Штамм дрожжей @ @ Советский патент 1985 года по МПК C12N1/00 

4 0

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетики, в частности к получению нового тестерноге штамма дрожжей, и может быть использовано в микробиологической промыпшенности, иммунологии, экологии.

Известны штаммы, например Saccharomyces cerevisiae S3, SX и 7А-П192, происходящие из Оксфордской и Петергофской генетических коллекций соот- вётственно, которые имеют i следунзщие морфологические и физиологически призиаки: штаммы являются гетероталличными, относимыми к L а и к L типам спаривания. Споруляция у них отсутствует. Клетки овальной формы размером-(з, 12+0, 11) X (3,42+0,12) мк Штамм 83 сбраживает сахарозу, рафинозу, мелибиозу и не сбразкивает галактозы и мальтозы, а SX сбраживает сахарозу, рафинозу, мелибиозу, мальтозу и не сбраживает галактозу. А 7А- П192 сбраживает мальтозу, сахарозу, рафирозу, галактозу Q.

Однако эти штаммы обладают малой чувствительностью к киллерным штаммам типов К , KV и образуют зоны лизиса размером 3-4 мм.

Наиболее близким по чувствительности к штаммам - убийцам К, Kj и KV является штамм Saccharomyces сеrevisiae SBY 2576, происходящий из коллекции Национального агрономического института (Мадрид, имекщий следующие морфологические и физиологические признаки: он . является rOMOiталличным, образующим двухспоровые, трехспоровые- и четырехспоровые аски. Форма клеток штамма эллипсоидная, размером (5,04+0,14) х(4,10±0,12)мк .Сбраживает глюкозу, гала.ктозу. Не сбраживает мальтозу, сахарозу, рафинозу н.

Однако штамм Saccharomjfces globosus SBY 2576 также мало чувствителен, его зона лизиса достигает примерно 3-4 мм..

Цель изобретения - получение тестерного штамма, выявляющего у дрожжей генетическую информацию, детерминирующую кшшерные свойства.

Полученный штамм Saccharomyces cerevisiae ВКМ V-2449 Д имеет следукнцие кюрфологическую и физиологическую характеристики.

Штамм является гетероталличным, L типа спаривания, споруляция отсутствует. Вегетативные клетки овальные (2,16+0,45)х(2,16±0,45) мк.. Размножается по.чкованием. На твердых средах образует белые, матовые,

вьшуклые колонии, которые лежат на поверхности среды. Края колоний ровные. Температура:выращивания штамма 26°С, Штамм сбраживает глюкрзу, сахарозу, мальтозу, рафинозу, фруктозу и мелибиозу. Не сбраживает ара- бинозу, ксилозу, лактозу, галактозу и маннит.

Штамм оказался стабильным при хранении его в холодильнике на среде,

5 содержащей, г/л: пептона 10, глюкозы 20, автолйзата дрожжей 5 мп, агара 20; рН 5,8 с пересевом через каждые 3 мес. в течение года.

Штамм Saccharomyces cerevisiae ВКМУ-2449 Д получают следующим образом. При воздействии ультрафиолетовыми лучами (2 бактерицидные лампы БУФ-15 S расстоянии 55 см, в течеНИИ 1 мин., доза облучения составляет примерно 3000 эрг/мин/мм. на 5 МП суспензии кпеток штамма Saccharomyces cerevisiae 2 густотой 110 , расположенной на чашке Петри

диаметром 90 мм, получают мутант.

обладающий одновременно нейтральностью к штаммам-убнйцам типа К и штаммам-убийцам типа Кg и KV. В результате спонтанного митотического расщепления мутанта получают

штамм ВКМУ-2449Д, проявляющий, новые свойства чувствительности к штаммам-убийцам типов К2 и KV, т.е. уже через сутки на газоне чувствительного тестера ВКМ У-2449Д от штрихов

штаммов-убийц типа- Kg и KV образу- . ются зоны лизиса размером до 5-7 мм. По отношению к штаммам-убийцам типа К мутантный штамм обладает исходным фенотипом, присущим штамму

Saccharomyces ceriyisiae № 2, т.е. он является устойчивым к штам- мам-убийцам типа К. Мутантный штамм обладающий чувствительностью, позволяет ндентифи1щровать у штам-

мов-убийц типа KV ядерный ген MV, действие которого приводит.к появлению фенотипа, обладающего слабой убивающей активностью, тестируемой только на газоне штамма ВКМ У-2449Д

и не проявляющегося при использовании ПОВС1ОДУ принятых чувствительных f тестерных штаммов. Используя штамм ВКМ -2449Д в качестве тестера. штаммы Saceharorayces globosus SBY 2576 и Saccharomyces cerevisiae 7А-П192, ранее охарактеризованные как чувствительные штаммы, обладают слабой убивающей активностью, зона лизиса достигает примерно 1мм Изучение антагонизма, у дрожжей имеет как теоретическое, так и прик ладное., значение. Мно.гие дрожжевые гфриз-водства нестерильны, но к ним предъявляется требование минимального заражения посторонней .fflкpoфлo рой. Штамм ВКМ У-2449Д может быть использован при отборе производственных штаммов, обладающих феноменом убийства клеток, определяющим конкурентноспособность промьшшенных .штаммов по отношению к диким, загря няющим производство, С другой сторо шя, известно, что производственные штаммы дрожжё.й Candida, используемы при производстве кормового белка, недостаточно конкурентноспособны и в производственных популяциях вы- / тесняется дикой микрофлорой, . Штамм ВКМ У-2449Д может быть использован в качестве тестера при вдентификаций гибридных векторных плазмид, обладающих феноменом убийства, которые методами генной инженерии могут быть переданы производственным штаммам несовершенных.дрожжей Candida, используемым в производстве кормового белка, для повышения их конкурентноспособности в производственных популяциях, Установлено, что количество двухцепочечной РНК штамма прямо пропорциональна величине зоны лизиса на газоне штамма ВКМ У-2449Д при этом двухцепочечная РНК,является одним из индукторов образования интерферона в организме. Поэтому щтамм ВКН У-2449Д может бы,ть использован для поиска дрожжевых штаммов-продуцентов, обладающих интерферогенными свойствами. Особенности пггамма ВКМ У-.2449Дкак чувствительного тестера выявляются при на забуференной (рН-4,8) среде, содержащей в 1 г: пепетона 5 г, глюкозы 40 г, Ма2НР042 HjO 17,8 г, лимонной кислоты 10,5 г, метиленовой сини 0,03 г, дрожжевого автолизата 5 мп, Для переноса-дрожжей использовали метод отпечатков Ледербергов,

ШТАММ ДРОЛОКЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE ВКМ У-2449Д (коллекция Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) , предназна чеиный для выявления у дрожжей генетической информации, детерминируняцей киллерные свойства.