Штамм бактерий Мусовас @ -44-продуцент каротиноидов Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 C12N1/20 C12P23/00 C12R1/32 

(О

сг

Ц

Юо

0 Изобретение относится к микробиологической промышленности и каса ется нового штамма бактерийi исполь зуемого для получения коротиноидных пигментов, применяемых в животновод стве, медицине и пищейой промышленности . Известно, что каротиноидные пигменты синтезируют некоторое бактери дрожжи, микроскопические водоросли и грибы. Однако практически нет рентабельного штамма микроорганизма, который можно было использовать в микробиологической промышленности для получения каротиноидов. Известные штаммы микроорганизмов либо имеют нйзкое содержание каротиноидов в абсолютно сухой биомассе либо являются продуцентом только . -каротина, торулина и торулородин либо являются нетехнологическими. Известен {итамм дрожжей Rhadotoru 1а glutinis Б-71-продуцент каротино доз СИ . Однако данный штамм не обеспечивает высокого выхода каротинов. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является штамм дрожжей Rhodotorula 6lutinis-214 , синтезирующий каротиноиды С21. Недостатком данного штамма является очень низкий уровень биосинтеза большого количества каротиноидов С819 мкг/гК Кроме того, в пигментном комплексе у прототипа содержится только три компонента, а именно: -каротин, торулородин и торулин. Цель изобретения - получение штамма бактерии с высоким- содержанием каротиноидов как в количест.венном, так и в качественном отношении (о. -каротин , jb -каротин, -ка ротин, ауроксантин, лютеин, криптоксантин, виолаксантин, зеаксантин антераксантин, торулин, ликопин, рубиксантин , лепротеин, неоксантин) Штамм имеет следующую характерис тику . Морфологические признаки. Величина клеток двухсуточной культу| ы на обычном сусле-агаре 8-10 JiAjM... Клетки палочковидные, полиморфные, разной величины, часто искривленные ветвящиеся палочки, с возрастом уко рачивающиеся и измельчающиеся до ко ковидной формы, неподвижные. Колонии интенсивно оранжевого цвета, пуговицеподобные, матовые, комковатой консистенции. Вокруг колоний имеется узкий ободок в виде ресничек, состоящий из цепочек, вра тающих в питательный агар. Др аметр колоний 0,8-1,0 см. Физиологические признаки. Мясопептонный бульон (МПБ). Рост наблюдается .как на поверхности (в виде пленок 1, так и на дне пробирки. В целом рост обильный. Образует плотный осадок, который при взбалтывании слегка взмучивается и быстро оседает. МПБ не мутнеет, биоцласса выпадает в виде хлопьев. Пигментация желто-оранжевая. Оптимальная темпе атура 28-30 С. Мясопептонный желатин |Гмпж)). Среду не разжижает. В верхней части среды наблюдается обильный рост. Отношение к углеводам: усваивает глюкозу, фруктозу, сахарозу, галактозу, лактозут Отношение к спиртам: усваивает этиловый, бутиловый, метиловый, сорбит, маннит. Отношение к органическим кислотам: усваивает фумаровую, молочную и лимонную. Штамм бактерии Mycobacterium гиЪ-. rum-44 получен путемвоздействия различными химическими мутагенами: -нитрозометилмочевина (НММ), W -нитрозодиметилмочевина (НДГШ), М-нитрозоэтилмочевина (ИЭМ) и методом ступенчатого мутагенеза по следующей схеме: Mycobacterium rubrum исходная форма II Воздействие 0,07% НММ (экспозиция 6ч} 4 Шделили штамм № 21 Воздействие 0,05% НЭМ {экспозиция 8 Ч) 4 Выделили штамм № 1 Воздействие 0,3% Ндам (экспозиция 24. ч ) Выделили штамм № 44 На оптимальной среде содержание каротиноидов достигает 7050 мкг/г сухих клеток. Штамм хранится в коллекции Инстиг тута биохимии растений АН ГССР и депонирован в Центральном Музее промышленных микроорганизмов, коллекционный номер даПМ В-2226. Пример. Штамм бактерий Муcobacterium rubrum-44 получен методом ступенчатого мутагенеза и селекции. . Культивирование штамма проводили на жидкой питательной среде следуюего составаj г/л: Кукурузный экстракт25,0 Меласса 85,0 Питательную среду разливали в ачалочныё колбы емкостью 750 мл о 200 мл.

&лращивание культур проводили ма круговой качалке при 160-200 об/ми в течение 96 ч при .

Посевным материалом служила культура, которую выра1аивали глубинным стособом в течение 48 ч на среде следующего состава г/л:

КукурузНИИ

экстракт5,0

Меласса20,0

при на качалке (180-200 об/мин);

После окончания культивирования продуцента определяли количество биомассы методом центрифугирования с последушдим взвв1 иванием. Количественный и качественный анализ

Общее количество кароМикроорганизм(штамм)

Штамм бактерии Мус.rubrum-44

7050 (пре длаг аемый)

Штамм дрожжей Rhodotorula glutinis-214 (прототип

819

пигментов проводили по известной ме тодике.

В таблице приведены сравнительные данные по биосинтезу каротиноидов предлагаемого иггамма бактерии и известного штамма дрожжей.

Как видно из таблицы, новый штамм бактерии Mycobacterium rubrum-44--синтезирует на 860%, больше общего количества каротиноидов, чем известный (прототип штамм дрожжей :Rhodotorula glutiniB-214. Кроме того, предлагаемый бактерий .синтезирует 14 различных каротиноид|Ных пигментов, а известный штамм 3.

Качественный состав тиноидов каротиноидов

ci. - Каротин, f -каротин, у-каротин, ауроксантин, лютеин, криптоксантин, виолаксантин, зеаксантин, антераксантин, ликопин, рубиксантин, лепротенн, неоксантин

- Каротин торулородин,