Способ определения вазопрессорной активности гормонов задней доли гипофиза Советский патент 1983 года по МПК A61K38/22 

О

:о Изобретение относится к фармак логии, а именно к способам определ ния активности гормональных препа ратов, и может быть применено в р нообразных эндокринологических и биохимических исследованиях. Известен способ определения ак ности гормонов задней доли гипофи по активности,препарата адиурекрина, основанный на его способности повышать проницаемость изолированного мочевого пузыря лягушки, кото рый заключается в том, что в опоро ненный мочевой пузырь лягушки вводят разведенный в 10 раз раствор Рингера, удаляют обе доли пузыря, взвешивают их, переносят одну из долей в раствор Рингер.а со стандар ным препаратом, а другую - с иссле дуемым, взвешивают их повторно с интервалами 30-35 мин и по снижени веса в интервале между 45 и 75 мин инкубации оценивают активность испытуемого препарата, причем испыту емый и стандартный препарат рекоме дуют брать в концентрации 0,8 и 6,4 мЕД/мл l. Таким образом, согласно этому способу, можно количественно определить содержание гормона лишь в очень узких пределах концентраци к тому же тестирование достаточно осложнено изготовлением изолирован ного препарата мочевого пузыря Известен способ определения вазопрессорной активности гормонов задней доли гипофиза, основанный на понижении кровяного давления у петухов или на его повышении у кры под действием вазопрессина, заклю.чающийся в том, что наркотизирован ным животным (.петухам породы белый леггорн массой 1,2-2,2 кг или самкам белой крысы массой 300-400.т) в кровяное русло рвоДят раствор Международного стандарта и испытуемый раствор, причем каждая доза должна быть введена не менее пяти раз, а определение проводят не менее двух раз с каждым образцом испытуемого препарата. Кровяное давление регистрируют на ленте кимографа, активность испытуемого препарата рассчитывают по формуле f Однако этот способ трудоемок, требует достаточно высокой квалификации и использования дорогосто щих животных, которых употребляют только однократно, что в свою очередь снижает точность способа, пос кольку при определении активности препарата экспериментатор может себе позволить лишьнебольшое число повторных испытаний. Цель изобретения - упрощение способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу в качестве животных используют ювенильных золотых рыбок Carasstus auratus,, а оценку биологического действия гормонов задней доли гипофиза производят по увеличению веса рыбок послеих помещения в раствор йо пытуемого гормона и повторного вэве-. шивания через 25-30 мин и 55-60 мин. Пример. Берут 40 ювенильНЫХ рыб Carassius auratus / разводят испытуемый препарат гормона в дехло« рированной воде, добавляя соответст венно 15; 7,5; 5; 3,75; 2,5} 2,14; 1,9; 1,7;1,5 мл испытуемого препарата, доводя объем каждого рабочего раствора водой до 500 мл. Рыб взвешивают группами по 4 штуки. Вес 1-ой группы 40,870 мг, 11-ой 38,120 мг, Ш-ей 43,100 мг, 1У-ОЙ 36,250 мг, 2-й 39,180 мг,- Vl-ой 36,440 мг, УИ-Ой 31,250 мг, УМ-ой 31,790 мг, Х-ой 36,3;iO мг, Х-ой 35,950 мг и помещают 1-ую группу в концентрацию испытуемого вещества 15/500, П-ю 7,5/500, ПЬю 5/500, 1У-ю 3,75/500, У-ую 3/500, У1-УЮ 2,5/500, УП-ю 2,14/500, УГЧ-ю 1,9/500, 1Х-ю 1,7/500, Х-ю 1,5/500, держат при комнатной температуре на лабораторном столе при обычном освещении. Через 30 мин взвешивают-вторично, вес Г-ой группы 41,390 rj 11-ой 38,570 г- Ш-ей 43,450 г,; 1У-ой 36,610.Г{ У-ой 39,520 Г У1-ой ,310 г;;У11-ой 31,250 г;УМ-оЙ 31,690 г ;1Х-ой 36,300 г; Х-й 35,900 г. Каждую группу рыб снова помещают в те же растворы. Еще через 30 мин взвешивания повторяют. вес 1-ой группы 42,000 г|П-ой 39/020 г;Ш-ей 43,970 г;1У-ой 36,980 г; У-ой 39,810 г;у1-ой 36,200 г;УП-ой 31,190 г; УГИ-ой 31,640 г; 1Х-ой 36 ,200 г; Х-ой 35,900 г. Таким образом, увеличение веса рыб на 0,81% и более происходит в растворах концентрации: 15/500; 7,5/500; 5/500 3,75/500 и 3/500. Наименьшая концентрация исследуемого вещества, вызвавшая увеличение веса рыб, составляет 3/500, таким образом, этот раствор имеет гормональную активность 0,03 ЕД/мл. Определяем исходную активность препарата расчетным путем по форму0 03 а. где С - искомая активность гормона, ЕД/мл J п - общий объем воды, в который помещены рыбы j а - объем исходного препарата, добавленного к раствору ; 0,03 ЕД/мп - постоянная величина, выбранная эмпирически. Поскольку объем а всегда постоян и равен, как в предлагаемом случае, 500 мл, то формула упрощается и при нимает вид; 500 15 п , п ЕД/м а в примере: -ч- 5 ЕД/мл. По окончании тестирования рыб по мещают в условия обычного содержани Через сутки их можно использовать вторично. При необходимости более точного определения активности препарата выполняют второй этап работы, производят те же действия, что ив пер вом этапе, но в ряду рабочих разведений добавляеьвлй, объем мл испытуемого препарата есть член арифметической прогрессии вида 15 1 5 а - f .JI , где п равно п определенного на первом этапе рабочего раствора, по которому вычисляют активность испытуемого препарата, а О, 1, 2 ..., 9. , Для воспроизведения предлагаемого способа в раствор каждой концентрации достаточно поместить 3-5 штук золотых рыбок, поскольку такое количество необходимо и достаточно для получения статистически достоверных результатов. Предложенный метод разведения (ряд 1%.„ых растворов на первом этапе и l5 1,5а п n(n+l) в 500 мл раствора во втором этате является оптимальным, поскольку позволяет определить активность с точностью до десятых долей едицины во IBTOPOM случае и до - в первом. Большой интервал разведений снижает точность метода, а меньший выходит за пределы чувствительности. Ювенильные рыбы выбраны так, что после наступления половой, зрелости ( у золотой рыбки к 12 месяцам ) чувствительность к экзогенным гормонам становится зависящей от стадии зрелости рыбы и в силу этого меняется периодически в течение полового цикла. Точность предлагаемого способа при определении активности питуитрина 0,01 ЕД/мл. Предлагаемый способ в сравнении с известными более прост, точен и экономичен.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВХЗОПРЕС) СОРНОЙ АКТИВНОСТИ ГОРМОНОВ ЗАДНЕЙ ДОЛИ ГИПОФИЗА, включающий сэденку их биологического действия на животных, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве животных используют ювенильных золотых рыбок Carassius auratus, а оценку биологического действия гормонов задней доли гипофиза производят по увеличению веса 1%1бок после их помещения в раствор испытуемого го1жона и повторного взвешивания через 25-30 мин и 5560 мин.