Мишенный пептид и способ его применения для оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований Российский патент 2025 года по МПК C07K7/08 C07K7/00 A61K38/10 G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно диагностике инвазивности злокачественных новообразований. Изобретение основано на применении 70 кДа белка теплового шока (БТШ). Данные белки в малом количестве синтезируются в любых ядерных клетках внутри разнообразных органелл. В некоторых случаях в покоящихся клетках БТШ могут составлять до 2% от всех белков [Craig, E. A., Is hsp70 the cellular thermometer? / E.A. Craig, C.A. Gross // Trends in biochemical sciences. - 1991. - №16. - p. 135-140.]. Характерная черта для БТШ - значительное повышение экспрессии при стрессовом воздействии на клетку. Таким образом, синтез БТШ - это распространенный среди эукариотов неспецифичный ответ клеток на стресс [Евдокимовская, Ю.В., Секреция белков теплового шока опухолевыми клетками человека in vitro / Ю.В. Евдокимовская и др. // Международный научно-исследовательский журнал.- 2013. - 13].

Важная особенность шаперонов БТШ 70 - присутствие на мембране клеток злокачественных новообразований [Shevtsov M, Balogi Z, Khachatryan W, Gao H, Vígh L, Multhoff G. Membrane-Associated Heat Shock Proteins in Oncology: From Basic Research to New Theranostic Targets. Cells. 2020 May 20;9(5):1263. doi: 10.3390/cells9051263. 5]. Мембранная форма шаперонов в виде гомо- и гетеродимеров БТШ в комплексе с факторами обмена нуклеотидов и другими компонентами шаперонного цикла - характерная черта опухолевых клеток [Murphy, M. E., The hsp70 family and cancer. / M. E. Murphy // Carcinogenesis. - 2013. - №34.6. - p. 1181-1188.]. Новообразования отличаются по составу и уровню экспрессии шаперонов, что делает БТШ важным маркером для таргетной диагностики и терапии.

На сегодняшний день известен ряд способов определения инвазивного потенциала злокачественных новообразований.

Из источника [Крахмаль Н.В. и др. Морфологические и молекулярно-генетические проявления опухолевой инвазии при раке молочной железы, под ред. В.М. Перельмутера, М.В. Завьяловой. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2017. - 128 с. - 2017] известно, что в пределах одного злокачественного новообразования клетки могут одновременно двигаться как коллективно, так и индивидуально. При этом переход от коллективной миграции к индивидуальной представляет собой важнейший этап на пути повышения инвазивного и метастатического потенциала злокачественных новообразований. Одиночные опухолевые клетки отделяются от многоклеточных опухолевых структур и приобретают более выраженную способность к инвазии, интравазии и трансмиграции через эндотелий. Следовательно, выявление индивидуально двигающихся клеток в опухоли говорит о повышенном инвазивном потенциале опухоли.

Из источников [Albini A. et al. A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells //Cancer research. - 1987. - Т. 47. - №. 12. - С. 3239-3245.], [Chen H. C. Boyden chamber assay //Cell migration: developmental methods and protocols. - 2005. - С. 15-22.] известен такой метод оценки инвазивного потенциала клеточных культур in vitro, как камера Бойдена. Камеры Бойдена являются наиболее широко применяемым методом анализа инвазивного потенциала и представляют из себя полую пластиковую камеру, закрытую с одного конца пористой мембраной с диаметром пор 8 мкм. Эта камера помещается внутрь большей по объёму камеры, которая может содержать культуральную среду и/или хемоаттрактанты. Клетки помещают внутрь меньшей камеры и позволяют им мигрировать через поры на другую сторону мембраны. Инвазивные клетки (злокачественные и незлокачественные) способны проникать через 8-микронные поры мембраны. Затем мигрировавшие на другую сторону мембраны клетки окрашивают и подсчитывают. Из существующих на рынке решений, использующих эту технологию, можно упомянуть Transwell®, EZCell™ Cell Invasion Assay, Corning® BioCoat™ Matrigel® Invasion Chamber, BD BioCoat™ Matrigel™ invasion Chamber.

Из источника [Китаева К.В., Ризванов А.А., Соловьева В.В. Современные методы доклинического скрининга противоопухолевых препаратов с применением тест-систем на основе клеток. // Ученые записки Казанского университета. Серия Естественные науки. - 2021. - Т. 163. - №.2. - С. 155-176] известен такой метод оценки инвазивного потенциала клеточных культур in vitro, как применение микрофлюидных систем. Они позволяют проводить исследования в малых объемах жидкости, что позволяет снизить влияние внешних факторов на результаты экспериментов. Из существующих на рынке решений, использующих эту технологию, можно упомянуть Millicell® μ-Migration Assay Kit.

Общим недостатком вышеуказанных методов является то, что для их применения необходима специальная посуда, и сложная, дорогостоящая аппаратуры, что затрудняет применение таких методов в клинической практике.

Помимо этого, на точность данных методов влияет то, что образцы биопсии могут содержать и другие типы подвижных клеток, помимо опухолевых. Из источников [Chen P.-Y., Wei W.-F., Wu H.-Z., Fan L.-S., Wang W. Cancer-Associated Fibroblast Heterogeneity: A Factor That Cannot Be Ignored in Immune Microenvironment Remodeling. Front. Immunol. 2021;12:2760. doi: 10.3389/fimmu.2021.671595.] и [Gilson P., Merlin J. L., Harlé A. Deciphering tumour heterogeneity: From tissue to liquid biopsy // Cancers. - 2022. - Т. 14. - №. 6. - С. 1384] известно, что это могут быть опухоль-ассоциированные фибробласты, наличие которых не вносит вклада в инвазивный потенциал злокачественного новообразования.

Поэтому необходим метод, позволяющий дифференцировать подвижные клетки на высокоинвазивные (опухолевые, одиночные, подвижные) и невысокоинвазивные (опухоль-ассоциированных фибробластов).

Задачей, решаемой авторами, являлось создание более точного простого и дешевого способа оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований.

Задача решается за счет применения мишенного пептида, содержащего последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1 TKDNNLLGRFELSGRGD (далее - пептид TKD-RGD).

Краткое описание фигур

На Фиг. 1 представлена интраоперационная визуализациия в эпифлуоресцентном микроскопе участка злокачественного новообразования головного мозга с применением раствора пептида SEQ ID NO: 1 (TKDNNLLGRFELSGRGD), конъюгированного с флуоресцентной меткой.

На Фиг. 2 представлены микрофотографии опухолевых клеток интраоперационного биоптата нейроонкологического пациента, полученные на разных временных точках (А - начало наблюдения, Б - через 24 часа) из одного поля зрения. На рисунке (Б) цветными линиями показаны треки клеточных движений.

На Фиг. 3 Представлены результаты измерений прямизны треков опухолевых клеток интраоперационного биоптата нейроонкологического пациента.

На Фиг. 4 представлена визуализация треков движения клеток T98G, культивируемых на пластике в течение 24 часов после добавления препарата, выполненная с помощью автоматической системы визуализации клеток. Клетки окрашены красителем для выявления ядер (синий цвет). (А) - клетки в начале съёмки; (Б) - клетки после добавления препарата через 24 часа, треки обозначены цветными линиями. Масштабный отрезок = 200 мкм.

На Фиг. 5 представлены результаты измерений прямизны треков клеток глиобластомы линии T98G.

На Фиг. 6 представлена визуализация треков движения клеток M-FetMSC, культивируемых на пластике в течение 24 часов после добавления препарата. Клетки окрашены красителем для выявления ядер (синий цвет).

(А) - клетки в начале съёмки; (Б) - клетки через 24 часа, треки обозначены цветными линиями. Масштабный отрезок = 200 мкм.

На Фиг. 7 представлены результаты измерений прямизны треков мезенхимных стволовых клеток человека линии FetMSC. Представлены средние значения и стандартные отклонения. ns - результат выполнения теста Манна-Уитни: достоверных отличий не обнаружено (U = 420).

Сущность изобретения.

Пептид, содержащий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1 (TKDNNLLGRFELSGRGD), способный избирательно накапливаться в клетках злокачественных новообразований и изменять прямизну треков движений высокоинвазивных опухолевых клеток.

Способ оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований, заключающийся в том, что клетки злокачественного новообразования делят на две группы: первую группу обрабатывают пептидом содержащим последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1 (TKDNNLLGRFELSGRGD), вторую группу обрабатывают физиологическим раствором, после чего регистрируют треки движения клеток двух групп, а затем сравнивают прямизну полученных треков: если прямизна треков движения клеток двух групп различается, то принимают решение о причислении тестируемых клеток к разряду высокоинвазивных.

Способ осуществляется следующим образом. Кусочки удаленного злокачественного новообразования культивируют в инкубаторе в пластиковых планшетах, покрытых, для улучшения адгезии, белками внеклеточного матрикса. Клетки мигрируют и спонтанно формируют сфероиды. Полученные сфероиды делят на контрольную и опытную группы. Обе группы культивируют на способствующих адгезии белковых субстратах.

К опытной группе сфероидов добавляют раствор пептида TKD-RGD в физиологическом растворе, к контрольной группе добавляют равный объём физиологического раствора. Культуральную посуду со сфероидами помещают в программно-аппаратный комплекс для прижизненной визуализации и анализа параметров клеток, после чего каждые 15 минут в течение 24 часов производят микрофотографирование клеток.

Затем регистрируют X и Y координаты треков клеточных движений с помощью анализа изображений покадровой съёмки. По полученным наборам координат вычисляют прямизну треков как отношение евклидова расстояния к длине пути по следующим формулам:

где:

S - прямизна трека,

D - расстояние между начальной и конечной точками трека,

L - длина трека,

tl - первый индекс времени трека,

tf - последний индекс времени трека.

Таким образом, прямизна треков является признаком, измеренным количественно для двух независимых выборок: для контрольной группы клеток (обработанной физиологическим раствором) и опытной группы клеток (обработанной пептидом TKD-RGD).

Затем сравнивают прямизну треков клеток контрольной и опытной групп с помощью U-критерия Манна-Уитни с уровнем значимости 0,05. Из источников [Mann H. B., Whitney D. R. On a test of whether one of two random variables is stochastically larger than the other. // Annals of Mathematical Statistics. - 1947. - № 18. - P. 50-60], [Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико- биологических исследованиях. - Л., 1973], [Крамер Г. Математические методы статистики, 2 изд., пер. с англ., М., 1975.] известен U-критерий Манна-Уитни - статистический критерий, используемый для оценки различий между двумя независимыми выборками по уровню какого-либо признака, измеренного количественно. Критические значения критерия U- Манна-Уитни для уровня значимости 0,05 представлены в источнике [Большев Л. Н., Смирнов Н. В., Таблицы математической статистики, 2 изд., М., 1968]

Если полученное значение U-критерия меньше или равно критическому значению, то признается наличие значимого различия между уровнем признака (прямизна трека) в контрольной и опытной группах, и принимается решение о причислении тестируемых злокачественных новообразований к разряду высокоинвазивных.

Примеры

Пример 1

Из нейрохирургического отделения Российского научно-исследовательского нейрохирургического института им. проф. А.Л. Поленова (г. Санкт-Петербург) в ходе удаления злокачественного новообразования головного мозга получили образец опухолевого интраоперационного биоптата нейроонкологического пациента (Фигура 1). Из детектированного участка вырезали кусочек злокачественного новообразования размером около 0,5 мм³, положили в чашку Петри диметром 3 см и накрыли предметным стеклом. Клетки культивировали при 37 °C (5 % CO₂, влажность 90 %) в присутствии 10 % фетальной бычьей сыворотки в питательной среде DMEM/F12 (Gibco, США), дополненной 1 % GlutaMAX (Gibco, США), 0,5 % 1 М раствором HEPES (Sigma, США), 2 % B27 supplement minus vitamin A (Gibco, США), recombinant human EGF (SCI store, Россия) и bFGF (SCI store, Россия) в рабочей концентрации 20 нг/мл. Из кусочка начали радиально мигрировать клетки, которые самопроизвольно сформировали сфероиды. Для оценки скорости миграции клеток полученные сфероиды высевали на 24-луночные пластиковые планшеты, лунки которых покрывали, для улучшения адгезии, белком внеклеточного матрикса фибриногеном.

Клетки злокачественного новообразования, посеянные на фибриноген, разделили на две группы: первой группе сменили среду на содержащую пептид SEQ ID NO: 1 (TKDNNLLGRFELSGRGD) (10 мкг/мл), второй группе сменили среду на содержащую равный объем физиологического раствора.

С использованием покадровой съемки произвели анализ движения 30 клеток в каждой группе. Для регистрации движения отдельных клеток использовали настольную систему цитометрии Image ExFluorer LCI (Южная Корея), представляющую из себя программно-аппаратный комплекс для прижизненной визуализации и анализа параметров клеток. В эту систему помещали 24-луночные пластиковые планшеты с клетками. Изображения получали с помощью лазера 405 нм и освещения в светлом поле с использованием сухого объектива 20×. Выбирали поле зрения в лунках с клетками контрольной и опытной групп, затем производили микрофотографирование полей зрения каждые 15 минут в течение 24 часов. На полученных изображениях выявили популяцию активно движущихся клеток. Треки движения этих клеток регистрировали как наборы их X-Y координат. Для получения X-Y координат отмечали середину ядра движущейся клетки на каждом изображении. Примеры полученных треков представлены на Фигуре 2.

В процессе анализа треков были получены значения D и L. Рассчитали прямизну треков S (по формуле 3). Результаты представлены в Таблице 1 и на Фигуре 3.

Для выявления различий между контрольной и опытной группами в программе GraphPad Prism версии 9.4.1 вычислили U-критерий Манна-Уитни, который оказался равен 206. Для двух выборок, содержащих по 30 элементов, и уровня значимости 0,05 критическое значение критерия U-Манна-Уитни равно 317. Поскольку 206 меньше чем 317, то было принято решение о причислении тестируемых клеток к разряду высокоинвазивных, а исследуемый образец оценили, как злокачественное новообразование с высоким инвазивным потенциалом.

Пример 2

Клетки линии T98G получили в ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» (Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург). Клетки культивировали при 37 °C (5 % CO₂, влажность 90 %) в ростовой среде, содержащей 90 % среды DMEM/F12 и 10 % фетальной бычьей сыворотки. Микробиологический анализ подтвердил отсутствие бактериального, грибкового или микоплазменного загрязнения культивированной линии. Далее провели операции согласно Примеру 1. Визуализация полученных треков представлена на Фигуре 4.

В процессе анализа треков были получены значения D и L. Рассчитали прямизну треков S. Результаты представлены в Таблице 2 и на Фигуре 5. Для выявления различий между контрольной и опытной группами в программе GraphPad Prism версии 9.4.1 вычислили U-критерий Манна-Уитни, который оказался равен 253. Поскольку 253 меньше, чем 317, то было принято решение о причислении тестируемых клеток к разряду высокоинвазивных, а исследуемый образец оценили, как культуру клеток с высоким инвазивным потенциалом.

Пример 3

Клетки линии M-FetMSC получили в ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» (Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург).

Провели операции согласно Примеру 1. Визуализация полученных треков представлена на Фигуре 6.

В процессе анализа треков были получены значения D, L. Рассчитали прямизну треков S. Результаты представлены в Таблице 1 и на Фиг. (2). Для выявления различий между контрольной и опытной группами в программе GraphPad Prism версии 9.4.1 вычислили U-критерий Манна-Уитни, который оказался равен 420. Поскольку 420 больше, чем 317, то было принято решение о не причислении тестируемых клеток к разряду высокоинвазивных, а исследуемый образец оценили, как культуру клеток без высокого инвазивного потенциала.

Таким образом, вышеприведённые примеры показывают, что создан точный, простой, и дешевый способ оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований.

Таблица 1. Значения параметров D, L, S опухолевых клеток интраоперационного биоптата нейроонкологического пациента, двигающихся в течение 24 часов.

Контроль Пептид D, мкм L, мкм S D, мкм L, мкм S 47,779731 276,9984 0,172491 116,053007 486,4608 0,238566 59,2425586 339,2928 0,174606 129,694676 603,5904 0,214872 24,9768725 301,7952 0,082761 121,018768 497,952 0,243033 83,6360199 330,8256 0,25281 47,9883023 531,0144 0,090371 4,22568357 247,5648 0,017069 104,655398 403,2 0,259562 19,7843013 400,176 0,049439 85,6824127 493,5168 0,173616 68,5100153 367,92 0,186209 99,0524119 276,9984 0,357592 45,9391976 559,2384 0,082146 96,1059521 482,2272 0,199296 60,6786949 368,928 0,164473 154,849609 626,3712 0,247217 21,4996018 346,3488 0,062075 94,4433077 628,1856 0,150343 133,658105 376,7904 0,354728 241,605288 723,744 0,333827 25,173999 321,9552 0,078191 154,257884 628,1856 0,245561 34,8086606 213,0912 0,163351 360,804151 748,5408 0,48201 17,5290769 283,6512 0,061798 125,055957 427,9968 0,292189 91,6592846 314,8992 0,291075 113,021549 555,6096 0,203419 10,1941489 221,1552 0,046095 68,078252 504,6048 0,134914 24,9929004 353,6064 0,07068 44,7553681 392,5152 0,114022 22,7540017 266,5152 0,085376 100,73761 386,064 0,260935 56,8181376 403,2 0,140918 59,5224254 398,7648 0,149267 27,5005765 300,5856 0,09149 79,8480469 449,7696 0,177531 20,0494659 258,2496 0,077636 77,0317188 690,6816 0,11153 89,3600346 450,576 0,198324 133,538589 550,1664 0,242724 118,05316 357,0336 0,33065 110,074808 488,2752 0,225436 57,4046694 372,5568 0,154083 13,5191345 406,6272 0,033247 47,012468 314,0928 0,149677 155,256091 557,2224 0,278625 7,35351765 214,3008 0,034314 80,6604172 632,6208 0,127502 51,3239681 543,312 0,094465 108,94966 431,424 0,252535 28,284102 277,2 0,102035 33,1497984 373,3632 0,088787 32,5372467 365,5008 0,089021 221,536857 461,664 0,479866 23,4541319 312,0768 0,075155 93,2927956 386,4672 0,241399

Таблица 2. Значения параметров D, L, S клеток линии T98G, двигающихся в течение 24 часов.

Контроль Пептид D, мкм L, мкм S D, мкм L, мкм S 1443,532519 112,0795661 0,077642564 20,61481624 390,7641867 0,052755132 749,8938778 132,5991985 0,176823951 23,2575208 121,1737405 0,191935321 322,2146253 49,55985001 0,153810057 160,4700437 609,3779555 0,263334179 232,7734254 4,479600397 0,019244467 185,5321444 487,608279 0,380494246 585,2827351 123,005618 0,21016444 120,7961069 848,6557083 0,142338178 252,4053979 38,01066981 0,150593728 90,63368101 513,7900286 0,17640218 572,3633676 170,4721922 0,297839103 66,4364996 511,157649 0,129972621 500,2346705 33,58206766 0,067132627 143,4171894 490,9301024 0,292133623 210,8698893 4,479600397 0,021243433 80,27252815 427,8065508 0,187637445 316,8772533 44,79600397 0,141367055 125,3185503 343,8180381 0,364490912 876,3476612 120,0090808 0,136942319 171,1522641 453,2194833 0,377636599 557,60562 118,2327896 0,212036582 128,7308263 274,5186681 0,468932868 253,9909417 17,62988205 0,06941146 19,27327501 259,3708642 0,074307787 286,6739977 35,24078853 0,122929839 7,375864553 56,9140537 0,129596542 384,4499655 81,59488252 0,212237976 400,1715066 1194,053876 0,335136893 394,0107315 42,49197389 0,107844712 116,0822657 706,3147336 0,164349206 446,4748895 63,84194585 0,142991123 48,76618809 218,956879 0,222720512 288,665804 17,64252449 0,061117473 79,41803575 256,2905741 0,309874977 922,2895326 164,7670399 0,178650016 44,92026497 382,2395426 0,117518624 416,6106582 52,10819199 0,125076474 5,972800529 560,0540482 0,010664686 375,8829094 39,85473953 0,106029667 84,75538643 405,1196057 0,209210774 389,800003 64,93961538 0,166597268 74,9729229 358,751123 0,208983103 177,4842317 29,48077778 0,166103645 80,14465688 279,4281161 0,286816724 696,345878 87,83266681 0,126133678 25,41073918 91,22137236 0,278561246 607,7525142 135,1292496 0,22234256 34,98679755 207,0324442 0,168991859 489,5201802 56,17291089 0,114750961 47,42644332 344,7401144 0,137571583 316,1407987 22,74374682 0,071941828 129,9856231 1006,166628 0,129188963 468,1502671 25,51581505 0,054503472 97,24161342 741,880865 0,131074433 605,1121835 37,13237778 0,061364452 68,71641466 624,1455332 0,110096782 548,0375378 86,14095427 0,157180756 208,7331428 704,1773276 0,296421277

Таблица 3. Значения параметров D, L, S клеток линии M-FetMSC, двигающихся в течение 24 часов.

Контроль Пептид D, мкм L, мкм S D, мкм L, мкм S 6,690479704 23,14230503 0,289101699 1,032555857 9,704148926 0,106403546 12,81469235 50,53958745 0,253557518 1,809852748 9,354544288 0,193473107 52,49871528 95,17424353 0,551606331 4,066019126 13,49526605 0,301292254 1,153638912 44,96666192 0,025655427 7,546159726 10,99193052 0,686518143 6,357792866 44,93207407 0,141497872 2,393147543 7,178248965 0,333388763 24,68792949 70,06008524 0,352382236 0,310709053 8,430425866 0,036855677 6,274523828 13,49526605 0,464942581 1,835243965 11,81012098 0,155395865 1,188472575 68,65105479 0,017311789 2,683922636 8,025526323 0,334423255 9,817053231 20,17145656 0,486680434 0,440667378 8,766224204 0,050268778 0,466553129 1,332967369 0,350010915 5,462916647 14,35649793 0,38051875 0,969481375 22,9041654 0,042327732 4,821079759 8,108123967 0,594598674 7,353381111 18,94502588 0,388143102 1,445721985 7,361552908 0,196388181 40,77158682 116,535639 0,349863674 13,06781856 18,00739754 0,725691679 4,075903875 16,55511128 0,246202143 1,198267887 5,37336325 0,223001467 1,382566827 9,704148926 0,142471724 2,143246314 8,025526323 0,267053677 19,54474638 149,2589458 0,130945226 3,855185586 11,81012098 0,32643066 6,515929076 49,32225612 0,132109307 2,886451591 4,470908474 0,645607399 45,12243507 58,17146571 0,775679872 0,39448497 10,53803233 0,037434405 33,94084614 97,77113479 0,347145875 4,221192488 20,75751639 0,2033573 1,114217484 21,18118285 0,05260412 1,908380345 7,451514123 0,256106385 13,49192494 15,39857937 0,876179849 1,664545503 7,178248965 0,231887402 57,94649631 92,47806367 0,626597206 2,09234166 7,52636656 0,278001562 22,82777686 25,2912776 0,902594848 1,199570141 4,244806237 0,282597149 1,4696084 7,599083183 0,193392856 0,349026124 5,694439097 0,06129245 22,08831598 46,00188039 0,480161154 0,950902404 7,451514123 0,127611971 21,44069537 73,92863433 0,290018821 4,057976196 4,40617323 0,920975183 1,142043625 3,398413313 0,33605201 1,051607457 6,698078133 0,157001372 18,7461921 38,31556679 0,489257857 1,297459365 2,462169423 0,526957793 8,494292564 42,70179223 0,198921219 0,29169778 1,043777985 0,279463434 0,312855361 4,054061983 0,077170838 29,24998137 68,91912943 0,424410198

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="1-TRACK.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.3.0"

productionDate="2024-03-01">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>2023127706</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-10-27</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>1-TR</ApplicantFileReference>

<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное

бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский

центр имени В.А. Алмазова" Министерства здравоохранения

Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ им. В.А. Алмазова"

Минздрава России)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Federal State Budgetary Institution

"Almazov National Medical Research Centre" of the Ministry

of Health of the Russian Federation</ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Мишенный пептид и способ его

применения для оценки инвазивного потенциала злокачественных

новообразований</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..17</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>ACT_SITE</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>&lt;1..&gt;17</INSDFeature_location>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>TKDNNLLGRFELSGRGD</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Группа изобретений относится к пептиду, содержащему последовательность аминокислот TKDNNLLGRFELSGRGD, способному избирательно накапливаться в клетках злокачественных новообразований и изменять прямизну треков движений высокоинвазивных опухолевых клеток, и также относится к способу оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований, отличающемуся тем, что клетки злокачественного новообразования делят на две группы: первую группу обрабатывают пептидом, содержащим последовательность аминокислот TKDNNLLGRFELSGRGD, вторую группу обрабатывают физиологическим раствором, после чего обе группы помещают в программно-аппаратный комплекс для прижизненной визуализации и анализа параметров клеток, после чего каждые 15 минут в течение 24 часов производят микрофотографирование клеток, затем регистрируют X и Y координаты треков движения клеток двух групп с помощью анализа изображений покадровой съёмки, и по полученным наборам координат вычисляют прямизну треков движения клеток как отношение евклидова расстояния к длине пути по следующим формулам:

где: S - прямизна трека, D - расстояние между начальной и конечной точками трека, L - длина трека, tl - первый индекс времени трека, tf - последний индекс времени трека, а затем сравнивают прямизну полученных треков: если прямизна треков движения клеток двух групп различается, то принимают решение о причислении тестируемых клеток к разряду высокоинвазивных. Группа изобретений обеспечивает создание более точного простого и дешевого способа оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 3 пр.

1. Пептид, содержащий последовательность аминокислот TKDNNLLGRFELSGRGD, способный избирательно накапливаться в клетках злокачественных новообразований и изменять прямизну треков движений высокоинвазивных опухолевых клеток.

2. Способ оценки инвазивного потенциала злокачественных новообразований, отличающийся тем, что клетки злокачественного новообразования делят на две группы: первую группу обрабатывают пептидом, содержащим последовательность аминокислот TKDNNLLGRFELSGRGD, вторую группу обрабатывают физиологическим раствором, после чего обе группы помещают в программно-аппаратный комплекс для прижизненной визуализации и анализа параметров клеток, после чего каждые 15 минут в течение 24 часов производят микрофотографирование клеток, затем регистрируют X и Y координаты треков движения клеток двух групп с помощью анализа изображений покадровой съёмки, и по полученным наборам координат вычисляют прямизну треков движения клеток как отношение евклидова расстояния к длине пути по следующим формулам:

где:

S - прямизна трека,

D - расстояние между начальной и конечной точками трека,

L - длина трека,

tl - первый индекс времени трека,

tf - последний индекс времени трека,

а затем сравнивают прямизну полученных треков: если прямизна треков движения клеток двух групп различается, то принимают решение о причислении тестируемых клеток к разряду высокоинвазивных.