Способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма Советский патент 1982 года по МПК G09B23/28 

(54) СПСЮОБ

1

Изобретение относится к экспериментальной медицине, преимущественно к иммунологии и патофизиологии и может найти применение дпя моделирования заболеваний, сопровождающихся недостаточностью иммунной системы с целью изучения механизмов его развития и возможных путем их коррекции.

.Известен способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния ганизма путем иммунизации животного антигеном ij.

Однако известный способ не позволяет приблизить модель к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состояния организма.

Цель изобретения - приближение модели к клиничecкo fy проявпению вторич- ного иммунодефицитного состояния.

Указанная цель достигается тем, что в способе моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма, включающем иммунизацию животного антигеном, в качестве антигена испопьзуют белковую фракцию гомолимфоцитов с мол. вес. 105000, и иммунизацию проводят однократным подкожным введением белковой фракции в дозе 0,2-0,25 мл/кг .веса животного с адъювантом.

Пример 1. Получение антигена, используемого для воспроизведения им- мунодефицитного состояния.

Лимфатические узлы стерильно забирают у 1О интактных кроликов. 2О г.

10 лимфатически,х узлов расщепляют в 2О мп физиологического раствора. Попученную клеточную взвесь фильтруют через кап.роновую ткань. Концентрация клеток составляет 2,5-3-Ю /мп. Концентрацию

15 клеток доводят раствором Хенкса до 1-10 в 10О МП среды и разливают в плоские флаконы по 2ОО мл. Флаконы помещают в термостат при 37 С на ЗО мин. Затем надосадочную жидкость

20 сливают в другой флакон на 30 мин. Супернатант сливают из флаконов, разливают по пробиркам и центрифугируют при 100 об/мин 7 мин. От примеси эритроМОДЕЛИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА цитов освобождаются с помощью осмотического шока ч- к осадку клеток добавляют 1,0 дести шшрованной воды и 15 с пипетируют, затем добавляют фиаиопогический раствор и концентрацию клеток доводят до первоначальной - 2,5-3 «1Сг/мл Конечная концентрация лимфоцитов составляет 93-95%. На следующем этапе взвесь клеток подвергают ультраз ковой обработке в течение 1,5 мин на модернизированнсяи ультразвуковом генераторе с параметрами: {частота 44 кГц, мощность преобразователя 4 О Вт. Взвесь центрифугируют на ультрацентрифуге 1 ч 2О мин при 1050OO.g, Супернатант пропускают на колонке с сефадексом CJ, 2ОО. Полученную белковую фракцию с мол. вес. 1О5000 концентрируют на приборе до содержания белка 3 мг/мл и используют в качестве антигена. Пример 2. Вторичное иммунодефицитное состояние у мышей СВА воспроизводят с помощью гомогената, состо ящего из равный частей белковой фракции лимфоидного антигена (мол.вес. 1О5ООр) в смеси с полным адъювантом Фрейнда в дозе 0,2/мышь. Спустя месяц мышей забивают, извлекают селезенку, расщепляют в среде Хенкса, нюличество клеток доводят до ЗО млн. в 0,5 мл (поспе фильтрации), Которые внутривенно вводят гибридам (СВА/С57Ве) в дозе 0,5 мл. Спустя неделю гибридов F, которым вво дят клетки селезенки, и интакгаых иммунизируют эритрсдаитами барана в дозе 5-1О . На 4 сут определяют число бляшкообразуюошх клеток (БОК) в селезенке по методу ConmHO hoim. В случае снижения количества Т-супрессоров у под опытных мыщей отмечается усиленная вы работка антител (число БОК увеличивает ся). При введении клеток селезенки от

Сравнительные данные по действию препаратов на иммунную

систему мышей со вторичным иммунодефицитным состоянием у гибридов F число БОК составляет 4411О, что более чем в 4 раза брльще, чем у контрольных мышей - 106-10 . Следовательно, у мыщей с иммуноде4я1цитным состоянием снижено число Т-супрессоров. Снижение количества Т-супрессоров, контролирующих в организме выработку аутоантител, обуславливает их увеличение. Пример 3. Получение антигена для постановки серологических реакций. Антиген получают по общепринятой методике по А. И. Николаеву. С этой целью 5 г лимфатических узлов интактных кроликов промывают в оистиллированной воде в физиологическом растворе. Затем лимфатические узлы растирают в ступке с 25 мл физиологического раствора. Потом добавляют 41,5 мг трипсина, доводят рЯ среды 8,0 боратом натрия и ставят на 2 ч в термостат при 37 С. Периодически проверяют рН среды. Затем антиген ннактивир ют ЗО мин при и центрифугируют 2О мин при 12 тыс. об/мин. Полученный Супернатант используют в качестве антигена для приготовления стойкого эритроцитарного диагностикума в нащей модификации. Диагностикум испольдуют в реакции пассивной гемагглютинации для выявления аутоантител к .лимфоидной ткани. Для уточнения характеристики изменений, происходящих при моделировании втсфичного иммунодефицитного состояния, была проведена контрольная серия экспериментов с введением одного стимулятора Фрейнда. В таблице представлены данные по введению стимулятора Фрейнда, стимулятора с белковой фракцией и одной бепковой фракции на примере динамики Т-хшмфоцитов.

Стимулятор Фрейнда0,12,132,0

Стимулятор Фрейнда

и белковый антиген0,22,01,44

Белковый антиген. 0,12,1 1,1

2,1

2,12

0,97 .; . 0,73 1,92,2

Введение стимулятора Фрейнда не вызывает угнетения иммунной системы. Введение одной белковой фракции вызывает кратковременную иммуносупрессию, а совместное введение белкового антиге-г на со стимулятором Фрейнда вызывает стойкое иммунодефицитное состо шие, характеризующееся усиленной выработкой аутоантитеп, снижением количества Т-лимфооитов и соответст юшей перестройкой лимфоузлов, заключающийся в редукции паракортикальной зоны.

Предлагаемый способ позволяет приблизить модель к клиническому проявлению вторичного иммунодефииитного состояния и создать представления об изменениях, сопровождающих развитие вторичного иммуиодефицитного состояния.

Способ обеспечивает высокую воспроизводимость, надежность и длительность существования модели вторичного иммунодефииитного состояния.I

Формула изобретения

Способ моделирования вторичного иммунодефицитного состо1шия организма путем иммунизации животного антигеном, отличающийся тем, что, с цепью приближения модели к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состояния, в качестве антигена используют белковую фракцию гомолвмфскПИТОВ с мол. вес. 10SOOO,в иммунизацию проводят однократным подкожным введением белковой фракхти в дозе 6,2« 0,25 мл/кг веса животного с адыован- том.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лисяный Н. И. Антилямф(И1итарная сыворотка. Достиження и иммунолошческие проблемы . Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобаологии, 1979, № 6, с. 3-8.