Способ приготовления питательной среды для культивирования продуцентов глюкоамилазы Советский патент 1983 года по МПК C12N9/34 C12N1/20 

Изобретение относится к микро1биологической отрасли промышленности, в частности к ферментной, а именно к приготовлению питательной среды для культивирования продуцентов глюкоамилазы.

Известен способ приготовления питательной среды для культивирования продуцентов глюкоамилазы, предусматривающий приготовление 16-20%-ной суспензии кукурузной муки, разваривание суспензии муки при 149-176 С (давление 5-12 атм) в течение 30+ 5 мин, охлазедение разваренной массы, внесение амилолитических ферментов в виде солода в количестве 1-3% к весу муки, гидролиз муки при , охлаждение гидролизата до ЗЗ-ЗТ С, добавление глутйминовой кислоты, стерилизацию среды и охлаждение ее. Приготовленную таким образом среду засевают продуцентом глюкоами-пазы, в качестве которого используют Asperg i I I us a warn о г i и культивируют продуцент до максимальной активности глюкоамилазы в среде (160т290 ч) Д. Недостатками описанного способа Являюто : разваривание муки при вы-соких,температурах, что требует наличия специальной аппаратуры и рас-.

ходования значительного количества электроэнергии; применение солода, для приготовления которого используется высококондиционное зерно; получаемая среда- вязкая, что затрудняет процесс аэрации среды, в связи с чем увеличивается продолжительность процесса культивирования.

Наиболее близким к изобретению

10 по технической сущности .и достигаемому положительному эффекту является способ приготовления питательной среды для культивирования продуцентов глюкоамилазы, предусматри15вающий приготовление суспензии муки, введение, в суспензию амилотических и целлюлолитических ферментов, гидролиз суспензии, добавление в гидрОлизат источников азота и ми20неральных солей с последующей стерилизацией среды. При этом суспензию муки разваривают при 127-138 С (1,5-2,5 атм) в течение 1,5-Z ч, амилолитические ферменты вводят по25стадийно, сначала в количестве 0,20,5 ед/г муки в суспензию муки, охлажденной до 95-90, и затем после снижения температуры до 85-г80 С в количестве 0,8-0,5 ед/г одновременно

30 с крахмалом, а ферментные препарата пектиназы или целлюлозы вводят посл 10-минутного гидролиза амилазами, внесения остальных компонентов среды и доведения рН до 4,5, в количес ве 0,5 ед ПкА или 1 ед С на г сухих вэвеш.енных ве1цеств среды. Гидролиз осуществляют, в течение 1ч, доводят рН до 6,0 и стерилизуют среду 2. Недостатком известного способа является разваривание супензии мук что требует множительных энергозат. рат и многократный гидролиз крахмалосодержащего сырья, что значительн усложняет процесс приготовления среды. Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса приготовления питательной .среды. Поставленная цель достигается те что в способе приготовления питател ной среды для культивирования продуцентов глюкоамилазы, предусматривающем приготовление суспензии муки введение в суспензию амилолитических и целлюлолитических ферментов, гидролиз суспензии, добавление в гидролизат источников- азота и 1у1инеральных солей с последующей стерилизацией среды, в суспензию муки до полнительно вводят пшеничные отруби а также пектолитические и протёолитические ферменты, причем соотношение муки и отрубей в суспензии соот ветственно, вес.%, 10-14 и 4-8-, а ферменты вносят в суспензию в следу ющих количествах ,ед/г смеси муки и отрубей: Амилолитические 1,5-10 Целлюлолитические 0,1-1 Пектолитические 0,1-1 Протеолитические 0,1-1 С целью использования среды для непрерывных процессов культивирования продуцентов глюкоамилазы из полученного гид;ролизата суспензии мук и отрубей вьщеляют жидкую фракцию, которую дополнительно вводят гидролизат крахмала, а источники азота и минеральные соли вводят в смесь гид ролизатов кра:хмала и суспензии муки и отрубей. Способ приготовления питательной среды для культивирования продуцентов глюкоёшилазы заключается в следующем. Готовят суспензию, содержащую 10 14% муки и 4-8% пшеничных отрубей, р суспензии устанавливают 4,5-6,3, по лученную суспензию нагревают до 4060 С и вносят амилолитические, пекто литические и Целлюлолитические ферменты в количествах,соответственно равных 1,5-10 и по 0,1-1 ед на 1 г смеси муки и отрубей, суспензию выдерживают при 45-90 С в течение 0,5 2,0 ч. При использовании среды для периодического процесса культивирования продуцентов глюкоамилазы в полученный гидролизат вносят иточники азота, в качестве которого могут быть использованы дрожжи, автолизат дрожжей, солодовые ростки, вытяжка солодовых ростков, кукурузный экстракт, соли аммония, азотнокислые соли и источники фосфора - фосфорнокислые соли. Приготовленную таким образом среду стерилизуют 40-60 мин при . При использовании среды для непрерывных процессов культивирования продуцентов глюкоамилазы из полученного гидролизата муки и отрубей выделяют жидкую фракцию фильтрованием или центрифугированием. В жидкую фракцию гидролизата вносят гидролизат крахмгша, источники азота и фосфорнокислые соли. Полученную среду стерилизуют и охлахадают. Указанные ферменты можно вносить одновременно, при этом гидролиз проводят в две стадии, первую из которых при рН 5,5-6,3; температуре 4555 С, в течение 10-60 мин, а вторую при ТО-ЭО С в течение 20-60 мин или .первую стадию при рН 4,5-5,0, температуре 45-55 с в течение 2060 мин, а вторую при рН 5,8-6,3, температуре 70-90°С в течение 1040 мин. Указанные ферменты можно вносить и последовательно. В приготовленную суспензию муки и отрубей с рН 4,5-5,0 можно вначале внести пектолитические и Целлюлолитические Ферменты в количестве 0,1-1,5 ед на 1 г смеси муки и отрубей, гидролиз осуществить при 4555 с в течение 30-60 мин, затем рН изменить до 5,8-6,3 добавлением аммиака, внести амилолитические и Протеолитические ферменты в количествах соответственно равных 1,510 ед и 0,1-1 ед на г смеси муки, и отрубей, и суспензию прогидролизовать при 70-90°С в течение 10-60 мин. Пример. В ферментер Биолафит Б-50 наливают 5 л воды, включают мешалку и, подогрев до , вносят кг муки, затем наливают еще 5 л воды и вносят 0,6 кг пшеничных отрубей, объем суспензии доводят до 14,4 л, рН суспензии устанавливают 5,0 и вносят 0,8 г Амилосубтилина Г10х, 0,48 г Целловиридина ГЗх и 8,9 г Пектофоетидина ГЗх, растворенные в воде (0,6 л), температуру суспензии поднимают до и вьщерживают 30 мин, затем температуру поднимают, до 85С, вьадерживают 10 мин. Полученный гидролизат при окрашивании иодом не изменяет окраски.