Способ выращивания микобактерий туберкулеза Советский патент 1983 года по МПК C12Q1/04 

о: оо

00

со

05 Изобретение относится к медицинс кой микробиологии касается способа выращивания микобактерий туберку леза. Извесген способ выращивания мико бактерий туберкулеза путем посева Исследуемого материала на среду Левенштейна-Йенсена и инкубации посе. ВОВ l . Однако данный рпособ не обеспечивает высокой высеваемости микобактерий.. Цель изобретения - повышение вы севаемости микобактерий. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выращивания микобактерий туберкулеза путе посева исследуемого материала на среду Левенштейна-Йенсена и инкубации посевов на поверхность питатель ной среды перед посевом наносят рас вор энте Ьохелина в 1%-ном , содержащем , в концентрации 20-30 мкг/мп среды. Пример. Рабочий раствор энтерохелина (2,3-диоксибензоилсери готовят следующим образом. 100 мг энтерохелина растворяют в 20 мл 1%-ного , добавляют 43,7 мг и Фильтруют через мембранный фильтр 8. Суспензию музейного штамма микобактерий туберкулеза в концен трации 1 млн бактериальных тел в 1 мл физиологического раствора засе вают по 0,1 мл на плотную среду Левенштейна-Йенсена без энтерохелин .с добавлением к среде 25 мкг/мл знт рохелина и с добавлением FeC на 1% N.л НРО . Посевы ежедневно просм тривают и оценивают результаты по числу выросших колоний. При учете результатов оказалось, что рост на среде с энтерохелином появляется на 5-7-й день, в остальных пробах - на 11-13-е сутки. Пример 2 .Для исследования влиян знтерохелина на высеваемость микробак терий туберкулеза из органов морских свинок после интенсивной химиотерапии десять здоровых животных заражают 0,01 мг/кг суспензии микобактерий штамма , 8 подкожно в правую паховугс область. Спустя 3 недели после инфицирования животных подвергают лечению изониазидом (15 мг/кг и рифадином (15 мг/кг) ежедневно в течение 3 мес. По истечении срока лечения морских свинок убивают хлороформом, а кусочки органов (легкие печень, - селезенка) растирают в ступке и после обработки засевают на сре ды Левенштейна-Йенсена, Финн-2 и Левенштейна-Йенсена с добавлением 25 мкг/мл энтерохелина. Всего производят 90 посевов суспензии орга нов морских свинок.Посевы просматрива-; ют ежедневно в течении 2,5 мес.Рост возбудителя туберкулеза оценивают по числу выросших колоний. Отрицательным результатом посева считают отсутствие роста колоний через 2,5 мес. инкубирования в термостате при . В результате проведенного исследования оказалось, что после интенсивной химиотерапии экспериментгшьного туберкулеза рост колоний микобактерий туберкулеза обнаруживают только на среде Левенштейна-Йенсена с добавлением 25 мкг/мл энтерохелина. На средах без энтерохелина ,ни в одном случае не наблюдают роста колоний. Полученные данные свидетельствуют о том, что энтерохелин стимулирует рост микобактерий, у которых в процессе химиотерапии значительно снижается биологическая активность Изучение влияния энтерохелина на высеваемость возбудителя туберкулеза проводят также путем посева мокроты больных туберкулезом органов дыхания на среде Левенштейна -Йенсена, Финн-2 и Левенштейна-Йенсена с добавлением энтерохелина. Всего производят 525 посевов мокроты от 175 больных. Рост микоб.актерий туберкулеза обнаружен в 12% случаев на среде Лейенштейна-йенсена с добавлением энтерохелина. На среде ЛевенштейнаЙенсена и Финн-2 без энтерохелина рост микобактерий туберкулеза обнаружен лишь в б% случаев. Данные исследования приведены в табл. 1 и 2. В табл. 1 показано влияние энтерохелина на рост микобактерий туберкулеза на среде Левенштейна-Йенсена. В табл. 2 представлена высеваемость микобактерий туберкулеза из органов морских свинок на различных средах, П р и м е р 3. Испцтания с бычьим видом микобактерий туберкулеза (штамм Boy .8) проводят в пробирке, так как инфицированность бычьим видом возбудителя незначительна, и на зараженных лабораторных животных. Результаты опыта аналогичны данным, полученным со штаммом Использование предлагаемого способа позволяет повысить высеваемость микобактерий, что, в свою очередь, дает возможность повысить точность диагностики и ускорить рост микроорганизмов.

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА путем посева исследуемого материала на среду Левенштейна-Йенсена инкубации посевов, отличающий с я тем„ что, с целью повышения высеваемости микобактерий, на поверхность питательной среды перед посевом наносят раствор энтерохелина в 1%-ном , содержащем РеСВ -бН2О, в концентрации 20-30 мкг/мл среды.