Способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые Советский патент 1983 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно иммунологическим метод исследования., Известен способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем применения культуры клеток in vitro. Для этого используют чистую популяцию Т- или В-лимфоцитов и измеряют интенсивность синтеза ДНК, в них по включению Н тимидина Однако известный способ не обеспечивает достоверности получаемых результатов в связи со сложностью выделения чистых т- и В-клеточных популяций лимфоцитов и их последующей идентификации. Наиболее близким является способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимь1е путем введения антигена in vitro с последующим учетом результатов 21. Однако известный способ является трудоемким, включающим в себя такие операции , к4к облучение, хирургичес кое вмешательство,, трансплантацию лимфоидных клеток. Кроме того, применяемое в нем хирургическое вмешат тельство, а также облучение способствует инфицированию организма. Инфицирование и связанная с ним реакция воспаления организма искажают, картину течения иммунологического ответа на введение изучаемого антигена, что затрудняет определение принадлежности его к ТтзависиКилм или Т-независимым антигенам, а в ряде случаев исключает такую возможность . Цель изобретения - упрощение и ускорение способа. Цель достигается тем, что при дифференциации антигенов на Т-зависимые и i-независимые путем введения антигена in vivo с последующим учетом результатов антиген вводят одновременно с лимфоидным кейлоном, полученньи по методу Bw Bdugli в интактный организм, из расчета 10100 мкг кейлона (г веса), рпределяют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов селезенки на 4-14 сутки после введения и по изменению площади фолликулов по сравнению с нормой дифференцируют Т-зависнмые и.Т-независимые антигены. Пример 20 мышей линии Balb/c иммунизируют Т-независимым антигеном (эритроцитами барана) контрольная группа. 12 мышам этой

же линии одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 10 мкг/г (I опытная группа), 20 мышам одновременно с иммунизацией вво.дят лимфоидный кейлон в дозе so мкг/г (II опытная группа), а 12 мышам одновременно с иммунизацией вводят 100 мкг/г лимфоидного нейлона (III опытная группа). На 4-14 сутки в гистологических средах се-, лезёнки измеряют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов с помощью Вайбелевской решетки.

Контрольная группа: хорошо выражены крупные лифоидные фолликулы, вне фолликула располагаются лимфоидные скопления в виде отдельных островок. Опытная группа: периартериальные лимфоидные фолликулы мелкие , зоны периартериальных лимфоидных фолликулов истощены.

Полученные результаты представлены в табл. 1 (плсидадь периартериальных лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации Т-зависимым антигеном (аэритроцитами барана).

Из данных таблицы следует, что площадь периартериальных лимфоидных фолликулов,на протяжении всего эксперимента в опытных группах была значительно меньше по сравнению с контрольной группой и имела достоверные различия.

Пример 2. 19 мышей линии Balb/c иммунизируют Т-независимым антигеном (липополисахаридом Ё. coli. 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 10 мкг/г (I опытная группа). 19 мышам одновременно с иммунизацией вводят 50 мкг/г лимфоидного кейлона (II опытная группа). 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 100 мкг/г (III опытная группа). На 4-14 сутки измеряют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов.

Контрольная группа: лимфоидные периартериальные фолликулы четко выражены. Опытная группа: лимфоидные периартерлальные фолликулы представляют собой компактные зоны

Полученные результаты представлены в табл. 2 (плсяцадь периартериальиых лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации Т-независимым антигеном (липополисахаридом Е. co2i) .

Представленные данные указывают на то, что во все сроки наблюдения площадь периартериальных лимфоидных фолликулов в опытных и конт рольной группах не имела достоверных различий.

Пример 3. 14 мышей линии BaZb/c иммунизируют эритроцитами лошади (контрольная группа). 14 мышам одновременно с иммунизацией вво дят лимфоидный кейлон в дозе 10 мкг/г (I опытная группа). 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят.лимфоидный кейлон в дозе 50 мкг/г (II опытная группа). 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 100 мкг/г. Затем проводят 21сследрвания, как-и.в вышеописанных примерах.

Результаты исследований представ лены в табл. 3 (площадь периартериальных лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации эритроцитами лошади).

Данные табл. 3 указывают на то, что площадь периартериальных лимфоидных фолликулов при иммунизации эритроцитами лошади в опыте и контроле не имеет достоверных различий.

На Т-зависимые антигены в основном реагируют Т-лимфоциты, а на Т-независимые анз игены - В-лимфоциты. Полученные результаты исследований показывают, что при иммунизации животных эритроцитами барана и использовании лимфоидного кейлона периартериальные лимфоидные фолликулы селезенки (Т-зоны) истощаются, что позволяет сделатьвывод о принадлежности эритроцитов барана к Т-зависимым антигенам. В случае иммунизации липополисахаридом Е. соZi и эритроцитами лоша; и с использова нием лимфоидного кейлона периартериальные лимфоидные фолликулы (Т-зоны) опытной группы по сравнению с контрольной не истощаются, на основании чего можно сделать вывод о принадлежности этих антигенов к Т-независимым.

Оптимальным сроком для приготовления гистологических срезов с- точки зрения достоверности получаемых результатов являются 6-е сутки эксперимента, а оптимальной дозой лимфоидного кейлона является 50 мкг/г веса животного. Экспериментальные данные опытной группы (табл. 1) полученные в этих условиях имеют достоверные различия по сравнению с контрольной группой (р 0,001) , что указывает на высокую степень достоверности получаемых результатов.

Предложенный способ по сравнению с известным способом дифференциации антигенов, обеспечивает значительно более высокую достоверность получаемых результатов з§ счет исключения таких отрицательных факторов, как инфицирование и связанную с ним реакцию воспаления, искажающую картину иммунологического ответа-организма. Кроме того, предлагаемый сло,соб исключает такие трудоемкие процессы известного способа, как облучение, хирургическое вмешательство, трансплантацию лимфоидных клеток. Предлагаемый способ дает также существенный экономический эффект за счет уменьшения количества животных необходимых для эксперимента, уменьшения количества занятого персонала для выполнения эксперимента, а также за счет сокращения времени необходимого для исследований.

Дифференциация антигенов на Т-эа висимые и Т-независимые позволяет идентифицировать огромное количество антигенов как природно1О, так и синтетического происхождения, что необходимо для понимания механизмов течения и мунного ответа на тот или /иной антиген, а также для разработки схем его регуляции при вакцинации, как животных, так и человека.

Таблица

0,5 II19 50 14,59+0,64 0,5 III14 100 14,3+2,3 0,5 0,5 0,5 0,5 1б,0±2,0811,07+0,3811,74+0,77 0,5 0,5 0,5 17,0+2,012,3+2,013,4±1,28 0,5 0,5 Ч),5

КонтроФормула изобретения

Способ дифференциации антигенов на Т-эависимые и Т-независимые путем введения антигена in vivo с последующим учетом результатов, о тличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа/ антиген вводя одновременно с лимфоидным нейлоном из расчета мкг кейлона (г веса) , определяют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов селезенки на 4-14 сутки после введения и по изТаблица 3

менению площади фолликулов по сравнению с нормой дифференцируют Т-зависимые и Т-независимые антигены.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

с. 98-99 (прототип).