2,3-Диметокси-15-метил-8,16-диазагона-1,3,5(10), 13-тетраен-12,17-дион, обладающий иммуностимулирующей, антиагрегационной и противовоспалительной активностью Советский патент 1989 года по МПК C07J73/00 A61K31/58 

оследний применяется в клинической практике в качестве иммуностимулятора.

Целью изобретения является расши- рение арсенала средств воздействия а живой организм.

В соответствии с поставленной цеью синтезирован 2,3-диметокси-15етил-В,16-диазагона-1,3,5(10),13- JQ тетраен-12,17-дион, обладающий иммуостимулирующей, антиагрегационной противовоспалительной активностью. пособ получения его заключается во взаимодействии 6,7-диметокси-3,4-дигидроизохинолина и З-ацетилЗ-метилтетрамовой кислоты при кипячении в уксусной кислоте.

Пример. Смесь 0,95 г (0,005 моля) 6,7-диметокси-3,4-ди- 20 гидроизохинолина и 0,75 г (0,005 моя) З-ацетил-5-метилтетрамовой кислоты в 30 мл ледяной уксусной кислоты агревают до кипения в течение 3 ч токе аргона. Остаток после упари- 25 вания растворителя промывают эфиром (3 X 50 мл) и перекристаплизовывают из С Н ОН-эфир, получая 1,30 г (86%) 2,З-диметокси-8,16-диаза-15-метил8,16-диазагона-1,3,5(10),3-тетра- ЗО ен-12,17 диона в виде игл желтого цвета с Т.пл. 265 С (разл.).

Вычислено, %: С 65,84;.Н 6,14; N 8,53.

Найдено, С 65,31; Н 6,17; 35 N 8,77.

Структура 2,З-диметекси-8,16-диаза- I5-метил-8,16-диазагона-1,3,5(10), 13-тетраен-12,17-диона подтверзвдается ИК- и ПМР-спектрами.40

Соединения I и II стимулируют включение н-тимидина в лимфоциты и увеличивает количество трансформированных Т-лимфоцитов в 3,2 и 1,8 раза по сравнению с контролем - фитогемаг- 45 глютином (ФГА). Наиболее выраженный иммуностимулирующий эффект наблюдается при добавлении соединений в концентрации 10 ммоль/мл. Однако жизнеспособность клеток существенно не жается в диапазоне концентраций 10 10 ммоль/мл. Соединение I в тест-системе ФГА-индуцир&ванных лимфоцитов по активности в 2 раза превосходит структурный аналог.w

соединения угнетают биосинтез белка в опытных культурах. Этот эффект усиливается с увеличением концентрации веществ до 10 ммоль/мл. При

этом жизнеспособность клеток несколько ухудшается, но снижается лишь до 91-92%, что свидетельствует о низкой цитотойсичности исследуемых веществ (иммунодепрессант стероидного ряда прёднизолон в концентрации In л 10 ммоль/мл снижает жизнеспособность лимфоцитов до 85%).

Левамизол в условиях культуры клеток не оказывает влияния на трансформацию Т-лимфоцитов, а в целостном организме опосредовано усиливает созревание иммунных лимфоцитов.

Соединение I (95 мг/кг) стимулирует образование антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей в 4-5 раза по сравнению с контролем, тогда как соединение II в эквивалентной дозе (150 мг/кг) усиливает первичный иммунный ответ примерно в 2 раза. Левамизол (20 мг/кг) при одно.временном введении с эритроцитами барана (ЭБ) на образование АОК в селезенке мьш1ей не влияет, что связано с непродолжительностью действия последнего. В случае же введения левомизола за 48 ч до учетапервичного иммунного ответа, его стимулирующий эффект равен эффекту соединения II. Соединение I в дозах 24-48 мг/кг (2,5-5% от ) в 1,5-2 раза усиливает образование клеток, продуцирующих 9вп1-антитела к ЭБ, и, следовательно,в эквивалентных дозах в 2-4 раза активнее левамизола и соединения II. Максимальное стимулирующее действие соединение I проявляет в дозе 10% от . Параллельно с образованием OAK нарастает титр гемагглютинирутощих антител в ЭБ-в сыворотке мышей. Наибольшая стимуляция первичного иммунного ответа достигается при введении соединения I одновременно с иммунизацией животных или спустя 24 ч. Выраженный эффект отмечается также в случае введения за 24 ч или спустя 48 ч после иммунизации.

-При увеличении дозы соединения I до 140 мг/кг (1,5% от ) стимулирующий эффект его резко ослабевает и проявляется тенденция ингибировать первичный-иммунный Ответ у мьш1ей. .

Представляет интерес, что соединение I не оказывает влияния на синтез иммуноглобулинов и ДНК в системе, содержащей только В-лимфоциты, стимулированные протеином Н, которьй представляет собой избирательный митоген В-клеток и не требует присутствия Т-лимфоцитов. При добавлении в культуру В-клеток макрофагов включение Н-тимидина и синтез иммуноглобу линов несколько возрастает. Однако наиболее выраженное стимулируюп(ее де ствие соединение I проявляет в полно системе мононуклеаров (В-, Т- лимфоциты и микрофаги). Установлено, чт соединение I в дозе 90 мг/кг проявляет лишь тенденцию стимулировать фа гоцитоз макрофагами (индекс Гамбургера в опыте - 53,1; в контроле - 50,4 Таким образом, соединение I индуцирует перестройку клеточного и гуморального иммунного ответа в основном через посредство Т-лимфоцитов. Этими клетками могут быть Т-хелперы, продуцирующие рост-стимулируклций фактор независимо от биосинтеза белка. Возможно также усиление межклеточного взаимодействия путем активизации распознающих структур на поверхности клеток. Несомненно, что соединение I обладает высокой избирательностью иммунотропного действия, стимулируя опосредованный Т-лимфоцитами иммунитет. Соединение I оказьгоает выраженное противоотечное действие на модели тер мического (до 70%), агарового .(29%) и бентонитового (24%) отека, слабо влияет на гистамкновый и серотониновый отек. Противовоспалительная актинность соединения I является сущест венным дополнением к его иммунологическому профилю. Известно, что некоторые иммуностимуляторы могут усиливать воспаление, адъювантный артрит и ускорять отторйсение кожного трансплантата. Результаты исследований свидетельствуют, что соединение I обладает высокой антиагрегационной активностью в пробирочных опытах и в условиях целостного организма. Так, под влиянием Соединения I (10 ммоль/мл) степень агрегации АДФ-стимулированных тромбоцитов через 1, 10 и 25 мин соответственно снижается на 24, 50 и 57%. Однонаправленную и более высокую антитромбоцитарнук) активность проявляет соединение I и в условиях целостного организма. В дозе 50 мг/кг оно снижает степень дезагрегации тромбоцитов до .73%, увеличивает степень дезагрегации тромбоцитов на 46,7% по сравнению с контролем. Следовательно, соедине ние I представляет интерес не только как иммуностимулятор, но н.для коррекции тромбоцитарных функций и предупреждения внутрисосуднстой агрегации тромбоцитов, последствиями которой являются тромбоэмболическне осложнения.. При изучении острой токсичностн новых соединений и левамизола установлены следующие показатели CRyg мг/кг, в/б: Соединеиие I940 Соединение II 1500 Левамизол (210 в желудок). Соединение I в 19 раз менее токсично по сравнению с известным иммуностимулятором левамизолом. Оно уступает по токсичности в 1,5 раза: структурному прототипу (соед. II).. Однако индекс широты терапевтического действия для соединения I равен 40, для соединения 11-10. Иммуностимулирующая активность изученного диазастероида удачно сочетается с противовоспалительной (противоотечной) и антиагрегациоиной активностью, что дополняет cneKfp его фармакологической активности и расширяет фармакотерапевтические возможности соединения.

2,3-Диметокси-15-метип-8,16-диаза гона-1,3,5