Способ приготовления пластин для тонкослойной хроматографии липидов Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 

220

т

280

ш

т

т

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам количественного определения группового срстава липидов с использованием метода тонкослойной хроматографии.

Известен способ определения группового состава липидов путем тонкослойного хроматографического разделения на пластинах из силикагеля,, имлрегнированного сульфатом аммония, с последующим проявлением разделенных фракций липидов. Проявление разделенных фракций липидов осуществляется за счет вьщеляквдейся npli термодеструкции сульфата аммония серной кислоты С 1 J.

Недостатком этого способа является его относительно невысокая точность.

Наиболее близким к предложенному по чзхнической сущности и достигаемому результату является способ определения группового состава липидов включающий приготовление сорбента из силикагеля, гипса, сульфата аммония и катализатора окиси меди, нанесение сорбента на пластинки, их активирование, тонкослойное хроматографическое разделение анализируемых веществ на пластинках с сорбентом и проявление разделенных фракций липйдов при нагревании С 2.

Недостатком указанного способа является Трудоемкость и длительность процесса введения катализатора в сорбента, что связано со свой ствами окиси меди, представлякнцей собой порошок HepacTBOpHNbrti в воде.

Цель изобретения - повышение чувствительности анализа и ускорение процесса приготовления пластин.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу приготовления пластин для тонкослойной хроматографии липидов путем нанесения на подложку слоя сорбента, состоящего из смеси силикагеля, типса, сульфата аммония и соединения меди, соединение меди вносят в виде ацетата .при следукицем соотношении компонентов, мае.%:

Гипс7-8

Сульфат аммония 10

Ацетат меди 5-7

Силикагель , Остгшьное

Способ осуществляют следующим образом.

Для приготовления сорбента на 10 пластин берут 1,05 г силикагеля/ 0,105 г гипса и тщательно растирают их в фарфоровой ступке, добавляют 0,16 г сульфата аммония и 0,0735 г от веса силикагеля )ацетата меди растворенного в 7,5 мл дистшширо ванной воды. Суспензию e&te раз расти

рают и сливают в пробирку с притертой пробкой.

. Перед нанесением на пластинки суспензию встряхивают. На каждую пластинку наносится 0,75 мл суспензии. Пластинки сушат при комнатной температурю а затем активируют, в термостате при 110-120°С в течение часа. Высушенные пластинки хранят в эксикаторе над СаС.

На пластинки наносят 1 мкл 2%-ног раствора липидов в хлороформеи проводят тонкослойное хроматографическое разделение в системе раство- рителей гексан: дизтиловый эфир: уксусная кислота в соотнесении 80 20 : 1 соответственно. Проявление разделеннызс фракций липидов проводят в термостате при .

Пример 1. Приготовление платинок проводят по указанному методу, но ацетат меди добавляют в концентрации 1,5, 7 и 10 вес.%. На пластины наносят маргариновую кислоту (А ; и стеариновую кислоту (Б/. Проявление разделенных фракций проводят при 220, 280 и .

На чертеже представлена диаграмма изменения значений интенсивности окраски маргариновой ( линоленовой (В ) кислот в зависимости.от температуры проявления разделенных фракций липидов и содержания ацетата мед в составе сорбента /(цифрами у столбиков показано ссадержание ацетата меди в сорбенте, вес.%.

Из диагрг1ммы видно, что оптимальнее результаты получены при содержании ацетата меди в составе сорбента равном 5-7% от веса силикагел и температуре проявления 250-280с.

При темпб1ратуре проявления ниже не достигается максимального значения интенсивности окраски фракций липидов, При температуре вь&ое 280 с наблюдается снижение значений интенсивности окраски, что связано с окислением фракций липидов до СС.

Пример 2. Определение группового состава липидов микроорганизмов рода Candida scotti.

Пластины приготовляют, активируют и хранят по указанному методу. Весовое соотношение ингредиентов на 10 пластин 0,973 г силикагеля; 0,128 г гипса; 0,089 г сульфата аммония и 0,089 г ( 7% от веса сорбента } ацетата меди. Наносят 1 мкл 2% но1о раствора липидов в хлороформе. Результаты анализа представлены в таблице. в таблице приведены также результаты анализа фракций триглицерчдов и эфиров стеринов липидов пшеницы и липидов микроорганизмов рода Candida scotti, полученные по способу, принятому за прототип, а также метопом жидкостной хроматографии.

суммарная интенсивность .отклика 678 суммарная интенсивность отклика 2486

Как видно из таблицы, все эти данные хорошо согласуются, а .суммарная интеисувность отклика по предлагаемому способу увеличивается, что ведет к повышен «ю точности измерений. ; Использование изооретения по сравнению с базовым (прототипом)

позволяет упростить и ускорить про20 цесс определения группового состава липидов за счет сокращения времени при приготовлении сорбента в .6 раз (время приготовления сорбента согласно базовому спсообу 25 30 шн).

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ, ПЛАС1ТИН ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ЛИПНДОВ путем нанесения на подлокку тонкого слоя сорбента, состоящего из смеси силика1 Д я, гипса, сульфата аммония н соединений «еди о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повыЕоения чувствительности анализа и ускорения процесса npriroтовления пластины, соединения меди вносят в виде ацетата меди пря cns , дунвдем соотноыении коАоюнентов, . мас.%.: , . . , . . Гипс7-8 . Сульфат аммония 10 Ацетат меди 5-7 Силикагель .Остальное