Альфа-1-антитрипсин (ААТ) в лечении и (или) профилактике неврологических нарушений Российский патент 2025 года по МПК A61K38/55 A61P25/00 

Данное изобретение относится к композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), его варианта, изоформы и (или) фрагмента, или вектора, или генетически модифицированную клетку, содержащим последовательность, кодирующую ААТ, для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы, или его симптома.

Заболевания или нарушения нервной системы представляют собой заболевания или нарушения, которые могут резко повлиять на периферическую и (или) центральную нервную систему (ПНС/ЦНС). В последнее десятилетие нейровоспаление занимает все более и более центральное место в нашем понимании неврологических нарушений. Воспаление само по себе может прямо или косвенно спровоцировать заболевание, но оно, несомненно, вносит свой вклад в патогенез заболевания во всей периферической (ПНС) и центральной нервной системах (ЦНС). Периферические заболевания, такие как синдром Гийена – Барре (СГБ) (Chang et al. 2012), болезнь Шарко – Мари – Тута (Hoyle et al. 2015), нейропатическая боль, фибромиалгия и другие нейропатии (ПН) (Martin-Aguilar, Pascual-Goni, and Querol 2019), а также центральные заболевания, включающие в себя болезнь Паркинсона (БП) и болезнь двигательных нейронов (Marogianni et al. 2020), болезнь Альцгеймера (БА) (Hampel et al. 2020) и другие деменции, рассеянный склероз (РС) (Baecher-Allan, Kaskow, and Weiner 2018; Matthews 2019), боковой амиотрофический склероз (БАС), ишемию и черепно-мозговые травмы, депрессию и расстройства аутистического спектра, – все это связано с механизмами, приводимыми в действие активированной микроглией (Skaper et al. 2018).

Наследственные периферические нейропатии представляют собой весьма разнообразную группу нарушений, наиболее частая форма которых в совокупности известна как болезнь Шарко – Мари – Тута (ШМТ), с частотой распространенностью во всем мире, составляющей 1:2500, и высокой генетической гетерогенностью (вовлечено >100 различных генов) (Bird, T. D., 1993, GeneReviews (R)). В данном широком диапазоне генетических паттернов ШМТ1A является наиболее распространенной формой и составляет 80% ШМТ типа 1. Она характеризуется внутрихромосомной дупликацией гена PMP22 (Stavrou, Sargiannidou et al. 2021). Основным компонентом периферических нейропатий являются повреждения миелиновой оболочки, либо после ее аномального развития (дисмиелинизация) при наследственных формах (ШМТ1A-F и -X), либо напрямую при приобретенных формах (острая/хроническая воспалительная демиелинизирующая полинейропатия; ОВДП/ХВДП, англ. «AIDP/CIDP»).

Миелин вырабатывается шванновскими клетками (ШК) в ПНС и является чрезвычайно важным для правильной передачи электрического импульса по нервам. В сложной перекрестной коммуникации нейрон/глия, необходимой для правильной регуляции миелина (Rao and Pearse 2016), задействовано несколько разнообразных сигнальных путей, которые включают в себя факторы роста, интегрины и молекулы клеточной адгезии, но, что более важно, ключевой нейрегулин 1 типа III (NRG1-III) передает сигналы через рецепторы ERBB2/3 (Taveggia, C., et al., 2005, Neuron 47(5): 681-694.) и их модулятор протеолитической шеддазы – фермент, конвертирующий фактор некроза опухоли-α, TACE (также известный как ADAM17) (Fleck, D. et al., 2016, J Biol Chem 291(1): 318-333). Несмотря на то, что в настоящее время изучаются разнообразные и ультрасовременные терапевтические стратегии (редактирование CRISPR/Cas9, доставка генов на основе вирусов, наночастицы миРНК), ни одна из них не прошла успешно фазу III клинических испытаний, и ШМТ остается без актуального лечения (Fridman, V. and M. A. Saporta, 2021, Neurotherapeutics 18(4): 2236-2268.). Более того, очень немногие из этих стратегий нацелены на путь NRG1/EBRB2/3/TACE, даже несмотря на то, что было показано, что ингибирование TACE способствует миелинизации. TACE/ADAM17 представляет собой трансмембранный белок, который включает в себя внеклеточный цинк-зависимый протеазный домен. В контексте ШМТ1A, ADAM17 известен своим ингибирующим действием на ШК-опосредованную миелинизацию путем расщепления NRG1-III в домене эпидермального фактора роста независимым от лиганда образом (La Marca, R., 2011, Nat Neurosci 14(7): 857-865.). В литературе сообщалось о противоречивых данных относительно роли протеазы альфа-1-антитрипсина (AAT) человека; в частности, в 2013 году было показано, что AAT не взаимодействует с TACE (van't Wout E. F. et al., 2014, Hum Mol Genet.; 23 (4): 929-4), в отличие от более ранней публикации 2010 года, в которой утверждалось, что ААТ действительно взаимодействует с TACE и ингибирует его активность дозозависимым образом (Bergin, D. A. et al., 2010, J Clin Invest 120(12): 4236-4250.).

Разнообразные расстройства, вызванные неврологическими нарушениями, все чаще рассматриваются как проблема общественного здравоохранения во всем мире, и ожидается, что в ближайшие десятилетия их бремя возрастет.

Заболевания или нарушения нервной системы могут вызываться вирусами. Вирусы, такие как, например, коронавирусы, вызывают заболевания, включительно с заболеваниями или нарушениями нервной системы, у животных и людей по всему миру. Коронавирусы являются РНК-вирусами.

Известно, что коронавирусы человека (HCoV) в основном вызывают инфекции верхних и нижних дыхательных путей. Примерами коронавирусов человека являются: бета-коронавирус, вызывающий ближневосточный респираторный синдром (называемый MERS-CoV), бета-коронавирус, вызывающий тяжелый острый респираторный синдром (называемый SARS-CoV, или SARS-CoV-1), новый коронавирус, вызывающий коронавирусную болезнь 2019 года, или COVID-19 (называемый SARS-CoV-2), альфа-коронавирус 299E, альфа-коронавирус NL63, бета-коронавирус OC43 и бета-коронавирус HKU1.

Заболевание или синдром, вызванные инфекцией SARS-CoV-2, также называются COVID-19. Инфекция SARS-CoV-2 может протекать либо бессимптомно, либо приводить к заболеванию или синдрому, связанному с легкими или тяжелыми симптомами. Наиболее распространенными симптомами заболевания или синдрома, связанных с инфекцией SARS-CoV-2 (также называемой SARS-CoV-19), являются лихорадка и кашель, усталость, затрудненное дыхание, озноб, боль в суставах или мышцах, отхаркивание, выделение мокроты, одышка, миалгия, артралгия или боль в горле, головная боль, тошнота, рвота, диарея, боль в пазухах носа, заложенность носа, снижение или изменение обоняния или вкуса. Другие симптомы включают в себя отсутствие аппетита, потерю веса, боль в желудке, конъюнктивит, кожную сыпь, лимфому, апатию и сонливость.

У пациентов с тяжелыми симптомами может развиться пневмония. Значительное число пациентов с пневмонией нуждаются в пассивной кислородной терапии. Неинвазивная вентиляция легких и высокопроизводительная назальная оксигенотерапия могут применяться при легких и умеренных пневмониях без гиперкапнии. При тяжелом остром респираторном синдроме или остром респираторном дистресс-синдроме (ТОРС/ОРДС, англ. «SARS/ARDS») и у пациентов с искусственной вентиляцией легких необходимо применять стратегию вентиляции легких с сохранением функции легких.

Хотя основным осложнением коронавирусной болезни 2019 года (COVID-19) является дыхательная недостаточность, сообщалось о значительном числе пациентов с неврологическими симптомами, поражающими как периферическую, так и центральную нервную системы (Niazkar, Zibaee et al. 2020 Neurol Sci 41 (7): 1667-1671; Nordvig, Fong et al. 2021, Neurol Clin Pract 11 (2): e135-e146). Гематогенный путь, ретро-/антероградный транспорт по периферическим нервам, а также редкая прямая инвазия рассматриваются в качестве потенциальных механизмов нейроинвазии нейротропного вируса, включительно с SARS-CoV-2 (Barrantes 2021 Brain Behav Immun Health 14: 100251; Tavcar, Potokar et al. 2021, Front Cell Neurosci 15: 662578). В тяжелых случаях SARS-CoV-2 часто проявляются непропорциональные и аномальные воспалительные реакции, включающие в себя системное повышение уровней цитокинов, хемокинов и провоспалительных сигналов (Najjar et al. 2020, J Neuroinflammation 17 (1): 231). Такое системное гипервоспаление может нарушить функцию нейрососудистого эндотелия, повредить гематоэнцефалический барьер, в конечном счете активируя иммунную систему ЦНС и способствуя развитию осложнений со стороны ЦНС (Amruta, Chastain et al., 2021, Cytokine Growth Factor Rev 58: 1-15).

Несмотря на то внимание, которое недавно привлекла пандемия COVID-19, несколько других вирусов связаны с серьезными заболеваниями головного мозга, такими как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и рассеянный склероз. Заболевания или синдромы, связанные с вирусными инфекциями, также включают в себя широкий спектр заболеваний или синдромов, таких как воспалительные заболевания, и являются серьезным бременем для общества.

Общей биологической чертой многих нейродегенеративных заболеваний ЦНС и ПНС является устойчивая и острая воспалительная реакция, обусловленная высвобождением цитокинов, организованным в петли прямой связи (которую также называют «цитокиновый шторм»). Поэтому подавление воспалительной реакции является главной целью терапевтических стратегий. Однако тонкости воспалительных механизмов, лежащих в основе его многочисленных медиаторов, до конца не изучены.

Следовательно, существует потребность в улучшенных видах терапии заболеваний или нарушений нервной системы.

Вышеуказанная техническая проблема решается вариантами осуществления данного изобретения, представленными в данном документе, и как указано в формуле изобретения.

Соответственно, данное изобретение относится, среди прочего, к нижеследующим вариантам осуществления.

1. Композиция для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), его варианта, изоформы и (или) фрагмента.

2. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ААТ, для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы.

3. Генетически модифицированная клетка, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ААТ, для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы.

4. Композиция для применения согласно варианту осуществления 1, вектор для применения согласно варианту осуществления 2 или генетически модифицированная клетка для применения согласно варианту осуществления 3, отличающиеся тем, что указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой воспалительное заболевание или нарушение нервной системы.

5. Композиция для применения согласно варианту осуществления 4, вектор для применения согласно варианту осуществления 4 или генетически модифицированная клетка для применения согласно варианту осуществления 4, отличающиеся тем, что указанные воспалительные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение нервной системы, опосредованные миелоидными клетками.

6. Композиция для применения согласно любому из вариантов осуществления 1, 4 или 5, вектор для применения согласно любому из вариантов осуществления 2, 4 или 5, или генетически модифицированная клетка для применения согласно любому из вариантов осуществления 3-5, отличающиеся тем, что указанные заболевание или синдром нервной системы представляют собой заболевание или синдром, выбранные из следующей группы: деменция, рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона.

7. Композиция для применения согласно любому из вариантов осуществления 1, 4-6, вектор для применения согласно любому из вариантов осуществления 2, 4-6, или генетически модифицированная клетка для применения согласно любому из вариантов осуществления 3-6, отличающиеся тем, что указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой по меньшей мере один симптом заболевания или нарушения нервной системы, выбранный из группы, состоящей из: тремора, потери памяти, невнятной речи, головокружения, изменения зрения и головной боли.

8. Композиция для применения согласно варианту осуществления 1, вектор для применения согласно варианту осуществления 2 или генетически модифицированная клетка для применения согласно варианту осуществления 3, отличающиеся тем, что указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение периферической нервной системы.

9. Композиция для применения согласно варианту осуществления 8, вектор для применения согласно варианту осуществления 8 или генетически модифицированная клетка для применения согласно варианту осуществления 8, отличающиеся тем, что указанные заболевание или нарушение периферической нервной системы представляют собой моторно-сенсорную нейропатию периферической нервной системы.

10. Композиция для применения согласно варианту осуществления 9, вектор для применения согласно варианту осуществления 9 или генетически модифицированная клетка для применения согласно варианту осуществления 9, отличающиеся тем, что указанная сенсорная нейропатия периферической нервной системы представляет собой наследственную моторно-сенсорную нейропатию периферической нервной системы.

11. Композиция для применения согласно варианту осуществления 10, вектор для применения согласно варианту осуществления 10 или генетически модифицированная клетка для применения согласно варианту осуществления 10, отличающиеся тем, что указанная наследственная моторно-сенсорная нейропатия периферической нервной системы представляет собой болезнь Шарко – Мари – Тута или ее симптом, предпочтительно – по меньшей мере один симптом, выбранный из группы, состоящей из слабости в голенях, лодыжках и (или) ступнях, потери мышечной массы в голенях и (или) ступнях, высоких сводов стоп, скрюченных пальцев, снижения способности бегать, трудности с поднятием ноги в лодыжке, нарушения походки, частых спотыканий или падений и снижения чувствительности или потери чувствительности в голенях и (или) ступнях.

12. Композиция для применения согласно любому из вариантов осуществления 1, 4-11, отличающаяся тем, что указанные белок ААТ, его вариант, изоформа и (или) фрагмент выделены из плазмы крови человека.

13. Композиция для применения согласно любому из вариантов осуществления 1, 4-11, отличающаяся тем, что указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент.

14. Композиция для применения согласно любому из вариантов осуществления 1, 4-13, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит по меньшей мере один фармацевтический носитель.

15. Композиция для применения согласно варианту осуществления 14, отличающаяся тем, что указанный фармацевтический носитель представляет собой усилитель проницаемости гематоэнцефалического барьера.

16. Композиция для применения согласно любому из вариантов осуществления 1, 4-11, вектор для применения согласно любому из вариантов осуществления 2, 4-6, или генетически модифицированная клетка для применения согласно любому из вариантов осуществления 3-7, отличающиеся тем, что указанные композиция, вектор или генетически модифицированная клетка составлены для внутримозгового введения, внутривенной инъекции, внутривенной инфузии, инфузии с помощью помпы-дозатора, ингаляционного назального спрея, глазных капель, кожных пластырей, составов с замедленным высвобождением, генной терапии ex vivo или клеточной терапии ex vivo.

Соответственно, в одном варианте осуществления данное изобретение относится к композиции для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), его варианта, изоформы и (или) фрагмента.

При употреблении в контексте данного документа термин «лечение» (и его грамматические вариации, такие как «лечить» или «процесс лечения») относится к клиническому вмешательству в попытке изменить естественное течение заболевания у индивидуума, проходящего лечение, и может проводиться либо для профилактики, либо во время курса клинической патологии. Желаемые эффекты лечения включают в себя, но не ограничиваются ими, предотвращение возникновения или рецидива заболевания, облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, снижение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение состояния заболевания и ремиссию или улучшенный прогноз. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения антитела согласно данному изобретению применяют для задержки развития заболевания или для замедления прогрессирования заболевания.

При употреблении в контексте данного документа термин «заболевание или нарушение нервной системы» относится к группе заболеваний или нарушений, патология которых затрагивает нервную систему. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения заболевание или нарушение нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой заболевание или нарушение, выбранные из группы, состоящей из следующего: синдром микроделеции 12q14, синдром микроделеции 15q13.3, синдром микроделеции 15q24, синдром делеции 22q11.2, синдром делеции 22q13.3, дефицит 2-метилбутирил-КоА-дегидрогеназы, синдром микроделеции 2q23.1, синдром делеции 2q37, дефицит 3-альфа-гидроксиацил-КоА-дегидрогеназы, синдром 3MC, синдром XXXY, синдром XYYY синдром, синдром XXXXY, синдром микроделеции 5q14.3, дефицит 6-пирувоил-тетрагидроптеринсинтазы, синдром Аарскога, абеталипопротеинемия, амилоидоз ABri, отсутствие прозрачной перегородки, ацерулоплазминемия, акрокаллозальный синдром, акрофациальный дизостоз типа Катании, акрофациальный дизостоз типа Родригеса, острая холинергическая дистония, острый эпизод демиелинизации ЦНС, острый диссеминированный энцефаломиелит, острая перемежающаяся порфирия, синдром острой моторно-сенсорной аксональной нейропатии, дискинезия, связанная с ADCY5, дефицит аденозинмонофосфатдезаминазы 1, дефицит аденилсукциназы, синдром Эйди, адреномиелонейропатия, полиглюкозановая болезнь взрослых, немалиновая миопатия взрослых, синдром фазового опережения сна, агенезия мозолистого тела, возрастная периферическая нейропатия, возрастная периферическая нейропатия, агнозия, синдром Экарди, синдром Экарди – Гутьереса, комплекс деменции при СПИДе, синдром Аль Газали Азиза Салема, аланинурия, синдром глухоты при альбинизме, сенсомоторная недостаточность, вызванная алкоголем или дефицитом питательных веществ, алкогольная нейропатия, алкогольная периферическая нейропатия, болезнь Александера, ALG11-CDG (CDG-Ip), ALG12-CDG (CDG-Ig), ALG13-CDG, ALG1-CDG (CDG-Ik), ALG2-CDG (CDG-Ii), ALG3-CDG (CDG-Id), ALG6-CDG (CDG-Ic), ALG8-CDG (CDG-Ih), ALG9-CDG (CDG-IL), синдром Аллана – Херндона – Дадли, алопеция, эпилепсия, олигофрения, синдром Мойнахана, алопеция, эпилепсия, пиорея, умственная отсталость, синдром алопеции – контрактур – карликовости – умственной отсталости, синдром алопеции – умственной отсталости, синдром Альперса, дефицит альфа-кетоглутаратдегидрогеназы, альфа-маннозидоз, синдром альфа-талассемии и Х-сцепленной умственной отсталости, альтернирующая гемиплегия детского возраста, болезнь Альцгеймера типа 4, болезнь Альцгеймера, болезнь Альцгеймера без нейрофибриллярных клубков, дефицит аминоацилазы 1, порфирия с дефицитом аминолевулинатдегидратазы, смертельная микроцефалия амишей, немалиновая миопатия амишей, амилоидная нейропатия, амиопатический дерматомиозит, боковой амиотрофический склероз, боковой амиотрофический склероз типа 6, комплекс бокового амиотрофического склероза – паркинсонизма/деменции 1, боковой амиотрофический склероз, анапластическая астроцитома, анапластическая ганглиоглиома, анапластическая олигодендроглиома, синдром Андерманна, синдром Андерсена – Тавила, сидеробластная анемия с атаксией, спиноцеребеллярная атаксия, анэнцефалия, наследственная нейрокутанная ангиома, аниридия, аниридийный почечный агенез с психомоторной задержкой, антисинтетазный синдром, аномалия дуги аорты, апраксия, арахноидальные кисты, арахноидит, дефицит декарбоксилазы ароматических L-аминокислот, врожденный множественный артрогрипоз, дистальный, Х-сцепленный, синдром артрогрипоза с нарушением функции почек и холестаза, синдром Артса, аспартилгликозаминурия, атаксия, атаксия-телеангиэктазия, атаксия с глазодвигательной апраксией типа 1, атаксия с глазодвигательной апраксией типа 2, атаксия с глазодвигательной апраксией типа 4, атаксия с дефицитом витамина Е, атаксия-телеангиэктазия, ателостеогенез типа 2, ателостеогенез типа 3, синдром Аткина, атипичный синдром Ретта, аутизм с капиллярной гемангиомой, аутосомно-доминантная центроядерная миопатия, аутосомно-доминантная мозжечковая атаксия/глухота/нарколепсия, аутосомно-доминантная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 2 с гигантскими аксонами, синдром аутосомно-доминантной глухоты – ониходистрофии, аутосомно-доминантная промежуточная болезнь Шарко – Мари – Тута, аутосомно-доминантная лейкодистрофия с вегетативным заболеванием, аутосомно-доминантный нейрональный цероидный липофусциноз 4B, аутосомно-доминантная ночная эпилепсия лобной доли, аутосомно-доминантная несиндромная умственная отсталость, аутосомно-доминантная атрофия зрительного нерва плюс синдром, аутосомно-доминантная парциальная эпилепсия со слуховыми признаками, аутосомно-доминантная спинальная мышечная атрофия, аутосомно-рецессивная аксональная нейропатия с нейромиотонией, аутосомно-рецессивная центроядерная миопатия, аутосомно-рецессивная болезнь Шарко – Мари – Тута с охриплостью голоса, аутосомно-рецессивная промежуточная болезнь Шарко – Мари – Тута типа А, аутосомно-рецессивная промежуточная болезнь Шарко – Мари – Тута типа В, аутосомно-рецессивная ювенильная болезнь Паркинсона, аутосомно-рецессивный нейрональный цероидный липофусциноз 4А, нейрональный цероидный липофусциноз взрослых, аутосомно-рецессивная первичная микроцефалия, аутосомно-рецессивная спастическая атаксия 4, аутосомно-рецессивная спастическая параплегия типа 49, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 9, B4GALT1-CDG (CDG-IId), синдром Баннаяна – Райли – Рувалькаба, синдром Барта, синдром Батталья – Нери, мышечная дистрофия Беккера, поведенческий вариант лобно-височной деменции, болезнь Бехчета, паралич Белла, доброкачественный эссенциальный блефароспазм, доброкачественная семейная неонатальная эпилепсия, доброкачественные семейные неонатально – младенческие судороги, доброкачественная наследственная хорея, доброкачественная роландическая эпилепсия (ДРЭ), нейродегенерация, ассоциированная с бета-пропеллерным белком, миопатия Бетлема, двусторонняя лобная полимикрогирия, двусторонняя лобно-теменная полимикрогирия, двусторонняя генерализованная полимикрогирия, двусторонняя парасагиттальная теменно-затылочная полимикрогирия, двусторонняя перисильвиарная полимикрогирия, болезнь Бинсвангера, дефицит биотинидазы, болезнь базальных ганглиев, реагирующая на биотин – тиамин, синдром Бирка – Барела, синдром Бикслера Кристиана Горлина, синдром блефароназофациальной мальформации, синдром качающейся головы куклы, синдром Боринга – Опица, синдром Боржесона – Форссмана – Лемана, синдром Боуэна – Конради, брахиоскелетогенитальный синдром, синдром брахидактилии – мезомелии – умственной отсталости – пороков сердца, болезнь везикулярного транспорта дофамина и серотонина в головном мозге, синдром головного мозга – легких – щитовидной железы, Х-сцепленный синдром бранхиальной дуги, миопатия Броуди, синдром Брукса – Вишневского – Брауна, синдром Броун – Секара, буллезная дистрофия, синдром С, синдром Кабезаса, CADASIL, камптокормизм, синдром камптодактильной артропатии и перикардита коксавара, синдром CANOMAD, синдром Канту, кап-миопатия, кардиофациокутанный синдром, синдром Кэри – Файнмана – Зитера, синдром Карни, катарактальная атаксия с глухотой, синдром Кейтеля – Манцке, глухота с хвостовидным придатком, синдром каудальной регрессии, болезнь центрального стержня, герминома центральной нервной системы, центральная нейроцитома, центральный болевой синдром, миелинолиз центрального моста, мозжечковая атаксия, дегенерация мозжечка, гипоплазия мозжечка, мозжечково-паренхиматозное расстройство 3, гидроцефалия с агенезией мозжечка, церебральная аутосомно-рецессивная артериопатия, церебральная кавернозная мальформация, церебральная дисгенезия, синдром ладонно-подошвенной кератодермии с нейропатией и ихтиозом, церебральный дефицит фолиевой кислоты, церебральный гигантизм, кисты челюсти, церебральный паралич, атаксический церебральный паралич, атетоидный церебральный паралич, церебральный паралич спастический гемиплегический, церебральный паралич спастический моноплегический, церебральный паралич спастический квадриплегический, церебральный склероз, церебро-фацио-суставной синдром, церебро-окуло-фациоскелетный синдром, цереброокулоназальный синдром, утечка спинномозговой жидкости, церебротендинозный ксантоматоз, цероидный нейрональный липофусциноз 1, цервикальный гипертрихоз с периферической нейропатией, синдром Шанарина – Дорфмана, болезнь Шарко – Мари – Тута, болезнь Шарко – Мари – Тута типа 1А, синдром Чедиака – Хигаши, мальформация Киари, мальформация Киари типа 1, мальформация Киари типа 2, мальформация Киари типа 4, детская речевая апраксия, начинающаяся в детском возрасте немалиновая миопатия, хорея – акантоцитоз, карцинома хориоидного сплетения, папиллома хориоидного сплетения, синдром Кристиансона, синдром делеции хромосомы 17p13.1, синдром делеции хромосомы 17q11.2, синдром делеции хромосомы 19q13.11, синдром делеции хромосомы 1p36, синдром делеции хромосомы 3p, хроническая икота, хроническое лимфоцитарное воспаление, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Чадли – Роздилски, цисплатин-индуцированная сенсорная нейропатия, волчья пасть, аномалии позвоночника с низкорослостью, кластерная головная боль, синдром COACH, нейродегенерация, ассоциированная с белком COASY, болезнь Коутса, синдром Кобба, синдром Коккейна типа I, синдром Коккейна типа II, синдром Коккейна типа III, дефицит коэнзима Q10, синдром Коффина – Лоури, синдром Коффина – Сириса, COG1-CDG (CDG-IIg), COG4-CDG (CDG-IIj), COG5-CDG (CDG-IIi), COG7-CDG (CDG-IIe), COG8-CDG (CDG-IIh), синдром Коэна, синдром вызванного холодом потоотделения, сложный регионарный болевой синдром, синдром врожденной центральной гиповентиляции, врожденный цитомегаловирус, врожденная диспропорция типов волокон, врожденный фиброз глазодвигательных мышц, врожденная генерализованная липодистрофия типа 4, врожденная нечувствительность к боли, врожденная нечувствительность к боли с ангидрозом, врожденный синдром, подобный внутриутробной инфекции, врожденный паралич гортани, врожденный нарушение зеркального движения, врожденная мышечная дистрофия, врожденный миастенический синдром, врожденная краснуха, врожденный токсоплазмоз, синдром непрерывной пиковой волны во время медленного сна, судороги, гипестезия роговицы, синдром Корнелии де Ланге, агенезия мозолистого тела, кортикальная слепота, кортикальная дисгенезия, кортикобазальная дегенерация, синдром Костелло, синдрома Крейна – Хейзе, краниофронтоназальная дисплазия, краниофарингиома, краниорахишизис, краниотелэнцефалическая дисплазия, болезнь Крейтцфельда – Якоба, синдром Кроума, синдром Карри – Джонса, цилиндрическая спиральная миопатия, кипрский лицевой нервно-мышечно-скелетный синдром, инклюзионная цитомегалия, D-2-гидроксиглутаровая ацидурия, киста Денди – Уокера, мальформация, подобная Денди – Уокеру, мальформация Денди – Уокера, болезнь Данона, дапсон-индуцированная нейропатия, DDOST-CDG (CDG-Ir), DEAF1-ассоциированные нарушения, дентато-рубро-паллидо-льюисова атрофия, дерматомиозит, семейная дисфазия развития, диабетическая нейропатия, дефицит дигидролипоамиддегидрогеназы, дефицит дигидроптеридинредуктазы, дифтерия, дистальная миопатия со слабостью голосовых связок, синдром DOOR, дефицит дофамин-бета-гидроксилазы, синдром дефицита транспортера дофамина, ДОФА-чувствительная дистония, DPAGT1-CDG (CDG-Ij), DPM1-CDG (CDG-Ie), DPM2-CDG, DPM3-CDG (CDG-Io), синдром Драве, синдром Дуэйна, синдром Дубовица, мышечная дистрофия Дюшенна, синдром Дайкса – Маркса – Харпера, расстройство, подобное дистонии, синдром нарушения равновесия, врожденный дискератоз, врожденный аутосомно-доминантный дискератоз, врожденный аутосомно-рецессивный дискератоз, врожденный Х-сцепленный дискератоз, миоклоническая диссинергия мозжечка, дистония 2, DYT-PRKRA, DYT-THAP1, DYT-TOR1A, DYT-TUBB4A, ранняя эпилептическая энцефалопатия младенческого возраста, ранняя эпилептическая энцефалопатия младенческого возраста 25, антериорно-полярная катаракта с ранним началом, аутосомно-доминантная болезнь Альцгеймера с ранним началом, синдром умственной отсталости с ранним началом паркинсонизма, восточный энцефалит лошадей, синдром пустого седла, летаргический энцефалит, энцефалокраниокутанный липоматоз, энцефалопатия, эозинофильный фасциит, эозинофильный гранулематоз, эпендимома, простой буллезный эпидермолиз с мышечной дистрофией, ювенильная абсанс-эпилепсия, эпилепсия с затылочными кальцификациями, прогрессирующая миоклоническая эпилепсия типа 3, эпилепсия с миоклонически – атоническими припадками, синдром эпифизарной дисплазии с потерей слуха и дисморфизмом, эпизодическая атаксия, эритромелалгия, эссенциальный тремор, болезнь Фабри, лицевая нейронопатия, плече-лопаточно-лицевая мышечная дистрофия, комплекс Фалло, семейный амилоидоз, семейный двусторонний стриарный некроз, семейная каудальная дисгенезия, семейный врожденный паралич тройничного нерва, семейная дистония, семейная энцефалопатия, семейная экссудативная витреоретинопатия, семейная фокальная эпилепсия, семейная гемиплегическая мигрень, семейный гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз, семейные судороги младенческого возраста, семейный пароксизмальный хореоатетоз младенческого возраста, семейная порэнцефалия, семейный транстиретиновый амилоидоз, семейная или спорадическая гемиплегическая мигрень, болезнь Фарбера, летальная семейная бессонница, летальная энцефаломиопатия младенческого возраста, нейродегенерация, ассоциированная с гидроксилазой жирных кислот, энцефаломиопатический синдром истощения митохондриальной ДНК, ассоциированный с FBXL4, синдром эпилепсии, ассоциированный с лихорадочной инфекцией, синдром Фейгенбаума – Бержерона – Ричардсона, синдром Филиппи, синдром Файна – Любински, миопатия с отпечатками пальцев на теле, синдром Фитцсиммонса – Уолсона – Меллора, синдром Фитцсиммонса – Гилберта, синдром плавучей гавани, синдром Флинна – Эйрда, очаговая кожная гипоплазия, очаговый сегментарный гломерулосклероз, фонтанный синдром Фонтан, синдром FOXG1, синдром хрупкой Х-хромосомы, синдром хрупкой ХЕ-хромосомы, атаксия Фридрейха, фронтометафизарная дисплазия, лобно-височная деменция, лобно-височная лобарная деменция, синдром Фринса, фукозидоз, мышечная дистрофия типа Фукуямы, дефицит фумаразы, галактозиалидоз, синдром Галлоуэя – Моуэта, дефицит трансаминазы гамма-аминомасляной кислоты, ганглиоцитома, синдром GAPO, болезнь Гоше типа 1, болезнь Гоше типа 2, болезнь Гоше типа 3, синдром Джеминьяни, генитопателлярный синдром, синдром Генуи, синдром Герстмана, болезнь Герстмана – Штраусслера – Шейнкера, гигантская аксональная нейропатия, синдром Гиллеспи, глиоматоз головного мозга, синдром дефицита транспортера глюкозы типа 1, врожденный дефицит глутамина, глутаровая ацидемия типа I, глутаровая ацидемия типа II, глутаровая ацидемия типа III, болезнь накопления гликогена типа 13, болезнь накопления гликогена типа 2, болезнь накопления гликогена типа 3, болезнь накопления гликогена типа 4, болезнь накопления гликогена типа 5, болезнь накопления гликогена типа 7, ганглиозидоз GM1 типа 1, ганглиозидоз GM1 типа 2, ганглиозидоз GM1 типа 3, дефицит синтазы GM3, синдром GMS, мегаколон – синдром Голдберга – Шпринцена, синдром Гомеса – Лопеса – Эрнандеса, прогрессирующая миоклонусная атаксия, связанная с GOSR2, синдром Грэма – Кокса, гранулематоз с полиангиитом, синдром Гришелли типа 1, синдром Груббена де Кок Боргграфа, дефицит ГТФ-циклогидролазы I, ДОФА-чувствительная дистония с дефицитом ГТФ-циклогидролазы 1, синдром Гийена – Барре, синдром Гурриери, гиратная атрофия хориоидеи и сетчатки, синдром дефекта волос – светочувствительности – умственной отсталости, синдром Халлермана – Стрейффа, синдром Холла – Риггса, синдром Хаманиши – Уэба – Цудзи, болезнь Хансена, атаксия Хардинга, синдром Арлекина, синдром Харрода – Домана – Кила, болезнь Хартнапа, энцефалопатия Хашимото, гемангиобластома, продолжительная гемикрания, гемимегалэнцефалия, синдром Хеннекама, наследственная ангиопатия, наследственная копропорфирия, наследственная диффузная лейкоэнцефалопатия, наследственная фиброзирующая пойкилодермия с контрактурами сухожилий, миопатией и фиброзом легких, наследственный гениоспазм, наследственная геморрагическая телеангиэктазия, наследственная геморрагическая телеангиэктазия типа 2, наследственная геморрагическая телеангиэктазия типа 3, наследственная геморрагическая телеангиэктазия типа 4, наследственная гиперэкплексия, наследственная моторно-сенсорная нейропатия типа 5, наследственная нейропатия со склонностью к параличам от сдавления нерва, наследственная предрасположенность к параличам от сдавления нерва (очаговым и симметричным), наследственная проксимальная миопатия с ранней дыхательной недостаточностью, наследственная сенсомоторная нейропатия с гиперэластичной кожей, наследственная сенсорно – автономная нейропатия типа 1e, наследственная сенсорно – автономная нейропатия типа 2, наследственная сенсорно – автономная нейропатия типа 7, наследственная сенсорно – автономная нейропатия типа v, наследственная сенсорная нейропатия типа 1, наследственная спастическая параплегия, наследственная сосудистая ретинопатия, синдром Эрнандеса – Агирре – Негрете, энцефалит простого герпеса, опоясывающий лишай, дефицит HIBCH, гомоцистинурия, паралич горизонтального взгляда с прогрессирующим сколиозом, синдром Хойерааля – Хрейдарссона, болезнь HSD10, HTLV-1-ассоциированная миелопатия/тропический спастический парапарез, синдромы HOXA1 человека, индуцированная вирусом иммунодефицита человека нейропатия, болезнь Хантингтона, болезнь Хантингтона, синдром Херлера, синдром Херлера – Шайе, гидранэнцефалия, гидроцефалия (например, из-за врожденного стеноза Сильвиева канала), синдром гидроцефалии – волчьей пасти – суставных контрактур, гидроксикинуренинурия, гипербетааланинемия, синдром гиперкоагуляции из-за дефицита гликозилфосфатидилинозитола, гиперкалиемический периодический паралич, гиперметионинемия, гиперфенилаланинемия, гиперпролинемия, гиперпролинемия типа 2, гипертрофическая нейропатия Дежерина – Соттаса, аутосомно-доминантная гипокальциемия, гипокалиемический периодический паралич, гипомеланоз Ито, гипомиелинизация (например, при атрофии базальных ганглиев и (или) мозжечка), синдром гипопаратиреоза – умственной отсталости – дисморфизма, гипоспадия – умственная отсталость, синдром типа Голдблатта, гамартомы гипоталамуса, ихтиозная алопеция – эклабион – эктропион – умственная отсталость, идиопатическая внутричерепная гипертензия, идиопатическая грыжа спинного мозга, миозит с тельцами включений, синдром недержания пигмента, аксональная нейропатия младенческого возраста, мозжечковая дегенерация сетчатки младенческого возраста, синдром хориоидоцеребральной кальцификации младенческого возраста, миофиброматоз младенческого возраста, нейроаксональная дистрофия младенческого возраста, спиноцеребеллярная атаксия с началом в младенческом возрасте, синдром спазмов и широких больших пальцев младенческого возраста, восходящий наследственный спастический паралич с началом в младенческом возрасте, индуцированная инфекцией острая энцефалопатия 3, интеллектуальный дефицит Буэнос-Айресского типа, атетоз с умственной отсталостью, гипопластическое мозолистое тело – умственная отсталость, синдром умственной отсталости – задержки развития – контрактур, синдром умственной отсталости – дисморфизма – гипогонадизма – сахарного диабета, синдром умственной отсталости – тяжелой задержки речи – легкого дисморфизма, синдром умственной отсталости – спастичности – эктродактилии, промежуточная врожденная немалиновая миопатия, агенезия внутренней сонной артерии, интраневральная периневриома, синдром IRVAN, синдром Айзекса, синдром изодицентрической хромосомы 15, синдром Йохансона – Близзарда, нейроэктодермальный синдром Джонсона, синдром Жубера, синдром Джуберга – Марсиди, ювенильный боковой амиотрофический склероз, ювенильный дерматомиозит, ювенильная болезнь Хантингтона, ювенильный полимиозит, ювенильный первичный боковой склероз, синдром Кабуки, болезнь Канзаки, синдром Капура – Ториелло, окулоцереброфациальный синдром Кауфмана, синдром KBG, KCNQ2 – родственные нарушения, синдром Кернса – Сейра, болезнь Кеннеди, карликовость с фолликулярным кератозом, церебральная атрофия, керниктерус, синдром Кейтеля, синдром Кинга – Денборо, синдром Кляйне – Левина, паралич Клумпке, синдром Коштоланьи, синдром Козловского – Краевской, болезнь Краббе, куру, синдром Кузнецкого – Андермана, L-2-гидроксиглутаровая ацидурия, энцефалит Ла Кросса, синдром Лабанда, болезнь Лафора, дистальная миопатия Лэйнга, миастенический синдром Ламберта – Итона, синдром Ландау – Клеффнера, дефицит l-аргинин:глицинамидинотрансферазы, дистальная миопатия с поздним началом, тип Марксбери – Григгса, синдром латерального менингоцеле, синдром Лоуренса – Муна, дефицит LCHAD, наследственная оптическая нейропатия Лебера, синдром Ли, синдром Леннокса – Гасто, гиперостозная карликовость Ленца – Маевского, синдром микрофтальмии Ленца, синдром Леша – Найхана, лейкодистрофия, лейкоэнцефалопатия (например, с поражением таламуса и ствола головного мозга, с высоким содержанием лактата), синдром Левика – Стефановича – Николича, синдром Льюиса – Самнера, болезнь Лермитта – Дюкло, синдром Ли – Фраумени, конечностно – поясная мышечная дистрофия (например, типа 1A, 1B, 1C, 1D, 1E, 1F, 1G, 1H, 2A, 2B, 2C, 2D, 2E, 2F, 2H, 2I, 2J, 2K, 2L, 2M, 2N, 2O, 2P, 2Q, 2S, 2T), лимбический энцефалит с антителами против LGI1, ограниченный системный склероз кожи, дефицит синтетазы липоевой кислоты, лиссэнцефалия 1, лиссэнцефалия 2, Х-сцепленная лиссэнцефалия, локализованная гипертрофическая нейропатия, синдром «запертого внутри», логопеническая прогрессирующая афазия, окулоцереброренальный синдром Лоу, синдром Лоури – Маклина, синдром Лужана, болезнь Лайма, синдром Мак Дермота – Винтера, синдром макроцефалии – низкого роста – параплегии, макротромбоцитопения с прогрессирующей глухотой, синдром маль-де-дебаркмент, синдром мужского псевдогермафродитизм – умственной отсталости, злокачественная гипертермия, злокачественная гипертермия – артрогрипоз – искривление шеи, злокачественные мигрирующие парциальные судороги младенческого возраста, MAN1B1 – CDG, мандибуло-фациальный дизостоз (например, при микроцефалии), маннозидоз, болезнь Маркиафавы – Биньями, синдром Мардена – Уокера, синдром марфаноидного габитуса – аутосомно-рецессивной умственной отсталости, синдром Маринеско – Шегрена, синдром Мартсольфа, синдром Макдоноу, синдром нейроакантоцитоза Маклеода, синдром Меккеля, синдром дублирования MECP2, синдром Медрано – Ролдана, медуллобластома, мегалэнцефалическая лейкоэнцефалопатия (например, с подкорковыми кистами), синдром мегалэнцефалии – полимикрогирии – полидактилии – гидроцефалии, мегалобластная анемия, синдром мегалокорнеи – умственной отсталости, синдром Мехеса, синдром MEHMO, синдром Мейера – Горлина, синдром Мейге, синдром Мельника – Нидлза, менингиома, менингит, болезнь Менкеса, парестетическая мералгия, синдром метафизарного дизостоза умственной отсталости – кондуктивной глухоты, дефицит метионинаденозилтрансферазы, дефицит метилкобаламина типа cbl g, метилмалоновая ацидемия с гомоцистинурией типа cblc, mgat2-cdg (cdg-iia), микросиндром, микробрахицефалия – птоз – заячья губа, микроцефальная остеодиспластическая первичная карликовость типа 1, микроцефальная остеодиспластическая первичная карликовость типа 2, микроцефальная первичная карликовость (например, монреальский тип, тип Ториелло), микроцефалия, аутосомно-доминантная микроцефалия, микроцефалический дефект головного мозга – спастичность – гипернатриемия, микроцефалия – аномалии сращения шейного отдела позвоночника, синдром микроцефалии – глухоты, микроцефалия – гломерулонефрит, марфаноидный габитус, синдром микроцефалии – микрокорнеи, микроцефалия – кардиомиопатия, синдром микродупликации Xp11.22-p11.23, синдром микрофтальмии 10, синдром микрофтальмии 4, синдром микрофтальмии 8, синдром микрофтальмии с линейными дефектами кожи, микроскопический полиангиит, мигрень (например, с аурой ствола головного мозга), легкая фенилкетонурия, синдром Миллера – Дикера, синдром Миллера – Фишера, мини-ядерная миопатия с наружной офтальмоплегией, дефицит митохондриального комплекса I, дефицит митохондриального комплекса II, синдром истощения митохондриальной ДНК, энцефаломиопатическая форма с метилмалоновой ацидурией, связанный с митохондриальной ДНК синдром Ли, митохондриальная энцефаломиопатия, лактоацидоз и инсультоподобные эпизоды, ассоциированная с белками митохондриальной мембраны нейродегенерация, митохондриальная миопатия и сидеробластная анемия, митохондриальная миопатия при сахарном диабете, митохондриальная миопатия с лактоацидозом, синдром митохондриальной нейрогастроинтестинальной энцефалопатии, дефицит митохондриального трифункционального белка, смешанное заболевание соединительной ткани, миопатия Миоши, синдром Мебиуса, MOGS-CDG (CDG-IIb), синдром Мора – Транебьерга, дефицит кофактора молибдена, дефицит моноаминоксидазы А, синдром Морса – Ронсли – Сарджента, фибриллярная хорея Морвана, синдром Мусы Ад-дина Аль-Нассара, болезнь мойя-мойя, MPDU1-CDG (CDG-If), MPI-CDG (CDG-Ib), MPV17-ассоциированый гепатоцеребральный синдром истощения митохондриальной ДНК, муколипидоз типа 4, мукополисахаридоз типа III, мукополисахаридоз типа IIIA, мукополисахаридоз типа IIIB, мукополисахаридоз типа IIIC, мукополисахаридоз типа IIID, мультифокальная моторная нейропатия, синдром множественных врожденных аномалий – гипотонии – судорог, синдром множественных врожденных аномалий – гипотонии – судорог типа 2, множественная миелома, множественный дефицит сульфатазы, множественная системная атрофия, множественная системная атрофия, синдром мультисистемной дисфункции гладкой мускулатуры, болезнь мышц – глаз – головного мозга, мышечная дистрофия, спонгиоз белого вещества, мышечная дистрофия мегакониального типа, дефицит мышечной фосфорилазокиназы, мышечно-контрактурный синдром Элерса – Данло, миастения гравис, миелит, миелоцеребеллярное нарушение, миеломенингоцеле, MYH7-ассоциированная лопаточноперонеальная миопатия, синдром Майре, миоклоническая эпилепсия с разорванными красными волокнами, миоклонус – мозжечковая атаксия – глухота, миоклонус – дистония, рецидивирующая миоглобинурия, миопатия с экстрапирамидными признаками, миопатия накопления миозина, врожденная миотония, миотоническая дистрофия типа 1, миотоническая дистрофия типа 2, N-синдром, синдром Нэнси – Горан, нарколепсия, NBIA/DYT/PARK-PLA2G6, некротизирующая аутоиммунная миопатия, неонатальная адренолейкодистрофия, неонатальный менингит, неонатальный прогероидный синдром, синдром Ней – Лаксовой, нейробластома, нейрокутанный меланоз, нейрофациодигиторенальный синдром, нейроферритинопатия, нейрофиброматоз типа 1, нейрофиброматоз типа 2, злокачественный нейролептический синдром, нейромиелит зрительного нерва со спектральным нарушением, нейрональный цероидный липофусциноз, нейрональный цероидный липофусциноз 10, нейрональный цероидный липофусциноз 2, нейрональный цероидный липофусциноз 3, нейрональный цероидный липофусциноз 5, нейрональный цероидный липофусциноз 6, нейрональный цероидный липофусциноз 7, нейрональный цероидный липофусциноз 9, болезнь нейронов с внутриядерными включениями, нейропатическая боль, синдром нейропатии – атаксии – пигментного ретинита, наследственная дистальная моторная нейропатия, тип Джераша, наследственная моторно-сенсорная нейропатия, тип Окинавы, наследственная моторно-сенсорная нейропатия, тип Руссе, болезнь накопления нейтральных липидов с миопатией, синдром базально-клеточного невуса, первичный рефрактерный эпилептический статус, синдром Николаидеса – Барайтсера, болезнь Ниманна – Пика типа А, болезнь Ниманна – Пика типа В, болезнь Ниманна – Пика типа С1, болезнь Ниманна – Пика типа С2, не 24-часовое расстройство сна и бодрствования, недистрофическая миотония, синдром Нунана, болезнь Норри, северная эпилепсия, окулоцереброкутанный синдром, окулофациокардиодентальный синдром, окулофарингеальная мышечная дистрофия, окулофарингодистальная миопатия, синдром Окамото, ольфакторная нейробластома, олигоастроцитома, олигодендроглиома, синдром Оливера, оливопонтоцеребеллярная атрофия, летальный синдром омфалоцеле – волчьей пасти, синдром OPHN1, синдром опсоклонус-миоклонус, атрофия зрительного нерва 2, глиома зрительного нерва, дефицит орнитинтранскарбамилазы, орофациодигитальный синдром 1, орофациодигитальный синдром 10, орофациодигитальный синдром 2, орофациодигитальный синдром 3, орофациодигитальный синдром 4, орофациодигитальный синдром 5, орофациодигитальный синдром 6, ортостатическая непереносимость из-за дефицита NET, остеопения и редкие волосы, синдром остеопороза – псевдоглиомы, отопалатодигитальный синдром типа 1, отопалатодигитальный синдром типа 2, синдром Уврие – Билсона, синдром пахигирии – умственной отсталости – эпилепсии, PACS1-ассоциированный синдром, синдром болезненных орбитальных и системных нейрофибром – марфаноидного габитуса, паллидопирамидальный синдром, синдром Паллистера W, мозаичный синдром Паллистера – Киллиана, ассоциированная с пантотенаткиназой нейродегенерация, дрожательный паралич, ювенильный паралич, паралич Ханта, врожденная парамиотония, паранеопластическая/аутоиммунная (анти-ассоциированная) нейропатия, болезнь Паркинсона типа 3, болезнь Паркинсона типа 9, индуцированная физической нагрузкой пароксизмальная дискинезия, пароксизмальное расстройство с сильной болью, пароксизмальная гемикрания, пароксизмальный кинезигенный хореоатетоз, пароксизмальная некинезигенная дискинезия, синдром Парсонажа – Тернера, синдром Партингтона, PCDH19-ассоциированная женская эпилепсия, детские аутоиммунные нейропсихические нарушения, связанные со стрептококковыми инфекциями, синдром PEHO, болезнь Пелизеуса – Мерцбахера, перивентрикулярная гетеротопия, перивентрикулярная лейкомаляция, синдром Перри, синдром Питерс-плюс, синдром Пфайффера – Майера, синдром Пфайффера – Палма – Теллера, кардиокраниальный синдром типа Пфайффера, PGM3 – CDG, синдром PHACE, дефицит фосфоглицераткиназы, дефицит фосфоглицератмутазы, дефицит фосфосеринаминотрансферазы, светочувствительная эпилепсия, синдром Питта – Хопкинса, синдром, подобный Питту – Хопкинсу, плазмацитома, плеоморфная ксантоастроцитома, PMM2-CDG (CDG-Ia), синдром POEMS, полиомиелит, POLR3-ассоциированная лейкодистрофия, узелковый полиартериит, поликистозная липомембранозная остеодисплазия со склерозирующей лейкоэнцефалопатией, синдром полинейропатии – умственной отсталости – акромикрии – преждевременной менопаузы, понтинная тегментальная дисплазия чашечек, понтоцеребеллярная гипоплазия, понтоцеребеллярная гипоплазия типа 1, понтоцеребеллярная гипоплазия типа 2, понтоцеребеллярная гипоплазия типа 3, понтоцеребеллярная гипоплазия типа 4, понтоцеребеллярная гипоплазия типа 5, понтоцеребеллярная гипоплазия типа 6, постполиосиндром, порфирия, атаксия постериорной колонны, атаксия постериорной колонны с пигментным ретинитом, постнатальная прогрессирующая микроцефалия, постнатальные судороги и постнатальная атрофия головного мозга, миотония, усугубляемая калием, синдром Потоцкого – Лупски, синдром PPM – X, габитус Прадера – Вилли, первичный амебный менингоэнцефалит, первичный ангиит центральной нервной системы, первичный базилярный отек, первичный дефицит карнитина, первичная лимфома центральной нервной системы, первичная семейная кальцификация головного мозга, первичный боковой склероз, первичная меланома центральной нервной системы, первичный ортостатический тремор, первичная прогрессирующая афазия, синдром Примроуза, прогрессирующий бульбарный паралич, прогрессирующий энцефаломиелит с ригидностью и миоклонусом, прогрессирующая наружная офтальмоплегия, аутосомно-рецессивная 1, прогрессирующая гемифациальная атрофия, прогрессирующая небеглая афазия, прогрессирующий надъядерный паралич, дефицит пролидазы, синдром Протея, синдром Прауда, псевдоаминоптериновый синдром, дефицит псевдохолинэстеразы, псевдонеонатальная адренолейкодистрофия, синдром псевдопрогерии, синдром псевдотрисомии 13, эластичная псевдоксантома, пудендальная невралгия, истинная вегетативная недостаточность, пиридоксаль-5'-фосфатзависимая эпилепсия, пиридоксинзависимая эпилепсия, дефицит фосфатазы пируватдегидрогеназы, синдром Кази – Маркуизоса, радиационно-индуцированная плексопатия плечевого сплетения, синдром Рамоса – Арройо – Кларка, быстронаступающая дистония – паркинсонизм, энцефалит Расмуссена, синдром Риардона – Уилсона – Кавана, миопатия уменьшающегося тела, болезнь Рефсума, синдром дисплазии почек – дефектов конечностей, синдром Ренье – Габрилса – Джаспера, синдром беспокойных ног, макроаневризма артерий сетчатки с надклапанным легочным стенозом, васкулопатия сетчатки с церебральной лейкодистрофией, синдром Ретта, синдром обратимой церебральной вазоконстрикции, RFT1-CDG (CDG-In), рабдоидная опухоль, точечная ризомелическая хондродисплазия 1 типа, дефицит транспортера рибофлавина, синдром Ричардса – Рандла, синдром Ричьери Коста Да Силва, синдром ригидного позвоночника, кольцевая хромосома 10, кольцевая хромосома 14, кольцевая хромосома 20, болезнь пульсирующих мышц, РНКазо-Т2-дефицитная лейкоэнцефалопатия, синдром Русси – Леви, RRM2B-ассоциированный синдром истощения митохондриальной ДНК, синдром Рувалкабы, болезнь Салла, болезнь Сандхоффа, синдром Сандифера, индуцированная саркоидозом нейропатия, синдром Сэя – Барбера – Миллера, синдром Сэя – Мейера, лопаточно-поясничный синдром, синдром SCARF, синдром Шаафа – Янга, синдром Шайе, иммунокостная дисплазия Шимке, болезнь Шиндлера типа 1, синдром Шинцеля – Гидиона, комплекс схизиса, шизэнцефалия, шванноматоз, синдром Шварца – Джампела, синдром Скотта – Брайанта – Грэма, синдром Сивера – Кэссиди, синдром Секкеля, семантическая деменция, сенсорная атаксическая нейропатия, дефицит сепиаптеринредуктазы, спектр септооптической дисплазии, синдром SeSAME, расстройство SETBP1, тяжелая врожденная немалиновая миопатия, синдром тяжелой умственной отсталости – прогрессирующей спастической диплегии, тяжелая Х-сцепленная умственная отсталость типа Густавсона, синдром Шапиро, дефицит короткоцепочечной ацил-КоА-дегидрогеназы, синдром омфалоцеле Шпринцена, синдром краниосиностоза Шпринцена – Голдберга, сиалидоз типа I, сиалидоз типа II, серповидноклеточная анемия, синдром Симпсона – Голаби – Бехмеля, единственный верхний центральный резец, синдром Шегрена – Ларссона, SLC35A1-CDG (CDG-IIf), SLC35A2-CDG, SLC35C1-CDG (CDG-IIc), врожденный миастенический синдром с замедленным течением, синдром Смита – Файнмана – Майерса, синдром Смита – Лемли – Опица, синдром Смита – Магениса, синдром Снеддона, синдром Снайдера – Робинсона, синдром Сонода, спазматическая дисфония, спастическая атаксия типа Шарлевуа – Сагене, спастическая диплегия, церебральный паралич, спастическая диплегия младенческого типа, спастическая параплегия 1, спастическая параплегия 10, спастическая параплегия 11, спастическая параплегия 12, спастическая параплегия 13, спастическая параплегия 14, спастическая параплегия 15, спастическая параплегия 16, спастическая параплегия 17, спастическая параплегия 18, спастическая параплегия 19, спастическая параплегия 2, спастическая параплегия 23, спастическая параплегия 24, спастическая параплегия 25, спастическая параплегия 26, спастическая параплегия 29, спастическая параплегия 3, спастическая параплегия 31, спастическая параплегия 32, спастическая параплегия 39, спастическая параплегия 4, спастическая параплегия 51, спастическая параплегия 5a, спастическая параплегия 6, спастическая параплегия 7, спастическая параплегия 8, спастическая параплегия 9, спастическая параплегия с кожно-лицевыми повреждениями, синдром спастической параплегии – эпилепсии – умственной отсталости, синдром спастической параплегии – глаукомы –умственной отсталости, синдром спастической тетраплегии – пигментного ретинита – умственной отсталости, синдром спастической тетраплегии – тонкого мозолистого тела – прогрессирующей постнатальной микроцефалии, скрытое расщепление дужки позвонка, синдром спинальной атрофии – пирамидальный офтальмоплегии, спинальная менингиома, спинальная мышечная атрофия типа 1, спинальная мышечная атрофия типа 2, спинальная мышечная атрофия типа 3, синдром спинальной мышечной атрофии – прогрессирующей миоклонической эпилепсии, спинальный шок, спиноцеребеллярная атаксия, спиноцеребеллярная атаксия 1, спиноцеребеллярная атаксия 10, спиноцеребеллярная атаксия 11, спиноцеребеллярная атаксия 12, спиноцеребеллярная атаксия 13, спиноцеребеллярная атаксия 14, спиноцеребеллярная атаксия 15, спиноцеребеллярная атаксия 17, спиноцеребеллярная атаксия 18, спиноцеребеллярная атаксия 19 и 22, спиноцеребеллярная атаксия 2, спиноцеребеллярная атаксия 20, спиноцеребеллярная атаксия 21, спиноцеребеллярная атаксия 23, спиноцеребеллярная атаксия 25, спиноцеребеллярная атаксия 26, спиноцеребеллярная атаксия 27, спиноцеребеллярная атаксия 28, спиноцеребеллярная атаксия 29, спиноцеребеллярная атаксия 3, спиноцеребеллярная атаксия 30, спиноцеребеллярная атаксия 31, спиноцеребеллярная атаксия 34, спиноцеребеллярная атаксия 4, спиноцеребеллярная атаксия 5, спиноцеребеллярная атаксия 7, спиноцеребеллярная атаксия 8, спиноцеребеллярная атаксия 9, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 3, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 4, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 5, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 6, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 7, аутосомно-рецессивная спиноцеребеллярная атаксия 8, спиноцеребеллярная атаксия типа 6, спиноцеребеллярная атаксия с аксональной нейропатией типа 1, спиноцеребеллярная атаксия с дисморфизмом, Х-сцепленная спиноцеребеллярная атаксия типа 2, Х-сцепленная спиноцеребеллярная атаксия типа 3, Х-сцепленная спиноцеребеллярная атаксия типа 4, спиноцеребеллярная дегенерация и дистрофия роговицы, расщепленная кисть – аномалии мочевыводящей системы – расщепление позвоночника, мальформация-расщепление спинного мозга, врожденная спондилоэпифизарная дисплазия, SRD5A3-CDG (CDG-Iq), SSR4-CDG, расстройство STAC3, эпилептический статус, синдром Стейнфельда, синдром ригидного человека, синдром Стокко – дос Сантоса, стриатонигральная дегенерация младенческого возраста, синдром Стердж – Вебера, подострый склерозирующий панэнцефалит, гетеротопия подкорковых полос, субэпендимальная гигантоклеточная астроцитома, субэпендимома, дефицит сукцинатполуальдегиддегидрогеназы, синдром Сусака, симметричные кальцификации таламуса, синдром Х-сцепленной умственной отсталости 7, болезнь Танжера, TANGO2-ассоциированные метаболическая энцефалопатия и аритмии, кисты Тарлова, болезнь Тея – Сакса, синдром камптодактилии Тель – Хашомера, синдром Тельфера – Шугара – Егера, синдром Темпла, синдром Темпла – Барайцера, височная эпилепсия, синдром Темтами, синдром натяжения спинного мозга, синдром торакальной дисплазии – гидроцефалии, синдром верхней апертуры грудной клетки, периодический тиреотоксический паралич, TMEM165-CDG (CDG-IIk), синдром Ториелло – Кэри, синдром Туретта, токсические нейропатии (например, алкогольная нейропатия, индуцированная химиотерапией нейропатия), синдром Транебьерга – Швейгаарда, поперечный миелит, трихинеллез, трихоринофаланговый синдром типа 2, невралгия тройничного нерва, дефицит триозофосфатизомеразы, синдром трех «А», синдром Тройера, комплекс туберозного склероза, тубулярная агрегатная миопатия, опухолеподобный рассеянный склероз, типичная врожденная немалиновая миопатия, дефицит тирозингидроксилазы, тирозинемия типа 1, врожденная мышечная дистрофия Ульриха, болезнь Унверрихта – Лундборга, синдром Ван Бентема – Дриссена – Ханвельда, синдром Ван Ден Боша, вариант болезни Крейтцфельда – Якоба, вариегатная порфирия, индуцированная васкулитом нейропатия, аневризма вены Галена, синдром Вичи, синдром Вилджоена – Каллиса – Вогеса, винкристин-индуцированная нейропатия, синдром снежной ряби, индуцированная витамином В6 нейропатия, дефицит VLCAD, болезнь Фогта – Коянаги – Харада, болезнь Фон Гиппеля – Линдау, синдром Уокера – Варбурга, синдром Уивера, дистальная миопатия Веландера, синдром Вернике – Корсакова, синдром Веста, болезнь Уиппла, синдром гипоплазии белого вещества – агенезии мозолистого тела – умственной отсталости, синдром Видеманна – Олдигса – Оппермана, синдром Уильямса, болезнь Вильсона, синдром Вильсона – Тернера, синдром Вольфа – Хиршхорна, болезнь Вольмана, синдром Вудхауса – Сакати, синдром Уорстер-Драута, синдром морщинистой кожи, синдром Уайберна – Мейсона, пигментная ксеродерма, синдром Ся – Гиббса, ХК-апросэнцефалия, Х-сцепленная церебральная адренолейкодистрофия, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 1, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 1А, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 2, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 3, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 4, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 5, Х-сцепленная болезнь Шарко – Мари – Тута типа 6, Х-сцепленная осложненная агенезия мозолистого тела, Х-сцепленная осложненная спастическая параплегия типа 1, Х-сцепленный дефицит креатина, Х-сцепленная дистония – паркинсонизм / синдром Любага, Х-сцепленная наследственная сенсорно-автономная нейропатия с глухотой, Х-сцепленная умственная отсталость – агенезия мозолистого тела – спастический квадрипарез, Х-сцепленная умственная отсталость – низкий рост – ожирение, Х-сцепленная умственная отсталость, тип Найма, Х-сцепленная умственная отсталость, тип Шимке, Х-сцепленная умственная отсталость, тип Сидериуса, Х-сцепленная умственная отсталость, тип Тернера, синдром Х-сцепленной умственной отсталости – дисморфизма – церебральной атрофии, синдром Х-сцепленной умственной отсталости – плагиоцефалии, Х-сцепленная лиссэнцефалия с аномалиями гениталий, Х-сцепленная миопатия с чрезмерной аутофагией, Х-сцепленная миотубулярная миопатия, Х-сцепленная неспецифическая умственная отсталость, Х-сцепленная перивентрикулярная гетеротопия, синдром Х-сцепленной скелетной дисплазии – умственной отсталости, синдром Зехи – Сейде, синдром Цельвегера и синдром ZTTK. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой психиатрическое нарушение. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение, классифицированные в соответствии с DSM-V (American Psychiatric Association, & American Psychiatric Association, 2013, Diagnostic and statistical manual of mental disorders: DSM-5. Arlington, VA). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение центральной нервной системы. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой воспалительное заболевание или нарушение нервной системы. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения заболевание или нарушение нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой заболевание или нарушение, выбранные из группы, состоящей из деменции, рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, лобно-височной лобарной деменции, атаксии-телеангиэктазии, множественной системной атрофии, прогрессирующего надъядерного паралича, болезни Краббе, агенезии мозолистого тела, связанной с периферической нейропатией, мышечной дистрофии Дюшенна, синдрома Гийена – Барре, болезни Шарко – Мари – Тута типа 1А, наследственной нейропатии со склонностью к параличам от сдавления нерва, диабетической нейропатии, токсических нейропатий, возрастной периферической нейропатии, эпилепсии, нарушений сна, энцефалопатии и нейропатической боли. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой нейродегенеративное заболевание или нарушение. При употреблении в контексте данного документа термин «нейродегенеративное заболевание или нарушение» относится к группе заболеваний или нарушений нервной системы, которые характеризуются повреждением и (или) гибелью нейрональных подтипов. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нейродегенеративное заболевание или нарушение, описанные в данном документе, представляют собой по меньшей мере одно заболевание или нарушение, выбранное из следующей группы: деменция, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, рассеянный склероз, болезнь Хантингтона и прионная болезнь. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой нейропатию, индуцированную токсином и (или) лекарственным средством. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нейропатия, индуцированная лекарственным средством, описанная в данном документе, индуцирована, частично индуцирована или предположительно индуцирована по меньшей мере одним агентом, выбранным из группы, состоящей из химиотерапевтических агентов, ингибиторов ФНО-альфа, антиретровирусных агентов, сердечных медицинских препаратов, статинов и антибиотиков.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нейропатия, индуцированная лекарственным средством, описанная в данном документе, индуцирована, частично индуцирована или предположительно индуцирована по меньшей мере одним агентом, выбранным из группы, состоящей из талидомида, дисульфирама, пиридоксина, колхицина, фенитоина, лития, хлорохина, гидроксихлорохина, цисплатина, оксалиплатина, таксана, алкалоидов барвинка, бортезомиба, сурамина, мизонидазола, эйнфликсимаба, этанерцепта, залцитабина, диданозина, ставудина, амиодарона, пергексилина, метронидазола, дапсона, подофиллина, фторхинолонов, изониазида и нитрофурантоина.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нейропатия, индуцированная токсином, описанная в данном документе, индуцирована, частично индуцирована или предположительно индуцирована по меньшей мере одним агентом, выбранным из группы, состоящей из органических растворителей, тяжелых металлов и фосфорорганических соединений.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нейропатия, индуцированная токсином и (или) лекарственным средством, описанная в данном документе, индуцирована, частично индуцирована или предположительно индуцирована употреблением алкоголя и (или) сигаретного дыма.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нейропатия, индуцированная токсином и (или) лекарственным средством, описанная в данном документе, характеризуется по меньшей мере одним признаком, выбранным из следующей группы: токсичность для дорсального корневого ганглия, нарушения транспортной функции микротрубочек аксонов, нарушения потенциалзависимых каналов, нарушения натриевых каналов и демиелинизация.

«Эффективное количество» агента, например, терапевтического агента, относится к количеству, которое в дозах и в течение необходимых периодов времени, является эффективным для достижения желаемого терапевтического или профилактического результата. Кроме того, эффективное количество может зависеть от индивидуального анамнеза пациента, возраста, веса, семейного анамнеза, генетического состава, стадии аутоиммунного заболевания, связанного с щитовидной железой, видов предшествующего или сопутствующего лечения, если таковое имелось или имеется, и других индивидуальных характеристик субъекта, подлежащего лечению.

В некоторых случаях эффективное количество композиции согласно данному изобретению может представлять собой любое количество, которое уменьшает тяжесть или возникновение симптомов заболевания, нарушения и (или) патологического состояния, подлежащих лечению, не вызывая значительную токсичность для субъекта. В некоторых случаях эффективное количество композиции согласно данному изобретению может представлять собой любое количество, которое уменьшает число пораженных заболеванием клеток (например, иммунокомпетентных клеток с нарушенной регуляцией), аутоантител и (или) других маркеров заболевания (например, цитокинов), не вызывая значительную токсичность для субъекта.

Эффективное количество фармацевтической композиции согласно данному изобретению (и любого дополнительного терапевтического агента) может оставаться постоянным или его можно регулировать в виде скользящей шкалы или переменной дозы в зависимости от реакции субъекта на лечение. В некоторых случаях частота введения может представлять собой любую частоту, которая уменьшает тяжесть или возникновение симптомов заболевания, нарушения и (или) патологического состояния, подлежащих лечению, не вызывая значительную токсичность для субъекта. На фактическое эффективное количество, используемое для конкретного применения, могут влиять различные факторы. Например, частота введения, длительность лечения, применение нескольких лечебных агентов, путь введения и тяжесть заболевания, нарушения и (или) патологического состояния могут потребовать увеличения или уменьшения фактической вводимой эффективной дозы.

Термины «пептид», «белок», «полипептид», «полипептидный (-ая, -ое, -ые)» и «пептидный (-ая, -ое, -ые)» употребляются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения ряда аминокислотных остатков, связанных друг с другом пептидными связями между альфа-амино- и карбоксигруппами соседних остатков.

При употреблении в контексте данного документа термин «белок альфа-1-антитрипсина», или «ААТ», относится к белку с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1, или нуклеотидной последовательности, кодирующей белок с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения ААТ, описанный в данном документе, представляет собой белок, пептид или полипептид. Белок AAT можно получать путем выделения из крови (например, крови человека) или можно получать рекомбинантным путем.

Термин «вариант» относится к белку, пептиду или полипептиду, имеющим аминокислотную последовательность, которая в некоторой степени отличается от последовательности нативного пептида ААТ, то есть аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности нативного пептида ААТ аминокислотными замещениями, при которых одна или большее число аминокислот замещаются другой с такими же характеристиками и конформационными ролями. Предпочтительно, вариант, описанный в данном документе, на по меньшей мере 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% гомологичен аминокислотам SEQ ID NO: 1. Варианты аминокислотной последовательности могут содержать замещения, делеции и (или) вставки в определенных положениях в аминокислотной последовательности нативной аминокислотной последовательности, например, в N- или C-концевой последовательности или внутри аминокислотной последовательности. Замещения могут также быть консервативными, в данном случае консервативные аминокислотные замещения определяются в данном документе как замещения в пределах одной из следующих пяти групп:

I. Малые алифатические, неполярные или слабополярные остатки: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly

II. Полярные, положительно заряженные остатки: His, Arg, Lys

III. Полярные, отрицательно заряженные остатки и их амиды: Asp, Asn, Glu, Gln

IV. Большие ароматические остатки: Phe, Tyr, Trp

V. Большие алифатические, неполярные остатки: Met, Leu, Ile, Val, Cys.

При употреблении в контексте данного документа термин «изоформа» относится к варианту сплайсинга, полученному в результате альтернативного сплайсинга мРНК ААТ. Изоформы ААТ известны в данной области техники (см., например, работу Matsuda, E., Ishizaki, R., Taira, T., Iguchi-Ariga, S. M., & Ariga, H., 2005, Biological & pharmaceutical bulletin, 28 (5), 898-901).

При употреблении в контексте данного документа термин «фрагмент» относится к последовательности, содержащей меньшее число аминокислот по длине, чем белок ААТ и (или) его изоформа, в частности – меньшее число аминокислот, чем последовательность ААТ, представленная в SEQ ID NO:1. Указанный фрагмент предпочтительно представляет собой функциональный фрагмент, например, фрагмент с той же биологической активностью, что и белок ААТ, указанный в SEQ ID NO:1. Указанный функциональный фрагмент предпочтительно получен из белка ААТ, указанного в SEQ ID NO:1. Можно использовать любой фрагмент ААТ, который проявляет те же свойства или по существу те же свойства, т. е. является биологически активным, что и нативная последовательность AAT, из которой он получен. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения фрагмент, описанный в данном документе, обладает такими же или по существу такими же ингибирующими свойствами, что и AAT, в отношении одной или большего числа сериновых протеаз нейтрофилов человека, предпочтительно данный фрагмент имеет константу второго порядка ассоциации фрагмента AAT с ЭН, составляющую по меньшей мере около 6,5 × 10⁷, с PR₃ – по меньшей мере около 8,1 × 10⁶, и (или) с CG – по меньшей мере около 4,1 × 10⁵ М^-1 с^-1, соответственно (касательно способа измерения – см., например, работы Beatty, K., et al., 1980, J. Biol. Chem. 255, 3931-3934.; Rao, N. V., et al., 1991, Structural and functional properties. J. Biol. Chem. 266, 9540-9548.).

Предпочтительно, (функциональный) фрагмент содержит около 5 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 7 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 15 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 20 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 25 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 20 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 30 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 35 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 40 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 45 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 50 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 55 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 60 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 100 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 150 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 200 последовательно расположенных аминокислот, по меньшей мере около 300 последовательно расположенных аминокислот или больше из аминокислотной последовательности нативного ААТ человека, представленной в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения (функциональный) фрагмент, описанный в данном документе, содержит экспрессионно-оптимизированный сигнальный белок.

В некоторых аспектах данного изобретения аминокислотная последовательность ААТ, его варианта, изоформы или фрагмента идентична соответствующей аминокислотной последовательности в SEQ ID NO: 1.

На сегодняшний день альфа-1-антитрипсин (ААТ), естественный ингибитор широкого набора протеаз, успешно применяется для ослабления воспаления в различных типах тканей человека (Bergin, David A., et al., 2021, Archivum immunologiae et therapiae experimentalis 60.2: 81-97).

Авторы данного изобретения обнаружили, что ААТ может сокращать патологические нейрональные пути (фиг. 2-4, таблицы 2-11). Подавление патологических нейрональных путей наблюдалось в покоящихся клетках (фиг. 4B) и стимулированных клетках (фиг. 4C), и, следовательно, полезно для профилактики и (или) лечения заболеваний или нарушений нервной системы и их симптомов.

Модуляция активности TACE вовлечена в регуляцию миелина и является признаком воспаления при приобретенной форме нейропатий.

Авторы данного изобретения обнаружили, что ААТ обладает способностью ингибировать TACE дозозависимым образом, что, не ограничиваясь конкретной теорией, восстанавливает выработку миелина ШК и, следовательно, впоследствии предотвращает, замедляет и (или) обращает вспять прогрессирование заболеваний и (или) нарушений нервной системы.

Волнующе, ААТ дает некоторую надежду касательно заболевания, для которого в настоящее время нет излечивающих способов лечения, доступных для лежащего в основе генетического процесса, и ни одного лечения, которое было бы последовательно признано эффективным для замедления прогрессирования процесса заболевания.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что ААТ полезен при лечении заболеваний или нарушений нервной системы, как описано в данном документе.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к вектору, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ААТ, для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы.

При употреблении в контексте данного документа термин «вектор» относится к вирусному вектору или к молекуле нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), например, к плазмиде или другой несущей среде, которые содержат одну или большее число гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот согласно данному изобретению и, предпочтительно, предназначены для переноса между различными клетками-хозяевами. Термины «вектор экспрессии», «вектор доставки генов» и «вектор генной терапии» относятся к любому вектору, который является эффективным для встраивания и экспрессии одной или большего числа нуклеиновых кислот согласно данному изобретению в клетке, предпочтительно – под регуляцией промотора. Вектор клонирования или экспрессии может содержать дополнительные элементы, например, регуляторные и (или) посттранскрипционные регуляторные элементы в дополнение к промотору.

Термины «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид» употребляются взаимозаменяемо и относятся к любому виду дезоксирибонуклеотидного (например, ДНК, кДНК, ...) или рибонуклеотидного (например, РНК, мРНК, ...) полимера, или комбинации дезоксирибонуклеотидного и рибонуклеотидного (например, ДНК/РНК) полимера, в линейной или кольцевой конформации, а также в одноцепочечной или двухцепочечной форме. Данные термины не следует толковать как ограничивающие в отношении длины полимера, и они могут охватывать известные аналоги природных нуклеотидов, а также нуклеотиды, которые модифицированы в основном, сахарном и (или) фосфатном фрагментах (например, фосфоротиоатные остовы). В общем, аналог конкретного нуклеотида имеет такую же специфичность спаривания оснований; то есть аналог A будет образовывать пару оснований с T.

Применение вектора, как описано в данном документе, может сократить ограничения белков, такие как проникновение через гематоэнцефалический барьер и (или) ферментативная деградация AAT. Как таковой, вектор может быть внедрен в системы доставки, такие как клетки, которые доставляют AAT к нейрональным клеткам, таким как нейрональные клетки головного мозга.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что вектор, как описано в данном документе, является полезным при лечении и (или) профилактике заболеваний или нарушений нервной системы.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к генетически модифицированной клетке, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ААТ, для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или нарушения нервной системы.

При употреблении в контексте данного документа термин «генетически модифицированная клетка» относится к клетке, модифицированной посредством генной инженерии. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанная клетка представляет собой эффекторную иммунокомпетентную клетку. При употреблении в контексте данного документа термин «сконструированный» и другие его грамматические формы могут относиться к одному или большему числу изменений нуклеиновых кислот, таких как нуклеиновые кислоты в геноме организма. Термин «сконструированный (-ая, -ое, -ые)» может относиться к изменению, добавлению и (или) делеции гена. Сконструированные клетки могут также относиться к клеткам, которые содержат добавленные, удаленные и (или) измененные гены.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения генетически модифицированная клетка, описанная в данном документе, включает в себя первичную трансформированную клетку и потомство, полученное от нее, независимо от количества пассажей. Потомство может не быть полностью идентичным по содержанию нуклеиновой кислоты родительской клетке, но может содержать мутации. В данный документ включены мутантные потомки, которые обладают той же функцией или биологической активностью, что и прошедшая скрининг или отобранная первоначальная генетически модифицированная клетка.

В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции, содержащей генетически модифицированную клетку, как описано в данном документе, вместо или в дополнение к белку ААТ, его варианту или изоформе. Поэтому генетически модифицированные клетки, описанные в данном документе, можно применять в клеточной терапии, чтобы доставить ААТ внутрь субъекта или в ткани/орган субъекта.

Применение генетически модифицированной клетки, как описано в данном документе, может сократить ограничения белков, такие как проникновение через гематоэнцефалический барьер и (или) ферментативная деградация AAT. Как таковой, вектор может быть внедрен в системы доставки, такие как клетки, которые доставляют AAT к нейрональным клеткам, таким как нейрональные клетки головного мозга.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что генетически модифицированная клетка, как описано в данном документе, может улучшить профилактику и (или) терапию заболеваний или нарушений нервной системы.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой воспалительное заболевание или нарушение нервной системы.

При употреблении в контексте данного документа термин «воспалительное заболевание или нарушение нервной системы» относится к заболеванию или нарушению нервной системы, которые характеризуются повышенным воспалением. Воспаление характеризуется нарушением регуляции маркеров воспаления и (или) повышенной инфильтрацией, активацией, пролиферацией и (или) дифференцировкой иммунокомпетентных клеток в крови, в ткани, в органе и (или) в определенном типе клеток.

Воспаление при заболевании или нарушении нервной системы может быть вызвано, например, физической травмой, ионизирующим излучением, инфекциями (например, патогенами), иммунными реакциями вследствие гиперчувствительности, онкологическими заболеваниями, химическими раздражителями, медицинскими препаратами, токсинами, алкоголем, питательными веществами (например, избыток питательных веществ), отложением зубного налета, токсичными метаболитами, аутоиммунными заболеваниями, старением, микробами, загрязнением воздуха и (или) (пассивным) курением.

Маркер воспаления – это маркер, который указывает на воспаление у субъекта. Маркеры воспаления включают в себя, но не ограничиваются ими, СРБ, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и прокальцитонин (ПКТ), интерлейкин (например, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, IL-9, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-14, ИЛ-15, ИЛ-16, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-19, ИЛ-20, ИЛ-21, ИЛ-22, ИЛ-23, ИЛ-24, ИЛ-25, ИЛ-26, ИЛ-27, ИЛ-28, ИЛ-29, ИЛ-30, ИЛ-31, ИЛ-33, ИЛ-32, ИЛ-33, ИЛ-35 или ИЛ-36), фактор некроза опухоли (например, ФНО-альфа, ФНО-бета), интерферон (например, интерферон-альфа, интерферон-бета, интерферон-гамма), MIP-I, MCP-I, RANTES, другие хемокины и (или) другие цитокины. Маркер воспаления также можно выявить косвенно, например, путем выявления ингибирующего фактора маркера воспаления (например, связывающего фактора и (или) антагониста). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения маркер воспаления измеряют в клетках, вовлеченных в воспаление, в клетках, пораженных клетками, вовлеченными в воспаление, в ткани и (или) в крови. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения маркер воспаления указывает на инфильтрацию, активацию, пролиферацию и (или) дифференцировку иммунокомпетентных клеток. Выявление маркера воспаления или соотношения двух или большего числа маркеров воспаления обнаружено за пределами нормального диапазона. Специалисту в данной области техники известен нормальный диапазон маркеров воспаления и то, должен ли маркер (соотношение) быть ниже или выше порогового значения, чтобы указывать на воспаление. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения маркер воспаления представляет собой микроглиальный маркер, такой как маркер идентификации, пролиферации, накопления и (или) активации микроглии. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения определяют уровень экспрессии генов, уровень транскрипта РНК, уровень экспрессии белка, уровень активности белка и (или) уровень ферментативной активности по меньшей мере одного маркера воспаления. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный по меньшей мере один маркер воспаления определяют количественно и (или) качественно.

Авторы данного изобретения обнаружили, что ААТ (или вектор / генетически модифицированная клетка, описанные в данном документе) могут подавлять нейрональные воспалительные пути (фиг. 2-4, таблицы 2-11). Подавление воспалительных путей наблюдалось в покоящихся клетках (фиг. 4B) и стимулированных клетках (фиг. 4C), и, следовательно, полезно для профилактики и (или) лечения заболеваний или нарушений нервной системы и их симптомов.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что ААТ (или вектор / генетически модифицированная клетка, описанные в данном документе) полезны при лечении воспалительных заболеваний или нарушений нервной системы, как описано в данном документе.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные воспалительные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение нервной системы, опосредованные миелоидными клетками.

При употреблении в контексте данного документа термин «заболевание или нарушение нервной системы, опосредованные миелоидными клетками» относится к заболеванию или нарушению нервной системы, которые характеризуются повышенным воспалением, опосредованным миелоидными клетками. Воспаление, опосредованное миелоидными клетками, можно выявлять любым способом, известным в данной области техники, например, путем измерений цитокинов и (или) количественного, и (или) качественного, анализа миелоидных клеток (см., например, работу Davis, B.M., Salinas-Navarro, M., Cordeiro, M.F. et al., 2017, Sci Rep 7, 1576).

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы, опосредованные миелоидными клетками, представляют собой заболевание или нарушение, при которых первичной патологией является воспаление, опосредованное миелоидными клетками.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные заболевание или нарушение нервной системы, опосредованные миелоидными клетками, представляют собой заболевание или нарушение нервной системы, опосредованные клетками микроглии.

Авторы данного изобретения обнаружили, что ААТ (или вектор / генетически модифицированная клетка, описанные в данном документе) могут подавлять нейрональные пути воспаления, опосредованного миелоидными клетками (фиг. 2-4, таблицы 2-11). Подавление путей воспаления, опосредованного миелоидными клетками, наблюдалось в покоящихся клетках (фиг. 4B) и стимулированных клетках (фиг. 4C), и, следовательно, полезно для профилактики и (или) лечения заболеваний или нарушений нервной системы и их симптомов.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что ААТ (или вектор / генетически модифицированная клетка, описанные в данном документе) полезны при лечении заболеваний или нарушений нервной системы, опосредованных миелоидными клетками, как описано в данном документе.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или синдром нервной системы представляют собой заболевание или синдром, выбранные из следующей группы: деменция, рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона.

При употреблении в контексте данного документа термин «деменция» относится к когнитивному нарушению, характеризующемуся слабоумием (т. е. общим ухудшением или прогрессирующим снижением когнитивных способностей, или симптомами, сходными с деменцией). Нарушения, связанные с деменцией, часто ассоциированы с или вызваны одним или большим числом аномальных процессов в головном мозге или центральной нервной системе (например, нейродегенерацией). Нарушения, связанные с деменцией, обычно прогрессируют от легкой до тяжелой стадий и нарушают способность субъекта самостоятельно функционировать в повседневной жизни. Деменция может быть классифицирована как корковая или подкорковая в зависимости от пораженной области мозга. Нарушения, связанные с деменцией, не включают в себя нарушения, характеризующиеся потерей сознания (как при делирии), депрессией или другие функциональные психические нарушения (псевдодеменция). Нарушения, связанные с деменцией, включают в себя необратимые деменции, такие как те, которые связаны с нейродегенеративными заболеваниями, такими как болезнь Альцгеймера, сосудистая деменция, деменция с тельцами Леви, болезнь Крейтцфельда – Якоба, болезнь Пика, прогрессирующий надъядерный паралич, деменция лобных долей, идиопатическая кальцификация базальных ганглиев, болезнь Хантингтона, рассеянный склероз и болезнь Паркинсона, а также обратимые деменции вследствие травмы (посттравматическая энцефалопатия), внутричерепных опухолей (первичных или метастатических), субдуральных гематом, метаболических и эндокринологических состояний (гипо- и гипертиреоз, болезнь Вильсона, уремическая энцефалопатия, диализная деменция, аноксическая и постаноксическая деменция, и хронические электролитные нарушения), дефицитных состояний (дефицит витамина В12 и пеллагра (авитаминоз В6)), инфекций (СПИД, сифилитический менингоэнцефалит, лимбический энцефалит, прогрессирующая мультифокальная лейкоэнцефалопатия, грибковые инфекции, туберкулез), и хронического воздействия алкоголя, алюминия, тяжелых металлов (мышьяк, свинец, ртуть, марганец) или отпускаемых по рецепту лекарственных средств (антихолинергические средства, седативные средства, барбитураты и т. д.).

При употреблении в контексте данного документа термин «рассеянный склероз» относится к заболеванию или нарушению, характеризующимся воспалением, демиелинизацией, гибелью олигодендроцитов, повреждением мембран и гибелью аксонов. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения рассеянный склероз, описанный в данном документе, относится к рецидивирующему/ремиттирующему рассеянному склерозу или прогрессирующему рассеянному склерозу. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения рассеянный склероз представляет собой рассеянный склероз по меньшей мере одной из четырех основных разновидностей рассеянного склероза, определенных в международном обзоре неврологов (Lublin and Reingold, 1996, Neurology 46 (4): 907-11), а именно: рецидивирующий/ремиттирующий рассеянный склероз, вторичный прогрессирующий рассеянный склероз, прогрессирующий/рецидивирующий рассеянный склероз или первичный прогрессирующий рассеянный склероз (ППРС, англ. «PPMS»).

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения рассеянный склероз относится к симптомам рассеянного склероза, которые включают в себя нарушение зрения, головокружение, вертиго, сенсорную дисфункцию, слабость, нарушение координации, потерю равновесия, усталость, боль, нейрокогнитивный дефицит, нарушения психического здоровья, дисфункцию мочевого пузыря, дисфункцию кишечника, сексуальную дисфункцию, теплочувствительность.

При употреблении в контексте данного документа термин «болезнь Хантингтона» относится к нейродегенеративному заболеванию, вызванному расширением трехнуклеотидного повтора (например, CAG, который транслируется в полиглютаминовый, или поли-Q, тракт) в гене HTT, что приводит к продуцированию патогенного мутантного белка хантингтина (HTT, или mHTT). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения мутантный белок хантингтин повышает скорость гибели нейрональных клеток в определенных областях головного мозга. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения болезнь Хантингтона, описанная в данном документе, относится к симптомам болезни Хантингтона, которые включают в себя нарушение двигательной функции, когнитивные нарушения, депрессию, беспокойство, двигательные нарушения, хорею, ригидность, мышечную контрактуру (дистонию), замедленные движения глаз или аномальные движения глазных яблок, нарушение походки, изменение осанки, нарушение равновесия, непреднамеренную потерю веса, нарушения цикла сна, нарушения циркадного ритма и дисфункцию вегетативной нервной системы.

При употреблении в контексте данного документа термин «боковой амиотрофический склероз» относится к прогрессирующему нейродегенеративному заболеванию, которое поражает верхние двигательные нейроны (двигательные нейроны головного мозга) и (или) нижние двигательные нейроны (двигательные нейроны спинного мозга), и приводит к гибели двигательных нейронов. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения боковой амиотрофический склероз включает в себя все классификации бокового амиотрофического склероза, известные в данной области техники, включая в себя следующие, но не ограничиваясь ими: классический боковой амиотрофический склероз (обычно поражающий как нижние, так и верхние двигательные нейроны), первичный боковой склероз (ПБС, обычно поражающий только верхние двигательные нейроны), прогрессирующий бульбарный паралич (ПБП, или с бульбарным началом, – разновидность бокового амиотрофического склероза, который обычно начинается с трудностей при глотании, жевании и речи), прогрессирующую мышечную атрофию (ПМА, обычно поражающую только нижние двигательные нейроны) и семейный боковой амиотрофический склероз (генетическая версия бокового амиотрофического склероза).

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «боковой амиотрофический склероз» относится к симптомам бокового амиотрофического склероза, которые включают в себя, но не ограничиваются ими, прогрессирующую слабость, атрофию, фасцикуляцию, гиперрефлексию, дизартрию, дисфагию и (или) паралич дыхательной функции.

При употреблении в контексте данного документа термин «болезнь Альцгеймера» (БА) относится к ухудшению психического состояния, связанному со специфическим дегенеративным заболеванием головного мозга, которое характеризуется старческими бляшками, нейритическими клубками и прогрессирующей потерей нейронов, что клинически проявляется в прогрессирующем дефиците памяти, спутанности сознания, поведенческих нарушениях, неспособности заботиться о себе и (или) постепенном физическом ухудшении.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения субъектов, страдающих болезнью Альцгеймера, идентифицируют с использованием критериев NINCDS-ADRDA (Национальный институт неврологических и коммуникативных нарушений и Ассоциация болезни Альцгеймера и связанных с ней нарушений):

1) оценка клинической деменции (ОКД, англ. «CDR») = 1; оценка по краткой шкале оценки психического состояния (MMSE) – от 16 до 24 баллов и медиальная височная атрофия (определенная с помощью магнитно-резонансной томографии, МРТ) > 3 баллов по шкале Шелтенса (Scheltens). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Альцгеймера» включает в себя все стадии заболевания, включительно со следующими стадии, определенными согласно критериям NINCDS-ADRDA для диагностики болезни Альцгеймера в 1984 году.

2) Явная болезнь Альцгеймера: пациент соответствует критериям вероятной болезни Альцгеймера и имеет гистопатологические признаки БА, полученные при вскрытии или биопсии.

Вероятная или продромальная болезнь Альцгеймера: деменция установлена в результате клинического и нейропсихологического обследования. Когнитивные нарушения также должны быть прогрессирующими и присутствовать в двух или большем числе когнитивных областей. Начало нарушений приходится на возраст от 40 до 90 лет, и, наконец, должно отсутствовать другое заболевание, способное вызвать синдром деменции.

3) Возможная или непродромальная болезнь Альцгеймера: присутствует синдром деменции с нетипичным началом, проявлением; и без известной этиологии; но считается, что в его основе нет сопутствующих заболеваний, способных вызвать деменцию. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Альцгеймера» относится к одной стадии болезни Альцгеймера. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Альцгеймера» относится к двум стадиям болезни Альцгеймера. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Альцгеймера» относится к симптомам болезни Альцгеймера, которые включают в себя, но не ограничиваются ими, потерю памяти, спутанность сознания, трудности с мышлением, изменения в речи, изменения в поведении и (или) изменения в личности.

При употреблении в контексте данного документа термин «болезнь Паркинсона» относится к неврологическому синдрому, характеризующемуся дефицитом дофамина, возникающему в результате дегенеративных, сосудистых или воспалительных изменений в базальных ганглиях черной субстанции. Симптомы болезни Паркинсона включают в себя следующие, но не ограничиваются ими: тремор в покое, ригидность по типу «зубчатого колеса», брадикинезию, нарушение постуральных рефлексов, хорошую реакцию на лечение препаратом 1-ДОФА, отсутствие выраженного глазодвигательного паралича, мозжечковых или пирамидных признаков, амиотрофии, диспраксии и (или) дисфазии. В конкретном варианте осуществления данное изобретение применяют для лечения синдрома, связанного с дофаминергической дисфункцией. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения болезнь Паркинсона включает в себя любую стадию болезни Паркинсона. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Паркинсона» включает в себя раннюю стадию болезни Паркинсона, которая в широком смысле относится к первым стадиям болезни Паркинсона, при которых у субъекта, страдающего данным заболеванием, проявляются легкие симптомы, которые не являются инвалидизирующими, такие как эпизодический тремор одной конечности (например, кисти), и которые затрагивают только одну сторону тела.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Паркинсона» включает в себя запущенную стадию болезни Паркинсона, которая относится к более прогрессирующей стадии болезни Паркинсона, при которой у человека, страдающего данным заболеванием, проявляются симптомы, которые обычно являются тяжелыми и которые могут привести к некоторой инвалидности (например, тремор, охватывающий обе стороны тела, нарушение равновесия и т. д.). Симптомы, связанные с запущенной стадией болезни Паркинсона, могут значительно различаться у разных людей и проявляться через несколько лет после первоначального появления заболевания.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения термин «болезнь Паркинсона» относится к симптомам болезни Паркинсона, которые включают в себя, но не ограничиваются ими, тремор (например, тремор, который наиболее выражен в состоянии покоя), тряску (например, дрожание кистей, плеч, ног, челюсти и лица), ригидность мышц, отсутствие постуральных рефлексов, замедление произвольных движений, ретропульсию, похожее на маску выражение лица, сутулую осанку, нарушение равновесия, нарушение координации, брадикинезию, постуральную нестабильность и (или) нарушения походки.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что ААТ (или вектор / генетически модифицированная клетка, описанные в данном документе) особенно полезны при лечении определенных заболеваний или нарушений нервной системы, как описано в данном документе.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой по меньшей мере один симптом заболевания или нарушения нервной системы, выбранный из группы, состоящей из: тремора, потери памяти, невнятной речи, головокружения, изменения зрения и головной боли.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение, опосредованные шванновскими клетками.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой TACE-опосредованные заболевание или нарушение нервной системы.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или нарушение нервной системы представляют собой заболевание или нарушение периферической нервной системы.

При употреблении в контексте данного документа термин «заболевание или нарушение периферической нервной системы» относится к любому заболеванию или нарушению, которые существенно влияют на периферическую нервную систему, предпочтительно – к любому заболеванию или нарушению, которые в первую очередь влияют на периферическую нервную систему.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или нарушение периферической нервной системы представляют собой моторно-сенсорную нейропатию периферической нервной системы.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанная сенсорная нейропатия периферической нервной системы представляет собой приобретенную моторно-сенсорную нейропатию периферической нервной системы.

Приобретенная моторно-сенсорная нейропатия периферической нервной системы, такая как приобретенные демиелинизирующие заболевания, включает в себя, но не ограничивается ими, повреждение нерва, диабетическую периферическую нейропатию, периферические нейропатии, связанные с лекарственными препаратами, проказу и воспалительные нейропатии. Данные нейропатии могут поражать как миелинизированные шванновские клетки, так и периферические аксоны/нейроны.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанная сенсорная нейропатия периферической нервной системы представляет собой синдром Гийена – Барре.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанная сенсорная нейропатия периферической нервной системы представляет собой наследственную моторно-сенсорную нейропатию периферической нервной системы.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанная наследственная моторно-сенсорная нейропатия периферической нервной системы представляет собой болезнь Шарко – Мари – Тута или ее симптом.

При употреблении в контексте данного документа термин «болезнь Шарко – Мари – Тута» относится к наследственной моторно-сенсорной нейропатии периферической нервной системы, характеризующейся прогрессирующей потерей мышечной ткани и (или) ощущения прикосновения в различных частях тела. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения болезнь Шарко – Мари – Тута, описанная в данном документе, представляет собой по меньшей мере один из подтипов болезни Шарко – Мари – Тута, выбранный из следующей группы: ШМТ1, ШМТX, ШМТ4, ШМТ2, тяжелая ШМТ с ранним началом, ШМТ5, ШМТ6, ШМТ7 и промежуточный тип ШМТ.

Симптомы болезни Шарко – Мари – Тута включают в себя, но не ограничиваются ими, слабость в ногах, лодыжках и (или) ступнях, потерю мышечной массы в ногах и (или) ступнях, высокий свод стопы, скрюченные пальцы (молоточковые пальцы), снижение способности бегать, трудности с подъемом стопы в лодыжке (опущение стопы), аномальная походка, частые спотыкания или падения и снижение чувствительности или потеря чувствительности в ногах и (или) ступнях.

На мышиной модели заболеваний и нарушений периферической нервной системы, таких как ШМТ1A, авторы данного изобретения подтвердили вывод о том, что AAT является эффективным терапевтическим контекстом.

В связи с этим на ААТ возлагаются большие надежды на улучшение дисмиелинизации аксонов, позволяя миелиновым оболочкам правильно формироваться вокруг аксонов и тем самым потенциально позволяя пациентам с ШМТ1A вести нормальную и здоровую жизнь.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанные белок ААТ, его вариант, изоформа и (или) фрагмент выделены из плазмы крови человека.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанная композиция содержит по меньшей мере один фармацевтический носитель.

При употреблении в контексте данного документа термин «фармацевтический носитель» относится к агенту (например, молекуле или клетке), который улучшает свойства композиции, вектора и (или) генетически модифицированной клетки для применения согласно данному изобретению. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения свойство доставки лекарственного средства, как описано в данном документе, включает в себя по меньшей мере одно свойство, выбранное из следующей группы: проникающая способность (например, через клеточную мембрану и (или) гематоэнцефалический барьер), доставка в определенное место (например, доставка в головной мозг), доставка с контролируемым высвобождением и стабильность (например, снижение ферментативной деградации). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения фармацевтический носитель, описанный в данном документе, представляет собой агент, выбранный из следующей группы: клетка для доставки, липосома, наночастица, слитый белок, ниосома, наносфера, мицелла, нанокапсула, нанооболочка, липидная частица и дендример.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения фармацевтический носитель, описанный в данном документе, представляет собой фармацевтически приемлемый растворитель или носитель.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанный фармацевтический носитель представляет собой усилитель проницаемости гематоэнцефалического барьера.

При употреблении в контексте данного документа термин «усилитель проницаемости гематоэнцефалического барьера» относится к агенту, который можно использовать для доставки композиции, вектора и (или) генетически модифицированной клетки для применения согласно данному изобретению в нервную систему, включительно с головным мозгом, и для прохождения через гематоэнцефалический барьер. Для достижения повышения проницаемости гематоэнцефалического барьера можно использовать любую стратегию, известную в данной области техники (см., например, работы Salameh, T. S., & Banks, W. A., 2014, Advances in pharmacology, 71, 277-299; Tashima, T., 2020, Receptor-Mediated Transcytosis. Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 68 (4), 316-32; Pardridge, W. M., 2020, Frontiers in aging neuroscience, 11, 373; Upadhyay, R. K., 2014, BioMed research international).

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения композиция для применения согласно данному изобретению слита с белком-усилителем гематоэнцефалического барьера. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения белок-усилитель гематоэнцефалического барьера, как описано в данном документе, представляет собой по меньшей мере один полноразмерный белок, вариант, изоформу и (или) фрагмент белка, выбранного из группы трансферрина, инсулина, инсулиноподобного фактора роста, липопротеина низкой плотности.

Можно также использовать стратегии по принципу «троянского коня» (см., например, Pardridge, W.M., 2017, BioDrugs 31, 503-519). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения композиция для применения согласно данному изобретению связана с антителом или его фрагментом, который связывается с эндогенным рецептором-транспортером ГЭБ, таким как рецептор инсулина или рецептор трансферрина.

Композицию для применения согласно данному изобретению также можно изменять для повышения липофильности и последующего улучшения свойств проникновения через ГЭБ (см., например, работу Upadhyay, R. K., 2014, BioMed research international, Article ID 869269, 37 pages). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения композиция для применения согласно данному изобретению включает в себя модификации, повышающие липофильность. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения модификации, повышающие липофильность, как описано в данном документе, включают в себя добавление по меньшей мере одного гидрофильного пептида, замену частей последовательности по меньшей мере одним гидрофильным пептидом, добавление липидных фрагментов и (или) замену нелипидных фрагментов липидными фрагментами.

В определенных вариантах осуществления указанная композиция относится к композиции для применения согласно данному изобретению, вектору для применения согласно данному изобретению или генетически модифицированной клетке для применения согласно данному изобретению, при этом указанные композиция, вектор или генетически модифицированная клетка составлены для внутримозгового введения, внутривенной инъекции, внутривенной инфузии, инфузии с помощью помпы-дозатора, ингаляционного назального спрея, глазных капель, кожных пластырей, составов с замедленным высвобождением, генной терапии ex vivo или клеточной терапии ex vivo.

Фармацевтические композиции согласно данному изобретению можно также доставлять пациенту с помощью нескольких технологий, включающих в себя ДНК-инъекцию нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AAT, его вариант, изоформу и (или) фрагмент, согласно данному изобретению (также называемую ДНК-вакцинацией) с электропорацией in vivo и без нее, опосредованные липосомами и улучшенные наночастицами рекомбинантные векторы, например, рекомбинантный лентивирус, рекомбинантный аденовирус и вирус, ассоциированный с рекомбинантным аденовирусом, как описано в данном документе.

Указанные композиции можно вводить внутривенно или локально в головной или спинной мозг, или электропорацией в представляющую интерес ткань.

При употреблении в контексте данного документа термины «субъект» / «субъект, нуждающийся в этом», или «пациент» / «пациент, нуждающийся в этом», хорошо известны в данной области техники и употребляются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения млекопитающего, включительно с собакой, кошкой, крысой, мышью, обезьяной, коровой, лошадью, козой, овцой, свиньей, верблюдом и, наиболее предпочтительно, человеком. В некоторых случаях указанный субъект представляет собой субъекта, нуждающегося в лечении, или субъекта, имеющего заболевание или нарушение. Однако в других вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект может представлять собой нормального субъекта. Данный термин не указывает на конкретный возраст или пол. Следовательно, подразумевается включение взрослых субъектов, субъектов-детей и новорожденных субъектов, мужского или женского пола. Предпочтительно, указанный субъект представляет собой человека. Наиболее предпочтительно – человека, страдающего от заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект страдает от неврологического нарушения, независимого от вирусной инфекции.

Термин «около», в частности применительно к заданной величине, предназначен для охвата отклонений плюс или минус десять (10) процентов, предпочтительно – 5 процентов, еще более предпочтительно – 2 процента, и наиболее предпочтительно – 1 процент.

Данное изобретение относится к композиции для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с любой вирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина, его варианта, изоформы и (или) фрагмента.

Указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент могут представлять собой выделенный из плазмы крови ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент, в частности – выделенный из плазмы крови человека ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент; или рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент; предпочтительно, белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент. Указанная вирусная инфекция может быть вызвана ДНК-вирусом (двухцепочечным или одноцепочечным), РНК-вирусом (одноцепочечным или двухцепочечным, положительным или отрицательным), вирусом обратной транскрипции или любым появляющимся вирусом, как оболочечным, так и безоболочечным.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанную композицию применяют в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с респираторной вирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения респираторный вирус, описанный в данном документе, представляет собой вирус, выбранный из группы риновируса, РСВ, парагриппа, метапневмовируса, коронавируса, энтеровируса, аденовируса, бокавируса, полиомавируса, вируса простого герпеса и цитомегаловируса.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанную композицию применяют в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с ДНК-вирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения ДНК-вирус, описанный в данном документе, выбран из группы, состоящей из аденовируса, риновируса, РСВ, вируса гриппа, вируса парагриппа, метапневмовируса, коронавируса, энтеровируса, аденовируса, бокавируса, полиомавируса, вируса простого герпеса, цитомегаловируса, бокавируса, полиомавируса и цитомегаловируса.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанную композицию применяют в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с РНК-вирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом. Указанный РНК-вирус может представлять собой оболочечный РНК-вирус (или покрытый оболочкой РНК-вирус), или безоболочечный РНК-вирус (или голый РНК-вирус). Указанный РНК-вирус может представлять собой вирус с одноцепочечной РНК (оцРНК) или вирус с двухцепочечной РНК (дцРНК). Указанный вирус с одноцепочечной РНК может представлять собой вирус с положительной смысловой оцРНК или вирус с отрицательной смысловой оцРНК.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения РНК-вирус, описанный в данном документе, выбран из группы, состоящей из риновируса, РСВ, вируса гриппа, вируса парагриппа, метапневмовируса, коронавируса, энтеровируса, аденовируса, бокавируса, полиомавируса, вируса простого герпеса и цитомегаловируса.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанную композицию применяют в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с коронавирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения коронавирус, описанный в данном документе, представляет собой коронавирус из рода, выбранного из группы α-CoV, β-CoV, γ-CoV или δ-CoV. В другом конкретном варианте осуществления данного изобретения коронавирус, описанный в данном документе, относится к роду α-CoV или β-CoV. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения коронавирус, описанный в данном документе, выбран из группы, состоящей из коронавируса человека OC43 (HCoV-OC43), коронавируса человека HKU1 (HCoV- HKU1), коронавируса человека 229E (HCoV-229E), коронавируса человека NL63 (HCoV-NL63, коронавирус Нью-Хейвен), коронавируса, связанного с ближневосточным респираторным синдромом (MERS-CoV, или «новый коронавирус 2012»), коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV, или «классический SARS») и коронавируса 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2, или «новый коронавирус 2019). Предпочтительно, указанная вирусная инфекция представляет собой РНК-вирусную инфекцию, наиболее предпочтительно – коронавирусную инфекцию, вызванную коронавирусом, выбранным из неограничивающей группы, включающей в себя MERS-CoV, SARS-CoV и SARS-CoV-2. Наиболее предпочтительно, указанная вирусная инфекция представляет собой инфекцию SARS-CoV-2.

Следует понимать, что данное изобретение включает в себя все заболевания или синдромы, связанные с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2. Заболевание или синдром, связанные с инфекцией SARS-CoV-2, также называют COVID-19. В одном варианте осуществления данного изобретения указанные заболевание или синдром, связанные с вирусной инфекцией, представляют собой воспаление, например, кровеносных сосудов по всему телу (например, болезнь Кавасаки), иммунное заболевание (например, болезнь Грейвса) и (или) респираторный синдром, в частности – тяжелый острый респираторный синдром. Указанные заболевание или синдром могут быть связаны с вирусной инфекцией в том смысле, что вирусная инфекция ассоциирована с данными заболеванием или синдромом, предшествует данным заболеванию или синдрому, способствует данным заболеванию или синдрому и (или) вызывает данные заболевание или синдром. Например, вирусная инфекция может вызывать воспаление, которое прямо или косвенно вызывает заболевание или синдром. Воспаление, связанное с вирусной инфекцией, может быть острым или хроническим воспалением. Воспаление, связанное с вирусной инфекцией, впоследствии может сохраняться системно и (или) в определенном органе, например, в головном мозге, и (или) вызывать длительные повреждения. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанную композицию применяют в лечении и (или) профилактике воспалительных заболевания или синдрома нервной системы, связанных с вирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом.

При употреблении в контексте данного документа термин «воспалительные заболевание или синдром нервной системы» относится к заболеванию, синдрому и (или) патологическому состоянию, которые характеризуются повышенным воспалением в нервной системе по сравнению со здоровым референсным субъектом. Заболевание или синдром, описанные в данном документе, включают в себя заболевание или синдром нервной системы, связанные с вирусом. Воспаление характеризуется нарушением регуляции маркеров воспаления и (или) повышенной инфильтрацией, активацией, пролиферацией и (или) дифференцировкой иммунокомпетентных клеток в крови и (или) головном мозге. Маркер воспаления – это маркер, который указывает на воспаление у субъекта. В определенных вариантах осуществления данного изобретения маркер воспаления, описанный в данном документе, представляет собой маркер, выбранный из следующей группы: СРБ, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и прокальцитонин (ПКТ), интерлейкин (например, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, IL-9, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-14, ИЛ-15, ИЛ-16, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-19, ИЛ-20, ИЛ-21, ИЛ-22, ИЛ-23, ИЛ-24, ИЛ-25, ИЛ-26, ИЛ-27, ИЛ-28, ИЛ-29, ИЛ-30, ИЛ-31, ИЛ-33, ИЛ-32, ИЛ-33, ИЛ-35 или ИЛ-36), фактор некроза опухоли (например, ФНО-альфа, ФНО-бета), интерферон (например, интерферон-гамма), MIP-I, MCP-I, RANTES, другие хемокины и (или) другие цитокины. Маркер воспаления также можно выявить косвенно, например, путем выявления ингибирующего фактора маркера воспаления (например, связывающего фактора и (или) антагониста). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения маркер воспаления измеряют в клетках, вовлеченных в воспаление, в клетках, пораженных клетками, вовлеченными в воспаление, в спинномозговой жидкости и (или) в крови. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения маркер воспаления указывает на инфильтрацию, активацию, пролиферацию и (или) дифференцировку иммунокомпетентных клеток. Выявление маркера воспаления или соотношения двух или большего числа маркеров воспаления обнаружено за пределами нормального диапазона. Специалисту в данной области техники известен нормальный диапазон маркеров воспаления и то, должен ли маркер (соотношение) быть ниже или выше порогового значения, чтобы указывать на воспаление. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения определяют уровень экспрессии генов, уровень транскрипта РНК, уровень экспрессии белка, уровень активности белка и (или) уровень ферментативной активности по меньшей мере одного маркера воспаления. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения по меньшей мере один маркер воспаления определяют количественно и (или) качественно для определения воспалительных заболевания или синдрома нервной системы у субъекта, нуждающегося в лечении и (или) профилактике.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения воспалительные заболевание или синдром нервной системы, описанные в данном документе, характеризуются острым воспалением, то есть продолжительность симптомов воспаления обычно составляет от около нескольких минут (например, 2, 5, 10, 15, 30, 45 минут) до нескольких суток (например, 2, 3, 5, 7, 10 или 14 суток). Острое воспаление, как правило, возникает в результате прямого воздействия стимула, такого как вирусная инфекция. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения воспалительные заболевание или синдром нервной системы, описанные в данном документе, характеризуются хроническим воспалением, то есть продолжительность симптомов воспаления обычно составляет по меньшей мере около нескольких суток (например, 2, 3, 5, 7, 10 или 14 суток), или симптомы воспаления повторно возникают по меньшей мере один раз (например, один раз или большее число раз, два раза или большее число раз, или три раза или большее число раз). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные воспалительные заболевание или синдром нервной системы характеризуются хроническим воспалением низкой степени тяжести. Хроническое воспаление низкой степени тяжести может возникать при отсутствии клинических симптомов.

В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, имеет перенесенную вирусную инфекцию в анамнезе. Следовательно, указанный субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, был инфицирован вирусом по меньшей мере один раз. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, инфицирован указанным вирусом по меньшей мере один раз. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, инфицирован указанным вирусом по меньшей мере один раз в детстве. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, инфицирован указанным вирусом по меньшей мере один раз. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанный субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, инфицирован указанным вирусом по меньшей мере один раз в течение последних 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0,5 года (лет). В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанная вирусная инфекция активна (например, поддается обнаружению) на момент постановки диагноза воспалительных заболевания или синдрома нервной системы у указанного субъекта, нуждающегося в лечении и (или) профилактике.

Способы выявления вирусных инфекций известны специалисту в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способу выявления вируса, выбранному из следующей группы: выделение вируса, способы на основе нуклеиновых кислот, способы на основе микроскопии, выявление антител хозяина, электронная микроскопии и фенотип клетки-хозяина.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вирусная инфекция, описанная в данном документе, выявляется в образце, таком как образец, выбранный из следующей группы: мазок из носоглотки, кровь, ткань (например, кожа), мокрота, жидкость для полосканий, смыв из бронхов, моча, сперма, кал, спинномозговая жидкость, засохшие пятна крови, носовая слизь.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вирусная инфекция, описанная в данном документе, получена в виде информации, извлеченной из истории болезни пациента.

Примеры выявления (предшествующей) инфекции SARS-CoV-2 включают в себя набор для определения ИФН-γ Human IFN-γ SARS-CoV-2 ELISpot^PLUS kit (ALP), тест-полоски (Mabtech, 3420-4AST-P1-1) или определение Т-клеточного ответа (Zuo, J., Dowell, A.C., Pearce, H. et al., 2021, Nat Immunol).

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения воспалительные заболевание или синдром нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой воспалительное заболевание или синдром симпатической нервной системы. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения воспалительные заболевание или синдром нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой воспалительное заболевание или синдром парасимпатической нервной системы. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения воспалительные заболевание или синдром нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой воспалительное заболевание или синдром центральной нервной системы. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения воспалительные заболевание или синдром нервной системы, описанные в данном документе, представляют собой воспалительное заболевание или синдром периферической нервной системы.

В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанные воспалительные заболевание или синдром нервной системы связаны с вирусом, выбранным из группы рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона и болезни Хантингтона.

Примеры установленных связей между воспалительным заболеванием или синдромом нервной системы и вирусными инфекциями:

Нарушение головного мозга Вовлеченный вирус Семейство вируса Литературный источник Болезнь Паркинсона (БП) Гепатит С Flaviviridae Tsai, Liou et al. 2016 Neurology 86 (9): 840-846 H5N1 Orthomyxoviridae Jang, Boltz et al. 2012 J Neurosci 32 (5): 1545-1559 SARS-CoV-2 Coronaviridae (Sulzer, Antonini et al. 2020 NPJ Parkinsons Dis 6: 18.) ВИЧ Retroviridae Tse, Cersosimo et al. 2004 Parkinsonism Relat Disord 10 (6): 323-334. Болезнь Альцгеймера (БА) Герпес Herpesviridae Abbott 2020 Nature 587 (7832): 22-25. Рассеянный склероз (РС) Эпштейна – Барр Herpesviridae Soldan and Lieberman, 2020, Drug Discov Today Dis Models 32 (Pt A): 35-52 Герпес Herpesviridae Virtanen and Jacobson, 2012, CNS Neurol Disord Drug Targets 11 (5): 528-544.

Указанные заболевание или синдром предпочтительно связаны с коронавирусной инфекцией, и более предпочтительно указанные заболевание или синдром связаны с инфекцией SARS-CoV-2. Указанные заболевание или синдром, связанные с заболеванием или синдромом SARS-CoV-2, предпочтительно представляют собой по меньшей мере одно из группы, состоящей из: лихорадки, кашля, усталости, затрудненного дыхания, озноба, боли в суставах или мышцах, отхаркивания, выделения мокроты, одышки, миалгии, артралгии или боль в горле, головной боли, тошноты, рвоты, диареи, боли в пазухах носа, заложенности носа, снижения или изменения обоняния или вкуса, отсутствия аппетита, потери веса, боли в животе, конъюнктивита, кожной сыпи, лимфомы, апатии и сонливости, предпочтительно – лихорадку, кашель, усталость, затрудненное дыхание, озноб, боли в суставах или мышцах, отхаркивание, выделение мокроты, одышку, миалгию, артралгию или боль в горле, головную боль, тошноту, рвота, диарею, боль в пазухах носа, заложенность носа, снижение или изменение обоняния или вкуса.

Данное изобретение относится к композиции для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), его варианта, изоформы и (или) фрагмента. Предпочтительно, указанный коронавирус представляет собой SARS-CoV-2.

Авторы данного изобретения обнаружили, что ААТ и рчААТ ингибируют вирусное проникновение нескольких вирусов и уменьшают воспаление, в частности в микроглии нервной системы. Более того, клетки SH-SY5Y, которые имеют нейрональное происхождение и часто используются для изучения нейродегенеративных заболеваний, включительно с болезнью Паркинсона (Xicoy, H., Wieringa, B. & Martens, G.J. The SH-SY5Y cell line in Parkinson’s disease research: a systematic review. Mol Neurodegeneration 12, 10, 2017), демонстрируют относительно высокое число копий мРНК протеаз, праймирующих шиповидный белок, а именно трипсина и катепсина В. В сочетании с относительно высоким уровнем экспрессии ACE2 в SH-SY5Y данная нейрональная ткань (Bielarz V, Willemart K, Avalosse N, et al. Susceptibility of neuroblastoma and glioblastoma cell lines to SARS-CoV-2 infection. Brain Res. 2021 May 1) и клетки подобного происхождения становятся восприимчивыми к поражению вирусной инфекцией SARS-CoV-2.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на широком влиянии ААТ на заболевания или синдромы, связанные с вирусными инфекциями.

Субъекты могут быть особенно подходящими для лечения и (или) профилактики с помощью белка ААТ и (или) белка рчААТ.

Следовательно, данное изобретение также относится к композиции для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, у субъекта, нуждающегося в этом, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), его варианта, изоформы и (или) фрагмента, при этом указанный субъект, нуждающийся в этом, характеризуется по меньшей мере одним измененным уровнем, выбранным из эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ), по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) и интерферона-гамма (ИФН-γ) по сравнению с по меньшей мере одним референсным субъектом. Указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент могут представлять собой выделенный из плазмы крови ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент, в частности – выделенный из плазмы крови человека ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент; или рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент; предпочтительно, белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент.

«Субъект, нуждающийся в этом» также указан в данном документе как «субъект, представляющий интерес». Субъект, нуждающийся в этом, представляет собой субъекта во время вирусной инфекции или с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2 (т. е. инфицированного субъекта), имеющего заболевание или синдром, связанные с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2. Инфицированному субъекту могут потребоваться лечение и (или) профилактика заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2. Лечение с помощью ААТ и (или) рчААТ может ингибировать или уменьшать проникновение вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – вируса SARS-CoV-2 в клетки путем ингибирования протеазы, праймирующей шиповидный белок, уменьшать распространение указанной вирусной инфекции в организме, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – вируса SARS-CoV-2, и (или) уменьшать воспаление в ответ на указанную вирусную инфекцию, предпочтительно – коронавирусную инфекцию, более предпочтительно – инфекцию SARS-CoV-2. Субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, может иметь респираторный синдром, более предпочтительно – острый респираторный синдром, еще более предпочтительно – тяжелый острый респираторный синдром. Субъект, нуждающийся в лечении и (или) профилактике, может иметь по меньшей мере один симптом, выбранный из группы, состоящей из: лихорадки, кашля, усталости, затрудненного дыхания, озноба, боли в суставах или мышцах, отхаркивания, выделения мокроты, одышки, миалгии, артралгии или боль в горле, головной боли, тошноты, рвоты, диареи, боли в пазухах носа, заложенности носа, снижения или изменения обоняния или вкуса, отсутствия аппетита, потери веса, боли в животе, конъюнктивита, кожной сыпи, лимфомы, апатии и сонливости, предпочтительно – из группы, включающей в себя лихорадку, кашель, усталость, затрудненное дыхание, озноб, боли в суставах или мышцах, отхаркивание, выделение мокроты, одышку, миалгию, артралгию или боль в горле, головную боль, тошноту, рвота, диарею, боль в пазухах носа, заложенность носа, снижение или изменение обоняния или вкуса. Субъекту, нуждающемуся в лечении и (или) профилактике, может потребоваться интенсивная терапия и (или) искусственная вентиляция легких. Субъекта, нуждающегося в лечении и (или) профилактике, можно определить с помощью одного из приведенных выше определений или любой их комбинации.

Субъект, нуждающийся в этом, может также представлять собой субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который особенно восприимчив к развитию заболевания или синдрома после вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2. Такому субъекту до инфицирования может потребоваться профилактика заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2.

Указанный по меньшей мере один референсный субъект может представлять собой группу референсных субъектов. Предпочтительно, референсный (-ые) субъект (-ы) представляет (-ют) собой субъекта (-ов) с вирусной инфекцией или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2 (т. е. инфицированный субъект), который (которые) является (являются) бессимптомным (-и) или имеет (имеют) легкие симптомы, более предпочтительно субъект (-ы) представляет (-ют) собой субъекта (-ов) с вирусной инфекцией или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который (которые) является (являются) бессимптомным (-и).

«Бессимптомный» согласно данному изобретению означает, что у (референсного) субъекта отсутствуют симптомы, предпочтительно – отсутствуют симптомы, выбранные из группы, состоящей из: лихорадки, кашля, усталости, затрудненного дыхания, озноба, боли в суставах или мышцах, отхаркивания, выделения мокроты, одышки, миалгии, артралгии или боль в горле, головной боли, тошноты, рвоты, диареи, боли в пазухах носа, заложенности носа, снижения или изменения обоняния или вкуса, отсутствия аппетита, потери веса, боли в животе, конъюнктивита, кожной сыпи, лимфомы, апатии и сонливости, более предпочтительно – отсутствуют лихорадка, кашель, усталость, затрудненное дыхание, озноб, боли в суставах или мышцах, отхаркивание, выделение мокроты, одышка, миалгия, артралгия или боль в горле, головная боль, тошнота, рвота, диарея, боль в пазухах носа, заложенность носа, снижение или изменение обоняния или вкуса. У бессимптомного (референсного) субъекта предпочтительно отсутствует респираторный синдром, более предпочтительно – отсутствует острый респираторный синдром, еще более предпочтительно – отсутствует тяжелый острый респираторный синдром. Бессимптомный (референсный) субъект не нуждается в интенсивной терапии и (или) искусственной вентиляции легких. Бессимптомного (референсного) субъекта можно определить с помощью одного из приведенных выше определений или любой их комбинации.

У (референсного) субъекта с легкими симптомами согласно данному изобретению предпочтительно отсутствует респираторный синдром, более предпочтительно – отсутствует острый респираторный синдром, еще более предпочтительно – отсутствует тяжелый острый респираторный синдром. (Референсный) субъект с легкими симптомами предпочтительно не нуждается в интенсивной терапии и (или) искусственной вентиляции легких. (Референсный) субъект с легкими симптомами может иметь по меньшей мере один симптом, выбранный из группы, состоящей из: лихорадки, кашля, усталости, затрудненного дыхания, озноба, боли в суставах или мышцах, отхаркивания, выделения мокроты, одышки, миалгии, артралгии или боль в горле, головной боли, тошноты, рвоты, диареи, боли в пазухах носа, заложенности носа, снижения или изменения обоняния или вкуса, отсутствия аппетита, потери веса, боли в животе, конъюнктивита, кожной сыпи, лимфомы, апатии и сонливости, более предпочтительно – не имеет лихорадку, кашель, усталость, затрудненное дыхание, озноб, боли в суставах или мышцах, отхаркивание, выделение мокроты, одышку, миалгию, артралгию или боль в горле, головную боль, тошноту, рвота, диарею, боль в пазухах носа, заложенность носа, снижение или изменение обоняния или вкуса, при этом (референсный) субъект с легкими симптомами не нуждается в интенсивной терапии и (или) искусственной вентиляции. (Референсного) субъекта с легкими симптомами можно определить с помощью одного из приведенных выше определений или любой их комбинации.

Референсный субъект может представлять собой ребенка, в частности ребенка, возраст которого составляет меньше чем 10 лет, предпочтительно – меньше чем 5 лет. Возраст референсного субъекта может составлять от 1 года до 10 лет, предпочтительно – от 2 лет до 5 лет.

(Референсный) субъект во время вирусной инфекции или с вирусной инфекцией, в частности – коронавирусной инфекцией, более конкретно – инфекцией SARS-CoV-2, представляет собой субъекта, который предпочтительно является (референсным) субъектом, инфицированным вирусом, в частности – коронавирусом, более конкретно – SARS-CoV-2. «Инфицированный (референсный) субъект» означает, что вирус, в частности коронавирус, более конкретно – вирус SARS-CoV-2, проник в клетки организма данного (референсного) субъекта и предпочтительно размножается в клетках организма данного (референсного) субъекта.

После заражения вирусом, в частности коронавирусом, более конкретно – SARS-CoV-2, уровни интерферона-гамма у данного инфицированного субъекта повышаются. Повышенный уровень интерферона-гамма, в свою очередь, приводит к повышению уровня ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2). Повышенные уровни ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) стимулируют повышенную активность и прайминг шиповидного белка протеазами. Затем эндогенные уровни AAT снижаются в ответ на повышенный уровень активности по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок. Впоследствии эндогенный уровень AAT снижается еще больше, поскольку AAT связывает (и ингибирует) активные протеазы, праймирующие шиповидный белок. Субъекты, имеющие по меньшей мере одно из следующей группы: i) более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (AAT), ii) более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, iii) более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) и iv) более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ), по сравнению с по меньшей мере одним референсным субъектом, особенно восприимчивы к развитию заболевания или синдрома в ответ на вирус, в частности – коронавирус, более конкретно – инфекцию SARS-CoV-2. Следовательно, данные субъекты, представляющие интерес, особенно актуальны и подходят для лечения и (или) профилактики с использованием композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (AAT), его варианта, изоформы и (или) фрагмента. Указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент могут представлять собой выделенный из плазмы крови ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент, в частности – выделенный из плазмы крови человека ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент; или рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент; предпочтительно, белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), его вариант, изоформу и (или) фрагмент. Более предпочтительно, белок ААТ представляет собой рекомбинантный белок альфа-1-антитрипсин (рчААТ), продуцируемый в клетке яичника китайского хомячка (CHO) и (или) в клетке эмбриональной почки человека (HEK).

Данное изобретение также относится к композиции для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, у субъекта, нуждающегося в этом, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), рекомбинантного белка альфа-1-антитрипсина (рчААТ), их варианта, изоформы и (или) фрагмента, при этом указанный субъект, нуждающийся в этом, имеет по меньшей мере один признак, выбранный из группы, состоящей из следующего:

1. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (AAT) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

2. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

3. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

4. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы

Указанный по меньшей мере один субъект, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы, также указан как по меньшей мере один референсный субъект. Референсный субъект определяется так, как описано в данном документе.

«Субъект, нуждающийся в этом» также указан в данном документе как «субъект, представляющий интерес». Указанная необходимость лечения и (или) профилактики синдрома заболевания, связанного с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, определяется так, как описано в данном документе.

Уровни, определенные в пунктах i)-iv), могут представлять собой уровни белка и (или) уровни мРНК, предпочтительно – уровень белка или мРНК. Уровень (уровни) белка измеряют с помощью анализов на основе антител, таких как твердофазный иммуноферментный анализ (ТИФА, англ. «ELISA»), и (или) биослойной интерферометрией (БСИ, англ. «BLI») на основе оптоволоконных биосенсоров (ForteBio Octet).

Уровень протеазы, праймирующей шиповидный белок, можно определять путем измерения активности протеазы шиповидного белка с использованием флуорогенных пептидов, полученных из шиповидного белка SARS-CoV-2. Соответствующий способ описан в работе Jaimes et. al (Javier A. Jaimes, Jean K. Millet, Gary R. Whittaker Proteolytic Cleavage of the SARS-CoV-2 Spike Protein and the Role of the Novel S1/S2 Site, CELL, iScience 23, 101212, June 26, 2020). Transparent Methods Peptides: Флуорогенные пептиды, полученные из участков S1/S2 шиповидного (-ых) белка (-ов) (S) SARS-CoV-2, состоящие из последовательностей HTVSLLRSTSQ (SEQ ID NO: 3) и TNSPRRARSVA (SEQ ID NO: 4), соответственно, и содержащие (7-метоксикумарин-4-ил) ацетил/2,4-динитрофенил (MCA/DNP) FRET-пару, были синтезированы в Biomatik (г. Уилмингтон, штат Делавэр, США). Рекомбинантный фурин может быть приобретен у New England Biolabs (г. Ипсвич, штат Массачусетс, США). Рекомбинантный трипсин, обработанный L-1-тозиламид-2-фенилэтилхлорметилкетоном (TPCK), может быть приобретен у Sigma-Aldrich (г. Сент-Луис, штат Миссури, США). Рекомбинантные ПК1, матриптаза, катепсин B и катепсин L могут быть приобретены у R&D Systems (г. Миннеаполис, штат Миннесота, США). Флуорогенный пептидный анализ: для каждого флуорогенного пептида реакцию проводят в объеме 100 мкл с буфером, состоящим из 100 мМ HEPES, 0,5% Triton X-100, 1 мМ CaCl2 и 1 мМ 2-меркаптоэтанола, рН 7,5 – для фурина (разбавленного до 10 Ед/мл); 25 мМ MES, 5 мМ CaCl2, 1% (масс./об.) Brij-35, рН 6,0 – для PC1 (разбавленного до 2,2 нг/мкл); ФСБ – для трипсина (разбавленного до 8 нМ); 50 мМ Tris, 50 мМ NaCl, 0,01% (об./об.) Tween® 20, рН 9,0 – для матриптазы (разбавленной до 2,2 нг/мкл); 25 мМ MES, рН 5,0 – для катепсина B (разбавленного до 2,2 нг/мкл); 50 мМ MES, 5 мМ DTT, 1 мМ EDTA, 0,005% (масс./об.) Brij-35, рН 6,0 – для катепсина L (разбавленного до 2,2 нг/мкл), и с пептидом, разбавленным до 50 мкМ. Реакции проводят при 30°C в трех повторностях, и излучение флуоресценции измеряют каждую минуту в течение 45 мин с помощью флуориметра SpectraMax (Molecular Devices, г. Саннивейл, штат Калифорния, США) с настройкой длин волн λ возбуждения = 330 нм и λ излучения = 390 нм, что позволяет отслеживать интенсивность флуоресценции с течением времени и вычислять Vmax реакций. Анализы следует проводить в трех повторностях, а результаты представлять в виде средних значений Vmax из трех независимых экспериментов.

Уровень белка ИФН-γ можно измерять с помощью проточной цитометрии, иммуноанализа на основе частиц. Можно адаптировать способ, указанный в работе Huang et. al., (Huang KJ, Su IJ, Theron M, et al. An interferon-gamma-related cytokine storm in SARS patients. J Med Virol. 2005;75(2):185-194. doi:10.1002/jmv.20255). Наборы реактивов BD Human Th1/Th2 Cytokine или Chemokine Bead Array (CBA) Kit. Набор реактивов BD Human Th1/Th2 Cytokine CBA Kit (BD PharMingen, г. Сан-Диего, штат Калифорния, США) – для измерения уровней ИФН-γ способом проточной цитометрии в основанном на частицах иммуноанализе. Данный набор позволял одновременно измерять содержание шести цитокинов в 50 мл образца сыворотки крови пациента. Пределы обнаружения для данных иммуноферментных анализов составляют 7,1 пг/мл для ИФН-γ.

Предпочтительно, эндогенный уровень ААТ, как описано в данном документе, представляет собой уровень белка. Уровень указанной по меньшей мере одной протеазы шиповидного белка, как описано в данном документе, предпочтительно представляет собой уровень мРНК. Уровень рецептора ACE2, как описано в данном документе, предпочтительно представляет собой уровень мРНК. Уровень ИФН-γ, как описано в данном документе, предпочтительно представляет собой уровень белка. Уровни белка и (или) мРНК можно измерять в крови, моче или слюне, предпочтительно – в крови, более предпочтительно – в плазме крови, наиболее предпочтительно – в плазме крови человека.

Некоторые факторы проникновения вирусов, в частности – коронавирусов, более конкретно – вируса SARS-CoV-2, в клетки и их размножения в клетках уже изучены, в то время как другие все еще являются предметом изучения. Проникновение вируса SARS-CoV-2 опосредуется шиповидным белком, протеазой (-ами), праймирующей (-ими) шиповидный белок, и рецептором ACE2. Шиповидный белок SARS-CoV-2 также называют шиповидным белком S. Протеаза, праймирующая шиповидный белок, расщепляет шиповидный белок SARS-CoV-2, тем самым подготавливая SARS-CoV-2 к проникновению в клетку. SARS-CoV-2 проникает в клетку путем взаимодействия праймированного шиповидного белка с рецептором ACE. Следовательно, если по меньшей мере одна или большее число праймирующих протеаз присутствуют в объекте, представляющем интерес, то проникновение вируса SARS-CoV-2 в клетки происходит легче и быстрее. Кроме того, чем больше присутствует рецепторов ACE2, тем легче и быстрее вирус SARS-CoV-2 проникает в клетки. Инфекция SARS-CoV-2 приводит к воспалению и, следовательно, к повышенной экспрессии ИФН-γ. Экспрессия ИФН-γ в ответ на инфекцию SARS-CoV-2, в свою очередь, может привести к повышенной экспрессии рецептора ACE2. Во время пролиферации SARS-CoV-2 уровни ИФН-γ еще больше повышаются, стимулируя усиление взаимодействия ACE2 с шиповидным белком и, следовательно, прайминг шиповидного белка, уровни AAT снижаются, и при проникновении вируса в клетки воспаление усиливается, что приводит к еще более высоким уровням ИФН-γ. После заражения SARS-CoV-2, во-первых, повышаются уровни ИФН-γ, во-вторых, снижаются уровни AAT и повышаются уровни катепсина L и (или) других протеаз, праймирующих шиповидный белок (протеаз S-прайминга).

Следовательно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что ААТ, так же, как и рчААТ, одновременно уменьшает проникновение вируса и связанное с вирусом воспаление, в частности, связанное с вирусом воспаление из-за высоких уровней ИФН-γ. Данный комбинированный эффект особенно полезен в популяциях пациентов, описанных в данном документе.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанная протеаза, праймирующая шиповидный белок, представляет собой по меньшей мере одну протеазу, выбранную из группы, состоящей из трансмембранной сериновой протеазы подтипа 2 (TMPRSS2), трансмембранной протеазы подтипа 6 (TMPRSS6), катепсина L, катепсина В, пропротеинконвертазы 1 (PC1), трипсина, эластазы, эластазы нейтрофилов, матриптазы и фурина.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанная протеаза, праймирующая шиповидный белок, представляет собой катепсин L и (или) фурин.

ААТ экспрессируется эндогенно в организме человека. ААТ также указан как «ингибитор альфа-1-протеиназы». AAT способен ингибировать протеазы, в частности протеазы шиповидного белка, такие как трансмембранная сериновая протеаза подтипа 2 (TMPRSS2), трансмембранная протеаза подтипа 6 (TMPRSS6 / матриптаза-2), катепсин L, катепсин В, пропротеинконвертаза 1 (PC1), трипсин, эластаза, эластаза нейтрофилов, матриптаза и фурин. Если уровни четырех главных молекул согласно данному изобретению (AAT, протеазы (протеаз), праймирующей (-их) шиповидный белок, рецептора ACE2 и ИФН-γ) изменены у представляющего интерес инфицированного субъекта по сравнению с референсным субъектом, указанный представляющий интерес инфицированный субъект может получить особую пользу от лечения и (или) профилактики заболевания или синдрома, связанных с инфекцией SARS-CoV-2. Низкие уровни эндогенного AAT могут привести к более высокой восприимчивости представляющего интерес субъекта к развитию заболевания или синдрома, связанных с SARS-CoV-2, в частности – к развитию COVID-19.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом более низкий уровень эндогенного AAT до вирусной инфекции или во время вирусной инфекции вызван дефицитом AAT.

Альфа-1-антитрипсин (далее «ААТ») представляет собой белок, который естественным образом содержится в организме человека и вырабатывается в печени, предпочтительно в гепатоцитах. Согласно работе Janciauskiene et. al., (Janciauskiene SM, Bals R, Koczulla R, Vogelmeier C, Köhnlein T, Welte T. The discovery of α1-antitrypsin and its role in health and disease. Respir Med. 2011; 105 (8): 1129-1139. Doi:10.1016/j.rmed.2011.02.002), нормальная концентрация ААТ в плазме крови варьирует от 0,9 г/л до 1,75 г/л. Учитывая молекулярную массу, составляющую 52000 (Brantly M, Nukiwa T, Crystal RG. Molecular basis of alpha-1-antitrypsin deficiency. Am J Med. 1988; 84 (6A): 13-31. doi:10.1016/0002-9343(88)90154-4), это соответствует нормальной концентрации в плазме крови, составляющей от 16 мкМ до 32 мкМ. В работе Crystal 1990 (Crystal RG. Alpha 1-antitrypsin deficiency, emphysema, and liver disease. Genetic basis and strategies for therapy. J Clin Invest. 1990 May; 85 (5): 1343-52. doi: 10.1172/JCI114578. PMID: 2185272; PMCID: PMC296579) описано, что 11 мкМ – это пороговый уровень для клинического проявления дефицита ААТ. Для большинства здоровых людей 2 г ежесуточной экспрессии AAT в печени достаточно, чтобы достичь данного критического уровня в сыворотке крови, равного 11 мкМ, тогда уровень эндогенного AAT достаточен для защиты нижних дыхательных путей от разрушения эластазой нейтрофилов (ЭН) и ингибирования прогрессирующего разрушения альвеол, которое приводит к эмфиземе. В работе Crystal, 1990 далее отмечается, что нормальные эндогенные уровни ААТ у здоровых людей варьируют в пределах 20-53 мкM. Эндогенные уровни белка AAT в плазме крови здоровых людей до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, находятся в диапазоне от 5 до 60 мкМ, предпочтительно – от 10 до 40 мкМ, более предпочтительно – от 25 до 30 мкМ, еще более предпочтительно – от 16 до 32 мкМ. В качестве альтернативы, эндогенные уровни белка AAT в плазме крови здоровых людей до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, предпочтительно превышают 30 мкМ, более предпочтительно превышают 40 мкМ, наиболее предпочтительно превышают 50 мкМ. Белок ААТ может представлять собой белок ААТ плазмы крови или рекомбинантный белок ААТ (рчААТ). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения белок ААТ плазмы получают из плазмы крови. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения рекомбинантный белок AAT продуцируется рекомбинантно, например, в клетках HEK, клетках CHO или клетках E. coli. Фармацевтические компании по всему миру получают белок AAT из плазмы крови человека для лечения дефицита AAT – наследственного заболевания. ААТ, полученный из плазмы крови, одобрен в США и ЕС Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) и Европейским агентством по лекарственным средствам (EMA), соответственно. Предпочтительно, белок ААТ согласно данному изобретению имеет человеческую аминокислотную последовательность, наиболее предпочтительно – как представлено в SEQ ID NO: 1.

ААТ в концентрации 10 мкМ уменьшает проникновение псевдовируса на 20-30% в клетки A549, которые сверхэкспрессируют рецептор ACE2.

Согласно работе Azouz et. al. (Nurit P. Azouz, Andrea M. Klingler and Marc E. Rothenberg, Alpha1-Antitrypsin (AAT) is an Inhibitor of the SARS-CoV-2–Priming Protease TMPRSS2, (bioRxiv preprint online, https://doi.org/10.1101/2020.05.04.077826, posted on May 5, 2020), концентрации ААТ, составляющие 1-100 мкМ, обеспечивают дозозависимое ингибирование протеолитической активности TMPRSS2.

ААТ в концентрации 100 мкМ уменьшает проникновение псевдовируса на 50-75% в клетки A549, которые сверхэкспрессируют только рецептор ACE2.

ААТ в концентрации 100 мкМ уменьшает проникновение псевдовируса лишь вплоть до 45% в клетках A549, которые сверхэкспрессируют как рецептор ACE2, так и протеазу TMPRSS2, праймирующую шиповидный белок.

Важно отметить, что проникновение вируса наблюдается независимо от TMPRSS2. Это демонстрирует, что праймирующие протеазы, такие как фурин и (или) катепсин L, способны заменять TMPRSS2, вероятно, среди прочих. В связи с этим ААТ, так же, как и рчААТ, снижает активность протеаз – катепсина В, катепсина L, трипсина, фурина, PC1, матриптазы, эластазы и эластазы нейтрофилов.

Следовательно, ингибирующий эффект AAT, так же, как и рчААТ, на проникновение вируса выходит за рамки действия других ингибиторов TMPRSS2, поскольку AAT, так же, как и рчААТ, эффективно ингибирует несколько праймирующих протеаз (например, протеазы, которые могут заменить функцию TMPRSS2) и последующее ACE2-опосредованное проникновение вируса.

Следовательно, AAT, так же, как и рчААТ, уменьшает проникновение вируса за счет снижения активности праймирующей протеазы, в частности, за счет широкого и эффективного снижения активности праймирующей (-их) протеазы (протеаз).

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на удивительном открытии того, что композиции, содержащие ААТ и (или) рчААТ, их варианты, изоформы и (или) фрагменты, являются особенно эффективными в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, в частности, у субъекта, имеющего одно или большее число предшествующих состояний, как описано в данном документе.

В данном изобретении более низкий уровень эндогенного ААТ в соответствии с i) предпочтительно представляет собой уровень белка в плазме крови человека. В соответствии с i), уровень эндогенного белка ААТ в плазме крови человека предпочтительно составляет меньше чем 200 мкМ, предпочтительно – меньше чем 150 мкМ, 100 мкМ, меньше чем 90, мкМ, меньше чем 80 мкМ, меньше чем 70 мкМ, меньше чем 60 мкМ, меньше чем 50 мкМ, меньше чем 40 мкМ, меньше чем 30 мкМ, меньше чем 25 мкМ, меньше чем 20 мкМ, меньше чем 15 мкМ, меньше чем 11 мкМ или меньше чем 10 мкМ. Более предпочтительно – меньше чем 200 мкМ, меньше чем 25 мкМ, меньше чем 15 мкМ или меньше чем 11 мкМ. Низкого уровня ААТ не достаточно для успешного ингибирования протеазы (протеаз), праймирующей (-их) шиповидный белок. Следовательно, низкий уровень эндогенного ААТ может способствовать пролиферации вируса, в частности – пролиферации коронавируса, более конкретно – пролиферации SARS-CoV-2, и (или) развитию заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2. Более низкий уровень эндогенного ААТ до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, может вызываться дефицитом ААТ, предпочтительно, более низкий уровень эндогенного ААТ до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, вызван дефицитом ААТ. Дефицит ААТ представляет собой состояние, которое наследуется по аутосомно-кодоминантному типу. Кодоминантность означает, что могут быть активны (экспрессироваться) две разные версии гена, и обе версии вносят вклад в генетический признак. Наиболее распространенная версия (аллель) гена SERPINA1, называемая M, продуцирует нормальные уровни альфа-1-антитрипсина. Большинство людей в общей популяции имеют по две копии аллели M (MM) в каждой клетке. Другие версии гена SERPINA1 приводят к снижению уровня альфа-1-антитрипсина. Например, аллель S продуцирует умеренно низкие уровни данного белка, а аллель Z продуцирует очень низкие уровни альфа-1-антитрипсина. Индивидуумы с двумя копиями аллели Z (ZZ) в каждой клетке, вероятно, будут иметь дефицит альфа-1-антитрипсина. Индивидуумы, имеющие комбинацию SZ, имеют повышенный риск развития заболеваний легких (таких как эмфизема легких), особенно в случае курения. По оценкам, 161 миллион человек во всем мире имеют по одной копии аллели S или Z и по одной копии аллели M в каждой клетке (MS или MZ). Индивидуумы, имеющие комбинацию MS (или SS), как правило, продуцируют достаточное количество альфа-1-антитрипсина для защиты легких. Однако люди с аллелями MZ имеют несколько повышенный риск нарушения функции легких или печени. Субъекты с дефицитом AAT согласно данному изобретению предпочтительно имеют мутацию ZZ, мутацию SZ, мутацию MS, мутацию MZ или мутацию SS гена SERPINA1, предпочтительно – мутацию ZZ. Низкие уровни секреции AAT при мутации ZZ гена SERPINA1 обусловлены неправильным сворачиванием AAT и его последующим накоплением в эндоплазматическом ретикулуме (ЭР) гепатоцитов (Crystal 1990), что приводит к прогрессирующей болезни печени, поскольку накопление неправильно свернутого AAT негативно влияет на здоровье гепатоцитов, впоследствии приводя к их гибели.

Более низкий уровень эндогенного AAT во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, также может быть вызван вирусной инфекцией, коронавирусной инфекцией или инфекцией SARS-CoV-2, соответственно. То есть уровень эндогенного AAT у референсного субъекта может временно повышаться во время вирусной инфекции, поскольку здоровые гепатоциты пытаются компенсировать снижение уровней эндогенного AAT, в то время как уровень эндогенного AAT у субъекта с генетическим дефицитом AAT будет более низким из-за отсутствия или неполного повышения, вызванного вирусной инфекцией (недостаток здоровых гепатоцитов).

Более низкий уровень эндогенного ААТ также может быть вызван заболеванием печени, таким как неалкогольная жировая болезнь печени, сахарный диабет типа 1 или 2 (предпочтительно – типа 1), ожирение и сердечно-сосудистые заболевания. Накопление отложений жирных кислот в печени приводит к повышенному стрессу (повышенный уровень ИФН-γ), воспалению тканей и последующему повреждению гепатоцитов, что приводит к снижению уровня здоровой секреции AAT. Как и при других типах заболеваний печени, важно отметить, что дефицит AAT со временем приводит к заболеванию печени, поскольку накопление неправильно свернутого AAT в ЭР гепатоцитов в конечном итоге вызывает печеночную недостаточность.

В данном изобретении протеаза, праймирующая шиповидный белок, может представлять собой любую протеазу, способную праймировать шиповидный белок вируса, предпочтительно – коронавируса, более предпочтительно – SARS-CoV-2. Предпочтительно, протеаза, праймирующая шиповидный белок, представляет собой по меньшей мере одну из группы, состоящей из трансмембранной сериновой протеазы подтипа 2 (TMPRSS2), трансмембранной протеазы подтипа 6 (TMPRSS6), катепсина L, катепсина В, пропротеинконвертазы 1 (PC1), трипсина, эластазы, эластазы нейтрофилов, матриптазы и фурина, более предпочтительно – TMPRSS2, катепсина L и фурина, еще более предпочтительно – катепсина L и фурина. Указанная протеаза, праймирующая шиповидный белок, представляет собой фурин, также называемый ферментом, расщепляющим парные основные аминокислоты (PACE).

Более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, предпочтительно – катепсина L, как описано в данном документе, предпочтительно представляет собой уровень мРНК в плазме крови человека или уровень белка в плазме крови человека. Концентрация катепсина L в плазме крови здоровых субъектов составляет от 0,2 нг/мл до 1 нг/мл (т. е. от 10 пМ до 50 пМ при молекулярной массе около 23-24 кДа; (Kirschke 1977 https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1432-1033.1977.tb11393.x). Более того, известно, что иммунокомпетентные клетки являются основным источником внеклеточных цистеиновых катепсинов при воспалении, в том числе в головном мозге (Hayashi et al., 2013, von Bernhardi et al., 2015, Wendt et al., 2008, Wendt et al., 2007). Уровень указанной по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, как описано в данном документе, предпочтительно превышает 0,2, 0,5 или 1 нг/мл в плазме крови человека. Уровень указанной по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, как описано в данном документе, предпочтительно превышает 10, 20, 30, 40, 50, 75 или 100 пМ, предпочтительно превышает 10, или 50 пМ, еще более предпочтительно превышает 50 пМ. В данном варианте осуществления данного изобретения указанная по меньшей мере одна протеаза, праймирующая шиповидный белок, предпочтительно представляет собой катепсин L. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанная по меньшей мере одна протеаза, праймирующая шиповидный белок, описанная в данном документе, представляет собой по меньшей мере две, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять протеаз, праймирующих шиповидный белок. В определенных вариантах осуществления данного изобретения по меньшей мере одна из протеаз, праймирующих шиповидный белок, описанная в данном документе, представляет собой по меньшей мере одну протеазу, выбранную из группы, состоящей из TMPRSS2, катепсина В, катепсина L, трипсина, фурина, PC1, матриптазы, эластазы и эластазы нейтрофилов. В определенных вариантах осуществления данного изобретения по меньшей мере одна из протеаз, праймирующих шиповидный белок, описанная в данном документе, представляет собой по меньшей мере одну протеазу, выбранную из группы, состоящей из TMPRSS2, катепсина В, катепсина L, трипсина, фурина, PC1 и матриптазы.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, обусловлен возрастом и (или) генетической предрасположенностью.

Более высокий уровень указанной по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, может быть вызван возрастом и (или) генетической предрасположенностью. В частности, более высокий уровень катепсина В и L, предпочтительно катепсина В, может быть вызван возрастом. Более высокие уровни протеазы шиповидного белка, в частности катепсина В и L, более предпочтительно – катепсина В, могут накапливаться в лизосоме. Уровень протеазы, праймирующей шиповидный белок, является более высоким у представляющих интерес субъектов, возраст которых превышает 50 лет, предпочтительно превышает 60 лет, более предпочтительно превышает 70 лет, еще более предпочтительно превышает 80 лет и наиболее предпочтительно превышает 90 лет. Субъекты афроамериканского происхождения могут иметь генетическую предрасположенность к более высоким уровням протеазы, праймирующей шиповидный белок, в частности фурина. Клетки HeLa отличаются относительным содержанием мРНК фурина и катепсина L по сравнению с клетками A549. Клетки HeLa имеют афроамериканское происхождение. Клетки A549 представляют собой эпителиальные клетки дыхательных путей европеоидного происхождения. Клетки HeLa более восприимчивы к проникновению SARS-CoV-2, чем клетки A549, и в меньшей степени отвечают на лечение с помощью AAT. Генетическую предрасположенность можно определить путем генетического профилирования отдельных субъектов, представляющих интерес.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом более высокий уровень рецептора ACE2 вызывается по меньшей мере одним из следующего: инфекцией, воспалением, возрастом и генетической предрасположенностью.

Более высокий уровень рецептора ACE2, как описано в данном документе, предпочтительно представляет собой уровень мРНК в плазме крови человека. Более высокий уровень рецептора ACE2 может быть вызван по меньшей мере одним из следующей группы: инфекцией, воспалением (например, ИФН-γ), возрастом и генетической предрасположенностью. Указанная инфекция может представлять собой вирусную инфекцию и (или) бактериальную инфекцию, предпочтительно – вирусную инфекцию, более предпочтительно – коронавирусную инфекцию, еще более предпочтительно – инфекцию SARS или SARS-CoV-2. Дополнительным примером инфекции является лейшманиоз. Экспрессия рецептора ACE2 повышается в ответ на более высокие уровни ИФН-γ, уровни которого, в свою очередь, повышаются как иммунный ответ на воспаление. Воспаление может быть вызвано, например, бактериальной и (или) вирусной инфекцией, онкологическими заболеваниями, гиперчувствительностью замедленного типа; аутоиммунными заболеваниями (такими как аутоиммунный энцефаломиелит, ревматоидный артрит, аутоиммунный инсулит (также называемый сахарным диабетом типа 1), отторжением аллотрансплантата и реакцией «трансплантат против хозяина», неспецифическим воспалением и высвобождением цитокинов. Предпочтительно, указанный возраст превышает 50 лет, предпочтительно превышает 60 лет, более предпочтительно превышает 70 лет, еще более предпочтительно превышает 80 лет и наиболее предпочтительно превышает 90 лет. Примером генетической предрасположенности к высокому уровню ИФН-γ является семейная средиземноморская лихорадка. Генетическую предрасположенность можно определить путем генетического профилирования отдельных субъектов, представляющих интерес. Более высокий уровень рецептора ACE2, как описано в данном документе, также может присутствовать в ткани, выбранной из группы, состоящей из легкого (Calu3), толстой кишки (CaCo2), печени (HEPG2), почек (HEK-293T) и головного мозга (SH-SY5Y), что подтверждено способом кПЦР.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом более высокий уровень ИФН-γ вызывается по меньшей мере одним из следующего: инфекцией, воспалением, возрастом и генетической предрасположенностью.

Более высокий уровень интерферон-гамма (ИФН-γ) согласно iv) предпочтительно представляет собой уровень белка или мРНК в плазме крови человека, более предпочтительно – уровень белка в плазме крови человека. У здоровых людей уровень ИФН-γ находится ниже или около предела аналитического обнаружения, например, меньше чем 30-50 пг/мл) (Billau 1996; Kimura 2001). ИФН-γ продуцируется почти исключительно клетками – естественными киллерами (NK-клетками), CD4+ и некоторыми CD8+ лимфоцитами. Продуцирование ИФН-γ либо NK, либо Т-клетками требует взаимодействия вспомогательных клеток, главным образом мононуклеарных фагоцитов, которые также должны находиться в некотором состоянии активации (Billiau A. Interferon-gamma: biology and role in pathogenesis. Adv Immunol. 1996; 62:61-130. doi:10.1016/s0065-2776(08)60428-9). Следовательно, воспалительные состояния, приводящие к активации NK-клеток и Т-лимфоцитов, приводят к повышению уровней ИФН-γ. Ожидается, что воспалительное состояние с участием циркулирующих NK- или Т-клеток (инфекция, рак) приведет к повышению уровня в плазме крови.

В следующей таблице приведены значения уровней ИФН-γ в плазме крови при нескольких патологических состояниях.

Таблица 1

Патология Тип патологии ИФН-γ (пг/мл) Контроль ИФН-γ (пг/мл) Литературный источник SARS Инфекция 456 (острая фаза)
26,6 пМ 3,3 (контроль)
0,19 пМ Huang et. al.,
Huang, K.-J., Su, I.-J., Theron, M., Wu, Y.-C., Lai, S.-K., Liu, C.-C. and Lei, H.-Y. (2005), An interferon-γ-related cytokine storm in SARS patients. J. Med. Virol., 75: 185-194. Лейшманиоз Инфекция 118 (без лечения)
6,9 пМ 31 (с лечением)
1,8 пМ Hailu et. al.,
Hailu A, van der Poll T, Berhe N, Kager PA. Elevated plasma levels of interferon (IFN)-gamma, IFN-γ inducing cytokines, and IFN-γ inducible CXC chemokines in visceral leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg. 2004; 71 (5): 561-567. Средиземноморская семейная лихорадка Генетическое нарушение 19,4 (острый приступ)
1,1 пМ 4,8 (без приступов)
0,28 пМ Köklü et. al.,
Köklü S, Oztürk MA, Balci M, Yüksel O, Ertenli I, Kiraz S. Interferon-gamma levels in familial Mediterranean fever. Joint Bone Spine. 2005; 72 (1): 38-40. doi:10.1016/j.jbspin.2004.03.011

Уровень белка ИФН-γ в плазме крови человека согласно iv) предпочтительно превышает 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 300, 400 или 500 пг/мл. Более высокий уровень ИФН-γ предпочтительно вызывается по меньшей мере одним из следующего: инфекцией, воспалением, возрастом и генетической предрасположенностью, более предпочтительно – воспалением. Указанная инфекция может представлять собой вирусную инфекцию и (или) бактериальную инфекцию, предпочтительно – вирусную инфекцию, более предпочтительно – коронавирусную инфекцию, еще более предпочтительно – инфекцию SARS или SARS-CoV-2. Дополнительным примером инфекции является лейшманиоз. Воспаление может быть вызвано, например, бактериальной и (или) вирусной инфекцией, онкологическими заболеваниями, гиперчувствительностью замедленного типа; аутоиммунными заболеваниями (такими как аутоиммунный энцефаломиелит, ревматоидный артрит, аутоиммунный инсулит (также называемый сахарным диабетом типа 1), отторжением аллотрансплантата и реакцией «трансплантат против хозяина», неспецифическим воспалением и высвобождением цитокинов. Предпочтительно, указанный возраст превышает 50 лет, предпочтительно превышает 60 лет, более предпочтительно превышает 70 лет, еще более предпочтительно превышает 80 лет и наиболее предпочтительно превышает 90 лет. Примером генетической предрасположенности к высокому уровню ИФН-γ является семейная средиземноморская лихорадка. Генетическую предрасположенность можно определить путем генетического профилирования отдельных субъектов, представляющих интерес.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на удивительном открытии того, что композиции, содержащие ААТ, так же, как и рчААТ, их варианты, изоформы и (или) фрагменты, уменьшают как пролиферацию вируса, так и воспаление, в частности воспаление, связанное с ИФН-γ.

В одном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом», т. е. субъект, представляющий интерес, имеет два признака, выбранные из группы, состоящей из следующего:

5. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

6. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

7. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

8. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы

Следовательно, «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

9. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

10. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

Предпочтительно, в данном варианте осуществления данного изобретения уровень белка ААТ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более низким, чем 52 мкМ, и уровень белка катепсина L в плазме крови человека является более высоким, чем 10 пМ.

В другом варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

11. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (AAT) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

2. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В еще одном дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

12. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

13. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы

В данных вариантах осуществления данного изобретения 1 и 4 могут представлять собой по меньшей мере одно заболевание или патологическое состояние, выбранное из группы, состоящей из следующего: дефицит ААТ, заболевание печени, такое как неалкогольная жировая болезнь печени, сахарный диабет, ожирение и сердечно-сосудистое заболевание. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом более высокий уровень ИФН-γ вызывается по меньшей мере одним заболеванием или патологическим состоянием, выбранным из группы, состоящей из следующего: дефицит ААТ, заболевание печени, такое как неалкогольная жировая болезнь печени, сахарный диабет, ожирение и сердечно-сосудистое заболевание. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом более низкий уровень ААТ вызывается по меньшей мере одним заболеванием или патологическим состоянием, выбранным из группы, состоящей из следующего: дефицит ААТ, заболевание печени, такое как неалкогольная жировая болезнь печени, сахарный диабет, ожирение и сердечно-сосудистое заболевание. Сахарный диабет может относиться к сахарному диабету типа 1 или типа 2. Заболевание печени может представлять собой повреждение печени, вызванное ацетаминофеном, тяжелый хронический гепатит, алкогольную болезнь печени (АБП), охватывающую собой широкий спектр фенотипов, включительно с простым стеатозом, стеатогепатитом, фиброзом печени и циррозом печени, или даже ГЦК (гепатоцеллюлярной карциномой). Сердечно-сосудистое заболевание может представлять собой любое патологическое состояние, вызванное внезапным снижением или блокадой притока крови к сердцу, инфарктом миокарда, острым коронарным синдромом (ОКС), также у пациентов с острым инфарктом миокарда, при котором фракция выброса левого желудочка обратно коррелирует с концентрацией ААТ в сыворотке крови, что позволяет предположить, что систолическая дисфункция связана с воспалительной реакцией.

Предпочтительно, в данном варианте осуществления данного изобретения уровень белка ААТ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более низким, чем 52 мкМ, и уровень белка ИФН-γ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более высоким, чем 0,19 пМ.

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом», т. е. субъект, представляющий интерес, имеет два признака, выбранные из группы, состоящей из:

1. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

2. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

14. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В еще одном дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

1. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

2. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В еще одном дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

1. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

2. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В еще одном дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

1. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

2. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом», т. е. субъект, представляющий интерес, имеет три признака, выбранные из группы, состоящей из:

15. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

16. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

17. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

18. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

Следовательно, «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

19. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

20. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

21. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

22. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

23. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

24. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы

Предпочтительно, в данном варианте осуществления данного изобретения уровень белка ААТ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более низким, чем 36 мкМ, уровень белка катепсина L в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более высоким, чем 10 пМ, и уровень белка ИФН-γ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более высоким, чем 0,19 мМ.

Более предпочтительно, в данном варианте осуществления данного изобретения уровень белка ААТ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более низким, чем 52 мкМ, уровень белка катепсина L в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более высоким, чем 10 пМ, и уровень белка ИФН-γ в плазме крови человека, как описано в данном документе, является более высоким, чем 0,19 мМ.

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом» может иметь:

1. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

2. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

3. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения «субъект, нуждающийся в этом», т. е. субъект, представляющий интерес, имеет:

25. более низкий уровень эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

26. более высокий уровень по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

27. более высокий уровень ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы; и

28. более высокий уровень интерферона-гамма (ИФН-γ) у субъекта до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, по сравнению с по меньшей мере одним субъектом во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, который является бессимптомным или имеет легкие симптомы.

Белок ААТ в композиции для применения согласно данному изобретению может представлять собой белок ААТ плазмы крови, его вариант, изоформу и (или) фрагмент; или рекомбинантный белок ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент. Предпочтительно, указанные белок ААТ, его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный белок ААТ, его вариант, изоформу и (или) фрагмент. Белок AAT плазмы крови предпочтительно получают из белка AAT плазмы крови, более предпочтительно – из плазмы крови человека (также указан как AAT, выделенный из плазмы крови человека). В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный альфа-1-антитрипсин (также указанный в данном документе как «рчААТ»), его вариант, изоформу и (или) фрагмент.

Рекомбинантный белок AAT продуцируется рекомбинантно, например, клетках CHO, в клетках HEK (HEK293 и (или) HEK293T), или клетках E. coli. Фармацевтические компании по всему миру получают белок AAT из плазмы крови человека для лечения дефицита AAT – наследственного заболевания. ААТ, полученный из плазмы крови, одобрен FDA и EMA. Предпочтительно, белок ААТ согласно данному изобретению имеет человеческую аминокислотную последовательность, наиболее предпочтительно – как представлено в SEQ ID NO: 1. Рекомбинантный белок ААТ, его вариант, изоформа и (или) фрагмент предпочтительно являются свободными от домена Fc и (или) гистидиновой метки (His-метки).

Авторы данного изобретения обнаружили, что рекомбинантный AAT (рчААТ, продуцируемый в CHO) связывается с антителом против ААТ с другой аффинностью и обладает более выраженным биологическим эффектом, чем AAT, полученный из плазмы крови. В частности, рекомбинантный AAT (рчААТ) ингибирует опосредованное ACE2/шиповидным белком слияние с клеткой более эффективно, чем AAT, полученный из плазмы крови, и имеет другой профиль ферментативного ингибирования.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на удивительном открытии того, что рекомбинантный ААТ (рчААТ), продуцируемый в CHO, является особенно эффективным для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный альфа-1-антитрипсин, продуцируемый клетками человека (например, клетками HEK293 или HEK293T).

Авторы данного изобретения обнаружили, что рекомбинантный ААТ, продуцируемый в клетках человека, в частности – в HEK293 (без His-метки), является особенно эффективным в снижении ферментативной активности катепсина L, трипсина, фурина и эластазы нейтрофилов по сравнению с рекомбинантным AAT (рчААТ), продуцируемым в клетках CHO, а также AAT, полученным из плазмы крови.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на удивительном открытии того, что рекомбинантный ААТ, продуцируемый в клетках человека, в частности – в HEK293, является особенно эффективным в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2.

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанные белок альфа-1-антитрипсин (ААТ), его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный альфа-1-антитрипсин (рчААТ, продуцируемый в CHO), имеющий гликановый профиль, в большей степени не характерный для человека. В определенных вариантах осуществления данного изобретения гликановый профиль, не характерный для человека, описанный в данном документе, представляет собой гликановый профиль, характерный для клеток млекопитающих, и (или) глико-сконструированный гликановый профиль. Стратегии глико-конструирования, например, используемые для снижения фукозилирования и (или) усиления сиалилирования гликопротеинов, известны специалисту в данной области техники. В определенных вариантах осуществления данного изобретения гликановый профиль, не характерный для человека, описанный в данном документе, представляет собой гликановый профиль, характерный для клеток CHO. Клетки CHO экспрессируют другой механизм гликозилирования, чем клетки человека, что приводит к различному составу гликанов на поверхности рекомбинантных белков (Lalonde, M. E., & Durocher, Y., 2017, Journal of biotechnology, 251, 128-140).

В определенных вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанные белок ААТ, его вариант, изоформа и (или) фрагмент представляют собой рекомбинантный ААТ, продуцируемый pXC-17.4 (GS System, Lonza), его вариант, изоформу и (или) фрагмент.

Авторы данного изобретения обнаружили, что рекомбинантный AAT, продуцируемый pXC-17.4 (GS System, Lonza) в CHO (рекомбинантный AAT 1), индуцирует более выраженный ингибирующий эффект на активность эластазы и эластазы нейтрофилов, чем полученный из плазмы альфа-1-протеиназный ингибитор (AAT, полученный из плазмы) и рекомбинантный AAT, продуцируемый PL136/PL137 (pCGS3, Merck) в CHO (рекомбинантный AAT 2).

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на удивительном открытии того, что определенные формы рекомбинантного ААТ (рчААТ) являются особенно эффективными для применения в лечении и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2.

При употреблении в контексте данного документа термин «фрагмент» белка, пептида или полипептида ААТ согласно данному изобретению относится к последовательности, содержащей меньшее число аминокислот по длине, чем белок, пептид или полипептид ААТ согласно данному изобретению, в частности – меньшее число аминокислот, чем последовательность ААТ, представленная в SEQ ID NO:1. Указанный фрагмент предпочтительно представляет собой функциональный фрагмент, например, фрагмент с той же биологической активностью, что и белок ААТ, указанный в SEQ ID NO:1. Указанный функциональный фрагмент предпочтительно получен из белка ААТ, указанного в SEQ ID NO:1. Можно использовать любой фрагмент ААТ, который проявляет те же свойства, т. е. является биологически активным, что и нативная последовательность AAT, из которой он получен.

Указанный функциональный фрагмент может содержать или состоять из С-концевого фрагмента ААТ, указанного в SEQ ID NO: 2. C-концевой фрагмент SEQ ID NO: 2 состоит из аминокислот с 374 по 418 из SEQ ID NO: 1.

Более предпочтительно, указанный фрагмент ААТ представляет собой фрагмент, содержащий меньше аминокислот по длине, чем С-концевая последовательность ААТ 374-418 (SEQ ID NO: 2). В качестве альтернативы, фрагмент ААТ по существу состоит из SEQ ID NO: 2.

«Гомология» относится к процентной идентичности между двумя полинуклеотидными или двумя полипептидными фрагментами. Две нуклеиновые кислоты или две полипептидные последовательности являются «по существу гомологичными» друг другу, когда данные последовательности демонстрируют по меньшей мере около 50% идентичности последовательностей, предпочтительно – по меньшей мере около 75% идентичности последовательностей, более предпочтительно – по меньшей мере около 80% или по меньшей мере около 85% идентичности последовательностей, более предпочтительно – по меньшей мере около 90% идентичности последовательностей, и наиболее предпочтительно – по меньшей мере около 95%-98% идентичности последовательностей на протяжении определенной длины данных молекул. При употреблении в контексте данного документа термин «по существу гомологичные» также относится к последовательностям, которые полностью идентичны указанной последовательности.

В общем, «идентичность» относится к точному соответствию нуклеотид – нуклеотид или аминокислота – аминокислота двух полинуклеотидных или полипептидных последовательностей, соответственно. Процент идентичности можно определять путем прямого сравнения информации о последовательностях между двумя молекулами путем выравнивания последовательностей, подсчета точного числа совпадений между двумя выровненными последовательностями, деления на длину более короткой последовательности и умножения результата на 100.

В качестве альтернативы, гомологию можно определить с помощью легко доступных компьютерных программ или путем гибридизации полинуклеотидов в условиях, способствующих образованию стабильных дуплексов между гомологичными областями, с последующим расщеплением специфической (-ими) нуклеазой (-ами), специфичной (-ыми) в отношении одноцепочечных участков, и определения размера расщепленных фрагментов. Последовательности ДНК, которые по существу гомологичны, можно идентифицировать в эксперименте по саузерн-гибридизации, например, в строгих условиях, определенных для данной конкретной системы. Определение подходящих условий гибридизации находится в пределах компетенции специалиста в данной области техники.

В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к композиции для применения согласно данному изобретению, при этом указанный фрагмент альфа-1-антитрипсина представляет собой фрагмент С-концевой последовательности или любую их комбинацию.

Варианты пептидов могут представлять собой линейные пептиды или циклические пептиды и могут быть выбраны из группы, включающей в себя короткие циклические пептиды, полученные из С-концевой последовательности, как указано в SEQ ID NO: 2. Предпочтительно, указанные короткие циклические пептиды, полученные из С-концевой последовательности альфа-1-антитрипсина, выбраны из неограничивающей группы, включающей в себя цикло-(CPFVFLM)-SH, цикло-(CPFVFLE)-SH, цикло-(CPFVFLR)-SH и цикло-(CPEVFLM)-SH или любую их комбинацию.

При употреблении в контексте данного документа «изоформа» белка, пептида или полипептида ААТ относится к варианту сплайсинга, полученному в результате альтернативного сплайсинга мРНК ААТ.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения аминокислотная последовательность ААТ, его варианта, изоформы или фрагмента, как описано в данном документе, на по меньшей мере 80% идентична соответствующей аминокислотной последовательности в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения аминокислотная последовательность ААТ, его варианта, изоформы или фрагмента на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична соответствующей аминокислотной последовательности в SEQ ID NO: 1.

Пептид, его изоформа, фрагмент или вариант согласно данному изобретению предпочтительно могут быть конъюгированы с агентом, который увеличивает накопление данного пептида, его изоформы, фрагмента или варианта в целевой клетке, предпочтительно – в клетке дыхательных путей. Такой агент может представлять собой соединение, которое индуцирует рецептор-опосредованный эндоцитоз, такой как, например, опосредованный мембранным рецептором трансферрина эндоцитоз трансферрина, конъюгированного с терапевтическими лекарственными средствами (Qian Z. M. et al., “Targeted drug delivery via the transferrin receptor-mediated endocytosis pathway” Pharmacological Reviews, 54, 561, 2002), или проницаемый для клеточной мембраны носитель, который может быть выбран, например, из группы жирных кислот, таких как декановая кислота, миристиновая кислота и стеариновая кислота, которые уже использовали для внутриклеточной доставки пептидных ингибиторов протеинкиназы С (Ioannides C.G. et al., “Inhibition of IL-2 receptor induction and IL-2 production in the human leukemic cell line Jurkat by a novel peptide inhibitor of protein kinase C” Cell Immunol., 131, 242, 1990) и протеинтирозинфосфатазы Chem. 271, 14302, 1996), или из пептидов. Предпочтительно, используют носители, способные проникать через клеточную мембрану. Более предпочтительно, используют пептид-носитель, способный проникать через клеточную мембрану.

В случае, если носитель, способный проникать через клеточную мембрану, представляет собой пептид, то предпочтительно он представляет собой пептид, богатый положительно заряженными аминокислотами.

Предпочтительно, такой пептид, богатый положительно заряженными аминокислотами, представляет собой пептид, богатый аргинином. В работе Futaki et al. (Futaki S. et al., “Arginine-rich peptides. An abundant source of membrane-permeable peptides having potential as carriers for intracellular protein delivery” J. Biol. Chem., 276, 5836, 2001) было продемонстрировано, что число остатков аргинина в пептиде-носителе, способном проникать через клеточную мембрану, оказывает значительное влияние на способ интернализации и что, по-видимому, существует оптимальное число остатков аргинина для интернализации, предпочтительно, они содержат более 6 аргининов, более предпочтительно, они содержат 9 аргининов. Богатый аргинином пептид предпочтительно содержит по меньшей мере 6 аргининов, более предпочтительно – по меньшей мере 9 аргининов.

Указанные пептид, его изоформа, фрагмент или вариант могут быть конъюгированы с носителем, способным проникать через клеточную мембрану, с помощью спейсера (например, двух остатков глицина). В данном случае указанный носитель, способный проникать через клеточную мембрану, предпочтительно представляет собой пептид.

Как правило, пептиды, богатые аргинином, выбраны из неограничивающей группы, включающей в себя пептид ВИЧ-TAT 48-57 (GRKKRRQRRR; SEQ ID NO. 5), пептид оболочки FHV 35-49 (RRRRNRTRRNRRRVR; SEQ ID NO. 6), пептид HTLV-II Rex 4-16 (TRRQRTRRARRNR; SEQ ID NO. 7) и пептид BMV gag 7-25 (SEQ ID NO. 8).

Можно использовать любой носитель, способный проникать через клеточную мембрану, как определено квалифицированным специалистом.

Поскольку неотъемлемой проблемой нативных пептидов (в L-форме) является деградация природными протеазами, указанные пептид, его изоформу, фрагмент или вариант, а также пептид, способный проникать через клеточную мембрану, согласно данному изобретению можно получать с включением D-форм и (или) «ретро-инверсоизомеров» пептида. В данном случае получают ретро-инверсоизомеры фрагментов и вариантов указанного пептида, а также указанного пептида, способного проникать через клеточную мембрану, согласно данному изобретению.

Указанные пептид, его изоформу, фрагмент или вариант согласно данному изобретению, необязательно конъюгированные с агентом, который увеличивает накопление данного пептида в клетке, можно получать с помощью различных способов и методик, известных в данной области техники, таких как, например, химический синтез или рекомбинантные методики, как описано в работе Maniatis et al. 1982, Molecular Cloning, A laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory.

Пептид, его изоформа, фрагмент или вариант согласно данному изобретению необязательно конъюгированы с агентом, который увеличивает накопление данного пептида в клетке, как описано в данном документе, предпочтительно полученным рекомбинантно в клеточной системе экспрессии. Большое разнообразие одноклеточных клеток-хозяев пригодно для экспрессии последовательностей ДНК согласно данному изобретению. Данные хозяева могут включать в себя хорошо известных эукариотических и прокариотических хозяев, таких как штаммы E. coli, Pseudomonas, Bacillus, Streptomyces, грибы, такие как дрожжи, и клетки животных, такие как клетки CHO, YB/20, NSO, SP2/0, Rl. 1, B-W и L-M, клетки почки африканской зеленой мартышки (например, COS 1, COS 7, BSCl, BSC40 и BMTlO), клетки насекомых (например, Sf9) и клетки человека, а также клетки растений, в культуре тканей.

Под «терапевтически эффективными дозой или количеством» белка альфа-1-антитрипсина, его варианта, изоформы и (или) фрагмента авторы данного изобретения подразумевают любое количество, которое при введении приводит к положительному терапевтическому или профилактическому ответу, связанному с лечением, у субъекта, в отношении заболевания или синдрома, связанных с коронавирусной инфекцией.

Термин «коронавирусная инфекция» может относиться к инфекции, вызванной коронавирусом, выбранным из группы, содержащей MERS-CoV, SARS-CoV и SARS-CoV-2, а также к любому их варианту. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вариант SARS-CoV-2, описанный в данном документе, представляет собой вариант SARS-CoV-2, выбранный из линии поколений B.1.1.207, линии поколений B.1.1.7, кластера 5, варианта 501.V2, линии поколений P.1, линии поколений B.1.429 / CAL.20C, линии поколений B.1.427, линии поколений B.1.526, линии поколений B.1.525, линии поколений B.1.1.317, линии поколений B.1.1.318, линии поколений B.1.351, линии поколений B.1.617 и линии поколений P.3. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вариант SARS-CoV-2, описанный в данном документе, представляет собой вариант SARS-CoV-2, описываемый кладой Nextstrain, выбранной из группы 19A, 20A, 20C, 20G, 20H, 20B, 20D, 20F, 20I и 20E. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вариант SARS-CoV-2, описанный в данном документе, представляет собой вариант SARS-CoV-2, содержащий по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы D614G, E484K, N501Y, S477G/N, P681H, E484Q, L452R и P614R. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вариант SARS-CoV-2, описанный в данном документе, представляет собой вариант SARS-CoV-2, полученный из вариантов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения вариант SARS-CoV-2, описанный в данном документе, представляет собой вариант SARS-CoV-2, последовательность которого на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% идентична последовательности вирусного генома по меньшей мере одного из вариантов SARS-CoV-2, описанных в данном документе.

Коронавирусная инфекция может вызвать инфекцию дыхательных путей, приводящую к заболеванию или синдрому, которые являются респираторным синдромом. Указанный респираторный синдром может представлять собой тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС). В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанная инфекция SARS-CoV-2 представляет собой по меньшей мере одно из следующих трех клинических проявлений инфекций, которые можно различить: (1) легкое заболевание с проявлениями со стороны верхних дыхательных путей, (2) пневмония, не представляющая угрозы для жизни, и (3) тяжелое состояние с пневмонией, острым респираторным дистресс-синдромом (ОРДС), тяжелым системным воспалением, органной недостаточностью, сердечно-сосудистыми осложнениями.

Композиция для применения согласно данному изобретению может дополнительно содержать один или большее число фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей.

«Фармацевтически приемлемые разбавитель или носитель» означают носитель или разбавитель, которые полезны при приготовлении фармацевтической композиции, которые являются в общем безопасными, нетоксичными и желательными, и включают в себя носители или разбавители, приемлемые для фармацевтического применения у человека.

Такие фармацевтически приемлемые носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включительно с нефтяными маслами, маслами животного, растительного или синтетического происхождения, такими как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т. п. Вода является предпочтительным носителем, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. В качестве жидких носителей, в частности, для растворов для инъекций, также можно применять солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерола.

Фармацевтически приемлемые разбавитель или носитель включают в себя крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, натрий стеарат, глицерол моностеарат, тальк, натрий хлорид, сухое обезжиренное молоко, глицерол, пропиленгликоль, воду, этанол и т. п.

Фармацевтические композиции могут дополнительно содержать одну или большее число фармацевтически приемлемых солей, например, соль минеральной кислоты, такую как гидрохлорид, гидробромид, фосфат, сульфат и т. п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т. п. Дополнительно могут также присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, рН-буферные агенты, гели и гелеобразующие материалы, вкусовые добавки, красители, микросферы, полимеры, суспендирующие агенты и т. п. В дополнение к этому, также могут присутствовать один или большее число других типичных фармацевтических ингредиентов, таких как консерванты, увлажнители, суспендирующие агенты, поверхностно-активные агенты, антиоксиданты, агенты против слеживания, наполнители, хелатообразующие агенты, покрывающие агенты, химические стабилизаторы и т. д., особенно если лекарственная форма представляет собой восстанавливаемую форму. Подходящие иллюстративные ингредиенты включают в себя макрокристаллическую целлюлозу, карбоксиметилцеллюлозу натрия, полисорбат 80, фенилэтиловый спирт, хлорбутанол, сорбат калия, сорбиновую кислоту, диоксид серы, пропилгаллат, парабены, этилванилин, глицерин, фенол, парахлорфенол, желатин, альбумин и их комбинацию. Подробное обсуждение фармацевтически приемлемых эксципиентов доступно в работе REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Pub. Co., N.J. 1991), которая включена в данный документ посредством ссылки.

В качестве альтернативы, фармацевтические композиции согласно данному изобретению дополнительно содержат один или большее число дополнительных терапевтических агентов. Предпочтительно, указанные один или большее число терапевтических агентов включают в себя терапевтически эффективное количество одного или большего числа из следующих: аналога нуклеозида, ингибитора протеазы, иммуносупрессора (например, сарилумаба или тоцилизумаба), хлорохина, антибиотика гидроксихлорохина, антитела, направленного против структурных компонентов вируса или его фрагмента (например, пассивная иммунотерапия), интерферона-бета (например, интерферона бета-1а) и (или) вакцины.

В определенных других вариантах осуществления данного изобретения указанные фармацевтические композиции согласно данному изобретению и указанные один или большее число дополнительных терапевтических агентов вводят по существу одновременно или параллельно. Например, субъекту можно вводить фармацевтическую композицию для применения согласно данному изобретению во время прохождения им курса лечения одним или большим числом дополнительных терапевтических агентов. В дополнение к этому, предусмотрено, что указанный субъект уже получал или может одновременно получать другие формы противовирусной терапии.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный дополнительный терапевтический агент может быть полезным для уменьшения возможного (-ых) побочного (-ых) эффекта (-ов), связанного (-ых) с введением антитела или его антигенсвязывающего фрагмента согласно данному изобретению.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный дополнительный терапевтический агент может быть полезным для поддержания эффекта, связанного с введением антитела или его антигенсвязывающего фрагмента согласно данному изобретению.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения введение указанного дополнительного терапевтического агента и антитела или его антигенсвязывающего фрагмента согласно данному изобретению приводит к синергическому эффекту в отношении желаемого эффекта и (или) побочного эффекта.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный дополнительный терапевтический агент, описанный в данном документе, представляет собой по меньшей мере один агент, выбранный из следующей группы: аналог нуклеозида, ингибитор протеазы и иммуномодуляторы, такие как иммуносупрессоры.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный дополнительный терапевтический агент, описанный в данном документе, представляет собой по меньшей мере один агент, выбранный из следующей группы: аналог нуклеозида, ингибитор протеазы, иммуносупрессор (например, сарилумаб или тоцилизумаб), хлорохин, антибиотик гидроксихлорохина, антитело, направленное против структурных компонентов вируса или его фрагмента (например, пассивная иммунотерапия), интерферон-бета (например, интерферон бета-1а) и (или) вакцина.

Неограничивающие примеры аналога нуклеозида включают в себя рибавирин, ремдесивир, β-d-N4-гидроксицитидин, BCX4430, гемцитабина гидрохлорид, 6-азауридин, мизорибин, ацикловир флексимер и комбинацию одного или большего числа из них.

Неограничивающие примеры ингибитора протеазы включают в себя ингибитор протеазы ВИЧ и (или) ВГС.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения иммуномодулятор, описанный в данном документе, представляет собой интерферон-бета. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения иммуномодулятор, описанный в данном документе, представляет собой интерферон-бета-1a. Неограничивающие примеры иммуносупрессоров включают в себя ингибиторы интерлейкина, такие как, например, ингибиторы ИЛ-6 (например, сарилумаб или тоцилизумаб), ИЛ-1, ИЛ-12, ИЛ-18, и ингибиторы ФНО-альфа.

Дополнительные терапевтические агенты могут улучшать или дополнять терапевтический эффект композиций и способов, описанных в данном документе.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что определенные комбинации (такие как ИФН-бета-1а с ААТ) улучшают эффект ААТ на вирусное проникновение и воспаление.

В данном изобретении также представлен вектор для доставки генов и фармацевтические композиции, содержащие его. Предпочтительно, указанный вектор для доставки генов находится в форме плазмиды или вектора, которые содержат одну или большее число нуклеиновых кислот, кодирующих белок AAT, его вариант, изоформу и (или) фрагмент согласно данному изобретению. Примеры векторов для доставки генов включают в себя, например, вирусные векторы, невирусные векторы, носители в виде частиц и липосомы. Предпочтительно, генную доставку выполняют in vitro или ex vivo.

Соответственно, данное изобретение, по меньшей мере частично, основано на открытии того, что генная доставка ААТ (генная терапия) уменьшает эффекты воспаления.

В варианте осуществления данного изобретения указанный вирусный вектор представляет собой вектор, пригодный для доставки генов ex vivo и in vivo, предпочтительно – для доставки генов ex vivo. Более предпочтительно, указанный вирусный вектор выбран из группы, включающей в себя аденоассоциированный вирус (ААВ) и лентивирус, например, лентивирус 1-го, 2-го и 3-го поколений, не исключая другие вирусные векторы, такие как аденовирусный вектор, векторы вируса герпеса и т. д. Известны другие средства доставки или несущие среды (такие как дрожжевые системы, микровезикулы, генные пушки/средства прикрепления векторов к наночастицам золота), и в некоторых вариантах осуществления данного изобретения один или большее число вирусных или плазмидных векторов могут доставляться через липосомы, наночастицы, экзосомы, микровезикулы или генную пушку.

В других вариантах осуществления данного изобретения фармацевтическая (-ие) композиция (-и) согласно данному изобретению представляет (-ют) собой состав с замедленным высвобождением или состав, который вводят с использованием устройства с замедленным высвобождением. Такие устройства хорошо известны в данной области техники и включают в себя, например, трансдермальные пластыри и миниатюрные имплантируемые помпы, которые могут обеспечивать доставку лекарственного средства с течением времени непрерывным, стабильным образом в различных дозах для достижения эффекта замедленного высвобождения фармацевтической композиции, не обладающей эффектом замедленного высвобождения.

Фармацевтические композиции согласно данному изобретению можно вводить субъекту разными путями, включающими в себя пероральный, парентеральный, сублингвальный, трансдермальный, ректальный, трансмукозальный, местный, ингаляционный, буккальный, интраплевральный, внутривенный, внутриартериальный, внутрибрюшинный, подкожный, внутримышечный, интраназальный, интратекальный и внутрисуставной или их комбинацию. В случае применения у человека указанную композицию можно вводить в подходящем приемлемом составе в соответствии с общепринятой практикой применения у человека. Специалист может без труда определить режим введения доз и путь введения, которые являются наиболее подходящими для конкретного пациента. Композиции согласно данному изобретению можно вводить с помощью традиционных шприцев, безыгольных устройств для инъекций, «пушек для бомбардировки микрочастицами» или других физических способов, таких как электропорация («ЭП»), «гидродинамический способ» или ультразвук. Указанную композицию можно также вводить путем внутривенной инъекции, внутривенной инфузии, инфузии с помощью помпы-дозатора, ингаляционного назального спрея, глазных капель, кожных пластырей, препаратов с замедленным высвобождением, генной терапии ex vivo или клеточной терапии ex vivo, предпочтительно – путем внутривенной инъекции.

Указанные композиции можно вводить внутривенной инъекцией или местной инъекцией в легкие или дыхательные пути, или электропорацией в представляющую интерес ткань.

В данном изобретении дополнительно представлены способы лечения и (или) профилактики заболевания или синдрома, связанных с коронавирусной инфекцией, у субъекта, нуждающегося в этом, способы, включающие в себя введение терапевтически эффективного количества i) белка альфа-1-антитрипсина, его варианта, изоформы и (или) фрагмента, как описано в данном документе, или ii) фармацевтической композиции для применения согласно данному изобретению, как описано в данном документе.

Дополнительно представлены способы модулирования начала коронавирусной инфекции у субъекта, подвергшегося воздействию коронавируса или подозреваемого в таком воздействии, включающие в себя введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества i) белка альфа-1-антитрипсина, его варианта, изоформы и (или) фрагмента, как описано в данном документе, или ii) фармацевтической композиции для применения согласно данному изобретению, как описано в данном документе.

Данное изобретение также относится к определению восприимчивости субъекта, представляющего интерес, к лечению и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, с помощью композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ), его варианта, изоформы и (или) фрагмента, как описано в данном документе, включающему в себя следующие этапы:

a) определение уровня по меньшей мере одного из группы, состоящей из эндогенного альфа-1-антитрипсина, по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, рецептора ACE2 и интерферона-гамма, у субъекта, представляющего интерес, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2;

b) определение уровня по меньшей мере одного из группы, состоящей из эндогенного альфа-1-антитрипсина, по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, рецептора ACE2 и интерферона-гамма, у по меньшей мере одного референсного субъекта во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, при этом указанный референсный субъект является бессимптомным или имеет легкие симптомы;

c) сравнение уровня, представляющего интерес, определенного на этапе а), с референсным уровнем, определенным на этапе b);

при этом указанный субъект, представляющий интерес, является более восприимчивым к лечению и (или) профилактике заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, если указанный субъект, представляющий интерес, имеет по меньшей мере одно из группы, состоящей из следующего:

29. более низкий уровень, представляющий интерес, эндогенного альфа-антитрипсина (ААТ) по сравнению с референсным уровнем эндогенного ААТ;

30. более высокий уровень, представляющий интерес, по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок, по сравнению с референсным уровнем по меньшей мере одной протеазы, праймирующей шиповидный белок;

31. более высокий уровень, представляющий интерес, ангиотензинпревращающего фермента 2 (рецептор ACE2) по сравнению с референсным уровнем рецептора ACE2; и

32. более высокий уровень, представляющий интерес, интерферона-гамма (ИФН-γ) по сравнению с референсным уровнем ИФН-γ.

Все определения и комбинации, представленные в данном документе, применимы к данному варианту осуществления данного изобретения, если это применимо и если не указано иное.

Данное изобретение также относится к способу определения терапевтически эффективного количества альфа-1-антитрипсина (ААТ) для эффективного лечения и (или) профилактики заболевания или синдрома, связанных с вирусной инфекцией, предпочтительно – коронавирусной инфекцией, более предпочтительно – инфекцией SARS-CoV-2, с помощью композиции для применения согласно данному изобретению, включающему в себя следующие стадии:

a) определение уровня эндогенного альфа-1-антитрипсина у субъекта, представляющего интерес, до вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2, или во время вирусной инфекции, предпочтительно – коронавирусной инфекции, более предпочтительно – инфекции SARS-CoV-2;

b) определение в указанной композиции количества ААТ, которое необходимо для достижения у указанного субъекта уровня ААТ, составляющего по меньшей мере 10 мкМ, предпочтительно – по меньшей мере 20 мкМ, более предпочтительно – по меньшей мере 50 мкМ, еще более предпочтительно – по меньшей мере 100 мкМ, и наиболее предпочтительно – по меньшей мере 200 мкМ.

Все определения и комбинации, представленные в данном документе, применимы к данному варианту осуществления данного изобретения, если это применимо и если не указано иное.

В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способу согласно данному изобретению, при этом указанный вирус представляет собой коронавирус. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способу согласно данному изобретению, при этом указанный вирус представляет собой SARS-CoV-2. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способу согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или синдром представляют собой респираторный синдром или тяжелый острый респираторный синдром. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способу согласно данному изобретению, при этом указанные заболевание или синдром представляют собой воспалительное заболевание или синдром нервной системы. В некоторых вариантах осуществления данное изобретение относится к способу согласно данному изобретению, при этом указанные воспалительные заболевание или синдром нервной системы представляют собой заболевание или синдром, выбранные из группы рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона и болезни Хантингтона.

Все определения и комбинации, представленные в данном документе, применимы к данным вариантам осуществления данного изобретения, если это применимо и если не указано иное.

Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в данном документе, можно использовать на практике или при тестировании данного изобретения, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, заявки на патенты, патенты и другие документы, указанные в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте. Публикации и заявки, обсуждаемые в данном документе, предназначены исключительно для их раскрытия до даты подачи данной заявки. Ничто в данном документе не следует интерпретировать как признание того, что данное изобретение не имеет права предшествовать такой публикации в силу более раннего изобретения. В дополнение к этому, материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными и не предназначены быть ограничивающими.

В случае противоречия преимущественную силу имеет данное описание, включительно с определениями. Если не определено иное, все технические и научные термины, употребляемые в данном документе, имеют те же значения, которые обычно понимаются специалистом в области техники, к которой принадлежит данное изобретение. При употреблении в контексте данного документа представлены следующие определения с целью облегчения понимания данного изобретения.

При употреблении в данном описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают в себя ссылки на множественное число, если из контекста явным образом не следует иное.

При употреблении в контексте данного документа «по меньшей мере один» означает «один или большее число», «два или большее число», «три или большее число» и т. д.

Термин «или» следует понимать как означающий либо одну из альтернатив, либо обе, либо любую их комбинацию. 

Термин «и (или)» следует понимать как означающий либо одну из альтернатив, либо обе альтернативы. 

При употреблении в контексте данного документа, если из контекста не следует иное, термины «включает в себя», «содержит», или «включающий (-ая, -ее, -ие) в себя», «содержащий (-ая, -ее, -ие)» следует понимать как подразумевающие включение указанного этапа или элемента, или группы этапов или элементов, но не исключение любого другого этапа или элемента, или группы этапов или элементов. 

Термины «включает в себя» и «содержит» употребляются как синонимы. «Предпочтительно» означает один вариант из ряда вариантов, не исключая другие варианты. «Например» означает один пример без ограничения указанным примером. Термины «состоит из», «состоящий (-ая, -ее, -ие) из» подразумевают включение только того, что следует за фразой «состоит из» или «состоящий (-ая, -ее, -ие) из», соответственно.

Ссылка в данном описании на «один вариант осуществления», «вариант осуществления», «конкретный вариант осуществления», «связанный вариант осуществления», «определенный вариант осуществления», «дополнительный вариант осуществления», «некоторые варианты осуществления» или «дальнейший вариант осуществления», или на их комбинации, означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с таким вариантом осуществления, включены в по меньшей мере один вариант осуществления данного изобретения. Следовательно, присутствие указанных выше фраз в различных частях данного документа не обязательно означает ссылку на один и тот же вариант осуществления данного изобретения. Кроме того, конкретные признаки, структуры или характеристики могут быть объединены любым подходящим образом в одном или большем числе вариантов осуществления данного изобретения. Также следует понимать, что положительное указание признака в одном варианте осуществления данного изобретения служит основанием для исключения указанного признака в конкретном варианте осуществления данного изобретения.

Если не определено иное, все технические и научные термины, употребляемые в данном документе, имеют значение, обычно понимаемое рядовым специалистом в области техники, к которой относится данное изобретение. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в данном документе, можно использовать на практике или при тестировании данного изобретения, подходящие способы и материалы описаны ниже. В случае противоречия данное описание, включительно с определениями, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, материалы, способы и примеры являются иллюстративными и не подразумеваются как ограничивающие.

Общие способы и методики, представленные в данном документе, могут выполняться в соответствии с обычными способами, хорошо известными в данной области техники и описанными в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в данном описании, если не указано иное. См., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) и Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), и Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990).

Хотя варианты осуществления данного изобретения проиллюстрированы и подробно описаны в графических материалах и в вышеприведенном описании, такие иллюстрация и описание носят иллюстративный характер или характер примеров и не являются ограничивающими. Следует понимать, что рядовыми специалистами в данной области техники могут быть внесены определенные изменения и модификации без отступления от духа или объема прилагаемой формулы изобретения. В частности, данное изобретение охватывает собой дополнительные варианты осуществления с любой комбинацией признаков из разных вариантов осуществления данного изобретения, описанных выше и ниже.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАЦИЙ

Фиг. 1. Активация микроглии, опосредованная ИФН-γ.

Фиг. 2. ААТ снижает активацию микроглии, опосредованную ИФН-γ.

Фиг. 3. Подтверждение противовоспалительного эффекта ААТ в образцах выделенной РНК.

Фиг. 4. Подтверждение активации микроглии и противовоспалительного эффекта ААТ путем анализа способом GSEA.

Фиг. 5. AAT (Sigma Aldrich, партия № A6150) ингибирует активность TACE в бесклеточном анализе, что показано в виде относительных единиц флуоресценции (А) или в процентах от контрольной активности (B) с показателем IC₅₀, составляющим 15,3 мкМ (C).

Фиг. 6. Результаты исследования электрофизиологии (способом ЭМГ – электромиографии) седалищного нерва: (A) амплитуда, (B) скорость проведения.

Фиг. 7. Результаты теста силы захвата в виде абсолютной величины (A) и в виде % от момента времени 6 недель (В).

Фиг. 8. Результаты теста «Ротарод» в виде абсолютной величины (A) и в виде % от момента времени 6 недель (В).

Фиг. 9. Экспрессия генов DNAJB9 и PLA2G4B в ответ на воздействие ААТ.

Фиг. 10. Число аксонов.

Фиг. 11. Аксональный диаметр.

Фиг. 12. Коэффициент g.

Фиг. 13. Индивидуальные изображения гистологии полутонких поперечных срезов седалищного нерва. Метка масштаба: 10 мкм. А) группа 1: ДТ-контроль, В) ШМТ1А + несущая среда, С) ШМТ1А + чААТ.

Фиг. 14. Концентрация ИЛ-6 в плазме крови.

Фиг. 15. Концентрация ФНО-α в плазме крови.

Фиг. 16. План исследования мышиной модели ШМТ1А при введении ААТ.

Фиг. 17. Морфология и число клеток после воздействий: морфологический анализ SH-SY5Y и подсчет клеток после введения 6-OHDA и лечения ААТ. Снимки в ярком поле (20x) и число клеток (сутки 0 по сравнению с сутками 4 в культуре), показывающие влияние воздействий на фенотип и пролиферацию клеток SH-SY5Y, а также положительное действие AAT. А) иллюстративные изображения; В) количественный анализ.

Фиг. 18. Жизнеспособность клеток: на графике представлена жизнеспособность клеток, измеренная по абсорбции (при 450 нм) для контроля и образцов.

Фиг. 19. Количественное определение ИЛ-6 в надосадочной жидкости.

ПРИМЕРЫ

Специалисты в данной области техники поймут, что описанное в данном документе изобретение допускает изменения и модификации, отличные от конкретно описанных. Следует понимать, что данное изобретение включает в себя все такие изменения и модификации без отклонения от его сущности или важных характеристик. Данное изобретение также включает в себя все этапы, признаки, композиции и соединения, упомянутые или указанные в данном описании, по отдельности или совместно, и любые и все комбинации или любые два или большее число указанных этапов или признаков. Следовательно, данное раскрытие следует рассматривать как проиллюстрированное во всех вариантах осуществления и не ограниченное этим, при этом объем данного изобретения указан в прилагаемой формуле изобретения, и предполагается, что в ней будут учтены все изменения, которые подпадают под значение и диапазон эквивалентности. В данной спецификации приводятся различные ссылки, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей полноте. Вышеприведенное описание станет более понятным со ссылкой на нижеследующие примеры.

Пример 1

A) клетки микроглии человека – HMC3-MHCII^Luc – высевали в сутки 0, активировали их с помощью ИФН-γ с суток 1 по сутки 2, а в сутки 4 измеряли активность люциферазы и жизнеспособности клеток.

B) активацию измеряли по активности люциферазы, регулируемой ГКГII, и нормализовывали относительно жизнеспособности клеток. Активность люциферазы для всех условий представлена в виде фактора кратности (ФК) от необработанного контроля. Потенциальный эффект от наиболее высокой концентрации буфера, используемого для доставки лекарственного средства (ИФН-γ, ААТ) был исключен. (Фиг. 1). Все условия выполняли в трех повторностях, планки погрешностей отображают среднеквадратичное отклонение.

Пример 2

A) клетки микроглии человека – HMC3-MHCII^Luc и HMC3-MHCII^Luc;Ubi^AAT– высевали в сутки 0, воздействовали на них с помощью ИФН-γ с суток 1 по сутки 2, а в сутки 4 измеряли активность люциферазы и жизнеспособности клеток.

B) AAT вносили с суток 0 по сутки 4 к клеткам HMC3-MHCII^Luc. Активацию измеряли по активности люциферазы, регулируемой ГКГII, и нормализовывали относительно жизнеспособности клеток. Активность люциферазы для всех условий представлена в процентах от ИФН-γ-контроля. Все условия выполняли в трех повторностях, планки погрешностей отображают среднеквадратичное отклонение.

Пример 3

A) клетки микроглии человека – HMC3-MHCII^Luc – высевали в сутки 0, воздействовали на них с помощью ИФН-γ с суток 1 по сутки 2, а в сутки 4 измеряли активность люциферазы и жизнеспособности клеток.

B) AAT вносили с суток 0 по сутки 4 к клеткам HMC3-MHCII^Luc. Активацию измеряли по активности люциферазы, регулируемой ГКГII, и отображали в процентах от ИФН-γ-контроля для всех условий. Все условия выполняли в трех повторностях, планки погрешностей отображают среднеквадратичное отклонение.

С) Массовую экстракцию РНК проводили на тех же культурах HMC3-MHCII^Luc. Контроль качества (КК) применяли к РНК перед секвенированием. Контроль качества секвенирования выполняли до картирования на геноме человека. Подсчитывали картированные считывания и измеряли дифференциальную экспрессию генов в разных условиях (см. таблицы 2-11).

Пример 4

Данные RNAseq для полученного из плазмы и рекомбинантного ААТ объединяли, нормализовали и анализировали с помощью анализа обогащения набора генов (GSEA) (https://www.gsea-msigdb.org/gsea/index.jsp; Subramanian, A., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102 (43): 15545-15550, 2005). Семейства генов с повышенной регуляцией (серые полосы) и с пониженной (черные полосы) показаны в соответствии с нормализованным показателем обогащения.

A) воспалительный профиль, индуцированный ИФН-γ, был подтвержден повышенной регуляцией нескольких процессов, связанных с воспалением (выделено жирным курсивом).

B-C) Воздействие ААТ в отсутствие (В) и в присутствии (С) ИФН-γ привело к значительной понижающей регуляции некоторых из данных путей (выделено жирным курсивом). Важно отметить, что как ответ ИФН-γ, так и воспалительные реакции были ослаблены AAT. Однако понижающая регуляция генов воспалительного ответа в (C) была чуть ниже уровня значимости.

Что касается других семейств генов, передача сигналов KRAS имеет важное значение, поскольку она участвует в онкогенном процессе и иммуномодуляции (Dias Carvalho et al. 2018). Кроме того, путь р53 примечателен как медиатор реакции на стресс.

Пример 5

Воздействие ААТ уравновешивает экспрессию воспалительных генов

Таблицы генов, связанных с презентацией антигена (таблица 2), передачей сигналов цитокинов (таблица 3), передачей сигналов интерферона (таблица 4) и активацией комплемента (таблица 5). Основные гены, связанные с воспалением (ФК > 2; p-значение < 0,05; столбец слева), определяли по дифференциальной экспрессии между клетками, не обработанными и обработанными ИФН-γ (воспаление; средний столбец). Выделены основные гены, которые значительно и противоположно регулировались воздействием ААТ (столбец справа; выделено жирным шрифтом с подчеркиванием).

Было обнаружено, что воздействие ААТ повлияло на значительное число (~35%) генов, связанных с воспалением (6 из 23 генов, связанных с презентацией антигена; 14 из 33 генов, связанных с передачей сигналов цитокинов; 1 из 7 генов, связанных с активацией комплемента; 5 из 13 генов, связанных с передачей сигналов интерферона), что свидетельствует о его противовоспалительном потенциале. Например, уровень промотора гена HLA-DRA, который использовался в качестве стимулятора экспрессии люциферазы в линии HMC3-MHCII^Luc, последовательно повышался и понижался при воспалении и при воздействии ААТ, соответственно (выделено жирным курсивом). Следует отметить, что ФК, представленные для воспалительного состояния, на которое воздействовали AAT, не следует напрямую сравнивать с таковыми, обнаруженными при воспалении, поскольку для первого ФК = 2 уже представляет собой 50% уравновешивания генов, индуцированных/подавленных воспалением.

Гены второго порядка, связанные с воспалением (p-значение < 0,05; ФК < 2), которые значительно и противоположно регулируются воздействием ААТ при воспалительном состоянии или в состоянии покоя (регулируются в случае ААТ), представлены в нижней части таблицы.

Пример 6. Воздействие ААТ усиливает экспрессию характерных генов, связанных с противовоспалительной микроглией М2

Экспрессия генов микроглии M2 стимулируется после индукции M2-типа (исследование ФК; Satoh 2017). Воздействие ААТ на микроглию в состоянии покоя («ФК AAT») и в активированной микроглии («ФК воспаление + AAT») аналогичным образом привело к усилению экспрессии генов M2, хотя и с меньшей величиной. ~60% модифицированных генов были общими среди условий воздействия ААТ (выделено жирным шрифтом с подчеркиванием).

Таблица 6

Ген M2 Исследование ФК ФК AAT Ген M2 Исследование ФК ФК воспаление + ААТ MMP1 7,36 2,51 HLA-DRB5 53,99 2,09 ITGA11 4,78 1,65 ANPEP 8,90 1,25 COL1A1 4,38 1,58 THBS1 8,16 1,34 TAGLN 2,79 1,37 MMP1 7,36 2,39 GUK1 2,76 1,57 BGN 6,68 1,27 PAPPA 2,74 1,24 ITGA11 4,78 1,54 PLTP 2,52 1,28 OLFML2B 4,78 1,44 NTN4 2,38 1,25 GUK1 2,76 1,31 FOXC1 2,37 1,26 FAT1 2,75 1,34 PTPRS 2,34 1,27 PAPPA 2,74 1,31 COL11A1 2,30 1,14 KDM2B 2,69 1,17 STC2 2,29 1,42 CLMP 2,46 1,22 MXRA8 2,28 1,40 PTPRS 2,34 1,23 TEKT4P2 2,17 2,46 COL11A1 2,30 1,16 SART1 2,11 1,44 STC2 2,29 1,32 FZD2 2,09 1,39 MXRA8 2,28 1,49 AP2A2 2,04 1,26 TGFBI 2,19 1,18 FEZ1 1,99 1,45 LOXL2 2,10 1,25 ACAN 1,98 1,37 FZD2 2,09 1,37 TGFB1I1 1,94 1,31 FEZ1 1,99 1,34 NID1 1,90 1,16 AHNAK2 1,96 1,40 RASA4B 1,87 1,46 TGFB1I1 1,94 1,26 GREM1 1,82 1,69 CLIP3 1,89 1,25 FGD3 1,82 1,76 SH3PXD2B 1,88 1,19 GADD45GIP1 1,70 1,55 IL1R1 1,84 1,18 MOSPD3 1,69 1,51 GREM1 1,82 1,56 APRT 1,69 1,16 FGD3 1,82 2,31 RAB3IL1 1,68 1,55 ARHGDIB 1,79 1,28 TNFRSF1B 1,67 1,46 GATA6 1,78 1,47 SLC22A5 1,66 1,22 PRSS23 1,78 1,16 ENG 1,66 1,29 KANK2 1,74 1,25 SEMA3B 1,65 1,50 GADD45GIP1 1,70 1,51 DBN1 1,65 1,42 LDHA 1,67 1,21 IGFBP2 1,63 1,63 TNFRSF1B 1,67 1,23 TBCD 1,63 1,26 ENG 1,66 1,35 METRN 1,63 2,23 SEMA3B 1,65 1,39 SERPINH1 1,62 1,21 DBN1 1,65 1,31

Таблица 6 (продолжение)

Ген M2 Исследование ФК ФК AAT Ген M2 Исследование ФК ФК воспаление + ААТ MBOAT7 1,61 1,44 IGFBP2 1,63 1,34 PREX1 1,61 1,25 KIAA1549L 1,63 1,44 TTC9 1,61 1,65 TBCD 1,63 1,26 RASAL1 1,60 1,52 METRN 1,63 1,64 ZIC2 1,60 2,42 PLLP 1,62 1,46 CHPF 1,58 1,80 SERPINH1 1,62 1,20 PLEC 1,58 1,69 MBOAT7 1,61 1,37 APLP1 1,58 1,41 PREX1 1,61 1,28 HSPG2 1,57 1,58 RASAL1 1,60 1,45 BAIAP2 1,55 1,45 ZIC2 1,60 2,77 MIF 1,55 1,83 ZNF319 1,59 1,25 FZD7 1,55 1,24 CHPF 1,58 1,58 MARCH4 1,54 1,28 PLEC 1,58 1,54 PRSS36 1,52 1,58 HSPG2 1,57 1,41 C16orf45 1,51 1,31 TCEAL2 1,56 1,30 EXTL1 1,50 2,19 BAIAP2 1,55 1,24 MIF 1,55 1,72 FZD7 1,55 1,36 FADS2 1,54 1,20 HCK 1,51 1,44 EXTL1 1,50 1,78 SLC16A3 1,50 1,65

Пример 7. Воздействие ААТ влияет на экспрессию генов риска нейродегенеративных заболеваний

Гены риска, связанные с болезнью Паркинсона (БП, 21 ген), болезнью Альцгеймера (БА, 15 генов), рассеянным склерозом (РС, 53 гена), болезнью Шарко – Мари – Тута (ШМТ, 50 генов), периферической нейропатией (ПН, 88 генов) и синдромом Гийена – Барре (СГБ, 30 генов; ФК), извлекали из общедоступных библиотек (Timmerman, Strickland, and Zuchner 2014; Parnell and Booth 2017; Nikolac Perkovic and Pivac 2019; Blauwendraat, Nalls, and Singleton 2020; Chang et al. 2012) и оценивали их экспрессию в обработанных ААТ микроглии в состоянии покоя («ФК AAT») и активированной микроглии («ФК воспаление + AAT»). Общие модифицированные гены среди условий воздействия ААТ выделены (жирным шрифтом с подчеркиванием). Следует отметить, что экспрессия нескольких генов риска при всех вышеуказанных заболеваниях была модифицирована ААТ.

Таблица 11

Ген риска СГБ ФК СГБ AAT Ген риска СГБ ФК СГБ AAT p-значение ФК AAT p-значение ФК AAT GUK1 -2,13 1,38E-02 1,57 GUK1 -2,13 3,31E-02 1,31 HAGH -2,14 1,07E-02 1,40 NFIL3 2,83 6,38E-03 -1,22 GLRX5 -2,48 4,32E-02 1,12 ZNF12 2,79 4,52E-02 -1,23 HMGB2 3,63 7,91E-03 -1,20 FOS 4,02 1,19E-02 -1,54 ZNF12 2,79 3,05E-02 -1,26 MARCKS 2,81 2,06E-03 -1,84 CDC42 2,88 8,15E-03 -1,35 LY96
- 3,27 1,72E-02
- -2,31
- SMCHD1 2,81 3,33E-02 -1,39 PKN2 2,77 1,66E-02 -1,47 SENP6 2,76 1,91E-02 -1,47 MARCKS 2,81 5,40E-04 -2,06 FOS 4,02 6,60E-04 -2,31

Пример 8

Дальнейшие эксперименты включают в себя воздействие CSF-1 для оптимизации перехода от (Mɸ) к макрофагам M1, дозозависимость ФИН-γ для активации макрофагов M1, воздействие AAT на макрофаги в состоянии покоя и на ИФН-γ-активированные макрофаги, и экстракцию РНК, а также анализ RNAseq. При этом указанные клетки представляют собой первичные макрофаги человека в состоянии покоя (Mɸ) или M1-дифференцированные макрофаги человека. Воздействие включает в себя предварительное воздействие AAT в течение 24 часов с последующей активацией клеток (или без нее) с помощью CSF-1 или ФИН в присутствии AAT в течение 24 часов. На клетки дополнительно воздействовали ААТ в течение 48 часов и, наконец, исследовали на предмет высвобождения провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ФНО-α, ИЛ-1β, ИЛ-8; мультиплексное считывание) с использованием культурального супернатанта или, в качестве альтернативы, исследовали на предмет активности люциферазы (линия MHCII^Luc) и одновременно извлекали РНК для анализа на микрочипах. Культуры с устойчивыми показателями считывания для цитокинов или люциферазного анализа будут использованы в качестве образцов для экстракции РНК и анализа на микрочипах.

Условия эксперимента: каждое условие выполняли в трех повторностях

- Необработанные (без ААТ, без CSF-1): контроль макрофагов в состоянии покоя

- ИФН-γ: контроль активированных макрофагов

- ААТ (полученный из плазмы крови, Sigma, или рекомбинантный; Lonza): эффект ААТ на макрофаги в состоянии покоя

- ИФН-γ и ААТ (полученный из плазмы крови, Sigma или Lonza): противовоспалительный эффект ААТ на активированные макрофаги

Выходные данные:

- Экспрессия генов макрофагов в состоянии покоя

- Провоспалительные дифференциально-регулируемые гены (фактор кратности от необработанных; значительное p-значение; фактор кратности порога повышающей/понижающей регуляции)

- ААТ-стимулированная экспрессия генов изменяется на макрофагах в состоянии покоя и на активированных макрофагах

- Различия между генной регуляцией с помощью рекомбинантного и полученного из плазмы крови ААТ

СПОСОБЫ

Культура клеточной линии микроглиальных клеток человека

Клеточная линия HMC3-MHCII^Luc, кодирующая люциферазу Renilla под промотором главного комплекса гистосовместимости II (HLA-DRA), была описана как ценный инструмент для изучения активации микроглии человека и была получена от проф. Карл-Хайнц Краузе (Karl-Heinz Krause), Университет Женевы. Ее трансдуцировали лентивирусным вектором для получения клеточной линии HMC3-MHCII^Luc; Ubi^AAT (см. фиг. 3). Обе клеточные линии – HMC3-MHCII^Luc и HMC3-MHCII^Luc; Ubi^AAT – культивировали в чашках для культивирования клеток, обработанных для культуры тканей (CELLSTAR^®, Greiner, 7.664160), в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы + глютамин (Gibco, 41965039), дополненной 10% (об./об.) эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС, Gibco, 10270106) и 100 мкг/мл пенициллина/стрептомицина (пен./стреп., ThermoFisher, 15070063). Культуры содержали при температуре 37°C в атмосфере 5% CO2. Пассажи клеток выполняли путем быстрой промывки клеток в 1-кратном ФСБ, 3-минутной трипсинизации при комнатной температуре (Tryple Express, ThermoFisher, 12604021) с последующим центрифугированием (5 мин, 1000 об/мин) и ресуспендированием в вышеуказанной дополненной среде DMEM. Клетки подсчитывали и высевали в желаемой концентрации.

Трансдукция клеточной линии микроглиальных клеток человека

Лентивирус, кодирующий AAT человека под промотором убиквитина и GFP под промотором PGK человека, получали в соответствии с протоколом, описанным в работе Marc Giry-Laterrière, Els Verhoeyen, and Patrick Salmon, 2011, Methods in molecular biology. Кратко, 4,5x10⁶ клеток HEK высевали в чашку Ø100 мм и трансфицировали 16 ч спустя 15 мкг pCWXPG-UBI-SP::AAT, 10 мкг упаковочной плазмиды (psPAX2, подарок от Дидье Троно (Didier Trono) [плазмида Addgene 12260]) и 5 мкг оболочки (pMD2G, подарок от Дидье Троно [плазмида Addgene 12259]). Среду меняли через 8 часов после трансфекции. Через 48 ч вирусный супернатант собирали и фильтровали с помощью фильтров PVDF калибра 45 мкм и хранили при температуре -80°C. Определяли титр вируса и для экспериментальных условий отбирали клеточные линии HMC3-MHCII^Luc; Ubi^AAT с около 100% и 50% AAT-экспрессирующих клеток.

ИФНγ-опосредованная активация микроглии человека

Клеточную линию HMC3-MHCII^Luc высевали в 96-луночные планшеты с плотностью около 2500 клеток/лунка. Через 24 часа после этого их активацию индуцировали 24-часовым воздействием ИФН-γ (Sigma, SRP3058) в различных концентрациях (0,1; 1; 10 или 100 нг/мл). Затем ФИН-γ удаляли и клетки культивировали в течение 48 часов, прежде чем оценивать жизнеспособность и активацию клеток (см. фиг. 2).

Воздействие экзогенного/эндогенного ААТ на ИФН-γ-активированную микроглию человека

Клеточные линии HMC3-MHCII^Luc и HMC3-MHCII^Luc; Ubi^AAT (эндогенный ААТ) высевали в 96-луночные планшеты при плотности около 2500 клеток/лунка. Через 3 часа после высевания к клеточной линии HMC3-MHCII^Luc добавляли AAT, полученный из плазмы крови, и рекомбинантные ААТ (полученные в клетках CHO, AAT 1 и AAT 2), в различных концентрациях (1; 10 или 25 мкМ). Через 24 часа, все еще в присутствии экзогенного или эндогенного AAT, индуцировали активацию микроглии добавлением ИФН-γ на протяжении 24 часов (10 нг/мл). Затем ФИН-γ удаляли и как клетки HMC3-MHCII^Luc, так и клетки HMC3-MHCII^Luc; Ubi^AAT культивировали в течение 48 часов в присутствии экзогенного или эндогенного AAT, прежде чем клеточные культуры оценивали на предмет жизнеспособности и активации клеток (см. фиг. 3 и 4).

Измерение жизнеспособности и активации клеток микроглии человека

Жизнеспособность (набор для подсчета клеток Cell Counting Kit-8, Sigma, 96992) и активацию (система люциферазного анализа Renilla-Glo® Luciferase Assay System, Promega, E2710) культур клеток HMC3-MHCII^Luc и HMC3-MHCII^Luc; Ubi^AAT измеряли в соответствии с протоколами производителей.

Получение РНК, ее секвенирование и анализ дифференциальной экспрессии

Извлечение РНК осуществляли с помощью набора реактивов RNeasy Mini kit (Qiagen) в соответствии с протоколом производителя. Проверяли качество образцов РНК из полученного из плазмы крови AAT и рекомбинантного AAT № 2 (анализатор Bioanalyzer 2100, Agilent) и готовили библиотеки с помощью набора реактивов Truseq RNA Library Kit (Illumina, RS-122-2001). Библиотеки секвенировали (HiSeq 4000, Illumina), контролировали качество секвенирования (FastQC), картировали на геном человека (STAR v.2.7.0f; UCSC hg38), регистрировали считывания (HTSeq v0.9.1) и выполняли анализ дифференциальной экспрессии с помощью программного пакета R/Bioconductor package (edgeR 1.30.1).

Получение РНК, ее секвенирование и анализ дифференциальной экспрессии

Макрофаги M1, полученные из моноцитов человека (GM-CSF, PromoCell, C-12916), культивировали в чашках для культивирования клеток, покрытых фибронектином, в среде для получения макрофагов M1-Macrophage Generation Medium XF и активировали с помощью CSF-1 (50 нг/мл, Sigma, SRP3058) в соответствии с протоколом производителя. Культуры содержали при температуре 37°C в атмосфере 5% CO2.

Мультиплексный анализ цитокинов

Собирали супернатант клеточной культуры и измеряли содержание ИЛ-6, ФНО-α, ИЛ-1β и ИЛ-8 с помощью анализа Luminex на основе гранул в соответствии с протоколом производителя.

Активность TACE/ADAM17 в отсутствие клеток

Активность TACE и его ингибирование с помощью AAT человека (AAT) определяли с использованием набора реактивов Recombinant Human TACE/ADAM17 kit (930-ADB и ES003, R&D Systems) в черных 96-луночных иммунопланшетах (437111, ThermoFisher Scientific). Ферментативную активность TACE/ADAM17 измеряли путем смешивания 0,005 мкг рекомбинантного человеческого rhTACE с 10 мкМ флуорогенного пептидного субстрата Mca-PLAQAV-Dpa-RSSSR-NH2 III в буфере для анализа (25 мМ Tris, 2,5 мкМ ZnCl2, 0,005% Brij-35 (масс./об.), рН 9,0) до конечного объема в 100 мкл. AAT (Sigma Aldrich, партия A6150) повторно суспендировали в воде (несущая среда), контрольную активность TACE/ADAM17 оценивали в присутствии данной несущей среды (количество, используемое для AAT, составляло 100 мкМ). ААТ добавляли в разных концентрациях (0, 6,25, 12,5, 25, 50 и 100 мкМ) для оценки его дозозависимого ингибирования TACE/ADAM17. Все условия выполняли в трех повторностях. Активность измеряли в относительных единицах флуоресценции (ОЕФ) в кинетическом режиме (9 моментов времени в течение 5 мин) с помощью считывателя микропланшетов SpectraMax iD3 (низкое усиление PMT, экспозиция 1 с, максимальное считывание при 1 мм, длина волны: возбуждение 320 нм, излучение 405 нм). Столбчатую диаграмму в процентах от контрольной активности получали путем усреднения значений, полученных в течение 5 мин, для каждого из условий.

Животные

В качестве мышиной модели ШМТ1A авторы данного изобретения использовали трансгенных мышей C3-PMP22 (B6.Cg-Tg(PMP22)C3Fbas/J, The Jackson Laboratory), которые экспрессируют три копии гена периферического миелинового белка 22 человека дикого типа (PMP22) (Verhamme, King et al. 2011). Мышей содержали в клетках Makrolon с фильтрующими крышками, в помещении с постоянной фильтрацией воздуха, что позволяло избежать загрязнения. Во время экспериментов животных в парах содержали в клетках при постоянной температуре с циклом день/ночь 12/12 часов. Животным предоставляли неограниченный доступ к еде и воде (контрольная водопроводная вода и корм). Протокол для животных одобрен Комитетом по исследованиям на животных Лангедок-Руссильона (Languedoc Roussillon). Данный протокол и лабораторные процедуры, практикуемые авторами данного изобретения, соответствуют законодательству Франции, которое реализует европейские директивы (референсный номер: D3417223, APAFIS#23920-2020020320279696 v3). За здоровьем животных следили ежедневно, чтобы гарантировать, что только животные с хорошим здоровьем проходят процедуры тестирования и продолжают использоваться в данном исследовании.

Парадигма исследования in vivo

Животных разделили на 3 группы (контроль дикого типа (подкожное введение 0,9% NaCl), ШМТ1A – несущая среда (подкожное введение 0,9% NaCl), ШМТ1A – альфа-1-антитрипсин человека (подкожное введение 50 мг/кг на инъекцию, два раза в сутки)) по 3 мыши в каждой группе (самцы возрастом 3 недели массой по 18 ± 2,5 г в начале исследования), и все они прошли следующий протокол после 7 суток акклиматизации на месте.

Начиная с возраста 4 недель, у животных отбирали образцы крови для определения уровней интерлейкина-6 (ИЛ-6) и фактора некроза опухоли альфа (ФНО-α), как описано на фиг. 16.

Уровни чААТ в плазме крови оценивали каждые 5 суток, начиная с первых суток воздействия и заканчивая последними сутками воздействия.

В первые и последние сутки воздействия нервно-мышечную активность животных проверяли с помощью теста «Ротарод», теста захвата и анализа электрофизиологии седалищного нерва. После последнего воздействия, через 8 недель, данные тесты повторяли, животных умерщвляли и брали образец левого седалищного нерва для гистологической оценки числа и размеров нейронов.

Пример 9

Активность TACE оценивали в соответствии с инструкцией производителя (набор реактивов Recombinant Human TACE/ADAM17 kit, 930-ADB, R&D Systems) в кинетическом режиме, без ААТ или с ААТ в различных концентрациях. Все условия выполняли в трех повторностях; условия представлены в виде среднего значения ± среднеквадратичное отклонение (СКО) (фиг. 5).

Пример 10

Наиболее распространенным типом ШМТ является ШМТ1A, характеризующаяся дупликацией гена PMP22, приводящей к накоплению белка pmp22 в шванновских клетках и прогрессирующей демиелинизации. PMP22 представляет собой тетраспановый гликопротеин, содержащийся в компактном миелине периферической нервной системы. Дупликация PMP22 была связана с возникновением болезни Шарко – Мари – Тута типа 1А (ШМТ1A, англ. «CMT1A»). Трансгенные мыши C3-PMP22 (B6.Cg-Tg(PMP22)C3Fbas/J) экспрессируют три копии гена периферического миелинового белка 22 человека дикого типа (PMP22). Причинно-следственный связи между дополнительным геном PMP22 и ШМТ1A все еще недостаточно изучены и остаются неуловимыми по сей день. Тем не менее, существует несколько правдоподобных гипотез, позволяющих связать данную генетическую аномалию, то есть дупликацию гена PMP22, с проявлением указанной патологии. Не ограничиваясь конкретной теорией, избыточная экспрессия PMP22 может оказывать негативное влияние на формирование миелиновых оболочек в периферической нервной системе (ПНС). У данных мышей наблюдается зависящая от возраста демиелинизирующая нейропатия, характеризующаяся преимущественно дистальной потерей силы и чувствительности. Мыши C3-PMP не проявляют явных клинических признаков в течение 3 недель, а через 4 недели у них развиваются прогрессирующие и наблюдаемые нервно-мышечные нарушения. Данные мыши проявляют стабильно низкую скорость нервной проводимости, такую же, как и у взрослых пациентов с ШМТ1A. Миелинизация у указанных мышей задерживается, и в возрасте 3 недель они содержат меньшее число миелинизированных волокон. Данную мышиную модель использовали для изучения эффекта ААТ в различных парадигмах.

Положительная эффективность введения AAT наблюдалась через две недели у мышей с ШМТ1A в виде увеличения латентности в тесте «Ротарод», силы захвата и показателей нервной проводимости по сравнению с контрольной группой, не получавшей лечения. Более того, в группе, получавшей ААТ, не наблюдалось заметной потери массы тела по сравнению с группой, получавшей несущую среду, что указывает на отсутствие системной токсичности указанного соединения в данных экспериментальных условиях.

Таблица 12. Масса тела

Электрофизиологическое исследование седалищного нерва (ЭМГ) обеспечивает чувствительный и количественный подход к измерению составного потенциала действия мышц и амплитуды скорости нервной проводимости у животных, и его выполняли путем стимуляции седалищного нерва. Аналогичные амплитуды составного потенциала действия мышц (СПДМ, англ. «CMAP») наблюдались между группами на базовом уровне (возраст 6 недель). Как и ожидалось, сильное и значимое снижение амплитуды СПДМ наблюдалось в группе ШМТ1A + несущая среда по сравнению с контрольной группой дикого типа в возрасте 8 недель. Результаты показывают улучшение параметров ЭМГ у мышей с ШМТ1A, получавших AAT, по сравнению с контролем. Фиг. 6 свидетельствует о положительной эффективности чААТ при дегенерации аксонов, индуцированной нарушением ШМТ1A.

Более низкие скорости нервной проводимости (СНП, англ. «NCV») наблюдались в обеих группах ШМТ1A по сравнению с контрольной группой дикого типа на базовом уровне (возраст 6 недель). На базовом уровне различия показателей СНП между группами не были статистически значимыми. Как и ожидалось, сильное и значимое снижение СНП наблюдалось в группе ШМТ1A + несущая среда по сравнению с контрольной группой дикого типа в возрасте 8 недель. В группе ШМТ1A + воздействие чААТ наблюдалось увеличение СНП по сравнению с группой, на которую воздействовали несущей средой. Поскольку скорость нервной проводимости зависит от целостности миелиновой оболочки, эти данные также свидетельствуют о положительной эффективности чААТ в отношении демиелинизации шванновских клеток, индуцированной нарушением ШМТ.

Таблица 13. Электрофизиология седалищного нерва

Таблица 14. Средний составной потенциал действия мышцы

2-сторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями и t-критерий Бонферрони

***: p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем; †: p < 0,05 по сравнению с ШМТ1А + несущая среда

Таблица 15. Средняя скорость проводимости нерва

2-сторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями и t-критерий Бонферрони

**; ***: p < 0,01; p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем

Тест на силу захвата измеряет нервно-мышечную силу, оценивая хватку животного за металлическую сетку. Более низкая сила захвата наблюдалась в группах ШМТ по сравнению с контрольной группой дикого типа на базовом уровне (возраст 6 недель). На базовом уровне различия показателей силы захвата между группами не были статистически значимыми. Как и ожидалось, сильное и значимое снижение силы захвата наблюдалось в группе ШМТ1A + несущая среда по сравнению с контрольной группой дикого типа в возрасте 8 недель. Результаты показывают улучшение силы захвата у мышей с ШМТ1A, получавших AAT, по сравнению с контролем группой (фиг. 7).

Таблица 16. Сила захвата

Таблица 17. Средняя сила захвата

2-сторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями и t-критерий Бонферрони

**; ***: p < 0,01; p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем

Тест «Ротарод» измеряет нервно-мышечную координацию путем оценки способности животных сохранять равновесие на вращающемся цилиндре. Наблюдалась аналогичная латентность в тесте «Ротарод» между группами на базовом уровне (возраст 6 недель). Как и ожидалось, сильное и значимое снижение латентности в тесте «Ротарод» наблюдалось в группе ШМТ1A + несущая среда по сравнению с контрольной группой дикого типа в возрасте 8 недель. Результаты показывают улучшение латентности в тесте «Ротарод» у мышей с ШМТ1A, получавших AAT, по сравнению с контролем группой (фиг. 8).

Таблица 18. Латентность в тесте «Ротарод»

Таблица 19. Средняя латентность в тесте «Ротарод»

2-сторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями и t-критерий Бонферрони

*; ***: p < 0,05; p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем

Пример 11

По всей видимости белок PMP22 особенно важен для защиты нервов от физического давления, помогая им восстановить свою структуру после пережатия или сдавливания (компрессии). Компрессии может прервать передачу нервных сигналов, что приводит к ощущению, обычно называемому «засыпанием» конечности. Способность нервов восстанавливаться после нормального ежедневного сдавливания, например, при длительном сидении, предохраняет конечности от постоянной потери чувствительности. У пациентов с ШМТ1А процесс миелинизации не завершен должным образом, и патологические симптомы, связанные с данным заболеванием, чаще всего проявляются после второго десятилетия жизни.

Ген PMP22 также играет роль в росте шванновских клеток и процессе, посредством которого клетки созревают для выполнения специфических функций (дифференцировка). Прежде чем стать частью миелина, новообразованные белки PMP22 подвергаются процессингу и упаковываются в специализированные клеточные структуры, называемые эндоплазматическим ретикулумом и аппаратом Гольджи. Завершение указанных этапов процессинга и упаковки имеет решающее значение для правильного функционирования миелина. Патомеханика ШМТ1A характеризуется отсутствием миелиновых оболочек из-за дополнительного гена PMP22, который отвечает за аномально высокую концентрацию периферического миелинового белка 22 (PMP22) в шванновских клетках. Анализ GSEA, проведенный на клетках микроглии человека, показал, что воздействие ААТ оказывает повышающую регуляцию генов, связанных с путем реакции несвернутых белков (РНБ, англ. «UPR») и выживанием клеток (антиапоптотический эффект (фиг. 4C, фиг. 9).

Пример 12

ADAM17, также известный как TACE, представляет собой трансмембранный белок, который включает в себя внеклеточный цинк-зависимый протеазный домен. В контексте ШМТ1A, ADAM17 известен своим ингибирующим действием на ШК-опосредованную миелинизацию посредством нейрегулина 1 типа III (NRG1-III). Постулируется, что AAT смог преодолеть гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и взаимодействовать с ADAM17, успешно ингибируя его активность, и тем самым позволяя ШК «вручную» преодолевать дистресс-сигнал, который генерирует перегруженный ЭР с PMP22, и способствуя образованию миелиновых оболочек вокруг аксонов.

Пример 13. Уровни чААТ в плазме крови

чААТ не был обнаружен в плазме крови контрольных мышей дикого типа и мышей с ШМТ1A, получавших несущую среду, в проанализированные моменты времени (сутки 14, сутки 19, сутки 24 и сутки 29). чААТ был обнаружен в плазме крови группы ШМТ1A + чААТ в среднем на уровне 6,07 мкг/мл, 6,99 мкг/мл, 8,14 мкг/мл и 5,22 мкг/мл в сутки 14, сутки 19, сутки 24 и сутки 29, соответственно.

Пример 14. Гистология седалищного нерва

Как и ожидалось, уменьшение общего числа аксонов на единицу площади, диаметра аксонов и значительное увеличение коэффициента g наблюдалось в группе ШМТ1A + несущая среда по сравнению с контрольной группой дикого типа в возрасте 8 недель (таблица 20, фиг. 10-13).

Небольшое увеличение общего числа аксонов на единицу площади наблюдалось в группе ШМТ1A + воздействие чААТ, по сравнению с группой, получавшей несущую среду. Более того, у животных с ШМТ1A, получавших чААТ, наблюдалось значительное увеличение диаметра аксона и уменьшение коэффициента g (равного отношению внутреннего диаметра к внешнему диаметру миелинизированного аксона) по сравнению с группой, получавшей несущую среду. Даже если животные ШМТ1A + чААТ также имели число аксонов, диаметр аксонов и коэффициент g статистически отличались от таковых у контрольной группы дикого типа (таблица 20, фиг. 10-13). Взятые в совокупности, полученные данные свидетельствуют о положительной, но частичной эффективности чААТ при гистопатологии, индуцированной нарушением ШМТ1A, при введении в дозе 50 мг/кг два раза в сутки подкожным путем.

Таблица 20. Гистология седалищного нерва

1-сторонний дисперсионный анализ и тест Туки: ***: p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем; †††: p < 0,001 по сравнению с ШМТ1А + несущая среда

Пример 14. ИЛ-6

Сходные концентрации ИЛ-6 в плазме крови наблюдались между группами на базовом уровне (сутки 1) и в сутки 8.

Как и ожидалось, значительное повышение концентрации ИЛ-6 в плазме крови наблюдалось в группе ШМТ + несущая среда в сутки 14 и сутки 29.

В группе ШМТ + воздействие чААТ также наблюдалось значительное повышение концентрации ИЛ-6 в плазме крови по сравнению с базовой концентрацией. Однако концентрация ИЛ-6 в плазме крови животных, получавших чААТ, была ниже, чем у животных, получавших несущую среду, в сутки 29 (таблица 21 и фиг. 14), что указывает на прямой или непрямой эффект чААТ на данный воспалительный цитокин.

Таблица 21. Уровни ИЛ-6 в плазме крови

t-критерий Стьюдента: *; **; ***: p < 0,05; p < 0,01; p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем в указанный момент времени; †: p < 0,05 по сравнению с ШМТ1А + несущая среда в указанный момент времени

Пример 15. ФНО-α

Как и ожидалось, значительное повышение концентрации ФНО-α в плазме крови наблюдалось в группе ШМТ1А + несущая среда в сутки 14 и сутки 29.

В группе ШМТ1A + воздействие чААТ также наблюдалось значительное повышение концентрации ФНО-α в плазме крови в сутки 14 и сутки 29 по сравнению с базовой концентрацией (таблица 22 и фиг. 15), что позволяет предположить, что чААТ не оказывает влияния на уровни указанного воспалительного цитокина в данной модели ШМТ1A.

Таблица 22. Уровни ФНО-α в плазме крови

t-критерий Стьюдента: *; **; ***: p < 0,05; p < 0,01; p < 0,001 по сравнению с ДТ-контролем в указанный момент времени

Пример 16

Эффект ААТ на клетки SH-SY5Y, обработанные 6-OHDA, оценивали по морфологии клеток и клеточной пролиферации с последующей количественной оценкой жизнеспособности клеток.

Клетки и воздействия

Клетки SH-SY5Y, которые широко используются для моделирования нейродегенеративных нарушений, использовали для создания модели болезни Паркинсона in vitro (Que R et al., Front. Immunol 2021). Клетки культивировали в DMEM F12/Glutamax с добавлением 10% ЭТС.

Клетки обрабатывали в течение 24 часов нейротоксином 6-гидроксидофамином (6-OHDA, Sigma Aldrich 162957) в концентрациях 50 мкМ и 100 мкМ отдельно или в комбинации с 25 мкМ AAT (AAT, полученный из плазмы крови, Sigma Aldrich, партия A9024). Клетки, обработанные одним AAT или в комбинации с 6OHDA в течение 24 часов, затем инкубировали со свежим ААТ в течение еще 24 часов. На контрольные клетки воздействовали ФСБ.

Анализ роста и жизнеспособности клеток

В сутки 0 клетки высевали в равном количестве в 24-луночный планшет, на следующие сутки после описанных выше воздействий, и окончательный общий подсчет клеток выполняли в сутки 4 культивирования (рост клеток). Жизнеспособность клеток оценивали с помощью набора реактивов Cell Counting Kit-8 (CCK-8; Sigma Aldrich 96992). После воздействий клетки инкубировали с 10 мкл раствора CCK-8 в течение 2 часов в инкубаторе. Абсорбцию измеряли при 450 нм с помощью считывателя микропланшетов SpectraMax iD3. Эксперименты выполняли в трех повторностях.

Иммуноанализ ИЛ-6 человека

Иммуноанализ ИЛ-6 человека (R&D D6050) выполняли на супернатанте клеток. Кратко, 40000 клеток высевали в 24-луночный планшет и на следующие сутки воздействовали на них так, как описано в параграфе «Клетки и воздействия». В конце воздействий клетки промывали в ФСБ и инкубировали в среде с 2% ЭТС в течение 24 часов, затем супернатанты клеточной культуры собирали и центрифугировали для удаления частиц. Процедуру анализа проводили в соответствии с инструкциями производителя на стандартах и исследуемых образцах в двух повторностях. Абсорбцию измеряли при 450 нм с помощью считывателя микропланшетов SpectraMax iD3. Получали стандартную кривую на основе семи разведений стандарта ИЛ-6 и определяли концентрации ИЛ-6 в образцах.

6-OHDA в концентрации 50-100 мкМ в течение 24 часов индуцировал нарушение пролиферации клеток, вызывая гибель клеток и уменьшая число клеток после 4 суток культивирования (фиг. 17). Напротив, комбинированное воздействие с ААТ значительно увеличивало число клеток по сравнению с применением только 6-OHDA (фиг. 17), что указывает на положительный эффект AAT на выживаемость/пролиферацию клеток. p-значения t-критерия являются значимыми для следующих условий: контроль против 6-OHDA, p = 0,001; 6-OHDA против ААТ + 6-OHDA, p = 0,003. Контроль при сравнении с ААТ: статистически не значимо. Планки погрешностей представляют собой СОС.

Обработанные клетки затем подвергали анализу на жизнеспособность клеток. SH-SY5Y, обработанные только 6-OHDA, продемонстрировали сильное снижение жизнеспособности по сравнению с контрольными клетками и клетками, обработанными только AAT (фиг. 18).

Число клеток, а также жизнеспособность клеток были значительно увеличены, когда воздействие 6-OHDA комбинировали с воздействием AAT, по сравнению с воздействием только 6-OHDA (фиг. 18). p-значения t-критерия: существенных различий между контролем и только ААТ не наблюдалось. Все условия выполняли в трех повторностях. Основываясь на данных результатах, авторы данного изобретения могут заключить, что введение AAT в клеточной модели БП (SH-SY5Y, индуцированные 6-OHDA) оказывает благоприятный эффект на рост и жизнеспособность клеток, возможно, защищая клетки от гибели, индуцированной 6-OHDA.

В дополнение к изучению эффекта AAT на провоспалительные цитокины авторы данного изобретения провели количественное определение ИЛ-6 в супернатантах клеток. Среда от клеток, индуцированных 6-OHDA, имела повышенный уровень ИЛ-6 по сравнению с контрольной средой, напротив, среда, собранная от клеток, обработанных AAT, демонстрировала меньшую концентрацию ИЛ-6 (фиг. 19). p-значения t-критерия: значимость для контроля против 6-OHDA, p = 0,05; и отсутствие значимости для другого сравнения.

ПЕРЕЧЕНЬ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Wrapp, D., et al., Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation. Science, 2020. 367(6483): p. 1260-1263.

2. Jaimes, J.A., J.K. Millet, and G.R. Whittaker, Proteolytic Cleavage of the SARS-CoV-2 Spike Protein and the Role of the Novel S1/S2 Site. iScience, 2020. 23(6): p. 101212.

3. Korber, B., et al., Spike mutation pipeline reveals the emergence of a more transmissible form of SARS-CoV-2. bioRxiv, 2020: p. 2020.04.29.069054.

4. Becerra-Flores, M. and T. Cardozo, SARS-CoV-2 viral spike G614 mutation exhibits higher case fatality rate. Int J Clin Pract, 2020.

5. Li, Q., et al., The Impact of Mutations in SARS-CoV-2 Spike on Viral Infectivity and Antigenicity. Cell, 2020.

6. Ogawa, J., et al., The D614G mutation in the SARS-CoV-2 Spike protein increases infectivity in an ACE2 receptor dependent manner. bioRxiv, 2020.

7. Goodfellow, I. Goodfellow, and S.I. Taube, Calicivirus Replication and Reverse Genetics Viral Gastroenteritis: Molecular Epidemiology and Pathogenesis. 2016: p. 355-378.

8. Yin, W., et al., Structural basis for inhibition of the RNA-dependent RNA polymerase from SARS-CoV-2 by remdesivir. Science, 2020.

9. Gao, Y., et al., Structure of the RNA-dependent RNA polymerase from COVID-19 virus. Science, 2020. 368(6492): p. 779-782.

10. Pachetti, M., et al., Emerging SARS-CoV-2 mutation hot spots include a novel RNA-dependent-RNA polymerase variant. J Transl Med, 2020. 18(1): p. 179.

11. Baecher-Allan, C., B. J. Kaskow, and H. L. Weiner. 2018. 'Multiple Sclerosis: Mechanisms and Immunotherapy', Neuron, 97: 742-68.

12. Bergin, D. A., K. Hurley, N. G. McElvaney, and E. P. Reeves. 2012. 'Alpha-1 antitrypsin: a potent anti-inflammatory and potential novel therapeutic agent', Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 60: 81-97.

13. Blauwendraat, C., M. A. Nalls, and A. B. Singleton. 2020. 'The genetic architecture of Parkinson's disease', Lancet Neurol, 19: 170-78.

14. Chang, K. H., T. J. Chuang, R. K. Lyu, L. S. Ro, Y. R. Wu, H. S. Chang, C. C. Huang, H. C. Kuo, W. C. Hsu, C. C. Chu, and C. M. Chen. 2012. 'Identification of gene networks and pathways associated with Guillain-Barre syndrome', PLoS One, 7: e29506.

15. Dias Carvalho, P., C. F. Guimaraes, A. P. Cardoso, S. Mendonca, A. M. Costa, M. J. Oliveira, and S. Velho. 2018. 'KRAS Oncogenic Signaling Extends beyond Cancer Cells to Orchestrate the Microenvironment', Cancer Res, 78: 7-14.

16. Hampel, H., F. Caraci, A. C. Cuello, G. Caruso, R. Nistico, M. Corbo, F. Baldacci, N. Toschi, F. Garaci, P. A. Chiesa, S. R. Verdooner, L. Akman-Anderson, F. Hernandez, J. Avila, E. Emanuele, P. L. Valenzuela, A. Lucia, M. Watling, B. P. Imbimbo, A. Vergallo, and S. Lista. 2020. 'A Path Toward Precision Medicine for Neuroinflammatory Mechanisms in Alzheimer's Disease', Front Immunol, 11: 456.

17. Hoyle, J. C., M. C. Isfort, J. Roggenbuck, and W. D. Arnold. 2015. 'The genetics of Charcot-Marie-Tooth disease: current trends and future implications for diagnosis and management', Appl Clin Genet, 8: 235-43.

18. Marogianni, C., M. Sokratous, E. Dardiotis, G. M. Hadjigeorgiou, D. Bogdanos, and G. Xiromerisiou. 2020. 'Neurodegeneration and Inflammation-An Interesting Interplay in Parkinson's Disease', Int J Mol Sci, 21.

19. Martin-Aguilar, L., E. Pascual-Goni, and L. Querol. 2019. 'Autoantibodies in immune-mediated inflammatory neuropathies', Med Clin (Barc), 153: 360-67.

20. Matthews, P. M. 2019. 'Chronic inflammation in multiple sclerosis - seeing what was always there', Nat Rev Neurol, 15: 582-93.

21. Nikolac Perkovic, M., and N. Pivac. 2019. 'Genetic Markers of Alzheimer's Disease', Adv Exp Med Biol, 1192: 27-52.

22. Parnell, G. P., and D. R. Booth. 2017. 'The Multiple Sclerosis (MS) Genetic Risk Factors Indicate both Acquired and Innate Immune Cell Subsets Contribute to MS Pathogenesis and Identify Novel Therapeutic Opportunities', Front Immunol, 8: 425.

23. Ransohoff, R. M. 2016. 'A polarizing question: do M1 and M2 microglia exist?', Nat Neurosci, 19: 987-91.

24. Satoh, J. I. 2017. 'Gene Expression Profiles of M1 and M2 Microglia Characterized by Comparative Analysis of Public Datasets', Clinical and Experimental Neuroimmunology, 9(2): 124-138.

25. Skaper, S. D., L. Facci, M. Zusso, and P. Giusti. 2018. 'An Inflammation-Centric View of Neurological Disease: Beyond the Neuron', Front Cell Neurosci, 12: 72.

26. Timmerman, V., A. V. Strickland, and S. Zuchner. 2014. 'Genetics of Charcot-Marie-Tooth (CMT) Disease within the Frame of the Human Genome Project Success', Genes (Basel), 5: 13-32.

27. Zhou, T., Z. Huang, X. Zhu, X. Sun, Y. Liu, B. Cheng, M. Li, Y. Liu, C. He, and X. Liu. 2018. 'Alpha-1 Antitrypsin Attenuates M1 Microglia-Mediated Neuroinflammation in Retinal Degeneration', Front Immunol, 9: 1202.

28. Que R, Zheng J, Chang Z, Zhang W, Li H, Xie Z, Huang Z, Wang H-T, Xu J, Jin D, Yang W, Tan E-Kand Wang Q DI-3-n- Butylphthalide Rescues Dopaminergic Neurons in Parkinson’s Disease Models by Inhibiting the NLRP3 ln"ammasome and Ameliorating Mitochondrial Impairment. Front. Immunol. 12 (2021).

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Atlas Biotechnology SA

<120> Альфа-1-антитрипсин (ААТ) в лечении и (или) профилактике

неврологических нарушений

<130> AE3184 PCT BS

<150> EP22168622.3

<151> 14.04.2022

<150> EP21206096.6

<151> 02.11.2021

<150> PCT/EP2021/061597

<151> 03.05.2021

<160> 8

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 418

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<220>

<223> AAT

<400> 1

Met Pro Ser Ser Val Ser Trp Gly Ile Leu Leu Leu Ala Gly Leu Cys

1 5 10 15

Cys Leu Val Pro Val Ser Leu Ala Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala

20 25 30

Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn

35 40 45

Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln

50 55 60

Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser

65 70 75 80

Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr

85 90 95

His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro

100 105 110

Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn

115 120 125

Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu

130 135 140

Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys

145 150 155 160

Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu

165 170 175

Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys

180 185 190

Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu

195 200 205

Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val

210 215 220

Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val Thr Thr Val

225 230 235 240

Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys

245 250 255

Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala

260 265 270

Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu

275 280 285

Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp

290 295 300

Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr

305 310 315 320

Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe

325 330 335

Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys

340 345 350

Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly

355 360 365

Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile

370 375 380

Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu

385 390 395 400

Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr

405 410 415

Gln Lys

<210> 2

<211> 44

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> C-концевая последовательность AAT, 374-418

<400> 2

Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe

1 5 10 15

Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro

20 25 30

Leu Phe Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys

35 40

<210> 3

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Флуорогенные пептиды, полученные из шиповидного белка SARS-CoV-2

<400> 3

His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Флуорогенные пептиды, полученные из шиповидного белка SARS-CoV-2

<400> 4

Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид ВИЧ-TAT, 48-57

<400> 5

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 6

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид оболочки FHV, 35-49

<400> 6

Arg Arg Arg Arg Asn Arg Thr Arg Arg Asn Arg Arg Arg Val Arg

1 5 10 15

<210> 7

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид HTLV-II Rex, 4-16

<400> 7

Thr Arg Arg Gln Arg Thr Arg Arg Ala Arg Arg Asn Arg

1 5 10

<210> 8

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид BMV gag, 7-25

<400> 8

Lys Met Thr Arg Ala Gln Arg Arg Ala Ala Ala Arg Arg Asn Arg Trp

1 5 10 15

Thr Ala Arg

<---

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики, а именно к применению композиции, содержащей терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ) и по меньшей мере один фармацевтический носитель, для лечения и/или профилактики болезни Шарко-Мари-Тута. Технический результат заключается в лечении или профилактике болезни Шарко-Мари-Тута. 3 з.п. ф-лы, 19 ил., 22 табл., 16 пр.

1. Применение композиции для лечения и/или профилактики заболевания или нарушения нервной системы, где композиция содержит терапевтически эффективное количество белка альфа-1-антитрипсина (ААТ),

где композиция дополнительно включает по меньшей мере один фармацевтический носитель, и

где заболеванием или нарушением нервной системы является болезнь Шарко-Мари-Тута.

2. Применение композиции по п. 1, где белок ААТ выделен из плазмы крови человека.

3. Применение композиции по п. 1 или 2, где белок альфа-1-антитрипсин (ААТ) представляет собой рекомбинантный альфа-1-антитрипсин (рчААТ).

4. Применение композиции по любому из пп. 1-3, где фармацевтический носитель представляет собой усилитель проницаемости гематоэнцефалического барьера.