcaacgcgtcagtgggct

gatcattaactatccgctggatgaccaggatgccattgctgtggaagctgcctgcactaatgttccggcg

ttatttcttgatgtctctgaccagacacccatcaacagtattattttctcccatgaagacggtacgcgac

tgggcgtggagcatctggtcgcattgggtcaccagcaaatcgcgctgttagcgggcccattaagttctgt

ctcggcgcgtctgcgtctggctggctggcataaatatctcactcgcaatcaaattcagccgatagcggaa

cgggaaggcgactggagtgccatgtccggttttcaacaaaccatgcaaatgctgaatgagggcatcgttc

ccactgcgatgctggttgccaacgatcagatggcgctgggcgcaatgcgcgccattaccgagtccgggct

gcgcgttggtgcggacatctcggtagtgggatacgacgataccgaagacagctcatgttatatcccgccg

ttaaccaccatcaaacaggattttcgcctgctggggcaaaccagcgtggaccgcttgctgcaactctctc

agggccaggcggtgaagggcaatcagctgttgcccgtctcactggtgaaaagaaaaaccaccctggcgcc

caatacgcaaaccgcctctccccgcgcgttggccgattcattaatgcagctggcacgacaggtttcccga

ctggaaagcgggcagtgagcgcaacgcaattaatgtaagttagctcactcattaggcaccgggatctcga

ccgatgcccttgagagccttcaacccagtcagctccttccggtgggcgcggggcatgactatcgtcgccg

cacttatgactgtcttctttatcatgcaactcgtaggacaggtgccggcagcgctctgggtcattttcgg

cgaggaccgctttcgctggagcgcgacgatgatcggcctgtcgcttgcggtattcggaatcttgcacgcc

ctcgctcaagccttcgtcactggtcccgccaccaaacgtttcggcgagaagcaggccattatcgccggca

tggcggccccacgggtgcgcatgatcgtgctcctgtcgttgaggacccggctaggctggcggggttgcct

tactggttagcagaatgaatcaccgatacgcgagcgaacgtgaagcgactgctgctgcaaaacgtctgcg

acctgagcaacaacatgaatggtcttcggtttccgtgtttcgtaaagtctggaaacgcggaagtcagcgc

cctgcaccattatgttccggatctgcatcgcaggatgctgctggctaccctgtggaacacctacatctgt

attaacgaagcgctggcattgaccctgagtgatttttctctggtcccgccgcatccataccgccagttgt

ttaccctcacaacgttccagtaaccgggcatgttcatcatcagtaacccgtatcgtgagcatcctctctc

gtttcatcggtatcattacccccatgaacagaaatcccccttacacggaggcatcagtgaccaaacagga

aaaaaccgcccttaacatggcccgctttatcagaagccagacattaacgcttctggagaaactcaacgag

ctggacgcggatgaacaggcagacatctgtgaatcgcttcacgaccacgctgatgagctttaccgcagct

gcctcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccggagacggtcacagcttg

tctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtcagcgggtgttggcgggtgtcggggc

gcagccatgacccagtcacgtagcgatagcggagtgtatactggcttaactatgcggcatcagagcagat

tgtactgagagtgcaccatatatgcggtgtgaaataccgcacagatgcgtaaggagaaaataccgcatca

ggcgctcttccgcttcctcgctcactgactcgctgcgctcggtcgttcggctgcggcgagcggtatcagc

tcactcaaaggcggtaatacggttatccacagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaa

ggccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctg

acgagcatcacaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccaggc

gtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcc

tttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcatagctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcg

ttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaacta

tcgtcttgagtccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagc

agagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaagga

cagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaaagagttggtagctcttgatccgg

caaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaagga

tctcaagaagatcctttgatcttttctacggggtctgacgctcagtggaacgaaaactcacgttaaggga

ttttggtcatgagattatcaaaaaggatcttcacctagatccttttaaattaaaaatgaagttttaaatc

aatctaaagtatatatgagtaaacttggtctgacagttaccaatgcttaatcagtgaggcacctatctca

gcgatctgtctatttcgttcatccatagttgcctgactccccgtcgtgtagataactacgatacgggagg

gcttaccatctggccccagtgctgcaatgataccgcgagacccacgctcaccggctccagatttatcagc

aataaaccagccagccggaagggccgagcgcagaagtggtcctgcaactttatccgcctccatccagtct

attaattgttgccgggaagctagagtaagtagttcgccagttaatagtttgcgcaacgttgttgccattg

ctgcaggcatcgtggtgtcacgctcgtcgtttggtatggcttcattcagctccggttcccaacgatcaag

gcgagttacatgatcccccatgttgtgcaaaaaagcggttagctccttcggtcctccgatcgttgtcaga

agtaagttggccgcagtgttatcactcatggttatggcagcactgcataattctcttactgtcatgccat

ccgtaagatgcttttctgtgactggtgagtactcaaccaagtcattctgagaatagtgtatgcggcgacc

gagttgctcttgcccggcgtcaatacgggataataccgcgccacatagcagaactttaaaagtgctcatc

attggaaaacgttcttcggggcgaaaactctcaaggatcttaccgctgttgagatccagttcgatgtaac

ccactcgtgcacccaactgatcttcagcatcttttactttcaccagcgtttctgggtgagcaaaaacagg

aaggcaaaatgccgcaaaaaagggaataagggcgacacggaaatgttgaatactcatactcttccttttt

caatattattgaagcatttatcagggttattgtctcatgagcggatacatatttgaatgtatttagaaaa

ataaacaaataggggttccgcgcacatttccccgaaaagtgccacctgaaattgtaaacgttaatatttt

gttaaaattcgcgttaaatttttgttaaatcagctcattttttaaccaataggccgaaatcggcaaaatc

ccttataaatcaaaagaatagaccgagatagggttgagtgttgttccagtttggaacaagagtccactat

taaagaacgtggactccaacgtcaaagggcgaaaaaccgtctatcagggcgatggcccactacgtgaacc

atcaccctaatcaagttttttggggtcgaggtgccgtaaagcactaaatcggaaccctaaagggagcccc

cgatttagagcttgacggggaaagccggcgaacgtggcgagaaaggaagggaagaaagcgaaaggagcgg

gcgctagggcgctggcaagtgtagcggtcacgctgcgcgtaaccaccacacccgccgcgcttaatgcgcc

gctacagggcgcgtcccattcgccaatccggatatagttcctcctttcagcaaaaaacccctcaagaccc

gtttagaggccccaaggggttatgctagttattgctcagcggtggcagcagccaactcagcttcctttcg

ggctttgttagcagccggatctcagtggtggtggtggtggtgctcgagtgcggccgca</INSDSeq_se

quence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="4">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>260</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..260</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q8">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADE

YQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLAGSGSGHMHHH

HHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSDGTLFPGDDDLAIPATEFFSTKAA

KNPETKREAIVKAYGDDNEETLKQRLTNLEKKITNITTKFEQIEKCCKRNDEVLFRLEKLAAALEHHHHH

H</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="5">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>106</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..106</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q10">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>QFTASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYR

ASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPRAFGGGTKLEIK</INSDSeq_seq

uence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="6">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>204</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..204</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q12">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>VQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTDYGVSWIRQPPGKGLEWLGV

IWGGGSTYYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTCAGCTCTCAAATCCAGACTGAGCATCAGCA

AGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGAMYYCAKPKR

YYGSGVKEPQSPSPQ</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и биохимии. Предложен способ молекулярно-генетической идентификации сортов и линий сои. Способ включает выделение геномной ДНК, постановку двух мультиплексных ПЦР - амплификации с двумя смесями праймеров. Смесь праймеров №1 включает следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 для идентификации локусов Sct001, Sat090, Satt141, Satt681, Sat084, Satt264, Satt440, Sat_177. Смесь праймеров №2 включает следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 для идентификации локусов Satt245, Satt181, Soysc514, Satt009, Soyhsp176, Soyprl, Satt431. Далее проводят визуализацию продуктов амплификации с помощью капиллярного электрофореза и идентификацию сортов и линий сои. Изобретение позволяет эффективно идентифицировать сорта и гибриды сои и может быть использовано в селекции и семеноводстве сои. 6 ил., 1 табл.

Способ молекулярно-генетической идентификации сортов и линий сои, включающий в себя следующие этапы:

выделение геномной ДНК,

постановка двух мультиплексных ПЦР - амплификации с двумя смесями праймеров, где смесь праймеров №1 включает в себя следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 для идентификации локусов Sct001, Sat090, Satt141, Satt681, Sat084, Satt264, Satt440, Sat_177, и смесь праймеров №2 включает в себя следующие пары олигонуклеотидных последовательностей: SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 для идентификации локусов Satt245, Satt181, Soysc514, Satt009, Soyhsp176, Soyprl, Satt431,

визуализация продуктов амплификации с помощью капиллярного электрофореза,

идентификация сортов и линий сои путем получения для каждого образца уникального профиля - набора аллелей в анализируемых локусах, и дальнейшего сравнения полученных профилей исследуемых образцов друг с другом для их последующей дифференциации.