Способ получения вещества,обладающего противоклещевой и глистогонной активностью Советский патент 1983 года по МПК C12P1/06 C12P1/06 C12R1/465 

s

сд Изобретение относится к микробиологической промыитенности и касается получения вещества, обладающего противоклещевой и глистогонной активностью. Известен способ получения ве1чества В-41, обладающего инсектицидной и противоклещевой активностью, с испол эованием Streptomyces B- il-Й6 1. Известен также способ получения вещества (мильбеницина, облада ющего также и глистогонной активностью с использованием того же продукта 2. Однако известные способы не обеспечивают получения вещества формулы Ъд 4Us «HS Цель изо1бретения - получение веuiecrea формулы I, обладающего противо клещевой и глистогонной активностью. П Уставленнйя цель достигается тем что согласно способу получения вещества, обладающего противоклеи евой и глистогонной активностью формулы I Streptomyces 13- 1-1«б выраи ивают на питательной среде, содержащей источники углерода и азота при 22ЗП Г, с последующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости концентрированием и очисткой. При этом выращивание осуи(ествляют на среде, содержащей в качестве основ ного источника углерода глюкозу в концентрации 6-8% и дополнительного источника углерода - лактозу, мальтозу и/или маисовый крахмал в концентра ции 0, и в качестве источника азо та - смесь муки соевых бобов крупного помола 0,5-1 и снятого молока 1-2. Кроме того, концентрирование и очистку проводят до содержания целевого продукта 25-50. Вещество, обладающее противоклещевой и глистогонной активностью, получают путем культивирования штамма Streptomyces Этот штамм депонирован в Исследовательском институте ферментации. Агентства Промышленных Наук и Технологии,Министерства Внешней торговли и промышленности , Япония, под номером , а также под наименованием Бикокен-кинки 1(ЗВ. Выращивают штамм в питательной среде, (ей источники усваиваемого углерода и усваиваемого-азота. К источникам углерода относятся глюкоза, сахароза, крахмал, глицерин, экстракт солода, молоза и масло соевьк бобов. Предпочтительным источником углерода является глюкоза, используемая в количестве 6-8% ( вес./об, . Вместе с глюкозой используют дополнительные источники углерода - лактозу, мальтозу и кр«)хмал моиса в количестве 0,5 2,0% С вес./об,. Чтобы поддерживать величину рН постоянной, в процессе выраи(ивания добавляют избыточное количество глюкозы. К источникам азота относятся мука крупного помола соевых бобов, зерна пшеницы, мясной экстракт, пентон, свежие дрожжи, крутой маисовый ликер, сульфат аммония и нитрат аммония. В качестве источника азота используют смесь муки соевых крупного помола 0,,0% снятого молока 1 ,0-2,0%. При необходимости в среду для выращивания культуры добавляют аминокислоту (например глицин или аргинин). При необходимости добавляют также неорганические соли, такие как карбонат кальция, хлорид натрия, хлорид калия или фосфаты, можно также добавлять другие органические или неорганические материалы, которые способствуют росту микроорганизмов и ускоряют образование вещества. Высокий выход вещества получают при использовании среды, которая содержит 6-8% глюкозы, 0,5-2% лактозы и/или муки соевых бобов крупного помола и 1,0-2,0% снятого молока. Выращивание осу«1ествляют в аэробных условиях при 22-3., предпочтительно при 28С. Максимальной производительности вещества достигают спустя дн после начала выращивания, которое осуществляют либо при встряхивании, либо в резервуаре с мешалкой . Количество вещества в бульоне определяют следующим образом. Известное количество, например 3 г, бульона для выращивания культуры заливают в небольшую пробирку, в

31011

которую добавляют 10 мл ацетона. Затем смесь экстрагируют при встряхивании и подвергают центрифугированию. В образующийся сверху раствор добавляют ацетон до общего объема 5 10 мл. Полученный в результате .раствор помещают на заранее подготовленное место на пластинке для тонкослойной хроматографии ( силикагель, например Кизельгель 6П F 25) в коли- ю честве, например, 10-20 нл. Затем пластинку проявляют в течение ч смесью 18:82 { об. ) диоксана и тетра- . хлорида углерода. Пробу исследуют при помощи сканирующего устройства is или тонкослойной хроматографии в области с длиной волны .45.

Вещество выделяют из бульона для выращивания культуры, используя натуральный адсорбент (например, акти- -jo вированный углерод, двуокись алюминия или силикагель, синтетический адсорбент ( например, Лиаиен НР-2ПД абсорбент ( например, Авицел, ионообменную смолу, ионообменный геле- 5 вый фильтр.

Выделение осуществляют следующим образом.

Бульон для ферментации фильтруют с использованием ускорителя фильтрования (такого как диатомовая земля) с тем, чтобы получать фильтровальную лепешку, коУорую затем подвергают экстрагированию метанолом. Затем в водный метановый раствор добавляют воду и полученный в результате раст- 5 вор экстрагируют гексаном. Фазу гексана отделяют и концентрируют выпариванием при пониженном давлении, в результате чего образуется маслянистый материал, содержащий искомое вещество. Этот маслянистый материал помещают в колонну, содержащую силикагель t,например, Вакогель Г.-200) и элюируют, например, смесью 95:5 (Сб) гексана и ацетона с тем, чтобы со- 45 брать фракции, содержащие искомое вещество. Эти фракции концентрируют выпариванием при пониженном давлении, причем снова образуется маслянистый материал, который растворяется в не- 50 большом количестве метанола, и добавляют в колонну из материала Сефадекс H-20, затем элюируют метанолом. Собирают фракции, содержащие искомое вещество, растворитель удаляют и ос- 55 таток растворяют в небольшой количестве метанола. Добавляют воду и смесь выдерживают при комнатной температу-.

554 ;

ре. В результате получают вещество в виде пены или пузырьков, KOTOpW после разрушения дают аморфный порошок.

После перекристаллизовывания из смеси 20:1 ( об. гексана и этилацетата вещество получают в виде небольших игл с т.пл. 186-188 С. Процедуру очистки вещества можно проводить на любой стадии и использовать неочищенный продукт, которьй содержит смесь мильбемицинов и искомое вещество. Если смесь, содержащая два или более таких веществ, используется без полного разделения, то достаточно, чтобы полученный в результате продукт давал 100 эффект при применении против клещей с концентрацией 5 ч./млн. Содержание вещества в неочищенном продукте составляет предпочтительно не менее вес.%.

Полученное вещество обладает высокой противоклещевой при применении против взрослых клеЩей и яиц, а также глистогонной активностью.

Вещество можзт быть применено против такихклещей, как клещик паутинный двупятнистый (Tetrahycniis urtrede), европейский красный клещ (Рапоnychus ulmi), цитрусовый красный клещик (Panonychus citri) и клещи видов Аи lops или Aculus, которые паразитируют на фруктах, растениях и цветах. Вещество также обладает активностью против клещей вида 1х odidas doerma nyssidas и Sareopttdae, которые паразитируют на животных. Вещество обладает также высокой активностью против таких эктопаразитов как Oestrus, Luci1 га Hypoderma, Ctasurophilus, блох,I вшей и т.д., а также насекомых (таких, как тараканы или мухи и некоторых других видов насекомых, являющихся вредителями садового и сельского хозяйства, таких как тля и личинки насекомых других Lepidoptera. Кроме того, вещество является активным при применении против круглых червей, таких как черви вида Meloidogyne, и клещей, которые обитают в почве.J

При использовании против клещей или насекомых ве1цество предпочтительно разбавляют носителем с целью получения композиций, таких как порошки, крупные порошки, гранулы, мелкие гранулы, смачиваемые порошки, эмульгируемые концентраты или масло. 5 Носитель, используемый для получе ния таких композиций, может быть син тетическим или натуральным, неоргани ческим или органическим и, в общем случае, любым носителем, который обы но добавляют в инсектициды или акари циды для того, чтобы активный ингредиент быстрее достигал объекта, который подвергается обработке( например, растения, клеща или насекомоговредителя), или упростить хранение, транспортировку и работу с активным ингредиентом. Примерами соответствуЮ1 их твердых носителей могут служить неорганические материалы, такие как глина, таль диатомовая земля, каолин, бентонит, карбонат кальция или синтетический силикат кальция; натуральные или син тетические смолы, такие как кумароно вые, алкидные и поливинилхлориды; воски, такие как пальмовый и парафин; ореховая скорлупа, например ско лупа грецкого ореха, или мука соевых бобов крупного помола. Примерами соответствующих жидких носителей могут служить вода; спирты, такие как этанол или изопропанол гликоли, такие как этиленгликоль; простые эфиры гликолей, такие как монофениловый простой эфир этиленгликоля или моноэтиловый простой эфи диэтиленгликоля; кетоны, такие как ацетон, метилизобутилкетон, циклогексанон, ацетофенон или изофорон простые эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксан ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол, ксилол или метилнафталин) хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен и тетрахлорид углерода; фракции нефти, имеющие низкие, средние и высокие температуры кипения, содержащие керосин, светлые нефтепродукты или ароматические углеводороды. Вещество можно готовить в виде аэрозоля, в этом случае носителем могут быть фторуглероды ( включая те которые известны под торговой маркой Фреон) , ожиженный не(11тяной газ, диметиловый простой эфир и винилхлоридный мономер. При необходимости композиции могу также содержать поверхностно-активный агент с целью эмульгирования, диспергирования, смачивания или рас пространения активного соединения, который может быть как ионным, так и 55« неионным материалом Примерами соответствующих анионных поверхностно-активных агентов могут служить соли натрия и кальция лигно(.моно)сульфокислоты, соли натрия и калия олеиновой кислоты, соль натрия лаурил(моно сульфокислоты и соли натрия и кальция додецилбензол{моно сульфокислоты. Примерами соответствующих катионных поверхностно-активных агентов могут служить высшие алифатические амины и конденсаты высших алифатических аминов с окисью этилена. Примерами неионных поверхностно-активных агентов могут служить глицерины жирных кислот, слоусные эфиры сахарозы жирных кислот, конденсаты окиси этилена с высшими алифатическими спиртами, окиси этилена с высшими жирными кислотами и.окиси этилена с алкилфенолами или алкилнафтолами и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена. Протиеоклещевые или инсектицидные композиции в дополнение к вышеуказанным добавкам содержат защитный коллоид (такой как желатин, арабская смола, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцеллюлоза J или тиксотропный агент (такой как поли%осфат натрия или бентонит). Композиция может также содержать другие соединения, обладающие противоклещевой активностью, например 2-(1-метилпропил) -4, б-динитрофенил-f, &-диметилакрилат, ди-(п-хлорфеИил)-циклопропилкарбонил, N- ( -хлор-2-метилфенил) -N, N-диметилформамин; -2,,,5-тетрахлордифенилсульфон; 1,1-бис-(п-хлорфенил)-2,2,.-трихлорэтанол; 2-втор-бутилфенил-М-метилкарбамат, м-толил-N-метилкарбамат или минеральное масло, чтобы в некоторых случаях увеличить активность композиции; в некоторых случаях можно ожидать синергетический эффект. Вещество можно также использовать в смеси с другими фунгицидами, гербицидами, регуляторами роста растений, привлекающими вредителей веществами или удобрениями. Полученное известным способом вещество обладает активностью против гельминитов у человека и животных и применяется в виде напитка или капсулы. Оно может применяться в виде водного раствора или раствора в других подходящих нетоксичных растворителях или в виде суспензии или дисперсии с использованием ускорите 7. 101 лей суспендирования и смачивающих агентов, таки)$ как бентонит, или других составляющих. Напиток должен также содержать противопенный агент. Предпочтительно, чтобы напиток содержал активное соединение в количестве 0,01-0,5 или 0,01-0,1 вес,%. Кроме того, вещество можно применять в форме сухих твердых капсул, пилюль или таблеток, содержащих заранее определенное количество активного соединения. Такие композиции можно получать при п6мои и гомогенизирующего перемешивания активного соединения с одним или несколькими тонкоизмельченными материалами, такими как разбавители, наполнители, дезинтегра торы или связываюи4ие агенты (например, крахмал, лактоза, тальк, стеара магния или растительные смолы). Вес активного ингредиента можно варьировать в широких пределах в зав симости от вида животного/которого подвергают обработке, степени заболе вания и веса тела животного. Вещество можно вводить животным равномерного распределения его в корме или применять в форме шариков. С целью достижения удовлетворительного антипаразитического эффекта корм должен содержать активное со единение в количестве 0,00010,02 вес.. Вещество можно также растворить или диспергировать в жидком носителе и применять парентерально животным в виде инъекции в желудок, мышцу, легкие или под кожу. При паренте ральном применении в качестве носите ля предпочтительно используют растительное масло, такое, как арахисовое или хлопковое масло. При паренте ральном применении активное соединение, содержится в количестве 0,0550 вес.% от всей композиции. Вещество можно использовать местно, непосредственно на открытом участке кожи, например, распылением. Обработку животных можно проводить в течение короткого промежутка времени, на пример в течение 1-5 дн. Пример 1. Получение вещества. 600 мл предварительно подготовлен ной среды, содержащей 2% вес./об. глюкозы, }% муки соевых бобов крупно го помола, 0,5 насыщенного мамсового/ликера и 0,21 хлорида натрия, по|Мещают в колбу Эрлемебера емкостью 58 1 л. Колонии спор штамма Streptomyces. B-Ml-1 6 прививают на упомянутую среду и затем выращивают в течение ЦВ ч при . По истечении этого промежутка времени содержимое двух таких 2литровых колб Эрленмейера переносят в ферментер, снабженный устройством для его встряхивания, емкостью 30 л, который уже содержит 20 л ти1ательно стерилизованной среды для выращивания культуры, содержащей k% вес./об. глюкозы, 1 вес./с, муки соевых бобов крупного помоги, 0,5 вес./об. маисового крахмала, 1 вес./об. снятого молока, 0,2% -вес./об. насыщенного маисового ликера и 0,3 хлорида натрия. Значение рН перед стерилизацией 7,2-7,5. Затем культуру инкубируют при 28 С при давлении внутри ферментера 0,5 кг/см в течение 10 дн. После завершения этой стадии 20 л бульона для выращивания культуры подк fcляют до рН 3 добавлением серной кислоты, а затем после добавления 1 кг Селита, вспомогательного фильтрующего материала, смесь фильтруи т под давлением, в результате чего образуется фильтровальная лепешка весомо примерно 3 кГа Эту лепешку экстрагируют при помощи 15л метанола и экстракт фильтруют. 15 л метанолового раствора, полученного таким образом, разбавляют 5 л воды и экстрагируют 20 л гексана. Полученный гексановый раствор сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют выпариванием при пониженном давлении в водяной бане при , в результате чего образуется 22 г маслянистого материала. Полученный маслянистый материал растворяют в 30 мл гексана и адсорбируют на колонне, содержащей 2 кг силикагеля, сбалансированного гексаном. Колонну эгяоируют смесью гексана и ацетона 95:5(06.). Фракцию объемом 2л, содержащую искомое соединение, собирают и затем концентрируют при пониженном давлении в водяной бане при +0- 5с, в результате чего образуется 550 мг маслянистого материала. Этот материал растворяют в 1 мл метанола и раствор помещают в колонну, содержащую 200 мл Сефадекса LH-20, который сбалансирован метанолом. Затем колонну элюируют метанолом, в результате чего образуется фракция объемом б5 мл, содержащая искомое вещество. Эту фрак цию концентрируют выпариванием при пониженном давлении при , полученный в результате остаток растворяют в 2 мл метанола и метаноловый раствор разбавляют 2 мл воды. Смесь выдерживают при комнатной температуре, в результате чего получается 110 мг соединения в виде аморф ного порошка. Пример 2. Получение вещест ва В 2-литровую колбу, содержащую бООмл предварительно пригото вле нной среды,содержащей % (вес,/об.) саха розы, 0,35% (вес./об.) полипептона и 0,05 («ее./об.) дикалийартофосфа та, прививают колонии спор штамма Streptomyces и затем микроорганизиы выращивают в течение 8 при . Содержимое трех таких колб переносят затем в резервуар для фер ментации емкостью бОО л, в котором уже содержится 300 л тщательно стерилизованной среды для выращивания культуры, котор.ая содержит 8% в/о глюкозы, 1 в/о муки крупного помола соевых бобов, 0,5 в/о маисового крахмала, 1 в/о снятого молока, 0,2 в/о насыщенного маисового ликера, 0,3% в/о хлорида натрия и 0,05% в/о карбоната кальция. рН сре ды поддерживают на уровне 7,,5. Выращивание осуществляют при 28С при перемешивании со скоростью 150200 об/мин и внутреннем давлении 0,5-1,0 кг/см -в течение 12 дн. После завершения этой стадии количество вещества в среде составляет 180 мкг/мл. В 300 л полученной в результате среды для выращивания культуры рН обеспечивается на уровне 3 при помощи добавления серной кислоты, а затем в нее добавляют 15 Селита, вспомогательного фильтрующего материала, и смесь фильтруют п давлением, в резу ьтате чего образу ется фильтровальная лепешка весом kQ кг. Эту лепеш1 у экстрагируют при помощи 200 л метанола и фильтруют. Добавляют 150 л воды в экстракт метанола и полученную смесь экстрагируют дважды, оба раза при помощи 250 л гексана. Полученный гексановы раствор сушат над безводным сульфат натрия и затем концентрируют выпари ванием при пониженном давлении в во дяной бане при , в результат чего обрадуется 350 г масла. Это масло растворяют в lOO мл гексана и адсорбируют на колонне, содержащей 3 кг силикагеля, который предварительно сбалансирован гексаном. Колонну элюируют смесью гексана и ацетона 95:5 об. , в результате чего получается, фракция элюата, содержащая искомое вещество. Эта фракция концентрируется выпариванием при пониженном давлении над водяной ванной при 045 С, в результате чего образуется 33 г неочищенных кристаллов. Полученные кристаллы растворяют в смеси гексана и этилацетона 20:1 (,об., из которой в результате перекристаллизации получают 17, г вещества в виде бесцветных кристаллов в форме игл, которые плавятся при 186-188 0 и имеют ранее описанные свойства. Пример 3. Порошок. 10 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка дс авляют и тщательно перемешивают с 5 вес.ч. белого углерода. В эту смесь добавляют 50 вес.ч. глины. Полученную смесь тщательно перемешивают, трижды измельчают в порошок в мельнице тонкого помола ударного типа, а затем снова тщательно перемешивают, в результа те чего образуется порошок. Пример k. Смачиваемый порошок. 0 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка смешивают с .0 вес .ч. белого углерода. В полученную смесь добавляют 5 вес.ч. додецилбензолсульфоната натрия, 2 вес;.ч. поливинилового спирта и 33 вес.ч. глины. Полученную смесь тщательно перемешивают. Далее смесь трижды измельчают в мельнице тонкого помола ударного типа, снова тщательно перемешивают, в результате чего получается смачиваемый порошок. Пример 5. Эмульгируемые концентраты. 3 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка, 7 вес.ч. полиоксиэтиленнонилфенилового простого эфира, 3 вес.ч. додецилбензолсульфоната кальция и 87 вес.% ксилола перемешивают и фильтруют, в результате чего получается раствор, который можно использовать в качестве эмульгируемого концентрата. Пример 6. Композиция на основе масла. 10 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка растворяют в 10 вес.ч. ксилола и затем в раствор добавляют

11101

80 вес.ч..машинного масла. Далее смесь фильтруют, в результате чего получается композиция на основе масла,

П р и м е р.7. Противоклещеаая активность относительно двупятнистого паутинного клещика (Tetranychus urtlcae),

3 вес.% вещества эмульгируют, концентрат приготавливают аналогично примеру 3. Затем концентрат разбавля ют водой, чтобы получить концентрацию активного соединения, которая указана в табл. 1, На листву китайской вигны, содержащую взрослых самок Tetranychus urtlcae, разбрызгивают испы ||ваемый раствор в количестве ; 5 см на 2 листа при помощи распы- .

105512 .

глителя типа Мизухо. Далё листву су шат на воздухе и выдерживают в, fep.мостатических условиях при 2 С в течение 72 ч, после чего определяют

S количество погибших клеи1ей. Это ког личество составляет 30-35 на лист, в каждом испытании используется два листа.

1§ : Эксперимент проводится с использованием предпагаемого вещества, а в контрольных экспериментах используют ни льбемицины и ес и известный сельскохозяйственный препа1$ рат Келтан (на основе 1,1-бис(хлорфенил) -2,2, 2-трихлорэтанола Л Полученные результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1

Пример 8. Противоклещевая активность относительно яиц двумятнистого паутинного клещика (Tetra- nychus urticae).

В этом испытании откладывают яйца в возрасте 1 день Tetranychus urticae, которые предварительно наносятся на листву китайской вигны. Листья об| батывают веществом, полученным

предлагаемым способом, а также веществами, приведенными в примере 7. Число яиц на одном листе составляет примерно 100. Спустя 2 нед. после обработки определяют число яи1|, которые не вылупились.

Полученные результаты даны в табл.2, где указаны проценты от общего числа яиц. ..

Таблица 2

тивность относительно цитрусового красного клещика (Panonychus citri). Испытание проводят, как в примере 7, за исключением того, что испольВ дополнение к тем результатам, которые приведены в табл. 3 был проведен эксперимент с эмульсией Келта- 25 на с концентрацией 30 ч./млн, но даже при такой концентрации гибель клеща составляет только 93.

Из приведенных результатов видно, что предлагаемое вещество обладает зо в высшей степени значительной противоклещевой активностью по сравнению с мильбемицинами с(. ио(, которые в свою очередь обладают существенно более высокой активностью по сравнению с известным препаратом против акарицидов Келтаном.

П р и м е р 10. Глистогонная ктивность против Nematospiroides ubris.

Самцы мыши в возрасте нед. вида RFVL, вес которых 18-22 г, заражают томатическим.способом паразитом виа Nematospiroides dubius. Затем мышей разделяют на группы из пяти животных каждая, и каждая мышь полу- 5 чает корм, содержащий предлагаемое вещество в количестве, указанном в табл. k, в течение 7 дн. после заражения , а затем снова им дают необработанную пищу. Спустя 1 дн.после. 50 заражения животных усыпляют и определяют количество паразитов в малом кишечнике. Результат сравнивают с контрольной группой, которая подвергается аналогичной процедуре заражения, Ss но не получает предлагаемое вещество.

Результаты глистогонной активности приведены в табл. .

взрослых самок цитрусового красного клещика. Полученные результаты приведены в табл. 3.

Т а

лица

Таблица k

0,05

100

0,005

100

96

0,0005

0,03

32

27,6 0,03

Данные табл. k показывают, что предлагаемое вещество обладает глистогонной активностью, которая примерно в 2 раза выше, чем активность смеси мильбемицинов.

П р и м е р 11. Глистогонная активность против Тохосага cati.

Используют в качестве животных 18 котят 13 самца и 15 самок) весом примерно 1,6-3,0 кг, которые в естественных условиях заражены паразитом Тохосага cati . Каждому котенку стоматическим способом вводят одну дозу вещества, диспергированного в оливковом масле, в следующих количествах: 2 котятам - 5 мг/кг, 3 котятам - 2,5 мг/кг, 2 котятам - /кг. 3 котятам - 0,5 мг/кг, 3 котятам - 0,25 мг/кг, 2 котятам 0,1 мг/кг и 3 котятам - 0,05 мг/кг. Перед обработкой показатель ЯГК (т.е. число яиц на 1 г кала) составляет 15016250.Спустя 1 нед после обработки тот же показатель равен нулю у всех котят. а общее число изгнанных глистов втече- ние той же недели 2-Ю. В результате вскрытия установлено, что ни у одног котенка глистов нет. Пример 12. Глистогонная активность против Тохосага canis. В качестве животных используют 13 щенков (3 самца и 10 самок) весом 1,2-13 кг, которые в естественных условиях заражены паразитом Тохосага canis.: Каждому щенку стоматическим способом вводят одну дозу вещества, диспергированного в оли ковом масле, в следующих количествах: 1 щенку - 5 иг/кг веса животного; 2 Щенкам - 0,25 мг/кг, щенкам - 0,1 мг/кг, 3 щенкам - 0,05 мг/ /кг, 2 щенкам - 0,025 мг/кг и 1 щенку - 0,01 мг/кг. Перед введением препарата показатель ЯГК составляет lOO-ie iOO. Спустя 1 нед после обработки тот же показатель для всех щен ков равен нулю, а общее число изгнан ных глистов в течение той же недели 2-36 на каждого щенка. В результате вскрытия установлено, что ни у одного щенка глистов нет. ; Пример 13. Глистогонная активность против Trichuris vulpis. В качестве животных используют 5 собак (2 самки и 3 самца) весом 6,2-11,5 кг в возрасте 2 или 3 лет. Каждому животному стоматическим способом вводят одну дозу 1 или 5 мг/кг iaieca животного вещества в виде капсулы, покрытой желатином. Установлено, что эти собаки в естественных, условиях заражены паразитом Trichurls vulpus. Перед обработкой показатель ЯГК составляет 100-3500. Спустя 1 нед после обработки тот же показатель составляет 0-200, а общее число изгнанных в течение недели глистов 8-451. В результате вскрытия установлено, что число оставшихся паразитов составляет 0-33., т.е. эффективность препарата 92-100. Пример Шо Глистогонная активность против Ancylostoma canium. В качестве животных используют 5 собак ( 2 самки и 3 самца весом 7,0-11,5 кг в возрасте 2 или 3 лет. Эти собаки в естественных условиях заражены паразитом Ancylostoma canium Каждой собаке стоматическим способом вводят одну дозу вещества в виде капсулы, покрытой желатином. Вещество вводят собакам в следующих количествах: 2 собакам - 0,5 м-/кг, веса животного; 2 собакам - 1 мг/кг и 1- собаке - 5 мг/кг. Перед введением соединения показатель ЯГК соетавляет 200-1550. Через 1 нед после обработки тот же показатель для всех собак равен нулю, а общее число изгнанных глистов в течение недели составляет t-82 на собаку. В результате вскрытия установлено, что ни у одной собаки глистов нет. Предлагаемый способ позволяет получить вещество,обладающее высокой протипоклещевойи глистогонной активностью.