Питательная среда для хранения бактериальных продуцентов пектолитических ферментов Советский патент 1988 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/01 

(21) 3895006/28-13

(22-) 17.05.85

(46) 07.05.88. Бюл.№ 17

(71)Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт

(72)Т.Е.Смирнова, Г.Б.Бравова, Н.М.Макарова, Ю.А.Брюханова, Л.Н.Мирошник и О.В.Бражникова

(53)577.15(088.8)

(56)Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. М.: Колос, 1979.

(54)ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ХРАНЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРОДУЦЕНТОВ ПЕКТОЛИТИ- ЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

(57)Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической про- мьшшенности и может быть использовано при производстве пектолитических ферментных препаратов. С целью повышения биосинтетической способности бактериальных продуцентов пектолитических ферментов предложенная среда содержит в качестве источника углерода, азота, биологически активных веществ и индуктора синтеза фермен тов пектолитического комплекса фильтрат продуктов деградации пектина свекловичного жома при следующем соотношении ингредиентов, г/л: фильтрат продуктов рделочной деградации пектина свекловичного жома 400-800, агар 20-25, водопроводная вода остальное. Преимущество предложенной среды заключается в увеличении биоситетичес -.. кой способности бактериальных продуцентов в процессе хранения на 20-30% и снижении ее себестоимости в 3,7 раза по сравнению с известной средой, 2 табл.

S

jffSXSSK

ша

СО СО СлЭ 00

05

10

15

20

Изобретение относится к ферменткой отрасли микробиологической промышленности, и может быть использовано при производстве пектохштических ферментньк препаратов.

Цель изобретения - повышение био- синтетической способности продуцентов пектолитических ферментов.

Сущность изобретения заключается в том, что предлагаемая питательная среда в качестве источника, углерода, азота, биологи -гески активных веществ и как индуктор с:интеза ферментов пектолитического комплекса содержит фил1.трат продуктов щелочной деградации пектина свеклов:и:чного жома при следующем соотношении 1;тгредиентов, г/л

Фильтрат продуктов

щелочной деграда1:(ии

пектина свекловичного

жома400-800

Агар20-25

Водопроводная вода

рН среды 7,1-7,3.

Способ ее приготовления заключаете ся ,в измельчении субстрата, перемешивании его с водным раствором соды кальцинированной, отделении твердой 30 . фракции от жидкойJ. доведении водопроводной водой объема до 1 л и внесении в него агара, перемешивании, стерилизации, причем измельчение свекловичного жома ведут до размеров частиц 1-2 мм, а гидролиз его проводят в водном растворе соды кальцинированной при 115-125°С в соотношении сода кальцинированная:вода водопрородная: :свекловичный жом (0,5-1,5) 160}:(13-15) в течение 0,5-1,0 ч.

Пример 1. Бактериальные продуценты пектолитических ферментов; В.с1гсг11алз 31, B.raacerans шт. бб, B.subtilus шт. хранили в течение 3,10,20 дней и 1,2 мес, на агаризован- ной питательной среде, имеющей состав , г /л:

Фильтрат продуктов

щелочной деградации

пектина свекловичного

жома

Агар

Водопроводная вода рН естественный.

примера 1 на агаризованной питательной среде, имеющей состав, г/л: Фильтрат продуктов, щелочной деградации пектина свекловичного жома 600,0

Агар . 25,0 Водопроводная вода Остальное рН естественный.

Пример 3. Указанные бактериальные продуценты пектолитических ферментов хранили в течение срока примера 1 на агаризованной питательной средеэ имеющей состав, г/л. Фильтрат продуктов щелочной деградации . пектина свекловичного

жома800,0

Агар20,0

Водопроводная вода Остальное рН естественный.

Среду полу1-1али, используя продукты щелочной деградации пектина свекло35

40

Пример 2, Указанные бактериальные продуценты пектолитических ферментов хранили в течение срока

Остальное 25 вичного жома, которые приготавливали путем Е(елочного гидролиза молотого до размеров частиц 1-2 мм свекловичного жома в водном растворе соды кальцинированной при соотношении сода кальцик:ированная:вода водопроводная: :свекловичный жом 1,5:160: 15 в течение 1 ч при 125 с с последздащей фильтрацией гидролизата через сито диаметром пор мм и доведением его до объема водопроводной водой до 1 л, внесением 20 г агара, перемешиванием и стерилизацией в течение 40 мин при .0,8 ат и.

Полученные среды примеров 1-3 разливали в асептических условиях в, пробирке и скашивали. Затем среды засевали петлей вегетативным посевным материалом указанных продуцентов.

По истечении срока хранения прово,- дили контроль биосинтетической активности бактериальных продуцентов пектолитических ферментов путем за- - сева с косяка 1 л жидкой питательной среды, 1да1еющей следующий состав: свекловичный жом 2,75; калия гидроокись 0,2; кальций углекислый 0,2;- калий сернокислый 0,25; мочевина 0,75; кукурузный экстракт 1,25, рН 8,1 „

Культивирован.ие проводили при аэрации на качалке 180 об/мин при 40 С в течение 18ч.

Ло окончании култивирования прово,- дили определение активности фермен45

50

400 20

Остальное

55

10

15

20

938462

примера 1 на агаризованной питательной среде, имеющей состав, г/л: Фильтрат продуктов, щелочной деградации пектина свекловичного жома 600,0

Агар . 25,0 Водопроводная вода Остальное рН естественный.

Пример 3. Указанные бактериальные продуценты пектолитических ферментов хранили в течение срока примера 1 на агаризованной питательной средеэ имеющей состав, г/л. Фильтрат продуктов щелочной деградации . пектина свекловичного

жома800,0

Агар20,0

Водопроводная вода Остальное рН естественный.

Среду полу1-1али, используя продукты щелочной деградации пектина свеклотов пектолитического комплекса: эк- зо-полигалактуроназы (экзо-ИГ), эндо- полигалактуроназы (эндо-ПГ), пектат- транс-элиминазы (ПТЭ), . : Активности экзо-ИГ и эндо-ЛГ опре- . Деляли в соответствии с ГОСТом, Активность ПТЭ определяли спектрофо о- метрически определением продуктов реакции с ненасьпценной двойной связью между 4 и 5 атомами угле - рода, имеющих максимально е поглощение при длине волны 230-235 нм. За единицу ПТЭ активности принято такое количество фермента, которое за 1 ч при 40 С катализирует расщепление пектина с образованием ненасьаценньк продуктов реакции, в результате чего происходит увеличение оптической плотности реакционной смеси на 0,1,

Влияние состава агаризованной питательной среды на активность бакте- риальных продуцентов пектолитических ферментов представлено в табл.1. Контролем для предлагаемой среды служили агаризованные среды: Чапека, крахма- лоаммиачная и картофельный агар.

Пример 4. Сбалансированность предлагаемой питательной среды по элементам питания достигается за счет введения фильтрата щелочного гидро- лйзата свекловичного жома в количестве 400-800- г/л. Выход за предельные значения количества фильтрата щелочного гидролизата свекловичного жома на предлагаемой .агаризованной среде не приводит к желаемому результату - сохранению и повыгаению биосинтетической способности продуцентов. Со- держание в среде фильтрата ниже

400 г/л приводит к сокращению срока

л Q

5

л

0

хранения культур, а повышение содержания фильтрата выше 800 г/л приводит к потере биосинтетической способности культур.

Влияние количества фильтрата щелочного гидролизата свекловичного жома в агаризованной питательной среде на сохранение активностей пектолитических ферментов бактериальных продуцентов приведено в табло2.

Преимущество предложенной среды заключается в снижении ее себестоимости в 3,7 раза по сравнению с известной и увеличении биосинтетической способности бактериальных продуцентов пектолитических ферментов на 20-30% в процессе хранения.

Формула изобретения

Питательная среда для хранения бактериальных продуцентов пектолити- ческих ферментов, содержащая источник углерода, агар и воду, о т л и - чающаяся тем, что, с целью повышения биосинтетической способности продуцентов пектолитических ферментов, в качестве источника углерода, азота, биологически активных веществ и индуктора синтеза ферментов она содержит фильтрат продуктов щелочной деградации пектина свекловичного жома при следующем соотногаении ингредиен- . тов, г/л:

Фильтрат продуктов

щелочной деградации

пектина свекловичного

жома400-800

Агар20-25

Водопроводная вода Остальное

о

(U СЧ

L

n K

о

.«

M (-4

en G

ts - -

-I Cr -

m

О

IT)

о

о о

сч от

о

Q

s

cc u

Д

tl у

§

I

X

I

о

g

en G

о

tn

X C-i CO G

Г

to

N

R,,

о о oo ptSI Cvl

Оч -.

О

Оо

ШCSI

СМ,

L

m G

I

«

;4 (- m G

in

СО

см

- 00

о о

ЧГ

г.

О

О

о см

о - 00

со ю

о h и о

ю

D

(К

Е- S

Ю

я

сб н 0) о

I

S

ш

н н н

W

pq

рр рр.

к « 2 0)

п)

Е-,

се

(U

а

G

CSJ, Д

см -

in

00

1Л -

00

ш

о

о

ел

-.

о

о о о in

о

о

04

о

ОЧ

vO

оо

оо

so00

1Л-

о г

(N1

см ,-

ш

IN -

со

о

о

CS)

см

см -.

о г

о о

S

чО

о о

tN CN

о

00 ЧО

о

I

оо

оо

iri

о см |-

CVJ

со

IN

см.

vD N

оо

см со-

см

CM

о

о

ч

см

о

со

00

о о о

1-4

о

о

1Г)

см

о см

00

оо

-о

о00

rv.-

о

чО

а

ю

vO

I

;н

о о oi

б

S

ю н н н

га

pq

pq

« рр

РЧ

pq

pq pq

1к

оcfl

ч«

SсВ

XSM

(ОS

р.S

«nj

. iw I

.B.circulans 31730012,03,0

B.aacerans 6625009,02,0

B.BuTrtilis 18201,02,0

B.circulans730012,03,0

B.Eacerans 6в25009,02,0

B.subtilis 1 8201,02,0

B.circulans .31560010,0 .2,6

B.macerans 6621008,02,5

B.subtilis, 17001,02,0

Таблиц 2

1,0

0,5

0,5

2,0

1,0

1,0

2,8

2,5

2,0

5AOO7,01,0

10204,00,S

6800,60,2

717010,02,00

24508,51,5

eiO1,01,0

520010,02,5

19507,82,5

6901,02.0