Способ определения стероидных сапонинов и сапогенинов Советский патент 1983 года по МПК G01N31/08 

4 00 СП

Gb

Изобретение относится к аналитической XHjviHH природных ор1анических соединений, преимущественно к способу количественного определения стероидных сапонинов и сапогенинов.

Известен способ определения стероидных сапонинов и сапогенинов путем экстракции из растительного сырья, распределительном хроматографировании, получении пятна исследуемого вещества, обработки его нагреванием при 60°С со смесью концентрированной серной кислоты и водного формальдегида в течение 15 мин с последующим фотометрическим определением l .

Недостатком этого способа является то, что сапонины и сапогенины при нагревании со смесью концентрированной серной кислоты и водного формальдегида не дают устойчивой во времени окраски, что приводит к невысокой точности способа.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемым результатам является способ определения стероидных сапонинов и сапогенинов путем тонкослойного хроматографирования раствора анализируемого вещества, обработки силикагеля цветореагентом - концентриро- ванной серной кислотой в присутствии хлороформа при 60°С и фотометрированием полученного раствора 2,

Метрологическая характеристика известного метода количественного определения дигитонина приведена в табл.1.

Таблица

1

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ САПОНИНОВ И САПОГЕНИНОВ путем тон1 ослойного хроматографирования раствора анализируемого вещества Р пбСАедугощей обработкой силикагеля при нагревании в присутствии хлороформа цветореагвнтом, содержащим концентрированную серную кислоту, и фотометрирование полученного раствора, отличающий с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве цветог| реагента используют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты, взятых в объемном соотношении 9:1, и обработку ведут при е 35-40°С.f (Л

1,11 0,00925 iO,043 0,95 2,77 0,16128 Однако сапонины и сапогенины при нагревании с концентрированной серной кислотой не дают устойчивой во времени окраски, что приводит к относительно невысокой точности. Целью изобретения является повышение точности способа. Поставленная цель достигается те что согласно способу определения стероидных сапонинов и сапогенинов путем тонкослойного хроматографиров ния раствора анализируемого вещества с последующей обработкой силикагеля при нагревании в присутствии хлороформа цветореагентом, содержащ концентрированную серную кислоту, и фотометрированием полученного раствора. В качестве цветореагента используют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты, взятых в объемном соотношении 9:1, и обработку ведут при 35-45°С. Пример 1. Определение дигитонина в семенах наперстянки крас ной. 2 г (с точностью до 0,01 г) семя Наперстянки красной, измельченных в просеянных сквозь сито с диаметром отверстий 0,25 мм, обезжиривают в аппарате Сокслета экстракцией петролейным эфиром в количестве 20 мл в течение 12 ч. Обезжиренные семена высушивают на воздухе, помещают в колбу вместимостью 100 м заливают 60 мл 70%-ного этилового спирта, закрывают колбу пробкой, взвеЕ11ивают (-с точностью до 0,01 г) и выдерживают 1 ч. Затем содер0,11911 - tlO,7 жимое колбы соединяют с обратным холодильником, нагревают до кипения и поддерживают слабое жидкости в течение 2 ч. По охлаждении колбу с содержимым вновь закрывают пробкой, взвешивают и убыль в весе пополняют 70%-ным этанолом. Жидкость тщательно взбалтывают, фильтруют через сухой фильтр в сухую круглодонную колбу и отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе досуха. Остаток растворяют в смеси хлороформ-этанол (1:1), переносят в колбу емкостью 25 мл и объем доводят тем же растворителем до метки (раствор А). Хроматографирование. Пластинку с силикагелем размером 1420 см делят на три равные части, обозначенные номерами 1-3. 0,25 г (точная навеска) высушенного дигитонина при 105° помещают в мерную колбу емкостью 25 мл, доводят до метки системой хлороформ-метанол-вода (65:35:10) - раствор Б. На первую и вторую полоски наносят 0,2 мл раствора А., на третью полоску 0,2 мл раствора Б. Пластинку высушивают на воздухе, после чего хроматографируют в системе хлороформ-метаяолвода (65:35:10) до поднятия фронта растворителей на 18 см. После этого пластинку выдерживают в сушильном шкафу при 80° в течение 5 мин и рассматривают в УФ-свете. На уровне проявленного пятна стандартного дигитонина обводят участки на полосках 1 и 2. С отмеченных

участков по отдельности выскабливают силикагель, переносят в колбы емкостью 25 мл, добавляют по 7 мл смеси уксусного ангидрида с серной кислотой (9:1) и в ультратермостате выдерживают в течение 30 мин при 40с. Объем жидкости в мерных колбах доводят до метки хлороформом. Измеряют оптическую плотность фильтратов на фотоколориметре ФЭК-5 с использованием светофильтра № 3 (Л 400t5) в кюветах толщиной слоя 10 см. Содержание дигитонина вычисляется по формуле

Dji: С ст Y 1„У 100 -100

(1)

V4IГ-Г/ . л . .4

f. V2-a (100-b)

D

где а - навеска сырья, г;

V - объем сгущенного спиртового извлечения, мл

3,98 -0,0i01 10,1005 95 2,26 ±0,2271 ±5,7 П р и м е р 2. Определение тиго генина в кюке славной. 2 г измельченных листьев юкки славной, просеянной сквозь сито с диаметром отверстий 0,1 мм, помеща ют в колбу емкостью 100 мл, залива ют 42 мл 50%-ного этилового спирта взбалтывают и нагревают в течение 20 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Затем до бавляют 8 мл концентрированной НСЕ :и нагревают в течение 3 ч. Массу после нейтрализации 10%-ным NaOH помещают в делительную воронку емкостью 50 мл и извлекают 7 раз по 15 мл хлороформом. Хлороформные из влечения переносят в круглодонную колбу вместимостью 20 мл и отгоняю под вакуумом на ротационном испари теле досуха. Остаток растворяют в хлоЕ оформе, переносят в колбу емкостью 25 мл и объем доводят тем .же растворителем до метки (раствор Пластинку с силикагелем размером 14«20 см делят на три равные части, обозначенные номерами . 0,25 г (точная навеска) высушенного, тигогенина при 105° помещают в мерную колбу 25 мл и доводят до метки хлороформом (раствор Б). На первую и вторую полоску наносят 0,2 мл раствора 2, на третью полос ку 0,2 МП раствора Б. Пластинку вы сушивают на воздухе, посла чего хроматографир5тот в системе хлороформ-этанол (24:1) до поднятия фро

Vj - количество сгущенного спиртового извлечения, нанесенного на пластинку для хроматографироваНия, мл; V, - объем окрашенного раствора, мл;

С,- концентрация раствора стандартного образца дигитонина; Dji - оптическая плотность раствора стандартного образца 0дигигитонина;

b -. потеря в весе при высушивании ; Dji - оптическая плотность иссле-дуемого раствора.

5 Содержание дигитонина в семенах наперстянки красной 3,7%. Метрологическая характеристика метода количественного определения дигитонина в семенах наперстянки красной приведена в табл.2.

Таблица 2

- t3,29 та растворителей на 18 см. Пластинку выдерживают в сушильном шкафу при 80° в течение 5 мин и рассматривают в УФ-свете. На уровне проявленного пятна стандартного тигогенина обводят участки на полосках 1-2. С отмеченных участков по отдельности выскабливают силикагель, переносят в колбы емкостью 25 мл, добавляют по 7 мл смеси уксусного ангидрида с серной кислотой (9:1) и в ультра-, термостате выдерживают в течение 30 мин при 40°. Объем жидкости в мерных колбах доводят до метки хлороформом. Измеряют оптическую плот- ность фильтратов на фотоколориметре ФЭК-56 с использованием светофильтра № 3 (Л 400±5) в кюветах толщиной слоя 10 мм. Содержание тигогенина вычисляют по формуле (1). П р и м е р 3. Количественное, определение дигитонина в готовом продукте. 0,25 г (точная навеска) дигитонина помещают в 25 мл мерную колбу, растворяют в смеси хлороформ-метанол (1:1) и объем доводят тем же растворителем до метки (раствор А). Приготовление стандартного раствора дигитонина (раствор Б). г (точная навеска) высушенного дигитонина при 105 помещают в 25 мл мерную колбу, растворяют в смеси хлороформ-метанол (1:1) и объем доводят тем же растворителем до метки.