Способ получения моноспецифической сыворотки Советский патент 1983 года по МПК A61K39/395 

00

4

СО Изобретение относится к иммуноло гии и может быть использовано в про изводстве диагностических сывороток заданной специфичности. Известен способ получения преципитирукхцих сывороток узкой специфичности, заключающийся в том, что животному-продуценту многократно вво дят растворимый антиген с интервало не менее 10 дней и полученную от не го сыворотку сорбируют гетерологичным антигеном 13. Известен также способ получения моноспецифической сыворотки путем иммунизации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело, полученным путем препаративного выделения последнего из иммуноэлектрофореграммы с последующим кровопускани ем и отделением целевого продукта 2 Однако известные способы не обес печивгиот высокой специфической акти ности целевого продукта. Целью изобретения является повышение специфической активности целе вого продукта. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения моноспецифической сйворотки путем иммунизации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделение целевого продукта, после первой инъ ции комплексом антиген-антитело извл кают иммунную сыворотку, обрабатывают ее специфическим антигеном и полученный комплекс вводят тому же животному-продуценту. Кроме того, комплекс антиген-антитело вводят пятикратно с интерва.лом между инъекциями 10 дней. Способ осуществляется следующим образом. Предварительно животное-продуцен иммунизируют заданным антигеном по общепринятому методу. Затем от живо ного берут кровь, выделяют иммунную сыворотку, сорбируют ее гетероло гичным антигеном, после чего формир ют преципитат с заданным антигеном. Этот преципитат используют для реиммунизации того же животного-продуце та. Вышеописанную операцию повторяют перед каждой последующей реиммунизацией. Пример. Общепринятым методом получают сорбированную серым веществом мозга кролика иммунную сыворотку морской свинки к белому веществу головного мозга кролика, выявляющую данный антиген в концентраций не менее 0,2204 мг/мл. Последнюю используют для получения преципитата из экстракта белого вещества мозга кролика. Им осуществляют начальную иммунизацию основного животного-продуцента. Через lu дней у животного-продуцента забирают 3 мл крови, выделяют сыворотку, смешивают ее в равном объеме с гбмогенатом серого вещества, мозга кролика, инкубируют 2 ч при 37°С и 18 ч выдерживают при +4°С, центрифугируют, собирают супернатант. К супернатанту добавляют водно-солевой экстракт белого вещества мозга кролика, вышеописанным способом инкубируют и после 20 минутного центрифугирования при 5000 об/мин-отделяют сформировавшийся преципитат, который используют для реиммунизации того же самого животного-продуцента. Через каждые 10 дней описанную -процедуру повторяют После пятикратной реиммунизадии животное обескровливается. Целевой продукт (сыворотка к белому веществу мозга кролика )в реакции двойной иммунодиффузии выявляет один компонент в экстракте белого вещества мозга кролика и не реагирует с серым веществом. В непрямом иммунолюминесцентном методе полученная сыворотка взаимодействует с глиальными элементами подкорковых структур, но не связывается с нервными клетками. Сыворотка морской свинки, иммунизированной по предлагаемой схеме, выявляет специфический компонент белого вещества мозга кролика в концентраций 0,0072 мг/мл (по белку), т.е. ее специфическая активность более чем в 30 раз выше, чем у сыворотки, получаемой ранее описанными методами.. П р и м е р 2. Используя общепринятую схему иммунизации, получают сыворотку к комерческому препарату Ви-антигена брюшнотифозных бактерий. При этом, после пятикратной реиммунизации получают сыворотку с титром 1/320 в реакции пассивной гемагглюти-. нации (РПГА). Следует отметить, что в динамике иммунного ответа титр 1/320 был достигнут уже после второй иммунизации животного-продуцента, а последуквдие введения антигена не дали дальнейшего повышения титра. В реакции двойной иммунодиффузии указанная сыворотка взаимодействовала с ис-. ходным антигенным материешом, образуя две линии преципитации. Одна из них идентифицировалась с Ви-антигеном, другая с 0-антигеном брюшнотифозных бактерий. На тот же препарат Ви-антигена получают сыворотку по предлагаемому способу, т.е. пятикратную реиммунизацию животного-продуцента осуществляют специфическим преципи татом, образовавшимся при добавлении Ви-антигена к взятой от животногопродуцента его же собственной иммунной сыворотки, предварительно сорбированный О-антигеном брюшнотифозных бактерий. В результате пятикратной реиммунизации животного получают сыворотку к Ви-антигену брюшнотифозных бактерий с титром 1/1280 (в РПГА, ие выявлявшую О-антиген в реакции иммунодиффузиич Использование предлагаемого изобретения позволит повысить специфическую активность диагностических сиворотокв процессе; их производства.

1. (ЛЮСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПБЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ путем нммуннэации животн1ях-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделением целевого продукта, отличаюад и и с я тем, что, .с целью повышения специфической.активности целе восчэ продукта, лосле первой,инъекции комш1ек х « антиген-антитело извлекают иммунну.ю СЫВ01ЮТКУ, обрабатывайэт ее спшЫфическим антигеном и полученНь комплекс вводят тому же животному-продуценту. 2. Способ по п. 1, от л и чающий с я тем, 4to комплекс антигенантитело вводят пятикратно с интервалом между инъекциями 10 дней.