16-Метил-1,3,5(10)13-тетраен-Д-гомо-8-азагона-12, 17а-дион, обладающий коагулянтной, антифибринолитической антиагрегантной, антиадгезивной и иммуностимулирующей активностью Советский патент 1993 года по МПК C07J73/00 A61K31/58 A61P7/02 A61P7/04 A61P37/00 

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, конкретно к новому производному 8-азастероидов-1бметил-1,3,5(10),13-тетраен-О-гомо-В-азагона-12,17аДирдУ формулы О О обладающему коагулянтной, антифибринолитической, антйагрегантной, антиадгезивной и иммуностимулирующей активностями, в связи с чем оно может найти применение в медицине при создании новых лекарственных препаратов для леч1гиия аутоиммунных и иммунодефицитных заболеваний с геморрагическим синдромом, включая аутоиммунные тромбоЦитопении. Известен 1,3.5(10)13- тетраен-Д-гомо-8азагона-12,17а-дион формулы являющийсяструктурным аналогом описываемого соединения. Изучение биологической активности соединения формулы (I) проводили в сравнении с описываемым со единением формулы (И). Известен лекарственный препарат %ОН . преднизолон --оя влияние котореяо на клеточный иммунитет, функциональную активность тромбоцитов и систему гемостаза изучено весьма обстоятельно. Преднизолон нашел широкое применение в медицинской Нрактике, в том числе при лечении иммуноаллергических заболеваний. Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия на живой организм. В соответствии с поставленной целью синтезирован 1б-метил-1,3,б(10)13.тетраенД-гомо-8-азагрна-12,17а-дион, обладающий иммуностимулирующей активностью, способ получения которого основан на известном методе и заключается во взаимодействии 2-ацетил-5-метилциклогексан-1,3-диона с 3,4-дигидроизохинолином в абсолютированном этаноле при нагревании. Пример. 16-метил-1.3.5(10),13-тетраен-0-гомо-8-азагона-12,17а-дион. Смесь 2.34 г (17,8 ммоль) 3.4-дигидроизохинолина и 3,00 г (17,8 ммоль) 5-метил-2ацетилциклогексан-1,3-диона в 20 мл абсолютированного этанола нагревают при температуре кипения в течение 4 ч. Выпавшие после охлаждения реакционной смеси кристаллы отфильтровывают и перекристаллизовывают из метанола. Получают 4,25 г (84,7%) 1б-метил-1,3,5 (10), 13-те траен-0-гомо-8-азагона-12,17адиона,т.пл. 197-198°С. ИК-сп(Зктр (V , см ): 1690, 1620, 1520 (КВг). УФ-спектрЯг а °, н м, е: 268 (16900), 304 (17800), ПМР-спектр (CDCI3. 5,. М.Д.): 1,08 (16СНз, q. Гц. ЗН), 4,74 (9-Н, gg. и 12 Гц, Itt), 7,02 (аром. Н., 4Н). Найдено, %: С 76,96; Н 6,54; N 4,83. Ci8Hi N02 Вычислено, %: С 76,84: Н 6.81; N 4,98. Как показывают результаты опытов In vitro соед11нение t в концентрации 10 М тормозит спонтанную агрегацию тромбоцитов, о чем свидетельствует увеличение количества о : иночных тромбоцитов после инкубации крови с данным веществом. Под влиянием соединения (I) в 2 раза снижается агрегация тромбоцитов через 1 мин после добавления АДФ и тормозится максимальная степень агрегации кровяных пластинок. Соединение (I) в Т,5 раза снижает степень адгезив.ности тромбоцитов. Соединение (1.1) оказывает слабое и непостоянное угнетающее влияние на динамическую функцию тромбоцитов, вызывая достоверное снижение лишь степени адгезивности посяеднйх. Направленность влияния преднизолоиа на агрегацию и адгезию тромбоцитов такая же. как и у соединения (1). Антиагрегатная и антиадгезивная активности соединения (I) ориентируют на экспериментальное изучение влияния его на свертывающую и противосвертывающую системы крови и условиях целостного организма, В SiToft серий опытов соединение (I) повышает протромбиновую активность на 35%, -увеличивает количество свободного гепарина на Т0%, снижает суммарную фибринолитическую активность крови 1,5 раза, ферментативный фV1бpинo/iиз и активность активатора плазмогенй в 1,8 разе. Преднизолон в тех же условиях опыта повышает протромбиновую активность на 20%. несколько снижает уровень свободного гепарина и ингибирует фибринолитическую активность крови в 2 раза по сравнению С контролем. Таким образом, соединение (I) 8-аэастероидного ряда как и предниэолон обладает коагулянтной и антифибринолитической активностью. Соединения (t) и (II) стимулируют реакцию бласттраИсформации лимфоцитов в культуре, что выражается в увеличении количества трансформированных Т-лимфоцитов и в усилении синтеза ДНК ФГА стимулироваиными лимфоцитами. Индекси усиления пролиферации для зтих соединений соответственно равны 1.36 и 1,31, индексы ешмуляцииСиосинтеза ДНК-1,59 и 1.S4. Под влиянием изученных соединений (I) и (Н) синтез белка в стимулированных митогеном лимфоцитах несколько снижается, а жйзнеспосс ность лимфоцитов ухудшает6я. 4fo снижается лишь до 80% при добавлеНИИ соединений в концентрации tO М, что свидетельствует о низкой цитотоксичности последних,. - Смдинение (I) дозе 30 мг/кг (10% от СДЦ стимулирует первичный иммунн ый ответ у мышей линии СВА, иммунизированных аритроцитами барана. По способности увеличивать количество в-.клеток в селезёнке мышей, продуцирующих антитела t М, соединение ( 2,2 раза превосходит соединение (И) (индексы стимуляции первичного иммунного ответа соответственно равны 3,13и1,39). Преднизолон в параллельных опытах угнетает первичный иммунный ответ у мышей в 2 раза по сравнению с контролем (индекс относительной активности 0.45). Известно также, что.преднизолон угнетает реакцию бласгтрансформации лимфоцитов, уменьшает количество циркулирующих Т- и В-лимфоцитов, тормозит иммунный ответ. Следовательно, в отличие от прототипа по ожидаемой иммунотропной BKTliBKOcnt преднизолона соединение (О 8-азастероидного ряда обладает иммунрстиму/трующей активностью. Соединение (1) менее токсично, чем Преднизолон, хотя уступает по токсичности структурному аналогу (И). Средние смертельные дозы (СДго) и их доверительные границы для сравниваемых соединений: Соединение 311(248.8-388.8) Соединение II670(620.1-723.6) Преднизолон211(166,1-268,0) Результаты приведены в табл. 1-6. Таким образом, проведенные исследования дали возможность установить, что соединение (О 8-азастероидного ряда, как и Преднизолон, обладает коагулянтной и антифибринолитической, умеренной антиагрегантной и антиадгезивной активностью. По способности понижать функциональную активность тромбоцитов и увеличивать количество одиночных в крови соединение (1) активнее своего структурного аналога. По влиянию на коагуляционный статус и фйбринолиз крови соединение (I) не уступает преднизолону. Вместе с тем соединение (I) обладает выраженной иммуностимулирующей активностью, стимулирует трансформацию Тлимфоцитов в 1,5 раза, В-клеточную Дифференцировку и количество антителообразующих клеток в 3 раза. По тесту усиления первичного иммунного ответа у мышей СВА соединение (I) в 2 раза активнее своего структурного аналога (II). Соединение (0. в отличие от преднизолона отмоси-гся к новому классу биологически активных веществ, которые сочетают в фармакологическом спектре коагулянтную, антифибринолитическую, антиагрегатную, антиадгезивную и иммуностимулирующую активности, лишено гормональной активности, а следовательно, и тех многочисленных побочных эффектов, присущих преднизолону и другим кортикостероидам. 6) Ахрем А.А., Моисеенков A.M., Криворучко В.В., Лахвич Ф.А.. Поселенов А.И. Подход к синтезу 8-азастероидов. Сообщение I; Синтез и некоторые свойства бензо(а)-циклоалкано(0хинолизинов. Изд. АН СССР, Сер. химия, 1972, hfe 9. с. 2078. Машковский М.Д. Лекарственные средтва. М.: Медицина. 1977, ч. 1, с, 577.

-.::-/ : . г: - :- /.

И«и«11снй« мАичсетм oAHiwwwx тронСоимте noAMHurtlyr сяди

,.-. ::-: .:... . ; -- Т в1шцв 1 ни I и « e-iUaCTCpOiwigFD )(п « б)

,; , : , . ., ; ,:.:;- -Таблица

Изменение степени erperaitHM тромбоцитов под япиякием соединений I и II 8-аэастероидн6го ряда червэ различные интервалы времейи

. - ()(n-6) . -. , ; ,, .,.

; Л , : . . ,.. ;. ,. , , , .. .; , ,

:-,.... .. ./,,.,. . .,-

Изменение количества одиночных тромбоцитав и степени их адгезивйрстип

изучаемых соединений 8-азвстероидного ряда через различные интервалы времени

, ,.;,, . . . :, . - : ... , Т.а-б«и 4в4,

Изменение некоторых показателей свертывающей системыжрови под елиянтмшединения I 8-айстероидного ряда

Влияние соединений I и II8- взастероидиага ряда на рекцию блаетГраНсфориэиий лимфрцито периферической крови человека в культура

Влияние соединений 1 и If 8-азастероидного ряда и преднизолона на первичный иммунный ответ у мышей линии С8А, иммунизированных эритроцитами барана

:Таблнца5

, . -,,.

Табли ца 6