Способ приготовления питательной среды для культивирования грибов-продуцентов ферментов Советский патент 1986 года по МПК C12N9/00 C12N1/00 C12N9/00 C12R1/645 

1 -1

Изобретение относится к микробиологической промьшшеиности, в част- ности к производству ферментов, и может быть использовано при получении амилолитических ферментов для спиртового производства целлюлолити- ческих и пектолитических ферментов для сельского хозяйства.

Цель изобретения -- предотвращение развития кокковой инфекции в процессе культивирования продуцентов ферментов, а также получение комплекса ферментов широкого спектра.

При производстве биомицина образуется значительное количество отходов в виде культуральной жидкости с остаточной активностью биомицина 50 - 90 ед./мл, которые сбрасываются на очистные сооружения, что ингибирует микрофлору очистных сооружений и они не справляются с очисткой технических сточных вод. Утилизация отходов биомицинового производства позволит улучшить условия очистки сточных вод за счет исключения процесса ингиби- рования микрофлоры очистных сооружений.

Сущность изобретения заключается в том, что в питательную среду для культивирования грибов-продуцентов ферментов, содержащую источник углерода, источник азота и минеральные коьшоненты,дополнительно вводят отхо биомицинового производства в виде культуральной жидкости с остаточной активностью биомицина 40-50 ед./мл в количестве 3-25 об.%.

Пример 1. Для культивирования продуцентов амилолитических ферментов готовят гидролизат рхсано- пшеничной муки и пшеничных отрубей, вводят кукурузный экстракт 0,5%. Отход биомицинового производства вво- дят в количестве 10% от объема среды, доводят объем среды до 1 л водой Приготовленную таким образом среду стерилизуют, охлаждают и засевают Aspergillus awamori F-122 - продуцентом амилолитических ферментов. Культивируют при 28°С при аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в течение 72 ч. Получают.глубинную культуру с активностями о. -амилазы 15,8 ед./мл и глюкоамилазы 31,3 ед./мл.

При культивировании этого же штамма на среде указанного состава, но без добавления отхода биошщинового производства активность глубинной

5

0

5

0

5

0

5

0

5

20I

культуры: f -амилазы 18, ед./мл, глюкоамилазы 26,3 ед./мл.

Пример 2. Готовит среду, как описано в примере 1, но дополнительно вводят 25% отхода биомицинового производства. Засевают среду тем же штаммом -и культивируют его в описанных условиях.

Получают глубинную культуру с активностями : с/ -амилазы и глюкоамилазы соответственно 12,9 и 25,4 ед/мл.

П. р и м е р 3. Смешивают в воде 4% свекловичного жома, 1,8% солодо- вь к ростков, 5% зерно-картофельной барды, (Ю1.,,),,50„ 0,6%; КН,РО, 0,2%; M,SO,| о,,06/..и 3% культуральной жид- :Кости5 являющейся отходом биомици- jitoBoro производства. Полученную среду стерилизуют, охлаждают и засевают. Trichoderma viride 13/10, Культивируют при при аэратдаи в течение 168 ч.

Целлюлазная активность по гидролизу фильтровальной бумаги 18,3 е д./мл, Э(5) .: При культивировании этого же штамма в описанных условиях на среде, приготовленной без отхода биомицинового производстла, цедлюлазная активность по гидролизу фильтровальной бумаги составляет 18,1 ед./мл.

Пример .4. Смешивают 3% свекловичного жома, 10% вытяжки солодовых ростков, 0,7% сернокислого аммония, 0,1% фосфорнокислого калия, 0,05% сернокислого магния и 7% отхода биомицинового производства в виде культуральной жидкости. Полученную таким образом среду стерилизуют, охлаждают до и засевают продуцентом пектолитических ферментов Лзрег- gilLus foetidus.

Культивируют штамм при аэрации в течение 120 ч. Пектолитическая активность в фильтрате культуральной жидкости составляет 4,2 ед./мл (интерфе- рометрический метод).

В контрольном опыте (без добавления отхода биомицинового производства) Пектолитическая активность 4,13 ед./мл.

П р и м е р 5. Производят рассев на производственной среде, используемой при производстве ам1шолитичес- кого комплекса ферментов (по примеру 1), содержаш;ей 2,5% агара, выделение кокковой инфекции Streptococcus и накопление ее на той же производственной среде в течение 72-80 ч.

3 . Полученную культуральную жидкость титром 1x10 млч/мл в количестве % засевают одновременно суспензией спор Aspergillus awamori F-122 в колбы объемом 700 мл, содержащие по 100 мл производственной питательной среды, используемой для получения

амилолитиче ского комплекса ферментов . В четыре колбы вводят стрептомицин в количестве 1250 ед./100 мл, а в ю ругие четыре колбы: - по 250 мл отода биомицинового производства (хлортетрациклина) с остаточной активностью биомицина 50 ед./мл(т.е. в 100 мл 1250 ед.), культивируют 72 ч, отбирают пробы и микроскопически определяют наличие кокковой инекции .

Йлияние антибиотиков на активность

ерментов и титр кокковой инфекции

редставлено в таблице.

би то че по те пр но фе

со пр лу гл Це ра сб но ну чт оч

Стрептомицин

Отход производства биомицина в виде фильтрата (хлортетра- циклин)

Редактор В. Петраш

Составитель Е. Воробьева

Техред О.Гортвай Корректор О. Луговая

Заказ 4092Тираж 490Подписное

ВНИИШ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35,Раушская наб., д. 4/5

. Производственно-полиграфическое пpeдпpиятиe г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0

Использование отхода произподстн.ч биомицина в виде фильтрата с остаточной активностью 50 ед./м.п в количестве 25% к объему питательной сред позволяет снизить количество нежелательной кокковой инфекции, сохраняя при этом - и глюкоамилазную активности и необходимое соотношение их в ферментном комплексе.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет исключить нестерильные процессы (кокковую инфекцию) при получении таких ферментов как Амило- глюкаваморин Гх, Пектофоетидин ГЗх, Целловиридин ГЗх, а также улучшить работу очистных сооружений, так как сброс в канализацию отхода, биомицинового производства ингибируёт полезную микр офлору очистных сооружений, что приводит к снижению качества очистки сточных вод.

1,2x10 0,95x10

20

10

1,2x10

0,03x10