Способ удаления цианэтильной защитной группы с производных моно- и динуклеотидов Советский патент 1983 года по МПК C07H21/04 A61K49/00 

СП

« vi Изобретение относится к химическому синтезу фрагментов нуклеиновых кислот, а именно к усовершенствован ному способу удаления концевой циан этильной защитной группы фосфата с производных моно- и динуклеотидов общей формулы 0 О ( -О) N -0-/i-0-CH 1 I 22 OR OR (i; где M - заищщенный no гетероцикли ческому ядру нуклеозид,R- монс5метокситритильная или диметокситритИльная 5-0защитная группа;. R - хлорфенильная группа. или 1. Известен способ удаления циан-этильной защитной группы, основанны на обработке производных моно-.и олигонуклеотидов растворами неоргани . ческих оснований в безводных и водных органических растворителях. Однако этот способ может привести к частичному удалению других защитны групп и гидролизу лабильных связей, поэтому требует хроматографической очистки целевого продукта. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемс му положительному эффекту является Способ удаления цианэтильной группы заключаю1дайся в обработке моно- и олигонуклеотидов формулы (1) органи ческим основанием в среде органичес кого растворителя, 50%-ный раствор триэтиламина в ацетонитриле. Выход количественный. Время проведения процесса 1 ч при комнатной температу ре, Недостатком этого способа являет(ся продолжительность процесса. Цель изобретения - интенсификация процесса. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу удаления цианэтильной защитной группы с производных моно- и динуклеотидов общей формулы (I) путем обработки их органическим основанием в срёДе органического растворителя, в качестве органического основания используют 2%-нь1й раствор пентаметилгуанидина в безводном, диоксане. Выход количественный. Время прове дения процесса 3 мин. Пример 1. Получение з-О-ди метокситритил-Н-бенз оилДеэокСицитидин-3-О-(п-хлорфенил Лфосфата. К 40 мкмоль 5-0-диметокситритил-N-бензоилдезоксицитидин-З -0-(п-хло фенил)цианэтилфосфата в 1 мл безводного диоксана добавляют 20 Мкл чисто го пентаметилгуанидина. Смесь выдерживают при комнатной температуре 3 мин и упаривают в вакууме. Выход., полученного хроматографически чистого продукта количественный. Продукт анализируют методом жидкостной хро матографии на силанизированном силикагеле в системе 30-60%-ный водный ацетонитрил в 0,05 М ацетате триэтиламмония. П р и м е-р 2. Децианэтилирование полимер-5-0-диметокситритилдезокситимидин-з -0-(п-хлорфенил)цианэтилфосфата. К 200 мг полистирольного полимера, содержащего 40 мкмоль ковалентно связанного 5-0-диметркситритилдезок- ситимидин-З-О-(м-хлорфенил)цианэтилфосфата, добавляют 1 мл безводного диоксана, дегазируют раствор и прибавляют 20 мкл чистого пентаметил- о гуанидина. Через 3 мин полимер отфильтровывают. Для. проверки полноты децианэтилирования полимер-нуклеотид обрабатывают. 1%-ным раствором трифторуксусной кислоты в хлороформе (2-20 мл, 2 мин), промывают диоксаном (310 мл). Объединённые вытяжки упаривают, растворяют в 10 мл 1р%-ного диоксана -и хроматографируют на силанизированном силикагеле в системе 15-50%-ный водный ацетонитрил .в 0,05 М ацетате триэтиламмония. Выход дезокситимидин-3-0-(п -хлорфенил)фосфата количественный.. П р и м е р 3. Получение 5 -0-мо- . нометокситритилдезокситимидилил (3 - 5 )дeзoкcимитидин-3-0-(n-xлopфeнил фосфата. .К 40 мкмоль Б-О-мономётокситритилдезокситимидилилСЗ- 5 ) дезокситимидин-3 -О-(h-хлорфенил)цйанэтилфосфа:та в 1 мл безводного прибавляют 20 мкл чистого пентаг етил гуанидина. Реакционную смесь выдер- живают при комнатной температуре. 3 мин, разбавляют 20 мл 0,05 ..М ацртата триэтиламмония и анализиру1Ьт методом жидкостной хроматографии .в системе 30-60%-ный водный ацетонитрил в 0,05 М ацетате триэтиламмония. Выход продукта дeциaнэтиJ иpoвaния количественный .. Пример 4. Децианэтилирование 5-0-диметокситритилдезоксицитидилил (3 - 5)дeзoкcиaдeнoзин-3-0-(n-xлopфeннл)циaнэтилфocфaтa. Смесь 30 мкмоль 5-0-диметокситритилдезоксицитидилилСЗ 5) дезокси-i аденозин-3-0-(п -хлорфенил)цйанэтилфрсфата, 0,75 мл безводного диоксайа и 15 мкл чистого пентаметилгуанидина выдерживают 3 мин, разбавляют 20 мл 0,05 М ацетата триэтиламмония и хроматографируют на силанизированном си-г ликагеле в системе 30-60%-ный водный ацетонитрил в 0,05 М ацетате зфиэтиламмония. Выход 5-0-диметокситритилдезоксицитидилил (3 - 5)дeзoкcиaдeн6зин-3-0- (h-хлорфенил)фосфата 98,7%.

3. 1041547.

П р. и м е р 5. Получение 5 -0-ли- фата растворяют в 0,75 мл безводного метокситритилдвзокситимидилил(З- 5) диоксана, прибавляют 15 MKJT чистого деэоксигуанозин-3-0-(и-члорфенил) пентаметилгуанидина, выдерживают фосфата. .3 мин и анализируют методом жидкост30 мкмоль 5-0-диметокситритилде- ный водный ацетонитрил в 0,05 М ацезокситимидщлил (З - 5 ) дезоксигуа- тате триэтиламмония. Выход продукта нозйн-3-0-(и-хлорфенйл)цианэтилфос- децианэтилирования количественный.

ной хроматографии в системе 30-60%

СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ЦИАНЭТИЛЬНОЙ ЗАЩИТНОЙ ГРУППЫ С ПРОИЗВОДНЫХ МОНОИ ДИНУКЛЕОТИДОВ общей формулы ОО IIII R-d(К О-Р-О ) О-Р-О-СН СНjCN, I OR OR где N - защищенный по гетероциклическому ядру нуклеозид,R - монометркситритильная или диметокситритильная 5-0защитная группа; хлорфенильная группа; или 1 путем обработки их органическим основанием в среде органического растворителя , отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса, в качестве органического основания используют 2%-ный раствор пентаметилгуанидина в безводном диок.сане.