Способ дифференциации МYсовастеRIUм аVIUм от МYсовастеRIUм INтRасеLLULаRе Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиоло гии и касается дифференциации возбу - дителя туберкулеза птичьего вида от атипичных микобактерий вида интрог- целлюляре,,

Цель изобретения « повышение точ«- ности способа

Способ осуществляют следующим разомо

Питательную среду Левенштейна- Иенсена или готовят по принятой методике. Затем ее разли«- вают в две стерильные колбы емкостью 150 мл о В первую колбу, содержа - щую 99 мл среды, добавляют 1 мл 5% ного раствора синтайода, чтобы центрация его в среде была 0,1% и тщательно смешивают0 В другую колбу синтайод не добавляют (контроль) , Затем содержимое колб разливают по

5 мл в стерильные бактериологичес - кие пробирки, которые в наклонном положении помещают в аппарат для свертывания и инактивируют (среду Левенштейна-Иенсена при 90°С в чение 1 ч, а среду Финн-2 при 85 С «- 30 мин)о

Из выросших двухнедельных изучае - мых культур, которые по культурально - морфологическим свойствам отнесены к комплексу авиум -интрацеллюляре, готовят микобактериальные взвеси 1 мг/мл на стерильном физиологичес - ком растворе и высевают по 0,5 мл на 5 пробирок со средой, содержащей 0,1% синтайода, а также на контрольную среду без синтайода. Пробирки поме щают в термостат в горизонтальном положении на 1 сут„ Затем пробирки парафинируют и выдерживают в термо

о

Ov

о ел

CJ

о

стате 20 дней при 38°С, Учет резуль - татов посевов проводят ежедневно0

Дифференцирующим показателем для Mycobacterium intracellulare от М« avium является рост колоний М. intracellulare на среде Левеш- щгейна--Йенсена или , содержа - щей 0,1% синтайода, при отсутствии роста у Ко avium с,

П р и м е р. Из выросших на среде Павловского двухнедельных испытуемых и музейных культур микобактерий гоТо вили взвеси на стерильном физиологи - ческом растворе из расчета 1 мг/мл, которые стерильными мерными пипетка ми высевают по 0-, 5 мл на пять пробирок со средой ЛевенштейнаНИенсена, которая содержит, мас.%5 однозамещен- ный фосфорнокислый калий 0,1j серно - кисльй магний 0,01| лимоннокислый магний 0,03; аспарагин 0,2; глицерин х/ч 0,7; вода дистиллированная 36,3 яичная масса 61,0; раствор

деленный, а М„ intracellulare попо жительный результате Для изучения образовавшегося осадка делают мазки, красят по методу Циль---Нильсена и про« водят микроскопическое исследование„ При этом микроскопия мазков показывает, что в поле зрения наряду с

малахитовой зелени 1,2; синтайод 0,5; 25 кислотоустойчивыми палочками обнаруили со средой , которая содер - жит,, маСс%: магнезия сернокислая 0,01; натрий лимоннокислый 0,03; однозамещенный фосфорнокисльй калий 0,7 аммоний лимоннокислый однозаме щеннчй 0,1; натрий глутаминовокислый 0,3; глицерин х/ч 0,7; железоаммиач - ные квасцы 0,001, вода дистиллирован - мая 36,0; яичная масса 61,5; синтайод 0,1; 2%г-ный раствор малахитовой лени 1,2, а также на 2 пробирки со средой Левенштейна -Йенсена или Финн«-2 без синтайода (контроль)о

Рост колоний микобактерий на дах, содержащих 0,1% синтайода, блюдают на 7НО день у одной испытуемой (№ 230) и у контрольной культуры вида Mo intracellulare о На де без синтайода рост колоний руживают как у всех испытуемых, так и у контрольных культур микобактерий на 7НО день Испытуемые культуры ( 354, 249 и 227), а также контрольная культура Но avium не растут на средах с 0, содержанием тайода о

Результаты представлены в таблице«

30

35

40

45

50

жены частички коагулированного белка

среды Шула о

I

Из сравнительного анализа предла

гаемого способа с известным следует, что предлагаемый способ дает более четкие результаты исследования, со«- кращает срок идентификации культур на дня и не требует проведения дополнительных исследований (приго«- товление мазков, окраска их по Циль- Нильсену и микроскопическое исследо - вание)о

Формула изобретения

Способ дифференциации Mycobacte- rium avium от Mycobacterium intracellulare путем посева исследуемого материала на плотную питательную среду для выращивания микобактерий туберкулеза с добавлением селектив - ного агента с последующим инкубирова нием посевов и учетом результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, посев осуществляют на среду или Левенштейна-Йенсена, содержащую в качестве селективного агента сит- тайод в концентрации 0,1 мас.% и при наличии роста культуру идентифици«- руют как Mycobacterium intracellulare, при отсутствии роста - Mycobacterium avium,,

Из данных таблицы видно, что при изучении четырех культур микобактерий на плотных яичных средах и Левенштейна-Йенсена с 0,1%-ным сия- тайодом рост колоний микобактерий обнаружен у одной культуры (Н° 230)

5

0

и у контрольной культуры М„ intracellulare на 7 день У трех культур (№ 354, У 249 и 227), а также у контрольной культуры Mo avium роста колоний не выявлено,,

При изучении культур на полусин«- тетической жидкой среде Шула с 0, иодоналом Б выявлено, что культура № 230 дает рост через 8 дней, а культуры № 354 и № 249 дают через 9 дней неопределенный результат в виде рыхлого осадка на дне пробиркио Культура № 227 не дает осадка на дне пробирки., I

В контроле М„ avium дает неопре деленный, а М„ intracellulare попо жительный результате Для изучения образовавшегося осадка делают мазки, красят по методу Циль---Нильсена и про«- водят микроскопическое исследование„ При этом микроскопия мазков показывает, что в поле зрения наряду с

5 кислотоустойчивыми палочками обнару

жены частички коагулированного белка

среды Шула о

I

Из сравнительного анализа предла

гаемого способа с известным следует, что предлагаемый способ дает более четкие результаты исследования, со«- кращает срок идентификации культур на дня и не требует проведения дополнительных исследований (приго«- товление мазков, окраска их по Циль- Нильсену и микроскопическое исследо - вание)о

Формула изобретения

45

50

55

Способ дифференциации Mycobacte- rium avium от Mycobacterium intracellulare путем посева исследуемого материала на плотную питательную среду для выращивания микобактерий туберкулеза с добавлением селектив - ного агента с последующим инкубирова - нием посевов и учетом результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, посев осуществляют на среду или Левенштейна-Йенсена, содержащую в качестве селективного агента сит- тайод в концентрации 0,1 мас.% и при наличии роста культуру идентифици«- руют как Mycobacterium intracellulare, при отсутствии роста - Mycobacterium avium,,

354 249

227

230+

Контроль

M.avium 117 - M.intracellu- lare If 128+

± ±. He опреде«лен+ i He опредег

лен

Moavium ±t He опредег

лен

t ±

ч-+

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации возбудителя туберкулеза птичьего вида от атипичных микобактерий вида интроцеллюляре. Целью изобретения является повышение точности способа. Питательную среду Левенштей-Иенсена или Финн-2, содержащую 0,1 мас.% синтойода в качестве селективного агента, засевают взвесью двухнедельных изучаемых культур. Посев инкубируют при температуре 38°С в течение 20 дней. При наличии роста на среде исследуемую культуру идентифицируют как MYCOBACTERIUM INTRACELLULARE, а при отсутствии роста - MYCOBACTERIUM AVIUM, 1 табл.

Примечание. +r- рост колоний микобактернй; «- г- рост колоний отсутствует; i г- получен неопределенный результат.