Способ удаления цианэтильной защитной группы с производных моно-и олигонуклеотидов Советский патент 1982 года по МПК C07H21/04 

(5) СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ЦИАНЭТИЛЬНОЙ ЗАЩИТНОЙ ГРУППЫ С ПРОИЗВОДНЫХ МОНО-И ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ 8 что производны заключающегося в том, моно-и олигонуклеотидов приведенной выше формулы обрабатывают раствором триэтиламина в ацетонитриле при 20-60 С. Время реакции 15 60 мин. Выход целевого продукта коли чественный. Пример 1. Получение 5 -0монометокситритил, N-бензоилдезокси аденозин 3 -О-(И-хлорфенил)-фосфата К 0,5 ммоль 5 -0-монометокситритил, N-бензоилдезоксиаденозин-з -0(И-хлорфенил) (цианэтил) фосфата добавляют при перемешивании смесь 25 мл безводного ацетонитрила и 25 мл триэтиламина. Смесь выдерживаю при комнатной температуре 1 ч и упа вают раствор в вакууме. Выход полученного хроматографически чистого продукта количественный. Продукт анализируют методом тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе ацетонитрил - вода 9:1, Rn продукта 0,., Пример 2. Получение 5-0диметокситритил N-бензоилдезоксицитидин-3-С -хлорфенил) фосфата. , 1 ммол. 5-0-диметокситритил-Нбензоил дезоксицитидин-3-(1 -хлорфенил) (цианэтил) фосфата смешивают с 50 мл ацетонитрила и 50 мл триэтиламина и нагревают смесь до 50 С в течение 15 мин. Затем раствор упа ривают в вакууме. Выход хроматографически чистого продукта количественный. R 0,1 в системе ацетонитрил - вода 9:1. Применение изобретения от j до 1 раз сокращает время удаления цианэтильной защитной группы с производ ных моно-и олигонуклеотидов и тем самым значительно ускоряет синтез олигонуклеотидов.i Пример 3. Получение з-Одиметокситритил М-изобутирил дезокс гуанилил () N-изобутирил дезокс гуанозин З-О-(И-хлорфенил) фосфата (D MTrdibuG ±ibuG tOCE) . К 0,2 ммол 5 -0-диметокситритил N-изобутирил дезоксигуанилил () N-изобутирил дезоксигуанозин 3 -О-(-хлорфенил) цианэтилфосфа та приливают смесь 10 мл ацетонитри ла и 10 мл триэтиламина, выдерживают при 20 С 1 ч и затем упаривают раствор в вакууме. Выход полученного хроматографически чистого продукта : 4 количественный. Rf:0,27 в системе ацетонитрил - вода (9:1). Пример k. Удаление цианэтильНой защитной группы с пёнтадекануклеотида состава: DWOtdCibUG + bZAi-t3ZC: : b C ibuGT TTbTLA :; 13ZA1 T 4.ОСЕ). 0,05 ммоль 3000 оптических единиц (OE)2gQ хроматографически чистого пентадекануклеотида р/ЛТУ;6(1ЪиСя + 4:ibuGi + fazCl.T4.T4-TibzAT ituQ T -bxAfbzA+Tl-OCE) смешивают с 10 мл смеси триэтиламин-ацетонитрил (1:1 V/V) и выдерживают при 20 С 1 ч. Затем раствор упаривают в вакууме. Выход продукта ..DMTrd (it)UCi tvitiuG 4-bz.C T+T+T 13ZA 1bzC:f1azCTibuQ+Т+Ъг.АтЬгА ;T4:ph) 30%, определенный методом тех в системе ацетонитрил - вода R$ 0,2k в системе ацетонитрил - вода (9:1). Символом 1 для кратности обозначена межнуллеотидная фосфотриэфирная связь. -0-Р-О . OR Формула изобретения Способ удаления цианэтильной защитной группы с производных монои олигонуклеотидов общей формулы: ка(,Й-о -рOCHj-CH, N, где N R R -защищенный нуклеозид, -,фенил или хлррфенил, -монометокситритильная или диметокситритильная защитная группа; п целое число от О до 20; путем обработки их триэтиламином в среде органического растворителя, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, использут раствор триэтиламина в цетонитриле и реакцию проводят при температуре 20-60 с. 5 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1 .KGrzeskowl k I.Stawinski M, WiewiorowskU Новые подходы для защиты защищенных S-эфирных нуклеоТИДОВ, являющихся промежуточными в синтезе олигонуклеотидов, Bull. Acadl Pd.Sci. Serie Chimignes, 23, 6.i 95-510, (1375). 098666 2. К. Itakura, N. Katagiri, C.P.Bahe, R.H.WIrjhtman, S.A., Improved.triester approach,for the sinthesis of pentadecathymidylle 5 acid, I.Am. Chem.Soc., 97,7325, 1975. 3. A.K.Sood, S.A.Navang A new method for the sinthesis of polythimidylfc by modification of triester method, Nucl.acid. Res., ° -(8) c. 2757-2765, 1977 (прототип).