Способ качественного определения цикутотоксина Советский патент 1983 года по МПК G01N31/20 

N|

оо

4

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к токсико-химическому анализу, и может быть использовано в бюро судебномедицинской экспертизы для идентификации цикутотоксина, относящегося к классу полиинов.

Известны способы качественного определения цикутотоксина путем взаимодействия его с химическим реагентом, таким как резорцин, пирокатехин или пирогаллол 1 J.

Однако данные реакции не обладают чувствител1 ностью и специфичностью, так как резорцин, пирокатехин и пирогаллол дают окрашенные соединения с окислителем и даже кислородом во;шуха, причем окраска получаемых соединений не устойчива.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения цикутотоксина хроматоспектрофотометрическим путем. Предварительно измельченные растительные остатки обрабатывают диэтиловым эфиром, фильтруют упаривают и получен 1ый остаток растворяют в этаноле. Этанольный раствор хроматографируют в тонком слое сорбента. Цикутотоксин обнаруживают, обрабатывая хроматограмму серной кислотой или раствором щелочи (10%-ный едкий кали в 50%-ном этиловом спирте с последующим нагреванием в течение 2-3 мин при 100-105°С или выдерживанием хромаTorpaMNttJ в течение 2-3 мин в парах иода. Цикутотоксин проявляется в виде темно-коричневого пятна. Другие полиины Веха ядовитого при данных условиях обработки приобретают коричневую окраску 2 .

Однако известный способ мало специфичен, так как обнаружение цикутотоксина проводят после проявления хроматограммы по появлению целого ряда пятен одинаковой коричнвой окраски. Цикутотоксин в предложенной системе растворителей - диэтиловый эфир:петролейный эфир - имеет наиболее низкое значение Rf, что делает его определение неконкретным. Кроме того, указанный спосо . обладает довольно низкой чувствителностью, что делает его малопригодным для проведения токсико-химического анализа. Открываемый минимум цикутотоксина по известному способу составляет всего 50 мкг.

Цель изобретения - повышение чувствительности, специфичности и упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу качественного определения цикутотоксина анализируемую пробу обрабатывают 0,05-0,15 н. раствором соляной кислоты, в качестве химического реагенТс используют 1,5-2,5%-ный раствор

сульфата церия (IV) при объемном соотношении анализируемой пробы и раствора сульфата церия (IV), равны 2-1:1, с последующим определением полученных кристаллов микрокристаллоскопическим способом.

Предварительная обработка анализируемой пробы раствором соляной килоты и затем раствором сульфата церия (ГУ) позволяет провести специфическое и чувствительное качественное определение цикутотоксина в исследуемом образце. Такое определение достигается тем, что в результа осуществления способа образуется продукт реакции - кристаллы характерной формы сферолиты из .призм и игольчатых кристаллов, форма которых наблюдается под микроскопом.

Проведение микрокристаллоскопической реакции нА Цикутотоксин обеспечивает возможность идентификации его в смеси с другими веществами. Установлено,- что другие яды, такие как нуредал, морфин, стрихнин и кокаин, не мешают образованию кристаллов характерной формы для цикутотоксина.

Предварительная обработка анализируемой пробы 0,05-0,15 н. раствором соляной кислоты необходима для реакции взаимодействия химического реагента сульфата церия (IV) с цикутотоксином. Отсутствие предварительной обработки анализируемой пробы 0,05-0,15 и. раствором соляной кислоты вызовет лишь крис|таллизацию химического реагента, следовательно идентификация цикутотоксина будет невозможной.

Использование 0,05-0,15 н.раствора соляной кислоты является достаточным для последующего получения кристаллов - продукта взаимодействи цикутотоксина с сульфатом церия (IV Использование большей концентрации соляной кислоты является нецелесообразным, так как возможен гидролиз цикутотоксина и кристаллы характерной формы не образуются.

Использование в качестве химического реагента 1, 5-2 , 5%-ного раст вора сульфата церия (IV) позволяет получить его устойчивое соединение с цикутотоксином при характерной форме кристаллов.

Использование 1,5-2,5%-ного раствора сульфата церия (11/) является оптимальным для образования кристаллов, так как меньшая концентрация данного химического реагента значительно удлиняет время кристаллизации (до 10 ч), большая концентрация приводит к-образованию мелких кристаллов с менее характерной формой при загрязнении поля зрения :в микроскопе кристаллами самого химического реагента - сульфата ц рия (IV). Оптимальный вариант кристаллизации достигается при соотношении реагентов 2:1 или 1:1. Увеличение объемной части хими ческого реагента в указанном выше соотношении мешает качественному определению цикутотоксина вследст его параллельной кристаллизации. В результате осуществления пред лагаемого способа получаются кристаллы характерной формы - сферолит из призм и игольчатых кристаллов, бесцветные, больших размеров. Чувствительность данного способ характеризуется открываемым минимумом, который равен 0,4 мкг при предельном разбавлении 1:20000. В известном же способе открываемый минимум равен 50 мкг, а предельное разбавление 1:200. П р и м е р .1. Навеску 0,10 г цикутотоксина растворяют в мерной колбе на 100 мл в 96%-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.. Один миллиметр полученного исходного раствора переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем до метки 96%-ньм этиловым спиртом. Одну каплю полученного разбавленно го раствора цикутотоксина наносят на предметное стекло и добавляют одну каплю 0,05 н. раствора соляной кислоты. Затем к обработанной пробе добавляют одну каплю 1,5%-ного раствора сульфата церия (IV). Результат проведенной реакции качест венного определения цикутотоксина наблюдают через 3 ч по характерной форме кристаллов - сферолиты из призм и игольчатых кристаллов при наличии мелких кристаллов химического реагента - сульфата церия (IV отдельные прямоугольники или бесформенные сростки из них. П р и м е р 2. На предметное стекло помещают 2 капли исследуемо го раствора цикутотоксина,одну кап соляной кислоты 0,10 н.концентраци и одну каплю 2,0%-ного раствора суль,фата церия (IV). Наблюдают орму кристаллов под микроскопом через 3 ч. Пример 3. На предметное стекло помещают одну каплю исследуемого раствора цикутотоксина, одну каплю 0,15 н. раствора соляной кислоты и одну каплю 2,5%-ного раствора сульфата церия {IV). Характерную форму кристаллов наблюдают под микроскопом через 2ч. Во всех случаях качественного определения цикутотоксина по предлагаемому способу образуются кристаллы, характерной формы - сферолиты из призм и игольчатых кристаллов, бесцветные, больших размеров. Более четкая кристаллизация идет при соотношении 2,0%-ного раствора сульфата церия (IV) и раствора цикутотоксина 1:1 и соляной кислоты 0,10 н. концентрации. Таким образом, предлагаемый способ обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Открываемый минимум цикутотоксина по предлагаемому способу составляет 0,4 мкг, при предельном разбавлении 1:20000. В известном же способе открываемый минимум не менее 50 мкг при предельном разбавлении 1:200. I , Высокая специфичность способа обеспечивается подбором условий и проведением микрокристаллоскопической реакции. Так, образование сферолитов из призм и игольчатых кристаллов при взаимодействии с раствором сульфата церия (IV) характерно только для одного вещества - цикутотоксина, в то время как известный способ дает не специфичные окрашивания с любым органичЬским соединением. Способ значительно проще известного, общедоступен и может быть применен в любой аналитической лаборатории. Способ не требует специального оборудования и подготовки специалистов, иcпoльзye в e реактивы лбшедоступны.

СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИКУТОТОКСИНА путем обработки анализируемой пробы химическим ipeareHTOM отличающи йс я тем, что, с целью повышения чувствительности, специфичности и упрощения способа, анализируемую пробу предварительно обрабатывают 0,05-0,15 н. раствором соляной кислоты, в качестве химического реагента используют 1,5-2,5%-ный раствор сульфата церия (IV) при объемном соотношении анализируемой пробы раствора сульфата церия (IV), равном 2-1:1, с последующим определением полученных кристаллов микрокристаллоскопическим способом. .§